CARACTERIZACIN QUMICA DE LA BIOMASA PRESENTE EN LA FIBRA PROTEICA

ANIMAL UTILIZADA COMO MATERIA PRIMA POR LA EMPRESA INCALPACA TPX.

RESUMEN

Este trabajo se desarrolla en el contexto de un estudio sobre los principales

componentes de la biomasa presente como contaminante en las fibras animales

proteicas utilizadas como materia prima para las diferentes lneas de productos

de la empresa INCALPACA TPX. La finalidad especifica de este trabajo consiste

en obtener la caracterizacin qumica de los componentes de la biomasa

empleando el mtodo de la extraccin qumica, para su posterior utilizacin.

ABSTRACT

This work takes place in the context of a study of the main components of this

plant material as a contaminant in animal protein fibers used as raw material for

different product lines the company INCALPACA TPX . The specific purpose of

this work is to obtain chemical characterization and quantification of the

components of the plant material using the method of traditional chemical

extraction for use in subsequent projects.

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INTRODUCCION

La biomasa abarca un gran conjunto de materiales de diversos origenes y con

caracteristicas muy diferentes. Segun la especificacion europea correspondiente,

la biomasa es todo material de origen biologico excluyendo aquellos que han sido

englobados en formaciones geologicas sufriendo un proceso de mineralizacion .

La biomasa esta compuesta principalmente por celulosa, hemicelulosa y lignina

(compuestos estructurales). Y como constituyentes minoritarios se encuentra la

humedad, la materia inorganica no extraible y los extraibles (no estructurales).

Los componentes mayoritarios estan interrelacionados entre si como se muestra

en la Fig. 1 en la que se observa como la celulosa se encuentra en forma de

fibras, alargadas, rodeada por la hemicelulosa que forma una especie de red en

torno a ella. La lignina se situa entre las cuerdas formadas por la asociacion de

celulosa y hemicelulosa.

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CELULOSA

La celulosa es el biopolmero ms abundante en la Tierra. Consiste en cadenas

lineales de celobiosa (D-glucopiranosil--1,4-D-glucopiranosa) de

aproximadamente 10.000 unidades glicosdicas en celulosa nativa de fibras

madereras donde representan ms de 50 % del peso. En la clula vegetal gran

parte de la celulosa est presente como microfibrillas empaquetadas muy

densamente. Poco se conoce sobre la regulacin de este plegamiento. Contiene

zonas amorfas y cristalinas. Las cadenas en la zona amorfa son susceptibles a

bioconversin (celulasas).

La superficie de las microfibrillas de celulosa es altamente polar debido a los

grupos hidroxlicos que se asocian entre si por puentes de hidrgeno .

Eso dificulta la compatibilidad con materiales no polares y afecta a la agregacin

entre fibras y a la absorcin de humedad que hacen disminuir respectivamente su

dispersin en materiales compuestos y su rigidez.

HEMICELULOSAS

Las Hemicelulosas son ms difciles de clasificar, es decir, son polisacridos con

grupos heterogneos. Tienen un grado de polimerizacin entre 100 y 200 en

fibras madereras. Son insolubles en agua, pero en medio alcalino se disuelven.

Plantas herbceas suelen contener ms hemicelulosas y menos ramificados. Las

pajas de cereales (trigo, arroz, centeno, cebada, etc.) suelen contener entre 30 y

40 % de hemicelulosas con algunas excepciones .

Los autores no siempre clasifican las hemicelulosas de la misma forma. Se

pueden clasificar segn la cadena principal en xilanos (Xyl), xiloglucanos (XyG),

mananos y glucomananos . Son ramificados con una cadena principal de glucosa,

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xilosa y/o manosa con enlaces -(1 4) entre si, todos en posicin ecuatorial en el

C1 y C4 . Las clasifican tambin en xilanos, glucuronoxilanos, arabinoxilanos,

mananos, glucomananos y galactoglucomananos.

Las hemicelulosas de la pared celular de las gramneas normalmente contienen

una cadena principal de -(1,4) xilopiranosil con -L-arabinofuranosa en las

ramificaciones. En algunos casos como en plantas del orden de los Poales

(principalmente cereales) se alternan los enlaces -(1 4) con -(1 3). Las

ramificaciones de hemicelulosas consisten en oligosacridos, una cadena pequea

tpicamente entre 1 y 4 unidades de D-galactosa, D-manosa, L-arabinosa, D-xilosa,

L-fucosa, L-ramnosa y/o D-cido glucurnico. Sin embargo las unidades

constituyentes, la estructura y el contenido total de la hemicelulosa varian entre

los tipos de especies, dentro de la misma especie y incluso segn el tejido

anatmico y fisiolgico del organismo vegetal.

