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Qumica Analtica: materiales docentes

Grado de Ingeniera Qumica


2 curso

A.M. Carro Daz


R.A. Lorenzo Ferreira
Universidad de Santiago de Compostela

UNIVERSIDADE DE SANTIAGO DE COMPOSTELA


A.M. Carro Daz
R.A. Lorenzo Ferreira

Qumica Analtica: materiales docentes


Grado de Ingeniera Qumica
2 curso

2011
UNIVERSIDADE DE SANTIAGO DE COMPOSTELA

CARRODAZ,AntoniaMara

Qumicaanaltica:materialesdocentes:gradodeIngenieraQumica,2curso/A.M.CarroDaz,R.A.
LorenzoFerreira.SantiagodeCompostela:Universidade,ServizodePublicacinseIntercambio
Cientfico,2011.xxxp.ISBN9788498877748

1.Qumicaanaltica.I.LorenzoFerreira,RosaAntonia.II.UniversidadedeSantiagodeCompostela.
ServizodePublicacinseIntercambioCientfico,ed.

543

Universidade de Santiago de Compostela, 2011

Edita
Servizo de Publicacins
e Intercambio Cientfico
Campus Vida
15782 Santiago de Compostela
www.usc.es/publicacions

ISBN 978-84-9887-774-8 (Edicin digital PDF)


Prlogo

En el marco del Espacio Europeo de Educacin Superior


(EEES), cobra especial relevancia el impacto de las
Tecnologas de la Informacin y la Comunicacin (TICs) con
posibilidades tanto para la elaboracin del conocimento como
para su adquisicin y transmisin, mediante mtodos
pedaggicos ms innovadores, adcesibles e interactivos que
se adapten a los diferentes tipos de estudiantes. El acceso a
las redes de la informacin dotan al docente y al alumnado de
poderosas herramientas que abren un gran abanico de
posibilidades metodolgicas. Siguiendo esta lnea, el mbito
de aplicacin de este material docente corresponde a la
materia de enseanza-aprendizaje de Qumica Analtica de
segundo curso (primer semestre) de la titulacin de Grado en
Ingeniera Qumica impartida en la Escuela Tcnica Superior
de Ingeniera (ETSE) de la Universidad de Santiago de
Compostela.

La Qumica Analtica es un rea de conocimiento con gran


impacto en la vida cotidiana y su desarrollo posibilita grandes
avances en muchas otras reas como la Medicina,
Biotecnologa, Ciencia de los Materiales, Ciencia Forense,
Ingeniera, Medio Ambiente, Tecnologa de los Alimentos, etc.
Es un instrumento fundamental en todos los laboratorios
clnicos, industriales o de investigacin por su carcter
interdisciplinar. Los dos principales objetivos de la Qumica
Analtica son garantizar una alta calidad metrolgica y
resolver los problemas analticos proporcionando informacin
con exactitud (bio) qumica que permita tomar las decisiones
correctas y oportunas1.
La Qumica Analtica est estrechamente relacionada con
otras asignaturas que se imparten en el Grado de Ingeniera
Qumica, como Qumica fundamental e Inorgnica, Fsica
Estadstica y Matemticas, siendo fundamental para todos los
perfiles profesionales de la titulacin. Como requisitos previos
a la hora de cursar esta asignatura es necesario que los

1
M. Valcrcel Talanta 85 (2011) 1707-1708

III
Prlogo

alumnos hayan adquirido, parcialmente, las competencias


transversales desarrolladas-evaluadas en las asignaturas de
primer curso como Qumica fundamental e Inorgnica.

Esta Gua docente facilita la comprensin de los contenidos


de las clases expositivas al disponer de los conocimientos
tericos y prcticos necesarios para planificar, aplicar y
gestionar la metodologa analtica ms adecuada para
abordar problemas de ndole medioambiental, sanitario,
industrial o alimentario. Introduce al alumno en la metodologa
de la Qumica Analtica, con el fin de que adquiera las bases
claras y actualizadas del proceso analtico, su fundamento y
las aplicaciones al anlisis cuantitativo de los mtodos
volumtricos, as como de los mtodos instrumentales. Se ha
dividido en 10 captulos y en todos los casos se presentarn
aplicaciones al anlisis actual de productos industriales y
contaminantes residuales relacionados con los procesos de
fabricacin.

El captulo 1 est dedicado al proceso analtico y a las


propiedades analticas que afectan a la calidad del resultado y
del procedimiento de anlisis qumico. El captulo 2 describe
el muestreo y diferentes procesos de preparacin de muestra.

El captulo 3 trata de los diferentes mtodos volumtricos de


anlisis, incluyendo las valoraciones cido-base, de formacin
de complejos, en medio heterogneo y de oxidacin-
reduccin.

Los tres captulos siguientes estn relacionados con los


mtodos espectroscpicos. El captulo 4 es un tema de
introduccin a los mtodos instrumentales en el que se
describen los mtodos de calibracin, las fuentes de ruido y
las caractersticas, especificaciones y clasificacin de los
analizadores de procesos y incluyendo el analizador continuo
de flujo no segmentado. El captulo 5 describe los mtodos
espectroscpicos en UV-Visible e IR, sus principios bsicos,

IV
Prlogo

componentes, funcin y requerimientos. El captulo 6 est


dedicado a los mtodos espectroscpicos de anlisis
molecular, fundamento, aplicaciones y manejo de
instrumentos. En el captulo 7 se describe las caractersticas
generales y aplicaciones de las tcnicas de espectroscopa
atmica o elemental.

El captulo 8 se dedica a las generalidades de la


cromatografa, incluyendo el fundamento y aplicaciones de la
cromatografa de gases y la deteccin por espectrometra de
masas. El captulo 9 describe los aspectos bsicos e
instrumentacin de la cromatografa de lquidos de alta
resolucin y su acoplamiento a espectrometra de masas.

Finalmente, en el captulo 10 se describe el fundamento


clasificacin y aplicaciones de los sensores electroanalticos.

V
ndice

INDICE
TEMA 1.EL PROCESO ANALITICO 1
1.1. Introduccin a la Qumica Analtica 1
1.2. Objetivo, finalidad y metodologa de la Qumica Analtica 3
1. 3. Parmetros de calidad de un mtodo analtico 11
1.3.1. Propiedades analticas supremas 11
1.3.2. Propiedades analticas bsicas 12
1.3.3. Propiedades analticas complementarias 16
1.4. Fuentes bibliogrficas 19

TEMA 2. EL MUESTREO Y LA PREPARACIN DE LA MUESTRA 20


2.1. La toma de muestra. 20
2.2. Clasificacin de las muestras. 21
2.3. Plan de muestreo. 25
2.4. Mtodos y equipos para la toma de muestra. 27
2.5. Preparacin de las muestras de laboratorio 34
2.6. Transporte y conservacin de la muestra. 39
2.7. Preparacin de la muestra para el anlisis. 39
2.7.1. Disolucin 43
2.7.2. Mineralizacin 44
2.7.3. Extraccin 46
2.7.3.1. Extraccin lquido-lquido clsica 47
2.7.3.2. Extraccin slido-lquido clsica con Soxhlet 49
2.7.3.3. Extraccin con disolventes asistida por microondas 50
2.7.3.4. Extraccin en fase slida 51
2.7.3.5. Microextraccin en fase slida 53
2.8. Fuentes bibliogrficas 56
TEMA 3. MTODOS VOLUMTRICOS DE ANLISIS 57
3.1. Fundamento de los mtodos volumtricos. 57
3.1.1. Procedimientos de valoracin 59
3.1.2. Propiedades generales de las sustancias tipo patrn primrio 61
3.2. Aplicaciones de las volumetrias cido-base 63
3.2.1. Caractersticas de los indicadores cido-base 63
3.2.2. Determinacin de nitrgeno. Mtodo de Kjeldahl 64
3.2.3. Determinacin de mezclas de carbonatos (NaCO3; NaHCO3 y NaOH) 66
3.3. Aplicaciones de las volumetras de formacin de complejos 67
3.3.1. Constantes de estabilidad 67
3.3.2. Reacciones parsitas o laterales 68
3.3.3. Constantes condicionales de estabilidad 68
3.3.4. Caractersticas de los indicadores metalocrmicos 68
3.3.5. Valoraciones con AEDT 69
3.4. Reacciones en medio heterogneo 72
3.4.1. Producto de solubilidad 72
3.4.2. Factores que afectan al equilibrio de una reaccin de precipitacin 73
3.4.3. Sistemas indicadores del punto final 74
3.5. Aplicaciones de los mtodos gravimtricos 77
3.6. Volumetras de oxidacin-reduccin 78
3.6.1. Sistemas indicadores qumicos 80
3.6.2. Uso de los reactivos oxidantes y reductores 82
3.6.2.1. Determinacin de reductores 83
3.6.2.2. Determinacin de oxidantes. Valoracin indirecta con KI.
Mtodos yodomtricos. 84

3.7. Fuentes bibliogrficas 86

VI
ndice

TEMA 4. INTRODUCCIN AL ANLISIS INSTRUMENTAL 87


4.1. Trazabilidad e incertidumbre. 87
4.1.1. Concepto de trazabilidad. 87
4.1.2. Caractersticas de la calibracin 89
4.1.3. Concepto de incertidumbre 90
4.1.4. Tipos de estndares y su trazabilidad. 91
4.2. Calibracin de patrn externo. 93
4.3. Calibracin de adicin estndar 95
4.4. Calibracin con patrn interno 96
4.5. Seales y ruido 97
4.6. Analizadores de procesos industriales. 100
4.6.1. Definicin y caractersticas de los analizadores de procesos. 100
4.6.2. Clasificacin de los analizadores de procesos. 102
4.6.3. Componentes de un analizador y sistemas de transporte. 107
4.7. Analizador contnuo de flujo no segmentado 109
4.7.1. Fundamento del anlisis por inyeccin en flujo (FIA) 109
4.7.2. Factores que afectan a la dispersin 111
4.7.3. Instrumentacin en FIA 112
4.7.4. Aplicaciones de FIA 114
4.8. Bibliografa 116
TEMA 5. INTRODUCCIN A LOS MTODOS ESPECTROSCPICOS 117
5.1. Teora de la radiacin electromagntica. 117
5.1.1. Espectro electromagntico. 119
5.1.2. Transformacin de la energa. 121
5.1.3. Pureza espectral. 122
5.2. Absorcin y emisin de radiacin. 123
5.2.1. Absorcin de la radiacin. 124
5.2.2. Emisin de la radiacin. 126
5.3. Procesos de relajacin. Mtodos luminiscentes. 127
5.3.1. Fluorescencia no resonante. 130
5.4. Refraccin de la radiacin. 131
5.5. Reflexin de la radiacin. 133
5.6. Fuentes de radiacin. 133
5.7. Lser. 136
5.8. Selector de longitud de onda. 137
5.8.1. Filtros de absorcin y de interferencia. 138
5.8.2. Monocromadores. 139
5.9. Cubetas o celdas. 141
5.10. Detectores de fotones o fotoelctricos. 141
5.10.1. Fototubo de vaco. 141
5.10.2. Tubos fotomultiplicadores. 142
5.10.3. Detectores de diodos en serie. 143
5.10.4. Detectores multicanal de transferencia de carga. 144
5.11. Detector trmico o de calor. 145
5.12. Fibras pticas. 146
5.13. Bibliografa 148

TEMA 6. MTODOS ESPECTROMTRICOS DE ANLISIS MOLECULAR 149


6.1. Ley de Beer 149
6.2. Diseo de instrumentos para absorcin molecular. 151
6.3. Aplicaciones de la espectrometra de absorcin molecular UV-Vis. 156

VII
ndice

6.4. Aplicaciones de espectrometra de absorcin molecular IR. 159


6.5. Aplicaciones de espectrometra de fluorescencia molecular. 164
6.6. Bibliografa 168
TEMA 7. MTODOS ESPECTROMTRICOS DE ANLISIS ELEMENTAL 169
7.1. Generalidades de la espectroscopa de anlisis elemental. 169
7.2. Mtodos de introduccin de muestra. 171
7.3. Mtodos de atomizacin. 176
7.3.1. Atomizacin electrotrmica. 177
7.3.2. Atomizacin con llama. 180
7.3.3. Atomizacin con plasma 183
7.4. Instrumentacin en espectrometra de absorcin atmica (AAS).
Aplicaciones. 187
7.4.1. Fuentes de radiacin 188
7.4.2. Sistemas de atomizacin 191
7.4.3. Espectrofotmetros 191
7.5. Interferencias qumicas en espectrometra de absorcin atmica (AAS). 194
7.6. Instrumentacin en espectrometra de emisin atmica (AES).
Aplicaciones. 196
7.7. Interferencias qumicas en espectrometra de emisin atmica (AES). 203
7.8. Bibliografa 204
TEMA 8. MTODOS CROMATOGRFICOS DE ANLISIS I 205
8.1. Generalidades de la cromatografa 205
8.2. Clasificacin de los mtodos cromatogrficos. 206
8.2.1. Mecanismos de separacin. 206
8.2.2. Mtodos de anlisis cromatogrfico. 207
8.2.3. Clasificacin de acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico. 208
8.2.4. Clasificacin segn la naturaleza fsica de las fases. 208
8.3. Parmetros bsicos en cromatografa. 209
8.4. Aplicaciones: anlisis cualitativo y cuantitativo. 212
8.5. Cromatografa de gases (Gas-Lquido) 213
8.6. Instrumentacin en cromatografa de gases. 214
8.6.1. Gas portador. 215
8.6.2. Sistemas de inyeccin 216
8.6.3. Modos de inyeccin. 218
8.6.4. Columnas cromatogrficas. 222
8.6.5. Control de la temperatura. 227
8.6.6. Seleccin del detector. 229
8.6.7. Detector de ionizacin de llama (FID). 230
8.6.8. Detector de captura electrnica (ECD). 232
8.6.9. Detector de emisin atmica (AED). 234
8.7. Acoplamiento CG-espectrometra de masas (MS). 236
8.7.1. Ionizacin por impacto electrnico. 237
8.7.2. Analizador de trampa de iones. 239
8.7.3. Analizador de cuadrupolo. 240
8.7.4. Detectores 241
8.8. Bibliografa 245
TEMA 9. MTODOS CROMATOGRFICOS DE ANLISIS II 246
9.1. Fundamento de la cromatografa lquida (LC). 246
9.2. Clasificacin de los mtodos de cromatografa lquida. 247
9.2.1. Mecanismos de separacin. 247
9.3. Cromatografa de lquidos de fase enlazada 251

VIII
ndice

9.4. Modos de operacin. 252


9.5. Instrumentacin bsica en HPLC 255
9.5.1. Fase mvil. 256
9.5.2. Modos de elucin. 258
9.5.3. Sistemas de bombeo. 260
9.5.4. Control de gradiente. 264
9.5.5. Sistemas de inyeccin. 265
9.5.6. Columna 266
9.5.7. Sistemas de deteccin. 270
302
9.6. Acoplamiento de LC y espectrometra de masas (MS). 274
9.6.1. Termospray. 275
9.6.2. Ionizacin qumica a presin atmosfrica (APCI). 275
9.6.3. Electrospray (ESI). 277
9.6.4. Analizador de triple cuadrupolo. 278
9.6.5. Analizador de tiempo de vuelo (TOF). 280
9.6.6. Analizador hbrido cuadrupolo tiempo de vuelo (QTOF). 281
9.6.7. Cromatografa lquida en el control de procesos. 281
9.7. Bibliografa 284
TEMA 10. SENSORES ELECTROANALTICOS 285
10.1. Fundamento de los sensores electroanalticos (ISE). 285
10.2. Clasificacin de lo sensores potenciomtricos. 287
10.3. Electrodo de vidrio para medir pH. 288
10.3.1. Errores en la medida de pH con electrodo de vidrio 290
10.4. Electrodos de vidrio selectivos de iones. 291
10.5. Electrodos selectivos de iones en estado slido cristalizado. 292
10.6. Electrodos selectivos de iones de matriz lquida. 294
10.7. Electrodos selectivos de iones sensibles a gases. 296
10.8. Biosensores. 298
10.9. Aplicaciones de los sensores potenciomtricos. 299
10.10. Sensores amperomtricos. 300
10.11. Bibliografa

IX
TEMA 1. Proceso Analtico

TEMA 1. EL PROCESO ANALTICO


Objetivos
Definir las Tcnicas Analticas, ofreciendo una visin
actual de las mismas.
Exponer sistemticamente las etapas generales de los
procesos analticos llevados a cabo dentro y fuera del
laboratorio.
Emplear ejemplos para ofrecer una panormica general
de cmo se obtienen los resultados analticos.
Comparar la informacin requerida y la suministrada por
el laboratorio analtico.
Diferenciar y definir las propiedades analticas que
afectan a la calidad del resultado y del procedimiento en
un anlisis qumico.

1.1. Introduccin a la Qumica Analtica.


En la primera mitad del siglo XX, la Qumica analtica se
centra en los mtodos analticos clsicos basados en los
equilibrios en disolucin, la introduccin de reactivos
orgnicos, el desarrollo del microanlisis y las marchas
sistemticas de identificacin, los mtodos volumtricos de
anlisis, la electrogravimetra, las extracciones con
disolvente, el cambio inico, etc. Tras la segunda guerra
mundial se entr en un perodo que se podra calificar de
Ciencia Metrolgica en el que destaca la utilizacin de
instrumentacin cada vez ms sofisticada (cromatogrficas,
espectroscpicas, espectromtricas, electroanalticas). El
desarrollo de la Qumica analtica contina en el siglo XXI y
se caracteriza por los avances en otras reas en las que
aparecen nuevas herramientas y recursos analticos como
es el caso de la tecnologa lser, la automatizacin, los
sensores, la miniaturizacin, la especiacin, la quimiometra,
el control de procesos y de calidad, la utilizacin de robots,

1
TEMA 1. Proceso Analtico

redes neuronales, tcnicas de screening, etc. De ah que


mantenga una relacin multidireccional y simbitica con
otras reas cientfico-tcnicas, como la Qumica Fsica,
Biologa, Ciencias de la Salaud, Matemticas, Informtica o
Ingeniera, y que deba mantener fructferas relaciones con
mbitos socio-econmicos que generan problemas analticos
o de I+D+i. En la figura 1.1. se muestran ejemplos de
aplicabilidad de la Qumica Analtica.

Problema cientfico, Problema


tcnico, econmico o social analtico

Identificacin y determinacin de especies


contaminantes orgnicas e inorgnicas en
Contaminacin de un ro
el agua del ro

Determinacin de CO y H2 por riesgo de


Proceso de combustin explosin. Matriz: gas efluente.

Adulteracin de aceite de Determinacin de grasas vegetales y


oliva con otras grasas animales en el aceite

Toxicidad de juguetes para Determinacin de Cd en las pinturas


bebs amarillas de los juguetes

Fig. 1.1. Problemas reales que justifican problemas


analticos actuales.

La evolucin histrica de la Qumica analtica proporciona


muchas y variadas definiciones, entre las que se pueden
destacar las siguientes:
La Qumica Analtica es una disciplina cientfica que
desarrolla y aplica mtodos, instrumentos y estrategias para
obtener y evaluar informacin sobre la naturaleza y

2
TEMA 1. Proceso Analtico

composicin de la materia en el espacio y en el tiempo.


Definicin del WPAC (Working Party on Analytical
Chemistry), Edimburgo, 1993.
La Qumica Analtica es una ciencia metrolgica que
desarrolla, optimiza y aplica herramientas (materiales,
metodolgicas y estratgicas) de amplia naturaleza, que se
concretan en procesos de medida encaminados a obtener
informacin (bio)qumica de calidad, tanto parcial
(presencia/concentracin en muestras de especies-analitos
(bio)qumicos) como global sobre materias o sistemas de
amplia naturaleza (qumica, bioqumica, biolgica) en el
espacio y en el tiempo para resolver problemas cientficos,
tcnicos econmicos y sociales. Definicin de M. Valcarcel
Principios de Qumica Analtica Springer, Barcelona 1999.
TRAC (Trends in Analytical Chemistry) 16(3),124-131 (1997)

1.2. Objetivo, finalidad y metodologa de la Qumica


Analtica
En respuesta a las demandas de informacin analtica cada
vez ms exigentes en el siglo XXI, los objetivos de las
determinaciones analticas han evolucionado de forma
espectacular siguiendo diversas directrices. En ellas tiene
cabida la demanda de informacin analtica cualitativa
(respuestas binarias Si/No) la informacin cuantitativa; la
repercusin de la incertidumbre de los resultados; la
creciente importancia de factores como el tiempo, el
esfuerzo personal, el riesgo o el coste de los materiales y del
anlisis; o la informacin analtica obtenida fuera del
laboratorio (desde el muestreo hasta la implantacin de
analizadores de procesos industriales, sistemas de control
de contaminacin automatizados y/o miniaturizados).
La Qumica analtica es una ciencia experimental cuyo
objeto de estudio es la materia y, basndose en principios
qumicos, fsicos y matemticos, establece las estrategias
para separar, identificar y determinar las cantidades relativas

3
TEMA 1. Proceso Analtico

de los componentes que forman una muestra (analitos),


como se puede observar en la figura 1.2.

Objeto: la materia

CIENCIA Principios: qumicos-fsicos-matemticos

Mtodos: estrategias de anlisis

PROCESOS EN QUMICA ANALTICA

SEPARACIN
Cantidades relativas de los componentes (analitos)
IDENTIFICACIN que forman una muestra de materia
DETERMINACIN

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL RESULTADO FINAL

SELECTIVIDAD Identificacin y anlisis del analito sin interferencias


SENSIBILIDAD Cantidad de analito ms pequea que puede determinarse
SIMPLICIDAD Se requiere poca especializacin del analista
INSTRUMENTACIN Disponer de la adecuada

METODOLOGA ANALTICA

MTODOS CUALITATIVOS Proporcionan informacin sobre la identidad de los analitos


MTODOS CUANTITATIVOS Proporcionan informacin sobre la cantidad de los analitos

Fig. 1.2. Conceptos bsicos relacionados con la Qumica


Analtica.

La Qumica Analtica actual es una ciencia multidisciplinar


que tienes tres finalidades fundamentales:
1. Obtener informacin qumica sobre los sistemas
materiales: composicin, estructura, distribucin, etc.
2. Desarrollar mtodos de medida (mtodos, tcnicas y
procedimientos analticos) que permiten la obtencin
de informacin.

