Manual de Practicas 2016 Version Definitiva PDF

UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MXICO
FACULTAD DE MEDICINA
CoASH COO
COO
CH2 H2O
O H+
CH2
HO C COO
CH3 C SCoA H2O
C COO
ACETIL CoA CH2
H2O
CH COO
COO COO
CITRATO COO CH2
C O
Cis-ACONITATO
CH2 H C C*OO

NADH+H HO CH
COO
NAD OXALACETATO C*OO

NAD
ISOCITRATO
COO
NADH+H
H C OH
CICLO DE KREBS
COO
CH2
CH2
COO
H C C*OO
MALATO
COO C O
CH CoASH COO
C*OO
H2O
HC CH2
COO OXALSUCCINATO
COO C*O2
COO CH2 CoASH CH2 C*O2
FUMARATO CH2
C O
FADH2 FAD CH2 CH2 NAD
COO C*OO
C O NADH+H
SUCCINATO GDP -CETOGLUTARATO
SCoA
GTP +PI
SUCCINIL CoA
MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA

LICENCIATURA DE MDICO CIRUJANO
DR. AURELIO MENDOZA MEDELLN QFB ALICIA LUCERO PEA MARTNEZ
AGOSTO 2016
1
Pgina
ndice 2
Prlogo 3
Medidas de Seguridad 4
Material de Laboratorio 6
Preparacin de soluciones 10
smosis 14
Obtencin de muestras de sangre 17
Protenas totales y albmina sricas 22
Emulsificacin de aceite 28
Amilasa srica 32
Fosfatasa alcalina srica 36
Glucosa plasmtica 41
Lactato plasmtico 45
Triacilgliceroles sricos 49
Colesterol srico 53
Colesterol-LBD y Colesterol-LAD sricos 57
Transaminasas sricas 63
Urea srica 69
Capacidad amortiguadora del plasma sanguneo 74
Cuantificacin de Hemoglobina glicada 79
Examen general de orina 83
Creatinina srica 103
Depuracin de Creatinina y Estimacin de la VFG 106
Hematocrito, Hemoglobina y CHCM 113
Identificacin de grupos sanguneos 118
Recuento plaquetario 123
Bilirrubinas sricas 130
cido rico srico 136
2
PRLOGO
La Bioqumica es una ciencia que explica la naturaleza qumica de muchos y muy diversos procesos que
forman parte esencial de lo que determina la vida de una clula y del organismo en su conjunto.
Para el estudiante de Medicina, la Bioqumica es una disciplina fundamental de apoyo para la comprensin
de los fenmenos fisiolgicos cuyas alteraciones presentan relacin directa con las manifestaciones clnicas
de las patologas.
El conocimiento bioqumico, igual que ocurre con otras disciplinas, avanza gradualmente conforme se
desarrolla la investigacin. Esto ha permitido entender los fundamentos bioqumicos relacionados con las
manifestaciones clnicas de mltiples patologas, pudiendo interpretar la presentacin de signos y sntomas
desde la perspectiva bioqumica. Sin embargo, existen todava casos en los cules la informacin es
insuficiente para establecer dichas relaciones y en ellos las asociaciones de las patologas con sus
expresiones clnicas se catalogan como empricas.
Los programas de Bioqumica de las escuelas y facultades de Medicina de las universidades mexicanas
deberan estar orientados fundamentalmente a que los conocimientos que construyan los alumnos vinculen
cada vez ms los contextos bsico y clnico. Este es el camino que hemos seguido en nuestro programa
durante muchos aos.
En este contexto se enmarca el presente Manual de Prcticas de Bioqumica, cuyos propsitos

fundamentales son que el alumno reafirme los conocimientos adquiridos en el programa terico,
relacionndolos con aspectos fisiolgicos y patolgicos relevantes, que aprenda el manejo bsico del
laboratorio de Bioqumica Clnica, y de manera muy especial, que aprenda la pertinencia de las pruebas de
laboratorio para la obtencin de datos que le permitan fundamentar diagnsticos, tratamientos y
pronsticos con un criterio cientfico.
Aunque se ha realizado un esfuerzo serio para que tanto los contenidos como la presentacin de este
trabajo sean congruentes con las necesidades acadmicas de gran competitividad que prevalecen en la
actualidad en el mundo de la Medicina, sin duda es una obra perfectible y ser bienvenida toda sugerencia
que permita mejorarlo.
Los autores
3
MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BIOQUMICA
Al desarrollar las actividades programadas en el componente prctico del curso de Bioqumica de

la Licenciatura de Mdico Cirujano se utilizan materiales que representan riesgos potenciales para
la salud, debido a que pueden ser corrosivos, txicos o biolgico infecciosos.
Aunque los laboratorios se consideran en general lugares de trabajo seguros, esto es as slo
cuando conocemos y seguimos las normas de seguridad existentes.
Las siguientes son medidas que permiten minimizar el riesgo de contraer alguna infeccin,
especialmente el virus de la hepatitis B o el VIH, as como para evitar cortaduras o exposicin a
sustancias qumicas peligrosas.
1. Manejar cualquier lquido corporal, sangre, plasma, suero, orina o tejido, como potencialmente
infeccioso. Todas las sustancias qumicas proporcionadas, equipos y materiales del laboratorio
debern ser utilizados con el mximo cuidado.
2. Usar bata, la cual deber estar cerrada durante todo el tiempo que se permanezca en el
laboratorio.
3. Lavar las manos y usar guantes. Los guantes deben usarse para efectuar punciones vasculares y
para manipular sangre o cualquier otro lquido corporal. Despus del uso de cualquier material
biolgico, se procede al lavado de manos con los guantes puestos. Despus de quitarse los guantes
se deben lavar las manos.
4. Las agujas deben desecharse sin reencapucharlas en recipientes especiales destinados para ello.
Reencapuchar las agujas aumenta el riesgo de pincharse.
5. Todas las sustancias qumicas son potencialmente txicas y peligrosas, por lo que debern
manejarse con el mayor cuidado, atendiendo lo siguiente:
a) Conocer las propiedades generales de las sustancias, p. ej. si son venenosas, custicas o
corrosivas y el uso correcto de las mismas.
b) Nunca probar ni inhalar las sustancias.
c) Evitar el contacto de sustancias con la piel, evitando llevarse las manos a la boca, los ojos, etc.
Usar bata y guantes para proteger la ropa y el cuerpo; nunca dirigir un tubo de ensayo o la boca de
un matraz con lquidos o material de reaccin hacia el vecino ni hacia uno mismo.
d) No exponer manos, alimentos, cigarrillos, telfonos mviles ni ningn otro objeto a
contaminacin con sustancias qumicas o materiales biolgicos. No deben ingerirse alimentos de
4
ningn tipo ni fumar o manipular cigarrillos, ni usar telfonos mviles durante la estancia en el
laboratorio.
e) Nunca pipetear con la boca ningn lquido an si es aparentemente inocuo.
6. Seguir las indicaciones del profesor y del personal a cargo del rea de prcticas. Todos los
accidentes personales, por triviales que sean, se deben comunicar inmediatamente al profesor.
Nunca realizar actividades experimentales sin la supervisin del responsable del grupo.
7. Los accidentes ms frecuentes que ocurren en el laboratorio son cortaduras o laceraciones por
cristalera rota, por lo tanto en primer lugar slo deben utilizarse materiales en buen estado. Si
llega a ocurrir alguna lesin, deber tenerse en cuenta lo siguiente:
a) En caso de heridas pequeas dejar que sangre unos segundos; tener cuidado de no dejar
partculas de vidrio en la herida y aplicar un desinfectante.
b) Las heridas de mayor importancia deben ser atendidas por un mdico. Mientras tanto, evitar el
sangrado aplicando presin en un punto ms arriba la herida o antes de ella (no mantener la
presin por ms de 5 minutos).
8. Casi siempre los choques elctricos en el laboratorio son de poca importancia; las precauciones
de seguridad se deducen de la naturaleza del peligro. Nunca tocar un aparato elctrico con las
manos hmedas o cuando se est parado sobre un piso hmedo. Siempre apagar y desconectar
los aparatos antes de cualquier manipulacin.
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MATERIAL DE LABORATORIO
OBJETIVO
EI alumno identificar y explicar la utilidad del equipo y de los distintos materiales comnmente
utilizados en el laboratorio de Bioqumica.
GENERALIDADES
La tecnologa del laboratorio de anlisis clnicos se emplea para realizar con la mayor exactitud las
diversas pruebas qumicas a fin de que los resultados generados sean correctos, dada la
importancia que esto tiene para que la interpretacin que haga el mdico permita un diagnstico
confiable. Para lograr este propsito, el alumno debe seguir cuidadosamente el mtodo de cada
prctica, utilizando los materiales y equipo apropiados.
Por otra parte, es muy importante que el alumno preste mucha atencin en lo que est realizando
a fin de evitar accidentes que podran ser graves. Debe tener presente en todo momento las
posibles causas de accidentes para poder evitarlos oportunamente y disminuir as la probabilidad
de sufrir daos en su integridad fsica.
CLASIFICACIN Y USO DE MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO
Medicin de masa (peso)

Balanza granataria. Se utiliza para medir cantidades de masa relativamente grandes (0.5 g) de sustancias
generalmente slidas
Balanza analtica. Se utiliza para medir con exactitud cantidades de masa relativamente pequeas
(aproximadamente 5 a 500 mg), aunque tambin pueden medirse masas mayores.
Medicin de volumen
Pipetas graduadas. Son tubos de vidrio con dimetro interno uniforme excepto en la punta del
instrumento, de diferentes capacidades y calibradas. Son muy utilizadas debido a que con una
misma pipeta se pueden medir diferentes volmenes. Debe utilizarse la pipeta que sea ms
adecuada al volumen por medir. Por ejemplo, para medir 2.5 mL se utiliza una pipeta de 5 mL,
para medir 0.5 mL, una de 1 mL, etc. Deben cargarse mediante dispositivos especiales que eviten
pipetear con la boca (propipetas), evitando as el riesgo de contacto de la solucin con la boca.
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Micropipetas. Son instrumentos muy tiles para la medicin de volmenes pequeos con un alto
grado de exactitud. Existen micropipetas con diferentes capacidades, siendo las ms comunes las
que miden 1-10 L, 10-250 L y 100-1000 L.
Probetas. Son contenedores cilndricos de vidrio, graduados y de diferentes capacidades. Se
utilizan para medir volmenes aproximados ya que son materiales de baja exactitud.
Matraces aforados o volumtricos. Son contenedores de vidrio que tienen un tallo relativamente
delgado que presenta una marca denominada afore, la cual indica el nivel al que debe llevarse el
lquido para que el volumen medido corresponda al indicado en el matraz. Se utiliza para la
preparacin de soluciones con concentracin porcentual (% p/v), molar, osmolar o normal.
Matraces Erlenmeyer. Son contenedores de vidrio de forma cnica y fondo plano que se utilizan
para medir volmenes aproximados de lquidos y si es necesario, para calentarlos con bajo grado
de evaporacin.
Vasos de precipitados. Son recipientes de vidrio utilizados para medir volmenes de lquidos, con
muy baja exactitud. Tambin se utilizan para calentar o hervir lquidos cuando no importa que se
evaporen en grado importante, o simplemente como contenedores de sustancias lquidas.
Materiales varios
Pipetas Pasteur. Son tubos de vidrio con una punta delgada y larga. No tienen graduacin y se
utilizan fundamentalmente para transferir a un tubo limpio el suero o el plasma de una muestra
de sangre despus de centrifugada, y para llenar con sangre completa los tubos de Wintrobe para
la determinacin del hematocrito.
Gradillas. Dispositivos generalmente metlicos utilizados para mantener los tubos de ensayo en
posicin vertical
Esptulas. Dispositivos generalmente metlicos, planos, sin filo y con el extremo romo, utilizados
para transferir sustancias slidas, tpicamente al medir determinadas masas de ellas.
Tubos de ensayo. Son tubos de vidrio con diferentes dimensiones que se utilizan para llevar a cabo
las reacciones qumicas. Comnmente se utilizan los tubos 13x100, es decir los que tienen 100 mm
de altura y 13 mm de dimetro interno.
Equipo
Centrfuga. Es un instrumento que contiene un rotor capaz de girar varios miles de revoluciones
por minuto. Presenta espacios en los que se colocan los tubos que contienen el material que se
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desea centrifugar para lograr la separacin de sus componentes. Tpicamente se utiliza para
separar el suero del cogulo o el plasma del paquete globular, en muestras de sangre.
Potencimetro. Es un instrumento electrnico que cuenta con un electrodo sensible a la
concentracin de hidrogeniones de cualquier medio lquido. Antes de medir el pH de la solucin
que interese, debe calibrarse con un amortiguador de pH 7.0. Proporciona la lectura directamente
como un valor de pH.
Espectrofotmetro. Es un aparato electrnico capaz de medir la cantidad de luz que pasa a travs
de una solucin (transmitancia) o la que absorbe dicha solucin (absorbancia, extincin o densidad
ptica). La luz que incide en la solucin debe tener la longitud de onda que presenta la mxima
absorcin por la solucin en estudio. Se utiliza para la determinacin de la concentracin de
solutos generalmente coloridos, bajo el principio de que mientras ms concentrado se encuentra
el soluto, menor es la transmitancia de la solucin y mayor su absorbancia si se utiliza luz con la
longitud de onda adecuada.
EJERCICIOS
1. Compare la exactitud de un matraz volumtrico de 100 mL y de una probeta de 100 mL,

midiendo 100 mL de agua en la probeta y pasando el lquido al matraz. Anote sus
observaciones.
2. Mida los siguientes volmenes de agua: 25 L, 40 L, 0.2 mL, 0.7 mL, 1.5 mL, 2.8 mL, 4.5
mL, 7.5 mL y 9.5 mL, indicando qu pipeta utiliz en cada caso.
3. Transforme los volmenes que se mencionan en el punto 2, de manera que cada uno
quede expresado en microlitros, mililitros y litros.
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RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES
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PREPARACIN DE SOLUCIONES
OBJETIVO
1. EI alumno preparar varias soluciones, para lo cual calcular previamente las cantidades
de soluto y/o solvente necesarias.
2. EI alumno ejercitar la interconversin de unidades para expresar la concentracin de

soluciones.
GENERALIDADES
Las soluciones son mezclas homogneas de dos o ms sustancias. En una solucin, el soluto es la
sustancia disuelta y el solvente es la sustancia que disuelve. En el campo de la Biologa, el solvente
ms comn es el agua, la cual disuelve sustancias polares, es decir sustancias cuya estructura
molecular presenta cargas formales (positivas, negativas o ambas), y/o dipolos. Por ejemplo, el
cloruro de sodio (NaCI), consta de iones Na+ y Cl-; los azcares, como la glucosa, tienen gran
cantidad de grupos oxhidrilo (-OH), los cuales son estructuras dipolares (presentan + y -). En
cualquier caso, el principio de disolucin est dado por la capacidad de interaccin elctrica entre
las molculas de agua y las molculas de soluto. Las sustancias hidrofbicas, que carecen de
grupos polares, no son solubles en agua. Entre ellas se encuentran el aceite, la gasolina, el ter,
etc.
La concentracin de las soluciones puede expresarse en diversas formas: porcentaje peso/
volumen (% p/v), que es el nmero de gramos de soluto disueltos en cada 100 mL de solucin
(100 mL = 1 dL); molaridad (M), que es el nmero de moles de soluto disueltos en cada litro de
solucin; osmolaridad (OsM), que es el nmero de osmoles de soluto disueltos en cada Iitro de
solucin; normalidad (N), que es el nmero de equivalentes qumicos de soluto disueltos en cada
litro de solucin; molalidad (m), que es el nmero de moles de soluto disueltos en cada kilogramo
de solvente; y osmolalidad (Osm), que es la cantidad de osmoles de soluto disueltos en cada
kilogramo de solvente.
IMPORTANCIA CLNICA
En su mayora, los nutrientes se hacen llegar a los distintos tejidos disueltos en el plasma
sanguneo y por el mismo medio se canalizan los productos de desecho hacia las vas de excrecin.
Desde este punto de vista, el plasma sanguneo es una solucin que contiene muy diversos solutos
a concentraciones variables. En muchos casos la determinacin de la concentracin de estos
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solutos tiene gran importancia diagnstica. En la clnica, la concentracin de los solutos se expresa
en las unidades ms convenientes de acuerdo con las concentraciones normales correspondientes.
As, la concentracin de albmina se expresa en % p/v o en g/L, con un intervalo normal de 3.6 a
4.7 g/dL o 36 a 47 g/L. En cambio, la concentracin de glucosa, urea y otras sustancias, se expresa
en mg/dL o en milimoles/L debido a que la concentracin de estos solutos es relativamente baja
en condiciones normales: 70 a 100 mg/dL (3.9 a 5.5 mmol/L) y 20 a 45 mg/dL (3.3 a 7.5 mmol/L)
para glucosa y urea, respectivamente.
En el plasma existen solutos con concentraciones normales an menores, debiendo utilizarse para
tales casos una unidad menor, como g/dL (microgramos por decilitro) o moles/L (micromoles
por Iitro). Por ejemplo, la concentracin normal de hierro en la sangre de hombres adultos es de
80 a 180 g/dL o 14 a 32 mol/L.
La concentracin total de solutos en el plasma sanguneo se expresa en miliosmoles/kg, la cual
depende fundamentalmente del sodio y sus aniones, de la glucosa y de la urea. Los lmites
normales de dicha concentracin son de 275 a 295 mosmol/kg.
MATERIAL
1. Balanza granataria
2. Esptulas
3. 1 matraz volumtrico de 50 mL
4. 2 matraces volumtricos de 100 mL
5. 1 matraz volumtrico de 250 mL
6. 1 vaso de precipitados de 100 mL
7. 1 vaso de precipitados de 250 mL
8. Glucosa, cloruro de sodio y sulfato de sodio
PROCEDIMIENTO
1. Calcular la cantidad de soluto (en gramos) y/o solvente (en mililitros) necesaria para
preparar cada una de las soluciones propuestas.
2. Pesar el soluto con la mayor exactitud posible, utilizando una balanza granataria.
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3. Transferir la masa de soluto al recipiente correspondiente. Si se trata de un matraz
volumtrico, aadir un poco de agua destilada para disolver el soluto y aforar enseguida.
En caso de que exista riesgo de que se tire el soluto al momento de pasarlo al matraz, es
preferible poner el soluto en un vaso de precipitados, disolverlo ah y posteriormente
pasarlo al matraz.
4. Al preparar una solucin con molalidad u osmolalidad definida, aadir al vaso de
precipitados que contenga al soluto la cantidad total de solvente necesaria, medida con el
recipiente graduado ms adecuado y disolver agitando con una varilla de vidrio.
PREPARE LAS SIGUIENTES SOLUCIONES:
1. 50 mL de solucin de glucosa al 5% p/v

2. 100 mL de solucin de cloruro de sodio al 0.9% p/v
3. 100 mL de solucin de sulfato de sodio 0.05 M
4. 100 mL de solucin de sulfato de sodio 0.1 N
5. 250 mL de solucin de cloruro de sodio 0.1 OsM
6. solucin 0.2 m de glucosa, utilizando 2g de soluto
7. solucin 0.5 Osm de cloruro de sodio, utilizando 3g de soluto
EJERCICIOS
a) Calcule la molaridad de las soluciones 1 y 2

b) Calcule la osmolaridad de la solucin 3
c) Calcule la molaridad y la osmolaridad de la solucin 4
d) Calcule la molaridad y la normalidad de la solucin 5
e) Si en lugar de preparar la solucin del punto 6 aadiera 100g de agua a la cantidad de
soluto indicada, qu molalidad producira?
f) Si la solucin 7 se pasa integra a un matraz volumtrico de 1 litro y se afora, qu
concentracin molar y osmolar tendra la solucin resultante?
g) Calcule la milimolaridad de las soluciones 1 a 5 y la miliosmolalidad de las soluciones 6 y 7
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BIBLIOGRAFA
Mendoza-Medelln, A. Nociones de Qumica para las reas mdica y biolgica, UAEM 2007
Osmolality Blood Test. Medline Plus (2015): https://medlineplus.gov/ency/article/003463.htm
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SMOSIS
OBJETIVOS
1. EI alumno demostrar el fenmeno de la smosis en un dispositivo experimental

2. EI alumno explicar la importancia de la smosis en la distribucin de lquidos en los
distintos compartimentos del organismo
GENERALIDADES
Los sistemas separados por membranas, en donde existen diferencias en la concentracin de
solutos no difusibles, tienden a equilibrar las concentraciones de soluto a ambos lados de la
membrana transfiriendo solvente del compartimiento ms diluido al ms concentrado. Este
fenmeno se conoce como smosis y, se diferencia de los procesos de difusin en que en estos
ltimos es el soluto el que se transfiere a travs de la membrana en el sentido en que las
concentraciones de soluto tienden a igualarse en ambos compartimientos.
La presin osmtica es una medida de la fuerza con que ocurre la smosis y depende del
gradiente de concentracin osmolal de los solutos no difusibles, de manera que a mayor gradiente
corresponde mayor presin osmtica. La presin osmtica que ejercen los solutos coloidales,
como son las protenas, se conoce como presin onctica.
IMPORTANCIA CLNICA
La distribucin de los lquidos en los diversos compartimentos del organismo humano se regula
por eventos de smosis que dependen de la concentracin de los solutos no difusibles.
En el espacio intravascular los principales solutos no difusibles son las protenas, siendo por tanto
responsables de la presin osmtica intravascular que acta como contraparte de la presin
hidrosttica debida al impulso cardiaco, permitiendo el retorno del lquido al lecho vascular.
La protena plasmtica que ejerce el principal efecto onctico es la albmina, la cual es sintetizada
en el hgado a una tasa de aproximadamente 12 g diarios.
De esta manera, dicha protena se encuentra sujeta a un recambio elevado, presentando una vida
promedio normal de 17 a 20 das en el plasma. Al parecer, el sitio donde se cataboliza la albmina
es el mismo hgado, tanto en los hepatocitos como en las clulas de Kpffer.
La manifestacin clnica de la hipoalbuminemia (ver sus causas en la prctica de protenas
plasmticas) es la extravasacin de lquido o edema, lo cual ocurre como consecuencia directa de
la disminucin de la concentracin del principal agente que ejerce presin osmtica intravascular.
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MATERIAL
1. Un huevo de gallina
2. Un popote
3. Un vaso de precipitados de 50 mL
4. Plastilina
5. Un bao de agua termo-regulado
PROCEDIMIENTO
1. Se remueve el cascarn en una zona aproximadamente circular del extremo ms ancho de
un huevo de gallina, cuidando de no romper la membrana subyacente.
2. En el extremo ms angosto del huevo se practica una abertura en el cascarn (incluyendo
la membrana) apenas suficiente para que pase un popote a travs de ella.
3. Se introduce el popote y se fija al cascarn con plastilina, cuidando que no queden grietas
y que el popote no toque la yema.
4. El huevo as preparado se asienta sobre un vaso de precipitados de 50 mL y todo el
dispositivo se introduce en un bao de agua termo-regulado a 37 C, de tal manera que el
nivel del agua sobrepase apenas el nivel del vaso de precipitados, asegurando as que la
membrana expuesta quede en contacto con el agua.
5. Se deja el dispositivo en esas condiciones durante el tiempo necesario para observar la
elevacin del nivel de lquido en el interior del popote debido al efecto osmtico que
propicia la transferencia de agua al interior del huevo.
NOTA: EI proceso osmtico puede llevarse a cabo usando agua a temperatura ambiente, pero en
tales condiciones puede ser ms lento.
BIBLIOGRAFA
15
16
OBTENCIN DE MUESTRAS DE SANGRE
OBJETIVO
EI alumno aprender la tcnica precisa para la obtencin de muestras de sangre venosa utilizando
el sistema Vacutainer
GENERALIDADES
Las muestras de sangre generalmente se obtienen por puncin venosa ya que se trata de un
mtodo sencillo que permite obtener un volumen suficiente de sangre para la determinacin de
los diversos parmetros de inters. Si se debe obtener suero, la muestra de sangre se deja
coagular y posteriormente se centrifuga 10 minutos a 3500 r. p. m., lo cual permite que el suero
quede como sobrenadante y el cogulo en el fondo del tubo. Si se requiere sangre completa, se
utiliza un tubo con anticoagulante y una vez con la sangre, se mezcla por inversin suavemente.
Debe evitarse la agitacin vigorosa y la formacin de espuma ya que esto produce hemlisis. Si se
requiere plasma sanguneo, se utiliza un tubo con anticoagulante, se mezcla y se centrifuga.
SISTEMA VACUTAINER
EI sistema vacutainer es un dispositivo para la toma de muestras de sangre, consistente en una
pieza de plstico (adaptador) con forma de jeringa a la que se enrosca una aguja con doble punta.
La parte larga de esta aguja queda por afuera del adaptador y es la que se utiliza para llevar a cabo
la puncin del vaso. EI otro extremo de la aguja queda por adentro del adaptador. Una vez que se
ha practicado la puncin de la vena, se introduce en el adaptador un tubo vacutainer, que tiene un
tapn de hule blando, fcilmente perforable por la aguja dentro del adaptador. Debido a que el
tubo vacutainer se halla sellado con cierto grado de vaco, en cuanto la aguja perfora el tapn de
hule empieza a fluir la sangre hacia el tubo. AI momento de perforar el tapn de hule debe
mantenerse al adaptador tan inmvil como sea posible para evitar que la aguja se salga de la vena
o se introduzca ms en ella. Despus de tomada la muestra, se remueve el tubo del adaptador
antes de sacar la aguja de la vena. En los laboratorios de servicio es frecuente que para un
paciente debe colectarse sangre en dos o ms tubos para diferentes estudios. Para esto se
remueve el primer tubo una vez tomada la muestra y se inserta en el adaptador el segundo tubo y
as los que sean necesarios, con la misma puncin. Debe tenerse la precaucin de colectar el
volumen de sangre que indica el tubo, en especial cuando se utiliza anticoagulante, pues debe
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existir una cierta relacin de volumen de sangre y de anticoagulante para que no altere los
resultados.
Sistema Vacutainer: adaptador y aguja estril doble
Los tubos vacutainer pueden tener ciertos aditivos, como anticoagulantes (EDTA, heparina, citrato,
oxalato, etc.), inhibidores enzimticos (fluoruro) para evitar que disminuya la concentracin de
glucosa, etc. EI color del tapn corresponde al aditivo que contiene. Por ejemplo, los tubos con
tapn violeta contienen EDTA, los de tapn azul claro contienen citrato, etc. Los tubos con tapn
color rojo no contienen ningn aditivo.
Tubos Vacutainer preparados con vaco
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MATERIAL
1. Sistema vacutainer (adaptador y aguja)

