INFORME FINAL PRCTICA LABORATORIO

CURSO MICROBIOLOGA.

ADRIANA MARCELA PEA QUINA

AURA PAOLA ANDRADE
CARLOS MARIO VALENCIA VALENCIA

Directora Curso:

SANDRA PATRICIA MONTENEGRO

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
ESPECIALIZACIN EN BIOTECNOLOGA AGRARIA
CURSO DE MICROBIOLOGIA
MAYO 2015
 1. INTRODUCCIN.

El curso de Microbiologa de la especializacin de Biotecnologa Agraria, dictado a los

estudiantes por la UNAD, contempla en su contenido acadmico, la realizacin de una
prctica de laboratorio, como medio de reforzar los conocimientos adquiridos durante el
curso.

La prctica del laboratorio se realiz los das 16, 17 y 18 de Mayo del 2.015, en los
laboratorios, de la sede principal de la UNAD Jos Celestino Mutis, en la ciudad de Bogot.

El objetivo fundamental de la prctica de laboratorio, es el de dar a conocer y comprender

los procedimientos y tcnicas propias para el anlisis microbiolgico del suelo, a los
estudiantes del curso de microbiologa., teniendo como elementos fundamentales el de
adquirir conocimientos y comprensin de las tcnicas de recuento microbiano, los mtodos y
principios para el manejo de muestras con diluciones, adems de la determinacin de
microorganismos patgenos del suelo y su importancia.

En el laboratorio se revisaron las temticas: Anlisis microbiolgico del suelo, recuentos

microbianos: Recuentos viables (recuento en placa en superficie y Nmero ms probable) y
determinacin de microorganismos patgenos del suelo.

Se destaca laboratorio la importancia de la realizacin de anlisis microbiolgicos al suelo

ya que nos permiten determinar la carga microbiana de grupos especficos de
microorganismos cultivables con caractersticas comunes (recuentos microbianos) as
como el aislamiento y tipificacin de sus gneros y especies.

Adems de la realizacin del anlisis microbiolgico del suelo, es necesario comprender el

metabolismo microbiano y la caracterizacin de los mismos, ya que de este depende su
correcta identificacin y conocimiento de actividad en el suelo, es necesario entonces
conocer sus caractersticas morfolgicas, fisiolgicas, metablicas, ecolgicas y genticas.

Para llevar a cabo lo propuesto anteriormente, es necesario realizar la identificacin los

microorganismos, para lo cual es indispensable, previamente cultivarlo y aislarlo. La
presencia de crecimiento se establece por la aparicin de colonias en medio slido y de
turbidez en medio lquido. Debe tenerse en cuenta la posible identidad del
microorganismo por: el origen de la muestra, caractersticas morfotintoriales, patrn de
crecimiento en medios diferenciales, selectivos y para pruebas bioqumicas, y propiedades
hemolticas, metablicas y fermentadoras en varios medios ,
 2. OBJETIVOS GENERALES

Conocer y comprender los procedimientos y tcnicas propias para el anlisis

microbiolgico del suelo.

Conocer y comprender los procedimientos y fundamentacin de las pruebas

bioqumicas como herramienta til en los procesos de tipificacin bacteriana.

Conocer y comprender las caractersticas morfolgicas y tintoriales de las bateras y

su utilidad en los procesos de tipificacin. Adicionalmente conocer la cmara de
Neubauer y su utilidad para la realizacin de recuentos celulares.

2.1 OBJETIVOS ESPECFICOS.

Conocer y comprender las tcnicas de recuento microbiano.

Comprender los mtodos y principios para el manejo de muestras con diluciones.
Conocer y comprender las tcnicas para determinacin de microorganismos
patgenos del suelo y su importancia.
Conocer y comprender algunos procesos metablicos bacterianos.
Comprender los mtodos y principios para los procesos de aislamiento y tipificacin
bacteriana.
Establecer la clasificacin bacteriana de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas.
Conocer los procesos adecuados y necesarios para el montaje de extendidos
bacterianos, la tcnica y fundamentacin de la coloracin de Gram y su utilidad.
Conocer las caractersticas de la cmara de Neubauer.
Conocer y comprender los procesos para la realizacin de los recuentos celulares
en la cmara de NeuBauer