4
TEMA 1. Proceso Analtico

3. Construir modelos que justifiquen la aplicacin


generalizada de los mtodos de medida.
En la figura 1.3. se muestra la clasificacin de los mtodos
analticos.

CLASIFICACIN CRONOLGICA

1. CLSICOS. Cuali o cuantitativos. Hacen uso de reacciones qumicas y


requieren la observacin de sus propiedades.

2. INSTRUMENTALES. Cuali o cuantitativos. Miden propiedades fsicas de los


analitos mediante instrumentos.

CLASIFICACIN DE MTODOS INSTRUMENTALES (segn la naturaleza de la medida)

GRAVIMTRICOS. Determinacin de la masa.

VOLUMTRICOS. Medida del volumen

ESPECTROSCPICOS. Medida de la interaccin de la radiacin electromagntica con


la materia.

DE SEPARACIN. Mtodos cromatogrficos

ELECTROANALTICOS. Medida de propiedades elctricas

Fig. 1.3. Clasificacin de los mtodos utilizados en anlisis


qumico.

La metodologa analtica responde a dos preguntas simples:


qu hay? y cunto hay? que se refleja en el esquema de
la figura 1.4.

5
TEMA 1. Proceso Analtico

Qu es esto?
Cunto hay de cada
De qu componentes est componente en la muestra?
constituida esta muestra?

IDENTIFICACION o
CARACTERIZACIN DETERMINACIN
Simple reconocimiento de los tipos Medida Cuantitativa de un
de especies o elementos presentes componente en una muestra
en una muestra

ANLISIS CUALITATIVO ANLISIS CUANTITATIVO

Fig. 1.4. Metodologa analtica segn la informacin


requerida.

La estrategia analtica es el conjunto de operaciones que


definen el procedimiento a seguir por el analista/ingeniero
qumico. En la figura 1.5. se pueden ver las etapas que
conforman la metodologa de anlisis qumico para la
resolucin de problemas.

EL PROCESO ANALTICO

PROBLEMA MUESTRA MEDICIN DATOS RESULTADOS INFORMACIN

ANALTICO

TOMA Y
TOMA Y
- DESARROLLO Y INTERPRETACIN
TRATAMIENTO TRATAMIENTO
OPTIMIZACIN DEL
MTODO
- CALIBRACIN

Fig. 1.5. Estrategia general del proceso analtico.

6
TEMA 1. Proceso Analtico

La primera etapa comienza con las operaciones previas de


la toma y tratamiento de la muestra, siendo una de las
etapas del proceso analtico que consume mayor tiempo y
tiene una gran repercusin en la calidad de los resultados.
Implica diversas subetapas, aunque no siempre son todas
necesarias:
- Toma de muestra: estrategia de muestreo
- Medida de la muestra (peso, volumen)
- Secado
- Trituracin, tamizado
- Homogeneizacin
- Conservacin
- Disolucin/disgregacin
- Eliminacin de la materia orgnica
- Separacin/concentracin
- Reacciones analticas
- Transporte/introduccin de la muestra en el instrumento de
medida de la seal.
La segunda etapa es la medicin y transduccin de la seal
analtica se lleva a cabo mediante diferente instrumentacin
que se clasifica segn los criterios mostrados en el grfico
de la figura 1.6. Las seales medidas en el instrumento
pueden basarse en las caractersticas q umicas (reactividad)
o fsico-qumicas de los analitos. Los instrumentos cuya
naturaleza implica los sentidos humanos incluyen los
mtodos volumtricos. Los instrumentos pasivos producen
una seal no provocada, como la masa en la balanza. Los
instrumentos activos, en cambio, producen una seal
provocada, como en fotometra. Algunos slo necesitan
calibracin instrumental (primarios), como la balanza,
mientras que los instrumentos relativos hacen uso tanto de
la calibracin instrumental como de la metodolgica, de las
que se hablar en el captulo 4.
Las seales instrumentales pueden ser de naturaleza
variada dando lugar a diferentes instrumentos en concepcin
y diseo, como se refleja en la tabla 1.1.

7
TEMA 1. Proceso Analtico

Ins trumentos S entidos humanos


pticos
E lectroqumicos
S egn P as ivos
Ms icos
naturalez a

s e z a
d e ura le
T rmicos

na t e g n

( re

S e litos )
s

a n c ion e
a le

ac

g
Activos

a
Magnticos

n
O tros

s
INS T R UME NT O S

pro s d e s
ra
a n e s o l
S e id a d

e ta n ot
fin a l tic a
C uantitativos


a na

g n

ic o
l

pa
Independientes

c
a l t
C ualitativos

Se
(offline)
Mixtos S egn Integrados
E s tructurales calibracin (online)

P rimarios R elativos

Fig. 1.6. Criterios de clasificacin de los instrumentos


analticos.

La tercera etapa es la toma y tratamiento de datos. La


adquisicin de datos puede ser manual o automtica
mediante un ordenador en interfase con el instrumento de
medida. El tratamiento estadstico de resultados se lleva a
cabo mediante softwares informticos apropiados que
validan la calidad del mtodo en trminos de precisin,
exactitud, etc.
La cuarta etapa es la interpretacin de los resultados para
generar informacin. Los resultados analticos interpretados
son la informacin que se necesita para resolver un cierto
problema o, al menos, para la toma de decisiones por parte
del organismo o persona que solicita estos resultados. No
siempre los resultados obtenidos conducen a la solucin
esperada y es preciso replantear el problema, formulando
nuevas preguntas y estrategias.

8
TEMA 1. Proceso Analtico

Tabla 1.1. Clasificacin de diversos instrumentos de uso


habitual en el laboratorio

Instrumento 1 2 3 4 5 6

Balanza msico Instrumento pasivo Fuera de lnea primario cuantitativo


propiamente
dicho

Bureta manual Volumen Instrumento pasivo Fuera de lnea primario cuantitativo


(msico) propiamente
dicho

Bureta Volumen Instrumento pasivo Fuera de lnea primario cuantitativo


automtica (msico) propiamente
dicho
Fotmetro ptico Instrumento activo Fuera de lnea / relativo cuantitativo
(UV-visible) propiamente en lnea
dicho (cromatgrafo)

Espectrofotm ptico Instrumento activo Fuera de lnea relativo Cualitativo


etro de propiamente y
emisin dicho cuantitativo
atmica
Potencimetro electroanaltico Instrumento pasivo Fuera de lnea Relativo cuantitativo
(medidas de propiamente (especial)
pH, pM) dicho

Para resolver un problema la informacin qumica tiene que


interpretarse para que sea informacin utilizable por el
usuario tal como se observa en el ejemplo real abordado
mediante el proceso analtico (figura 1.7.). Primeramente se
establece un dilogo con el cliente para recavar informacin
sobre el anlisis (que puede haberse hecho anteriormente,
por lo que habr bibliografa, o ser la primera vez que se
lleva a cabo). En ocasiones la empresa donde trabaja el
ingeniero qumico proporciona los datos solicitados sobre el
producto y calidad del proceso de manufactura, el grado de
contaminacin de sus efluentes en el medioambiente, etc.

9
TEMA 1. Proceso Analtico

Fig. 1.7. Diagrama de flujo de un enfoque analtico a la


solucin de un problema real. A la izquierda se refleja las
relaciones establecidas entre el cliente (que plantea el
problema) y el analista (que resuelve el problema analtico
en el laboratorio). A la derecha queda reflejado un ejemplo
real de problema analtico.

Otros ejemplos de procesos analticos vinculados a


problemas socioeconmicos reales pueden ser los
siguientes:
Adulteracin de aceite de oliva: determinacin grasas
vegetales y animales.
Determinacin de Cadmio en juguetes.
Determinacin de cafena en chocolate.
Determinacin de metales en aguas.

10
TEMA 1. Proceso Analtico

Determinacin de metilmercurio en pescados y


mariscos.
Anlisis de carbono medioambiental y demanda de O2
Determinacin de slice en rocas.
Determinacin de la dureza de un agua.

1.3. Parmetros de calidad de un mtodo analtico

Los parmetros de calidad de los mtodos analticos, son los


criterios, expresados en trminos cuantitativos, que permiten
decidir sobre el mtodo analtico ms adecuado para
resolver un determinado problema. Su objetico es la
validacin del mtodo analtico para probar de forma
documentada que el mtodo analtico se ajusta al fin al que
se destina. La validacin es un proceso que tiene dos metas:
1. Definir y asegurar la calidad de la informacin
analtica generada (resultados, informes) a travs de
las propiedades analticas supremas, bsicas y
complementarias.
2. Galantizar la coherencia entre la informacin analtica
generada y las necesidades planteadas por la
sociedad, industria, comercio, ciencia y tecnologa.

1.3.1. Propiedades analticas supremas

La exactitud es el grado de concordancia entre los valores


reales y los valores medidos. Para evaluarla se utilizan
materiales de referencia certificados o mtodos de referencia
oficiales. Describe si el resultado experimental obtenido es
correcto. Se caracteriza por el error sistemtico (desvos
constantes) y se expresa como error absoluto (Ea) o como
error relativo (Er), que aparecen fruto de calibraciones

11
TEMA 1. Proceso Analtico

inadecuadas, de la pureza de los reactivos o de medidas


instrumentales incorrectas.

X X
Ea X X Er x 100
X
La representatividad es el grado de coherencia,
concordancia y consistencia de resultados. Tiene como
soporte bsico un muestreo adecuado y se relaciona con
todo el proceso analtico.

1.3.2. Propiedades analticas bsicas

La precisin es el grado de concordancia entre un grupo de


resultados obtenidos al aplicar repetitiva e
independientemente el mismo mtodo analtico a alcuotas
de la misma muestra. Se relaciona con el error aleatorio
(error experimental) y se expresa como desviacin estndar
(s), varianza (s2), desviacin estndar relativa (RSD) o
coeficiente de variacin (CV).

in1 xi x in1 xi x
2 2

s s
2

n 1 n 1
s
RSD CV x100
x

La precisin se puede evaluar en trminos de:


Repetibilidad: resultados obtenidos con experimentos
independientes utilizando el mismo mtodo, analista,
instrumento, reactivos en un mismo intervalo de tiempo.

12
TEMA 1. Proceso Analtico

Reproducibilidad: dispersin de resultados de ensayos


independientes aplicando el mismo mtodo a la muestra
pero variando alguno de los factores anteriormente
mencionados (diferentes laboratorios o analistas o
instrumentos o intervalo de tiempo).
La sensibilidad expresa la capacidad de un mtodo para
poder detectar (cualitativamente) y determinar
(cuantitativamente) pequeas cantidades de analito en la
muestra. Es la razn entre el incremento de la seal y el
incremento de la concentracin del analito.
La sensibilidad de calibracin representa la relacin entre la
seal y la concentracin y se expresa como la pendiente de
la recta de calibrado (y=a + bx).
Y-a
b
x
La sensibilidad de calibrado no tiene en cuenta la precisin,
entonces se define la sensibilidad analtica como el cociente
entre la pendiente de la recta del calibrado y la desviacin
estndar de las seales. La sensibilidad analtica es
insensible a los factores de amplificacin que puede sufrir la
seal analtica.
b

Ss
Segn el ejemplo de la figura 1.8., en las tcnicas
espectroscpicas de emisin se puede aumentar la
sensibilidad incrementando el voltaje aplicado al tubo
fotomultiplicador (a), pero tambin aumenta el ruido de fondo
(b), situacin que se traduce en una sensibilidad constante,
que no vara con la amplificacin.

13
TEMA 1. Proceso Analtico

(a) (b)
590v
590v

Emisin
560v

Seal
515v 515v

1 emisin tiempo

Fig. 1.8. Espectro de emisin fluorescente a diferentes


voltajes (a). Fluctuacin de la seal en el mximo de emisin
a lo largo del tiempo (b)

El lmite de deteccin se refiere a la mnima cantidad de


analito que puede detectarse para un nivel de confianza
dado; corresponde a: Aquella concentracin que proporciona
una seal (y) en el instrumento significativamente diferente
de la seal de un blanco o del ruido o seal de fondo.
Se consideran seales tres veces superiores a la seal del
ruido de la lnea de base. El clculo de la seal
correspondiente al lmite de deteccin (YLD) se lleva a cabo
mediante la medida media del blanco ( Yblanco ) ms tres veces
la desviacin estndar del blanco ( 3S blanco ).

YLD Yblanco 3S blanco


El lmite de deteccin se expresa en trminos de
concentracin (XLD), sustituyendo el valor de (YLD) en la recta
de calibrado (Y=a+bx).
(Yblanco 3Sblanco ) a
X LD
b
El lmite de cuantificacin hace referencia al lmite ms bajo
para determinaciones cuantitativas precisas. Se consideran

14
TEMA 1. Proceso Analtico

seales diez veces superiores a la seal del ruido de la lnea


de base, y se expresa como:

YLQ Yblanco 10 S blanco


El lmite de deteccin se expresa en trminos de
concentracin (XLQ), sustituyendo el valor de (YLQ) en la
recta de calibrado (y=a+bx).

(Yblanco 10Sblanco ) a
X LQ
b
Otros parmetros relacionados con las propiedades
analticas bsicas son:
La linealidad, que mide el ajuste de la relacin entre la seal
analtica y la concentracin con un modelo lineal.
El intervalo de concentracin aplicable es el intervalo
comprendido entre la concentracin ms pequea con la que
pueden realizarse medidas cuantitativas, hasta la
concentracin a la cual la recta se desva de la linealidad. Es
el tramo en el cual la pendiente permanece constante (figura
1.9.).

Seal
Intervalo aplicable

XLQ Concentracin

Fig. 1.9. Intervalo aplicable para el calibrado, en el que se


establece un tramo lineal con pendiente constante y cuyo
inicio puede coincidir con el lmite de cuantificacin (XLQ).

15
TEMA 1. Proceso Analtico

La robustez es la cualidad de un mtodo analtico que mide


su capacidad de resistir pequeos cambios en las
condiciones operacionales sin que su funcionamiento se vea
alterado.

1.3.3. Propiedades analticas complementarias

La selectividad se define como la capacidad de un mtodo


analtico para originar resultados que dependan de forma
exclusiva del analito/s para su identificacin o cuantificacin
en la muestra. Soporta directamente a la exactitud ya que
las interferencias causan errores sistemticos que alejan
(por exceso o defecto) al resultado del valor considerado
como verdadero. Estas referencias pueden ser de distintos
tipos:
- Interferencias de origen qumico, por ejemplo, la
especie qumica perturbadora origina una reaccin
coloreada con un reactivo o ligando similar a la que
produce el analito de la muestra.
- Interferencias de origen fsico, por ejemplo la presencia
de partculas en suspensin en una muestra puede
causar dispersin de la radiacin cuando se realizan
medidas de intensidad de fluorescencia del analito o su
producto de reaccin.
- Interferencias de origen instrumental, consecuencia del
control inadecuado del caudal y/o temperatura en
cromatografa de gases.
- Interferencias de signo positivo (por exceso). Como la
interferencia qumica
- Interferencias de signo negativo (por defecto), por
ejemplo, la presencia de una especie enmascarante

16
TEMA 1. Proceso Analtico

que reacciona competitivamente con el analito por el


reactivo.
- Interferencias con el mismo mecanismo como para que
se produzca la seal del analito (como la interferencia
qumica).
- Interferencias con diferente mecanismo como para que
se produzca la seal del analito (como la interferencia
fsica).
- Interferencias con efecto aditivo, causadas por
especies con independencia de la concentracin del
analito.
- Interferencias con efecto proporcional, cuyo efecto
perturbador depende de la concentracin del analito, y
hace aumentar o disminuir la sensibilidad segn la
pendiente del calibrado
- Interferencias con efecto mltiple que implican tanto
errores aditivos como proporcionales.
Una informacin analtica suministrada fuera de plazo es
intil y por tanto de mala calidad, por tanto la rapidez es una
propiedad importante atribuible al proceso analtico que
define globalmente la productividad del laboratorio. Se
refiere al tiempo de anlisis y se expresa como frecuencia de
muestreo (): Nmero de muestras (n) procesadas de forma
completa, desde su muestreo, hasta la consecucin del
resultado en un perodo dado de tiempo (ej. 1 hora).

= n.h-1
El valor econmico de cada anlisis es un elemento
sustancial de la productividad del laboratorio. Con frecuencia
los costes se convierten en un parmetro prioritario y pueden
clasificarse segn varios criterios como costes generales
(relacionados con el montaje y mantenimiento del laboratorio
de anlisis), especficos (se refieren al precio de los
anlisis), fijos (relacionados con la instrumentacin del

17
TEMA 1. Proceso Analtico

laboratorio) y variables (relativas a la contratacin de


personal) como se muestra en la figura 1.10. Se expresa en
moneda/ resultado o muestra, en hombres/hora, etc.

instrumentacin

GENERALES FIJOS

MONTAJE, PERSONAL Y COSTES


MANTENIMIENTO

ESPECFICOS VARIABLES

PRECIO DEL ANLISIS personal

Fig. 1.10. Propiedad analtica complementaria de costes.

La automatizacin aumenta los gastos fijos (relacionados


con una instrumentacin cara, til para gran cantidad de
muestras cuando se exige rapidez en la medida) y disminuye
los gastos variables (derivados de una reduccin de
personal).
El personal es un aspecto prctico de gran trascendencia
que caracteriza al proceso analtico. Se puede dividir en dos
grupos: El primero, relacionado con la seguridad del
operador, personal del laboratorio y medio ambiente
(desechos); y el segundo, relacionado con la comodidad del
personal del laboratorio (evitar tareas tediosas, que
impliquen estrs, etc.)

18
TEMA 1. Proceso Analtico

1.4. Fuentes bibliogrficas

D. C. HARRIS "Anlisis Qumico Cuantitativo" 3 Ed. Ed.


Revert S.A. Barcelona (2007).

M. VALCARCEL "Principios de Qumica Analtica" Springer,


Barcelona (1999).

R. KELLNER, J.M. MERMET, M.OTTO, M. VALCRCEL y


H.M.WIDMER Analytical Chemistry 2 Ed Wiley-VCH. New York
(2004).

19
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

TEMA 2. EL MUESTREO Y LA PREPARACIN DE LA


MUESTRA
Objetivos
Resaltar la importancia de la toma de muestra dentro
del proceso analtico y su influencia en la calidad del
resultado final.
Destacar las principales estrategias de toma de
muestras slidas, lquidas y gaseosas.
Conocer los mtodos ms comunes utilizados para
disolver muestras.
Adquirir los conceptos bsicos de las distintas tcnicas
de extraccin.

2.1. La toma de muestra.


El muestreo es la primera de las subetapas de las
operaciones previas del proceso analtico (Figura 2.1.) y est
relacionado con la calidad de dicho proceso, desde la
recogida de la muestra, pasando por su recepcin en el
laboratorio, donde es almacenada antes y despus del
anlisis. El objetivo final de la garanta de calidad en los
laboratorios analticos es obtener informacin con la calidad
requerida para la toma de decisiones correctas. La muestra
debe ser debidamente registrada y codificada en el momento
de su recepcin en el laboratorio y tambin tras ser
analizada, ya que puede afectar a la calidad y significado de
los resultados analticos.
El objetivo del muestreo es separar de una cantidad grande
de material (objeto) una muestra reducida (alcuota) que
tenga la misma composicin que el conjunto del que ha sido
tomada (muestra representativa: rplica en miniatura del
sistema real). A continuacin tendr lugar la transformacin
en la forma qumica y fsica (slido, lquido y gas) y las
concentraciones adecuadas al mtodo analtico que se va a

20
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

emplear. Despus se produce, si es posible, la extraccin


del analito de inters o de especies interferentes en las
medidas analticas. El paso siguiente es el homogeneizado
de la muestra para el anlisis (pulverizado de slidos,
homogeneizado de mezclas y disoluciones) (figura 2.1.).

Homogeneizacin
Medida de Secado
Masa/Volumen Triturado
Muestreo Tamizado

Pretratamiento Conservacin
Disolucin
Muestra Disgregacin
Destruccin
Tcnicas de materia orgnica
Separacin
Reacciones no
analticas
Reacciones
analticas
Medida
Volumen/Masa Transporte
Introduccin al
Instrumento

Instrumento

Fig. 2.1. Subetapas de las operaciones previas del proceso


analtico.

2.2. Clasificacin de las muestras.


Existen diversos criterios para clasificar las muestras:
a) Segn el tamao de muestra inicial.
Condiciona el tipo de anlisis a realizar (Figura 2.2.). La
dificultad aumenta al disminuir el tamao de muestra,
aunque las nuevas tecnologas (balanzas, microbalanzas,
etc.) han hecho posible el anlisis de muestras de tamao
del orden de g con suficiente fiabilidad.

21
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

0,001g 0,01g 0,1 g

Ultramico Micro Semimicro Macro


anlisis anlisis anlisis anlisis

Fig. 2.2. Clasificacin de la muestra segn el tamao inicial

b) Segn la proporcin relativa de los analitos en la muestra.


Pueden diferenciarse tres tipos de determinacin a
realizar (Figura 2.3.) Tambin aqu la dificultad aumenta al
disminuir la concentracin de analito a determinar.

0,01% 1%

Trazas Micro Macro


Componentes Componentes

DETERMINACIONES

Fig. 2.3. Clasificacin de la muestra segn la proporcin


relativa de analito.

La combinacin de estas dos clasificaciones da lugar a


situaciones de complejidad creciente desde la
determinacin de macrocompuestos (>1%) en
macromuestras (>0.1g) y hasta la determinacin de trazas
(<0.01%) de analitos en ultramicromuestras (<0.001g).

c) Segn la forma de la toma de muestra.


Muestra aleatoria: Cada parte de la poblacin tiene la misma
probabilidad de ser seleccionada. No es una muestra tomada

22
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

de forma casual, sino que deben utilizarse tablas de nmeros


aleatorios.
Muestra sistemtica o selectiva: Se toman con objeto de
reflejar o controlar alguna hiptesis sistemtica, como el
cambio en la composicin de la muestra con el tiempo, la
temperatura o la localizacin.
Muestra representativa: Muestra obtenida de una poblacin
que se supone tiene las propiedades promedio de dicha
poblacin. Pueden ser:
- Muestras definidas previamente por un organismo
oficial.
- Muestras de materiales homogneos.
Muestra compuesta o estratificada: Se obtienen reuniendo
varias porciones de muestras obtenidas por procedimientos
aleatorios (Figura 2.4.).