La funcin principal es su interaccin con la celulosa y lignina para proporcionar

rigidez a la pared celular. Las cadenas de hemicelulosas se asocian con las

microfibrillas de celulosa tras su carcter polar (puentes de hidrgeno). Su

comportamiento fsico-qumico, principalmente su capacidad de enlace y su

comportamiento visco-elstico, es de gran importancia para proporcionar

propiedades deseadas como grado de hinchamiento, (re)hidratacin, plasticidad,

flexibilidad, rigidez, dureza, etc.

LIGNINA

La lignina representa entre 25 y 33 % de la biomasa en madera de especies

conferas y entre 18 y 34 % de frondosas . Detrs de celulosa y hemicelulosa, es

el tercer biopolmero ms abundante en la Tierra. Este polmero se encuentra

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principalmente en la lmina media de la pared celular y en las capas de la pared

celular. Con las hemicelulosas forman un matriz alrededor de las microfibrillas de

celulosa.

Lignina es de vital importancia para el organismo vegetal. Desempea funciones

en el transporte de agua, nutrientes y metabolitos en el sistema vascular facilitado

por sus propiedades como estructura macromolecular. Su hidrofobicidad junto

con el nivel de entrecruzamiento con los polisacridos es importante para la

permeabilidad de los poros entre las clulas vegetales. Se encuentra sobretodo en

el xilema. Juega un papel importante en el sistema de defensa de la planta frente

a patgenos y protegen los polisacridos de la pared celular frente a

despolimerizacin.

La composicin qumica de lignina (biopolmero) consiste principalmente en tres

tipos de unidades repetitivas: cumaril (H), guaiacil (G) y siringil (S). Estn derivadas

de los denominados monolignoles, los alcoholes p-cumrico (4-hidroxicinamlico),

coniferlico (4-hidroxi-3- metoxicinamlico) y sinaplico (4-hidroxi-3,5-

dimetoxicinamlico). Son los precursores en la biosntesis de lignina. Se

diferencian en la sustitucin con un grupo metoxilo (-OMe) en las posiciones 3 y 5

de la unidad aromtica .

PARTE EXPERIMENTAL

La composicion quimica de la biomasa lignocelulosica se determinar mediante el

metodo de la extraccion quimica, separando cada fraccion de la que se compone

la biomasa. En la Fig. 4 se muestra un esquema de todas las fracciones

cuantificadas en este procedimiento asi como el tratamiento requerido para su

determinacion.

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EXTRAIBLES

Determinados compuestos quimicos

presentes pueden interferir en el proceso de extraccion quimica, por este motivo,

son eliminados de la biomasa antes de realizar cualquier otro ensayo.

Estos componentes se eliminan en dos fases de extraccion siguiendo el

procedimiento TAPPI T-264 cm-07 Preparacion de la Biomasa para el analisis

quimico . Todas las muestras seran tamizadas previamente para que el tamano

de particula este dentro de un intervalo intervalo.

PREPARACIN DE LA MUESTRA

La primera fase de extraccion se realizar con acetona, en esta fase se eliminan

resinas, acidos grasos, esteroles, ceras y grasas. En la segunda fase, que se

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realizar con agua caliente, se eliminan taninos, gomas, azucares y materia

coloreada.

Para llevar a cabo el analisis se tomar una cantidad de biomasa suficiente para

realizar todo el analisis quimico, se introduce en un cartucho de extraccion en el

extractor Soxhlet. La extraccion se realiza con 200 ml de acetona durante 7 horas,

manteniendo el liquido en ebullicion para que la desviacion del extractor no sea

inferior a 4 veces por hora. Una vez transcurridas las 7 horas de extraccion con

acetona, se lava la muestra con agua caliente con el objetivo de eliminar la

acetona y se transfiere la muestra lavada a un Erlenmeyer de 1L. Se anaden 500

ml de agua destilada hirviendo y se deja hervir durante 1 h. Transcurrido ese

tiempo se filtra la muestra, se realizan lavados con agua caliente y se deja que

seque completamente la muestra.

Se puede realizar un unico experimento para la determinacion de extraibles,

debido a que se puede llevar a cabo la extraccion de la cantidad necesaria de

muestra en una sola vez.