3. MATERIALES Y METODOLOGA.

3.1 PRCTICA MICROBIOLOGA DE SUELOS

Materiales practica 3.1

- Erlenmeyer con 99 ml de agua peptonada estril
- Tubos de ensayo con 9 ml de agua peptonada estril
- Pipeteadores
- Piperas de 1ml estriles
- Gradillas
- Cajas de petri con agar nutritivo
- Tubos con caldo lactosado bilis verde brillante y tubo de Durham
- Cajas de petri con los medios VRBA, Mackonkey , King B, Agar
cetrimide, YDCA y OF
- Asas de vidrio para expandir la muestra
- Asa bacteriolgica
- Balanza
 Metodologa practica 3.1
Preparacin de la muestra Recuentos microbianos Determinacin de patgenos del suelo.
Pesar 1 gr de suelo y El recuento de bacterias hetertrofas en placa y el recuento de Para el aislamiento y tipificacin de
adicionarlo en condiciones coliformes por NMP se realizarn en forma sincrnica. Para ello: patgenos se partir de las ltimas diluciones
de asepsia a un Erlenmeyer Se organizar el material as: se seleccionarn tres tubos de obtenidas en la preparacin de la muestra
con 99 m de agua diluciones sucesivas que sern nuestras muestras de trabajo. inicial. Se utilizarn los siguientes medios:
peptonada estril. Para cada dilucin se organizarn 2 cajas de agar nutritivo y VRBA, Mackonkey , King B, Agar cetrimide,
Mezclar y dejar en reposo. tres tubos de caldo lactosado bilis verde brillante. El YDCA y OF.
(Dilucin 10 -2) En una material debe ser marcado adecuadamente con el nmero
gradilla organizar una de la dilucin y grupo correspondiente. Tomar de cada una de las ltimas diluciones
serie de 12 tubos con Siembra: adicionar 0.1 ml de la dilucin seleccionada en el y sembrar en una caja de cada uno de los
agua peptonada estril y centro de cada una de las 2 cajas correspondientes para esa medios anteriormente anotados.
previamente marcados dilucin, con la misma pipeta, adicionar 1 ml de la misma
numerando diluciones dilucin a cada uno de los 3 tubos con caldo lactosado Incubar durante 24 horas y de acuerdo a la
sucesivas, tomar 1 ml de la bilis verde brillante correspondientes. Para cada dilucin se lectura realizar nuevas siembras as:
dilucin inicial y realizar el mismo procedimiento.
adicionarla al tubo Tomar cada caja de agar nutritivo con el asa de vidrio Ante sospecha de presencia de
marcado con la dilucin previa esterilizacin se realizar la distribucin de la muestra enterobacterias en el medio mackonkey
10-3. asegurando una distribucin homognea por toda la superficie realizar tipificacin con pruebas bioqumicas
Despus de mezclar y con del medio. y en caso de crecimiento en el medio YDCA
para Xanthomonas, realizar repique en medio
distinta pipeta, realizar Incubar para su lectura en la siguiente prctica de acuerdo al
sucesivamente y en igual OF.
proceso investigativo realizada para dar el resultado como
forma diluciones hasta la UFC de bacterias hetertrofas por gr de suelo.
dilucin 10-12. PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES
TOTALES:
Despus de su incubacin, aquellos tubos donde se
observe turbidez y produccin de gas sern sembrados en
medio EMB para su posterior lectura despus de incubar 24
horas a 37C. El establecer las muestras positivas por cada
dilucin permitir realizar los clculos estableciendo en la tabla
existente para ello el NMP y realizar los clculos de acuerdo a
la frmula investigada para que se reporte finalmente como
NMP de coliformes totales por gr de suelo.
3.2 METABOLISMO MICROBIANO

Materiales practica 3.2

- Asa bacteriolgica
- Medios de cultivo: EMB, Makconkey, SS, TSI, LIA, Simons citrato,
SIM, rea, MRVP.
- Cepas para cultivo en Agar nutritivo.
- Incubadora

Metodologa practica 3.2

Realice una descripcin de los medios de cultivo antes de ser
inoculados.
Marque los medios de cultivo con el nmero de cepa y nmero de su
grupo.
Realice mediante el mtodo de siembra en rejilla la siembra de los
medios EMB, Mackonkey y SS previa esterilizacin y enfriamiento
del asa bacteriolgica antes y despus de cada siembra.
Siembre el medio de urea y MRVP (lquidos).
Para los tubos en agar inclinado (LIA, Simons citrato y TSI), siembre
con asa horizontal, inoculando en profundidad y luego con estra en
superficie.
Recuerde esterilizar el asa antes y despus de cada siembra.
Siembre el medio de sim (semislido), por puncin hasta el fondo
del tubo.
Lleve a incubacin a 37C por 24 horas para su lectura.

3.3 MORFOLOGA BACTERIANA

Materiales practica 3.3

Asa bacteriolgica
Lminas portaobjeto
Soluciones para la coloracin de Gram (violeta de Gram, lugol, alcohol
acetona, fuscina de Gram)
Cultivos bacterianos
Tubos de ensayo
Solucin salina
Pipeteadores
Pipetas
Microscopios
Cmaras de Neubauer
Gradillas

Metodologa practica 3.3

Caractersticas morfolgicas de las bacterias
Para el desarrollo de la prctica cada grupo tendr en su
sitio de trabajo los siguientes elementos: asa
bacteriolgica, lminas portaobjetos, solucin salina,
mechero, 2 cultivos para estudio uno en medio slido y
uno en medio lquido.
Marcar las lminas con el nmero de la muestra que
Determinacin de patgenos
Realice a partir del cultivo a estudio, diluciones seriad
6
Se realizarn los recuentos primero utilizando los cuadran
el cuadrante central para conocer como se utiliza ca
como se realizan los clculos para ello.
Montaje de la cmara: tome la cmara y fije so
 se utilizar en cada una
Previa esterilizacin del asa bacteriolgica y despus
de su enfriamiento se tomar una muestra del cultivo
lquido. Esta se extender en el portaobjetos del
centro a la periferia en forma ovalada y uniforme.
Esterilizar el asa despus del procedimiento.
Adicionar una gota pequea de solucin salina en el
centro del portaobjeto.
Tomar con el asa estril, una pequea muestra de
colonia bacteriana y extender del centro a la periferia
en forma uniforme.
Con los frotis secos, fijar mediante calor con ayuda
del mechero.
Realizar la coloracin de Gram para los dos
extendidos.
Observar al microscopio mediante objetivo de
inmersin.
Determinar las caractersticas morfotintoriales
de cada una de las cepas estudiadas
dos cuadrculas de la cmara ubicadas entre los surc
Con pipeta Pasteur tome una muestra de la d
lquido al borde de la laminilla. La muestra se
laminilla por capilaridad. Proceda igualmente par
contrario de la cmara.
Observe microscpicamente en pequeo aumento u
recorrido sobre la misma identificando los difere
recuento y cambie a objetivo de 40x.
Ubquese en uno de los cuadrantes esquineros co
cuadros. Realice el recuento de los 16 cuadros en for
los otros tres cuadrantes de las esquinas.
Calcule el nmero de elementos formes de la dilucin
De su informe en mm 3 y por ml. Explique los clculos
Clculos: No de clulas en mm3
= sumatoria de clulas en los cuatro cuadrantes/4 X FD
Recuento en el cuadrante central: se utiliza para
bacterias, sin embargo facilita el recuento de elemen
forma rpida.
Recorra el campo microscpico y ubique el cuadran
nmero de cuadros y subdivisiones.
El cuadrante central (1 mm 2 ) est dividido en 2
subdividido en 16 cuadros.
Realice el recuento en cinco de los 25 cuadros as: lo
De su informe en mm 3 y por ml. Explique los clculos
Clculos:No de clulas/mm 3
= sumatoria de clulas en los 5 cuadros X 5 X FD X 10
 3.4 MORFOFISIOLOGA HONGOS Y PARSITOS