2. Torundas de algodn con alcohol
3. Tubos vacutainer con y sin anticoagulante
4. Ligadura
PROCEDIMIENTO
1. EI paciente debe estar sentado en una posicin cmoda que le permita colocar el brazo
sobre una superficie plana adecuada para mantenerlo extendido e inmvil sin mayor
esfuerzo.
2. Se prepara el brazo frotando la regin anterior del antebrazo con una torunda de algodn
humedecida con alcohol etlico (96).
3. Se aplica un torniquete con la ligadura aproximadamente 7 cm por arriba del pliegue del
codo. La puncin suele hacerse en la vena mediana ceflica, la cual es fcilmente
localizable en casi todas las personas. Si por alguna razn no se observa dicha vena, debe
indicarse al paciente que abra y cierre su puo al tiempo que se aplica masaje en la cara
anterior del antebrazo, con lo cual frecuentemente se logra que resalte la vena. En
ocasiones ser necesario utilizar otra vena del antebrazo o alguna vena del dorso de la
mano. En este ltimo caso deber hacerse con cuidados especiales ya que dichas venas
son mviles.
4. Se monta la aguja en el adaptador, se sujeta la parte posterior del brazo del paciente (a
nivel del codo) con la otra mano y manteniendo la aguja paralela al trayecto de la vena se
perfora la vena (con el bisel de la aguja hacia arriba). Una vez posicionada la aguja dentro
de la vena se inserta el tubo en el adaptador y la sangre empezar a fluir hacia el tubo por
efecto del vaco.
5. EI torniquete se suelta en cuanto se asegura la posicin adecuada de la aguja si se tiene la
destreza suficiente para evitar que se pierda la vena. Si no, se suelta hasta que se termine
de obtener la muestra.
6. Una vez que se concluy la sangra se coloca la torunda sobre el sitio de la puncin y se
retira la aguja. Se mantiene la torunda presionando el sitio de la puncin unos segundos
ms y se coloca sobre dicho sitio un parche redondo tipo curita.
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7. La aguja se deposita en un recipiente especialmente destinado a ese uso.
ANTICOAGULANTES
Existe cierto nmero de anticoagulantes, Los cuales en general actan impidiendo que el calcio
desempee su funcin en el proceso de la coagulacin. Por ejemplo, el oxalato de amonio o de
potasio se combina qumicamente con el calcio disuelto, Ca+2, con lo cual se precipita. La ausencia
de calcio disuelto impide la activacin de diversos factores de la coagulacin.
De manera similar actan el citrato y la sal sdica o potsica del EDTA (etilendiaminotetracetato).
EI EDTA (secuestreno) permite adems que los elementos formes de la sangre se mantengan en
buenas condiciones hasta por 4 horas despus de haber obtenido la muestra y evita que las
plaquetas se adhieran a la superficie del tubo.
La heparina es un polisacrido natural que se une a la antitrombina III, lo cual potencia el efecto
anticoagulante de esta ltima sustancia.
NOTA.- Se recomienda a los alumnos que se habiten a extremar las precauciones en el manejo de
la sangre, con el fin de evitar cualquier contacto con la misma. Deben utilizarse guantes
quirrgicos para hacer la toma de muestras y tener todos los cuidados para minimizar el riesgo de
picaduras con agujas que han sido utilizadas y que por lo tanto pudieran estar contaminadas con
agentes biolgicos, como son los virus productores de hepatitis, el VIH, etc.
BIBLIOGRAFA
BD Vacutainer: http://bd.com/mexico/vacutainer/aboutus.asp
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PROTENAS TOTALES Y ALBMINA SRICAS
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de protenas en una muestra de plasma

sanguneo
2. EI alumno explicar la importancia de la concentracin normal de las protenas

plasmticas y las principales causas de su variacin
GENERALIDADES
En el plasma sanguneo existen ms de 100 protenas diferentes, adems de los mltiples
anticuerpos, generando una concentracin total de 6 a 8 g/dL bajo condiciones normales.
Mediante electroforesis en acetato de celulosa las protenas plasmticas se resuelven en 5
fracciones. Una de ellas se halla constituida exclusivamente por albmina, y las restantes 4 se
conocen como globulinas 1, 2, y . Cada una de estas fracciones se halla constituida por un
conjunto de protenas diferentes que presentan una movilidad electrofortica similar.
Albmina
Globulinas
2
1

Electroforegrama de protenas plasmticas
La albmina es la ms abundante de las protenas plasmticas y aunque solo representa alrededor

del 52% de la masa total de dichas protenas, ejerce aproximadamente el 80% de la presin
onctica intravascular.
22
Adems, la albmina desempea una funcin de transporte de sustancias hidrofbicas que se
encuentran normalmente en la sangre, como los cidos grasos libres, la bilirrubina indirecta, el
urato, etc., y cuando se ingieren, diversos medicamentos.
Entre las globulinas 1 se hallan las lipoprotenas de alta densidad (LAD), involucradas en el
transporte inverso de colesterol (de tejidos perifricos al hgado); la globulina fijadora de tiroxina
(transporte de dicha hormona); globulina fijadora de corticosteroides, tambin llamada
transcortina (transporte de cortisol) y la antitripsina 1 (hidrlisis de enzimas proteolticas
liberadas a partir de los leucocitos en los procesos de defensa que desarrollan estas clulas,
particularmente en los pulmones, contra agentes biolgicos infecciosos que penetran por esa va).
Entre las globulinas 2 se hallan la haptoglobina, que transporta hemoglobina liberada en el lecho
vascular, al sistema reticuloendotelial; ceruloplasmina, que acta como ferroxidasa, es decir oxida
Fe+2 a Fe+3; las lipoprotenas de muy baja densidad (LMBD), involucradas en el transporte de
triacilgliceroles y colesterol del hgado a otros tejidos; y la macroglobulina 2 (a pesar de que es la
protena mayoritaria de esta fraccin de protenas plasmticas no se ha definido su funcin,
habindose encontrado solamente que presenta actividad inhibitoria de endopeptidasas).
Entre las globulinas se hallan las lipoprotenas de baja densidad (LBD), las cuales se forman a
partir de las lipoprotenas de densidad intermedia (LDI) y llevan colesterol del hgado a otros
tejidos; la transferrina (transporte plasmtico de hierro), la hemopexina (transporte del hemo
liberado en el lecho vascular al sistema reticuloendotelial); el fibringeno (precursor de la fibrina
en el proceso de la coagulacin sangunea) y los factores del complemento.
Las globulinas corresponden a los anticuerpos, siendo su funcin unirse a antgenos en
reacciones especficas como parte de la respuesta inmune.
La gran mayora de las protenas plasmticas que no son globulinas y se sintetizan en el hgado. Las
globulinas se forman en clulas especializadas del aparato inmunocompetente (clulas
plasmticas).
IMPORTANCIA CLNICA
1. Hiperproteinemia con cociente A/G (albmina/ globulinas), normal. Solamente se presenta
en procesos que producen hemoconcentracin, como son: choque, vmitos y diarreas
intensas, quemaduras, coma diabtico, etc. Se consideran hiperproteinemias falsas.
2. Hipoalbuminemia. Se presenta en casos de patologa heptica, particularmente cuando es
crnica (esto se relaciona con el hecho de que la vida promedio de la albmina en la
23
sangre es de aproximadamente 20 das) as como en casos de desnutricin. En la mayora
de las enfermedades renales se presenta proteinuria, pero slo en el sndrome nefrtico
disminuye significativamente la concentracin plasmtica de albmina pues la prdida de
protenas en esta enfermedad es superior a 5 g/ da.
3. Transferrina. Su funcin es el transporte de hierro en el plasma sanguneo. Su
concentracin aumenta en estados de deficiencia de hierro. En casos de hemocromatosis
puede estar baja o normal. La ingestin de medicamentos puede alterar esas relaciones.
Por ejemplo, el cloranfenicol produce disminucin de la transferrina y las pldoras
anticonceptivas producen su aumento por efectos metablicos no bien definidos. Por lo
tanto deben tenerse en cuenta estos factores para interpretar adecuadamente los
resultados de la cuantificacin de transferrina.
4. Haptoglobina. Su funcin es el transporte de hemoglobina liberada a partir de los
eritrocitos en el lecho vascular. Se practica su determinacin cuando se sospecha de
anemia hemoltica en el paciente o para distinguirla de otros tipos de anemia. En el caso
de anemia hemoltica disminuye la concentracin plasmtica de haptoglobina. La anemia
hemoltica se asocia tambin con el incremento del recuento de reticulocitos y
disminucin del nmero de eritrocitos, del hematocrito y de la hemoglobina en sangre. La
concentracin de haptoglobina disminuye en la enfermedad de Wilson (patologa
hereditaria que cursa con retencin de cobre por el organismo. A travs de los alimentos
el intestino absorbe cobre pero el hgado no lo transfiere a la bilis como ocurre
normalmente y su acumulacin lesiona al hgado. Eventualmente el cobre heptico se
libera a la circulacin y se distribuye por todo el organismo, produciendo dao
principalmente en riones, cerebro y ojos. Si no se instituye el tratamiento adecuado
puede presentarse dao cerebral severo, insuficiencia heptica y muerte. Su tratamiento
es a largo plazo con penicilamina u otras sustancias que se combinan con el cobre,
promoviendo su excrecin, o bien con acetato de zinc, que impide la absorcin de cobre
por el intestino). En algunos casos la disminucin de la haptoglobina en la enfermedad de
Wilson se debe a que la patologa se acompaa de una fase temprana de anemia
hemoltica, pero en realidad esto no es comn, por lo cual debe suponerse que en esta
enfermedad se altera el metabolismo heptico y entre las manifestaciones de dichas
alteraciones se encuentra la baja produccin de haptoglobina. Esta protena plasmtica
24
aumenta durante el embarazo y disminuye en mujeres que toman pldoras
anticonceptivas, sin que se cuente con la explicacin de dichos efectos.
5. Macroglobulina 2. Aumenta notoriamente en pacientes con sndrome nefrtico y en
algunos pacientes con cirrosis. Presenta actividad antifibrinolitica similar a la de la
antiplasmina 2, la cual se manifiesta solamente cuando la capacidad inhibitoria de esta se
ha saturado.
6. Globulinas . Tambin conocidas como anticuerpos, pueden hallarse disminuidas en
patologas genticamente determinadas (hipogammaglobulinemia) o adquiridas (leucemia
linftica crnica y SIDA). Su incremento ocurre en infecciones agudas pero ms
notoriamente en las crnicas, en enfermedad heptica crnica, como la cirrosis, y en
enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso (trastorno autoinmune
inflamatorio y crnico que puede afectar la piel, las articulaciones, los riones y otros
rganos. Afecta ms a las mujeres que a los hombres, en proporcin de 9 a 1, y puede
presentarse a cualquier edad) y la tiroiditis crnica. Tambin ocurre incremento de la
concentracin de globulinas en algunos procesos malignos como el mieloma mltiple
(proliferacin de clulas plasmticas y sus precursoras) y la macroglobulinemia de
Waldenstrm (proliferacin de linfocitos ms que de clulas plasmticas, con gran
producci6n de IgM, a tal grado que puede aumentar la viscosidad de la sangre).
PROCEDIMIENTO (Randox)
Fundamento: las protenas en solucin bsica de sulfato cprico y tartrato forman un complejo
azul violeta cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas.
La albmina se une cuantitativamente con el indicador 3, 3, 5, 5 tetrabromo-m-cresol
sulfoneftalena (verde de bromocresol, VBC). La intensidad del color del complejo albmina-VBC es
proporcional a la concentracin de albmina.
25
Protenas totales
Pipetear en tubos de ensayo de 13x100:
Blanco Patrn Muestra

Agua destilada 20 L --- ---
Suero (o plasma) --- --- 20 L
Patrn --- 20 L ---
Reactivo de trabajo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL
Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos y medir la absorbancia
(A) a 546 nm de la muestra y del patrn frente al blanco.
CLCULO
(A muestra /A patrn) x [patrn] = ______ g/dL Protenas totales
VALORES DE REFERENCIA
Neonatos: 5.3-8.9 g/dL

Nios (hasta 6 aos): 5.6-8.5 g/dL
Adultos: 6.6-8.7 g/dL
Albmina

Suero (o plasma) --- --- 10 L
Patrn --- 10 L ---
Mezclar e incubar entre 20 y 25 C durante 5 minutos y medir la absorbancia (A) a 578
nm de la muestra y del patrn frente al blanco.
CLCULO
(A muestra /A patrn) x [patrn] = ______ g/dL Albmina
Adultos: 3.4-4.8 g/dL

26
BIBLIOGRAFA
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition. Wiley-Liss,
2002
H. Lehr, M. Pauschinger, E. Pittke, E. Kurrle and H. Heimpel (1988). Haemolytic anaemia as initial
manifestation of Wilson's disease. Annals of Hematology: 56 (1)
Wilson disease. National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney diseases (2014):
http://digestive.niddk.nih.gov/ddiseases/pubs/wilson/
Lupus eritematoso sistmico. Medline Plus (2015):

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000435.htm
27
EMULSIFICACIN DE ACEITE
OBJETIVOS
1. El alumno comparar la capacidad de la bilis, de un detergente y del agua para emulsionar

muestras de aceite de cocina
2. El alumno explicar la relevancia fisiolgica y clnica de la emulsificacin de la grasa

dietaria
GENERALIDADES
La emulsificacin de la grasa dietaria es el proceso mediante el cual los componentes lipdicos de
los alimentos sufren la accin del peristaltismo intestinal y de las sustancias anfipticas presentes
en la bilis, resultando de ella la generacin de partculas pequeas de grasa dietaria que
interaccionan can relativo grado de estabilidad con el medio acuoso.
Los cidos grasos y otros productos de la digestin estimulan la secrecin de la hormona
colecistocinina-pancreocimina, la cual provoca la contraccin de la vescula biliar, necesaria para
que la bilis fluya hacia el duodeno. La bilis contiene, entre otras sustancias, sales biliares y
fosfolpidos, que coadyuvan a emulsionar la grasa debido a su naturaleza anfiptica, en conjuncin
con el movimiento peristltico del intestino, aunque este ltimo factor es el fundamental para el
proceso emulsificante. La grasa emulsionada consiste en partculas de 200-5000 nm de dimetro
de material lipdico, principalmente triacilgliceroles, colesterol esterificado y vitaminas liposolubles
(A, D, E y K), que en su superficie interaccionan con las partes hidrofbicas de las molculas
anfipticas, quedando las hidroflicas interaccionando a su vez con el agua del ambiente.
Lado Lado
hidrofbico hidroflico
Lpidos
Sal biliar
Esquema de un modelo de partcula emulsionada rodeada por sales biliares
28
La emulsificacin es un proceso importante debido a que permite una accin adecuada de las
enzimas digestivas con actividad lipoltica, fundamentalmente la lipasa pancretica y la colesterol
esterasa. Los productos de la digestin de los triacilgliceroles (cidos grasos y monoacilgliceroles)
y de los esteres de colesterol (cidos grasos y colesterol libre), en asociacin con las sales biliares y
los fosfolpidos, configuran estructuras esferoidales de 3 a 10 nm de dimetro, denominadas
micelas mixtas, las cuales contienen en su parte interna las regiones hidrofbicas de sus
componentes, y en la superficie las hidroflicas. Las vitaminas liposolubles tambin se encuentran
presentes en la parte interna de dichas micelas.
Las micelas mixtas se desplazan por el intestino y en el borde en cepillo liberan sus componentes
de origen dietario, los cuales penetran a las clulas del epitelio intestinal. En el leon se reabsorbe
la mayor parte de las sales biliares y participan en la circulacin enteroheptica
IMPORTANCIA CLNICA
La ausencia de sales biliares y fosfolpidos en el intestino puede ocurrir debido a problemas
obstructivos de las vas biliares. En estas condiciones los lpidos dietarios se emulsionan en grado
importante por efecto de la peristalsis, lo cual permite la accin digestiva de las enzimas
pancreticas, pero la ausencia de materiales anfipticos impide la formacin de micelas mixtas y
por lo tanto no se absorben los productos de la digestin de los Ipidos dietarios, ocasionando el
sndrome de malabsorcin de grasa, conocido tambin como esteatorrea.
La permanencia de la grasa en el intestino tiene algunos efectos adicionales. Por ejemplo, la grasa
puede interaccionar con otros componentes de la dieta, impidiendo la accin digestiva apropiada
sobre ellos; y la absorcin deficiente de grasa puede provocar que las vitaminas liposolubles
tampoco se absorban apropiadamente.
MATERIAL
1. Bilis de pollo 2 mL
2. Aceite vegetal 5 mL
3. Detergente extrn 2 mL
4. Tubos con tapn de rosca 3
5. Pipeta graduada de 5 mL 3
6. Pipeta graduada de 10 mL 1
8. Agua destilada 10 mL
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9. Agitador "vortex"
PROCEDIMIENTO
Pipetear en tubos de rosca de 15x150:
Tubo Agua Aceite Bilis Extrn

Control 3 mL 1 mL --- ---
Bilis 3 mL 1 mL 1 mL ---
Extrn 3 mL 1 mL --- 1 mL
Mezclar el contenido de cada tubo en el agitador vrtex durante 15
segundos y observar y anotar los resultados inmediatamente y
despus de algunos minutos.
BIBLIOGRAFA
Baynes JW & MH Dominiczak. Bioqumica Mdica Tercera Edicin Elsevier Mosby 2011
Devlin, T. M. (Editor) Textbook of Biochemistry with clinical correlations, 5th edition, 2002
Mathews, C. K. & K. E. Van Holde. Bioqumica, 2a. ed. McGraw-Hili, 1998
30
31
AMILASA SRICA
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la actividad de amilasa en una muestra de suero sanguneo

2. EI alumno explicar la importancia clnica de la determinacin de la amilasa srica
GENERALIDADES
La amilasa es una enzima que participa en la digestin del almidn y del glucgeno dietarios.
Cataliza la hidrlisis de los enlaces glucosdicos 1-4 que unen a las molculas de glucosa entre s
en dichos polisacridos.
La amilasa se produce en las glndulas salivales, principalmente en las partidas, y en el pncreas,
nombrndose amilasa salival (ptialina) y amilasa pancretica, respectivamente. La actividad de la
amilasa salival es limitada debido al corto periodo de tiempo que permanece el bolo alimenticio
en la boca, ya que poco despus de que este pasa al estmago se pierde la actividad amilsica
debido al pH cido del jugo gstrico.
La funcin de la amilasa salival es iniciar la hidrlisis del almidn y del glucgeno presentes en los
alimentos, generando como productos fundamentalmente dextrinas y en menor proporcin
maltosa. Las dextrinas son oligosacridos o polisacridos de peso molecular variable que resultan
de la hidrlisis al azar de los enlaces 1-4 del almidn o del glucgeno.
La amilasa pancretica se vierte a travs del jugo pancretico al intestino, donde transforma los
productos generados por la amilasa salival, en maltosa y dextrinas lmite. Las dextrinas lmite son
oligosacridos ramificados que contienen un enlace 1-6. Ninguna de las dos amilasas es capaz de
hidrolizar estos enlaces.
Se han documentado casos de personas que carecen de amilasa salival y no presentan ninguna
alteracin en el proceso digestivo de los polisacridos mencionados, lo cual indica que se trata de
una enzima no indispensable. Evidentemente, la explicacin de esto es que la amilasa pancretica
acta en la misma forma que la salival y puede por lo tanto digerir por s misma al almidn y al
glucgeno.
En el suero de los lactantes no se detecta actividad amilsica sino hasta uno o dos meses de edad,
alcanzndose el lmite inferior del intervalo normal del adulto hasta el primer ao de edad.
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IMPORTANCIA CLNICA
SE PRESENTA AUMENTO DE LA AMILASEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:
1. Pancreatitis aguda. Se registran elevaciones de hasta 5 veces los niveles normales. En caso
de que se mantengan los valores elevados por ms de 5 das, puede pensarse en una
necrosis continuada del pncreas o en la formacin de un pseudoquiste (acumulacin de
tejido, lquido, residuos, enzimas pancreticas y sangre, que se puede desarrollar despus
de una pancreatitis aguda. Con frecuencia ocurre cuando se rompen los conductos
pancreticos por efecto de la inflamacin propia de la pancreatitis). En muchos casos la
pancreatitis aguda se encuentra asociada con ingesta aguda de etanol.
2. Pancreatitis secundaria a hepatitis viral.
3. Afecciones txicas del pncreas, debidas a infecciones como la tifoidea, el paludismo, la
neumona, el sarampin y la meningitis meningoccica.
4. lcera gstrica penetrante de pncreas, en cuyo caso los aumentos son menores a los
registrados en la pancreatitis aguda.
5. Padecimientos abdominales como lcera duodenal perforada, gastritis, peritonitis y
obstruccin abdominal. Son cuadros que cursan con incrementos discretos de la
amilasemia.
6. Parotiditis, particularmente cuando es bilateral. EI aumento de la amilasemia se detecta al
5 o 7 da despus de iniciado el padecimiento.
7. Insuficiencia renal. EI incremento de la amilasemia en estos casos se debe a la
disminucin de la excrecin de la amilasa, apareciendo negativa la amilasuria.
Normalmente alrededor del 25% de la amilasa plasmtica se excreta por los riones.
8. Administracin de frmacos como morfina, codena y otros opiceos. En estos casos la
hiperamilasemia es muy marcada, posiblemente por espasmo del esfnter de Oddi.
PROCEDIMIENTO (Hycel)
Fundamento: Se mide la hidrlisis del almidn por la amilasa srica mediante la formacin de
un complejo colorido (azul-verde) entre el almidn y el yodo, cuya intensidad es directamente
proporcional a la cantidad de almidn. Mientras ms se hidroliza el almidn (por mayor
actividad amilsica), menos complejo colorido se forma con el yodo, por lo tanto la intensidad
del color vara en proporcin inversa con la concentracin de amilasa en la muestra.
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Pipetear en tubos de 15x150:
Blanco Muestra
Sustrato de almidn 1 mL 1 mL
Incubar 5 min a 37 C
Suero --- 20 L
Incubar 7.5 min a 37 C
Yodo N/20 1 mL 1 mL
Agua destilada 8 mL 8 mL
Tapar el tubo con Parafilm, mezclar por inversin y leer absorbancia a 660 nm contra
blanco de agua antes de que transcurran 30 min.
CLCULO
[(A blanco A problema)/A blanco] x 1000 = _______ unidades de amilasa/dL
NOTA: Una unidad de amilasa se define como la cantidad de enzima que hidroliza 10 mg de
almidn en 30 minutos a 37 C a un grado tal que no haya reaccin colorida con el yodo.
60 160 unidades de amilasa/dL
BIBLIOGRAFA
Prieto Valtuea, Yuste Ara JR. Balcells La Clnica y el Laboratorio. 22 Ed. Elsevier Masson,
Barcelona, Espaa 2015
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FOSFATASA ALCALINA SRICA
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la actividad de fosfatasa alcalina en una muestra de suero

sanguneo
2. El alumno explicar la importancia clnica de la cuantificacin de la actividad de fosfatasa

alcalina en el suero
GENERALIDADES
Fosfatasa alcalina (FAL) es el nombre con que se conoce un grupo de isoenzimas que presentan
actividad ptima para hidrolizar fosfosteres en un intervalo de pH de 9.0 a 10.5. Como productos
de las reacciones que catalizan se obtienen los alcoholes correspondientes y fosfato inorgnico,
segn indica la siguiente reaccin general:
R-O-POH + HO R-OH + HPO
La FAL se encuentra distribuida ampliamente en los tejidos del organismo. Durante el crecimiento
se encuentra en mayor cantidad en los osteoblastos (clulas productoras de tejido seo) y
condroblastos (clulas embrionarias que dan origen al cartlago) del tejido seo. En el adulto, la
mayor proporcin se encuentra en la mucosa intestinal, el hgado, los pulmones y el bazo, aunque
tambin se produce en el endotelio vascular, los tbulos renales, el epitelio tiroideo, el epitelio del
conducto biliar, placenta y clulas de la serie mieloide. Se localiza en el citosol, microsomas y
Iisosomas. Su funcin bioqumica precisa no se conoce aunque al parecer en el hgado y el hueso
participa en el transporte de membrana pues en dichos tejidos la actividad de fosfatasa alcalina se
halla asociada a la membrana celular.
La FAL srica es principalmente de origen heptico y seo, y los incrementos se deben ms al
aumento de su sntesis que a incremento de su liberacin por los tejidos lesionados o necrticos
Las isoenzimas de la FAL son distinguibles por sus propiedades fisicoqumicas, segn indica el
siguiente cuadro:
Propiedades de las isoenzimas de la fosfatasa alcalina
PROPIEDAD HGADO HUESO INTESTINO PLACENTA

RAPIDEZ ELECTROFORTICA* 1 2 3 2
DESACTIVACIN A 56 C 50-70 90-100 50-60 0
INHIBICIN CON 0-10 75 75
0-10
FENILALANINA (%)
*A MENOR NMERO, MAYOR RAPIDEZ
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IMPORTANCIA CLNICA
LA FAL AUMENTA EN LOS SIGUIENTES CASOS:

1. Padecimientos del hueso asociados con aumento de la actividad de los osteoblastos
2. Enfermedad de Paget. Tambin conocida como ostetis deformante, ataca primeramente
los huesos del crneo, con aumento bilateral y algo asimtrico del tamao de la cabeza.
Aparece osteoporosis y el sntoma ms constante es el dolor reumatoide, especialmente
en las tibias. Se presentan frecuentemente calambres musculares, incurvacin de tibias y
cifosis (desviacin anormal de la columna vertebral), pudiendo presentar fracturas que
consolidan rpidamente. No se altera la calcemia. Se atribuye a una alteracin del
metabolismo seo, en especial en la pelvis, el crneo y el fmur. Los huesos pueden ser
tan blandos que pueden cortarse con un bistur. Los pacientes registran disminucin de
estatura de hasta 20 cm y se presenta con mayor frecuencia en hombres de edad
avanzada. En el suero de los pacientes se eleva en grado importante la FAL (10 a 100 veces
mayores al lmite superior normal) debido a un exceso de actividad de los osteoblastos. Se
inicia con resorcin sea excesiva e incremento en el nmero de osteoclastos (elemento
celular gigante multinucleado de la mdula sea cuya funcin es la resorcin o destruccin
del hueso). Simultneamente a la resorcin se produce hueso nuevo por activacin de los
osteoblastos, lo cual genera un patrn de depsitos seos que constituye un mosaico
caracterstico de resorcin y formacin de hueso. Se trata de un padecimiento de causa no
definida aunque algunos estudios sugieren que se inicia por una infeccin viral. Llega a
afectar hasta el 3% de la poblacin de ms de 40 aos.
3. Raquitismo y osteomalacia. Producidas por deficiencia de vitamina D, estas patologas se
caracterizan por formar depsitos de matriz sea no calcificada, lo que aumenta la
actividad de los osteoblastos
4. Tumores seos primarios, como el sarcoma osteognico, producen incrementos variables
de la FAL srica dependiendo del grado de afeccin. La actividad de la enzima se utiliza
para vigilar la evolucin de la enfermedad y su recurrencia.
5. Metstasis seas derivadas de neoplasias de prstata, pulmn y glndula mamaria. La
presencia de actividad elevada de FAL es signo de afeccin sea.
6. Hiperparatiroidismo. En esta patologa aumenta excesivamente la secrecin de la
hormona paratiroidea, lo cual altera el metabolismo del calcio y del fsforo y por lo tanto
37
la integridad sea. Los incrementos de la actividad srica de la FAL se registran solamente
cuando el hueso se encuentra muy afectado.
7. Reparacin sea por recuperacin de fracturas. El aumento de la FAL se debe a la
formacin de hueso nuevo.
8. Crecimiento. Durante el crecimiento es normal que la actividad srica de FAL se encuentre
aumentada respecto a las cifras normales del adulto. Los incrementos son ms notables en
adolescentes de sexo masculino. Las y los jvenes alcanzan los niveles del adulto a los 15 y
18 aos, respectivamente.
9. Embarazo. El incremento se registra en el segundo y tercer trimestres debido a que es
entonces cuando se estimula el desarrollo seo del producto. El incremento tambin se
debe a la presencia de la isoenzima placentaria. Las cifras se normalizan aproximadamente
a las seis semanas posparto.
10. Menopausia. El aumento significativo de la actividad de FAL se relaciona con la prdida de
hueso secundaria al descenso de los niveles de estrgenos. Las cifras de FAL en mujeres
mayores aumentan hasta en un 40% respecto al intervalo normal
11. Enfermedades hepticas. En la mayora de estas enfermedades se registra un aumento de
FAL, pero cuando el incremento es mayor al triple del lmite superior normal es ms
probable que se trate de una patologa obstructiva, ya que los padecimientos que cursan
con necrosis de los hepatocitos por lo general no registran incrementos altos de FAL
srica, excepto si tambin ocurre necrosis en los canalculos o en los conductos biliares. Si
un paciente ictrico presenta niveles normales de FAL se descarta la obstruccin biliar.
12. Tratamiento con corticosteroides (glucocorticoides). El efecto se debe a que estos
frmacos (p. ej. prednisona, dexametasona) afectan a los osteoblastos, reduciendo la
formacin de hueso nuevo, lo cual desplaza el equilibrio hacia la resorcin sea. Tambin
pueden alterar el metabolismo del calcio y los niveles de hormonas sexuales. El posible
efecto global es la produccin de osteoporosis.
Fundamento: la hidrlisis del p-nitrofenilfosfato, catalizada por la FAL, produce fosfato y p-
nitrofenol. Este ltimo es un compuesto colorido. La intensidad del color es directamente
proporcional a la actividad de FAL.
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1. Transferir 20 L de suero a una celdilla del espectrofotmetro
2. Aadir 1.0 mL del reactivo de trabajo
3. Mezclar y leer la absorbancia (A0) a 405 nm frente al aire (celdilla vaca)
4. Sin sacar la celdilla leer nuevamente la absorbancia al cabo de 1 (A1) , 2 (A2) Y 3 (A3)
minutos
CLCULO
Obtener los 3 valores de A de la muestra como sigue: A1 - A0, A2 - A1 y A3 - A2 y promediarlos.

A promedio x 2760 = _____ U/L Fosfatasa alcalina
Los sueros hemolticos interfieren con la determinacin.
Hombre/ Mujer:
25 C: 60-170 U/L
30 C: 73-207 U/L
37 C: 98-279 U/L
NOTA. Se recomienda tomar la temperatura en el espacio donde se inserta la celdilla para saber
qu intervalo de referencia es aplicable.
BILBLIOGRAFA
Glucocorticoid-induced osteoporosis. American College of Rheumatology (2015):
http://www.rheumatology.org/I-Am-A/Patient-Caregiver/Diseases-Conditions/Glucocorticoid-
induced-Osteoperosis
39
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GLUCOSA PLASMTICA
OBJETIVOS
1. El alumno determinar la concentracin de glucosa en una muestra de suero sanguneo

2. El alumno explicar la importancia clnica de la determinacin de la glucemia
GENERALIDADES
La glucosa es el monosacrido de mayor importancia que utilizan las clulas para la obtencin de
energa. El origen de la glucosa puede ser exgeno, cuando se obtiene a partir de los carbohidratos
dietarios (almidn, glucgeno, sacarosa y lactosa), y endgeno, cuando se sintetiza en el
organismo a travs de la va gluconeognica.
La glucemia (glucosa en sangre) se halla regulada fundamentalmente por dos hormonas, el
glucagon y la insulina. La hipoglucemia es el efector para la secrecin de glucagon, el cual
estimula la glucogenlisis en el hgado. La glucosa liberada a partir del glucgeno pasa entonces a
la sangre, restableciendo la normoglucemia. En la hiperglucemia en cambio, la insulina activa el
mecanismo que permite la incorporacin de la glucosa a los tejidos adiposo y muscular,
reduciendo as la concentracin de glucosa sangunea hasta lograr la normoglucemia. Aunque la
insulina se requiere para la incorporacin de glucosa por los hepatocitos, s interviene en forma
importante estimulando la glucognesis.
La concentracin normal de glucosa en la sangre o normoglucemia despus de un ayuno de al
menos 8 horas vara dentro de un intervalo de aproximadamente 70 a 100 mg/dL o 3.9 a 5.5
mmol/L.
En condiciones normales la glucemia posprandial raramente supera los 140 mg/dL, recuperndose
la normoglucemia antes de 2.5 horas. Si el grado de glucemia en ayuno supera el lmite superior
del intervalo normal o bien si la hiperglucemia posprandial se mantiene durante ms tiempo del
indicado, muy probablemente se trata de alguna patologa que cursa con hiperglucemia.
Se considera que en el ayuno los mnimos valores de glucemia tolerables por el organismo sin que
se presente dao cerebral son de 40 a 50 mg/dL, sin embargo esto no es aplicable a todas las
personas debido a que la sensibilidad es muy variable entre los distintos individuos, de tal manera
que debe procurarse en todos los casos mantener normoglucmico al paciente para prevenir
cualquier efecto de la hipoglucemia.
41
La hiperconcentracin de glucosa puede producir estado de coma por efecto de la
hiperosmolaridad del plasma cuando contiene 600 mg/dL o ms de glucosa, lo cual ocurre con
cierta frecuencia en ancianos con diabetes mellitus no dependiente de insulina.
IMPORTANCIA CLNICA
SE PRESENTA HIPERGLUCEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:
1. Hiperglucemia fisiolgica. Se trata de un incremento discreto y transitorio que no se
acompaa de glucosuria. Se presenta como resultado de la exposicin a baos calientes,
excitaciones psquicas y ocasionalmente por efecto del periodo menstrual.
2. Asfixia e intervenciones quirrgicas, probablemente debido a descargas de adrenalina,
con efectos pasajeros.
3. Diabetes mellitus. Es la causa ms comn de hiperglucemia, debindose a la ausencia
total o parcial de insulina, o bien a un efecto insuficiente de dicha hormona.
4. Sndromes diabetoides extrainsulares, pudiendo ser hipofisiario, como en la enfermedad
de Cushing (adenoma hipofisiario que cursa con hipercorticismo crnico), suprarrenal, por
presencia de feocromocitoma (tumor de la mdula adrenal) que provoca aumento de la
secrecin de adrenalina, y tiroideo, por hiperfuncin de la glndula tiroides. En este caso
la hiperglucemia es muy discreta.
5. Traumatismo cerebral.
6. Infarto al miocardio, registrndose la hiperglucemia slo en los primeros dos das. En
ocasiones se acompaa de glucosuria.
7. Tratamiento con ciertas hormonas esteroides, debido a su efecto gluconeognico.
SE PRESENTA HIPOGLUCEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS:

1. Esfuerzos musculares agotadores
2. Hiperinsulinismo debido a insulinoma (neoplasia pancretica)
3. Sobredosis de insulina, pudiendo presentarse coma hipoglucmico
4. Insuficiencia heptica grave, por alteracin del metabolismo del glucgeno
5. Trastornos digestivos que cursan con malabsorcin intestinal, como vmitos y diarrea
6. Hipoglucemia de la lactancia, que afecta a las madres lactantes por alimentacin
insuficiente
42
7. Alcoholismo agudo, por el efecto inhibidor del alcohol sobre la gluconeognesis. Se
presenta en pacientes alcohlicos que no ingieren alimento suficiente.
Fundamento: la glucosa reacciona con oxgeno y agua, transformndose en gluconato y perxido
de hidrgeno mediante la glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno producido reacciona con
fenol y 4-aminofenazona, formando quinoneimina y agua, por catlisis de la peroxidasa. La
quinoneimina es un compuesto colorido cuya concentracin es proporcional a la de glucosa en la
muestra.

Plasma o suero --- --- 20 L
Patrn --- 20 L ---
Mezclar e incubar a 37 C durante al menos 10 minutos y medir la absorbancia (A) de la
muestra y del patrn frente al blanco a 500 nm. El color es estable durante 60 min.
CLCULO
(A muestra/A patrn) x [patrn] = ______ mg/dL Glucosa
El mtodo es lineal hasta valores de 500 mg/dL. Si la concentracin de glucosa es superior a este
valor, debe diluirse la muestra 1:2 con solucin salina, multiplicando al final la concentracin
obtenida por el factor 2
Normal: 70 a 100 mg/dL

Glucemia alterada en el ayuno: 100 mg/dL a 125 mg/dL
Diabetes mellitus: 126 mg/dL
BIBLIOGRAFA
Blood sugar test. Medline Plus (2015): https://medlineplus.gov/ency/article/003482.htm
43
Norma Oficial Mexicana para la prevencin, tratamiento y control de la diabetes mellitus (2010):
http://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=5168074&fecha=23/11/2010
44
LACTATO PLASMTICO
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de lactato en una muestra de plasma sanguneo

2. EI alumno explicar los contextos terico-clnicos en que es relevante la cuantificacin del
lactato plasmtico
GENERALIDADES
La glucosa se cataboliza en todos los tejidos a travs de la gluclisis, va que transforma la glucosa
en piruvato (glucosa 2 piruvato). Si ocurre en condiciones aerbicas, el piruvato ingresa a las
mitocondrias y ah es catabolizado hasta C02 y H20, lo cual permite la liberacin de cantidades
importantes de energa til para la formacin de ATP y otras sustancias a travs de las cuales se
aporta energa a los procesos celulares que la requieren.
En tipos celulares en los que la glucosa no se cataboliza aerbica sino anaerbicamente
(eritrocitos, clulas de gla, clulas de la mdula renal, etc.), o bien en aquellos otros que, teniendo
normalmente un metabolismo aerbico entran a una fase de limitacin o ausencia de oxgeno (el
comn de los tipos celulares, de manera importante las clulas del msculo esqueltico y los
cardiomiocitos), el piruvato producido a partir de la glucosa se reduce a lactato de acuerdo con la
siguiente reaccin:
Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
Esta reaccin es catalizada por la enzima denominada lactato deshidrogenasa, de amplsima
distribucin en el organismo humano.
La produccin endgena de lactato va invariablemente acompaada por la produccin de
hidrogeniones, de manera que lo que en realidad se produce es cido lctico.
El lactato y los hidrogeniones que se forman en las clulas pasan a la circulacin a travs del
simportador de lactato e hidrogeniones, con lo cual se preserva la electroneutralidad. De esta
manera, conforme se produce el cido lctico puede ir pasando a la circulacin.
Bajo las condiciones apropiadas, el hgado y en menor proporcin el rin, captan y metabolizan el
cido lctico de la sangre, transformndolo en glucosa a travs de una va conocida como
gluconeognesis. En condiciones normales, la concentracin de lactato se mantiene baja (menos
de 20 mg/dL de plasma) gracias a este proceso metablico.
45
IMPORTANCIA CLNICA
El incremento en la concentracin de lactato puede ocurrir porque se produzca en cantidades

mayores a lo normal o porque el hgado se halle insuficiente para metabolizarlo, especialmente si
concurre una condicin de sepsis o de etilismo.
SE REGISTRA INCREMENTO DE LACTATO EN SANGRE (HIPERLACTATEMIA) EN LOS SIGUIENTES
CASOS:
1. Insuficiencia cardiaca congestiva o coronariopata aguda grave

2. Choque de cualquier origen (hipovolmico, anafilctico, etc.)
3. Insuficiencia heptica aguda grave
4. Insuficiencia respiratoria grave
5. Intoxicacin con monxido de carbono
6. Intoxicacin etlica aguda
7. leo paraltico (prdida de la actividad motora intestinal, con isquemia)
8. Hipovitaminosis o avitaminosis B1 (en estados carenciales graves). El metabolismo
aerbico requiere de la vitamina B1.
9. Algunos tipos de tumores, como linfomas (cncer del sistema linftico) y
hemangioblastomas (neoplasias vasculares benignas localizadas principalmente en el
cerebelo).
Recientemente se ha generado informacin respecto a que el lactato juega un importante papel
en el desarrollo del cncer. La explicacin de la presencia del lactato en el cncer relacionada con
un ambiente hipxico determinado por el crecimiento celular rpido en ausencia de vasculatura
ha sido rebasado pues el lactato en los tumores slidos se ha relacionado con el potencial de
metstasis y otras caractersticas del desarrollo tumoral. Tambin se ha descubierto que el lactato
es una sustancia reguladora, capaz de promover la angiognesis a travs de efectos positivos
sobre el factor 1 inducible por hipoxia (HIF-1 ) y el factor de crecimiento endotelial vascular
(VEGF).
Fundamento: EI lactato se oxida a piruvato mediante la enzima lactato oxidasa, produciendo
adems perxido de hidrgeno (H202). El perxido de hidrgeno reacciona con 4-clorofenol y 4-
aminoantipirina para producir quinoneimina, agua y cido clorhdrico mediante una reaccin que
46
cataliza una enzima peroxidasa. La intensidad de la coloracin producida es directamente
proporcional a la concentracin de quinoneimina y sta a su vez es directamente proporcional a la
concentracin de lactato.

Plasma --- --- 10 L
Patrn --- 10 L ---
Mezclar e incubar a 37 C durante 5 minutos y medir la absorbancia (A) de la muestra y
del patrn frente al blanco a 550 nm. El color es estable durante 30 min.
CLCULO
(Amuestra/Apatrn) x [patrn] = _____ mg/dL Lactato
4.5 20 mg/dL
BIBLIOGRAFA
Goodwin ML, Gladden LB, Nijsten MWN, Jones KB (2015). Frontiers Nutr 1: 1-3
Hirschhaeuser F, Sattler UGA, Mueller-Klieser W (2011). Lactate: a metabolic key player of cancer.
Cancer Res 71: 6921-6929
47
48
TRIACILGLICEROLES SRICOS
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de triacilgliceroles en una muestra de suero

sanguneo.
2. EI alumno explicar el contexto clnico en que es relevante la determinacin de

triacilgliceroles sricos
GENERALIDADES
Los triacilgliceroles (triglicridos) son lpidos formados por la esterificacin de tres molculas de
cidos grasos con una de glicerol. Se encuentran presentes en los aceites y las grasas que forman
parte de las dietas comunes y en el tejido adiposo, donde constituyen la principal forma de
almacenamiento energtico. Los triacilgliceroles dietarios se digieren por accin de la lipasa
pancretica, generando principalmente monoacilgliceroles y cidos grasos, productos capaces de
ser absorbidos por el intestino.
En los enterocitos los monoacilgliceroles se reesterifican con los cidos grasos, y los
triacilgliceroles resultantes se asocian con otros componentes para estructurar las lipoprotenas
conocidas como quilomicrones, los cuales son secretados hacia la linfa, a travs de la cual son
llevados a la circulacin general. En los capilares sanguneos de diversos tejidos, principalmente
del adiposo y del muscular, la lipoprotena lipasa (LPL) hidroliza ms del 80% de los triacilgliceroles
de los quilomicrones, y la mayor parte de los cidos grasos liberados penetran a las clulas del
tejido correspondiente, mientras que el glicerol es captado y metabolizado por el hgado.
Despus de que acta la LPL sobre los quilomicrones, stos quedan convertidos en lipoprotenas
pequeas de relativo alto contenido de colesterol, llamadas remanentes de quilomicrones, cuyo
destino es ser endocitadas por los hepatocitos.
El hgado forma triacilgliceroles a partir de los carbohidratos dietarios cuando stos se hallan en
exceso. Debido a que el hgado normalmente no almacena grasa, sus triacilgliceroles se asocian
con otros componentes lipdicos y protenicos para estructurar las lipoprotenas de muy baja
densidad (LMBD), las cuales secreta a la sangre. De manera similar a lo que ocurre con los
quilomicrones, la LPL hidroliza la mayor parte de los triacilgliceroles presentes en las LMBD,
penetrando los cidos grasos liberados, a las clulas del tejido correspondiente.
49
EI hombre primitivo requera el almacenamiento de grasa en su cuerpo debido a lo incierto de
cundo podra tomar su prximo alimento, sin embargo, en la mayora de las sociedades actuales
es innecesario el almacenamiento de grasa, dada la disponibilidad de alimentos a cualquier hora
del da y a que el esfuerzo fsico cada vez es menor.
Las grasas insaturadas son de origen vegetal, aunque tambin existen en proporciones
importantes en los alimentos de origen animal. La ingestin de grasas de origen vegetal no se halla
asociada por s misma a la ingesta de colesterol. Adems, dicha fuente proporciona los cidos
grasos esenciales, que no pueden sintetizarse en el organismo humano.
IMPORTANCIA CLNICA
La elevacin de la concentracin plasmtica de triacilgliceroles constituye un factor de riesgo
aterognico. Aquellos pases con dietas altas en grasas animales tienen elevada prevalencia de
aterosclerosis y sus complicaciones. Por el contrario, en pases con ingesta baja de grasa saturada,
como es el caso de Japn y de algunos pases mediterrneos, la prevalencia de aterosclerosis es
baja.
Se ha documentado que las campaas exitosas para disminuir la ingesta de grasa animal en pases
con alta prevalencia de aterosclerosis y cardiopata isqumica, logran reducir la mortalidad por
esta causa.
La hipertriacilglicerolemia familiar se debe al incremento de LMBD, con una prevalencia alta en la
poblacin general, de 5 a 10%. Sus bases moleculares se desconocen en gran medida. Los
pacientes presentan concentraciones de triacilgliceroles generalmente entre 300 y 900 mg/dL,
frecuentemente con concentraciones de colesterol-LAD bajas. Esta patologa se asocia con mayor
riesgo cardiovascular, de obesidad, resistencia a la insulina, diabetes mellitus, hipertensin e
hiperuricemia.
La pancreatitis aguda es provocada por hipertriacilglicerolemia aproximadamente en el 7% de los
casos. La concentracin de triacilgliceroles relacionada con esta patologa es superior a 1000
mg/dL. El exceso de triacilgliceroles en este grado es propio de algunas hiperlipidemias bien
caracterizadas. Existe cierta evidencia de que la lesin primera del pncreas probablemente se
debe a la acumulacin de las lipoprotenas en los capilares, provocando la liberacin de enzimas
de las clulas acinares pancreticas, como la lipasa y la fosfolipasa 2, que al actuar sobre sus
abundantes sustratos liberan cidos grasos y lisolecitina, sustancias que actan como detergentes
50
destruyendo en mayor medida las membranas celulares y provocando la lisis celular propia de la
pancreatitis.
Fundamento: la hidrlisis de los triacilgliceroles produce cidos grasos y glicerol por accin de la
lipasa. EI glicerol formado reacciona con ATP, produciendo glicerol-fosfato y ADP por catlisis de la
glicerolcinasa. EI glicerol-fosfato a su vez reacciona con oxgeno y produce dihidroxiacetona-
fosfato y perxido de hidrgeno, en una reaccin catalizada por la glicerol-fosfato oxidasa. EI
perxido de hidrgeno reacciona con 4-aminofenazona y 4-clorofenol, generando quinoneimina
(compuesto colorido), cido clorhdrico y agua. La concentracin del compuesto colorido es
proporcional a la concentracin de triacilgliceroles.

Suero --- --- 10 L
Patrn --- 10 L ---
Mezclar e incubar a 37 C durante 5 min. y medir la absorbancia (A) de la muestra y del
patrn frente al blanco a 500 nm. El color es estable durante 60 min.
CLCULO
(A muestra/A patrn) x [patrn] = _____ mg/dL Triacilgliceroles
Normal: <150 mg/dL

Lmite alto: 150-199 mg/dL
Alto: 200-499 mg/dL
Muy alto: 500 mg/dL
51
BIBLIOGRAFA
Kimura W, Mossner J (1996). Role of hypertriglyceridemia in the pathogenesis of experimental

acute pancreatitis. Internat J Pancreatol 20: 177-184
Kota SK, Kota SK, Jammula S, Krishna SVS, Modi KD (2012). Hypertriglyceridemia-induced recurrent
acute pancreatitis: a case-based review. Indian J Endocrinol Metabol 16: 141-143
National Cholesterol Education Program. ATP III Guidelines, National Institutes for Health (2001):
http://www.nhlbi.nih.gov/files/docs/guidelines/atglance.pdf
Yuan G, Al-Shali KZ, Hegele RA (2007). Hypertriglyceridemia, its etiology, effects, and treatment.
Can Med Ass J 176: 1113-1120
52
COLESTEROL SRICO
OBJETIVOS
1. El alumno determinar la concentracin de colesterol total en una muestra de suero

sanguneo tomada despus de ayuno de 12 horas.
2. EI alumno explicar el contexto clnico relevante para la determinacin de la

colesterolemia
GENERALIDADES
El colesterol es un derivado del ciclopentanoperhidrofenantreno. Es una molcula insoluble en
agua que se encuentra en todos los tejidos corporales, especialmente en cerebro, hgado, mdula
sea y piel.
CONTENIDO DE COLESTEROL DE ALGUNOS ALIMENTOS COMUNES
ALIMENTO (100 g) COLESTEROL (mg)
RIN DE RES 700

HGADO DE RES 440
CARNE DE RES O CERDO 85
CARNE DE BORREGO 95
POLLO O PAVO 80
CAMARONES 150
ALMEJAS 65
PESCADO MAGRO* 43
OSTIONES* 40
QUESO O CREMA 111
REQUESN 19
YEMAS DE HUEVO (2) 540
CLARA DE HUEVO 0
LECHE ENTERA (1 TAZA)) 33
VEGETALES 0
* Alimentos cocidos
En el hgado se produce la mayor parte del colesterol endgeno. Este rgano tambin participa en
la excrecin de colesterol transformndolo en sales biliares, las cuales son llevadas por la bilis
hacia el intestino, donde funcionan como agentes emulsionantes de la grasa dietaria, en
conjuncin con el movimiento peristltico. En el leon una gran parte de las sales biliares se
reabsorbe, participando en la circulacin enteroheptica. La pequea fraccin que no se
reabsorbe sufre la accin de la flora bacteriana, dando como resultado coprostanol y colestanol,
53
que son eliminados en las heces fecales. La dieta promedio suministra alrededor de 0.3 g de
colesterol diariamente.
El colesterol se encuentra en todas las clulas animales formando parte de las membranas.
Tambin se encuentra formando parte de los distintos tipos de lipoprotenas, siendo precursor de
las sales biliares, de la vitamina D y de toda la familia de hormonas esteroides.
IMPORTANCIA CLNICA
SE PUEDE ENCONTRAR HlPERCOLESTEROLEMIA EN LOS SIGUIENTES CASOS Y SITUACIONES:

1. Dietas ricas en colesterol. El consumo de alimentos ricos en colesterol propicia una
hiperconcentracin de colesterol en los hepatocitos, lo cual inhibe la exposicin de los
receptores para las LBD en su superficie celular. Esto ocasiona que cantidades importantes
y crecientes del colesterol circulante (de origen dietario o endgeno) no tengan acceso a
dicho tejido.
2. Colestasis obstructiva. En este padecimiento se obstruyen los canalculos biliares o el
coldoco, dificultndose por tanto la eliminacin del colesterol. En estos casos los niveles
de colesterol sanguneo pueden aumentar al doble o al triple de lo normal.
3. Sindrome nefrtico. Afeccin renal que se caracteriza por proteinuria, hipoalbuminemia,
edema e hiperlipidemia. Puede cursar con eliminacin urinaria de colesterol y otros
lpidos. Este sndrome es ocasionado por lesin de los glomrulos. EI efecto
hiperlipidmico aparentemente es un recurso que permite compensar la prdida de
albmina por la va urinaria, reduciendo as la alteracin de la presin onctica
intravascular. En tales condiciones tambin aumenta la concentracin de algunas
protenas, como la macroglobulina 2.
4. Hipotiroidismo. En este caso hay insuficiencia de la glndula tiroides y el efecto se
atribuye a la disminucin de receptores hepticos para las LBD.
5. Diabetes mellitus. La hipercolesterolemia se presenta frecuentemente en esta
enfermedad. Al disminuir la hiperglucemia tambin disminuye la hipercolesterolemia.
6. Hipercolesterolemia familiar. Padecimiento genticamente determinado, causado por
falta de receptores hepticos para LBD, lo que ocasiona que los niveles de colesterol
circulante se incrementen.
54
7. Enfermedad cardiovascular y aterosclerosis. Epidemiolgicamente esta patologa es la
ms importante que se asocia con hipercolesterolemia, siendo la causa fundamental de la
presentacin de infarto agudo al miocardio. Existen datos que indican que las
concentraciones de colesterol plasmtico superiores a 200 mg/dL se asocian con una
mayor frecuencia de aterosclerosis, de manera tal que a mayor concentracin, la
aterosclerosis aparece a una edad menor. Par tanto, como medida preventiva debe
procurarse que las cifras de colesterol se mantengan por debajo de dicho lmite.
Fundamento: Para determinar el colesterol total, primeramente se hidrolizan sus esteres
mediante colesterol esterasa, liberando colesterol y cidos grasos. Enseguida se oxida el colesterol
mediante colesterol oxidasa, generndose como productos colesten-3-ona y perxido de
hidrgeno. Este ltimo reacciona con fenol y 4-aminoantipirina por catlisis de la peroxidasa,
produciendo quinoneimina (compuesto colorido). La concentracin de quinoneimina es
proporcional a la concentracin de colesterol total.

