Diagnosis definitif penyakit menular secara tradisional telah dicapai melalui

demonstrasi langsung dan identifikasi agen penyebab (s) oleh budaya dan
prosedur isolasi. Sayangnya, ini mungkin di luar keahlian dan kemampuan
banyak laboratorium diagnostik, terutama di negara-negara berkembang.
Namun, diagnosis yang akurat dapat dicapai bila teknik serologi digunakan
dalam kombinasi dengan pengamatan klinis dan sejarah epidemiologi. Meskipun
teknik serologi klasik (yaitu aglutinasi, presipitasi, fiksasi komplemen dan virus
tes netralisasi) telah terbukti berguna, mereka menderita sejumlah kelemahan.
Secara umum, kelemahan ini berhubungan dengan kombinasi kinerja diagnostik
yang tidak memadai, kurangnya standarisasi dan / atau efisiensi biaya miskin.
Karena enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) teknik berpotensi mengatasi
semua masalah ini, banyak penekanan telah ditempatkan pada penelitian,
pengembangan dan penerapan teknik ini dalam diagnosis penyakit menular dari
hewan penting. Pengembangan teknik ELISA untuk diagnosis penyakit infeksi
dan transfer teknik ini untuk laboratorium rekan di negara-negara berkembang
adalah bagian dari pekerjaan dalam Joint Organisasi Pangan dan Pertanian
Perserikatan Bangsa / Badan Energi Atom Internasional (FAO / IAEA) Divisi
Program Teknik nuklir di Pangan dan Pertanian. Komponen kesehatan hewan dari
Program melibatkan kerjasama erat antara dua kelompok dalam IAEA. Itu
Produksi Hewan dan Bagian Kesehatan Gabungan FAO / Divisi IAEA bertanggung
jawab untuk pembentukan keahlian ilmiah dan teknologi di counterpart
laboratorium sehingga peneliti di negara-negara ini dapat mengidentifikasi dan
mengatasi masalah terkait dengan penyakit menular pada ternak domestik.
Produksi Hewan Unit Badan Laboratorium, Seibersdorf, memberikan dukungan
teknis untuk kegiatan ini melalui pengembangan dan penyediaan standar dan
kualitas terjamin ELISA kit untuk beberapa penyakit epidemi utama hewan
penting. kit ini digunakan dalam studi epidemiologi, dalam program pemantauan
vaksinasi dan kontrol dan program pemberantasan di lebih dari tujuh puluh lima
laboratorium rekan di Afrika, Asia dan Amerika Latin. Melalui kerjasama dengan
lebih dari lima belas dari penelitian hewan besar laboratorium di seluruh dunia,
teknik ELISA dan reagen telah disesuaikan dengan format kit yang cocok untuk
distribusi dan penggunaan di laboratorium rekan. kit diagnostik telah
dikembangkan untuk rinderpes, brucellosis, trypanosomiasis, Babesiosis, kaki
dan mulut, rhinotracheitis sapi menular dan haemorrhagic keracunan darah;
sementara berbagai tahap perencanaan dan pengembangan telah meraih kit
untuk bluetongue, sapi leukosis, menular pleuropneumonia sapi, penyakit
Aujeszky dan penyakit Newcastle. Pengembangan kit pada skala besar seperti
untuk penggunaan internasional membutuhkan tingkat tinggi standarisasi baik
prosedur pengujian dan reagen. A Joint FAO / IAEA Rapat Konsultan
diselenggarakan di Wina pada bulan Januari 1992 untuk meninjau aspek ekspresi
Data ELISA, standar referensi utama, kualitas jaminan dan validasi diagnostik.
Para ahli menghadiri pertemuan ini termasuk Dr S. Edwards (Central Veterinary
Laboratory, Weybridge, Inggris Raya, dan Anggota dari Office International des
Epizooties [OIE] Standar Komisi), Dr R.J. Jacobson (New York State College of
Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York) dan Dr T. Spencer
(Regional Hewan Laboratorium, Benalla, Australia). Berikut ini adalah ringkasan
konsensus pendapat dicapai pada pertemuan ini berkenaan dengan teknik ELISA
diagnostik untuk mendeteksi antibodi.