Objeto (lote)

Incrementos de muestra

Muestra bruta

Fig. 2.4. Muestra compuesta o estratificada de 3 zonas de


volmenes relativos (1:4:2).

Muestra de conveniencia: Considera diferentes criterios para


la toma de muestra como la accesibilidad, el coste, la
eficacia, etc., como la disponibilidad de muestras de una
lnea de proceso de produccin para control de calidad del
producto.
d) Segn el tamao y la proximidad al objeto se pueden
considerar dos tipos de muestreo aplicado a la

23
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

acumulacin de un componente de un producto en la


entrada de la fbrica Figura 2.5.):
A. Muestreo para obtener una composicin media o
global
B. Muestreo de su composicin discriminada
espacialmente (superficie, interior y fondo del lote).

A B

Muestra
lote

Muestra
bruta

Muestra
compuesta Reduccin
Reduccin

Muestra de
laboratorio

Reduccin Reduccin

Alcuota para
el proceso
analtico

Fig. 2.5. Muestreo para obtener informacin global (A) y


para informacin discriminada (B).

La IUPAC (International Union of Pure and Applied


Chemistry) recomienda la utilizacin de los siguientes
conceptos:
Lote / Objeto: Material completo del que se toma la
muestra.

24
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Muestra primaria bruta: De gran tamao y tomada para el


anlisis o almacenamiento.
Muestra agregada o compuesta: varias porciones de
muestra bruta.
Muestra de laboratorio: Muestra reducida tomada de la
muestra agregada o bruta que debe tener la misma
composicin.
Muestra test o alcuota: Tomada de la muestra de
laboratorio que es sometida al proceso de medida qumica
(PMQ), tras reduccin o adecuacin.

2.3. Plan de muestreo.


Un plan de muestreo es la estrategia seguida para obtener
una muestra bruta representativa, a partir de un lote y
responde de forma apropiada a las siguientes cuestiones
con ayuda de la estadstica de muestreo:

1.- En qu parte del material debe tomarse la muestra?

Dependiendo del tipo de muestra que se va a tomar, hay


dos procedimientos generales:
Muestras aleatorias: El lote se divide en un nmero de
segmentos reales o imaginarios y se recogen con ayuda
de una tabla de nmeros aleatorios, es decir, un conjunto
de cifras entre 0 y 9 cuyo orden no obedece ninguna regla
de formacin, que se pueden leer individualmente o en
grupos y en cualquier orden, en columnas hacia abajo,
columnas hacia arriba, en fila, diagonalmente. Si se desea
formar nmeros aleatorios en un determinado rango, basta
con calcular la proporcin, otra forma de usarlo es
sumando dos nmeros tomados de alguna posicin o
multiplicarlos.
Materiales estratificados: Se toma una muestra compuesta
que resulte lo ms representativa posible.

25
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

2.- Qu cantidad de muestra debe tomarse?

La cantidad de muestra necesaria que proporcione una


desviacin estndar de muestro (Sm) puede definirse
teniendo en cuanta la ecuacin siguiente:

m Sm2 = Ks

donde m es el peso de muestra analizada; Sm es la


desviacin estndar del muestreo (%) y Ks es la contante
de muestreo de Ingamells, caracterstica de cada material y
definida como la cantidad de masa requerida para limitar la
incertidumbre del muestreo al 1%.

3.- Cuntas porciones deben analizarse?

El nmero de muestras implica que el muestreo sigue una


distribucin gaussiana y se puede conocer el nmero de
muestras mnimo para limitar la incertidumbre, e, con un
nivel de significacin del 95%. Para ello se hace uso de la
siguiente expresin:

t Sm
2 2

n
e 2

donde n es el nmero de muestras a analizar; Sm es la


desviacin estndar del muestreo (%); t es el estadstico de
Student para el 95% de significacin y n-1 grados de
libertad y e es la incertidumbre basada en el valor medio.
Sm y e deben expresarse ambos como errores absolutos o
ambos como errores relativos.
La calidad del proceso analtico se ve afectada por el error
analtico que depende de la desviacin estndar del
proceso global (So) y considera dos desviaciones estndar:
- La naturaleza de la muestra, afectada por la desviacin
estndar del muestreo (Sm).

26
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

- El procedimiento analtico utilizado, afectado por su


desviacin estndar (Sa).
El error global se puede expresar en trminos de varianza
del siguiente modo:
So2 = Sm2+ Sa2

2.4. Mtodos y equipos para la toma de muestra.


Muchos de los protocolos de toma de muestra se encuentran
recogidos en diferentes normas de carcter internacional
(International Standard Organization, ISO, o American
standars and testing materials, ASTM). Adems se debe
considerar el estado fsico de la muestra (slido, lquido,
gas), diferentes aplicaciones (control de calidad, seguridad,
toxicidad medioambiental), los posibles riesgos de
contaminacin de la misma y la falta de representatividad.
Muestras slidas
Su mayor heterogeneidad obliga a disear cuidadosamente
la toma de muestra para evitar la falta de representatividad.
Los factores que deben considerarse son el estado de
agregacin (material particulado o compacto) y si la muestra
est en movimiento o es esttica.
Materia particulada en movimiento. Es muy importante
considerar el tamao de partcula en el diseo de la toma de
muestra. El muestreo de una muestra de un reactivo en una
cinta transportadora, puede llevarse a cabo de forma
automtica con un muestreador mecnico sin parar la cinta.
El muestreador toma una muestra unidireccional a intervalos
regulares de tiempo (figura 2.6.)

27
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

P1 P2 P3

P1 P2 P3

Fig. 2.6. Toma de muestra en una fraccin de tiempo


prefijada. Modelo dinmico con toma de muestra
unidireccional (arriba) y con toma de muestra bidireccional
(abajo).

Materia particulada esttica. Existe riesgo de falta de


representatividad debido a la distinta distribucin de
partculas. El muestreo puede ser: superficial o a diferentes
profundidades; o permitir buscar una composicin media de
una zona entre la superficie y una profundidad dada. Se
utilizan muestreadores tipo sonda como el de la figura 2.7.a
y los taladros de tornillo (figura 2.7.b). Son introducidos
verticalmente, de forma manual o mecnica, en la muestra a
la vez que se guan. La rotacin del cilindro interior abre y
cierra las hendiduras situadas a lo largo de la vaina del
cilindro externo.

Fig. 2.7. Muestreadores tipo sonda (a) y taladros de tornillo


(b). En la fotografa sonda de bayoneta.

28
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Muestras lquidas
Muestras lquidas en movimiento en sistemas abiertos
como (ocanos, estuarios, ros, efluentes industriales). La
composicin de la muestra puede variar en funcin de la
temperatura, caudal, profundidad, distancia de la fuente, etc.
Por lo que se recomienda tomar un nmero elevado de
muestras en perodos consecutivos. Los equipos varan
dependiendo de si la toma de muestra es superficial (1-2 m
de profundidad) o en la columna de agua a grandes
profundidades (varios km). Se utilizan contenedores en
forma de botella de cuello ancho, con un tapn que puede
quitarse a una determinada profundidad, que van situados
en una especie de cesta con un peso.
Tambin se utilizan equipos automticos (Figuras 2.8.) que
constan de: Una sonda de longitud variable por donde se
aspira la muestra; una bomba de succin; un distribuidor
automtico de las muestras succionadas; un
automuestreador que contiene de 20 a 100 contenedores y
un microprocesador que controla el proceso.

Fig. 2.8. Sistema de muestreo automtico para muestras


lquidas en movimiento.

29
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Cuando la muestra tiene materia slida en suspensin, debe


filtrarse y analizar la materia slida en paralelo con la
muestra lquida.
Muestras lquidas en movimiento en sistemas
cerrados, como canalizaciones de agua de suministro a una
poblacin, fluido en una tubera en una industria (figura 2.9.).
Es necesario controlar la velocidad de flujo para asegurar la
homogeneidad de la muestra. La muestra se toma en la
direccin opuesta al flujo del lquido. Adems se controla la
velocidad de flujo para asegurar la homogeneidad de la
muestra.

Fig. 2.9. Sistema de muestreo para flujo continuo.

Muestras de lquidos almacenados en contenedores


cerrados, como un tanque contenedor de aceite en una
industria conservera. Hay que tener en cuenta la posible
heterogeneidad de la muestra debido a una estratificacin
por diferentes densidades. En ese caso, el muestreo puede
realizarse tomando porciones a diferentes profundidades,
usando una botella como la de la figura 2.10.
Muestras de lquidos estticos en sistemas abiertos
como un lago o un embalse. El muestreo pude llevarse a
cabo con cualquiera de los dispositivos indicados
anteriormente. Aunque se recomienda la instalacin de una
estacin permanente y automtica de muestreo a diferentes
profundidades (figuras 2.11. y 2.12).

30
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.10. Botella para muestreo de lquidos almacenados en


sistemas cerrados (izquierdo). Muestreador con mbolo para
lquidos almacenados en tanques (derecha).

a
b

Fig. 2.11. Muestreo de aguas subterrneas a distintos


niveles de profundidad (a) Muestreador con refrigeracin de
aguas residuales (b).

31
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Vlvula
de Bomba
succin

Muestra

Fig. 2.12. Estacin de muestreo de muestras lquidas a


distintas profundidades.

Muestras gaseosas. Cuando se realiza el muestreo


de analitos orgnicos o inorgnicos (gases, partculas en
suspensin, en forma de gotas o aerosoles) se utilizan
dispositivos como los de las figura 2.13 y 2.14. Constan de
una bomba de succin de aire. Las partculas quedan
retenidas en el filtro de tefln. Los gases, por ejemplo, SO2
son retenidos en el lecho de carbn impregnado de un
reactivo que interacciona con el analito originando SO4 2- que
queda adsorbido en el soporte activo

32
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Partculas

SO2 + Reactivo SO4-2

Fig. 2.13. Esquema de muestreador para la determinacin


de partculas en suspensin y gases inorgnicos (arriba).
Dispositivo con bomba muestreadora de gases y kits de
tubos detectores de gases e impurezas (abajo)

33
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.14. Impingers para muestreo de aire.

2.5. Preparacin de las muestras de laboratorio


El pretratamiento depender de la forma fsica de la
muestra, de la matriz de muestra, del tipo de analito y para
ello puede requerir la preconcentracin de la muestra u otra
transformacin de los analitos en la forma qumica ms
adecuada para la tcnica de determinacin que se vaya a
utilizar (Tabla 2.2.). Esta operacin, algunas veces la realiza
el analista y otras el propio instrumento de medida. La
preparacin de la muestra incluye la separacin de
interferencias de la matriz, especies diferentes del analito de
inters. Un mtodo con pocas interferencias se denomina
especfico.

34
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Tabla 2.2. Directrices para el tratamiento de muestras.

MUESTRA BRUTA
SLIDA LQUIDA GASEOSA
Tratamiento muestra Homogenizacin Obtencin
bruta Presin
Separacin de
Secado muestra
fases
Divisin Sin cambio
Pulverizacin qumico
Con cambio
Homogeneizacin qumico Adsorcin
Mezcla en centrfuga -Fase slida /Absorcin
Pruebas de -Fase gaseosa Absorbentes
homogeneidad lquidos
Preconcentracin
Adsorbentes
Precipitacin slidos
Submuestreo Submuestreo
Por pesada Por pesada o
volumen

En el caso de muestras slidas, pueden requerir una


reduccin de tamao que mejore su homogeneizacin para
que la muestra final sea lo ms representativa posible.
Algunos instrumentos trituran de forma cortante mediante
molino de cuchillas (para materiales con fibras como
vegetales, papel, madera) y otros actan por impacto, molino
de bolas (para materiales duros como rocas, o minerales).
Tambin pueden utilizarse morteros de diversos materiales
dependiendo de la dureza de la muestra (gata y acero para
muestras duras y porcelana o vidrio para muestras ms
blandas). Tambin se pueden utilizar reductores de muestra
o divisor automtico rotatorio para dividir la muestra de
forma controlada y reproducible. La muestra se coloca en un
embudo acoplado a un sistema de vibracin que permite la
salida de la muestra hacia un carrusel giratorio especial
(hasta 16 recipientes) para obtener submuestras de manera
rpida (figura 2.15.)
35
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Molino decuchillas
Molinodebolas

Reductordemuestra
Morteros

Fig. 2.15. Diversos sistemas de divisin de la muestra.

Tras la pulverizacin puede ser necesaria la separacin por


tamao de partcula, para posteriores tratamientos de las
submuestras, mediante tamices o cribas (acero, latn y
naylon) con diferente nmero de malla o dimetro de los
huecos del tamiz que permite pasar las partculas (figura
2.16.).
Generalmente el contenido de humedad de una muestra
puede ocasionar alteraciones en el rendimiento de etapas
posteriores de extraccin. Por ello se requiere su eliminacin
por secado al aire (en campana extractora), mediante
estufas (entre 90 y 110 C, pero inadecuada para analitos
voltiles) o por liofilizacin, procedimiento de secado en frio
(-40 C con N2 lquido) por sublimacin del hielo a estado
vapor y sometiendo las muestras a vaco (10 Pa de presin).

36
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.16. Tamices utilizados para separar las partculas


slidas por tamao.

La temperatura es muy importante, si es muy alta provoca


descomposicin de la muestra, si es demasiado baja,
asegura la integridad de la muestra pero aumenta el tiempo
de secado y el riesgo de contaminacin. Las muestras secas
se guardan en desecadores (figura 2.17.) para evitar que
adquieran humedad ambiental.
A veces la homogeneizacin de muestras lquidas requiere,
dependiendo de la posible presencia de materia particulada,
el uso de centrifugacin o filtracin.

37
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.17. Fotografa y esquema de un desecador. Utiliza un


desecante (a), generalmente slica gel que se coloca en el
interior del desecador (b).

En el caso de muestras gaseosas se utilizan absorbentes y


adsorbentes (figura 2.18.).

Fig. 2.18. Diferencia entre absorcin (atraer y retener una


muestra lquida en el interior de un slido) y adsorcin (unin
de las molculas de la muestra a la superficie de un slido).

38
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

2.6. Transporte y conservacin de la muestra.


En el transporte de las muestras se debe tener ciertas
precauciones para mantener la integridad de las mismas y
evitar la prdida de analitos: (a) Evitar la exposicin a
humedades extremas y mantener las muestras a 4 C. (b)
Congelar las muestras biolgicas o de alimentos para su
transporte.
En la conservacin de las muestras tambin se deben tener
ciertas precauciones que estn interrelacionadas: (a)
Reducir los riesgos de alteraciones por contacto con la
atmsfera, absorcin y oxidacin. (b) Evitar la exposicin de
la muestra al aire y a la luz y su manipulacin. (c) Los
slidos se mantienen secos eliminando el agua en una
estufa. (d) Las muestras biolgicas se congelan en nitrgeno
lquido o se liofilizan. (e) El tratamiento de los lquidos
depende del tipo de anlisis a realizar. En general, la
estabilizacin de iones orgnicos se consigue por
acidulacin con HNO3.

2.7. Preparacin de la muestra para el anlisis.


Es una etapa determinante en el proceso analtico.
Representa ms del 60% del tiempo requerido para el
anlisis (figura 2.19.) y engloba gran nmero de
procedimientos que estn afectados por errores.

39
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Tratamiento Muestreo
de datos 6%
27%

Anlisis
6% Preparacin
de muestra
61%

Fig. 2.19. Tiempo consumido (%) por las diferentes etapas


del proceso analtico.

Consideraciones generales:
1. La preparacin de muestra debe hacerse sin que se
produzca la prdida de ninguno de los analitos
(recuperacin cuantitativa y reproducible) de muestra a
muestra.
2. La preparacin de la muestra debe llevar los analitos a la
forma qumica ms adecuada para el mtodo de medida
que se utilice posteriormente (figura 2.20.).
3. Esta etapa debe incluir la separacin de interferencias
de la matriz (cuando sea necesario).
4. En la preparacin de muestra debe evitarse la adicin de
nuevas interferencias de los reactivos o recipientes de
reaccin. Un problema comn es la aparicin de
contaminacin cruzada, cuando algn material de una
muestra se incluye en otra muestra
5. La preparacin de muestra debe incluir, s es necesario,
la dilucin o concentracin de los analitos para que sus
concentraciones se encuentren dentro del mejor rango
de medida del mtodo (figura 2.21.). As, para la
concentracin de los analitos se puede utilizar un
rotavapor que elimine el disolvente a presin reducida en

40
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

un matraz evaporador que rota mecnicamente en un


bao de agua a temperatura controlada de 30-40 C. El
sistema est conectado a una bomba de vaco. En el
caso de procesar varias muestras simultneamente, se
pueden evaporar-concentrar las muestras mediante un
turbo-vap. Permite un calentamiento homogneo a
presin reducida y la entrada de gas que se satura de
disolvente en su ruta de salida. En el caso de analitos
termolbiles hay que tener la precaucin de no evaporar
a sequedad el extracto. Para ello se recomienda el uso
de un mini-vap que elimina el disolvente mediante
corriente de gas en inerte (N2) en ausencia de calor.
6. La presencia de compuestos inactivos en la muestra es
importante cuando se desarrollan mtodos de
preparacin de muestra.
7. Existen muchos mecanismos por los que puede haber
prdida de analitos (adsorcin a las paredes de los
recipientes, evaporacin, reacciones qumicas laterales,
accidentes) El % de recuperacin se refiere a una
comparacin entre la concentracin de analito
encontrada (determinada) y la concentracin de analito
presente en la muestra.

41
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.20. Mecanismos de cambio de estado.

42
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Rotavapor

Minivap Turbovap

Fig. 2.21. Sistemas de concentracin de muestra: rotavapor,


turbo vap,; minivap. Estos dos ltimos dispositivos evitan
prdidas elevadas de analitos.

2.7.1. Disolucin
La disolucin de la muestra se basa en convertir los analitos
a determinar en una forma qumica que permanezca estable
en un disolvente adecuado. El procedimiento ms sencillo se
lleva a cabo con agitacin y calentamiento suave o con
ayuda de un sistema de ultrasonidos (figura 2.22.). Este
sistema se caracteriza por proporcionar un pequeo
desplazamiento de partculas, agitacin y activacin de las
molculas de disolvente y una gran aceleracin del proceso
de disolucin. Se originan vibraciones que proporcionan
agitacin de las muestras por generacin de burbujas
microscpicas que se contraen y expanden y se facilita la
transferencia de masas.

43
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

a b

c d

Fig.2.22. Sistemas de disolucin con placa agitadora y


calentamiento por conduccin a travs del recipiente y por
conveccin en el seno de la disolucin(a) y mediante
ultrasonidos (b), con sonda de ultrasonidos, el transductor
est sumergido en el disolvente (c) y con bao de
ultrasonidos donde el transductor alcanza la parte inferior del
recipiente (d).

2.7.2. Mineralizacin
Supone la eliminacin de la materia orgnica de una
muestra. Se realiza cuando se determinan elementos traza
en muestras con materia orgnica. Se utilizan disolventes
cidos o mezclas de cidos que aumentan la eficacia del
proceso, disolviendo las muestras inicialmente slidas:
H2SO4, H2SO4 + H2O2, HNO3 + H2O2, HNO3 + H2SO4, HNO3
+ HClO4, HNO3 + H2SO4+ HClO4. Se lleva a cabo por va
seca o por va hmeda.
a) Va seca
- Se utiliza un crisol con el material colocado en un horno
a temperaturas elevadas (500 C).

44
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

- Un plasma de radiofrecuencia de oxgeno a bajas


temperaturas (< 150 C), pero el proceso es lento (24 h)
- Mediante combustin en atmsfera de oxgeno
activado.
b) Va hmeda
La digestin se realiza en un sistema abierto (matraz
Erlenmeyer o tipo Kjeldahl, de fondo redondo y cuello
largo que permite el calentamiento a reflujo, minimizando
la prdida de componentes voltiles) mostrados en la
figura 2.23.
Tambin puede llevarse a cabo en reactores de digestin
sometidos a presin o mediante energa de microondas
(utilizando material transparente a las microondas que
facilita la rapidez del calentamiento). En ambos casos la
combinacin de la presin y la temperatura (100 - 150 C)
reduce el tiempo de mineralizacin (1 - 2 h) (ver figura
2.24.).

a b

45

Fuentedecalor Fuentedecalor

Fig. 2.23. Digestin en sistemas abiertos (a) matraz


Erlenmeyer (b) matraz tipo Kjeldahl.

45
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.24. Diagrama comparativo del tiempo de digestin


mediante microondas o por procedimiento convencional.

Las ventajas que ofrece la digestin mediante microondas


son numerosas:

- Tiempos de digestin ms cortos.


- No hay prdida de elementos voltiles.
- No hay desprendimiento de vapores cidos.
- No se produce contaminacin de la muestra.
- Concentraciones muy bajas en los blancos.
- No se requiere la presencia del operador.
- Control riguroso de la temperatura y presin.

2.7.3. Extraccin
Procesos que se utilizan fundamentalmente para la
separacin de compuestos orgnicos; mejorar la
sensibilidad, mediante la preconcentracin de los analitos;
mejorar la selectividad, mediante la eliminacin de
interferencias; y favorecer la deteccin de los analitos en el
nuevo medio en el que se encuentra.

46
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

2.7.3.1. Extraccin lquido-lquido clsica.


Se basa en la transferencia de una o ms sustancias entre
dos fases lquidas inmiscibles puestas en contacto entre s
(figura 2.25.). Se establece un equilibrio entre ambas fases
que puede alterarse con temperatura y presin:

A(ac) A(org)

definindose la constante de distribucin (KD) y la razn de


distribucin (D) si existen varios equilibrios que puedan influir
en el reparto del soluto entre las dos fases:

Aorg A
KD D
org

Aac A ac

Modos de extraccin:
a) Extraccin lquido-lquido sencilla (figura 2.26), para la
que es necesario conocer la relacin entre el rendimiento
y las variables operacionales que se pueden controlar,
como el tipo de disolvente, el volumen de disolvente y de
fase acuosa y el nmero de operaciones (mejor con varias
extracciones de poco volumen de disolvente que con una
sla extraccin y mayor volumen). Es un proceso rpido,
siempre que no se formen emulsiones al agitar los dos
disolventes.

b) Extraccin lquido-lquido continua que consiste en poner


en contacto la fase inicial, generalmente la acuosa, con
porciones nuevas del segundo disolvente, alcanzndose
el equilibrio en cada operacin. Utiliza dispositivos
especiales como los mostrados en la figura 2.27., en los
que el disolvente pasa de forma continua por goteo a
travs de la disolucin acuosa mediante un sistema de
destilacin. Se emplean cuando las relaciones de
distribucin no son muy favorables y no se puede lograr la

47
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

extraccin de una sustancia de las dems, en una nica


operacin.