Materiales practica 3.4

Cultivos de trabajo
Cortes histolgicos
Pipetas de Pasteur
Lminas portaobjeto
Lminas cubreobjeto
Lugol parasitolgico
Azul de lactofenol
Microscopios

Metodologa practica 3.4

Prctica 2: caractersticas morfolgicas de Prctica 3: caractersticas morfolgicas de
mohos y levaduras los parsitos.
Para el desarrollo de esta prctica se contar en Para el desarrollo de la prctica se contar con:
el sitio de trabajo de: mechero, lminas, microscopio, gradilla y muestras de anlisis,
laminillas, cultivo de levaduras, microcultivo, cortes histolgicos.
cultivo de mohos en PDA. OBSERVACIN MICROSCPICA DE LOS
OBSERVACIN DE LEVADURAS: sobre la CONCENTRADOS: sobre una lmina
lmina coloque una gota de azul de lactofenol y portaobjetos adicione una gota de la muestra a
transfiera una pequea cantidad de cultivo de examinar y coloque el cubreobjetos sobre ella.
levadura con ayuda del asa bacteriolgica. Realice un segundo preparado en igual forma
Coloque la laminilla y observe al microscopio. pero adicionando una pequea gota de lugol
Describa las estructuras. parasitolgico.
OBSERVACIN DE MOHOS: sobre una lmina Observe al microscopio el preparado primero
portaobjeto coloque una gota de azul de en 10X y luego en 40X. De acuerdo a lo
lactofenol y con ayuda del asa micolgica investigado determine la presencia de
transfiera una pequea porcin de la colonia a huevos de helmintos o formas de
examinar. Sobre el preparado coloque la laminilla protozoarios. Respldese con el atlas de
y observe al microscopio. Reconozca las parasitologa y el docente.
estructuras morfolgicas (micelio, hifa, Realice la descripcin de las formas
estructuras de reproduccin etc). Mencione y encontradas y caractercela de acuerdo a
describa las estructuras observadas y su sus estructuras especficas.
importancia en el proceso de diagnstico para su
identificacin. OBSERVACIN MICROSCOPICA DE CORTES
OBSERVACIN DE MOHOS EN HISTOLGICOS: bajo la gua del docente se
MICROCULTIVO: saque de la caja de petri en la realizara el estudio y revisin de cortes
cual se encuentra el cultivo el preparado. histolgicos y preparados coloreados con
Coloque la lmina sobre la platina del diferentes formas parasitarias.
microscopio y enfoque observando el centro y Realice la descripcin de cada uno de los
las zonas perifricas (borde del agar), identifique preparados revisados y las caractersticas de
las diferentes estructuras micticas y
los parsitos relacionados.
descrbalas. Mencione las caractersticas
observadas tiles en el proceso de clasificacin.
 4. RESULTADOS

4.1 Prctica microbiologa de suelos

Fundamento Caldo lactosado Verde bilis brillante

En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado

desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepcin de coliformes, y la
lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la
fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas.

Composicin

Frmula (en gramos por litro)

Bilis de buey deshidratada 20.0

Lactosa 10.0

Peptona 10.0

Verde brillante 0.0133

pH final: 7.2 0.2

Tcnica Numero ms probable NMP [1]

El mtodo del Nmero ms probable (NMP) (Most probable number - MPN - en ingls),
tambin conocido como el mtodo de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos
cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia
positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de poblacin que se
emplea cuando una evaluacin cuantitativa de elementos individuales no es factible.

El mtodo se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos

especficos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de
muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una nica clula viva
puede desarrollarse y producir un cultivo turbio. El mtodo requiere la realizacin de una
serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio lquido adecuado para el
crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las
muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que
recibieron una o ms clulas microbianas procedentes de la muestra, se pondrn turbios,
mientras que los tubos que no recibieron ninguna clula permanecern transparentes.

Tabla de NMP 95% por gramo de muestra

 Fuente: STANDARD METHODS 9221 B. STANDARD TOTAL COLIFORM
FERMENTATION TECHNIQUE , JUNE 2003

Para el ejercicio acadmico se trabaj con muestras de suelo del laboratorio de

microbiologa JCM la muestra de suelo 1 fue inoculada con entero bacterias para que diesen
positivas las pruebas y pudisemos comparar resultados.