Patrn --- 10 L ---
Suero o plasma --- --- 10 L
Mezclar e incubar a 37 C durante 5 min. y medir la absorbancia (A) de la muestra y del
patrn frente al blanco a 546 nm. El color es estable durante 60 min.
CLCULO
(A muestra/A patrn) x [patrn] = _____ mg/dL Colesterol
Deseable: 200 mg/dL
Lmite alto: 200-239 mg/dL
Hipercolesterolemia: 240 mg/dL
55
BIBLIOGRAFA
Guadalajara, J. F. Cardiologa. 5a. Ed., Mndez Editores, 1990
National Cholesterol Education Program. ATP III Guidelines, National Institutes for Health (2001):
56
COLESTEROL-LBD Y COLESTEROL-LAD SRICOS
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de colesterol-LBD y colesterol-LAD en una
muestra de suero sanguneo despus de ayuno de 12 horas.
2. El alumno explicar la relevancia clnica del colesterol asociado a LBD y a LAD
GENERALIDADES
Las lipoprotenas de baja densidad (LBD) transportan en la sangre la mayor cantidad del
colesterol liberado por el hgado y lo llevan hacia los tejidos perifricos, aunque despus su mayor
parte regresa al tejido heptico. Las clulas que captan LBD poseen receptores membranales
capaces de reconocer a dichas lipoprotenas siempre y cuando stas contengan apoprotena B-
100. Una vez incorporadas las LBD por endocitosis, el colesterol queda libre y se integra al
metabolismo celular, pudiendo almacenarse previa esterificacin catalizada por la enzima acil CoA
colesterol aciltransferasa (ACAT).
EI hgado segrega normalmente lipoprotenas de muy baja densidad (LMBD), las cuales se
convierten en lipoprotenas de densidad intermedia (LDI) al perder una buena parte de sus
triacilgliceroles por efecto de la enzima lipoprotena lipasa (LPL) en los capilares de los tejidos
perifricos. Aproximadamente la mitad de las LDI del plasma son captadas por el hgado, y las que
no, se convierten en LBD por accin de la lipasa heptica. Los individuos que padecen
hipercolesterolemia familiar tienen receptores para LBD con alteraciones estructurales y
funcionales genticamente determinadas. Los individuos normales que ingieren dietas con alto
contenido de colesterol tienen en su hgado un exceso de colesterol, lo cual hace que disminuya el
nmero de receptores para LBD en la superficie celular, con el consecuente aumento de la
concentracin plasmtica del colesterol LBD.
La regulacin del metabolismo de las LBD y por tanto del colesterol, depende de su concentracin
plasmtica, ya que si se presenta una reduccin de las LBD del plasma y por tanto del colesterol
heptico, se activa la HMGCoA reductasa, enzima reguladora de la sntesis heptica de colesterol.
Con la mayor produccin de colesterol se restituye la concentracin plasmtica de LBD y
colesterol. Por el contrario, si aumenta la concentracin plasmtica de las LBD se incrementa la
captacin heptica del colesterol y este inhibe a la HMGCoA reductasa con la consiguiente
disminucin de la sntesis de colesterol heptico. Adicionalmente, disminuye la sntesis de
57
receptores para LBD, lo cual se traduce en menor nmero de receptores en la superficie celular, lo
que a su vez reduce la captacin heptica de las LBD plasmticas. En las personas sanas este
mecanismo mantiene dentro de los intervalos normales la concentracin de LBD circulantes y su
colesterol.
El aumento de la concentracin plasmtica de colesterol-LBD es uno de los factores de riesgo ms
importantes para generar aterosclerosis. Por el contrario, la terapia que reduce sus
concentraciones sanguneas reduce tambin la probabilidad de aparicin de afecciones coronarias.
Se consideran cifras normales por debajo de 160 mg/dL, aunque son deseables cifras menores a
130 mg/dL.
Las lipoprotenas de alta densidad (LAD) se forman en el hgado y en el intestino. Recin

secretadas se les denomina LAD nacientes y son una especie de vesculas planas. En la circulacin
adquieren apoprotena A y apoprotena C provenientes de las LMBD y de los quilomicrones. Las
LAD reciben fosfolpidos y colesterol no esterificado a partir de la superficie celular en los tejidos
perifricos y a partir de otras lipoprotenas. En dichas lipoprotenas ocurre la esterificacin del
colesterol ya que contienen la enzima lecitina colesterol acil transferasa (LCAT). A esto se debe
que normalmente 2/3 del colesterol sanguneo se encuentre esterificado.
Las LAD llevan al hgado el colesterol esterificado, lo cual constituye en su conjunto un proceso
que se conoce como transporte inverso de colesterol, el cual es un mecanismo importante para
evitar la hipercolesterolemia y la aterosclerosis. Todos aquellos factores que disminuyen las LAD
(tabaquismo, obesidad, vida sedentaria, andrgenos, beta-bloqueadores, hipertriacilglicerolemia,
anablicos esteroides, diabetes mellitus, etc.) son promotores de la aterosclerosis. Se considera
conveniente una concentracin de colesterol-LAD mayor a 55 y 65 mg/dL para hombres y mujeres,
respectivamente y como factor de riesgo aterognico elevado, una concentracin menor a 35 y a
45 mg/dL en hombres y mujeres, respectivamente.
EI colesterol, las LBD Y LAD deben cuantificarse en sujetos sanos despus de los 20 aos de edad,
por lo menos cada 5 aos y con mucha mayor razn si presentan uno o ms factores de riesgo
aterognico.
58
IMPORTANCIA CLNICA
SE REGISTRA INCREMENTO DE LA CONCENTRACIN DE LBD EN LAS SIGUIENTES SITUACIONES O
PATOLOGAS:
Dieta inadecuada. Las dietas ricas en grasa saturada (de origen animal) y grasas trans
Hipercolesterolemia familiar. Es un padecimiento de origen gentico causado por disminucin o
falta de receptores hepticos para las LBD o mutaciones de la apoprotena B-100
Dietas ricas en carbohidratos. En el hgado el exceso de carbohidratos de la dieta se transforma en
grasa y colesterol, los cuales se envan a la circulacin en forma de LMBD, dando lugar
parcialmente a la formacin de LBD por intermedio de las LDI.
Tabaquismo. El efecto se observa en sujetos que fuman ms de 20 cigarrillos al da y se atribuye a
una accin oxidante de algunos componentes del humo del tabaco sobre las LBD, lo cual hace que
sean captadas por los macrfagos en la pared de las arterias.
Aterosclerosis. Se llama ateroesclerosis a la presencia de placas en la ntima arterial en vasos
como la aorta, las coronarias, la cerebral, la cartida interna, la ilaca, la femoral y las
mesentricas. Aquellas con un dimetro menor a 300 m no son afectadas. No se trata de una
enfermedad sistmica, sino que afecta ciertos sitios con gran predileccin. En estos sitios el
endotelio vascular presenta mayor permeabilidad a diversos componentes del plasma, entre los
cuales destacan las LBD y los monocitos, que tienden a acumularse en el espacio subendotelial. En
este espacio los monocitos se transforman en macrfagos, los cuales, al igual que las clulas
endoteliales y las del msculo liso, forman radicales libres. Estos propician la peroxidacin de los
cidos grasos insaturados de las LBD. Los macrfagos fagocitan a las LBD oxidadas y se
transforman en clulas espumosas. La necrosis de las clulas espumosas provoca un proceso
inflamatorio que promueve la sntesis de colgena y la proliferacin de clulas de msculo liso, las
cuales migran hacia el espacio subendotelial y dan lugar a la formacin de una placa en el
endotelio vascular que es llamada estra grasa. Si la hipercolesterolemia persiste, el proceso
mencionado se perpeta y la placa sigue creciendo. Con frecuencia, en etapas tardas la placa
arterial se fisura, con lo que se activa la generacin de un trombo sobre la placa, precipitndose as
la oclusin vascular.
59
VARIACIONES DE LA CONCENTRACIN DE LAD
Las personas con concentraciones sricas de triacilgliceroles elevadas comnmente tienen bajos
niveles de colesterol-LAD. Tambin pueden estar bajos estos niveles por factores genticos,
presencia de diabetes mellitus 2, tabaquismo, sobrepeso u obesidad y sedentarismo.
PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR COLESTEROL-LBD (Randox)

Fundamento: consta de 2 fases, aclaramiento y reaccin
FASE DE ACLARAMIENTO
Los quilomicrones, las LMBD y las LAD se destruyen mediante detergentes especficos, liberando
sus steres de colesterol y su colesterol libre. Las LBD quedan intactas con este tratamiento. Los
steres de colesterol se hidrolizan enzimticamente, produciendo colesterol y cidos grasos libres.
Posteriormente el colesterol libre se oxida enzimticamente para producir colestanona y perxido
de hidrgeno y finalmente este ltimo se reduce, produciendo agua y liberando oxgeno.
COLESTEROL ESTERASA
steres de colesterol colesterol + cido graso

COLESTEROL OXIDASA
Colesterol + O2 colestenona + H2O2
CATALASA
H2O2 2 H2O + O2
FASE DE REACCIN
El propsito de la fase de aclaramiento es eliminar todo el colesterol asociado a las lipoprotenas
antes mencionadas. Una vez cubierto esto, se repite el procedimiento hasta la produccin de
perxido de hidrgeno para posteriormente hacer que reaccione enzimticamente con ciertas
sustancias para generar quinoneimina, que tiene color. La intensidad del color producido es
proporcional a la concentracin de colesterol-LBD.
PEROXIDASA
H2O2 + 4-AA + HDAOS quinoneimina + 4 H2O2
60
Patrn Muestra
Patrn 10 L ---
Suero --- 10 L
Reactivo 1 750 L 750 L
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C y medir la absorbancia A1 de la
muestra y del patrn a 578 nm frente a agua destilada.
Despus agregar:
Reactivo R2 0.25 mL 0.25 mL
Mezclar e incubar 5 minutos a 37 C y medir la absorbancia (A2) de la
muestra y del patrn a 578 nm frente a agua destilada
CLCULO
[(A2 A1)muestra/(A2 A1)patrn] x [patrn] = ______ mg/dL Colesterol-LBD
ptimo 100 mg/dL

Casi ptimo 100-129 mg/dL
Lmite alto 130-159 mg/dL
Alto 160-189 mg/dL
Muy alto 190 mg/dL
PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR COLESTEROL-LAD (Randox)

El fundamento y la tcnica son iguales a los del colesterol-LBD, excepto que en la fase de
aclaramiento se utiliza un detergente adecuado para destruir quilomicrones, LMBD y LBD.
CLCULO
[(A2 A1)muestra/(A2 A1)patrn] x [patrn] = ______ mg/dL colesterol-LAD
ptimo (cardioprotector) 60 mg/dL
Bueno (mientras ms alto mejor) 40-59 mg/dL
Bajo (riesgo importante de ECC*) <40 mg/dL
*ECC, enfermedad cardiaca coronaria
61
BIBLIOGRAFA
Cholesterol levels: what you need to know. NIH Medline Plus (2012):
https://medlineplus.gov/magazine/issues/summer12/articles/summer12pg6-7.html
National Cholesterol Education Program. Adult Treatment Panel III (ATP III) Guidelines, National
Institutes for Health (2001):
What your cholesterol levels mean. American Heart Association (2016):

http://www.heart.org/HEARTORG/Conditions/Cholesterol/AboutCholesterol/What-Your-
Cholesterol-Levels-Mean_UCM_305562_Article.jsp
62
TRANSAMINASAS SRICAS
OBJETIVOS
1. El alumno determinar la actividad de las enzimas TGO y TGP en una muestra de suero
sanguneo
2. EI alumno explicar los contextos clnicos en que es relevante la cuantificacin de

transaminasas sricas
GENERALIDADES
Las transaminasas o aminotransferasas son enzimas que participan en el metabolismo de los
aminocidos, tanto en su degradacin como en su biosntesis, con un requerimiento estricto por
fosfato de piridoxal, coenzima derivada de la vitamina B6. Cuando los aminocidos se catabolizan
para liberar energa o se transforman en sustancias utilizables energticamente, como la glucosa o
los cuerpos cetnicos, la primera reaccin que sufren es la prdida de su grupo amino, lo cual
ocurre principalmente mediante reacciones de transaminacin.
La transaminacin es una reaccin reversible en la que un aminocido y un cetocido
intercambian recprocamente sus grupos amino y ceto, produciendo, a partir del aminocido, un
cetocido y a partir del cetocido, un aminocido, como lo indica la siguiente reaccin general:
Aminocido A + Cetocido A Aminocido B + Cetocido B

Una vez que los aminocidos pierden su grupo amino, se integran a las vas que los catabolizan o
que los transforman en glucosa y/o cuerpos cetnicos.
EI cetocido que participa de manera preponderante para que los aminocidos pierdan su grupo
amino es el -cetoglutarato, el cual se transforma en glutamato en la reaccin transaminante al
perder su grupo ceto y adquirir el amino, de tal manera que este aminocido porta el grupo amino
que perteneci a otros aminocidos.
A fin de que este proceso pueda seguir ocurriendo se hace necesario que el glutamato se
reconvierta en su cetocido por una reaccin no transaminante. La regeneracin de -
cetoglutarato a partir de glutamato es catalizada por la glutamato deshidrogenasa y se trata de un
proceso de desaminacin oxidativa que libera el grupo amino del glutamato como amonio, al
tiempo que reduce NAD+ como lo indica la siguiente reaccin:
Glutamato + NAD+ + H2O -cetoglutarato + NADH + H+ + NH4+
63
Debido a que las tranasaminasas catalizan reacciones reversibles, pueden sintetizar los distintos
aminocidos no esenciales a partir de sus respectivos cetocidos y glutamato.
IMPORTANCIA CLNICA
En el plasma sanguneo se encuentran dos transaminasas de relevancia diagnstica, la
transaminasa glutmico-oxalactica (TGO), tambin conocida como aspartato aminotransferasa
(AST), y la transaminasa glutmico-piruvica (TGP) o alanina aminotransferasa (ALT).
Las transaminasas se encuentran en el hgado, el corazn, el msculo esqueltico, el pncreas y el
cerebro. La ALT es ms especfica del hgado que de los dems tejidos mencionados.
La AST est formada por dos isoenzimas, una citoslica y la otra mitocondrial, mientras que la ALT
es exclusivamente citoslica
Las reacciones que catalizan estas enzimas son las siguientes:
AST (TGO)
Aspartato + -cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
ALT (TGP)
Alanina + -cetoglutarato Piruvato + Glutamato
SE PRESENTA INCREMENTO DE LAS TRANSAMINASAS EN LOS SIGUIENTES CASOS:
1. Infarto al miocardio. Se detecta elevacin de la TGO en el suero sanguneo a partir de las 8

horas del evento y aumenta hasta un mximo a las 36 horas (unas 6 veces el lmite
mximo normal), volviendo a la normalidad a los 3 o 4 das. En los casos tpicos sin
complicaciones, la TGP no se eleva o slo lo hace moderadamente. Sin embargo, si se
presenta insuficiencia cardiaca o choque severo, la TGP generalmente aumenta en grado
importante por el dao heptico secundario a la afeccin cardiaca.
2. Hepatitis aguda viral. Produce incrementos muy marcados de las transaminasas en el
suero. La deteccin de ms de 1000 U/L sugiere esta patologa si es que no existe
sospecha de afeccin txico-farmacolgica o isqumica.
3. Hepatitis aguda txico-farmacolgica. Existe una gran variedad de sustancias que pueden
producir afeccin heptica con elevacin de la transaminasemia, pero entre los que
producen los mayores incrementos son la intoxicacin con paracetamol y con tetracloruro
de carbono. El paracetamol es un analgsico de uso muy comn y venta libre. La
sobredosis de este frmaco es una de las causas de intoxicacin ms frecuentes en todo el
mundo. Las manifestaciones de la intoxicacin incluyen nuseas, sudoracin, malestar
64
estomacal, diarrea, convulsiones y coma. El tetracloruro de carbono es una sustancia que
an se usa en algunas industrias y es en el personal que labora en ellas donde se
presentan principalmente los casos de intoxicacin. El tetracloruro de carbono afecta al
hgado, los riones y en casos ms serios al sistema nervioso central, pudiendo ser fatal.
Adems, se reconoce a esta sustancia como carcinognica.
4. Hepatitis aguda alcohlica. Produce hipertransaminemia moderada, generalmente
inferior a 500 U/L
5. Afecciones musculares. Se produce incremento de las transaminasas sricas en casos de
distrofia muscular, traumatismos musculares extensos, triquinosis, rabdomiolisis, etc.
PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR ACTIVIDAD DE AST (Randox)

Fundamento: se pone la muestra en contacto con aspartato y -cetoglutarato para que
reaccionen transaminando y produzcan glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido
reacciona con 2, 4-dinitro-fenilhidracina (2, 4 DNFH) y produce oxalacetato hidrazona, que es un
compuesto que tiene color. La intensidad del color es proporcional a la actividad de la AST.

Blanco Muestra
Suero --- 0.1 mL
Tampn (R1-AST) 0.5 mL 0.5 mL
Mezclar e incubar a 37 C durante exactamente 30 minutos. Despus
agregar:
2, 4-DNFH (R2) 0.5 mL 0.5 mL
Suero 0.1 mL
Mezclar, dejar reposar durante exactamente 20 minutos entre 20 y 25
C. Despus agregar:
Hidrxido sdico (R3) 5.0 mL 5.0 mL

Mezclar y despus de 5 minutos leer la absorbancia (A) a 546 nm de la
muestra frente al blanco
65
CLCULO
Obtener la actividad de la AST a partir de la siguiente tabla:
ABSORBANCIA AST (U/L) ABSORBANCIA AST (U/L)

0.020 7 0.100 36
0.030 10 0.110 41
0.040 13 0.120 47
0.050 16 0.130 52
0.060 19 0.140 59
0.070 23 0.150 67
0.080 27 0.160 76
0.090 31 0.170 89
Hasta 12 U/L AST
PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR ACTIVIDAD DE ALT (Randox)
Fundamento: se pone la muestra en contacto con alanina y -cetoglutarato para que reaccionen
transaminando y produzcan glutamato y piruvato. El piruvato producido reacciona con 2, 4-
dinitro-fenihidracina y produce piruvato hidrazona, que es un compuesto que tiene color. La
intensidad del color es proporcional a la actividad de la ALT.
Blanco Muestra
Suero --- 0.1 mL
Tampn (R1-ALT) 0.5 mL 0.5 mL
Mezclar e incubar a 37 C durante exactamente 30 minutos. Despus
agregar:
2, 4-DNFH (R2) 0.5 mL 0.5 mL
Suero 0.1 mL
Mezclar, dejar reposar durante exactamente 20 minutos entre 20 y 25
C. Despus agregar:
Hidrxido sdico (R3) 5.0 mL 5.0 mL

Mezclar y despus de 5 minutos leer la absorbancia (A) a 546 nm de la
muestra frente al blanco
66
CLCULO
Obtener la actividad de la ALT a partir de la siguiente tabla:
ABSORBANCIA ALT (U/L) ABSORBANCIA ALT (U/L)

0.025 4 0.275 48
0.050 8 0.300 52
0.075 12 0.325 57
0.100 17 0.350 62
0.125 21 0.375 67
0.150 25 0.400 72
0.175 29 0.425 77
0.200 34 0.450 83
0.225 39 0.475 88
0.250 43 0.500 94
Hasta 12 U/L ALT
BIBLIOGRAFA
Sobredosis de paracetamol (acetaminofn). Medline Plus (2015):

https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002598.htm
Tetracloruro de carbono (Carbon tetrachloride). Resmenes de Salud Pblica. Agencia para

Sustancias Txicas y el Registro de Enfermedades (2016):
http://www.atsdr.cdc.gov/es/phs/es_phs30.html
67
68
UREA SRICA
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de urea en una muestra de suero sanguneo
2. EI alumno explicar el contexto clnico relevante de la cuantificacin de urea srica
GENERALIDADES
EI catabolismo de las protenas es un proceso que ocurre permanentemente por el recambio
normal a que se encuentran sometidas las protenas y por el recambio celular en los tejidos con
capacidad de divisin celular. Las protenas se catabolizan con mayor intensidad durante el ayuno
para activar la sntesis de glucosa, sustancia fundamental para el cerebro y otros tejidos o tipos
celulares. Los productos del catabolismo de las protenas son los aminocidos libres, los cuales
mediante el proceso conocido como transdesaminacin se transforman en los cetocidos
correspondientes, con la liberacin concomitante del nitrgeno aminoacdico en forma de amonio.
EI amonio es una sustancia txica para el organismo, especialmente para el sistema nervioso
central, que llega al hgado principalmente formando parte de diversas molculas,
fundamentalmente alanina y glutamina, las cuales en dicho rgano se descomponen para liberar
su nitrgeno como amonio. Otro origen muy importante del amonio heptico es la putrefaccin
intestinal pues este ion es uno de los principales productos del metabolismo bacteriano, el cual se
absorbe y desplaza a travs de la va porta hacia el hgado.
En el hgado el amonio se transforma en urea a travs del ciclo de la urea o ciclo de Krebs-
Henseleit. La urea es una sustancia de muy bajo peso molecular, sin carga elctrica formal y capaz
de permear fcilmente las membranas. Es un producto de desecho que se elimina principalmente
por la va renal y es notoriamente menos txico que el amonio.
La insuficiencia heptica limita la transformacin de amonio en urea, de lo cual puede resultar
hiperamonemia, condicin bajo la cual el cerebro sufre desarreglos metablicos que se traducen
en alteraciones neurolgicas potencialmente severas.
En condiciones normales, la concentracin de urea en la sangre se halla influenciada por la
magnitud del aporte dietario de protenas y por el estado de hidratacin general. En este ltimo
caso, la deshidratacin se asocia con hemoconcentracin y con reduccin de la filtracin
glomerular, registrndose consecuentemente un incremento en la concentracin de urea.
EI trmino azoemia o azotemia se utiliza en ocasiones para referirse a la presencia de nitrgeno
de origen protenico en la sangre, es decir a la urea.
69
IMPORTANCIA CLNICA
EL AUMENTO DE LA CONCENTRACIN DE UREA EN LA SANGRE PUEDE OCURRIR DEBIDO A LAS

SIGUIENTES CAUSAS:
I. POR MAYOR PRODUCCIN DE UREA:
1. Dietas hiperprotenicas
2. Hemorragia digestiva, por la digestin de las protenas de la sangre
3. Aumento del catabolismo de protenas, por sepsis, politraumatismo, intervenciones
quirrgicas, fiebre y otras condiciones del paciente crtico.
II. POR MENOR ELIMINACIN DE UREA
En este caso se reconocen tres grupos de alteraciones:
A. PRERRENALES, las cuales se deben a un descenso en la perfusin renal. La urea plasmtica

aumenta mucho ms en comparacin con la creatinina (cociente urea/creatinina >80).
Intervienen diferentes factores, entre los cuales se encuentran:
1. Hipovolemia absoluta por prdidas gastrointestinales (vmito, diarrea, fstulas,
hemorragias), prdidas renales (diuresis osmtica por uso de diurticos o por diabetes
mellitus; diabetes inspida, insuficiencia suprarrenal), prdidas cutneas (quemaduras,
diaforesis) o por secuestro de lquido (pancreatitis, leo paraltico. El leo paraltico es una
suspensin de la actividad normal del intestino en que no existe una obstruccin
mecnica, pudiendo deberse a gastroenteritis bacterianas o virales, bajo nivel de potasio,
disminucin del riego sanguneo al intestino, apendicitis, etc. es una de las principales
causas de obstruccin intestinal en bebs y nios).
2. Hipovolemia relativa por infarto agudo al miocardio, choque sptico (afeccin grave que
ocurre cuando una infeccin en todo el cuerpo produce una hipotensin arterial peligrosa,
principalmente debido a la accin de toxinas microbianas), choque anafilctico
(insuficiencia circulatoria que se presenta en forma casi inmediata cuando el paciente
recibe por va parenteral un medicamento al que es alrgico. El efecto general se debe a
que la reaccin alrgica provoca la liberacin de histamina, que causa broncoconstriccin
y vasodilatacin, as como aumento de la permeabilidad vascular con extravasacin de
lquido), sndrome hepatorrenal (afeccin renal progresiva debida a la insuficiencia
70
heptica grave (p. ej. cirrosis, hepatitis alcohlica). Es una complicacin seria que puede
producir la muerte del paciente), estados edematosos por insuficiencia cardiaca
congestiva, cirrosis heptica o sndrome nefrtico
B. RENALES O NEFROPTICAS, en las cuales existe dao parenquimatoso renal. El cociente
urea/creatinina en el plasma es <40. Entre ellas se encuentran las siguientes:
1. Isquemia (necrosis tubular aguda)
2. Glomerulopata primaria o secundaria a enfermedad sistmica
3. Nefropata tbulo intersticial, por uso de antibiticos nefrotxicos (aminoglucsidos,
cefalosporinas, vancomicina), anestsicos, contrastes radiolgicos, mioglobina,
hemoglobina, metales (plomo, mercurio, arsnico), AINEs, furosemida, o por
enfermedades sistmicas como la tuberculosis, el mieloma mltiple, la sarcoidosis
(enfermedad de causa desconocida que produce inflamacin de ganglios linfticos,
pulmones, hgado, ojos, piel y otros tejidos), sndrome de Sjgren (trastorno
autoinmunitario en que se destruyen las glndulas que producen lgrimas y saliva,
pudiendo afectar otras partes del cuerpo, como los riones y los pulmones)
C. POSTRENALES, las cuales dificultan la excrecin de urea debido a obstruccin de vas como
ocurre en los siguientes casos:
1. Obstruccin intrnseca por cogulos, cristales, cilindros (proteinuria del mieloma)
2. Obstruccin extrnseca por enfermedad prosttica, neoplasias o fibrosis retroperitoneal
(enfermedad rara de causa desconocida en que se bloquean los urteres por la formacin
de tejido fibroso adicional por atrs del estmago y los intestinos, formando masas que
pueden bloquear los urteres)
Fundamento: la hidrlisis de la urea produce amoniaco y dixido de carbono por catlisis de la
ureasa. El amoniaco generado reacciona con salicilato e hipoclorito, produciendo 2, 2-
dicarboxilindofenol, que tiene color verde. La intensidad del color obtenido es directamente
proporcional a la concentracin de urea.
71