Fase orgnica

Fase acuosa
Fase acuosa

Fig. 2.25. Esquema de extraccin lquido-lquido clsica


mediante embudo de decantacin o extraccin que consta
de una llave de tefln.

Fase
Orgnica

Fase
Orgnica A
A
A A A
A

BAB B B
Inmiscibles AB B
Fase
A
Acuosa

Fase B B
Acuosa B 11

Fig. 2.26. Esquema de extraccin lquido-lquido sencilla con


embudo de decantacin.

48
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Condensador

Muestra
Disolvente

Fig. 2.27. Sistemas especiales para extraccin lquido-


lquido continua (A) disolvente menos denso (ter) que la
fase acuosa (B) disolvente ms denso (cloroformo) que la
fase acuosa.

2.7.3.2. Extraccin slido-lquido clsica con Soxhlet.


Se trata de una extraccin cuantitativa a reflujo, utilizando
grandes volmenes de disolvente (200 - 300 mL) para
cantidades de muestra entre 1 - 10 g durante un perodo de
tiempo considerable (12 - 24 horas). Se utiliza el dispositivo
mostrado en la figura 2.28. Cuando la cmara de extraccin
se llena de disolvente hasta un determinado nivel,
impregnando la muestra slida, un sifn lateral enva
prcticamente todo el volumen de disolvente de nuevo al
matraz y se repite la operacin. Es un sistema adecuado
para el anlisis de grasas en alimentos o de aceites.

49
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Condensador

Muestra

Disolvente

Fig. 2.28. Dispositivo de extraccin Soxhlet y sistema para


extraccin en serie.

2.7.3.3. Extraccin con disolventes asistida por microondas.


Es una alternativa a la extraccin convencional con
disolventes. Se utiliza un sistema cerrado a presin
(semejante al digestor). Se basa en que los diferentes
disolventes absorben radiacin de microondas en funcin de
su constante dielctrica, de modo que a mayor constante,
mayor absorcin. De este modo la muestra con el disolvente
se calienta a una temperatura superior al punto de ebullicin
del disolvente y los analitos se extraen. En el caso de utilizar
disolventes que no absorben la energa de microondas, se
puede aadir unos microlitros de agua a la muestra para
favorecer la absorcin y la liberacin de los analitos al
disolvente frio. Es un mtodo ms suave, en cuanto a
calentamiento y, por lo tanto adecuado para analitos
termolbiles.
Entre las ventajas que ofrece la extraccin asistida por
microondas (MAE) cabe destacar la menor cantidad de

50
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

disolventes utilizada (unos pocos mL), el menor riesgo de


toxicidad y la posibilidad de optimizar la extraccin mediante
estrategias quimiomtricas como el diseo de experimentos,
teniendo en cuenta los factores que pueden afectar a la MAE
(tiempo de calentamiento, temperatura, volumen de
disolvente y tipo de disolvente). Como riesgos, comentar el
uso de energa de microondas y manejar recipientes a
presin (figura 2.29.) Es un sistema adecuado para la
extraccin de aromas, lpidos en alimentos, pesticidas y
otros contaminantes en sedimentos y suelos, aditivos en
polmeros.

a b

Fig. 2.28. Celda para extraccin asistida por microondas (a)


Equipo para MAE que dispone de un horno sometido a
presin y temperatura y un carrusel con cabida de hasta
doce celdas (b).

2.7.3.4. Extraccin en fase slida


Esta tcnica se basa en el reparto de los analitos,
contenidos en una matriz generalmente acuosa, entre dos
fases, una slida y otra lquida.
Los analitos a extraer deben tener mayor afinidad por la fase
slida que por la matriz (etapa de adsorcin).
Los compuestos retenidos en la fase slida son eludos con
un disolvente que tenga mayor afinidad por los analitos
(etapa de elucin o desorcin).
Los principales objetivos de la tcnica de extraccin en fase
slida (SPE) se resumen en: la separacin de compuestos

51
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

interferentes prensentes en la matriz junto a los analitos de


inters; preconcentracin de la muestra (1 litro a 1 mL);
fraccionamiento de la muestra en grupos de compuestos;
almacenamiento de analitos inestables en otro disolvente,
llevar a cabo simultneamente reacciones de derivatizacin
entre los analitos de inters y los compuestos de la
superficie adsorbente. En el esquema de la figura 2.29 se
presentan las diferentes etapas del proceso de SPE.
ADICIN DE
ADICIN DE MUESTRA
REACTIVOS DISOLVENTE DISOLVENTE
ACONDICIONADORES DE LAVADO DE ELUCIN

ACONDICIONAMIENTO ELUCIN DE ELUCIN DE


INTERFERENCIAS ANALITOS
RETENCIN DE ANALITOS
E INTERFERENCIAS

Fig. 2.29. Etapas de SPE: acondicionamiento del absorbente


con un disolvente adecuado (metanol) (1), adicin de la
muestra (adsorcin) (2-4) Separacin de interferencias
(lavado) (5) elucin de los analitos (desorcin) (6).

El adsorbente est empaquetado entre dos discos fritados


en un cartucho de polipropileno o en una columna de jeringa.
Las fases lquidas pasan a travs de l por gravedad,
succin o aplicando presin. Tambin puede inmobilizarse el
adsorbente en una membrana de microfibras de 0.5 mm de
espesor que permite flujos ms elevados que con cartuchos.

52
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

En la figura 2.30. se muestran algunos dispositivos utilizados


en SPE.

b
a

Fig. 2.30. Jeringas con columnas de adsorbente para SPE


(a). Dispositivo para SPE en serie (b).

El adsorbente o fase estacionaria ms utilizada como fase


inversa es el octadecilsilano (C18) que es apolar. La slice o
el N-propiletilendiaminosilano (PSA) son dos adsorbentes
polares utilizados como fase normal. El carboximetilsilano
(CBA) o el dietilaminopropilsilano (DBA) son adsorbentes
utilizados para cambio inico.
La SPE es una tcnica alternativa frente a la extraccin
lquido-lquido porque proporciona altas recuperaciones,
reduccin de la manipulacin de la muestra y del consumo
de disolventes, alto nivel de concentracin y purificacin,
fcilmente automatizable.

2.7.3.5. Microextraccin en fase slida


Esta tcnica de microextraccin en fase slida (SPME) es
ms reciente y est basada en el reparto de los analitos
entre la muestra y una fase slida que es una microjeringa
de slice fundida con un recubrimiento de distintos materiales
(polidimetilsiloxano, poliimida, carbowax, grafito, etc) que
est introducida en la aguja de una microjeringa (figura
2.31.).

53
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

mbolo

Cuerpo de la jeringa

Aguja de
la jeringa

Pieza de acero de
fijacin de la fibra

Fibra
Aguja de
la jeringa

Fig. 2.31. Dispositivo de microextraccin en fase slida.

Los analitos son absorbidos/adsorbidos, segn la naturaleza


de la fibra, en 2 - 15 min al introducir la aguja de la jeringa en
la muestra (ver los modos de extraccin en la figura 2.32.).
La SPME se aplica para el anlisis de compuestos voltiles.
Al pulsar el mbolo la fibra se introduce en la muestra lquida
(inmersin directa) o en el espacio de cabeza del matraz
(HS). Tras la adsorcin/absorcin de los analitos, la fibra es
retirada dentro de la aguja. Los analitos son desorbidos
trmicamente, introduciendo la aguja en el inyector de un
cromatgrafo de gases. En la figura 2.33. se muestran las
etapas de SPME.

54
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

Fig. 2.32. Esquema del proceso de SPME (a) inmersin


directa en la muestra lquida; (b) extraccin en espacio de
cabeza (HS-SPME); (c) desorcin trmica en inyector de
cromatgrafo de gases.

Muestra Absorcin

A B C Desorcin

D E F

Fig. 2.33. Etapas de SPME: muestra (A); absorcin de los


analitos en la fibra (B); la fibra se retrotrae en la aguja de la
jeringa (C); desorcin trmica en inyector de un
cromatgrafo de gases (D-F).

55
TEMA 2. El muestreo y la preparacin de la muestra

2.8. Fuentes bibliogrficas

C. CMARA, P. FERNNDEZ, A. MARATN-ESTEBAN, C. PREZ-


CONDE y M. VIDAL Toma y tratamiento de muestras Ed.
Sntesis. Madrid (2002).

http://www.rsc-teacher-
fellows.net/labTechniques/SoxhletExtractionVideo.htm

http://www.sigmaaldrich.com/Club_Usuarios_SPME.html

http://www.sigmaaldrich.com/Brands/Supelco_Home/Datanodes.htm
l?cat_path=970203,970204&supelco_name=SPME&id=970204

56
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

TEMA 3. MTODOS VOLUMTRICOS DE ANLISIS


Objetivos
Caractersticas de las reacciones utilizadas en
volumetras.
Procedimientos de valoracin.
Sustancias tipo primario y disoluciones patrn.
Aplicaciones analticas de las volumetras.
Conocer el funcionamiento de los indicadores.
Aplicaciones de mtodos gravimtricos.

3.1. Fundamento de los mtodos volumtricos.


Se basan en la adicin de una disolucin del reactivo de
concentracin exactamente conocida a la disolucin
problema, hasta lograr que reaccionen entre s cantidades
equivalentes. Se puede determinar la concentracin de un
analito a travs de la medida del volumen de un reactivo
valorante estndar o previamente estandarizado.
Ej.:
HCl + NaOH NaCl + H2O

2 HCl + Na2CO3 2 NaCl + H2CO3

Definir:
Punto de equivalencia: punto en el que la cantidad de
agente valorante y de sustancia valorada, coinciden
estequiomtricamente.
Punto final: punto experimental en el que se detecta el
punto de equivalencia.
Indicador: sustancia o tcnica que permite visualizar o
detectar el punto final.
Error volumtrico: cuando los puntos de equivalencia y
final no coinciden. Hay que establecer siempre las
condiciones de valoracin para que sea < 0.1%. Engloba

57
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

tres tipos de errores: error qumico (asociado a la


reaccin), error visual (debido al observador) y error del
indicador (consumo de disolucin valorada por el
indicador, pero se puede estimarse mediante la
valoracin de blancos).

Caractersticas de los mtodos volumtricos:


- La reaccin entre el agente valorante (patrn o
previamente valorado) y la sustancia a valorar debe ser
cuantitativa (99,9 %) entre la sustancia valorada y Rpido
- La interaccin entre el valorante y la sustancia
valorada debe ser estequiomtrica, segn una reaccin
definida.
- La velocidad de la reaccin debe ser suficientemente
alta para que la valoracin sea rpida. Las reacciones
lentas pueden acelerarse por medio de catalizadores
- La medida en el punto de equivalencia se debe
realizar mediante la utilizacin de un indicador.
En la figura 3.1. se muestra algunos de los materiales
volumtricos utilizados. Las probetas miden volmenes
aproximados. Los matraces aforados miden exactamente el
volumen de la disolucin que contienen, mientras que las
buretas miden exactamente el volumen de lquido que
dispensan al accionar la llave. Las micropipetas estn
provistas de un pistn y puntas desechables. Pueden medir
entre 20 y 500 L (volumen fijo o variable)

58
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Materialvolumtricograduado

Pipeta

Probeta Matraz Vasode


erlenmeyer precipitados

Materialvolumtricoaforado

Pipetas

Matraz
aforado
Bureta

Micropipetas

Fig. 3.1. Material volumtrico.

3.1.1. Procedimientos de valoracin


Valoracin directa. Implica la adicin gradual o continua
del reactivo valorante sobre la disolucin que contiene la
especie a determinar. Es el procedimiento preferible por
su rapidez, simplicidad y mejor precisin. Es aplicable
cuando se dispone del valorante, disolvente e indicador
adecuados.

59
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Valoracin por retroceso. Se realiza aadiendo un


exceso de disolucin estndar (primer valorante) cuyo
exceso, que no ha reaccionado, se valora despus con
otra disolucin estndar (segundo valorante). Como
consecuencia de la utilizacin de dos disoluciones
estndar, los errores son mayores y el procedimiento
consume ms tiempo.

Valoracin indirecta. Se utiliza cuando no es posible


hacer la valoracin directa. Este procedimiento utiliza
alguna reaccin analtica auxiliar con la especie a
determinar (preferiblemente especfica o selectiva).
Como consecuencia de esta reaccin se libera una
cantidad equivalente de un tercer reactivo, el cual se
valora con otra disolucin estndar.

Desplazamiento AX + R RA + X

A X
R Desplazamiento
AR X

60
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

En las diferentes curvas de valoracin se representa:

- Variacin de pH frente al volumen de reactivo valorante


(cido-base).
- Variacin de pM frente al volumen de AEDT aadido
(formacin de complejos metal-ligando).
- Variacin de p(especie) frente al volumen de reactivo
valorante (precipitacin).
- Variacin del potencial frente al volumen de reactivo
valorante (redox).
En la Tabla 3.1. se muestran diferentes expresiones
utilizadas para los clculos volumtricos.

3.1.2. Propiedades generales de las sustancias tipo patrn


primrio
Deben de cumplir uma serie de requisitos:
- Que sea idneo para el fin perseguido.
- Que tenga pureza elevada con incertidumbre pequea
para alcanzar cotas altas de exactitud y trazabilidad.
- Debe existir una amplia variedad de estndares de
medida analticos, para cubrir diversas necesidades.
- Conocer detalles de conservacin y forma de empleo.
Deben de venir adecuadamente documentados
- Asequibles econmicamente. Generalmente son
materiales caros porque, aunque el material base sea
barato, los trabajos previos y la oferta de varias
magnitudes con sus incertidumbres certificadas
implican mucho trabajo y costes.
- Las caractersticas referenciales deben estar bien
establecidas y a ser posible certificadas, sobre todo la
exactitud e incertidumbre.
- Deben ser estables (identificados con fecha de
caducidad, algunos slo pueden ser usados una nica
vez) y homogneos (que no varen con el tiempo, ni
interaccionen con agentes atmosfricos).
- Que sean fciles de preparar.

61
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Algunos patrones primrios: cido oxlico (H2C2O4 2H2O;


Na2C2O4), carbonato sdico (Na2CO3), ftalato cido de
potasio (KHC8H7O4), yodato cido de potasio (KH(IO3)2)

Tabla 3.1. Unidades habituales utilizadas para expresar la


concentracin

a
Nombre Unidades Smbolo

molaridad moles soluto M

litros disolucin

formalidad nmero PF soluto F

litros disolucin

normalidad nmero Eq soluto N

litros disolucin

molalidad moles soluto m

kg disolvente

peso % g soluto % p/p

100 g disolucin

volumen % mL soluto % v/v

100 mL disolucin

% peso-volumen g soluto % p/v

100 mL disolucin

partes por milln g soluto ppm


6
10 g disolucin

partes por billn g soluto ppb

9
10 g disolucin
a
PF = peso frmula; Eq = n equivalentes= g/PE;
PE (peso equivalente) = PM/n

62
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

3.2. Aplicaciones de las volumetrias cido-base


3.2.1. Caractersticas de los indicadores cido-base
Compuestos orgnicos (cidos o bases dbiles) en las que
las formas protonadas (HIn) y desprotonada (In-) tienen
distinto color y estructura. Los mecanismos de cambio de
color son fruto de la variacin del pH, reacciones de
fluorescencia o fenmenos turbidimtricos
HIn In H pH = pKIH 1

Conocer el intervalo de viraje: un color definido para un pH y


otro para otro pH, dos unidades superior. En la zona de
viraje hay mezcla de color (figura 3.2.).

Fenolftalena Rojo de metilo

Rangodeviraje:8,09,6 Rangodeviraje:4,26,3

(incoloroarojo) (rojoaamarillo)

Fig. 3.2. Intervalos de viraje para fenolftalena y rojo de


metilo.

No deben consumir disolucin valorante. Deben de tener


una solubilidad adecuada y presentar estabilidad qumica.

En la tabla 3.2. se muestran diferentes indicadores cido-


base con sus correspondientes intervalos de viraje.

63
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Tabla 3.2. Caractersticas de indicadores cido-base.


INDICADOR Rango de viraje Color cido Color bsico
(pH)
Azul de Timol 1,2-2,8 Rojo Amarillo
8,9-9,6 Amarillo Azul
Amarillo de metilo 2,9-4,0 Rojo Amarillo
Anaranjado de metilo 3,1-4,4 Rojo Amarillo
Verde Bromocresol 3,8-5,4 Amarillo Azul
Rojo de metilo 4,2-6,3 Rojo Amarillo
Azul de bromotimol 6,0-7,6 Amarillo Azul
Rojo de fenol 6,4-8,0 Amarillo Rojo
Prpura de cresol 7,4-9,0 Amarillo Prpura
Fenolftalena 8,0-9,6 Incoloro Rojo
Timolftalena 9,3-10,5 Incoloro Azul
Amarillo de alizarina 10,1-12,0 Incoloro Violeta

3.2.2. Determinacin de nitrgeno. Mtodo de Kjeldahl


El nitrgeno est presente en los compuestos orgnicos
como los polipptidos. El nitrgeno de los grupos amino y
amido del polipptido se convierte en in amonio, el cual se
disuelve en la disolucin oxidante, y posteriormente es
convertido en NH3 gas. La determinacin volumtrica se
lleva a cabo en un dispositivo como el mostrado en la figura
3.3.
Las etapas del proceso se pueden resumir como sigue
(figura 3.4.).
Etapa 1. Digestin en caliente de la muestra con cido
sulfrico concentrado. El cido fija el NH4+
2 NH3 + H2SO4exceso (NH4+)2SO4
1er valorante
Etapa 2. La disolucin digerida se alcaliniza con NaOH y el
NH3 liberado se destila y es recogido en una disolucin
cida.

(NH4+)2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2NH3 + 2H2O

64
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Etapa 3. El amonio se valora con cido y luego por


retroceso, el exceso de cido con una base.

2 NH3 + H2SO4exceso (NH4+)2SO4


1er valorante

H2SO4no reaccion + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O

2 valorante

Fig. 3.3. Montaje propuesto por (Kjeldalhl-1883) para la


determinacin de nitrgeno.

Etapa 1: digestin Etapa 2: destilacin Etapa 3: Valoracin

Fig. 3.4. Etapas del mtodo Kjeldalhl.

65
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

3.2.3. Determinacin de mezclas de carbonatos (NaCO3;


NaHCO3 y NaOH)
En cualquier disolucin slo pueden existir dos de las tres
especies, ya que por reaccin entre ellas queda eliminada la
tercera.
Valoracin de cido fuerte con base fuerte: puede usarse
naranja de metilo o fenolftalena como indicadores.
Fenolftalena (8-9,6) Naranja de metilo (3,1-4,4)
incoloro rojo (rosa) rojo anaranjado (amarillo)

El Na2CO3 es alcalino, en su valoracin con HCl:


1) CO3-2 + H+ HCO3- (fenolftalena)

2) HCO3- + H+ H2CO3 (naranja de metilo)

Valoracin de NaHCO3
El NaHCO3 no es alcalino a la fenolftalena, al valorar con
HCl:
3) HCO3- + H+ H2CO3 (naranja de metilo)

NaOH Na2CO3 Carbonato+hidrxidosdico

H+ V1 H+ V2 V1+V2

H2O HCO3 fenolftalena

H+ V2 V2

H2CO3 Naranjademetilo

66
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Na2CO3 Carbonato+bicarbonato

H+ V1 V1

HCO3 HCO3 fenolftalena


V1+V2
H+ V1 H+ V2

H2CO3 H2CO3 Naranjademetilo

3.3. Aplicaciones de las volumetras de formacin de


complejos
3.3.1. Constantes de estabilidad
La constante de formacin o estabilidad (K) mide la
extensin en que se produce la reaccin de formacin del
complejo entre un metal M (ion central) y un ligando L
(agente complejante).

M + nL MLn

Las molculas del disolvente que permanecen unidas al ion


central pueden ser sucesivamente reemplazadas por ms
ligandos hasta formarse el complejo MLn. El nmero mximo
de ligandos n que se une de forma covalente al ion central
se denomina ndice de coordinacin. Las constantes
parciales, K1, K2, K3.Kn, responsables de la formacin de
complejos en etapas, y las constantes globales, 1, 2, 3
n son las responsables de explicar la formacin del
complejo.

1 K1
2 K1.K 2
3 K1.K 2 .K 3
n K1.K 2 .K 3 .....K n

67
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

La constante de disociacin es la inversa de la constante de


formacin (Kd)=1/K

3.3.2. Reacciones parsitas o laterales


Causadas por otros ligandos que donan electrones en medio
cido, aniones, metales que aceptan electrones en medio
alcalino, cambios de pH ( H+ y OH -).
En medio cido, los ligandos por poseer al menos un par de
e- libre, actan como bases y participan en reacciones
cido-base. Existe una competencia entre el M y los H+ por
L. En medio alcalino, los metales se comportan como cidos
de Lewis, la formacin de hidroxocomplejos supone una
competencia con el ligando. Se evala mediante los
coeficientes de reaccin parsita () hasta qu punto las
reacciones parsitas son importantes y alteran la formacin
del complejo, dependiendo del pH del medio.

3.3.3. Constantes condicionales de estabilidad


Representan una medida cuantitativa de la extensin en que
se produce la reaccin principal de formacin de complejos,
segn la importancia de posibles reaciones parsitas.

Reaccin principal M + nL MLn

K'
ML K
log K = log K - log M - log L
M 'L' M L
K es la constante de estabilidad y K es la constante
condicional de estabilidad. Si no se forma la posible reaccin
parsita, =1 y, por tanto log=0

3.3.4. Caractersticas de los indicadores metalocrmicos


Son sustancias orgnicas quelatantes (ligandos polidentados
que pueden unirse al ion central por varias posiciones) con

68
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

propiedades cido-base, capaces de experimentar cambios


de color cuando se forman o destruyen complejos metal-
indicador.