Se inoculo 1 mL de las concentraciones 10 -5 - 10 -6 - 10 -7 y se hicieron 3 repeticiones de

cada concentracin para hallar el NMP. Se llevaron a incubacin por 24 horas y se evaluaron
las siguientes caractersticas:

- Cambio en la coloracin inicial (verde traslucido brillante a turbio) y presencia de

burbuja de ms de del tubo de durham si tiene las dos caractersticas se toma
como positiva la prueba y se le asigna el nmero 1.
- Si es turbio pero no hay burbuja es negativa la prueba se le asigna 0.
- Si tiene burbuja pero esta brillante es negativa la prueba se le asigna 0.

Para el presente informe se presentan los datos de los grupos 1, 2 y 3 en la siguiente tabla.

Tabla de resultados grupo 1,2 y 3

GRUPO 10-5 10-6 10-7

Diluci
NMP
n
10 -5 3

10 -6 3

10 -7 3
 2

Dilucin NMP
-5
10 0
-6
10 0

10 -7 0

Dilucin NMP
10 -5 0
10 -6 0

10 -7 0

Discusin de los resultados recuentos microbianos.

De acuerdo a la tabla anterior se puede observar que el grupo 1 tiene resultados positivos
para la presencia de coliformes ya que el caldo lactosado verde bilis brillante reacciona con
el grupo coliforme con la fermentacin de la lactosa (turbidez) con produccin de cido y
gas (Burbuja).

Analizando la tabla de NMP se busca el nmero 3-3-3 dado que es positivo en las tres
diluciones y aparece que es > 1100 lo cual es positivo para la presencia de coliformes dado
que la muestra estaba inculada con cepas de E. coli

Lo ideal es esperar 24 horas y hacer siembra en medios selectivos para identificar

caractersticas del grupo de estudio. Para esta prctica se trabaj con una bacteria
especfica para poder visualizar resultados. Por lo tanto no se desarroll la prctica de
determinacin de patgenos del suelo dado que no se aislaron bacterias de las muestras de
suelo analizadas si no de bacterias ya aisladas para lo cual se har el anlisis en la prctica
de metabolismo bacteriano.

4.2 Metabolismo microbiano Determinacin de patgenos del suelo.

Esta prctica consiste en aislar microrganismos de las diluciones y someterlas a pruebas

bioqumicas para lo cual se evala como se comporta determinada bacteria en un sustrato
para esta prueba nuestro grupo trabajo con la bacteria Salmonella enteritidis la cual es un
importante patgeno de las aves de corral y ha sido aislada en pollos parrilleros, aves
reproductoras y parvadas de ponedoras comerciales. La identificacin bacteriolgica de
aves positivas es difcil debido a la excrecin intermitente del organismo. La presencia de
anticuerpos no siempre significa infeccin, pero es indicativa de exposicin previa. Otros
grupos trabajaron con Escherichia coli la cual es una enterobacteria que se encuentra
generalmente en los intestinos animales, y por ende en las aguas negras, pero se lo puede
encontrar en todos lados, dado que es un organismo ubicuo. Por lo tanto es indicador de
contaminacin por heces. Tambien se trabaj con Enterobacter aerogenes bacilo Gram-
negativo, anaerbico facultativo, no esporulante oxidasa negativo, catalasa positivo, citrato
positivo, indol negativo. E. aerogenes es una bacteria patgena causante de infecciones
oportunistas y nosocomiales.

A continuacin solo se hara la descripcin de los resultados obtenidos con Salmonella

enteritidis.

Medio SIM
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y
de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de
la familia Enterobacteriaceae.
Siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin
profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe
inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad
del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice
en lnea recta.
Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.
Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de
la lnea de siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de
siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o
en todo el medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo
de Kovacs o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
MUESTRA
SIM RESULTADO RESULTADO
GRUPO INICIAL
S I M

1 E. coli - + +

2 Salmonella
+ - +
enteritidis

3 E. coli - - -

4 Enterobacter
- - +
aerogenesis

SIM Sulfuro indol - movilidad

Para la bacteria Salmonella enteritidis se observa que es SH 2 positiva
por el ennegrecimiento en todo el medio. Es indol negativa La prueba
del indol es una prueba bioqumica realizada en especies bacterianas
para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del
aminocido triptfano. Esta divisin molecular es lograda por una serie
de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le
llama con frecuencia triptofanasa. La movilidad es positiva porque esta
relacionada con la prueba SH2.
Caractersticas de Enterobacteriaceae

En la definicin clsica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios

bsicos, adicional a la aparicin de nuevos mtodos taxonmicos para incluir a
ciertos gneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que
forman parte de esta familia:

1. Son bacterias gram negativas, la mayora bacilos, otros cocobacilos y

otros pleomrficos.
2. No son exigentes, son de fcil cultivo.
3. Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es
decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
4. Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
5. Son anaerbicos facultativos.
6. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaerbicas con o sin
la produccin de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una
amplia gama de substratos en condiciones aerbicas.
7. Muchos gneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque
algunos gneros no son mviles.

Adicional a ello, las enterobacterias no forman esporas, algunas producen

toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos.
Son quimiohetertrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos
simples de carbono y nitrgeno, generalmente slo con D-glucosa,
aunque algunas requieren aminocidos y vitaminas. La temperatura
ptima de crecimiento es de entre 22 C y 37 C.

Medio LIA - Lisina Hierro Agar.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente
Salmonella spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en la
produccin de cido sulfhdrico.
Siembra
Por puncin profunda con aguja de inoculacin.
Incubacin
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:

-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.