Ekspresi Data
Sebagian besar teknik ELISA diagnostik memanfaatkan kromogenik a enzim /
sistem substrat. Ketika membaca photometrically, kepadatan optik (OD) atau
nilai absorbansi adalah data mentah yang dihasilkan dalam sistem tes. Beberapa
metode memiliki telah digunakan untuk ekspresi aktivitas antibodi tetapi tidak
ada metode tunggal telah universal diadopsi. teknik ELISA tidak langsung Dalam
ELISA tidak langsung, ada hubungan positif antara intensitas warna dan jumlah
antibodi terikat dalam sistem tes. Sejumlah kualitatif dan metode kuantitatif
telah diterapkan untuk ekspresi aktivitas antibodi dalam langsung ELISA dan ini
telah dibandingkan dalam jumlah tinjauan (4, 8). Itu metode mengomentari
bawah ini mewakili mereka yang paling sering digunakan dalam hewan tersebut
laboratorium diagnostik. a) nilai-nilai baku OD Ini adalah bentuk sederhana dari
ekspresi data, sering ditulis sebagai desimal atau dikalikan 1.000 untuk
memberikan seluruh nomor. nilai-nilai baku OD adalah penggunaan diagnostik
kecil tanpa pengetahuan yang mendalam tentang kinerja assay, tidak pula nilai-
nilai ini berguna untuk intra atau antar laboratorium perbandingan. b) nilai OD
Dikoreksi Nilai-nilai ini biasanya digunakan dalam sistem virologi mana produksi
murni antigen dapat secara teknis sulit. Pengurangan dari nilai OD antigen
control (untuk memberikan "dikoreksi" nilai OD) mengkompensasi pengikatan
antibodi untuk menjadi tuan rumah sel komponen dalam penyusunan antigen
virus dan memberikan garis dasar yang lebih seragam dengan pengujian kadar
logam. nilai OD dikoreksi menderita kelemahan yang sama sebagai nilai-nilai OD
baku. c) End-point titrasi Pendekatan ini berasal dari tes serologi klasik lainnya.
Akhir-titik titer adalah dinyatakan sebagai kebalikan dari serial pengenceran
tertinggi yang menunjukkan minimum aktivitas antibodi. Meskipun metode ini
memiliki keuntungan dari keakraban, ia tidak memiliki Keuntungan diagnostik
lebih tes dilusi tunggal, kecuali dalam kasus-kasus di mana lebih data kuantitatif
yang diperlukan. d) kurva Standard OD dari setiap sampel diuji pada
pengenceran tunggal membaca terhadap kurva standar untuk mendapatkan
perkiraan akhir-titik titer. Metode ini mengasumsikan dosis paralel / tanggapan
kurva untuk semua sampel. Kurva standar harus ditetapkan untuk setiap
menjalankan pengujian tersebut. Sebagai perbandingan antar-laboratorium, set
yang sama standar harus tersedia untuk dan digunakan oleh semua
laboratorium. e) nilai Normalised OD Dengan dimasukkannya standar referensi
positif didefinisikan dalam ujian, koreksi Faktor ditentukan atas dasar
"diharapkan" versus "mengamati" nilai-nilai OD untuk ini referensi pada
pengenceran tunggal. Semua nilai sampel OD untuk lari diberikan dinormalisasi
dengan Faktor koreksi ini. Diagnostik interpretasi menggunakan nilai OD
dinormalisasi Menderita dari kelemahan yang sama dengan menggunakan nilai
OD baku. f) Sinyal untuk rasio kebisingan Juga disebut sebagai positif: rasio
negatif, OD untuk sampel uji dinyatakan sebagai rasio relatif terhadap standar
referensi negatif. Metode ini mengasumsikan bahwa negatif qgnmnnjh
nstandar acuan adalah benar-benar mewakili populasi normal.