M + In MIn
Color indicador Color complejo

El indicador acta como ligando y puede intervenir en


reacciones parsitas cido-base al aceptar H+.
El intervalo de transicin del indicador viene definido por la
ecuacin segn la cual el pM cambia bruscamente en el
punto de equivalencia. La transicin de color se aprecia si el
cociente entre las concentraciones del indicador en su forma
libre (In) y su forma complejada (MIn) es igual a 10 1/10.

pM = log K 1
Ejemplo:
Negro de Eriocromo T (cido triprtico)
H3In H2In- HIn-2 In-3
Rojo Rojo Azul Naranja

En presencia de un metal como Mg (II) (pH: 7.3 -


10.6):
Mg (II) + HIn-2 Mg In- + H+
Azul Rojo

En este ltimo caso, al aadir AEDT, este reacciona con Mg


libre y, despus desplaza al indicador del complejo rojo (Mg
In-) antes del punto de equivalencia. El cambio de color de
rojo a azul del indicador en su forma libre (In-) seala el
punto final de la valoracin.

3.3.5. Valoraciones con AEDT


Complejos quelatos solubles en agua con estequiometra
(1:1) y constantes de formacin (K) muy elevadas. Son muy
estables y dan lugar a valores de pM elevado en la curva de
valoracin.

69
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Las disoluciones de AEDT se preparan a partir de la sal


disdica del cido etilendiaminotetraactico, que es un
agente quelatante con seis tomos donadores.

El AEDT experimenta reacciones parsitas de protonacin a


pH cidos. Se presenta como sal disdica que hay que
estandarizar previamente a su uso. H4Y es una especie que
predomina en medio cido, mientras que Y4- predomina a
pH>12. Para minimizar estas reacciones laterales se trabaja
a pH alcalino, por lo que el ligando complejante de iones
metlicos es H2Y2-.

A) Mtodo directo: Reacciones rpidas y se dispone de un


mtodo para detectar el punto final.
Ejemplo: dureza total de un agua (mg CaCO3/L).

B) Valoraciones por retroceso: Complejos estables pero no


se dispone de un indicador adecuado.
Aade un exceso de AEDT
El AEDT que no ha reaccionado se valora con Mg(II) y negro
de eriocromo T (NET).

70
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

C) Valoraciones por desplazamiento:


Se aade un exceso de una disolucin del complejo AEDT-
Mg(II)
Se valora el Mg(II) liberado con AEDT
La reaccin que tiene lugar es la siguiente:

MgY-2 + M2+ MY-2 + Mg 2+

Se valora con AEDT

Las reacciones parsitas que tienen lugar son: de


protonacin de Y4- a pH cido y formacin de
hidoxocomplejos del metal a pH alcalino.

D) Volumetras indirectas: Determinacin de aniones.


Ejemplo: determinacin de sulfato.

La tabla 3.3. presenta ejemplos de volumetras con AEDT.


Tabla 3.3. Aplicaciones de volumetras de AEDT para la
determinacin de metales

In pH Indicador Condiciones
metlico
Ba2+ 9-12 Azul-metil- Valoracin directa en exceso
timol NH3

Cu2+ 8 Murexida Valoracin directa, NH3 diluido

Hg2+ 9-10 Negro Erio T Valoracin retroceso con


Zn2+/NH3

Ni2+ 8-9 Murexida Valoracin directa/tampn NH3

Zn2+ 9-10 Negro Erio T Valoracin directa/tampn NH3

71
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

3.4. Reacciones en medio hetereogneo


Se define la solubilidad como la concentracin de un soluto
en una disolucin saturada de iones en equilibrio con su
precipitado. Es un valor constante y caracterstico a una
temperatura dada. Depende de la naturaleza y
concentracin de otras sustancias presentes en la
disolucin. Se expresa en mol L-1 g 100 mL-1.
Disolucin saturada: sustancia como fase pura en equilibrio
con la disolucin.
Disolucin sobresaturada: contiene una sustancia disuelta a
mayor concentracin que la disolucin saturada.
Disolucin no saturada: tiene menor concentracin que la
disolucin saturada.

3.4.1. Producto de solubilidad


La constante de equilibrio de la reaccin de disolucin de un
slido salino poco soluble con sus iones en disolucin
saturada, se conoce como producto de solubilidad (Kps).

AgCl(s) Ag + + Cl Kps = [Ag +] [Cl-]

La solubilidad est relacionada con el producto de


solubilidad a travs de la ecuacin:
s( AgCl ) K ps ( AgCl )

Para una reaccin de precipitacin general:

MmNn(s) mM + nN Kps = [ M ]m [N]n

La solubilidad viene dada por la siguiente expresin:


Kps( M m N n )
s nm
mm nn

72
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

3.4.2. Factores que afectan al equilibrio de una reaccin de


precipitacin

1. El producto de solubilidad es constante para una


temperatura dada.
2. Si la concentracin de uno de los iones aumenta, la del
otro debe disminuir proporcionalmente. Esto tiene como
consecuencia un desplazamiento del equilibrio que produce
una disminucin de la solubilidad. Este efecto se conoce
como efecto del ion comn.
3. Generalmente, nunca se precipita una sustancia a partir
de sus iones en agua pura, sino que existen otras sustancias
(electrolitos) que estn presentes, debido a las operaciones
previas, ajustes de pH, etc. Y por lo tanto existe una fuerza
ionica apreciable. El incremento de la fuerza inica aumenta
la solubilidad (efecto salino). Este aumento puede ser
apreciable o compensado por el efecto de los iones
comunes, es mayor cuanto mayor es la fuerza inica y est
afectado por la carga del ion.
En la figura 3.5. se muestra la influencia del efecto salino, a
travs de la fuerza inica de las especies K2SO4 y KNO3,
aumentando la solubilidad de TlCl. El efecto de K2SO4 es
mayor por la doble carga de SO42-.Tambin se puede
observar que a causa del efecto del in comn la
concentracin de Tl+ decrece por adicin de KCl (lnea de
puntos). Pero el efecto es dbilmente contrarrestado por el
incremento en la fuerza inica (lnea continua) confirmando
que el efecto del ion comn es ms importante que el efecto
salino.

73
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Fig. 3.5. Dependencia de la concentracin de equilibrio de


Tl+ en equilibrio con el precipitado TlCl en presencia de
diferentes concentraciones de K2SO4, KNO3 y KCl.

Las reacciones parsitas pueden llegar a impedir la


precipitacin. El camino ms conveniente para tomarlas en
cuenta es utilizar los coeficientes () de las reacciones
laterales y definir un producto de solubilidad condicional
(Kps):

pKps = pKps m log M - n log N

Si pKps < pKps significa que Kps > Kps porque las
reacciones parsitas cobran importancia. Como
consecuencia aumenta la solubilidad de la especie formada
en la reaccin principal.

3.4.3. Sistemas indicadores del punto final


1) Formacin de un precipitado coloreado: Mtodo de Mohr
Se basa en precipitar el haluro correspondiente (Cl-, Br-) con
nitrato de plata en presencia de cromato potsico como
indicador. Es necesario controlar el pH de la disolucin

74
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

aadiendo CO3HNa o Na2CO3 (tener un pH 6-10). Si el pH


es cido, disminuye la concentracin de cromato (CrO42-) al
formarse dicromato (Cr2O72-) ms soluble. A pH alcalino se
forma el precipitado de Ag2O.

Cl- + Ag+ AgCl(s) Kps = 1.8 . 10 -10


blanco

CrO4-2 + 2 Ag+ Ag2 CrO4 (s) Kps = 1.1 . 10 -12


rojizo

En el punto final el CrO42- se combina con el exceso de plata


originando un precipitado rojo. Mientras existan iones cloruro
en exceso, slo se formar AgCl. Al finalizar la precipitacin
de cloruro, comienza la precipitacin de cromato de plata, es
una precipitacin fraccionada.
Como el ion cromato tiene un color amarillo bastante
intenso, una concentracin de cromato relativamente grande
tiende a ocultar la aparicin del precipitado de color rojo. Por
ello, en la prctica es necesaria una concentracin menor de
cromato, utilizndose corrientemente concentraciones de
0.005 a 0.01M para que el precipitado rojo sea visible.
Para corregir este error en la valoracin debe hacerse un
ensayo en blanco con el indicador. Con ello se mide el
consumo de Ag+ para una suspensin de CaCO3 exenta de
Cl- y de un volumen semejante al de la valoracin y con la
misma cantidad de indicador.
El volumen as determinado se debe restar del volumen de
disolucin valorada gastado en cada determinacin. La
valoracin del ensayo en blanco sirve como color de
referencia para sucesivas valoraciones.

2) Formacin de un complejo coloreado: Mtodo de Volhard


Se basa en la precipitacin de tiocianato de plata (AgSCN)
en medio ntrico, empleando Fe(III) como indicador para
detectar el exceso de SCN-.

75
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Ag + + SCN- AgSCN(s) Kps = 1.16 .10-12


blanco

SCN- + Fe(III) Fe (SCN)2+


Exceso Rojo

Aplicaciones:
a) Determinacin directa de Ag(I) con disolucin patrn de
SCN-
b) Determinacin por retroceso de Cl-, Br-, I- en medio cido

3) Mtodo de Fajans. Indicadores de adsorcin


Compuestos orgnicos cuyo mecanismo de accin se debe
a la adsorcin del indicador en la superficie del precipitado
cuando se alcanza el punto de equivalencia.

Aplicaciones: Determinacin de cloruros


Ejemplo: Valoracin de NaCl con AgNO3

(AgCl) Ag+ NO3- + Fl- (AgCl) Ag+ Fl- + NO3-


En el punto de equivalencia el indicador (Fl-) adsorbido como
contrain sobre el precipitado de AgCl (figura 3.6.).

76
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Antes del punto En el punto de


de equivalencia equivalencia
Fl-
Fl-
Fl-

AgNO3
Fl-
Cl- Fl-
Fl-
Cl-
In adsorbido. In adsorbido
AgCl Repele al como contrain
indicador (Fl-)

Fig. 3.6. Etapas en la valoracin de cloruro con AgNO3


utilizando el mtodo de Fajans como indicador.

3.5. Aplicaciones de los mtodos gravimtricos


Las gravimetras por precipitacin necesitan una balanza
analtica.
Caractersticas de las reacciones:
- El componente a determinar precipite cuantitativamente
(99,9 %)
- El precipitado obtenido es de baja solubilidad, puro y
adecuado para los tratamientos posteriores
- El compuesto final utilizado en la pesada debe ser
qumicamente puro, estable y de composicin
estequiomtrica exacta y conocida.
En el clculo de los anlisis gravimtricos es necesario
hacer dos medidas experimentales:
1.- El peso de muestra tomada para hacer la determinacin
2.- El peso final del producto de composicin definida
Reaccin:
calor
aA + bB cC dD
wd

77
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

gA
%A 100
gmuestra

a Pm A
gA WD
d PmD
Factor gravimtrico

El factor gravimtrico (gA) incluye los factores


estequiomtricos de la reaccin (a, d), los pesos moleculares
de las especies iniciales y finales (PmA, PmD) y el peso de
producto final (WD).
En la figura 3.7. se muestran algunos procesos frecuentes
en la obtencin de un precipitado en anlisis gravimtrico.

Filtracin de un precipitado Filtracin de un precipitado


por decantacin por succin

Fig. 3.7. Procesos de filtracin de un precipitado.

3.6. Volumetras de oxidacin-reduccin


Un proceso de oxidacin-reduccin corresponde a la
transferencia de electrones de un reactivo (agente reductor)
a otro (agente oxidante).

78
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Definir los conceptos de:


Agente Oxidante: especie que gana electrones (se reduce) a
travs de una reaccin de reduccin.
Agente Reductor: especie que pierde electrones (se oxida) a
travs de una reaccin de oxidacin

Agente oxidante + ne- Agente reductor


Aox + ne Ared
-
Bred Box + ne-
Fe3+ + e- Fe2+ Zn0(s) Zn2+ + 2 e-
Se reduce (gana electrones) Se oxida (pierde electrones)

Reaccin redox: Reaccin en la que una o ms especies


cambian su n de oxidacin. Oxidacin y reduccin tienen
lugar de forma simultnea en la misma reaccin. Las formas
oxidadas y reducidas de una sustancia constituyen un
sistema conjugado llamado sistema redox o par redox, que
est regido por un potencial de electrodo (E), expresado en
forma de la ecuacin de Nerst

Reaccin neta:

Aoxd + Bred Ared + Boxd


2 Fe 3+ + Zn0(s) 2 Fe2+ + Zn2+

Clculo del potencial: Ecuacin de Nerst

79
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

E Eo
0,059
log
Re d
n Oxid
Donde E0 es el potencial normal del electrodo. Cuando el
proceso redox est en equilibrio E1 = E2

3.6.1. Sistemas indicadores qumicos


En el punto de equivalencia se produce un marcado cambio
en el potencial del sistema.

a) Autoindicadores
El reactivo valorante (KMnO4) acta como indicador (forma
oxidada de color rosa/violeta).
Inconveniente: Hay que aadir un exceso de reactivo.
Solucin: Realizar un ensayo en blanco.

b) Indicadores especficos
Reaccionan con uno de los participantes en la reaccin.
Ejemplo: Almidn, forma un complejo azul oscuro con el I5-
que indica el punto final de las reacciones en las que se
consume o genera yodo.
La funcin activa del almidn es la -Amilosa que forma
hlices. El yodo, en forma de (I5-) entra en el centro del las
cadenas largas de hlices de -Amilosa.

80
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

I 5-
Almidn + Yodo Complejo azul

-Amilosa Hlice de -
Amilosa

La disolucin de almidn se prepara disolviendo el almidn


en agua destilada y hervida a la que se aade un
conservante, para que no se degrade. En la volumetra, el
almidn se aade en las proximidades del punto final para
evitar la adsorcin irreversible de yodo.

c) Indicadores redox
Especies susceptibles de sufrir reacciones redox con el
agente valorante. Sus formas oxidada y reducida cambian
de color reversiblemente al variar el potencial redox de la
disolucin a la que se aaden.
Son sistemas redox cuya forma oxidada tiene un color
distinto de la forma reducida.

Ind(oxi) + n e- Ind (red)

E Ind EInd
o

0,059
log
Ind red
n Ind oxd
0,059
E Ind EInd
o

n

81
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

En la tabla 3.4. se muestran varios ejemplos de sistemas


indicadores utilizados en volumetras redox.

Tabla 3.4. Indicadores utilizados en volumetras redox.

COLOR
Indicador Forma Forma
Reducida Oxidada E0(V) n
Redox
DIFENILAMINA INCOLORO VIOLETA 0.76 2

FERRONA ROJO AZUL 1.06 1


AZUL DE
METILENO
INCOLORO AZUL 0.36 2

CIDO
DIFENILAMINO INCOLORO VIOLETA 0.84 2
SULFNICO

3.6.2. Uso de los reactivos oxidadantes y reductores


Objetivo: Conseguir que el analito a determinar se encuentre
en un nico estado de oxidacin, mediante un oxidante o un
reductor auxiliar. Ej: Cuando se disuelve una aleacin de
hierro en medio cido se obtiene Fe2+ y Fe 3+, por eso es
necesario aadir un oxidante o reductor para que todo el
hierro est en una sola forma oxidada (Fe2+ Fe 3+).
Requisitos: La reaccin debe ser cuantitativa para que el
agente prerreductor o preoxidante sea eficaz. El exceso de
reactivo debe ser fcilmente eliminable.

Oxidantes
Bismutato sdico, NaBiO3

Persulfato amnico, (NH4)2S2O8

Reductor de Walden
Ciertos metales pierden electrones fcilmente: Ag, Zn, Cd,
Al, Pb, Ni, Cu, Hg

82
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

Ag(s) + Cl- AgCl(s) + e- Eo = 0.79 V

La presencia del cido es esencial para evitar contaminar la


muestra con Ag+ (precipitndola). Es menos vigoroso que el
reductor de Jones

Reductor de Jones
La amalgama entre zinc y mercurio evita el desprendimiento
de hidrgeno de la disolucin cida.

2 Zn + Hg(II) Zn(II) + Zn(Hg) Eo = - 0.76 V


Zn + 2H+ Zn2+ + H2(g)

muestra
La reduccin permite asegurar
un slo estado de oxidacin de metal reductor
la muestra (ms bajo).
La amalgama evita el
desprendimiento de H2:

Zn + 2H+ Zn2+ + H2(g)

La disolucin con la muestra que se quiere reducir pasa a


travs de columnas con empaquetamiento de grnulos del
reductor metlico. Al abrir la llave, la disolucin reducida se
recoge en un matraz, para despus valorar con un oxidante.

3.6.2.1. Determinacin de reductores


Valoraciones con KMnO4
Es un oxidante fuerte en medio cido, mediante una
reaccin irreversible

MnO4- + 8 H+ + 5e- Mn (II) + 4 H2O Eo = 1.51 V

83
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

En medio dbilmente cido, neutro o poco alcalino, se


reduce a Mn(IV)

MnO4- + 4 H+ + 3e- MnO2(s) + 2 H2O Eo = 1.68 V

En medio fuertemente alcalino, se reduce a manganato


(verde)

MnO4- + e- MnO42- Eo = 0.67 V

No es patrn primario, se estandariza frente a Na2C2O4. El


punto final se establece por la coloracin del primer exceso
de in permanganato (autoindicador).
Aplicaciones: Determinacin de Fe(II), H2O2, NO2-, HSO3- y
H3AsO3

Valoraciones con I2. Mtodos directos o yodimtricos


El par I2/I- puede utilizarse tanto en oxidimetras (reacciones
de oxidacin) como en reductimetras (reacciones de
reduccin).
I2 + Red 2 I- + Oxd
siendo el potencial I2 + 2 e- 2 I- Eo = 0.54 V

El I2 es poco soluble en agua, pero s lo es el complejo I3-.


Por eso el I2 se prepara en presencia de I- para aumentar su
solubilidad.

3.6.2.2. Determinacin de oxidantes. Valoracin indirecta


con KI. Mtodos yodomtricos.
Se aplica a las valoraciones de oxidantes, aadiendo exceso
de I- y valorando el I2 generado con tiosulfato.

Oxd + 2 I- I2 + Red

I2 + S2O3-2 2 I- + S4O6-2

84
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

El S2O3-2 no es patrn primario, se estandariza frente a


dicromato, yodato o bromato
Aplicaciones: Determinacin de H2O2, Cu(II), Br2, Fe(III),
dicromato, bromato, hipoclorito.
Ejemplo: Determinacin de hipoclorito de sodio en disolucin
blanqueadora

ClO- + 2H+ +2e- Cl-+ H2O


2I- I2 +2 e-
ClO- + 2H+ + I- I2 + Cl-+ H2O
I2 +2 e- 2I-
2 S2O3= S4O6= + 2 e-

2 S2O3= + I2 S4O6= + 2I-

1 ClO- 1 I2 2 S2O3=

85
TEMA 3. Mtodos volumtricos de anlisis

3.7. Fuentes bibliogrficas

D. C. HARRIS. "Anlisis Qumico Cuantitativo" 3Ed. Ed. Revert


S.A. Barcelona (2007).

D. HARVEY Qumica Analtica Moderna Mc Graw Hill. Madrid


(2002).

http://www.uwplatt.edu/chemep/chem/chemscape/labdocs/catofp/me
asurea/concentr/titrate/ftitraon.htm

86
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

TEMA 4. INTRODUCCIN AL ANLISIS INSTRUMENTAL


Objetivos
Conocer la calibracin de los mtodos instrumentales
para relacionar la medida analtica con la
concentracin de analito.
Describir las fuentes ms comunes de ruido y modos
de disminuir sus efectos sobre la informacin analtica
de inters (seal).
Definir y caracterizar los analizadores de procesos.
Conocer y justificar la clasificacin de analizadores de
procesos.

4.1. Trazabilidad e incertidumbre.


4.1.1. Concepto de trazabilidad.
La importancia de los estndares o patrones en las medidas
de parmetros fsicos, qumicos, bioqumicos y biolgicos es
innegable. Qu traje le saldra bien a un sastre si emplease
una cinta mtrica elstica para tomar las medidas al cliente?
La trazabilidad se relaciona directamente con la calidad de
los procesos de medida y con la calidad de los resultados
generados. Su significado se corresponde con la definicin
de trazabilidad en el Vocabulario de Gestin y Garanta de
Calidad (ISO 8402, 1994) define la trazabilidad como:
Aptitud de rastrear (conocer) la historia, aplicacin o
localizacin de una entidad (producto, proceso, servicio,
organizacin) por medio de identificaciones registradas.
El trmino trazabilidad puede ser usado con tres enfoques
principales:
Con respecto a un producto, la trazabilidad ofrece un
seguimiento desde el origen de los materiales, historia de su
produccin, distribucin, localizacin, etc.
Con respecto a la calibracin, la trazabilidad se aplica a la
relacin de los equipos de medida con los estndares
(patrones) nacionales e internacionales, con patrones

87
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

primarios, con propiedades fsicas bsicas o con materiales


de referencia. Permite asegurar que los equipos estn en
condiciones ptimas para su utilizacin.
Con respecto a la adquisicin de datos, la trazabilidad
relaciona los datos generados y con los clculos.
En la figura 4.1. se muestra la cadena de trazabilidad en los
mtodos de anlisis comparativos (tcnicas instrumentales).
Se puede destacar la trazabilidad de la pesada con el
calibrado de la balanza, la trazabilidad de los patrones con
su correspondiente certificado y la trazabilidad del
instrumento que aplica la calibracin directa de equipos
(patrones y medidas con las mismas unidades) y la
calibracin metodolgica o indirecta, mediante el calibrado
analtico (patrones y medidas con distintas unidades).

Kilogramo
patrn Muestra

Pesas
certificadas Preparacin

Trazabilidad Calibracin
instrumental Medida

Patrones
qumicos
Calibracin
instrumental

Calibracin
analtica

Fig.4.1. Cadena de trazabilidad en los mtodos de anlisis


comparativos (tcnicas instrumentales).

88
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

4.1.2. Caractersticas de la calibracin


La calibracin directa o instrumental y la indirecta o
metodolgica se comparan en la tabla 4.1.

Tabla 4.1. Comparacin de la calibracin instrumental y


metodolgica

CALIBRACIN CALIBRACIN
INTRUMENTAL METODOLGICA
Comprobacin Caracterizacin respuesta
Definicin funcionamiento instrumental en funcin de la
correcto instrumento propiedad(es) del analito

Aparato o Mtodo analtico.