Patrn --- 10 L ---
Mezclar e incubar durante 3 minutos a 37 C. Despus, aadir:
Hipoclorito sdico 200 L 200 L 200 L

Mezclar e incubar a 37 C durante 5 min. y medir la absorbancia (A) a 600 nm de la
muestra y del patrn frente al blanco. El color es estable durante 2 horas
CLCULO
(A muestra/A patrn) x [patrn] = _____ mg/dL Urea
15-45 mg/dL
BIBLIOGRAFA
Oclusin intestinal. Medline Plus (2014):

https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/000260.htm?PHPSESSID=3f3e56abe6242df67208da
941616c01e
Sndrome hepatorrenal. Medline Plus (2014)

Zubelda JM, Baeza ML, Juregui I, Senent CJ. La anafilaxia y el choque anafilctico (Cap. 36). En: El
Libro de las Enfermedades Alrgicas de la Fundacin BBVA, 2012:
http://www.alergiafbbva.es/otras-enfermedades-alergicas/36-la-anafilaxia-y-el-choque-
anafilactico/
72
73
CAPACIDAD AMORTIGUADORA DEL PLASMA SANGUNEO
OBJETIVOS
1. EI alumno comparar una muestra de plasma sanguneo con una muestra de solucin
salina fisiolgica en cuanto a su capacidad de amortiguamiento
2. El alumno explicar el contexto fisiolgico y clnico relevante del amortiguamiento del pH

en el organismo humano
GENERALIDADES
Los cambios en la concentracin de hidrogeniones afectan la estructura de las protenas. Si se
trata de enzimas, es posible que pierdan o disminuyan significativamente su actividad cataltica. Si
se trata de protenas membranales, pueden sufrir alteraciones severas en su estructura, con
potencial impacto en la actividad de diversos sistemas de transporte y sealizacin que actan en
las membranas.
EI amortiguamiento del pH es la propiedad que tienen ciertas soluciones de no modificar
significativamente su pH al recibir cantidades moderadas de cido o de lcali, cantidades que,
aadidas a muestras equivalentes de agua o soluciones no amortiguadas, produciran cambios
significativos de pH.
EI pH sanguneo normal es de 7.4 (intervalo 7.35-7.45). La importancia de que no vare de manera
significativa se aprecia al considerar la informacin emprica de que valores de pH sanguneo
menores a 7.0 o mayores a 7.8 ponen en riesgo la vida del paciente.
EI mantenimiento del pH normal depende de la accin de importantes sistemas amortiguadores.
Entre los que actan en la sangre destacan el de bicarbonato/CO2 y el de hemoglobinato/
hemoglobina.
IMPORTANCIA CLNICA
Las alteraciones del pH sanguneo pueden ser las siguientes:
Acidosis metablica. Consiste en la disminucin del pH por aumento en la produccin de cidos
no carbnicos. Por ejemplo, en la Diabetes mellitus tipo I puede producirse acidosis por la
produccin incrementada de cuerpos cetnicos (cido acetoactico y cido hidroxibutrico). En
pacientes con hipoxemia intensa se producen cantidades excesivas de cido lctico, lo cual
tambin puede producir acidosis metablica
74
Asimismo, la acidosis metablica puede resultar de las diarreas graves debido a que la secrecin
de los intestinos delgado y grueso posee importantes cantidades de bicarbonato.
En la uremia debida a casi todas las formas de enfermedad renal crnica se produce acidosis
metablica debido a que la secrecin renal de hidrogeniones y de amoniaco es deficiente.
En la gasometra arterial se identifica la presencia de acidosis metablica por la disminucin en la
concentracin de bicarbonato, lo cual se debe a que es esta la sustancia que amortigua
directamente los cidos metablicos, reduciendo su concentracin en mayor medida cuanto
mayor es la severidad de la acidosis.
Alcalosis metablica. Consiste en el incremento de pH debido generalmente a la prdida de cido
no carbnico, como ocurre en los casos de vmitos repetidos e intensos, y en casos en los que se
practica aspiracin gstrica. En ambas condiciones se pierde el cido clorhdrico presente en el
jugo gstrico y se pierde el equilibrio cido-bsico a favor de la alcalosis.
En los casos en los que el rin retiene Na+ y HC03-, como ocurre con el uso teraputico excesivo
de hormonas esteroides suprarrenales o en enfermedades que cursan con hiperproduccin de
dichas hormonas, puede presentarse alcalosis metablica debido al exceso de concentracin de
bicarbonato.
EI rin deja pasar con cierta facilidad al potasio (K+), y aunque con dietas normales es improbable
una deficiencia de este elemento, en pacientes alimentados con sonda nasogstrica o por va
intravenosa durante tiempos prolongados, puede presentarse dficit si no se incorpora en esas
formas de alimentacin.
Debido a que el potasio se encuentra fundamentalmente en el medio intracelular, su prdida por
el intestino y/o por el rin, produce su deplecin intracelular. La respuesta a esto es el ingreso de
hidrogeniones y sodio a las clulas, condicionando el estado alcaltico. La alcalosis metablica se
manifiesta en la gasometra por incremento de la concentracin de bicarbonato.
Acidosis respiratoria. Consiste en la disminucin del pH debida a la incapacidad de la ventilacin
alveolar para excretar CO2 a una velocidad apropiada, producindose en consecuencia un exceso
de cido carbnico. Se trata de una afeccin tpicamente vista en los casos de enfermedad
obstructiva crnica (EPOC) y en enfermedades agudas que afectan la funcin respiratoria, como
los ataques agudos de asma, la bronconeumona, etc.
75
La hipoventilacin tambin se puede producir si el centro respiratorio se halla deprimido por
agentes anestsicos, sedantes o hipoxia y en alteraciones del sistema nervioso central de diversos
tipos, como traumatismo, isquemia o presin elevada del lquido cefalorraqudeo.
La hipoventilacin alveolar puede aparecer en las enfermedades de los msculos respiratorios as
como en las afecciones que limitan significativamente los movimientos del trax, como artritis,
deformidades torcicas y obesidad. El movimiento de los pulmones puede verse restringido por
acumulacin intratorcica de lquido pleural o de sangre, y por neumotrax (acumulacin de aire o
gas en la cavidad pleural). En la gasometra se identifica la presencia de la acidosis respiratoria por
incremento de la pCO2.
Alcalosis respiratoria. Consiste en el aumento del pH debido a una ventilacin alveolar excesiva
con relacin a los requerimientos de eliminacin de CO2. La hiperventilacin se produce, entre
otras causas, por sobredosis de medicamentos como los salicilatos y el 2,4-dinitrofenol. La
ventilacin pulmonar tambin puede aumentar por efecto de lesiones del SNC como meningitis,
encefalitis, hemorragia cerebral o traumatismos. Otra causa de la alcalosis respiratoria es la
hiperventilacin histrica. La alcalosis respiratoria se identifica en la gasometra por disminucin
de la pCO2
MATERIAL
1. Vasos de precipitados de 50 mL (2)
2. Plasma sanguneo (40 mL)
3. Solucin salina fisiolgica (20 mL)
4. Solucin de HCI 0.1 N
5. Solucin de NaOH 0.1 N
6. Solucin amortiguadora con pH 7.0
7. Pipetas de 1 mL (2)
8. Potencimetro
9. Agitador magntico
10. Regla geomtrica
76
PROCEDIMIENTO
1. Transfiera 20 mL de plasma sanguneo a un vaso de precipitados de 50 mL
2. Transfiera 20 mL de solucin salina fisiolgica a otro vaso de 50 mL
3. Registre el pH basal de ambas muestras con el potencimetro debidamente calibrado
4. Aada a cada muestra 1.0 mL de solucin 0.1 N de HCl en fracciones de 0.2 mL, mezclando
bien despus de cada adicin mediante el agitador magntico. Registre cada vez el pH.
5. Grafique el pH en funcin del volumen aadido de la solucin de cido
6. Repita el experimento con otra muestra de plasma, aadiendo 1.0 mL de solucin 0.1 N de
NaOH en fracciones de 0.2 mL, como en el primer experimento, y grafique los resultados
BIBLIOGRAFA
Gaw A, Murphy, MJ, Srivastava R, Cowan RA, OReilly D. Bioqumica Clnica. 5 Ed Elsevier/Churchil
Livingstone, 2013
77
12
11
10
7
pH
2
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
Volumen de solucin 0.1 N de HCl o NaOH (mL)
78
CUANTIFICACIN DE HEMOGLOBINA GLICADA
OBJETIVOS
1. El alumno explicar qu es la hemoglobina glicada y de qu depende su formacin

2. El alumno explicar el contexto clnico en que es relevante la cuantificacin de
hemoglobina glicada
GENERALIDADES
La glucosa es una sustancia fundamental para el metabolismo del organismo humano. Las
membranas celulares en los distintos tipos celulares tienen transportadores para este importante
combustible biolgico, teniendo acceso por lo tanto al ambiente intracelular en todos los tejidos.
En el caso particular de los eritrocitos, el transportador de la glucosa es el GluT1, que, como toda
la familia de transportadores GluT, acta con un mecanismo de difusin facilitada, permitiendo a
la glucosa el acceso al interior de los eritrocitos, donde se metaboliza, liberando energa suficiente
para mantener la viabilidad celular.
La glucosa es una sustancia reactiva, capaz de combinarse qumicamente con grupos amino sin
necesidad de actividad enzimtica. En el caso particular de la hemoglobina A1 la glucosa se
combina con el grupo amino libre de las cadenas de la protena, formando la hemoglobina
glicada, conocida como HbA1C (tambin llamada glicohemoglobina o hemoglobina glucosilada),
sustancia totalmente estable que no desaparece sino hasta que los eritrocitos son captados por el
sistema retculoendotelial como parte del proceso de recambio celular.
La reaccin entre la glucosa y la hemoglobina ocurre en mayor medida mientras mayor es la
concentracin de glucosa circulante, por lo cual se utiliza como medio de monitorizar el nivel de
glucemia en las ltimas semanas previas a la toma de muestra. Aunque existe correlacin entre la
proporcin de hemoglobina glicada y la glucemia que ha tenido el paciente 1 a 3 meses antes del
anlisis, la mejor correlacin se tiene con la glucemia de 2 a 4 semanas previas a la toma de
muestra.
IMPORTANCIA CLNICA
La utilidad de la cuantificacin de hemoglobina glicada se tiene principalmente en el marco de la
diabetes mellitus tipos 1 y 2. La diabetes mellitus tipo 2 es una patologa de amplsima distribucin
mundial en la actualidad. En Mxico la Encuesta Nacional de Salud 2012 revel que en promedio
9.2% de las personas adultas (20 o ms aos de edad) eran diabticas con diagnstico
79
previamente establecido, siendo mayor la prevalencia al aumentar la edad, de manera que en el
grupo de edad de 50 a 59 aos era de 19.2 % y en el de 60 a 69 aos era de 25.2 %. La
comparacin de estos datos con los que arrojaron las ENSANUTs previas claramente indica un
avance de la enfermedad en la poblacin mexicana.
La diabetes mellitus es una patologa que en funcin de tiempo impacta en la funcionalidad de la
micro y vasculatura, lo cual produce patologas derivadas de gran relevancia como son la
insuficiencia renal, las retinopatas y las neuropatas, as como la insuficiencia cardiaca y el infarto
al miocardio.
La presencia de 9-9.5 % o ms de hemoglobina glicada se asocia con una progresin muy rpida de
las complicaciones microvasculares que produce la hiperglucemia, habindose encontrado en
estudios de alto nivel que disminuyendo la proporcin de hemoglobina glicada, disminuye el
desarrollo y progreso de alteraciones en ojos, riones y nervios, tanto en la diabetes tipo 1 como
en la tipo 2. Se ha establecido que en los pacientes diabticos el riesgo de sufrir las complicaciones
microvasculares se reduce en 10% por cada punto porcentual que disminuya la concentracin de
hemoglobina glicada, de manera que si un paciente con un valor de 10% lo reduce a 8, tendr un
riesgo 20% menor de sufrir las complicaciones, debiendo disminuir la hemoglobina glicada por
debajo de 7% para prevenir la patologa microvascular.
Recientemente la hemoglobina glicada ha sido integrada como criterio diagnstico de la diabetes
mellitus por la Asociacin Americana para la Diabetes (AAD). Una concentracin de 6.5 % o ms de
hemoglobina glicada es diagnstica de dicha patologa, como lo son otros criterios de la AAD,
entre los cuales se encuentran la concentracin de glucosa de 126 mg/dL o ms en plasma
despus de ayuno de al menos 8 horas o el registro de 200 mg/dL o ms a las 2 horas en prueba de
tolerancia a la glucosa.
La cuantificacin peridica de hemoglobina glicada permite saber el grado de control de la
glucemia en las ltimas semanas, permitiendo al profesional de la salud darse cuenta con un
criterio fidedigno del apego que ha tenido el paciente a las prescripciones dietticas y
medicamentosas que recibi. La AAD recomienda la cuantificacin de HBA1C al menos 2 veces al
ao.
80
PROCEDIMIENTO (NycoCard)
Fundamento: los eritrocitos se lisan al ponerse en contacto con una solucin amortiguada de
glicinamida que contiene tambin un detergente y cido brico conjugado con un colorante. La
solucin produce que la hemoglobina liberada se precipite y en esas condiciones la hemoglobina
glicada HbA1C se une al conjugado de cido brico en forma especfica. Posteriormente se
transfiere una alcuota de la solucin a una membrana porosa que retiene las hemoglobinas libre y
glicada y filtra el conjugado de cido brico, se lava el precipitado pare eliminar el conjugado de
cido brico residual que no se uni y se cuantifica con un lector especial la hemoglobina glicada.
1.- Aadir 5 L de sangre al tubo de prueba con reactivo (R1)

2.- Mezclar bien
3.- Incubar por 2 minutos
4.- Mezclar otra vez
5.- Aplicar 25L de la mezcla de reaccin al centro de la membrana
6.- Esperar de 15-20 segundos a que filtre
7.- Aadir 25L de solucin de lavado (R2)
8.- Esperar 10 segundos a que filtre
9.- Leer el resultado usando el lector de NycoCard Reader II, colocando el lpiz sobre la
membrana y bajando el capuchn del mismo
4.5-6.3%
BIBLIOGRAFA
Bunn, HF, Haney, DN, Gabbay, KH and Gallop, PM. (1975). Further identification of the nature and
linkage of the carbohydrate in Hemoglobin A1C. Biochem Biophys Res Commun 67: 103-109
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81
Mathur, R. (2009) Hemoglobin A1 test.
http://www.medicinenet.com/hemoglobin_a1c_test/index.htm
82
EXAMEN GENERAL DE ORINA
OBJETIVOS
1. El alumno realizar el anlisis general de una muestra de orina
2. El alumno explicar la relevancia clnica del examen general de orina
GENERALIDADES
La orina es el resultado de la ultrafiltracin del plasma sanguneo que tiene lugar en los glomrulos
y de una serie de procesos de reabsorcin y secrecin que ocurren a lo largo del tbulo
contorneado proximal, asa de Henle, tbulo contorneado distal y tbulo colector. La orina
contiene una importante cantidad de sustancias que deben ser excretadas para mantener el
contexto homeosttico en el medio interno.
MATERIAL
1. Tubos de 13 X 100 mm
2. Porta y cubreobjetos
3. Microscopio
4. Pipeta graduada de 10 mL
5. Tiras reactivas
6. Muestra de orina
7. Centrfuga clnica
Obtencin de la muestra. En condiciones ideales la obtencin de la muestra de orina debe

hacerse como sigue: se lavan los genitales. En el hombre se limpia bien el glande y el meato
urinario. En la mujer deben separarse los labios vaginales para lavar adecuadamente el orificio
uretral con movimientos de adelante hacia atrs. Al terminar el lavado, debe secarse con una
toalla limpia.
Una vez realizada la limpieza, se colecta la primera orina de la maana en un recipiente limpio,
seco y de ser posible estril. Para ello se inicia la miccin, desechando la primera fraccin. La
segunda fraccin se colecta en el recipiente y la tercera fraccin se desecha. Por su grado de
concentracin, en la primera orina de la maana es ms probable detectar las anomalas que
pudieran encontrarse en su composicin. En caso de que no se tenga disponible la primera orina
83
de la maana, se recomienda esperar al menos 4 horas desde la ltima miccin para colectar una
muestra til.
EI examen general de orina (EGO) se ha practicado con fines diagnsticos durante siglos y
probablemente es el ms antiguo de los procedimientos de laboratorio utilizados en Medicina.
EI estado nutricional del paciente, el estado de sus procesos metablicos y la capacidad renal para
manejar selectivamente las sustancias que recibe, constituyen los tres factores principales que
determinan la composicin de la orina. El EGO se compone de tres partes: identificacin de las
caractersticas macroscpicas de la orina, su anlisis bioqumico y el anlisis microscpico del
sedimento obtenido por centrifugacin de una alcuota.
CARACTERSTICAS MACROSCPICAS DE LA ORINA. Las caractersticas macroscpicas normales

que se analizan en la orina son el color y el aspecto
Color
El color que comnmente tiene la orina es amarillo pajizo. Dependiendo del grado de
concentracin, la orina puede ser clara y transparente (diluida) o amarilla oscura (concentrada).
Algunos medicamentos, colorantes o pigmentos de los alimentos pueden modificar su coloracin.
En contextos patolgicos, la coloracin de la orina puede orientar a ciertas causas:
1. El color rojo puede significar presencia de eritrocitos, hemoglobina o mioglobina
2. El color amarillo oscuro puede significar orina muy concentrada
3. El color mbar puede indicar abundante bilirrubina directa en la orina
4. El color verde puede indicar infeccin por Pseudomonas aeruginosa
5. La ausencia de color puede significar poliuria (diabetes mellitus o diabetes inspida)
Aspecto
Normalmente la orina es cristalina. Puede presentar turbidez debido a la presencia de cantidades
anormales de cristales, leucocitos, eritrocitos, bacterias, grasa o clulas de descamacin. La
abundancia de algunas de estas estructuras puede provocar la presencia de un sedimento en la
muestra, que puede ser escaso, abundante o muy abundante. La presencia de espuma en la
superficie de la muestra indica la presencia de proteinuria importante.
ANLISIS BIOQUMICO. Diversos parmetros de importancia pueden analizarse a travs de tiras

reactivas (Combur 10 test). Una tira reactiva es un trozo de material plastificado que contiene
84
zonas discretas impregnadas con reactivos qumicos que al contacto con la orina pueden detectar
la presencia de una serie de compuestos relevantes relacionados con estados patolgicos del
paciente. La tira reactiva se sumerge en una muestra de orina colocada en un tubo de 13x100.
Despus de unos segundos, cuando ya no se observa la liberacin de burbujas, se saca la tira lo
ms seca posible. La lectura se hace por comparacin entre la tira humedecida con la orina y un
patrn de colores que aparece en el envase de las tiras.
Las tiras reactivas son instrumentos impregnados con reactivos qumicos que permiten la deteccin de sustancias
importantes en la orina. La tira se introduce en una alcuota de orina colocada en un tubo de ensayo y posteriormente se
interpreta comparando con escalas de color que se encuentran en el envase de las tiras.
Parmetros que se analizan mediante tiras reactivas y su resultado normal
Densidad 1.005 1.030 Glucosa negativo

pH 4.5 8.0 Cuerpos cetnicos negativo
Leucocitos negativo Urobilingeno negativo
Nitritos negativo Bilirrubina negativo
Protenas negativo Sangre oculta negativo
85
Interpretacin de los colores obtenidos en una tira reactiva por comparacin con la escala de colores
Densidad. La densidad de la orina est influida por la cantidad de solutos que contiene en
solucin, guardando una relacin con su osmolalidad. La densidad normal de la orina se debe al
grado de concentracin que produce la actividad renal en la orina. La disminucin de la densidad
por debajo de la referencia (hipostenuria) constituye un signo que puede estar asociado con
diabetes inspida central o nefrognica, glomerulonefritis, pielonefritis, insuficiencia renal,
situaciones en que no se concentra la orina en forma normal, pudiendo deberse tambin a la
ingestin excesiva de agua. El incremento de la densidad puede estar relacionado con algunas
patologas, como insuficiencia cardiaca congestiva, deshidratacin, sndrome nefrtico y diabetes
mellitus.
pH. El pH normal de la orina se encuentra entre 4.5 y 8. Valores por debajo de este intervalo se
relacionan con acidosis metablica (p. ej. cetoacidosis diabtica, acidosis lctica), diarrea crnica,
dieta hiperprotenica (exceso de carne), insuficiencia respiratoria crnica o infecciones de las vas
urinarias por E. coli. Los valores de pH por arriba de la referencia pueden estar relacionados con
acidosis tubular renal, alcalosis metablica (p. ej. por vmitos, aspiracin nasogstrica, uso de
diurticos), alcalosis respiratoria o infecciones de vas urinarias por bacterias que producen
ureasa, como Proteus (la ureasa hidroliza la urea y libera amonaco, que alcaliniza el medio).
Protenas. La cantidad normal de protenas en la orina es muy baja y no producen reaccin
positiva con la tira reactiva. De acuerdo con la Asociacin Americana para la Diabetes, la cantidad
86
normal de albmina en orina de 24 horas es inferior a 30 mg, mientras que la cantidad de protena
en orina de 24 h es inferior a 150 mg. Cuando la tira reactiva produce resultado positivo, la
cantidad de albmina ya est francamente por arriba de lo normal. De hecho la microalbuminuria
(30 a 300 mg/24 h) no la detecta la tira reactiva.
La proteinuria franca puede estar relacionada con deterioro de la funcin renal, elevacin de la
presin arterial y enfermedades sistmicas (fiebre, artralgias, etc.). En el caso de las afecciones
renales el origen de la proteinuria puede ser glomerular o tubular. En el caso de las enfermedades
glomerulares pueden ser primarias (glomerulonefritis membranoproliferativa, glomerulonefritis
membranosa, etc) o secundarias a infecciones (postesptreptoccica, hepatitis B, mononucleosis
infecciosa, etc), a problemas vasculares (trombosis de la vena cava inferior, de la vena renal o
estenosis de la arteria renal), a problemas autoinmunes (lupus eritematoso sistmico, artritis
reumatoide, etc), a problemas neoplsicos, a enfermedades metablicas (diabetes mellitus), etc.
En las afecciones tubulares las protenas que se excretan son de bajo peso molecular, que
normalmente se reabsorben por los tbulos despus de haber filtrado por los glomrulos, como
las microglobulinas y , protena fijadora de retinol, lisozima, etc. La causa puede ser adquirida,
tpicamente por uso de frmacos nefrotxicos como los aminoglucsidos, cefalosporinas, litio, etc,
o intoxicaciones con metales pesados (plomo, cadmio, mercurio), gentica, como el sndrome de
Fanconi, enfermedad de Wilson, cistinosis, etc., o por elevacin de protenas plasmticas filtrables,
como la protena de Bence-Jones (mieloma mltiple), mioglobina, etc.
Glucosa. Normalmente la glucosa no aparece en la orina en cantidad significativa (los valores
normales estn entre 0 y 15 mg/dL) pues la capacidad de reabsorcin tubular permite la
reincorporacin de toda la glucosa tubular al medio interno. Cuando se rebasa el umbral renal de
glucosa (comnmente 180 mg/dL de glucosa en plasma) la glucosa empieza a filtrarse hacia la
orina. El hallazgo independiente de glucosuria debe llevar al estudio formal de la glucemia pues
por s misma no tiene significado diagnstico. La presencia de otros azcares, como la galactosa, la
fructosa y las pentosas pueden dar positiva la prueba de glucosa con la tira reactiva.
Cuerpos cetnicos. Son la acetona, el cido acetoactico y el cido -hidroxibutrico. Su presencia
en la orina se relaciona comnmente con cetoacidosis diabtica o con ayuno prolongado. En estas
situaciones se activa la liplisis en el tejido adiposo, el cual libera cantidades muy
importantes de cidos grasos de cadena larga que en buena medida convierte el hgado en
cuerpos cetnicos. Tambin puede aparecer cetonuria en personas con dietas altas en
87
grasa y bajas en carbohidratos y protenas, y en casos con demanda energtica aumentada,
como ocurre en el hipertiroidismo, la fiebre y el embarazo.
Nitritos. La mayora de los grmenes patgenos que pueden encontrarse en la orina reducen el
nitrato (presente normalmente en la orina) a nitrito, pudiendo determinarse de esta manera
indirecta la presencia de grmenes como E. coli, Proteus, Klebsiella, Aerobacter, Salmonellas y
Citrobacter. Una prueba negativa de nitrito no implica ausencia de infeccin urinaria pues no todas
las bacterias capaces de producir estas infecciones reducen el nitrato.
Bilirrubina. La bilirrubina libre o no conjugada es incapaz de atravesar la barrera glomerular del
rin puesto que no se encuentra libre sino asociada con albmina. Cuando la bilirrubina libre se
conjuga en el hgado con glucuronato, se hace soluble en agua y entonces s es capaz de atravesar
el glomrulo puesto que se desplaza por s misma en la sangre. La bilirrubina conjugada
normalmente se excreta por la bilis, de manera que la orina normal no contiene bilirrubina. La
bilirrubina conjugada se elimina por la orina en cuadros de ictericia obstructiva (litiasis, neoplasias)
o hepatocelular (cirrosis avanzada, hepatitis agudas virales o txicas), produciendo el signo de
coluria (orina oscura). La bilirrubina puede aparecer en la orina en la hepatitis antes de que se
manifieste ictericia. La positividad de bilirrubina en orina puede ser un indicio precoz de afeccin
heptica.
Urobilingeno. El urobilingeno se produce en el intestino a partir de la bilirrubina y se reabsorbe
parcialmente. Parte del urobilingeno circulante sale por la orina (0 a 4 mg/da) y no es detectado
por la tira reactiva. Cuando la tira reactiva da resultado positivo puede indicar afeccin heptica,
como hepatitis viral, cirrosis o intoxicacin, o bien algn problema que produce aumento de la
hemlisis (anemia hemoltica). La prueba negativa en pacientes con bilirrubina en la orina o con
diagnstico de disfuncin heptica puede significar obstruccin heptica o biliar.
Leucocitos. La mayora de los leucocitos tienen una enzima que se llama leucocito esterasa, y es la
enzima que detecta la tira reactiva. Normalmente la pequea cantidad de leucocitos en la orina no
produce reaccin positiva en la tira. Cuando llega a dar positiva (leucocituria) indica la presencia
de un proceso inflamatorio en las vas urinarias, cuya causa ms comn es una infeccin vejiga o
de riones.
Sangre oculta. La prueba detecta la presencia de hemoglobina, protena normalmente contenida
en los eritrocitos. La prueba positiva con la tira reactiva indica la presencia de hematuria. Esto
puede deberse a la presencia de un proceso infeccioso, comnmente de la vejiga. El estudio
88
microscpico congruente presentar eritrocitos por arriba de lo normal en el sedimento. Otras
causas posibles son la uretritis, la prostatitis, hiperplasia prosttica benigna, clculos renales o en
la vejiga, glomerulonefritis, etc. Si la prueba con la tira es positiva pero no se observa un nmero
aumentado de eritrocitos en la orina, puede implicar hemoglobinuria por actividad hemoltica, o
buen mioglobinuria por alguna afeccin muscular.
EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO.