HOLOCELULOSA

La cuantificacion de la holocelulosa se realizar siguiendo el metodo ASTM D-

1104 .

Segun este procedimiento, se pesan 2 g de muestra libre de extraibles y se

colocan en un frasco de 250 ml. Se tratan con 150 ml de agua, 0.2 ml de acido

acetico y 1 g de clorito sodico en un bano de agua a 70-80 C. Ademas, cada hora,

y durante 5 horas, se anaden 0.22 ml de acido acetico muy frio y 1 g de clorito

sodico. Transcurridas las 5 horas, se coloca el frasco en un bano de hielo hasta

que la temperatura del frasco alcance 10 C.

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Finalmente se filtra el contenido del frasco, se lava con 500 ml de agua fria y se

observa que el residuo, que estaba amarillo, pasa a ser de color blanco. Se secan

los crisoles a 105 3 C hasta peso constante.

Se realizarn tres repeticiones de este experimento.

CELULOSA

El contenido en celulosa de la biomasa se determinar segun el procedimiento

TAPPI T 212 . El protocolo experimental consiste en tomar 1 g de muestra de

holocelulosa que se coloca en un matraz de 100 ml en un bano de agua a 25 C.

Se anaden 10 ml de hidroxido sodico del 17.5%, se agita y se deja reposar 5

minutos. Se anaden 5 ml de hidroxido sodico al 17.5 %, se agita y se deja reposar

30 minutos. Se anaden finalmente 30 ml de agua, se agita y se deja reposar 1

hora.

Transcurrido ese tiempo, se filtra a vacio con papel de filtro y se realizan lavados

con disolucion de agua e hidroxido sodico (30 ml de agua y 25 ml de hidroxido

sodico al 17.5 %). Posteriormente, se lava con 30 ml de agua. Se agregan 15 ml

de acido acetico al 10 % sin aplicar vacio y se deja reposar durante 3 minutos,

luego se anaden 50 ml de agua y se aplica vacio. Se seca el material insoluble

(celulosa) entre 60-85 C hasta peso constante.

Al igual que en los experimentos para la determinacion de la holocelulosa y para

comprobar la reproductibilidad de los experimentos se llevarn a cabo los

experimentos por triplicado para cada biomasa ensayada, excepto en aquellos

casos en que no se disponga de muestra suficiente de holocelulosa.

Determinacin de hemicelulosa

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El contenido en hemicelulosa se obtiene por diferencia entre la holocelulosa

obtenida y el contenido en celulosa de la misma.

LIGNINA

La cuantificacion de la lignina se realizar segun el procedimiento NREL/TP-510-

42618. Este procedimiento consiste en una hidrolisis acida en dos etapas para

fraccionar la biomasa en productos mas facilmente cuantificables. La lignina se

transforma de esta manera en materia acida insoluble y soluble.

Para la determinacion de la lignina se pesan 300.0 10.0 mg de muestra en un

tubo de presion tarado. Cada muestra se analiza por duplicado. Se anaden 3.00

0.01 ml de acido sulfurico del 72 % a cada tubo de presion. Se dejan los tubos de

presion en un bano de agua a 303 C e incubar la muestra durante 60 minutos.

Una vez completada la hidrolisis, se sacan los tubos de presion del bano y se

diluye el acido a una concentracion del 4 % anadiendo 84 ml de agua destilada. Se

introducen los tubos de presion en un autoclave, se mantienen durante 1 hora a

121 C. Una vez completado el ciclo se dejan enfriar lentamente las muestras

hidrolizadas antes de retirar los tapones.

La determinacion de la lignina acida soluble se realiza filtrando a vacio las

disoluciones de hidrolisis y se recoge el filtrado, siendo necesarias 6 horas de

hidrolisis. Una vez transcurridas las 6 horas de hidrolisis de las alicuotas, se mide

la absorbancia de cada una de ellas en el espectrofotometro UV-VIS.

La lignina acida insoluble se determina lavando los solidos con agua destilada, se

seca el residuo acido insoluble a 105 3 C hasta alcanzar peso constante.

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 BIBLIOGRAFIA

Withdrawn, Method of test for holocellulose in wood, 1985.

TAPPI-T-212-om-12, One percent sodium hydroxide solubility of wood and pulp.

B. H. R. R. C. S. J. S. D. T. D. C. A. Sluiter, Determination of structural
carbohydrates and lignin in biomass, National Renewable Energy Laboratory,
2008.

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