-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:

Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia
y alguna cepas de Morganella spp.

3-Produccin de cido sulfhdrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico

y fondo)
Microorganismos Color en el pico de flauta Color en la base del tubo Ennegrecimiento del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071 Rojo Amarillo Negativo

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Prpura Prpura Positivo

Salmonella enteritidis ATCC 13076 Prpura Prpura Positivo

Providencia spp. Rojo Amarillo Negativo

Citrobacter freundii Prpura Amarillo Positivo

Morganella spp.* Rojo Amarillo Negativo

Edwarsiella spp. Prpura Prpura Positivo

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Prpura Prpura Negativo

Escherichia coli ATCC 25922 Prpura Prpura Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.

GRUPO LIA MUESTRA INICIAL RESULTADO
1 E.coli -

2 Salmonella enteritidis -

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los
nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las
enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato
de sodio, son los indicadores de la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de
bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o
menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.

Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza

el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La
decarboxilacin de la lisina, tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario
que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de
cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color
violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.

La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del

medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.

Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella,

desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal
de hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del
medio.
Teroricamente la prueba para Salmonella enteritidis debe tomar
tonalidades descritas en la tabla pero en laboratorio la prueba es
negativa quiz por la temperatura o porque no se cumplieron las 24
horas completas.

CIT Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad
de usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo
ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.
Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo
bacteriano y no hay cambio de color.

En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y

el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son
necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema
buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al
color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los
microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan
sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin
de alcalinidad.

El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato

permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del
citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de
un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como
fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio
entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.
 SIMMONS MUESTRA INICIAL RESULTADO
GRUPO CITRATO
CIT
1 E. coli -

2 Salmonella enteritidis +

3 E. coli -

4 Enterobacter
+
aerogenesis
Salmonella enteritidis es positiva para esta prueba dado que se
observ crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.

TSI Agar-hierro-triple azcar

Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en
base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido
sulfhdrico.
Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre
la superficie del medio.
Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los

nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y
glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el
sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y
amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido
sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el
indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio

del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El
tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
 TSI MUESTRA INICIAL RESULTADO
GRUPO
G L S GAS H2S

1 E. coli + + + - -

2 Salmonella
+ + - + +
enteritidis

3 E. coli - - - - -

4 Enterobacter
+ + + + -
aerogenesis

G: glucosa; L: lactosa; S: sacarosa

Es positivo para glucosa y lactosa porque hay cambios en la base y el
medio del agar y negativo para sacarosa porque el pico de flauta quedo
del color inicial. Se observa una burbuja de aire en la base lo cual es
positivo para gas y el color negro es positivo para la produccin de H2S

Agar OF
Medio de cultivo utilizado en las pruebas bioqumicas de identificacin bacteriana
en base al metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas,
a la movilidad y produccin de gas.
Siembra
Inocular, por cada hidrato de carbono que se use y para cadamicroorganismo en
estudio, 2 tubos conteniendo el medio O.F. y el mismo hidrato de carbono.
Rotular un tubo con la inscripcin: Abierto y otro tubo con la inscripcin:
Cerrado (sellado).

A partir de un cultivo puro de 18-24 horas del microorganismo en estudio,

preparar un inculo poco denso y sembrar utilizando aguja de inoculacin. Picar
hasta aproximadamente 0.6 mm del fondo.

Agregar al tubo cerrado (sellado) 1 o 2 ml de vaselina o parafina fundida

estril, para excluir el oxgeno.

Luego, tapar ambos tubos con las tapas apropiadas.

Incubacin
Durante 48 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Algunos microorganismos requieren hasta 4 das, y otros hasta 14 das de
incubacin.
Resultados
El uso del hidrato de carbono, ya sea por fermentacin u oxidacin, produce
acidez en el medio, con el consecuente viraje del color verde al amarillo.

a. Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen

una reaccin cida solo en el tubo abierto. Presentan poco o nulo
desarrollo y ausencia de produccin de cido en el tubo cerrado.
 b. Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en estudio:
producen una reaccin cida en ambos tipos de tubos.

c. Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no

producen cambios ninguno de los 2 tubos, los cuales permanecen verdes.

Se debe informar: produccin de cido (A), cido con gas (AG), alcalino (K) o sin
cambio (-).
Tambin, puede informarse si el organismo es mvil, cuando crece lejos de la
lnea de inoculacin.

MUESTRA RESULTADO
GRUPO OF
INICIAL

1. E-coli +

2. Salmonella enteritidis +

3. E. coli -

4. Enterobacter aerogenesis +

El medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la
importancia del significado taxonmico del metabolismo oxidativo-fermentativo
de los hidratos de carbono por las bacterias Gram negativas.

Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo

el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o
parafina antes de la incubacin, se puede diferenciar bien el metabolismo
oxidativo o fermentativo, as como la no utilizacin de un hidrato de carbono por
la bacteria en estudio.

En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentracin de un determinado

hidrato de carbono, hace que los microorganismos utilicen para su desarrollo
dicha sustancia, evitando que bacterias aerbicas utilicen la triptena presente
con la consecuente produccin de reaccin alcalina, la que se neutraliza por la
ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo.

El fosfato dipotsico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene

el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al
color amarillo en medio cido. El contenido de agar, da la propiedad de ser un
medio semislido, y permite determinar la movilidad y la distribucin de los
productos cidos en el medio de cultivo. La glucosa es el hidrato de carbono mas
frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero tambin pueden agregarse
otros azcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa, entre
otros.