EI sedimento se obtiene de acuerdo con el siguiente procedimiento:
1. Se homogeneiza la orina en su contenedor original
2. Transferir unos 8 mL de orina a un tubo de 13x100
3. Centrifugar a 1800 rpm durante 5-10 min
4. Decantar el sobrenadante
5. Resuspender el sedimento en el lquido residual por agitacin suave manual
6. Transferir 50 L del sedimento a un portaobjetos
7. Aadir 5 L de colorante Sternheimer-Malbin
8. Se homogeneiza la gota con el borde de un cubreobjetos
9. Se cubre la gota con un cubreobjetos de 22x22 evitando la formacin de burbujas
10. Observar a 10x e interpretar a 40x
Eritrocitos. Normalmente se encuentran pocos eritrocitos en la orina, 0 a 5 por campo.

Cuando aparecen cantidades grandes es signo de hematuria, teniendo siempre presente en el
caso de las mujeres la posibilidad de que se trate de una contaminacin con sangre menstrual.
Aspecto de abundantes eritrocitos en el sedimento urinario
89
Leucocitos. Su tamao es mayor al de los eritrocitos. Normalmente se observan 5 a 15
leucocitos por campo. La presencia de mayores cantidades se conoce como leucocituria o
piuria, y puede estar relacionada con infeccin del tracto urinario, prostatitis,
glomerulonefritis, tumores o inflamacin de rganos vecinos (p. ej. apendicitis).
Eritrocito
Leucocito
Sedimento de un paciente con infeccin del tracto urinario, con presencia de leucocitos, eritrocitos y clulas
epiteliales
Clulas epiteliales. Dependiendo de su origen, pueden ser escamosas (tracto urinario distal o
contaminacin vaginal), transicionales (vejiga o pelvis renal) o tubulares (de los tbulos
renales).
Aspecto de las clulas escamosas en el sedimento urinario
90
Aspecto de las clulas transicionales en el sedimento urinario
Aspecto de las clulas tubulares en el sedimento urinario
Bacterias y hongos. Estos microorganismos no se hallan presentes en la orina normal. Cuando

se observan puede tratarse de una contaminacin o de una infeccin. La presencia de
bacterias sin leucocituria corresponde a bacteriruria asintomtica. Cuando tambin aparece
leucocituria, el cuadro corresponde a un proceso infeccioso. En ms de 85 % de los casos las
infecciones del tracto urinario se deben a bacterias Gram negativas, como E. coli, K.
pneumoniae o Proteus. De los hongos, el agente infeccioso ms frecuente es Candida albicans.
Imagen del sedimento urinario de un paciente con infeccin bacteriana. Se observan abundantes bacterias y gran
cantidad de leucocitos
91
Sedimento urinario que muestra la presencia de Candida albicans, observndose estructuras largas (hifas) y las
conidias, esporas que se liberan a partir de las hifas
Cilindros. Son estructuras que se forman en los tbulos renales distales y colectores. Se
forman por precipitacin de la mucoprotena de Tamm-Horsfall, que secretan las clulas
tubulares, aunque pueden contener tambin albmina cuando existe proteinuria. Los cilindros
hialinos son los que se observan con mayor frecuencia, no contienen otros componentes
adems de la mucoprotena, son algo translcidos, generalmente con lados paralelos y
extremos sin punta. Se observan incluso en personas sanas pero aparecen en mayor cantidad
por efecto de la deshidratacin o el uso de diurticos.
Cilindro hialino
Aspecto de los cilindros hialinos
Los cilindros granulares resultas de la degeneracin de las clulas de cilindros celulares o bien
de la agregacin de protenas plasmticas o cadenas ligeras de anticuerpos que filtraron a
travs de los glomrulos. La textura aparente de estos cilindros vara entre granulacin fina y
granulacin spera. Pueden encontrarse despus de realizar ejercicio fsico extenuante, en las
enfermedades renales crnicas y en la necrosis tubular aguda.
92
Aspecto de los cilindros granulares
Cuando existe patologa renal de larga duracin (insuficiencia renal crnica), el flujo urinario es
muy lento y la protena que secretan los tbulos se precipita en la luz tubular formando
cilindros muy compactos, ms grandes y anchos que los hialinos pues en esas condiciones los
tbulos aumentan de calibre, son quebradizos y pueden verse fracturados. Se denominan
cilindros creos.
Aspecto de los cilindros creos
Los cilindros grasos se forman a partir de cilindros que contienen clulas epiteliales ricas en
lpidos. Su degeneracin resulta en la aparicin de gotillas lipdicas en la matriz protenica del
cilindro. Se observan en casos de degeneracin tubular, sndrome nefrtico, etc.
Aspecto de los cilindros grasos
93
Los cilindros eritrocitarios son cilindros cubiertos por eritrocitos. Son indicativos de
glomerulonefritis, con fuga de eritrocitos por la membrana glomerular o de dao tubular
severo.
Aspecto de los cilindros eritrocitarios
Los cilindros leucocitarios son cilindros que contienen leucocitos en su interior o en la

superficie, usualmente neutrfilos. Aparecen tpicamente en la pielonefritis aguda, aunque
tambin pueden observarse en casos de glomerulonefritis y otras afecciones renales.
Aspecto de los cilindros leucocitarios
Los cilindros celulares son cilindros cubiertos por clulas epiteliales renales. Se observan en
casos como la necrosis tubular renal, rechazo de trasplante renal, etc.
Aspecto de los cilindros celulares
94
Cristales. La orina contiene disueltas una considerable variedad de sustancias. Cuando la
concentracin de ellas o las condiciones de acidez o alcalinidad lo propician, las sustancias
pueden precipitarse y entonces aparecen los cristales. La presencia de cristales en la orina se
denomina cristaluria, y puede aparecer en personas sanas pero tambin puede estar
relacionada con determinadas patologas. Normalmente pueden encontrarse cristales de cido
rico, oxalato de calcio, cido hiprico, fosfato de calcio, fosfato triple, carbonato de calcio y
biurato de amonio. En algunos casos la presencia de estos cristales puede estar relacionada
con algunas patologas. Los cristales que solo se observan en situaciones patolgicas son los
que estn formados por bilirrubina, colesterol, cistena, leucina, tirosina, sulfas, etc.
Cristales de cido rico. Tienen formas y tamaos variables, aparecen en la orina cida y tiene
color ambarino. Su forma puede ser romboide, de paralelogramo o en roseta. Se observan en
personas sanas pero pueden ser indicio de nefropata aguda por cido rico o de nefrolitiasis
por urato.
Aspecto de los cristales de cido rico
Cristales de oxalato de calcio. Pueden encontrarse en la orina independientemente de su pH.

Son incoloros y presentan dos formas llamadas monohidrato y dihidrato. La forma
monohidrato se describe como cerca de estacas o como pesas mientras que el dihidrato
tiene forma octadrica. En la intoxicacin por etilenglicol se observa la forma de pesas.
95
Aspecto de los cristales de oxalato de calcio
Cristales de cido hiprico. Se encuentran en la orina cida, neutra o ligeramente alcalina.

Tiene forma prismtica o plana o en agujas. A menudo se observan conglomerados de cristales
Aspecto de los cristales de cido hiprico
Cristales de fosfato triple. Estn formados por fosfatos de magnesio y amonio, se observan en
la orina alcalina y son rectangulares, se asemejan a la tapa de la forma clsica de los atades.
Su presencia puede estar relacionada con infecciones del tracto urinario debidas a bacterias
que producen ureasa.
Aspecto de los cristales de fosfato triple
96
Cristales de carbonato de calcio. Son cristales con forma de pesas o de esferas, varan entre
incoloros y amarillos, presentan estras radiales y se observan en orinas alcalinas. Usualmente
son cristales grandes que se pueden observar con poco aumento.
Aspecto de los cristales de carbonato de calcio
Cristales de fosfato de calcio. Son cristales incoloros que tienen forma de agujas sin punta, de
prismas o de rosetas. Se encuentran en orinas neutras o alcalinas.
Aspecto de los cristales de fosfato de calcio
Cristales de urato (o biurato) de amonio. Generalmente se observan como cuerpos esfricos

cafs o caf amarillos con protrusiones irregulares. Aparecen en orinas alcalinas.
97
Aspecto de los cristales de urato o biurato de amonio
Cristales amorfos. Pueden ser cristales de uratos sin forma definida que se encuentran en la
orina cida. Forman grnulos en el sedimento urinario. Al microscopio se observan amarillos
pero el conjunto puede observase rosa. Tambin se encuentran fosfatos amorfos, forman
grnulos incoloros y se observan en orinas alcalinas.
Aspecto de los cristales de uratos amorfos
Cristales de bilirrubina. Se forman de bilirrubina conjugada cuando abunda en la circulacin y se

filtra por los glomrulos. Los cristales son tipo aguja formando grnulos de color amarillo mbar.
Frecuentemente se observan unidas a clulas y se presentan en algunas afecciones hepticas.
98
Aspecto de los cristales de bilirrubina
Cristales de colesterol. Son placas rectangulares incoloras, con muescas en algunas esquinas. E
encuentran en orinas cidas y su presencia se relaciona con el sndrome nefrtico.
Aspecto de los cristales de colesterol
Cristales de cistina. Son placas planas incoloras con forma caracterstica hexagonal y lados iguales
o desiguales. Se observan en la orina cida. Su presencia se relaciona con una alteracin
genticamente determinada en la reabsorcin tubular, llamada cistinuria. El exceso de cistina
puede producir cristales y clculos que se alojan en los riones, en los ureteros o en la vejiga.
Aspecto de los cristales de cistina
99
Cristales de leucina. Son formas esfricas caf amarillentas con crculos concntricos y estras
radiales que pueden encontrarse en orinas cidas o neutras. Los cristales de leucina se pueden
encontrar en la orina de pacientes con afecciones hepticas en que se altera el metabolismo de los
aminocidos.
Aspecto de los cristales de leucina
Cristales de tirosina. Se observan como agujas finas sin color o amarillas en orinas cidas o
neutras. Pueden encontrarse en la orina de pacientes con tirosinemia (enfermedad gentica en
que est deficiente alguna de las reacciones del catabolismo de la tirosina y se acumulan en los
tejidos productos alternativos con accin txica, pudiendo producir insuficiencia heptica y renal)
o pacientes con enfermedades hepticas que alteran el metabolismo de los aminocidos.
Aspecto de los cristales de tirosina
Cristales de sulfonamidas. Presentan forma de agujas planas, rondanas o esferoides. Su presencia

indica que el paciente ha ingerido sulfonamidas, pero puede estar relacionada tambin con la
presencia de clculos renales.
100
Aspecto de los cristales de sulfonamidas
Otros componentes. Las levaduras y los parsitos en el sedimento urinario denotan infeccin de
las vas genitourinarias. EI parsito ms comn en el sedimento es Trichomonas vaginalis, un
protozoo flagelado que suele ocasionar vaginitis, uretritis y prostatovesiculitis (inflamacin de la
prstata y vesculas seminales).
Aspecto de Trichomonas vaginalis
BIBLIOGRAFA
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102
CREATININA SRICA
OBJETIVOS
1. El alumno cuantificar la concentracin de creatinina en una persona sana.
2. El alumno explicar la relevancia clnica de la cuantificacin de creatinina srica
GENERALIDADES
La creatinina es una sustancia de bajo peso molecular que filtra libremente por el glomrulo. Se
forma en el msculo a partir de la fosfocreatina, la cual reacciona con ADP para formar ATP en el
microambiente de las sarcmeras. Entre 1 y 2% de la fosfocreatina se transforma cada da en
creatinina + fosfato sin que en ello participe ninguna enzima. La creatinina, que es un producto de
desecho, pasa a la sangre y se excreta por la va renal. La cantidad de creatinina que se produce
cada da, y por lo tanto su concentracin sangunea, es muy constante y depende de la masa
muscular de cada persona, sin ser influida por el contenido protenico de las dietas.
En la prctica, la determinacin de la concentracin plasmtica de creatinina es la prueba simple
ms utilizada para valorar la funcin glomerular. Como se mencion antes, la concentracin de
creatinina en el plasma se encuentra relacionada con la masa muscular, por lo cual, un mismo
valor puede tener significados diferentes en cuanto a la funcin glomerular en personas con
diferente masa muscular. Debe tenerse cuidado al interpretar los valores encontrados de
creatinina plasmtica pues la velocidad de filtracin glomerular (VFG) puede estar muy disminuida
sin que la creatinina plasmtica salga del intervalo normal.
De esta manera, una concentracin de creatinina plasmtica dentro del intervalo normal no
significa necesariamente una funcin glomerular normal. Sin embargo, un valor por arriba del
intervalo normal generalmente indica alteracin de la funcin renal. Si un paciente registra un
incremento de la concentracin srica de creatinina respecto a determinaciones previas de l
mismo, puede significar alteracin de la VFG, aunque ninguno de los valores se halle fuera del
intervalo normal.
IMPORTANCIA CLNICA
En las siguientes condiciones puede encontrarse aumentada la concentracin srica de creatinina:
Uremia prerrenal, con aumentos menos intensos que los de la urea
Insuficiencia renal parenquimatosa o posrenal, con aumentos paralelos a los de la urea
Traumatismos masivos, enfermedades musculares degenerativas y rabdomiolisis
103
Pueden encontrarse valores de creatinina menores a la referencia en los siguientes casos:
Disminucin de la masa muscular, por enfermedad debilitante, fase terminal de afecciones
musculares degenerativas, edad avanzada
Enfermedad heptica grave, debido a que el hgado es un rgano que produce creatina a partir de
algunos aminocidos.
Embarazo pues aumenta la VFG
Cuantificacin de creatinina
Fundamento: AI reaccionar la creatinina con picrato alcalino se produce un complejo de color
anaranjado, en cantidad directamente proporcional a la de creatinina. Adaptando la reaccin a un
procedimiento cintico se logra un mayor grado de especificidad debido a que la creatinina
reacciona con el picrato alcalino con mayor rapidez que otras sustancias que tambin son
reactivas.
De esta manera, midiendo el incremento de color (absorbancia) en un perodo breve de tiempo al
iniciar la reaccin, se estar valorando principalmente la creatinina, con poca influencia de los
dems cromgenos inespecficos.
Pipetear en cubetas para espectrofotmetro:
Patrn Muestra
Patrn 100 L ---
Suero --- 100 L
Reactivo de trabajo 1.0 mL 1.0 mL
Se trabaja la muestra y el patrn uno a la vez. Mezclar y a los 30
segundos medir la absorbancia A1 de la muestra y del patrn a 492 nm
frente al aire. Exactamente 2 minutos despus, leer la absorbancia A2
de la muestra y del patrn.
CLCULO
A muestra = A2 A1 de la muestra
A patrn = A2 A1 del patrn
(A muestra/A patrn) x [patrn] = ___ mg/dL Creatinina
104
SUERO
HOMBRES 0.5-1.3 mg/dL
MUJERES 0.3 -1.1 mg/dL
BIBLIOGRAFA
Livingstone, 2013
105
DEPURACIN DE CREATININA Y ESTIMACIN DE LA VFG
OBJETIVOS
1. El alumno determinar la depuracin de creatinina en una persona sana.
2. El alumno explicar la relevancia clnica de la depuracin de creatinina
3. El alumno estimar la velocidad de filtracin glomerular de una persona utilizando una
frmula con base en la concentracin srica de creatinina
GENERALIDADES
El encontrar un valor de creatinina srica dentro del intervalo de referencia no implica
necesariamente que la filtracin glomerular sea normal. La velocidad de filtracin glomerular
(VFG) es un importante parmetro de la funcin renal y consiste en el volumen de plasma que
pasa en determinado tiempo a travs de los glomrulos renales. La VFG depende de tres factores:
1. la presin neta que se ejerce sobre la membrana glomerular, 2. el estado fsico de la membrana,
y 3. el rea de la membrana glomerular, que a su vez depende del nmero de glomrulos
funcionales. As, en ausencia de alteraciones significativas en la presin sangunea y en la
estructura de la membrana glomerular, la VFG es proporcional al nmero de glomrulos
funcionales.
Para valorar la VFG se utiliza el procedimiento conocido como depuracin o se estima a partir de la
concentracin de creatinina srica mediante ciertas frmulas.
Depuracin
La depuracin de una sustancia presente en el plasma sanguneo es una medida de la eficiencia
con la que los riones la excretan y suele definirse como el volumen plasmtico que se depura por
completo de tal sustancia cada minuto por efecto de la actividad renal. Evidentemente, la
depuracin es un dato calculado, ya que la funcin renal disminuye gradualmente la concentracin
de los solutos en la totalidad del volumen plasmtico. Por ejemplo, si una sustancia se encuentra
en el plasma a una concentracin de 7 mg/mL y en la orina producida durante un minuto aparecen
14 mg, la depuracin ser de 2 mL/min.
La depuracin renal de una sustancia es directamente proporcional a la concentracin de dicha
sustancia en la orina (mientras mayor concentracin tenga la orina significa que ms se depura) e
inversamente proporcional a su concentracin en la sangre (mientras ms concentracin
plasmtica, menos se depura).
La depuracin se plantea matemticamente mediante la siguiente frmula:
106
Cx = UxV/Px
Donde Cx es la depuracin de la sustancia X (se acostumbra utilizar la letra C debido a que el

trmino depuracin corresponde en ingls a clearance), Ux es la concentracin de X en la orina
colectada (U por urine, orina en ingls), Px es la concentracin de X en el plasma y V es el volumen
de orina que se produce por minuto (mL/min). Este ltimo dato se obtiene a partir del volumen
total de orina colectado en 24 h. Aplicando a Ux y Px las mismas unidades (mg/dL, g/L, etc.), la
depuracin adquiere las unidades de V, es decir mL/min. Por ejemplo, si Ux es 70 mg/dL, Px es 1
mg/dL y V es 1.4 mL/min, la depuracin renal sera igual a 98 mL/min.
La creatinina satisface en general las condiciones necesarias para medir la depuracin renal,
aunque el hecho de que los tbulos proximales la secretan en cierta medida, hace que la
depuracin sobrevalore la velocidad de filtracin glomerular por un 10 o 20%.
La funcin renal se halla influida por el tamao del organismo, y se ha encontrado que el resultado
de la depuracin es ms fidedigno si se considera la superficie corporal, en particular cuando el
paciente es muy delgado o tiene sobrepeso u obesidad. El promedio de superficie corporal para
los adultos sanos se ha estimado en 1.73 m2, de manera que el factor de la superficie corporal se
incluye en la frmula de depuracin multiplicando por el cociente 1.73/superficie corporal del
paciente:
Cx = (UxV/Px) x 1.73/SC
La superficie corporal se calcula con base en el peso y la talla, de acuerdo con la frmula de
DuBois y DuBois:
SC = (W0.425 x H0.725) x 0.007184
Donde W es la masa corporal en kilogramos, H la talla en centmetros y SC la superficie corporal en
metros cuadrados.
A pesar de las ventajas que en principio tiene la depuracin de creatinina sobre la determinacin
srica de creatinina, se trata de un procedimiento que, por requerir la recoleccin de orina de 24
h, no es fcil de llevar a cabo con toda confiabilidad pues los pacientes no siempre recolectan
todas las emisiones de orina.
Estimacin de la VFG
En consideracin de las dificultades tcnicas que impone la prueba de depuracin de creatinina, se
han encontrado frmulas que permiten la estimacin de la velocidad de filtracin glomerular a
107
partir de la concentracin srica de creatinina. La primera que se propuso es la frmula de
Cockcroft-Gault:
VFG = [(140 edad) x PC x 0.85 si es mujer]/[72 x CrP]
Donde PC es el peso corporal en kilogramos y CrP es la concentracin de creatinina en el plasma,
en mg/dL.
La modificacin de la frmula de Cockcroft-Gault por la superficie corporal produce resultados
ms cercanos a lo que se considera el estndar de oro para la medicin de la funcin glomerular,
que es la depuracin de inulina.
VFG = {[(140 edad) x PC x 0.85 si es mujer]/[72 x CrP]} x 1.73/SC
La frmula conocida como MDRD (propuesta por el Modification of Diet in Renal Disease Study) se
ha validado extensamente en las poblaciones caucsica y afroamericana entre 18 y 70 aos de
edad con afeccin de la funcin renal y funciona bien para pacientes con cualquiera de las causas
comunes de dao renal:
VFG = 175 (SCR)-1.154 (Edad)-0.203 (0.742 si es mujer) (1.212 si es afroamericano)
donde SCR es la concentracin srica de creatinina y la VFG se obtiene en mL/min/1.73 m2. Como
puede observarse, la frmula no incluye datos de peso corporal ni talla puesto que el resultado
est estandarizado a una superficie corporal de 1.73 m2, que se acepta como la superficie corporal
promedio.
La confiabilidad en la estimacin de la VFG a partir de la concentracin srica de creatinina con el
uso de frmulas depende de que la cuantificacin de dicha concentracin est calibrada con el
sistema IDMS (Isotope Dilution Mass Spectrometry), que permite la reduccin de la variabilidad
entre los laboratorios.
La estimacin de la VFG a partir de la [creatinina] en el suero solamente es confiable en pacientes
con concentracin estable de creatinina. No se recomienda en individuos que no cubren este
requisito, como mujeres embarazadas, pacientes con comorbilidades serias y pacientes
hospitalizados, en especial si tienen insuficiencia renal aguda.
Tampoco se recomienda en personas amputadas, parapljicas ni en fisicoculturistas, personas
obesas, pacientes con enfermedades en que se consume la masa muscular, pacientes desnutridos,
personas vegetarianas o que ingieren poca carne, ni en personas que ingieren suplementos con
creatina.
108
IMPORTANCIA CLNICA
La depuracin de creatinina o la estimacin de la VFG a partir de la [creatinina] srica se indican

cuando es importante saber la eficiencia del funcionamiento glomerular, por ejemplo en casos en
que el estudio rutinario de creatinina srica tiene valores altos, o si aparece protena en la orina
(orina con espuma), si aparece edema, en especial alrededor de los ojos, en la cara, en las
muecas o en los tobillos, presin arterial elevada o reduccin en la cantidad de orina
producida.
La disminucin de la depuracin de creatinina puede estar relacionada con reduccin del flujo
sanguneo renal, insuficiencia cardiaca congestiva o con el uso de diurticos.
La prueba de depuracin es til para la valoracin de donadores potenciales de rin, para el
ajuste de dosis de medicamentos potencialmente txicos que se eliminan por va renal, como
ocurre con los aminoglucsidos (antibiticos) y la digoxina (glucsido cardiotnico) entre muchos
otros, y para determinar cundo es oportuno iniciar la dilisis en pacientes con insuficiencia renal
crnica, lo cual est indicado generalmente cuando la filtracin es <15 mL/min.
PROCEDIMIENTO
1. Recolectar orina de 24 horas de acuerdo con lo siguiente: vaciar la vejiga al levantarse por
la maana (p. ej. 8:00 AM) y desechar la orina. Recolectar en un recipiente apropiado toda
la orina que se produzca durante el da y la noche. A la misma hora del siguiente da,
volver a vaciar la vejiga pero esta vez aadindola al recipiente. Llevar la orina al
laboratorio lo ms pronto posible.
2. Medir el peso corporal del paciente y su talla.
3. Tomar una muestra de sangre del paciente al recibir la orina. Dejar coagular y separar el
suero.
4. Medir con la mayor exactitud el volumen de orina de 24 h.
5. Cuantificar la creatinina en la muestra de suero y en la orina.
6. Calcular la depuracin de creatinina utilizando la frmula Cx = (UxV/Px) x 1.73/SC
NOTA. La concentracin de creatinina en la orina se practica de la misma forma que la del

suero, excepto que como es mucho mayor, la orina debe diluirse 1:50. Una vez obtenida la
concentracin de creatinina en la dilucin, se multiplica por 50 para obtener la concentracin
en la orina.
109
VALORES DE REFERENCIA. En general se reconoce el siguiente intervalo:
80 130 mL/minuto/1.73 m2
ESTIMACIN DE LA VFG CON FRMULAS
Utilizando el resultado de la cuantificacin srica de creatinina, calcule la velocidad de

filtracin glomerular mediante la frmula de Cockcroft-Gault modificada para la superficie
corporal: VFG = {[(140 edad) x PC x 0.85 si es mujer]/[72 x CrP]} x 1.73/SC o con la frmula
MDRD: VFG = 175 (SCR)-1.154 (Edad)-0.203 (0.742 si es mujer) (1.212 si es afroamericano).
VALORES DE REFERENCIA.
Se presentan variaciones por edad, gnero y raza y no hay un consenso nico. Para la frmula
de Cockcroft-Gault en algunos laboratorios utilizan los valores normales de 7014
mL/min/1.73 m2 para los hombres y 6010 mL/min/1.73 m2 para las mujeres.
Para el caso de la frmula MDRD el National Kidney Disease Education Program recomienda
que los valores por arriba de 60 mL/min/1.73 m 2 simplemente se reporten as: 60
mL/min/1.73 m2 y no como un nmero exacto (debido en parte a la inexactitud de los
resultados obtenidos con frmulas). Para valores por debajo de 60 mL/min/1.73 m 2 la
recomendacin es reportar el valor entero ms prximo.
Sin embargo, muchos laboratorios reportan la cantidad precisa si est por arriba de 60
mL/min/1.73 m2.
Se considera en general que 60 mL/min/1.73 m 2 es el mnimo valor aceptable de VFG
estimada a partir de la [creatinina] srica. Por debajo de este valor se reconoce dao renal,
mayor mientras menor sea la VFG estimada.
BIBLIOGRAFA
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http://www-users.med.cornell.edu/~spon/picu/calc/bsacalc.htm
Cockcroft GW, Gault MH (1976). Prediction of creatinine clearance from serum creatinine.
Nephron 16: 31-41
110
Creatinine clearance. AACC. Lab Tests Online (2012):
https://labtestsonline.org/understanding/analytes/creatinine-clearance/tab/test/#what
Creatinine clearance. Joan and Sanford I. Weill Medical College, Cornell University (2010):
http://www-users.med.cornell.edu/~spon/picu/calc/crclcalc.htm
Estimacin filtrado glomerular (Cockcroft-Gault). Sociedad Andaluza de Medicina Interna y