Objetivo instrumento. Corregir Establecimiento relacin
la respuesta inequvoca entre medidas
instrumental (seal) y caractersticas del
analito
Contiene en analto (excepto
Estndar No contiene analito en factorizacin en
volumetras)
Informacin Analtica Analtica
No Analtica

Se consideran diferentes procedimientos de calibracin:

a)Procedimientos absolutos
Relacionar la seal del instrumento con una magnitud fsica
y coloca la marca o escala del aparato en la posicin
correcta respecto al resultado de la calibracin.
Ejemplos de ajuste de equipos:
- Calibrar una balanza
- Calibrar una pipeta.
- Calibrar la escala de longitud de onda de un
espectrofotmetro UV-VIS con la disolucin de CrO4K2.

89
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

b) Procedimientos estequiomtricos.
Se llevan a cabo mediante reactivos valorados o
normalizados, que se relacionan con las muestras en
funcin de la estequiometra de la reaccin qumica.
Ejemplos:
Cada una de las disoluciones normalizadas que se utilizan
en volumetras cido-base, de precipitacin, de formacin
de complejos, o redox.

c) Procedimientos comparativos.
Se establece una funcin de calibracin aplicando el mismo
procedimiento de medida a patrones y a muestras. La
relacin es una funcin matemtica que permite establecer
la relacin entre seal y concentracin.

Ejemplo:
Relacin de regresin entre seal instrumental, y (rea de
pico) y la propiedad de inters, x (concentracin) en
cromatografa, mediante un modelo lineal polinmico de
grado 1.

4.1.3. Concepto de incertidumbre


El intervalo dentro del cual se espera encontrar el valor real
de aquello que se mide. Representa el nivel de duda en la
estimacin del resultado y engloba errores aleatorios y
sistemticos. Teniendo en cuanta los principios
metrolgicos:

1. Medir es comparar respecto a patrones.


2. No se puede comparar sin conocer las incertidumbres.

En la figura 4.2. se muestran las componentes aleatorias y


sistemticas de la incertidumbre. Una medida puede verse
afectada por un error. El error sistemtico debe tratarse de
eliminar, mientras que el error aleatorio puede minimizarse
pero no se eliminar totalmente. Algunos errores se
propagan y afectan al resultado final.

90
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Errores aleatorios y sistemticos de


la incertidumbre

Error en medida

Error sistemtico Error aleatorio

Eliminar

Minimizar
Error sistemtico Error sistemtico
conocido desconocido

Correccin Error remanente

RESULTADO INCERTIDUMBRE

Nivel de duda en la
estimacin de M
M + N

Fig. 4.2. Propagacin de errores desde la medida hasta el


resultado final.

4.1.4. Tipos de estndares y su trazabilidad.


a) Estndares bsicos
Se consideran las siete unidades bsicas del Sistema
Internacional de Unidades: tiempo (s), longitud (m),
corriente elctrica (amperio), temperatura dinmica (grado
Kelvin), intensidad luminosa (candela), masa (kilogramo) y
cantidad de sustancia (mol). De ellos se derivan otras
unidades: volumen (m3), frecuencia (Hz), presin (Pa).

b) Estndares qumicos
Vnculo entre los bsicos y los qumico-analticos.
Istopo 12 del carbono (base del clculo de los pesos
atmicos), Nmero de Avogadro (el nmero de molculas o
tomos contenidos en 1 mol de sustancia, N= 6.023 1023),
Pesos atmicos, y los operacionales: Faraday (cantidad de

91
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

electricidad necesaria para transformar


electroqumicamente 1 equivalente de una sustancia redox)
y plata ultrapura (99.999%).

c) Estndares qumico-analticos
Derivados de los estndares bsicos. Son los que
realmente se suelen utilizar en la prctica en los procesos
de medida. Podemos hablar de dos tipos fundamentales:

1c) Estndares analticos primarios


Sustancias estables y homogneas con propiedades bien
establecidas, que permiten relacionarse directamente con
los estndares qumicos (pesos atmicos) a travs de su
trazabilidad, teniendo en cuenta la incertidumbre especfica
de cmo se ha conseguido el valor de la magnitud que los
caracteriza. (Pureza (%) 99.5 0.2) Ejemplo: Materiales de
Referencia Certificados (MRC). Se trata de materiales de
referencia que tienen certificados uno o varios valores, con
sus incertidumbres especficas, de una o ms propiedades
y obtenidos por procedimientos especiales (ejercicios
interlaboratorio) bajo la responsabilidad de un organismo
competente e independiente.

92
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Direcciones de diferentes organismos productores de MCR


o SRM (standard referente material):

http://www.nist.gov/ts/msd/srm/index.cfm

http://www.iaea.org/programmes/aqcs/

http://irmm.jrc.ec.europa.eu/reference_materials_catalogue/
catalogue/Pages/index.aspx

http://www.irmm.jrc.be/html/reference_materials_catalogue/
catalogue/attachements/ERM-CE464_report.pdf

2c). Estndares analticos secundarios


Sustancias con propiedades no adecuadas para ser
utilizadas directamente como estndares analticos, pero
que se utilizan cuando el estndar primario no existe, o es
inasequible o caro. En este caso, se debe establecer el
vnculo de trazabilidad con un patrn primario a travs de la
experimentacin (Volumetra. Disoluciones valorantes).

4.2. Calibracin de patrn externo.


Consta de las siguientes etapas:
1.- Seleccin del modelo: Polinomio lineal
y= a + bx
2.- Establecimiento del plan experimental
3.- Realizacin de las medidas
4.- Clculo de las estimaciones de los parmetros del
modelo matemtico
a, ordenada en el origen

93
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

b, pendiente
5.- Validacin del modelo. Coeficiente de correlacin y
determinacin. Anlisis de la varianza (ANOVA)
6.- Etapa de prediccin. Clculo del intervalo de
confianza de la media.

s
X t n1 Error estndar
n
Para validar el modelo estadsticamente se utiliza ANOVA
que plantea dos test:
Test de linealidad: para demostrar la significacin estadstica
de la regresin (modelo planteado) frente al residual
(errores).
Test de fallo de ajuste: para demostrar que el ajuste del
modelo a los datos experimentales es mejor que los errores
aleatorios presentes.
En ambos casos se postulan la hiptesis nula y la alternativa
y un test F de Fisher de comparacin de varianzas.
El planteamiento de este tipo de calibracin pasa por la
preparacin de patrones de concentraciones perfectamente
conocidas, que proporcionan seales analticas
proporcionales que responden a una funcin de calibracin
lineal ajustada por mnimos cuadrados a un polinomio lineal
de primer grado. Esta funcin de regresin seal-
concentracin servir para predecir los valores de
concentracin de muestras desconocidas utilizando el
intervalo de confianza de la media (ver esquema de la figura
4.3.)

94
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

MUESTRAS PATRONES P

M1; M2; M3 XP1; XP2; XP3

PROCESO ANALTICO

YM1; YM2; YM3 YP1; YP2; YP3

COMPARACIN Y CLCULOS

RESULTADOS

Fig. 4.3. Esquema de elaboracin de calibracin con patrn


externo.

4.3. Calibracin de adicin estndar


Se aplica cuando existe un efecto matriz (influencia en la
magnitud de la seal analtica de alguna sustancia presente
en las disoluciones de las muestras) que no es posible
corregir. Casos de muestras difcilmente reproducibles en
preparaciones de patrones (alimentos, sedimentos, lodos).
Se mide la seal analtica de la disolucin de la muestra y de
disoluciones que, adems de la muestra, contienen
cantidades conocidas y crecientes de analito (patrn o
estndar). Se representa grficamente (figura 4.4.) las
seales analticas de la muestra y de las muestras con
adicin respecto al incremento de concentracin. Por
extrapolacin se obtiene la concentracin de analito en la
muestra no adicionada (igualar a cero la ecuacin de
calibracin).

95
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

SEAL M

Concentracin
Muestra

Fig. 4.4. Esquema de elaboracin de la calibracin de


adicin estndar.

Al comparar la pendiente del calibrado de adicin estndar


con el calibrado de patrn externo se puede evaluar la
existencia o no de efecto matriz. Si las rectas son paralelas
no existir efecto matriz. Cuando el cociente entre la
diferencia en valor absoluto de las pendientes, y la pendiente
del calibrado de patrn externo es mayor de 10%, se
considera que existe efecto matriz y el mtodo de adicin
estndar es la nica calibracin vlida para el estudio en
cuestin.

4.4. Calibracin con patrn interno


Se aplica cuando, entre medidas sucesivas, es difcil
mantener alguno de los parmetros operacionales o para
mtodos analticos que no garantizan alta reproducibilidad
en el procedimiento experimental.

96
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Se aaden a las muestras y a los patrones cantidades


conocidas de una sustancia, el patrn interno (PI), que
cumple los siguientes requisitos:
- No estar presente en las muestras.
- Presentar caractersticas, concentracin y comportamiento
anlogo al del analito.
- No reaccionar con los componentes de la muestra ni
interferir en el anlisis.
Se representa el cociente entre la seal de patrn y la del PI
frente a la concentracin (ver figura 4.5.)

Fig. 4.5. Esquema de elaboracin de la calibracin con patrn


interno.

4.5. Seales y ruido


El ruido degrada la exactitud y la precisin de un anlisis
instrumental y aumenta los valores del lmite de deteccin.
Un parmetro de calidad ms til que el ruido es la relacin
Seal/Ruido.

97
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Ys Yo
S/R =
S

Las condiciones ms favorables para efectuar una medida


se tendrn a relaciones de seal/Ruido (S/R) altas (S/R 3).
Se establece una relacin S/R=3 para calcular el lmite de
deteccin.
Se establece una relacin S/R=10 para calcular el lmite de
cuantificacin.
Las principales fuentes de ruido en anlisis instrumental se
dividen en:
Ruido qumico: producido por variables incontroladas
relacionadas con el sistema (Vibraciones, luz, variaciones de
humedad, variaciones de temperatura y presin) que afectan
a materiales fotosensibles, al equilibrio qumico de
reacciones, a slidos pulverulentos, etc.
Ruido instrumental: asociado a los distintos componentes del
instrumento. Tipos:

- Ruido trmico o de Johnson. Se produce por agitacin


trmica de los electrones, en procesos con o sin
corriente y al azar. Da lugar a una variacin en el voltaje
que es el causante del ruido. Para reducirlo se debe
disminuir la temperatura, el ancho de banda de
frecuencia o la resistencia.
- Ruido de disparo. Se produce por movimiento de
electrones a travs de una unin, si existe corriente y
una discontinuidad en el circuito. Da lugar a una
variacin en la intensidad que es el causante del ruido.
Este tipo de ruido, disminuye si ancho de banda de
frecuencia tambin disminuye.
- Ruido de parpadeo. Asociado a los amplificadores de
corriente. Se denomina 1/f y produce derivas en la
seal. Se puede reducir trabajando con frecuencias de
seal > 100 Hz.

98
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

- Ruido ambiental o de interferencia. Aparece como


consecuencia del entorno en el que est ubicado el
instrumento.

Para reducir el ruido asociado a la seal analtica se utilizan


diferentes sistemas de filtrado que mejoran la relacin
seal/ruido (figura 4.6.).

Actan sobre seal continua


Elimina ruido trmico, de disparo

Mtodos de ANALGICOS
hardware
FILTROS
Mtodos de
DIGITALES
software

Actan sobre datos discontinuos


Aplicar a ondas no peridicas o irregulares

4.6. Filtros de seales, analgicos y digitales.

Las tcnicas de filtrado digitales se basan en algoritmos


matemticos que tratan los datos obtenidos (cromatograma,
espectro) y suavizan el ruido. Se pierde cierta resolucin
pero se mejora la relacin S/R:
- Promediado conjunto de seales.
- Promediado por grupos (Box-Car)
- Promediado por grupos de ventana mvil.
- Transformada de Fourier (figura 4.7.). Una seal en el
dominio del tiempo se convierte en una seal en el
dominio de la frecuencia. Tras la aplicacin de un filtro
digitalque elimina componentes de ruido, se aplica la
transformacin matemtica inversa para obtener el
espectro inicial filtrado.

99
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Espectro en dominio de
tiempo con mayora de
ruido de alta frecuencia
eliminado

Pico espectral con


ruido, en dominio de
tiempo

Se eliminan componentes
con f > f0

Espectro en dominio Funcin de filtro de


de frecuencia paso bajo

Fig. 4.7. Etapas del funcionamiento del algoritmo de filtrado


basado en la transformada de Fourier.

4.6. Analizadores de procesos industriales.


4.6.1. Definicin y caractersticas de los analizadores de
procesos.
Los analizadores de procesos son dispositivos automticos
adaptados a su medio y concebidos para la medida continua
o peridica de uno o ms parmetros fsicos o qumicos a lo
largo de una lnea de un proceso industrial.
Instrumentos destinados a facilitar informacin relacionada
con las caractersticas fsicas o la composicin qumica de
un fluido. Incrementan el rendimiento de los procesos, su
control de calidad y la reduccin de la contaminacin
ambiental.
La principal razn de la rapidez con que se ha extendido el
uso de estos instrumentos en los ltimos aos estriba en su
papel a favor del incremento del rendimiento de los
procesos, su control de calidad y la disminucin de la
contaminacin ambiental.
En muchos procesos industriales es necesario controlar o
medir los cambios en la composicin qumica de ciertos

100
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

productos que indiquen el grado de eficacia del proceso


(impurezas del producto analizado).
Requerimientos y caractersticas de los analizadores de
procesos:

- Simplicidad y robustez.
- Selectividad.
- Exactitud y precisin.
- Velocidad de respuesta (control de lnea de proceso).
- Rango de aplicacin.
- Autocalibracin y mantenimiento sin interrupcin.
- Fcil manejo (no requiere personal especializado).
- Automatizacin (repetibilidad y estabilidad).
- Coste razonable y rendimiento alto.
Estos analizadores surgen de la adaptacin de la
instrumentacin habitual de laboratorio (tabla 4.2.)

Tabla 4.2. Comparacin de las caractersticas de los


instrumentos de laboratorio y los analizadores de procesos
industriales.

INSTRUMENTOS DE ANALIZADORES DE
LABORATORIO PROCESOS
Flexibles (especies y condiciones) Anlisis especficos y condiciones
establecidas
Complejos y delicados Simples y robustos

Trabajan 8 h/dia y 5 dias/semana Trabajan 24 h/da y 7 das/semana

Personal especializado Personal no especializado

Calibrar antes de anlisis No calibracin frecuente


(autocalibracin)
Procesado manual de muestras En lnea con sistema de toma y
tratamiento de muestra
Habitaciones limpias y Analista distante y condiciones
termostatizadas extremas (humedad, temperatura,
corrosin)
Responsabilidad de fabricante es la Responsabilidad de fabricante es
garanta de funcionamiento mayor

101
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

4.6.2. Clasificacin de los analizadores de procesos.


1. Clasificacin segn la localizacin en la lnea del proceso.
a) Control fuera de lnea (off-line): las muestras son
extradas de la lnea del proceso. Toma y transporte manual
de muestras antes de realizar las medidas en sistemas
instrumentales de respuesta rpida (GC-MS) que se
encuentran en un rea separada y son manipulados por
personal especializado (se reduce la rapidez de obtener
informacin).

Off-Line

b) Control at-line o a pie de lnea: las muestras se extraen


del sistema y se transportan de forma discontinua hasta el
analizador. Similar al anterior, pero el instrumento adecuado
est instalado en una zona prxima al punto de toma y
manipulacin de la muestra (aumenta la rapidez de
proceso).

At-line

102
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Sistema de control de emulsiones


de aceites industriales.
Tareas: Homogeneizacin,
medidas de conductividad y pH,
Pesada de muestras,
Rotaevaporacin, Calentamiento a
reflujo, Adicin de reactivos,
Valoraciones, etc.
Determinaciones: Conductividad,
pH, porcentaje de aceite y slice,
ndice de saponificacin.

Analizadores robotizados at-line

c) Control sobre lnea (on-line): Son analizadores localizados


en continuo cerca de la lnea de proceso (automuestreador).
Se emplea un sistema de by-pass automtico para extraer la
muestra, tratarla y realizar las medidas instrumentales.
Proceso en continuo o de forma intermitente (discontinuo)
ej.: FIA, SIA.

On-line

103
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Analizador potenciomtrico on-line

d) Control en lnea (in-line): Anlisis in situ mediante una


sonda sensible a la propiedad a medir. Se abre la posibilidad
de fabricar sensores mltiples que permitan la determinacin
simultnea de varios analitos. Con sensores insertados
directamente en la lnea del proceso (medidor de pH).

In-line

104
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Produccin de Na2HPO4: Sensor de pH in-line

e) Control no invasivo (non-invasive): La alternativa ms


deseable ya que el sensor no entra en contacto fsico con la
muestra. Directamente relacionado con tcnicas de control
remoto y tcnicas de anlisis no destructivas No requieren la
separacin del analito de la lnea ni sensores dentro del
sistema (ultrasonidos de baja frecuencia).

Non-invasive

2. Clasificacin de los analizadores segn el objetivo.


Como se ilustra en la figura 4.8. se pueden realizar dos tipos
de funciones:

a) Analizadores para la proteccin o seguridad.

105
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Medida de contaminantes en efluentes industriales o en


atmsfera de trabajo
b) Controladores de la lnea del proceso.
Aquellos que determinan la calidad del producto final.
Controlan una o ms especies representativas de la
eficiencia del proceso.

Fig. 4.8. Controles para la proteccin o seguridad del


medioambiente y realizados en la lnea de un proceso
industrial.

3. Clasificacin segn la interpretacin de resultados.


- Analizadores de control de procesos indirecto (sin
intervencin humana).
- Analizadores de control de procesos directo (tcnico toma
las decisiones).

4. Clasificacin segn el parmetro a determinar.


- Analizadores fsicos:
Conductivmetros,
Viscosimetros,
Refractometros,

106
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Medida de Presin y Temperatura.


- Analizadores qumicos:
Miden directamente la concentracin de una o ms especies
en el fluido. Pueden ser:
Especficos para una especie dada (pH, potenciomtros)
Que permitan controlar varios compuestos simultneamente
(cromatgrafo de gases).
Que permitan controlar varios compuestos sucesivamente
(fotmetros).

4.6.3. Componentes de un analizador y sistemas de


transporte.
Los componentes fundamentales (figura 4.9.) de un
analizador de procesos son:
1) Un sistema de muestreo.
2) El propio analizador (instrumento).
3) El sistema de recogida de datos.
4) La proteccin del analizador.
Ciertas precauciones han de ser consideradas en los
sistemas de transporte. As, debern evitarse
condensaciones, evaporaciones, adsorciones o
degradaciones. Son deseable flujos rpidos y lneas cortas,
dimetros anchos y materiales inertes.

107
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Corrientedel
proceso

Sistemade Bombasocontroldeflujo
muestreo ajustedelmedio:P,T

Preparacinde Filtracin
muestra Reaccin

Medida SensorotransductorINSTRUMENTO
SALIDA
Seal Ordenador,medidororegistrador

Fig. 4.9. Esquema de un analizador continuo.

Los sistemas de transporte se pueden clasificar en tres tipos,


como se muestran en la figura 4.10.

Con lnea simple


Cuando el volumen de lnea es pequeo respecto al
volumen de muestra que requiere el analizador.
Con lnea de bypass
Permite un caudal de muestra elevado. Para muestras que
se vaporizan y no hay dispositivos de retorno al conducto. La
muestra se drena o ventea.
Bypass con lnea rpida de retorno
Cuando el analizador est lejos del punto de extraccin.
Velocidad de circulacin alta por diferencia de presin en
lnea. La muestra no utilizada retorna al conducto.

108
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Analizador
Analizador
Analizador

Fig. 4.10. Sistemas de transporte de muestra en un


analizador de proceso.

4.7. Analizador continuo de flujo no segmentado


4.7.1. Fundamento del anlisis por inyeccin en flujo (FIA)
El fundamento de FIA es el fenmeno de dispersin: Dilucin
que sufre un volumen de muestra inyectada en el flujo en un
sistema determinado.
Se caracteriza por el perfil de concentraciones que en un
momento dado adquiere el trozo o bolo intercalado en un
lugar determinado sin interrumpir el flujo (figura 4.11.).

Fig. 4.11. El perfil de la muestra insertada se modifica,


debido al flujo laminar y a causa de la difusin. El transporte
por difusin se deber a los gradientes de concentracin:
Difusin axial y difusin radial.

109
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

La dispersin se evala mediante el coeficiente de


dispersin.
C
D 0
C
donde se definen C0 = Concentracin del analito en la
muestra inyectada directamente; C = Concentracin en el
detector despus de todo el proceso de transporte
Al anlisis por inyeccin en flujo contribuyen: Factores
fsicos y factores qumicos (cuando tiene lugar una reaccin
qumica entre algunos componetes del flujo y la muestra).
El flujo no est segmentado por burbujas de aire. En el
momento de la deteccin no se alcanza ni el equilibrio fsico,
ni el equilibrio qumico, siendo su instrumentacin ms
simple y sencilla que el de los sistemas clsicos. En la figura
4.12. se muestra un esquema con los componentes de FIA y
el registro de la seal en forma de fiagrama.
Se define:
Tiempo de arranque, ta, tiempo transcurrido desde la
inyeccin hasta que comienza la seal desde la lnea base.
Tiempo de referencia, T, tiempo transcurrido desde la
inyeccin hasta que alcanza el mximo de la seal.
Tiempo de retorno, Tr, tiempo transcurrido desde el mximo
de la seal hasta que vuelve a la lnea base.
Tiempo durante el cual aparece la seal, t, corresponde
con el ancho de banda y define la dispersin o dilucin del
analito.
Altura de pico, H, relacionada con la concentracin.

110
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Componentes del sistema FIA

Fiagrama con sus parmetros


caractersticos

Fig. 4.121. Caractersticas generales del anlisis por


inyeccin en flujo.

4.7.2. Factores que afectan a la dispersin


Factores fsicos:
Volumen de muestra: disminuye el factor de dispersin (D),
al aumentar el volumen. Tambin aumenta el tiempo de
residencia (T) y el ancho de banda (t), mientras que el
tiempo de arranque (ta) no se afecta.
Caudal: al aumentar el caudal, disminuye la D, disminuye ta y
disminuye el ancho de pico.
Longitud del tubo: al aumentar la longitud de la lnea,
aumenta la D, aumenta la ta y aumenta t.

111
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Tambin influye forma del serpentn, relleno,... En la figura


4.13. se esquematiza la influencia de los factores fsicos.

Factores qumicos:
Ser imprescindible conocer la contribucin de la cintica a
la dispersin, sabiendo que las medidas de FIA se realizan
en condiciones de no equilibrio.

a
s b
s

t
c t

Fig. 4.13. Influencia del volumen de muestra (a), del caudal


(b) y de la longitud del tubo (c) sobre el factor de dispersin.