Por oxidacin o fermentacin de un determinado hidrato de carbono, se acidifica

el medio y el indicador de pH vira del color verde al amarillo.
 Agar SS Salmonella Shigella Agar.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia.
Siembra
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas
especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los
cuales se sospeche su presencia.
Incubacin
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Colonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro

Shigella flexneri Incoloras

Shigella sonnei Incoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento

GRUPO SS MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E. coli +
2 Salmonella enteritidis -
No foto No foto
3 E. coli -
4 Enterobacter aerogenesis -
La prueba dio negativa para Salmonella enteritidis aunque tericamente
se reporta como positiva quiz porque no se llev a cabo la incubacin
en aerobiosis.

Prueba de UREA.
Medio utilizado para la identificacin de microorganismos, en base a la actividad
uresica.
Es particularmente til para diferenciar Proteus spp. de otros miembros de la
familia Enterobacteriaceae.
Siembra
Sembrar un inculo denso a partir de un cultivo puro de 24 horas.
Incubacin
A 35-37 C, en aerobiosis. Observar las reacciones a las 8, 12,24 y 48 horas de
incubacin.
Para aquellos microorganismos que hidrolizan lentamente la urea, incubar hasta
72 horas.
Resultados

Microorganismo Actividad uresica Color del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071 Positiva Rojo-rosado

Escherichia coli ATCC 25922 Negativa Amarillo

S. flexneri ATCC 12022 Negativa Amarillo

S. typhimurium ATCC 14028 Negativa Amarillo

MUESTRA RESULTADO
GRUPO UREA
INICIAL

1 E. coli -

2 Salmonella
-
enteritidis

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis

La prueba dio negativa para urea al parecer porque las bacterias de estudio son
descomponedoras de urea pero lentas ya que tericamente se recomienda
visualizar a las 72 horas y solo se revis a las 24 horas. Aunque comparado con
la muestra inicial se observan cambios en la coloracin como turbiedad y otras
que se tornan rosadas.

MR-VP Medio
Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y Voges
Proskauer.
Es particularmente til para la clasificacin de enterobacterias.
Siembra
Por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio.
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37C por 3 das.
Resultados

a-Prueba del rojo de metilo:

Aadir unas gotas de una solucin de rojo de metilo al 0.04%, observar el color del medio.

b-Prueba del Voges Proskauer:

Aadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto y 0.2 ml de hidrxido de potasio
al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente
durante 10-15 minutos. Observar el color de la superficie del medio.

1-Prueba del rojo de metilo:

Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.

2-Prueba de Voges Proskauer:

Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos despus de una completa agitacin
del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.

Microorganismo Crecimiento RM VP

E. coli ATCC 25922 Bueno + -

K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno - +

P. mirabilis ATCC 43071 Bueno + -

S. typhimurium ATCC 14028 Bueno + -

Citrobacter freundii Bueno + -

Enterobacter aerogenes Bueno - +

GRUPO MRVP MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E-coli -

2 Salmonella enteritidis +

3 E. coli +

4 Enterobacter aerogenesis -

En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el

desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de
distintas vas metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales
cidos (cido lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros
(acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la
adicin de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de
productos cidos, y por la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de
adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio
con glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil carbinol a
diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.
Esta prueba no se pudo caracterizar porque no reacciono con las pruebas de rojo
de metilo

Prueba Agar cetrimide

Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Pseudomonas
aeruginosa y de otras especies del gnero. Su frmula cumple con los
requerimientos de la Armonizacin de Farmacopeas Europea, Japonesa y
de los Estados Unidos de Norteamrica (EP, JP y USP respectivamente).
Siembra
En superficie, por inoculacin directa de la muestra estriando o a partir de un
caldo de enriquecimiento
Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24-48 horas.
Resultados
Observar el crecimiento microbiano, las caractersticas de las colonias y la
produccin de pigmentos. La presencia de un color verde-azulado corresponde a
produccin de piocianina, mientras que un color verde corresponde a la
produccin de pioverdina y un color rosa claro, rojizo o marrn oscuro
corresponde a la produccin de piorrubina. Examinar las placas bajo luz
ultravioneta, ya que la produccin de fluorescena se observa de color amarillo
verdoso brillante que difunde en el agar a partir del crecimiento microbiano.
GRUPO AC MUESTRA INICIAL RESULTADO

10 -5 -

10 -5 -

10 -5 -

10 -5 -

Para esta prueba se sembr de la dilucin 10-5 del suelo y dio negativo
por lo cual se describe la ausencia de Pseudomonas aeruginosa.

Pseudomonas agar F. King B

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la deteccin y la diferenciacin de
especies de Pseudomonas spp. en base a la produccin de fluorescena. Conocido
tambin como medio King B.
 Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de
Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.
Incubacin
Durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis. Si no se observa crecimiento,
reincubar a 25-30 C, o dejar a 22 C y observar diariamente hasta 7 das.
Resultados
Examinar las colonias bajo luz ultravioleta, a 260nm.
Se considera un resultado positivo la observacin de fluorescena, que es un
pigmento de color amarillo, amarillo-verdoso fluorescente que rodea la colonia o
que se extiende por todo el medio de cultivo debido a fenmenos de difusin.
KING- RESULTADO GRUPO 3 RESULTADO GRUPO 2
GRUPO
B

1 E.coli -

2 Salmonella
+
enteritidis

3 E. coli +

4
Enterobacter -
aerogenesis
En el medio de cultivo, la triptena y la peptona de carne aportan los nutrientes
necesarios para el desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la produccin de
pigmentos, la concentracin de fosfatos estimula la produccin de fluorescena e
inhibe la produccin de piocianina y piorrubina.