Unidades Coronarias (2012):
http://www.samiuc.es/index.php/calculadores-medicos/calculadores-nefrologicos-y-medio-
interno/filtrado-glomerular-estimado-cockroft-gault.html
Estimating Glomerular Filtration Rate. National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney
Diseases, NIH (US) (2015):
https://www.niddk.nih.gov/health-information/health-communication-programs/nkdep/lab-
evaluation/gfr/estimating/Pages/estimating.aspx
Livingstone, 2013
Guyton, A. C. and J. E. Hall. Textbook of Medical Physiology, 10th edition, W. B. Saunders Company,
2000
Reporting Glomerular Filtration Rate. National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney
Diseases, NIH (US) (2015):
https://www.niddk.nih.gov/health-information/health-communication-programs/nkdep/lab-
evaluation/gfr/reporting/Pages/reporting.aspx
Rostoker G, Andrivet P, Pham I, Griuncelli M, Adnot S (2007). A modified Cockcroft-Gault formula

taking into account the body surface area gives a more accurate estimation of the glomerular
filtration rate. J Nephrol 20:576-585
111
112
HEMATOCRITO, HEMOGLOBINA Y CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar el hematocrito, la concentracin de hemoglobina y la
concentracin celular media de hemoglobina en una muestra de sangre
2. El alumno explicar la relevancia clnica del hematocrito, de la concentracin de

hemoglobina en sangre y de la concentracin celular media de hemoglobina
GENERALIDADES
EI hematocrito es un parmetro hematolgico fundamental que corresponde al volumen
porcentual que representa el paquete eritroctico en la sangre completa. En el hombre y la mujer
adultos los valores de referencia son 40 a 54% y 34 a 47%, respectivamente. En los recin nacidos
el hematocrito es relativamente muy alto (aproximadamente 56%), decreciendo gradualmente
hasta un valor cercano a 35% en el primer ao de vida. Posteriormente se eleva paulatinamente
durante la infancia hasta los valores sealados para el adulto. Debe tomarse en cuenta que el
hematocrito es un parmetro que vara en funcin de la altitud del lugar donde reside la persona,
de tal manera que a mayor altitud se registra mayor valor del hematocrito.
La hemoglobina es una protena intraeritrocitaria cuya principal funcin es el transporte de
oxgeno de los pulmones a los tejidos. La liberacin de oxgeno a partir de la oxihemoglobina es un
proceso influido por varios factores, como son la concentracin eritroctica de 2, 3-
bisfosfoglicerato, el pH y la concentracin de dixido de carbono del ambiente tisular. A mayor [2,
3 BPG], menor es la afinidad de la hemoglobina por el oxgeno; ocurre lo mismo al descender el pH
y al aumentar la pCO2.
En el proceso eritropoitico, la serie eritroblstica inicia con el proeritroblasto, que se divide
mitticamente para producir eritroblastos basfilos, que a su vez se dividen para producir
eritroblastos policromatfilos y stos a su vez se dividen para producir eritroblastos
ortocromticos, los cuales experimentan enucleacin para convertirse en reticulocitos y
finalmente stos maduran a eritrocitos.
La hemoglobina se empieza a sintetizar en los eritroblastos basfilos y termina en los reticulocitos.
La sntesis del grupo hemo ocurre en dichas clulas a partir de succinilCoA (intermediario del ciclo
de Krebs) y de glicina, generndose sucesivamente -aminolevulinato, porfobilingeno,
113
uroporfirinogno III, coproporfiringono III, protoporfiringeno IX, protoporfirina IX y hemo. Este
ltimo es un tetrapirrol asociado con un tomo de hierro II (Fe+2) central.
Cada grupo hemo se une a una cadena protenica o formndose luego la hemoglobina por la
asociacin de 4 cadenas, 2 de cada tipo, de tal manera que la molcula de hemoglobina contiene 4
grupos hemo y es capaz de portar 4 molculas de oxgeno simultneamente.
La oxihemoglobina aporta oxgeno suficiente a los tejidos para que se lleve a cabo la oxidacin de
los combustibles biolgicos, proceso normalmente acoplado a la produccin de molculas de alta
energa, fundamentalmente el ATP.
La concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM) se calcula dividiendo la
concentracin de hemoglobina (en g/dL) entre el hematocrito y multiplicando el resultado por
100. Como puede apreciarse, este clculo corresponde al % de hemoglobina en el paquete celular
rojo, es decir el nmero de gramos de hemoglobina que estaran presentes en 100 mL de paquete
eritrocitario y equivale al % de hemoglobina dentro de cada eritrocito. La CHCM normal es de
aproximadamente 35%. Se consideran hipocromas las anemias cuya CHCM es inferior a 30%.
IMPORTANCIA CLNICA
Las anemias constituyen la manifestacin clnica de diversas alteraciones, las cuales pueden
agruparse como sigue:
Anemia ferropnica. Se caracteriza por microcitosis e hipocroma. La microcitosis se demuestra
midiendo el volumen corpuscular medio (VCM), que normalmente es de 80 a 100 fL (femptolitros),
disminucin de la hemoglobina corpuscular media (HCM), que normalmente es de 27 a 31 g, y
disminucin de la concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM), que normalmente es
de 32 a 36 g/dL. Adems en la anemia ferropnica se observa anisocitosis (tamaos variables)
disminucin de la ferritina circulante y de la saturacin de la transferrina.
Anemias megaloblsticas. En estas anemias se observa macrocitosis (aumento del VCM),
policromatofilia y poiquilocitosis (variaciones en la forma de los eritrocitos), la hemoglobina se
halla disminuida en grado variable, HCM elevada y CHCM normal. El origen de estas anemias
puede ser la deficiencia de vitamina B12 o la deficiencia de folato. Cuando se debe a deficiencia de
vitamina B12 se denomina anemia perniciosa y se diagnostica mediante pruebas de absorcin de la
vitamina en presencia y ausencia de factor intrnseco exgeno, o mediante el hallazgo de
anticuerpos anti-factor intrnseco o anti-mucosa gstrica. Casi la mitad de los apcientes con
114
anemia perniciosa tienen anticuerpos anti-factor intrnseco (especficos), y alrededor del 80%
tienen anticuerpos anti-mucosa gstrica (menos especficos).
Anemia de enfermedades crnicas. En general son anemias normocrmicas y normocticas a no
ser que la enfermedad de halle relacionada con ferropenia en cuyo caso es microctica, o a
hepatopata o hipotiroidismo, en cuyo caso es macroctica. En los casos de hepatopata o
hipotiroidismo puede haber acantocitosis (eritrocitos con espculas de posicin y longitud
irregulares). En la insuficiencia renal crnica puede encontrarse equinocitosis (eritrocitos con
espculas cortas distribuidas regularmente en toda la superficie celular). En estas anemias la
saturacin de la transferrina es normal o est apenas disminuida.
Anemias hemolticas. Existen varias enfermedades genticas que producen anemia hemoltica. La
ms frecuente en la raza blanca es la esferocitosis hereditaria, en que existe deficiencia de una
protena de membrana del eritrocito, la deficiencia de glucosa 6-fosfato deshidrogenasa
(favismo), en que no se neutraliza adecuadamente el estrs oxidativo y se fragilizan las
membranas de las eritrocitos, las talasemias (las y son las ms frecuentes), en que no se
sintetizan las cadenas de globina, o lo hacen en cantidades reducidas, la anemia de clulas
falciformes, debida a una mutacin de las cadenas de la hemoglobina que produce la
precipitacin de la hemoglobina cuando la pO2 es baja, con lo cual se rigidizan los eritrocitos y se
rompen con facilidad.
En casos no relacionados con mutaciones, la hemlisis aumentada puede deberse a la presencia
de anticuerpos contra los eritrocitos, como ocurre en la eritroblastosis fetal, enfermedad en la
cual el producto tiene un antgeno que no est presente en la madre y el sistema inmunolgico de
sta produce anticuerpos contra dicho antgeno. En los casos ms importantes, la madre Rh-
produce anticuerpos contra los eritrocitos del feto Rh+. La anemia hemoltica puede deberse
tambin a infecciones como el paludismo (malaria), proceso en el que el agente infeccioso,
Plasmodium, lleva a cabo su ciclo vital en el interior de los eritrocitos, lisndolos al cabo del
mismo.
Policitemia. Es el aumento de la cantidad de eritrocitos. Ocurre naturalmente cuando la
disponibilidad de oxgeno es limitada, como mecanismo compensatorio. En adultos mayores
puede presentarse como resultado de la prdida del control sobre la mdula sea. La policitemia
puede ser secundaria a otros procesos que cursan con hipoxia tisular, como la insuficiencia
respiratoria y las cardiopatas congnitas. La llamada policitemia vera consiste en el incremento de
115
clulas sanguneas, principalmente eritrocitos, debida a una produccin excesiva de clulas por la
mdula sea. Su causa no se conoce pero se sabe que afecta principalmente a hombres con edad
superior a los 40 aos.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR EL HEMATOCRITO
Para determinar el hematocrito se requiere un tubo graduado especial conocido como tubo de
Wintrobe, el cual est hecho de vidrio grueso que soporta bien la centrifugacin. EI tubo se carga
hasta la graduacin superior (10) con sangre tratada con anticoagulante, utilizando una pipeta
Pasteur de punta larga, la cual, una vez cargada con sangre se introduce hasta el fonda del tubo de
Wintrobe y entonces se descarga gradualmente conforme se va sacando del tubo, minimizando el
riesgo de formar burbujas. En caso de que se forme una burbuja, debe sacarse con golpes suaves
dados al tubo con un dedo. Una vez cargado debidamente el tubo de Wintrobe, se centrifuga
durante 30 minutos a 3000 r. p. m. y se toma la lectura directamente de la graduacin del tubo, a
nivel de la lnea que separa el paquete rojo del blanco.
PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA (Randox)

Fundamento: la oxidacin de fa hemoglobina con ferricianuro de potasio en solucin alcalina
forma metahemoglobina. sta reacciona con cianuro de potasio y forma cianometahemoglobina,
que es un compuesto colorido cuya intensidad es directamente proporcional a la concentracin de
hemoglobina.
1. Transferir 5 mL de solucin de Drabkin a un tubo de 13x100
2. Transferir 20 L de sangre con anticoagulante a la solucin anterior
3. Mezclar bien y dejar reposar al menos durante 3 minutos a temperatura ambiente
4. Medir la absorbancia a 540 nm de la muestra frente a agua destilada. EI color es estable
durante varias horas
5. Determinar la concentracin de hemoglobina multiplicando la absorbancia por el factor
36.77. EI resultado se reporta en g/dL
Hombres Adultos: 13 - 18 g/dL
Mujeres adultas: 11 - 16 g/dL
Recin nacidos: 14 -23 g/dL
116
NOTA: Puede haber variaciones fuera de los intervalos indicados por efecto de la edad, la raza, el
ejercicio, la altitud y la estacin del ao.
CLCULO DE LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA

Aplicar la siguiente frmula:
([Hemoglobina]/Hematocrito) x 100 = ______ CHCM (%)
BIBLIOGRAFA
ndices de Glbulos Rojos. Medline Plus (2014):

117
IDENTIFICACIN DE GRUPOS SANGUNEOS
OBJETIVOS
1. EI alumno identificar el grupo sanguneo ABO y el carcter Rh de una muestra de sangre

2. EI alumno explicar la relevancia clnica de los grupos sanguneos ABO y del carcter Rh
GENERALIDADES
Las sustancias que determinan los grupos sanguneos son componentes de la membrana de los
eritrocitos (y en muchos casos de otros tipos celulares) cuya variedad se debe a polimorfismos
genticos.
En el hombre se han reconocido ms de 200 variantes genticas de antgenos de los eritrocitos,
relacionadas con al menos 20 sistemas de grupos sanguneos, pudiendo haber en cada sistema dos
o ms fenotipos distintos. En el sistema ABO, por ejemplo, existen cuatro fenotipos (A, B, AB Y 0),
que corresponden a cuatro grupos sanguneos en dicho sistema.
El sistema ABO es de gran importancia por su alto poder de inmunogenicidad. Los individuos
pertenecientes al grupo A poseen el antgeno A en sus clulas rojas, los del grupo B poseen el
antgeno B, los del grupo AB poseen ambos antgenos y los del grupo O no poseen ninguno de los
dos. Una caracterstica notable de los grupos ABO es la relacin recproca entre los antgenos
presentes en los eritrocitos y los anticuerpos que se encuentran en el plasma de los mismos
individuos, de acuerdo con la siguiente tabla:
GRUPO ANTICUERPOS EN
GENOTIPO ANTGENOS EN
SANGUNEO EL PLASMA
ERITROCITOS
(FENOTIPO)
O O/O NINGUNO ANTI-A, ANTI-B
A/A A ANTI-B
A
A/O A ANTI-B
B/B B ANTI-A
B
B/O B ANTI-A
AB A/B A, B NINGUNO
La razn de esta relacin reciproca no se conoce pero se cree que la formacin de anticuerpos
anti-A y anti-B puede ser la respuesta al contacto con las sustancias A y B que se encuentran de
manera natural en el ambiente.
118
Las especificidades antignicas de estos grupos sanguneos se deben a variaciones en el azcar
terminal del oligosacrido de cierto glicolpido membranal. En el caso del grupo A, el azcar
terminal del oligosacrido es Nacetilgalactosamina, mientras que en el grupo B es D-galactosa. La
presencia de uno u otro azcar en esa posicin depende de que exista la enzima N-
acetilgalactosamina transferasa o la enzima D-galactosa transferasa, lo cual a su vez depende de
que un determinado locus presente el alelo A o el alelo B, respectivamente. Cuando la informacin
del gen no produce ninguna de las dos enzimas, dicho locus presenta el alelo O, y entonces el
oligosacrido no tiene ni N-acetilgalactosamina ni D-galactosa. EI componente membranal
correspondiente al alelo O se denomina sustancia H, de manera tal que si a la sustancia H se
adiciona N-acetilgalactosamina, resulta el grupo A; si se le adiciona D-galactosa, resulta el grupo B,
y si no se le adiciona ninguno de los dos azcares, resulta el grupo O.
En la poblacin caucsica, aproximadamente 40-45% de los individuos tienen dos copias del alelo
O, otro 40-45% tienen al menos una copia del alelo A. EI 10% tiene al menos una copia del alelo B y
el 5% tiene una copia del alelo A y una del alelo B.
Otro grupo sanguneo de importancia comparable con el del sistema ABO es el factor Rh (por
haber sido descubierto en los monos rhesus). Genticamente, los grupos Rh son complejos, pero
de una manera introductoria puede considerarse que el sistema consta de dos alelos, D y d, con
tres posibles genotipos, D/D, D/d y d/d. D/D y D/d son fenotpicamente Rh positivos, mientras que
d/d es fenotpicamente Rh negativo.
A diferencia de lo que ocurre con el sistema ABO, en el sistema Rh no se encuentran de manera
natural anticuerpos anti-Rh en personas Rh negativas, aunque en determinadas condiciones s se
forman dichos anticuerpos. Los anticuerpos anti-Rh tambin se conocen como anti-D.
IMPORTANCIA CLNICA
La importancia de los grupos sanguneos en general tiene relacin con el proceso de transfusin
pues, considerando la posible presencia de anticuerpos en la sangre del receptor puede
propiciarse la generacin de una reaccin inmunolgica si no se tiene el cuidado de ensayar
previamente la compatibilidad de la sangre del donante con la del receptor. EI individuo con
sangre tipo A puede recibir eritrocitos de tipo A u O, mientras que el individuo con sangre tipo B
puede recibir eritrocitos de tipo B u O. En cambio, quien tiene tipo AB puede recibir eritrocitos de
cualquier tipo y quien es tipo O puede recibir solo eritrocitos de tipo O. La compatibilidad o
119
incompatibilidad de una combinacin determinada se halla en funcin de la presencia o ausencia
de anticuerpos en la sangre del receptor, segn indica la tabla anteriormente presentada.
La transfusin de eritrocitos incompatibles (por ejemplo tipo B a un receptor tipo A o tipo O)
provoca una reaccin de aglutinacin de los eritrocitos transfundidos, activacin del complemento
y hemlisis intravascular. La reaccin a la transfusin se manifiesta clnicamente por fiebre,
hipotensin, dolor en la regin inferior de la espalda, sensacin de compresin en el pecho,
nusea y vmito. La destruccin de los eritrocitos puede provocar choque circulatorio y la
liberacin del contenido de dichas clulas, principalmente la hemoglobina, la cual puede producir
necrosis tubular aguda.
Antes de practicar la transfusin deben llevarse a cabo las pruebas cruzadas para asegurar la
compatibilidad. En la llamada prueba mayor, se mezclan dos gotas de suero del receptor con una
gota de suspensin de eritrocitos lavados del donador y en la prueba menor se mezclan dos gotas
de plasma o suero del donador con una gota de eritrocitos del receptor. La ausencia de
aglutinacin indica compatibilidad.
La enfermedad hemoltica del recin nacido (EHRN) aparece en productos cuyas madres fueron
sensibilizadas por antgenos de los eritrocitos fetales. Los anticuerpos que en respuesta produce la
madre, atraviesan la placenta y reaccionan con los eritrocitos fetales, causando su destruccin. La
sensibilizacin de la madre Rh negativa a las clulas Rh positivas del producto ocurre usualmente
durante el nacimiento del primer hijo Rh positivo, cuando algunas clulas rojas de ste se escapan
a travs de la placenta hacia la sangre materna, donde son reconocidas por el aparato
inmunocompetente de la madre. Debido a esto, el primer hijo Rh positivo no resulta afectado a no
ser que la madre hay tenido previamente un aborto espontneo o un embarazo interrumpido,
pero a partir del segundo hijo Rh positivo el riesgo es creciente debido a la previa sensibilizacin
de la madre y a la presencia de los eritrocitos del nuevo producto en la sangre materna. Para
prevenir la respuesta inmunolgica se aplican anticuerpos anti-Rh en la segunda mitad del
embarazo en periodos regulares y una vez que naci el beb. Esto ha permitido una disminucin
importante de la frecuencia con que se presenta la EHRN.
El problema inmunolgico responsable de la anemia hemoltica en realidad se produce desde la
etapa fetal, por lo cual esta patologa se ha conocido como eritroblastosis fetal, que, como indica
el nombre, corresponde al proceso intrauterino. En realidad la eritroblastosis fetal y la
120
enfermedad hemoltica del recin nacido forman un proceso continuo, para el cual existe una
mejor denominacin: enfermedad hemoltica del feto y el recin nacido.
Tambin puede presentarse incompatibilidad cuando una madre tipo O tiene un producto A o B,
sin embargo, en la gran mayora de los casos no aparece la eritroblastosis fetal, presentndose un
cuadro ms bien benigno que se ha atribuido a la presencia del antgeno A o B en la placenta, con
lo que se neutralizan los anticuerpos maternos.
PROCEDIMIENTO
1. Se obtiene una muestra de sangre mediante una puncin con lanceta del dedo pulgar
2. Se colocan tres gotas de sangre en diferentes espacios de una placa de aglutinacin
3. A cada gota de sangre se agrega una gota de uno de los sueros anti-A, anti-B o anti-D
4. En cada caso se mezclan las muestras con un palillo durante aproximadamente un minuto
5. La reaccin positiva se manifiesta por aglutinacin observable a ojo. Si en el ensayo del
sistema ABO se obtiene reaccin positiva solamente con anti-A, el grupo de la sangre es A;
si solo se obtiene aglutinacin con anti-B, se trata de sangre tipo B; si se obtiene reaccin
positiva con ambos antisueros, se trata de sangre tipo AB y si en ambos casos la reaccin
es negativa, el tipo de sangre es O.
6. En lo concerniente al sistema Rh, la reaccin positiva con anti-D indica que la sangre es Rh
positiva y la no aglutinacin de los eritrocitos implica que el tipo de sangre es Rh negativo.
BLIBLIOGRAFA
Bonilla-Zavala R (2005). Pruebas pretransfusionales. Rev Med Inst Mex Seg Soc 43: 13-15
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Thompson, J. S. and Thompson, M. W., Genetics in Medicine, 2nd edition, W. B. Saunders Co., 1973
121
122
RENCUENTO PLAQUETARIO
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de plaquetas en una muestra de sangre
2. El alumno explicar el contexto clnico relevante del recuento plaquetario
GENERALIDADES
EI sistema hemosttico del organismo humano tiene como funcin evitar la prdida excesiva de
sangre cuando existe una lesin, mediante la formacin de un cogulo que ocluye la solucin de
continuidad, preservando el estado lquido dentro de los vasos sanguneos. Los principales
componentes del sistema hemosttico son:
1. Plaquetas
2. Componente endotelial vascular
3. Protenas plasmticas, tanto las que participan en la coagulacin como las que actan en
la fibrinlisis.
Estos tres componentes interrelacionan entre s para generar el efecto hemosttico. La pared
interna de los vasos sanguneos se encuentra recubierta por clulas endoteliales y cuando stas se
lesionan, dejan expuestas fibras de colgena y otras sustancias del medio subyacente, a las cuales
se adhieren algunas plaquetas que entonces se activan e inducen la agregacin plaquetaria, que
termina formando un tapn primario; por otra parte, la solucin de continuidad permite la
activacin de las vas de la coagulacin (extrnseca, por exposicin al factor tisular, e intrnseca,
por la exposicin de una superficie extraa, de manera relevante la colgena), a lo que sigue la
cascada de reacciones que conduce a la formacin del cogulo.
Plaquetas. Tambin llamadas trombocitos, son clulas enucleadas en forma discoidal de 2 a 3 m
de dimetro, derivadas de los megacariocitos. Su vida promedio es de aproximadamente 10 das y
su concentracin normal en la sangre oscila entre 150,000 y 400,000/L. Normalmente, del total
de plaquetas presentes en el organismo, 2/3 se encuentran circulando y 1/3 se encuentra en el
bazo. La participacin de las plaquetas consta de cuatro fases:
1. Adhesin de las plaquetas a superficies extraas que quedan expuestas por efecto de la
lesin endotelial. Este proceso depende de la presencia de glucoprotenas membranales a
las que se enlazan los trombocitos y es fundamental para contener la hemorragia.
123
2. Luego de la adhesin de las plaquetas, su activacin produce que se contraigan y formen
estructuras similares a seudpodos, concentrando sus compuestos qumicos en el centro
de ellos.
3. Liberacin de grnulos al medio inmediato
4. Los productos liberados (ADP, serotonina, trombina, etc.) estimulan la vasoconstriccin, la
agregacin plaquetaria y la coagulacin.
Endotelio vascular. Normalmente libera xido ntrico (vasodilatador) y prostaglandina PGl
(antiagregante plaquetario), que hacen que el flujo sanguneo se mantenga normal. Las protenas
adhesivas fibronectina, vitronectina, tromboespondina y el factor Von Willebrand, tambin se
elaboran en este sitio y participan en el proceso de agregacin plaquetaria. Al continuar el proceso
de la coagulacin, las clulas endoteliales intactas que se encuentran en las proximidades del sitio
lesionado limitan la formacin de fibrina a partir de fibringeno, activando a los inhibidores de la
trombina. Esto ayuda a que no se extienda la formacin del cogulo a zonas no daadas.
Protenas plasmticas. Entre ellas se encuentran las protenas necesarias para los procesos de
coagulacin y fibrinlisis. La mayor parte de las que participan en la hemostasia, son
glucoprotenas que se activan secuencialmente hasta llegar a la reaccin en que el fibringeno se
transforma en fibrina, protena activa que al polimerizarse forma redes insolubles en donde
quedan atrapadas las plaquetas y otros elementos formes de la sangre.
EI recuento plaquetario es una prueba importante, ya que permite detectar la trombocitopenia
(disminucin del nmero de plaquetas), la cual es la enfermedad hemorrgica ms comn.
Adems, los recuentos precisos son de suma importancia para seguir el curso de enfermedades
relacionadas con la mdula sea como son la leucemia y la anemia aplstica. Esta determinacin
es tambin un valioso auxiliar para la evaluacin de la teraputica con anticoagulantes, frmacos
txicos, quimioterapia y radioterapia.
IMPORTANCIA CLNICA
AUMENTO DEL NMERO DE PLAQUETAS:
El cuadro se denomina trombocitosis y puede ser primaria o secundaria. La trombocitosis primaria
es un sndrome mieloproliferativo conocido como trombocitemia esencial hemorrgica, que se
caracteriza por un recuento superior a 450,000/L. En esta patologa ocurren eventos trombticos
debidos al exceso de plaquetas y eventos hemorrgicos debidos a que en general las plaquetas
son disfuncionales. La trombocitosis secundaria puede estar relacionada con muchas patologas o
124
situaciones, entre ellas las infecciones agudas, el posoperatorio de cirugas mayores, presencia de
tumores, en especial en la enfermedad de Hodgkin, despus de una esplenectoma y en la
recuperacin de tratamiento con radio o quimioterapia.
DISMINUCIN DEL NMERO DE PLAQUETAS
El cuadro se denomina trombocitopenia y se define por un recuento plaquetario inferior a
150,000/L. Sin embargo, la trombocitopenia se considera relevante slo cuando el recuento es
inferior a 100,000/L, aunque la presentacin de sangrados espontneos no ocurre en general si
el recuento se halla por arriba de 50,000/L. Las causas del bajo recuento de plaquetas pueden ser
centrales o perifricas.
CENTRALES. La reduccin de plaquetas se debe a deficiencias de la mdula sea.
1. Amegacariocitosis, es decir ausencia de megacariocitos relacionada con invasin tumoral
de la mdula sea, anemia aplsica (disminucin de clulas sanguneas por
hipocelularidad de la mdula sea)
2. Megacariocticas, por trombopoyesis ineficaz con presencia normal de megacariocitos,
como ocurre en la anemia perniciosa, dficit de trombopoyetina, alcoholismo, etc.
3. Txica medicamentosa, por el uso de frmacos, p. ej., los frmacos quimioteraputicos,
el cido valproico (anticonvulsivo), furosemida (diurtico), AINEs, quinidina
(antipaldico), ranitidina (inhibidor de receptores H2 de la histamina), sulfamidas,
linezolida (antibitico), etc. El riesgo significativo se relaciona con el uso prolongado de
alguno de los frmacos.
PERIFRICAS. La reduccin de plaquetas se debe a destruccin excesiva o prematura.
Prpura trombocitopnica idioptica, patologa autoinmune
Uso de heparina. Este medicamento induce la produccin de anticuerpos antiplaquetarios
Leucemia linftica crnica. Es un cncer de linfocitos en que se incrementa el nmero de linfocitos
B (clulas B), que se propagan a travs de la sangre y afectan ndulos linfticos, hgado, bazo y
puede eventualmente producir la prdida de la funcin de la mdula sea
Hiperesplenismo. Presencia de bazo hiperactivo relacionado con cirrosis, linfoma, paludismo,
tuberculosis, etc.
Sndrome urmico hemoltico. Patologa producida por E. coli enterohemorrgicas, que produce
una toxina tipo Shiga (que produce Shigella dysenteriae), la cual ataca los glomrulos produciendo
microtrombosis, hemlisis y trombocitopenia.
125
Coagulacin intravascular diseminada. Corresponde a la activacin sistmica de la coagulacin
como efecto secundario a una variedad de condiciones patolgicas, como sepsis, cncer,
traumatismos, pancreatitis, mordedura de serpientes, insuficiencia heptica, problemas
obsttricos, etc. Se produce dao a la microvasculatura que cursa con trombosis y hemorragias.
Los mecanismos naturales anticoagulantes, principalmente la antitrombina III no funcionan
adecuadamente.
MATERIAL
1. Sangre venosa (1 mL)