4.7.3. Instrumentacin en FIA


Los componentes bsicos del sistema FIA se muestran den
la figura 4.14.
Sistema de propulsin, caudal constante (bomba peristltica
o con presin gaseosa)

112
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Sistema de inyeccin, para insertar un volumen exacto y


perfectamente reproducible en la corriente continua de flujo
(inyector automtico)
Reactor tubo de reaccin, y que es donde tiene lugar el
transporte con o sin proceso adicional. Puede ser un tubo
recto, en forma de serpentn, o bien tener una cmara de
mezcla, un tubo relleno de material inerte o ctivo
qumicamente.
Clula de flujo, incorporada a un instrumento de medida que
traduce la seal continua a un registrador y/o un
microprocesador.

Fig. 4.14. Componentes del sistema FIA para el anlisis


fotomtrico de Fe en forma de complejo FeSCN2+
(colorimetra).

Los sistemas de deteccin deben cumplir unos requisitos


bsicos para su acoplamiento a FIA:
Pequeo volumen.
Bajo nivel de ruido.
Seal independiente del caudal.
Respuesta rpida y lineal en un amplio margen de
concentracin.
Alta sensibilidad.
1. Detectores electroquimicos
Deteccin potenciomtrica
Deteccin amperomtrica
2. Detectores pticos
Detectores espectrofotomtricos

113
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

Deteccin fluorimtrica
3. Tecnicas atmicas
Las tcnicas atmicas se utilizan principalmente para la
deteccin de elementos metlicos. La caracterstica de estas
es que no necesitan clula de flujo, pues el portador se
aspira continuamente hasta el nebulizador.

4.7.4. Aplicaciones de FIA


- Control de procesos
- Contaminacin medioambiental
- Qumica clnica.

Sistema comercial FIA de doble canal configurado para


determinar NITRATO (izquierda) y AMONIO.

114
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

115
TEMA 4. Introduccin al anlisis instrumental

4.8. Bibliografa

MILLER, J.C. MILLER, J.N. Estadstica y Quimiometra para


Qumica Analtica. 2 Ed. Prentice Hall. Madrid (2002)

KOCH, K.H. Process Analytical Chemistry, Springer, Berlin.


(1999)

M. VALCRCEL, M. D. LUQUE DE CASTRO Flow Injection


Analysis. Principles and Aplications. Ellis Horwood. Chischester
(1987)

116
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

TEMA 5. INTRODUCCIN A LOS MTODOS


ESPECTROSCPICOS
Objetivos
Razonar adecuadamente los fenmenos fsico-
qumicos asociados a las distintas tcnicas
instrumentales.
Manejar esquemas para clarificar fundamentos.
Manejar con soltura y precisin la terminologa
correspondiente a los fenmenos, elementos y
componentes implicados en el anlisis instrumental.
Introducir los principios bsicos, componentes,
funcin y requerimientos de los principales mtodos
espectroscpicos (UV-Vis e IR).

5.1. Teora de la radiacin electromagntica.


La propiedad en que se basan los mtodos
espectroscpicos es la radiacin electromagntica. Es una
forma de energa cuyas caractersticas se explican teniendo
en cuenta su naturaleza ondulatoria y corpuscular (modelo
dual de comportamiento). Como se muestra en la figura 5.1.
el campo elctrico y magntico estn en fase, con
oscilaciones sinusoidales perpendiculares, uno respecto al
otro y respecto a la direccin de propagacin de la radiacin.
La naturaleza ondulatoria se utiliza para explicar la difraccin
de la radiacin, mientras que la corpuscular (fotn) explica la
absorcin y emisin.

117
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.1. Representacin de un haz de radiacin


monocromtica polarizada en el plano.

La figura 5.2. muestra algunos conceptos que caracterizan la


radiacin elctrica.

Longitud de onda
+
Campo elctrico

Perodo
Amplitud

0
-

Distancia
Tiempo

Fig. 5.2. Representacin bidimensional del componente


elctrico de la radiacin.

Se define:
Amplitud: longitud del vector elctrico en el mximo de la
onda.
Perodo: tiempo necesario para el paso de sucesivos
mximos o mnimos por un punto fijo en el espacio.
La interaccin entre la muestra y la radiacin
electromagntica se comprende admitiendo que la segunda
est formada por un haz de partculas energticas llamada
fotones. Como se observa en la siguiente expresin, la

118
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

energa de la radiacin depende de su frecuencia (),


longitud de onda () y nmero de onda ( ).

E=h =h C = h c

donde h = 6.62 x 10-34 Julios (Constante de Planck).

5.1.1 Espectro electromagntico.

La frecuencia y la longitud de onda de la radiacin


electromagntica pueden variar dentro de muchos rdenes
de magnitud. Por comodidad, la radiacin se divide en
distintas regiones segn el tipo de transicin atmica o
molecular que produce la absorcin o la emisin de fotones.
El intervalo es tan grande que se utiliza una escala
logartmica, aunque existen solapamientos (figura 5.3. y
5.4.).

119
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.3. Espectro electromagntico de longitudes.

120
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.4. Espectro electromagntico de frecuencias.

5.1.2. Transformacin de la energa.


Segn el principio de conservacin de la energa: La suma
de todas las formas de energa que entran en la muestra
debe ser igual a la suma de todas las formas de energa que
salen de la muestra, ms la energa que queda en el
material (figura 5.5.). Como la radiacin se puede
transformar en calor, la longitud de onda de la radiacin (luz)
que se emite puede ser mayor (menor energa) que la que
excita el tomo o la materia, debido al calentamiento del
tomo y sus alrededores.

121
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Energa cintica e-
h entrada entrada

Energa cintica e- salida

kB T entrada (efecto fotoelctrico,


emisin termoelectrnica,
e- secundarios)

h salida kB T salida
(luminiscen (prdida de
cia, emisin) energa no
radiante)

Fig. 5.5. Interacciones de la radiacin con una partcula de


materia.

5.1.3. Pureza espectral.


Para las medidas de seales electromagnticas es deseable
trabajar con longitudes de onda simples o radiacin
monocromtica. Sin embargo, en la realidad existe una
anchura de banda o lnea espectral muy fina para toda
radiacin monocromtica.
La medida cuantitativa utilizada es la anchura de banda a
media altura entre la lnea de base y el pico denominada
anchura total a media altura o a la mitad del mximo,
centrada en un valor de longitud de onda nominal dada. El
perfil tiene forma de banda Lorentziana como se observa en
la figura 5.6.

122
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Longitud de onda
nominal

Potencia
h

h
2

Ancho de banda espectral

Fig. 5.6. Diagrama de la pureza espectra requerida para las


medidas de radiacin.

5.2. Absorcin y emisin de radiacin.


Los tomos, iones o molculas existen en estados discretos
de energa. Cuando una especie cambia su estado, absorbe
o emite una cantidad de energa exactamente igual a la
diferencia de energa entre los estados. La energa de
cualquier estado es debida al movimiento de electrones
alrededor del ncleo cargado positivamente (estados
electrnicos).

Estados excitados
(Estados de energa superiores)
Estados electrnicos
(Estados de energa de Estado fundamental
tomo o molcula)
(Estado de ms baja energa)
Estado habitual de especies
qumicas a temperatura ambiente

Las transiciones por absorcin o emisin se producen como


muestra el diagrama de la figura 5.6.

123
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.6. Absorcin y emisin de radiacin entre niveles


electrnicos.

5.2.1. Absorcin de la radiacin.


En el caso de tomos, los espectros son simples debido al
pequeo nmero de posibles estados de energa. La
transicin ocurre para los electrones ms externos o
enlazantes (UV-Vis) Es un proceso electrnico en el que
algn electrones se promociona a un nivel de energa
superior. Para partculas monoatmicas se produce la
absorcin de unas pocas del espectro, bien definidas,
produciendo un espectro de absorcin.
La naturaleza del espectro de absorcin depende de la
complejidad, estado fsico y entorno de la especie
absorbente. As, la figura 5.7. presenta diferentes espectros,
correspondientes a especies ms complejas o en diferente
estado fsico. Espectro de vapor de sodio que presenta dos
lneas de absorcin agudas en la regin amarilla de espectro
visible (a). Espectros moleculares, de bandas, en las
regiones UV-Vis. Presentan lneas de absorcin muy
prximas entre s que constituyen una banda (b). Sin
instrumento de alta resolucin los picos individuales no se

124
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

pueden detectar y la forma que presenta el espectro es de


suaves picos anchos (c). Espectro continuo. Las lneas
individuales tienden a ensancharse an ms en estado
condensado y en presencia de molculas de disolvente (d).

(a) Vapor de Na
(c) Benceno en
hexano
Absorbancia

Absorbancia
(b) Vapor de
benceno
(d) Bifenilo en hexano

Absorbancia
Absorbancia

Longitud de onda

Fig. 5.7. Espectros de diferentes especies.

Los espectros de absorcin molecular son ms complejos


debido a la existencia, no slo de niveles electrnicos, sino
tambin de niveles vibracionales (como consecuencia de
vibraciones interatmicas) y niveles rotacionales (debido a la
rotacin alrededor de centro de gravedad) en las molculas.
As el nmero de estados rotacionales > nmero de estados
vibracionales > nmero de estados electrnicos.
La energa asociada a las bandas de una molcula est
formada por tres componentes:

Energa = E electrnica + E vibracional + E rotacional

La energa electrnica proviene de los estados energticos


de los diferentes electrones enlazantes.
La energa vibracional est asociada al elevado nmero de
de vibraciones interatmicas.

125
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

La energa rotacional es debida a los diferentes movimientos


rotacionales dentro de molcula.

5.2.2. Emisin de la radiacin.

La emisin de radiacin se produce cuando las partculas


excitadas, situadas en niveles superiores de energa, se
relajan a niveles de menor energa cediendo fotones (figura
5.8.).

Espectro
Espectro
de lneas
de lneas

Espectro
Espectro
de bandas
de
bandas
Emisin

Espectro continuo
Espectro
continuo

Longitud de onda

Fig. 5.8. Diferentes espectros de emisin.

Se observan: Los espectros de lneas son una serie de picos


agudos originados por tomos individuales excitados. Los
espectros de bandas estn formados por grupos de lneas
estrechamente espaciadas, producidas por radicales o
molculas pequeas, que no se resuelven completamente
Por otro lado, el espectro continuo es consecuencia del
aumento de ruido de fondo (por encima de 350 nm).

126
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

En la figura 5.9. se muestran, comparativamente, los


espectros de emisin de varios gases excitados (a) y de
absorcin de hidrgeno (b).

Fig. 5.9. Comparacin de espectros de emisin (a) y


absorcin (b).

5.3. Procesos de relajacin. Mtodos luminiscentes.


El tiempo de vida media de un tomo o molcula excitados
por absorcin de radiacin es breve y tienden a volver al
estado fundamental mediante diversos procesos de
relajacin. Adems, el Principio de exclusin de Pauli
establece que en un tomo no puede haber 2 electrones que
tengan iguales los cuatro nmeros cunticos (coordenadas
establecidas por Schrdinger que describen el movimiento
de los electrones alrededor del ncleo). Slo puede haber 2
electrones en el mismo orbital y deben tener los espines
opuestos. As, en el estado singlete los dos electrones
deben tener los espines (nmero cuntico que se refiere al
giro del electrn sobre s mismo) apareados, mientras que
en el estado triplete el electrn tiene el espn paralelo. La
figura 5.10. muestran los diferentes estados energticos en

127
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

un tomo o en una molcula, entre los que tienen lugar las


distintas transiciones electrnicas.

Singletes Tripletes Singletes Tripletes


T2
S2

S1 S1

T1 T1

Niveles
vibracionales
S0
S0

Niveles
rotacionales

tomos Molculas

Fig. 5.10. Diagrama de niveles de energa para tomos y


molculas que tienen estados de singlete y de triplete.

Los procesos de relajacin o desactivacin electrnica


pueden ser: de tipo no radiante, que permite a los tomos y
molculas regresar al estado fundamental desde estados
excitados de energa sin emitir radiacin; y de tipo radiante,
como la fluorescencia (emisin de radiacin rpida entre
estados singlete-singlete) y la fosforescencia (emisin de
radiacin lenta y persistente entre estados triplete-singlete)
La figura 5.11. representa grficamente los niveles de
energa asociados con unos pocos de los numerosos
estados electrnicos y vibracionales de la molcula.

128
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Relajacin
Absorcin no radiante Fluorescencia

Estado
electrnico
UV excitado 2
E2 - E0
Energa

Estado
electrnico
excitado 1

Fluorescencia
Visible de resonancia
E1 - E0

IR
e 1 - e0 Estado
electrnico
f undamental 1
(a) (b) (c)

Fig. 5.11. Diagramas parciales de niveles de energa de una


molcula orgnica fluorescente. Absorcin (a), relajacin no
radiante (b) y fluorescencia (c).

Otros procesos de desactivacin no radiante son (figura


5.12.):
Relajacin vibracional: se pierde el exceso de energa
vibracional (entre niveles vibracionales), como consecuencia
de la colisin entre molculas de la especie excitada y del
disolvente, en disolucin
Conversin interna: procesos intermoleculares por los que la
molcula pasa a un estado electrnico de menor energa,
cuando los niveles electrnicos estn lo suficientemente
prximos como para que se produzca un solapamiento de
los niveles vibracionales.

129
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Cruce entre sistemas: se invierte el espn de un electrn


excitado y como resultado un cambio en la multiplicidad de
la molcula. La probabilidad de esta transicin aumenta si
los niveles vibracionales de dos estados singlete y triplete se
solapan.

Fig. 5.12. Diagrama de energa parcial para un sistema


fotoluminiscente.

Los mtodos luminiscentes engloban la fotoluminiscencia


(excitacin mediante absorcin de fotones) que incluye la
fluorescencia y fosforescencia; y la quimioluminiscencia
(excitacin mediante una reaccin qumica) que produce un
espectro del producto de oxidacin (ej. anlisis de gases).

5.3.1. Fluorescencia no resonante.


Proceso radiante producido por molculas fluorescente en
disolucin o en estado gaseoso. La energa de la radiacin
emitida por fluorescencia es menor que la energa de la
radiacin absorbida en una cantidad igual a la energa de
radiacin vibratoria. Esta variacin de la energa se conoce
con el nombre de desplazamiento de Stokes (figura 5.13.).

130
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

excitacin > emisin


excitacin < emisin

Fig. 5.13. Fluorescencia no resonante. Como consecuencia


del desplazamiento de Stokes la longitud de onda de
emisin de radiacin fluorescente es mayor que la de la
radiacin de excitacin.

5.4. Refraccin de la radiacin.


Desviacin en la direccin del haz incidente en la interfase
entre dos medios transparentes de distinta densidad, como
consecuencia de una diferencia de velocidad de la radiacin
en los dos medios (figura 5.14.)

131
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.14. Fenmeno de refraccin.

La refraccin responde a la Ley de Snell, ilustrada en la


figura 5.15.

sen1 2 1

sen2 1 2

Fig. 5.15. Esquema de la ley de Snell que rige la refraccin


de la radiacin.

El ndice de refraccin (i) indica la velocidad de la radiacin


en el medio en el que se desplaza.

132
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

5.5. Reflexin de la radiacin.


Fenmeno segn el cual se produce el retorno de la
radiacin procedente de una superficie. Tiene lugar siempre
cuando la radiacin atraviesa una interfase entre dos medios
con diferente ndice de refraccin (figura 5.16.).

Fig. 5.16. Esquema que ilustra la reflexin de la radiacin.

El fundamento del funcionamiento de la fibra ptica es la


reflexin total interna, que se produce cuando la fraccin de
haz incidente que se refleja es mayor a medida que aumenta
el ngulo de incidencia. Ms all de cierto ngulo crtico, la
reflexin es completa.

5.6. Fuentes de radiacin.


Deben de tener la suficiente potencia y un voltaje estable. Se
utilizan fuentes de radiacin continuas y de lneas.
1. Fuentes continuas de radiacin visible: Filamento de
tungsteno o wolframio (figura 5.17.). Emite un espectro
continuo desde 350 a 2500 nm, en las regiones Visible e IR
cercano (figura 5.18.). Necesita una fuente de voltaje
estabilizada electrnicamente. Se calienta hasta
incandescencia al paso de corriente, alcanzando una
temperatura de filamento de 2870 K. Las caractersticas se
mejoran con la fuente de wolframio/halgeno al aadir una
pequea cantidad de I2 dentro de la cubierta de cuarzo.

133
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.17. Fuente de tungsteno o wolframio (izquierda) y de


wolframio/halgeno (derecha).

Fig. 5.18. Espectro de emisin de la fuente de tungsteno.

2. Fuentes continuas de radiacin ultravioleta: Deuterio o


hidrgeno (figura 5.19.) Funciona por una descarga elctrica
entre dos electrodos situados en el seno de gas D2. Se
producen colisiones entre los electrones de descarga y las
molculas gaseosas. Emite un espectro de lneas a baja
presin y un espectro continuo a alta presin, en el intervalo
160-390 nm (figura 5.20.).

134
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.19. Fuente de deuterio o hidrgeno.


Intensidadderadiacin

200 300 400 500 600 700 800 1000


Longituddeonda,nm

Fig. 5.20. Espectro de emisin de la fuente de deuterio


(izquierda) superpuesto con el espectro de emisin de la
fuente de wolframio (derecha). En UV-Visible se debe utilizar
la fuente ms potente.

3. Fuentes continuas de radiacin infrarroja: Emisor de


Nernst (figura 5.21.), formado por un cilindro refractario de 2
x 20 mm de xidos de ZrO2 y de Y2O3. Emite radiacin IR al
calentarse, mediante una resistencia, a altas temperaturas
(2200 K) por el paso de corriente elctrica (figura 5.22.)

135
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Cermica
incandescente
conductora
Resistencia

Reflectory
protector

AlambredePt

Fig. 5.21. Fuente emisor de Nernst.

1000
Energa

100

10

0 1 3 5 7 9 11
Longituddeonda,m

Fig. 5.22. Espectro de emisin del emisor de Nernst.

5.7. Lser.
Su nombre es el acrnimo de light amplification by
simulated emission of radiation. Es adecuada para las
regiones del visible, UV e IR. Sus principales caractersticas
son: poseer una intensidad elevada, producir bandas
estrechas y radiacin coherente. Para su funcionamiento se
necesitan los siguientes componentes (figura 5.23.):
1- Un medio que genera el lser (puede ser de 3 niveles y 4
niveles).

136
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

2- Una fuente de activacin del lser (corriente elctrica,


radiacin externa).
3- Un sistema de amplificacin (espejos) que genera fotones
adicionales al pasar numerosas veces la radiacin a travs
del medio (haz paralelo).

Fig. 5.23. Componentes del lser: 1. Medio activo para la


formacin del lser. 2. Fuente de bombeo para el lser. 3.
Espejo reflectante al 100%. 4. Espejo reflectante al 99%. 5.
Emisin del rayo lser.

5.8. Selector de longitud de onda.


Dispositivos que restringen la radiacin que se va a medir a
una banda estrecha para que se absorba o emita por el
analito (radiacin monocromtica). La ley de Beer se aplica
con la radiacin monocromtica. Los anchos de banda
estrechos aumentan la sensibilidad al disminuir la seal del
blanco pero no la de la muestra. La selectividad mejora con

137
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

radiacin monocromtica porque hay menor probabilidad de


que otras sustancias distintas al analito absorban. Por tanto,
los filtros aumentan la sensibilidad y selectividad y dan lugar
a una respuesta lineal en absorcin.

5.8.1. Filtros de absorcin y de interferencia.


Son lminas que al interponerse en el paso de la luz
absorben parte de la radiacin o la interfieren, permitiendo
que pase nicamente la longitud de onda deseada.
Los filtros de interferencia son mejores que los de absorcin
porque tienen anchos de banda efectivos menores y el
porcentaje de transmitancia en el mximo es ms alto (70-
80% del inicial) mientras que en los filtros de absorcin es de
50 % (figura 5.24.)

Fig. 5.24. Anchuras de banda efectiva para dos tipos de


filtros. Se observa la medida inversa de la calidad del
dispositivo selector.

Los filtros de interferencia estn basados en interferencias


pticas. Reflejan las radiaciones sin inters y producen
anchos de banda de 5-10 nm. Estn formados por un
dielctrico (aislante), transparente a mayora de regiones
espectrales, CaF2 MgF2, situado entre dos pelculas
metlicas semirreflectantes de plata (figura 5.25.).

138
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.25. Filtro de interferencia. Se puede controlar el


grosor del dielctrico (d) pues de l depende la la .

5.8.2. Monocromadores.
Selectores de longitud de onda de mejor calidad y ms
complejos que los filtros. Tipos de monocromadores:

1. Prismas.
Dispersan la radiacin separando espacialmente las
longitudes de onda de la luz policromtica, proporcionando
bandas de anchura pequea (monocromtica) (figura 5.26.).
Existen diferentes tipos:
- Prisma de cuarzo tipo Cornu (formado por un nico
bloque de 60 grados; dos prismas de cuarzo cristalino de
30 grados)
- Monocromador de Bunsen (60 grados)
- Prisma de cuarzo tipo Littrow (30 grados con cara
posterior especular, dando diseos ms compactos).

139
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

1 2 4
3
5

Fig. 5.26. Componentes de un prisma: 1. Rendija de entrada


(deja pasar haz fino de radiacin). 2. Lente o espejo
colimador (dirige la radiacin en un haz paralelo). 3.
Elemento dispersante (red o prisma). 4. Elemento
focalizador (forma imagen de nuevo y la enfoca en plano
focal). 5. Rendija de salida sobre plano focal (deja pasar
radiacin deseada).

2. Redes de difraccin
En una red (reflexion y transmisin) la luz se dispersa
linealmente, lo que significa que la separacin de las
distintas longitudes de onda a lo largo del plano focal vara
linealmente con la longitud de onda.
La red de reflexin, en escalera o tipo escalerilla, est
formada por una superficie pticamente plana de aluminio
reflectante, recubierta de SiO2 transparente para evitar
oxidacin, con surcos grabados paralelos y cercanos. En las
caras ms anchas se produce la reflexin (figura 5.27.).

Fig. 5.27. Red de reflexin tipo monocromador Czerny-


Turner.