YDCA
indican los componentes del medio: Yeast (levadura), calcium carbonate
(carbonato de calcio), dextrosa y agar.
Resultados
GRUPO VDCA MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E-coli -

2 Salmonella
-
enteritidis

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis

Negativo no se encontr en las bases de datos consultadas especificaciones de

este medio de cultivo.
 Agar EMB
Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae.
Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener
colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubacin
De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y
otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos
capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de
hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un
efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de
Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las
cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada,
mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el
crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en
profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus
spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras
que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color
azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar
a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a
sus membranas. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de
especies de Salmonella y Shigella.
GRUPO EMB MUESTRA INICIAL RESULTADO

1 E-coli -

2 Salmonella
-
enteritidis

3 E. coli -

4 Enterobacter
-
aerogenesis

Agar ENDO
Desarrollado para el recuento de coliformes totales en agua, bebidas y otras
muestras por medio de la tcnica de filtracin por membrana.
 Siembra
Filtrar la muestra a analizar. El volumen que se filtra depende de la probable
contaminacin de la muestra.
- Embeber la almohadilla con el caldo m-Endo hasta la saturacin (la cantidad de
medio de cultivo depende del grado de absorcin de la misma).
- Apoyar la membrana filtrante sobre la almohadilla embebida con el medio de
cultivo.
Incubacin
Incubar las placas a 35-37 C por 24 horas. Ocasionalmente, los microorganismos
no coliformes pueden producir brillo metlico. Para confirmar las colonias
sospechosas, transferirlas a tubos con caldo verde brillante y bilis al 2%, con
campanitas de Durham. Incubar los tubos por 24-48 horas a 35-37 C. Los
coliformes habrn producido gas por fermentacin de la lactosa, al cabo de ese
perodo.
Resultados
El recuento debe realizarse en aquellas placas que contengan entre 20 y 80
colonias y no ms de 200, ya que se trata de un medio selectivo.
La concentracin microbiana debe expresarse como el nmero de
microorganismos presentes en 100 ml de muestra.
ENDO ENDO BACTERIA
ENDO ENDO 10-5
Grupo Bacteria CONOCIDA
10 E-5
Conocida
1 E-coli
+ -

2 Salmonella
enteritidis - -

3 E. coli
- -

4
Enterobacter - -
aerogenesis

4.3 Morfologa Bacteriana Resultados

MICROORGANISMO IMAGEN DESCRIPCION

Bacteria que pertenece al
gnero Enterobacter, de la
familia de las
Enterobacteriaceae. Es un
bacilo Gram-negativo,
anaerbico facultativo, no
esporulante oxidasa negativo,
Enterobacter catalasa positivo, citrato
aerogenesis positivo, indol negativo.
Muestra de suelo Basilos gram +, Cocos gram -

Resultados Cmara De Neubauer

Instrumento utilizado en medicina y biologa para realizar el recuento de esporas y clulas

en un medio lquido, cmara de recuento est adaptada al microscopio de campo claro o al
de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente
deprimidas en cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrcula de
dimensiones conocidas. Se cubre la cmara con un cubreobjetos que se adhiere por simple
tensin superficial (en especial una vez que se haya aadido la muestra lquida).

Luego se introduce, por capilaridad entre la cmara y el cubre, el lquido con las clulas a
contar, generalmente tras una dilucin previa; puesto que la cmara tiene dos zonas esto
permite hacer dos recuentos simultneamente. Se observa la retcula al microscopio con el
aumento adecuado y se cuentan las clulas.

A partir del nmero de clulas contadas, conociendo el volumen de lquido que admite el
campo de la retcula, se calcula la concentracin de clulas en la muestra lquida aplicada.1

El clculo de la concentracin de clulas se puede expresar as:

Partculas / l = (partculas contadas) / [ (superficie contada (mm)profundidad de la

cmara(mm) ] dilucin

Reticulo Neubauer.jpg
En la retcula central, la cmara de Neubauer tiene un cuadrado primario que contiene
nueve cuadrados secundarios, cada uno de ellos dividido a su vez en 16 cuadrados
terciarios. El cuadrado secundario central contiene no 16, sino 25 cuadrados, cada uno de
ellos dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este cuadrado central
se cuentan los hemates, utilizando slo los cuadrados de los bordes del terciario central y
uno de los centrales. En los secundarios de los bordes superiores e inferiores de la cmara
se hace el recuento leucocitario.
 Grupo 2
Grupo 1 Cuadrcula 1
Cuadrcula 1 35 39 35 53
26 2 6 5 40 29 41 41
5 10 7 9 37 42 28 31
-- - - - 33 25 40 31
9 15 18 52
40 27 31 66 Total 580
Total 164 Cuadrcula 2
Cuadrcula 2
39 29 42 38
4 - - 9
- - - -
33 32 33 44
- - - - 28 25 31 30
9 15 18 52 27 41 42 28
16 18 28 6
Total 81 Total 537
Cuadrcula 3 Cuadrcula 3
1 15 4 3 25 37 35 33
1 - 9 - 32 27 25 25
1 1 11 9 30 30 38 29
- 5 4 1 34 32 30 30
3 21 28 4