2. Solucin de oxalato de amonio al 1% y azul de metileno (al preparar la solucin se aaden
20 gotas de azul de metileno a cada 100 mL de la solucin de oxalato de amonio y se filtra
la solucin).
3. Anticoagulante EDTA
4. Cmara de recuento celular (hemocitmetro) con cubreobjetos
5. Caja de Petri
6. Microscopio
7. Agitador tipo vrtex
8. Papel filtro
PROCEDIMIENTO
1. Verter la sangre extrada en un tubo de ensayo que contenga una gota de anticoagulante y
mezclar suavemente por inversin
2. Inmediatamente despus, medir 20 L de sangre con una micropipeta apropiada
3. Transferir la alcuota de sangre a un tubo que contenga 4.0 mL de solucin de oxalato de
amonio y azul de metileno
4. Agitar durante 70 segundos con el vrtex a alta velocidad
5. Colocar el cubreobjetos sobre el hemocitmetro
6. Cargar una micropipeta con la preparacin y depositar una gota en la orilla del
cubreobjetos, a nivel de una de las hendiduras del hemocitmetro.
7. Colocar el hemocitmetro en una caja de Petri cubrindolo con la tapa en la que,
previamente, se habr colocado un papel filtro hmedo. Dejar en reposo durante 10
minutos.
126
8. Enfocar la cuadrcula con el seco dbil, luego con el seco fuerte e identificar las plaquetas.
Una vez identificadas, hacer el recuento de las plaquetas utilizando la cuadrcula central
del hemocitmetro. Dicha cuadrcula consta de 25 cuadros con una distribucin de 5 x 5.
Cada uno de dichos cuadros contiene a su vez 16 subcuadros (4 x 4)
9. EI conteo debe hacerse con todo cuidado, detectando las plaquetas en cada uno de los 16
subcuadros de cada uno de los 25 cuadros.
10. La cifra obtenida se multiplica por 2000 y el resultado corresponde al nmero de
plaquetas por L.
Hemocitmetro o cmara de Newbauer Cargando el hemocitmetro
Cuadrcula del hemocitmetro vista al microscopio
127
Aspecto de las plaquetas al microscopio (2) comparando con los eritrocitos (1)
150,000 400,000/ L
BIBLIOGRAFA
Crdoba CB, Blanco AR, Malawka JS, Ojeda VV (2007). Sndrome urmico hemoltico: revisin. Rev
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128
129
BILIRRUBINAS SRICAS
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar las concentraciones de bilirrubina directa, indirecta y total en una
muestra de suero sanguneo
2. El alumno explicar los contextos clnicos en que es relevante la cuantificacin de

bilirrubinas
GENERALIDADES
La bilirrubina es un compuesto de color amarillo anaranjado cuando se encuentra en solucin,
originndose en un 80 a 85% a partir del catabolismo del grupo hemo de la hemoglobina y el resto
a partir del catabolismo del grupo hemo que forma parte de otras protenas como la mioglobina,
los citocromos, la catalasa, etc.
Los eritrocitos senescentes son captados por el sistema reticuloendotelial, presente
fundamentalmente en el bazo y en el hgado. AI catabolizarse la hemoglobina liberada de los
eritrocitos, se producen aminocidos libres a partir de la parte protenica de la hemoglobina
(globina), y bilirrubina a partir de la fraccin no protenica (hemo). La bilirrubina producida por el
sistema reticuloendotelial se conoce como bilirrubina indirecta o no conjugada y es una sustancia
marcadamente insoluble en agua, asocindose con albmina a fin de ser transportada por la
sangre. Cuando los complejos de bilirrubina indirecta y albmina pasan por el hgado, los
hepatocitos captan la bilirrubina indirecta.
En el interior de los hepatocitos la bilirrubina indirecta se combina con glucuronato por la accin
cataltica de la UDP-glucuronil transferasa, generndose as la bilirrubina directa o conjugada, la
cual en un 85% corresponde a diglucurnido de bilirrubina (dos molculas de glucuronato por
cada molcula de bilirrubina) y el 15% restante a monoglucurnido de bilirrubina. Finalmente, la
bilirrubina directa es transferida a la luz de los canalculos biliares mediante un mecanismo de
transporte activo, pasando luego a la vescula biliar para finalmente llegar al intestino formando
parte de la bilis. En ltima instancia la bilirrubina se excreta en su mayor parte despus de haber
sufrido algunas modificaciones qumicas, en forma de urobilina por la orina y como estercobilina
por las heces fecales.
130
IMPORTANCIA CLNICA
La cuantificacin de bilirrubinas directa e indirecta en el suero tiene relevancia diagnstica. EI

aumento de la concentracin sangunea de bilirrubina (hiperbilirrubinemia) puede generarse por
incremento en la produccin de bilirrubina o por limitaciones en su excrecin. Cuando la
concentracin srica de bilirrubina alcanza la cifra de 2.5 a 3 mg/dL se presenta ictericia
(pigmentacin amarillenta de la piel y mucosas), pudiendo deberse a incremento de la bilirrubina
directa o de la indirecta. La ictericia se detecta primeramente en las esclerticas debido a que
stas son ricas en elastina, protena que presenta gran afinidad par la bilirrubina.
La hiperbilirrubinemia puede producirse por tres tipos de patologas:
1. Aumento en la produccin de bilirrubina. Se produce en las enfermedades que cursan
con destruccin incrementada de eritrocitos, como son la ictericia neonatorum,
policitemia, transfusin de sangre incompatible, paludismo, deficiencia de glucosa 6-
fosfato deshidrogenasa, etc. En estos casos, la hiperbilirrubinemia se explica en funcin
de la hiperproduccin de bilirrubina indirecta. Su acumulacin en la sangre ocurre debido
a que la capacidad de conjugacin heptica es limitada, es decir que el hgado sano no
puede conjugar cualquier cantidad de bilirrubina no conjugada que se produzca. Sin
embargo, si se trata de una patologa hemoltica pura, nicamente se registra un
incremento no muy importante de bilirrubina indirecta, alcanzando una concentracin <10
mg/dL. Si la hemlisis se presenta dentro de un cuadro de enfermedad sistmica con
compromiso heptico, se registrar tambin incremento de la bilirrubina directa. Los
cuadros clnicos con hemlisis prolongada pueden propiciar la precipitacin de la
bilirrubina en la vescula biliar, produciendo clculos de esa sustancia. La ictericia neonatal
fisiolgica ocurre frecuentemente entre los das 2 y 4 posteriores al nacimiento,
presentando una bilirrubinemia menor a 12 mg/dL. La causa es la falta de desarrollo de la
fisiologa heptica al momento del nacimiento, lo cual es normal. Antes del nacimiento la
bilirrubina fetal pasa a travs de la placenta y se procesa por el organismo materno. Los
mecanismos implicados en el metabolismo de la bilirrubina maduran rpidamente y
dentro de las primeras dos semanas se normalizan las concentraciones sricas de
bilirrubina. En los casos de hiperbilirrubinemia no conjugada no se observa presencia de
bilirrubina en la orina (coluria), pues la bilirrubina es insoluble y se halla firmemente unida
131
da la albmina. En la coagulacin intravascular diseminada tambin incrementa la
concentracin de bilirrubina indirecta.
2. Dficit en la captacin de bilirrubina por el hgado o en su conjugacin. EI sndrome de
Gilbert es una condicin relativamente leve caracterizada por la presentacin de periodos
con elevada concentracin de bilirrubina indirecta, aunque raramente llega a niveles que
produzcan ictericia. Los episodios de hiperbilirrubinemia se relacionan con situaciones de
estrs, como son el ejercicio fsico intenso, la deshidratacin, el ayuno prolongado, la
menstruacin o la presencia de alguna enfermedad. Comnmente la causa del sndrome
de Gilbert es la presencia de alguna mutacin en el gen que codifica la UDP glucuronil
transferasa, que hace que la actividad de la enzima solo sea de aproximadamente 30% de
lo normal, pero existen casos donde la causa puede ser otra, como la deficiencia en la
captacin de la bilirrubina no conjugada por los hepatocitos. Su frecuencia en Estados
Unidos oscila entre el 3 y el 7% de la poblacin general. Una forma ms severa del
sndrome de Gilbert es el sndrome de Crigler-Najjar, en que se tiene una mutacin sin
sentido en los dos genes de la UDP-glucuronil transferasa. Los pacientes con esta
alteracin pueden desarrollar kernicterus y morir en la niez. La deficiencia en la captacin
de bilirrubina no conjugada por el hgado puede estar relacionada con el uso de
rifampicina, contrastes radiolgicos, probenecid (uricosrico), etc.
3. Lesin hepatocelular. Se produce en las enfermedades que cursan con insuficiencia
heptica como son los casos de tumores hepticos, hepatitis viral, cirrosis, congestin
heptica por insuficiencia cardiaca, hepatitis medicamentosa, hepatitis alcohlica, etc.
Puede detectarse incremento en las bilirrubinas directa e indirecta, aunque
fundamentalmente aumenta la directa puesto que a pesar del dao heptico, la bilirrubina
indirecta continua conjugndose en proporcin importante. La elevacin de la bilirrubina
directa se explica en funcin de que su transferencia a los canalculos biliares depende de
energa, proceso que se limita severamente bajo condiciones de insuficiencia heptica. La
acumulacin de bilirrubina directa en los hepatocitos produce lo que se conoce como
regurgitacin o reflujo, para denotar su retroceso a la circulacin.
4. Colestasis. Se produce en obstrucciones totales de las vas biliares, encontrndose
elevada claramente la fraccin directa, aunque puede presentarse incremento
discreto de la indirecta. Puede deberse a cirrosis biliar primaria, colangitis
132
autoinmune, neoplasia (tumor de cabeza de pncreas, colangiocarcinoma,
carcinoma de la vescula biliar), litiasis, pancreatitis aguda y crnica, parasitosis
(fasciolasis, ascaridiasis) etc. Las proporciones de bilirrubina directa e indirecta
entre la lesin hepatocelular y la colestsica no permiten distinguir el tipo de
patologa.
Fundamento: la bilirrubina total se determina en presencia de cafena (acelerador)
mediante la reaccin con cido sulfanlico diazotado. La bilirrubina directa se determina
en ausencia de cafena
Bilirrubina total
Pipetear en cubetas para el espectrofotmetro:
Blanco Muestra
Reactivo R1 200 L 200 L
Reactivo R2 --- 1 gota (50 L)
Reactivo R3 1.0 mL 1.0 mL
Muestra 200 L 200 L
Mezclar y dejar reposar durante 10 minutos entre 20 y 25 C. Aadir:
Reactivo 4 1.0 mL 1.0 mL

Mezclar y dejar reposar 5-30 minutos entre 20 y 25 C y leer la
absorbancia (ABT) a 578 nm de la muestra frente al blanco
CLCULOS
Bilirrubina total (BT)

ABT x 10.8 = ______ mg/dL
133
Bilirrubina directa
Pipetear en cubetas para el espectrofotmetro:
Blanco Muestra
Reactivo R1 200 L 200 L
Reactivo R2 --- 1 gota (50 L)
NaCl 0.9% 2.0 mL 2.0 mL
Suero 200 L 200 L
Mezclar y dejar reposar durante 5 minutos exactos entre 20 y 25 C.
leer la absorbancia (ABD) a 546 nm de la muestra frente al blanco
CLCULOS
Bilirrubina directa (BD)
ABD x 14.4 = ______ mg/dL
Bilirrubina indirecta (BI)

Se obtiene por diferencia entre la bilirrubina total y la directa
Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dL
Bilirrubina directa hasta 0.4 mg/dL
BIBLIOGRAFA
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2000
134
135
CIDO RICO SRICO
OBJETIVOS
1. EI alumno determinar la concentracin de cido rico en una muestra de suero
sanguneo
2. EI alumno explicar los contextos clnicos relevantes de la cuantificacin de cido rico en

suero
GENERALIDADES
EI cido rico es el producto final del metabolismo de las bases nitrogenadas purnicas, proceso
que se lleva a cabo principalmente en el hgado y en la mucosa intestinal. En estos tejidos se
registra gran actividad de la xantina oxidasa, metaloenzima con molibdeno que produce
directamente el cido rico. En otros tejidos solo se encuentran indicios de dicha enzima.
Normalmente se ingiere muy poco cido rico. El cido rico que circula filtra libremente por los
glomrulos y es reabsorbido a partir de los tbulos en un 90% a lo largo de la nefrona por diversos
mecanismos, aunque parcialmente es secretado por las clulas tubulares, de manera que la
actividad renal es responsable de la excrecin de 60-70% del cido rico, y el resto se excreta por
la va intestinal. En este ltimo caso en realidad el cido rico es descompuesto por la actividad
bacteriana intestinal (uricolisis). De esta manera, la cantidad de urato en el organismo es el
resultado de la cantidad que se produce y de la que se excreta.
EI contenido total de cido rico en el adulto es de aproximadamente 1.2 g y se origina tanto de
los nucletidos de purinas ingeridos en los alimentos como de los endgenos. Las concentraciones
de cido rico y de su base conjugada, el urato, dependen del pH. La primera disociacin del cido
rico tiene un pK de aproximadamente 5.4, por lo que en el plasma (pH 7.4) el urato representa el
99% y el cido rico solo el 1%. La segunda disociacin tiene un pK de alrededor de 10.3, por lo
cual no tiene ninguna relevancia en el organismo humano.
Debido a que en la orina existe una mucho mayor variabilidad en el pH, la proporcin cido
rico/urato tambin vara, de manera que mientras ms cida es la orina mayor es la proporcin
cido rico/urato, lo cual es relevante porque al ser el cido rico menos soluble que el urato, su
mayor abundancia puede propiciar su cristalizacin y la nefrolitiasis.
La concentracin srica de cido rico se halla influenciada por el sexo y la edad. En los nios
oscila normalmente entre 3 y 4 mg/dL. A partir de la pubertad aumenta en los hombres y en
136
menor grado en las mujeres debido en parte a que las mujeres excretan una mayor cantidad de
urato, por lo cual los valores normales de los hombres adultos son mayores a los de las mujeres.
IMPORTANCIA CLNICA
La hiperuricemia puede definirse como una concentracin de urato superior a 7 mg/dL. A partir de
este valor aumenta el riesgo de sufrir artritis gotosa o urolitiasis. Entre el 2 y el 13 % de los
adultos ambulatorios presenta hiperuricemia. En la hiperuricemia se tiene la condicin propicia
para que se precipite el urato, aunque intervienen factores adicionales que hacen que no ocurra
en personas con elevadas concentraciones de urato. Se considera que esto se debe a la presencia
de algunas sustancias presentes en el plasma normal. Cuando llega a ocurrir, se forman cristales
que tienden a acumularse en las articulaciones formando los llamados tofos, que constituyen la
causa de la artritis gotosa aguda, la cual puede progresar a artritis gotosa crnica. El 90% de las
personas hiperuricmicas deben tal condicin a deficiencia en el manejo renal del cido rico. EI
exceso de cido rico favorece la precipitacin de cristales, que pueden observarse en la orina.
Alrededor del 13% de los casos de nefrolitiasis, los clculos son de cido rico.
Numerosas enfermedades y factores sociales y de comportamiento se asocian a modificaciones de
la concentracin de cido rico en el plasma. El aumento de la concentracin srica de urato es
ms frecuente y clnicamente ms significativo que su disminucin.
SE PRESENTA AUMENTO DE CIDO RICO EN:
1. Insuficiencia renal. La retencin de urato refleja una disminucin de la secrecin tubular,
una reabsorcin tubular aumentada o ambos factores
2. Nefropata crnica por plomo, patologa que se asocia con gota (gota saturnina).
3. Medicamentos. Algunos frmacos interfieren con la excrecin renal de urato, por
ejemplo: tiazidas (diurticos que actan en el tbulo distal), cido acetilsaliclico (aspirina)
y fenilbutazona (antiinflamatorio no esteroide de accin muy potente pero con efectos
colaterales muy importantes, ya que puede suprimir la produccin de leucocitos y puede
producir anemia aplstica), pirazinamida (antibitico usado principalmente contra la
tuberculosis), cido nicotnico (tratamiento para la baja concentracin de colesterol-LAD y
la concentracin alta de colesterol-LBD y de triacilgliceroles), etc.
4. Alimentos. La ingesta de alimentos ricos en purinas, como carne, hgado, rin,
leguminosas y otros vegetales, provoca hiperuricemia ligera con efecto uricosrico.
137
5. Fructosa. EI exceso en la ingestin de fructosa puede alterar el metabolismo heptico, el
cual produce mayores cantidades de cido rico derivado de la adenosina. La adenosina se
deriva del AMP, el cual aumenta de concentracin cuando abunda el ADP ya que en tales
condiciones ste se combina consigo mismo para formar ATP, coproducindose el AMP (2
ADP ATP + AMP). La elevada concentracin de ADP se debe a que la fructosa se fosforila
en el hgado a partir de ATP y la fructosa 1-fosfato resultante se metaboliza muy
lentamente, generndose un dficit de ATP que termina provocando la formacin de AMP,
metabolito que es muy lbil y se descompone fcilmente en adenosina y fosfato.
6. Deficiencia de hipoxantina-guanina fosforribosil transferasa (HGFT). La HGFT interviene
en una va metablica alterna de la sntesis de nucletidos de purinas. La enzima cataliza la
combinacin de las bases hipoxantina y guanina con un derivado que contiene la ribosa y
el fosfato (fosforribosil pirofosfato) para formar los ribonucletidos correspondientes (IMP
y GMP). La deficiencia de la enzima hace que se acumulen las bases y entren a fase
catablica, produciendo cido rico. Cuando se encuentra activa la enzima, se retarda el
catabolismo de las bases purnicas, lo cual resulta en una tasa menor de formacin de
cido rico.
7. Neoplasias como linfomas, leucemia, macroglobulinemia de Waldenstrm (tambin se
conoce como linfoma linfoplasmactico, correspondiendo a un cncer de linfocitos B en el
que se producen grandes cantidades de globulinas IgM, en un grado tan alto que la sangre
de hace hiperviscosa, dificultndose la circulacin sangunea en los vasos ms pequeos),
policitemia, mieloma mltiple y otras.
8. Etanol. La ingesta de grandes cantidades propicia la degradacin del ATP en el hgado y la
mayor produccin de cido rico. Por otra parte, la acidosis lctica que puede presentarse
secundaria a la ingestin etlica abundante favorece la precipitacin de cristales de cido
rico
9. Radiacin ionizante, que produce alteraciones en la estructura del DNA, lo cual aumenta
su tasa de degradacin a cido rico.
10. Acidosis. EI acetoacetato, el -hidroxibutirato, el lactato o los salicilatos se acumulan en
estados metablicos acidticos y en tales condiciones compiten con el cido rico para ser
secretados por los tbulos renales, lo cual lleva a menor excrecin de ste.
138
Fundamento: el cido rico se transforma en alantona y perxido de hidrgeno en presencia de
uricasa. El perxido de hidrgeno reacciona con cido 3, 5-dicloro-2 hidroxibencensulfnico y 4-
aminofenazona, por catlisis de la peroxidasa, produciendo quinoneimina, que es un compuesto
colorido. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentracin de cido rico.

Patrn --- 20 L ---
Mezclar e incubar a 37 C durante 5 minutos. Medir la absorbancia a 546 nm del patrn y
la muestra frente al blanco. El color es estable durante 15 minutos
CLCULO
(A muestra/A blanco) x [patrn] = _____ mg/dL cido rico
3 7.0 mg/dL
Con una tendencia a menores concentraciones en el caso de las mujeres
BIBLIOGRAFA
Bobulescu IA, Moe OW (2012). Renal transport of uric acid: evolving concepts and uncertainties.
Adv Chronic Kid Dis 19: 358-371
Grases, F., A. I. Villacampa, A. Costa-Bauza and O. Sohnel (1999). Uric acid calculi. Scanning
Microscopy 13: 223-234
Wortmann, R. L (2001). Disorders of purine and pyrimidine metabolism. En:

Braunwald E, Fauci AS, Kasper DL, Hauser SL, Longo DL, Jameson JL (Eds). Harrison's Internal
Medicine, 15th ed., McGraw-Hill, New York, N. Y., USA. P. 2268-2273
139
140

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UNIVERSIDAD AUTNOMA DEL ESTADO DE MXICO

NAD OXALACETATO C*OO

MANUAL DE PRCTICAS DE BIOQUMICA

Obtencin de muestras de sangre 17

Protenas totales y albmina sricas 22

Fosfatasa alcalina srica 36

Colesterol-LBD y Colesterol-LAD sricos 57

Capacidad amortiguadora del plasma sanguneo 74

Cuantificacin de Hemoglobina glicada 79

Examen general de orina 83

Creatinina srica 103

Depuracin de Creatinina y Estimacin de la VFG 106

Hematocrito, Hemoglobina y CHCM 113

Identificacin de grupos sanguneos 118

Recuento plaquetario 123

Bilirrubinas sricas 130

cido rico srico 136

En este contexto se enmarca el presente Manual de Prcticas de Bioqumica, cuyos propsitos

Al desarrollar las actividades programadas en el componente prctico del curso de Bioqumica de

CLASIFICACIN Y USO DE MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

Medicin de masa (peso)

1. Compare la exactitud de un matraz volumtrico de 100 mL y de una probeta de 100 mL,

2. EI alumno ejercitar la interconversin de unidades para expresar la concentracin de

4. 2 matraces volumtricos de 100 mL

5. 1 matraz volumtrico de 250 mL

6. 1 vaso de precipitados de 100 mL

7. 1 vaso de precipitados de 250 mL

8. Glucosa, cloruro de sodio y sulfato de sodio

PREPARE LAS SIGUIENTES SOLUCIONES:

1. 50 mL de solucin de glucosa al 5% p/v

a) Calcule la molaridad de las soluciones 1 y 2

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

1. EI alumno demostrar el fenmeno de la smosis en un dispositivo experimental

Sistema Vacutainer: adaptador y aguja estril doble

Tubos Vacutainer preparados con vaco

1. Sistema vacutainer (adaptador y aguja)

1. EI alumno determinar la concentracin de protenas en una muestra de plasma

2. EI alumno explicar la importancia de la concentracin normal de las protenas

Electroforegrama de protenas plasmticas

La albmina es la ms abundante de las protenas plasmticas y aunque solo representa alrededor

Blanco Patrn Muestra

(A muestra /A patrn) x [patrn] = ______ g/dL Protenas totales

Neonatos: 5.3-8.9 g/dL

Blanco Patrn Muestra

(A muestra /A patrn) x [patrn] = ______ g/dL Albmina

Adultos: 3.4-4.8 g/dL

Lupus eritematoso sistmico. Medline Plus (2015):

RESULTADOS, DISCUSIN Y CONCLUSIONES

1. El alumno comparar la capacidad de la bilis, de un detergente y del agua para emulsionar

2. El alumno explicar la relevancia fisiolgica y clnica de la emulsificacin de la grasa

Esquema de un modelo de partcula emulsionada rodeada por sales biliares

Pipetear en tubos de rosca de 15x150:

Tubo Agua Aceite Bilis Extrn

Mathews, C. K. & K. E. Van Holde. Bioqumica, 2a. ed. McGraw-Hili, 1998

1. EI alumno determinar la actividad de amilasa en una muestra de suero sanguneo

[(A blanco A problema)/A blanco] x 1000 = _______ unidades de amilasa/dL

1. EI alumno determinar la actividad de fosfatasa alcalina en una muestra de suero

2. El alumno explicar la importancia clnica de la cuantificacin de la actividad de fosfatasa

PROPIEDAD HGADO HUESO INTESTINO PLACENTA

LA FAL AUMENTA EN LOS SIGUIENTES CASOS:

Obtener los 3 valores de A de la muestra como sigue: A1 - A0, A2 - A1 y A3 - A2 y promediarlos.

Los sueros hemolticos interfieren con la determinacin.

1. El alumno determinar la concentracin de glucosa en una muestra de suero sanguneo