Total 56
Cuadrcula 4
Total 492
18 13 10 16 Cuadrcula 4
6 10 7 4 35 36 37 29
5 9 26 10 34 81 29 30
2 2 4 3 29 30 35 31
31 34 47 34 32 34 28 -
Total 141
Total 513
= 164+81+56+141= 442
Promedio= 110,5 = 580+537+492+513= 2.122
UFC/gr= 110,5*6*10= 6.630
Promedio= 530.5
UFC/gr= 530.5*6*10= 31.830

4.4 Resultados de observacin de hongos

Todos los hongos son organismos eucariotes y poseen al menos nucleo y membrana
nuclear, retculo endoplsmico, mitocondrias y aparato secretor. Los hongos crecen en dos
formas bsicos: levaduras y mohos. Los mohos son hongos filamentosos multicelulares
cuya forma y estructura tenida en cuenta a partir de sus caractersticas macro y
microscpicas permiten su clasificacin. Macroscopicamente se tendrn en cuenta las
caractersticas de las colonias en los medios de cultivo. Microscopicamente lo ser la
existencia y caractersticas de sus estructuras.

MICROORGANISM IMAGEN DESCRIPCION

O
Hongo sp1 Al tomar muestras de
hongos filamentosos para
observarlos al microscopio,
frecuentemente se
fragmenta el micelio. Sobre
todo en el estudio de los
dermatofitos, este
inconveniente se obvia
obteniendo un microcultivo.

El hongo crece sobre un

cubreobjetos que luego se
coloca sobre un
portaobjetos al que
aadimos un
transparentador con
colorante ( Lactofenol). De
este modo se observan las
hifas intactas facilitando su
correcta identificacin.
Hongo sp2

Hongo sp3 Los conidiforos generan

esporas solitarias o en
cadena. A veces estn
agrupados en un haz
(coremio) o sobre un
conjunto de hifas
entrelazadas (acrvula,
esporodoquio) o dentro de
un conidioma (picnidio).
Hongo sp4 HIFA es la unidad
vegetativa en la estructura
de los hongos.

Su forma es filamentosa y
de tipo tubular con paredes
celulares, pudiendo
presentar tabiques (hifas
septadas) o no (hifas
aseptadas) y que contienen
en su interior citoplasma
que viene a ser una
sustancia similar a la clara
de huevo junto con
pequeas estructuras con
morfologas y funciones
determinadas denominadas
organoides.

CONCLUSIONES

Esta prctica permite un acercamiento a las tcnicas bioqumicas para la identificacin de

microorganismos de diferentes grupos aunque en la actualidad pruebas de ADN ribosomal
permiten acercarse mas a la identificacin taxonmica de los microorganismos de inters.

Las pruebas bioqumicas sirven para hacer identificacin de familias sin embargo la
identificacin hasta especie es muy compleja.

La tincin de gram permite conocer caractersticas de la pared celular de los individuos de

estudio y clasificar en grandes grupos de acuerdo a la taxonoma de bergeys.

La actividad permite el acercamiento del estudiante de formacin virtual al manejo de

herramientas tecnolgicas para conocer los mtodos y tcnicas empleados en la actualidad.

La cmara de neubauer se usa para hallar densidad poblacional pero deben hacerse varia
repeticiones para sacar promedios ya que se observaron diferencias significativas en el
ejercicio que se hizo.

El video sobre la vida en el suelo es un objeto de aprendizaje que permite acercarnos al

universo microbiano y la relevacia para todos los ciclos biogeoqumicos.

El uso de organosclorados tiene efecto sobre la diversidad microbiana como estudiantes de

la especializacin debemos enfocarnos en las buenas practicas sobre el uso del suelo ya
que es un sistema dinamico.

Se ha podido apreciar la importancia de la actividad de los microorganismos en los

diferentes aspectos que denotan la fertilidad de un suelo y la sostenibilidad de ecosistemas
y agroecosistemas. El manejo de diversas prcticas culturales (establecimiento de
leguminosas en rotacin de cultivos, abonos verdes, aplicacin de materia orgnica) permite
que los sistemas agrcolas requieran menos aplicaciones externas de energa; con ello se
favorece la conservacin del recurso suelo en una condicin por dems favorable. Por otra
parte, estas prcticas permiten que la actividad microbiana sea favorecida y que se tenga
mayor diversidad de microorganismos, de tal forma que se establezcan diversas relaciones
trficas que contribuyan a la sanidad y fertilidad de los suelos manipulados en esta forma.

El conocimiento de la actividad fisiolgica de los microorganismos del suelo ha permitido

seleccionar aquellos con potencial de uso en la agricultura. De esta manera, el hombre ha
utilizado bacterias y hongos que propician mejor crecimiento y desarrollo de las plantas en
los agroecosistemas donde se aplican. Con ello, y de acuerdo con un adecuado manejo de
los sistemas, es posible incrementar la actividad microbiana del suelo, propiciando as el
fortalecimiento de la sostenibilidad de los ecosistemas y agroecosistemas. Sin embargo, el
uso de ciertos microorganismos debe contemplar algunos aspectos que permitan definir su
potencial benfico e incluso la factibilidad de utilizarlos, ya que algunos de ellos no son
susceptibles de ser aplicados directamente en cultivos bsicos (frijol o maz), como es el
caso de los hongos micorrzicos arbusculares, por ejemplo.

BIBLIOGRAFA.

AHMED E. Microbiologa de los alimentos. Manual de laboratorio. Editorial Acribia, Espaa.

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BARTHA R, ATLAS R. Ecologa microbiana y microbioga ambiental. Cuarta edicin.

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PARKER J, MARTINKO J, MADIGAN M. Brock biologa de los microorganismos. Dcima

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