140
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

5.9. Cubetas o celdas.


La forma de las celdas depende del estado fsico de la
muestra y el tipo de anlisis a realizar. Segn el tipo de
radiacin utilizada, variar el material de composicin de la
cubeta (figura 5.28.). Con radiacin UV se recomienda
cubetas fabricadas en cuarzo o slice fundida, porque otro
material absorbe dicha radiacin. En la regin de visible se
puede utilizar cualquier material, pero los ms baratos son el
vidrio y el plstico. Para trabajar en infrarrojo se utilizan
celdas de NaCl, KBr, ICs, AgCl, materiales que no absorben
radiacin IR.

Hacer vaco

Soporte:
Aceite de nujol
KBr
Celda de flujo

Fig. 5.28. Diferentes tipos de cubetas para anlisis


espectroscpico

5.10. Detectores de fotones o fotoelctricos.


Se basan en la interaccin de la radiacin con una superficie
reactiva para promover electrones a estados de energa que
puedan conducir la electricidad.

5.10.1. Fototubo de vaco.


Est constituido por un ctodo semicilndrico y un nodo de
filamento colocados en una ampolla de cuarzo o vidrio
donde se ha hecho el vaco (figura 5.29.). El material
fotosensible de la superficie cncava del ctodo (xidos de
metales alcalinos) emite electrones al incidir sobre la
radiacin, UV-VIS (190-700 nm). Cuando se aplica una

141
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

diferencia de potencial entre los electrodos, los


fotoelectrones emitidos por el ctodo, al incidir la radiacin,
son captados por el filamento del nodo produciendo
corriente elctrica.

e-
Catodo

e-

Anodo
e-

Reostato

Fig. 5.29. Esquema de funcionamiento de un fototubo de


vaco.

5.10.2. Tubos fotomultiplicadores.


Constituido por un ctodo fotosensible (similar al fototubo) y
un nodo colector, separados por una serie de electrodos
positivos (entre 5-11) de MgO, GaP, llamados dnodos (cada
uno a un voltaje 90 V superior al anterior) que emiten de 2 a
5 electrones cuando son golpeados con electrones de
suficiente energa (figura 5.30.).
Al ser irradiado, el ctodo fotosensible emite electrones que
son acelerados por el campo elctrico e inciden sobre varias
superficies liberando una cascada de electrones secundarios
(106- 107 electrones por cada fotn incidente).
Estos detectores tienen la ventaja de ser muy sensibles al
UV-Visible, respuesta rpida y la capacidad de medir
radiacin de baja potencia.

142
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.30. Esquema de funcionamiento de un tubo


fotomultiplicador.

5.10.3. Detectores de diodos en serie.


Los fotodiodos se pueden miniaturizar y alinear (1000 o ms)
en un solo chip pequeo de Si. Cada uno consiste en una
unin pn polarizada inversamente (figura 5.31.).
Este detector situado a lo largo de plano focal de un
monocromador permite controlar simultneamente todas las
longitudes de ondas, dando lugar a una espectroscopa de
alta velocidad (detector multicanal). Este detector tiene
menor sensibilidad, rango dinmico y S/R que el
fotomultiplicador.

143
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.31. Esquema de un detector de diodos en serie


(arriba). Conduccin en semiconductores de silicio o
germanio (abajo) por movimiento de electrones (e-) desde la
regin n y agujeros (huecos positivos) desde la regin p, en
direcciones opuestas.

5.10.4. Detectores multicanal de transferencia de carga.


Un ejemplo son los detectores de acoplamiento de carga
(CCD). Destacar que, en este caso, el semiconductor est
formado por silicio tipo p y el condensador est polarizado
positivamente, de manera que los electrones formados por
absorcin de radiacin se recogen en el pozo bajo el
electrodo, mientras que los huecos migran hacia el sustrato
tipo n (figura 5.32.)

144
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

VISTA TRANSVERSAL
VISTA SUPERIOR

RADIACIN
576 f ilas
Electrodo de Si
384 columnas
+ 10 v
Aislante de SiO2

Almacenado
de electrn
bajo electrodo Fotn genera
positivo un electrn y
Sustrato de Si dopado (tipo p) un hueco Amplif icador

Sustrato de Si dopado (tipo n)

ESTRUCTURA REAL DEL TAMAO DE UN


GENERACIN Y ALMACENAMIENTO DE
SELLO POSTAL
CARGA EN CADA PIXEL

Fig.5.32. Esquema de funcionamiento detector de


acoplamiento de carga.

5.11. Detector trmico o de calor.


La radiacin provoca una diferencia de temperatura que se
convierte en una seal elctrica. En los termopares se
necesita formar un par de uniones al soldar dos piezas de
metal (Bi y Sb). Se genera un potencial entre las dos
uniones que vara en funcin de la diferencia de temperatura
(figura 5.33.). La unin se ennegrece para aumentar la
capacidad de absorber calor, se sella en una cmara de
vaco con ventana transparente a IR.

145
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.33. Esquema de un termopar.

5.12. Fibras pticas.


El fenmeno de reflexin total interna explica la transmisin
de radiacin a travs de la fibra ptica. Tienen lugar
refraccin y reflexin en la interfaz de dos medios con
diferentes ndices de refraccin (n1>n2). No toda la radiacin
que penetra en la fibra se propaga a lo largo de ella. Se
transmite la radiacin contenida en un cono de apertura o
aceptacin limitado por un ngulo (figura 5.34.) segn la
siguiente ecuacin:

n3.sen =(n12-n22)1/2

con n1>n2>n3

146
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

Fig. 5.34. Funcionamiento de fibra ptica.

En la figura 5.35. se muestra el acoplamiento de una fibra


ptica en un instrumento espectroscpico.

Fig. 5.35. Transmisin de la radiacin a travs de fibra


ptica.

147
TEMA 5. Introduccin a los mtodos espectroscpicos

5.13. Bibliografa

D.A. SKOOG, D.M. WEST, F.J. HOLLER, S.R. CROUCH


Fundamentos de Qumica Analtica". 7 Ed Ed. Thonson
(Paraninfo Editores). Madrid (2005).

D.A. SKOOG, F.J. HOLLER and T.A. NIEMAN Principios de


Anlisis Instrumental 5 Ed. Mc Graw Hill Madrid (2001).

K.A. RUBINSON and J.F. RUBINSON Anlisis Instrumental Ed


Prentice Hall. Madrid (2000).

http://www.shsu.edu/%7Echm_tgc/sounds/pushmovies/grating.gif
http://www.shsu.edu/%7Echm_tgc/sounds/pushmovies/pee.gif
http://www.shsu.edu/%7Echm_tgc/sounds/pushmovies/pmt.html

148
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

TEMA 6. MTODOS ESPECTROMTRICOS DE ANLISIS


MOLECULAR
Objetivos
Conocer las aplicaciones generales, ventajas e
inconvenientes de las tcnicas de espectrometra
molecular.
Capacitar para el desarrollo de mtodos
espectroscpicos y su aplicacin a la resolucin casos
particulares.
Aprender a manejar tablas, dibujos y diagramas de
bloque que faciliten la comprensin de su
fundamento, aplicaciones y manejo de instrumentos.

6.1. Ley de Beer


Cuando un haz de radiacin monocromtica de potencia P0
incide y atraviesa una disolucin de espesor b cm y una
concentracin c de la especie absorbente, la potencia de la
radiacin disminuye de P0 a P debido a la interaccin de los
fotones y las partculas absorbentes. T es la fraccin de
radiacin incidente transmitida por la disolucin.
b

Po P

C
P
% T (Transmitancia) = x100
P0
1 P
A (Absorbancia) = log log 0 =- log T
T P

149
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

La absorbancia aumenta a medida que disminuye la


transmitancia.
Pero, cuando se mide la absorbancia o la transmitancia, la
muestra est colocada en una cubeta en la cual pueden
darse fenmenos de dispersin por parte de las partculas
de la disolucin y de reflexin en las interfases aire/pared y
pared /disolucin.

Po P

C
Para compensar estos efectos, la potencia del haz
transmitido por la disolucin del analito se compara con la
potencia del haz transmitido a travs de una cubeta idntica
que contiene slo disolvente, midindose la absorbancia
experimental.
Pdisolvente P0
Absorbancia = log log
Pdisolucin P

La ley de Beer relaciona directamente la absorbancia con el


espesor de la cubeta (expresado en cm) y la concentracin
de la especie absorbente (expresada en mol L-1):

A=bc

se define como el coeficiente de absortividad molar y se


expresa como L mol-1 cm-1

150
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

6.2. Diseo de instrumentos para absorcin molecular.


Esta instrumentacin se utiliza para medir la fraccin de
radiacin (UV, visible e IR), de una determinada longitud de
onda, que atraviesa la muestra. Los fotmetros son
instrumentos que constan de fuente, filtros (como selectores
de la longitud de onda), detector fotoelctrico, procesador
de seales y sistema de lectura. (Figuras 6.1.- 6.4.)

FOTMETROS

Absorcin UV
Sonda
Doble haz
Un solo haz

Fig. 6.1. Configuracin de un fotmetro de haz simple.

Fig. 6.2. Configuracin de un fotmetro de doble haz (uno


de ellos pasa a travs de la muestra y el otro de una
referencia).

151
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Fig. 6.3. Dispositivo provisto de lmpara de mercurio, filtro


254 nm, para deteccin de absorcin UV en equipo de
cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC).

Fig. 6.4. Esquema de un fotmetro tipo sonda, que utiliza


fibra ptica para la transmisin de la radiacin de la lmpara
a la muestra y de ah al detector.

Los espectrofotmetros son instrumentos que constan de


fuente, monocromador con una rendija en el plano focal, un

152
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

detector fotoelctrico procesador de seales y sistema de


lectura. (figuras 6.5. 6.8.)

ESPECTROFOTMETROS

Multicanal
Doble haz
Un solo haz

Fig. 6.5. Configuracin de un espectrofotmetro de un haz.

Fig. 6.6. Esquema de espectrofotmetro Spectronic 20 de


haz simple: Rango de de trabajo: 340-950 nm; Lmpara:
Wolframio; Selector de s: red de difraccin; Detector:
fototubo.

153
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Fig. 6.7. Configuracin de un espectrofotmetro de doble


haz.

Red de difraccin

Tubos fotomultiplicadores

Muestra

Tubos fotomultiplicadores

Fig. 6.8. Configuracin de un espectrofotmetro multicanal,


con detector de serie de diodos (izquierda) o con varios
tubos fotomultiplicadores (derecha).

En la figura 6.9. se muestra un espectrofotmetro multicanal


con detector de acoplamiento de carga (CCD).

154
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Fig. 6.9. Configuracin de un espectrofotmetro con


detector de acoplamiento de carga (CCD). 1- rendija, 2-
filtros instalados, 3- fibra ptica, 5- filtros mviles para
modificar la radiacin, 6- atenuador de seal, 7- ordenador
que controla el equipo y procesa las seales.

Los instrumentos temporales operan en un solo canal y las


bandas de absorcin se analizan de forma secuencial en el
tiempo. Dentro de este tipo destacan los instrumentos
dispersivos (con monocromador) como los mostrados en la
figura 6.10. La radiacin entra a travs de la rendija y se
dispersa. (a) El policromador produce un espectro
(intensidad frente a ) muestreando la salida con una serie
de detectores. El ancho de la banda del espectro es funcin
del ancho de la rendija, las cualidades de la red de
difraccin, el nmero de elementos individuales del detector
y la geometra de cada uno de los componentes. (b) Un
instrumento basado en un monocromador debe barrer el
espectro. Para ello, la red de difraccin se rota. La pureza
espectral depende de las anchuras de las rendijas y de las
cualidades de la red de difraccin y su geometra.

155
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

(a) (b)

Fig. 6.11. Representacin de las estructuras generales de


los espectrmetros dispersivos.

6.3. Aplicaciones de la espectrometra de absorcin


molecular UV-Vis.
Se muestran diferentes aplicaciones de la espectrometra de
absorcin molecular UV-Vis en las siguientes figuras.

On-line In-line

Planta de
produccin

Fibras pticas
Desecho

Zona de
almacenamiento

Fig. 6.12. Control espectrofotomtrico de produccin y


monitorizacin ambiental.

156
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Fig. 6.13. Fotmetro de dispersin de luz con sistema on-line


de bypass para anlisis de concentraciones traza de cenizas
en salidas de gases hmedos y calientes. Presenta diversas
ventajas como: Diseo compacto, instalacin simple,
elevada seguridad operacional, bajo mantenimiento.

Canales de muestra y referencia se alternan varias veces/minuto


para corregir influencias pticas o electrnicas

paso de
referencia

Lecho de carbn

paso de muestra
de aire
Clulas A y B recubiertas interiormente con floruro de
polivinilidina para prevenir descomposiciones de O3

Fig. 6.14. Analizador con espectrmetro de doble haz


paracontrol de O3 en gases expulsados por 5 aviones
comerciales de 3 compaas areas europeas que vuelan en
la tropopausa (entre troposfera y estratosfera). El gas de
referencia es el mismo que el de muestra pero ha pasado

157
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

por lecho de carbn para eliminar presencia de O3. Se mide


la diferencia de absorcin.

DOAS para NO2 bandas


fuertes a 420-440 nm

Fig. 6.15. Sistema de espectrometra de absorcin ptica


diferencial (DOAS) para medida de gases. Un emisor
proyecta un haz de luz hacia un receptor. La luz se transfiere
al sistema de medida a travs de cables de fibra ptica. El
rea de control suele tener varios cientos de metros de
longitud.

Fig. 6.16. Monitorizacin in-situ de emisin continua en


desechos de incineradoras y en plantas cementeras

158
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

mediante sistema DOAS. Diferentes gases voltiles


absorben radiacin procedente de regiones conocidas del
espectro (UV, Vis, IR). La absorcin es registrada mediante
un ordenador que controla el espectrmetro. Se trata de una
tcnica no invasiva, automtica y libre de calibracin

6.4. Aplicaciones de espectrometra de absorcin


molecular IR.
La absorcin de radiacin IR implica transiciones entre
distintos niveles de energa vibracional y rotacional
asociados con el nivel electrnico ms bajo de las
molculas.
1.- La molcula debe sufrir un cambio neto en su momento
dipolar debido a diferentes movimientos de vibracin o
rotacin.
Se define momento dipolar qumico () como la medida de la
intensidad de la fuerza de atraccin entre dos tomos. Es la
expresin de la asimetra de la carga elctrica. Est definido
como el producto entre la distancia d que separa a las
cargas (longitud del enlace) y el valor de las cargas iguales y
opuestas en un enlace qumico: = q d
2.- El campo elctrico alterno de radiacin puede
interaccionar con la molcula y provocar cambios en la
amplitud de sus movimientos.
3.- Si la de la radiacin IR coincide con la de
vibracin/rotacin natural de la molcula se produce una
transferencia de energa que produce un cambio en la
amplitud de vibracin molecular. Esto se traduce como
absorcin de radiacin IR (figura 6.17.).
Las especies mononucleares (sin momento dipolar) no
absorben (O2, Cl2, N2).

159
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Fig. 6.17. Interaccin entre la radiacin IR y un grupo


funcional de molcula en movimiento.

En la figura 6.18. se muestran las regiones del espectro IR


donde absorben distintos grupos funcionales. Los espectros
se presentan de forma habitual como %Transmitancia frente
a nmero de onda. Destacar que la regin de huella digital
es aquella zona del espectro entre 1500 y 700 cm-1 donde
aparecen bandas caractersticas de los grupos funcionales
que permiten la identificacin cualitativa de una muestra
desconocida (ver ejemplos en figura 6.19.)
La identificacin de analitos orgnicos se lleva a cabo
siguiendo las siguientes pautas:

1. Examinar frecuencias de grupo, pero hacer hincapi en la


regin de huella digital donde se observan cambios en el
aspecto, distribucin de picos debido a pequeas diferencias
de estructura.
2. Comparacin directa del espectro desconocido con
espectros conocidos (de referencia).
3. Seguir un esquema sistemtico de la presencia/ausencia
de bandas.

160
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Regin de frecuencias de grupo Regin de huella digital

Fig. 6.18. Regiones caractersticas en el espectro IR.

Fig. 6.19. Diferencias en las bandas de absorcin de los los


espectros de la regin IR para la identificacin de (a) 1-
octino y (b) 4-octino.

161
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

En la figura 6.20. se muestran los componentes bsicos de


un espectrmetro de absorcin IR. A diferencia de las
configuraciones mostradas cuando se utiliza radiacin UV-
Vis, en este caso el selector de longitudes de onda
(monocromador) est situado a continuacin de la cubeta de
muestra/referencia para evitar que la radiacin dispersada
por las partculas de la muestra alcance el detector. Adems
la energa de la radiacin IR es suficientemente baja como
para no producir fotodescomposicin de la muestra.

Fig. 6.20. Configuracin de un espectrmetro de doble haz


con detector trmico.

En las figuras siguientes se presentan diferentes


aplicaciones de la espectrometra IR.

162
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Lnea del proceso Dispositivo de


medida

Lentes
Monocromador

Detector
Fuente de luz

Fibra Fibra
ptica ptica

Lentes Lentes

Flujo

Fig. 6.21. Equipo basado en espectrometra IR, dotado de


fibras pticas, de un analizador in-line.


Puerta

Espejo
Barriles Pasillo
Centrfuga con CH2Cl 2

Centrfuga

Punto de muestreo
Flujo de
con tubos de carbn
aire

Fig. 6.22. Monitorizacin remota de aire en zona de trabajo


expuesta a materiales peligrosos: compuesto farmacutico
que se extrae con cloruro de metileno (CH2Cl2) mediante
centrfugacin y luego el disolvente se transfiere a barriles

163
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

de almacenamiento. En el mapa se muestra los puntos de


toma de muestra remota del equipo de absorcin IR provisto
de algoritmo de transformada de Fourier (FTIR), y la
trayectoria del haz en la zona de trabajo. A lo largo de esta
trayectoria se han dispuesto tubos de muestreo de carbn
vegetal. La sustancia absorbida se mide tambin por
cromatografa de gases (GC) y as se valida el mtodo FTIR.
Se rechazan los datos si la trayectoria del haz se ha cortado.
Se ofrecen niveles exactos de concentracin promedio en
tiempo real.

6.5. Aplicaciones de espectrometra de fluorescencia


molecular.
Los espectros de luminiscencia se obtienen cuando la
muestra, tras absorber radiacin adecuada, la reemite en
todos los sentidos y a una longitud de onda mayor
Factores influyentes:
- Distinto pH puede dar lugar o no a fluorescencia.
- Valores de viscosidad alta y temperatura baja favorecen la
disminucin de las colisiones entre partculas de soluto y
disolvente, reducen la amortiguacin coloidal o conversin
interna y favorece un incremento de la fluorescencia.
- La influencia del tipo de estructura es importante. As, la
falta de rigidez de la molcula provoca un aumento de
velocidad de conversin interna (desactivacin no
radiante) provocando una disminucin de la fluorescencia.
La presencia de grupos aromticos, confiriendo una
mayor rigidez a la molcula produce un incremento de la
fluorescencia.
- La presencia de un disolvente con tomos pesados
reduce los valores de fluorescencia.
En la figura 6.23. se muestra la instrumentacin utilizada
para las medidas de fluorescencia molecular, ya sea un
fluormetro (utilizando filtros como selectores de longitud de
onda) o un espectrofluormetro (utilizando
monocromadores). Ntese que la configuracin forma un
ngulo de 90 entre el haz de excitacin (procedente de la

164
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

fuente) y el haz de emisin de fluorescencia (procedente de


la muestra). De esta forma se evita que la radiacin de la
lmpara llegue al detector, junto con la radiacin
fluorescente emitida por la muestra, produciendo
interacciones en la medida. La emisin fluorescente de la
muestra en todas direcciones hace posible este diseo
instrumental.

Fig. 6.23 Configuracin de un fluormetro (usa filtros) o


espectrofluormetro (utiliza monocromadores).

En las siguientes figuras se presenta una interesante


aplicacin de la espectrometra de fluorescencia molcular.
Se trata de un biosensor de glucosa para medir la
concentracin de glucosa en el interior de la vena del
paciente. A travs de la pared del sensor (membrana)
difunden molculas pequeas como la glucosa. Cuando todo
el dextrano est unido a membrana, no hay ningn
cromforo fluorescente en el camino ptico y no se detecta
fluorescencia (figura 6.24).
Cuando la glucosa de la corriente sangunea libera parte del
dextrano enlazado, al unirse a concanabalina A, el dextrano

165
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

se difunde hasta el haz de luz y aparece fluorescencia. La


misma fibra ptica transporta la fluorescencia al detector
(figura 6.25).

Grupo fluorescente
La luz va unido covalentemente
al sensor Dextrano unido a la
Fibra ptica membrana al dextrano

Interior del
sensor

Exterior del
sensor

Membrana
Protena concanavalina A (se une semipermeable Glucosa
al dextrano o a la glucosa)

Fig. 6.24. Biosensor de glucosa. Sin deteccin de


fluorescencia.

Dextrano con cromforo


Fluorescencia procedente fluorescente
del sensor
Fibra ptica

Interior del
sensor

Exterior del
sensor

Membrana Glucosa
Protena concanavalina A (se une semipermeable
al dextrano o a la glucosa)

Fig. 6.25. Biosensor de glucosa. Deteccin positiva de


fluorescencia.

En la figura 6.26. se muestra el uso de fluorescencia para la


medida de oxgeno.

166
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

Fig. 6.26. Espectrmetro de fluorescencia con sensor de


oxigeno.

167
TEMA 6. Mtodos espectromtricos de anlisis molecular

6.6. Bibliografa

D.C. HARRIS Anlisis Qumico Cuantitativo 2 Ed. Ed. Revert


S.A. Barcelona (2001).

D.A. SKOOG, F.J. HOLLER and T.A. NIEMAN Principios de


Anlisis Instrumental 5 Ed. Mc Graw Hill Madrid (2001).

K.A. RUBINSON and J.F. RUBINSON Anlisis Instrumental Ed


Prentice Hall. Madrid (2000).

168
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

TEMA 7. MTODOS ESPECTROSCPICOS DE ANLISIS


ELEMENTAL
Objetivos
Conocer las aplicaciones generales, ventajas e
inconvenientes de las tcnicas de espectroscopa
atmica o elemental.
Capacitar para el desarrollo de mtodos
espectroscpicos y su aplicacin a la resolucin casos
particulares.
Aprender a manejar tablas, dibujos y diagramas de
bloque que faciliten la comprensin de su
fundamento, aplicaciones y manejo de instrumentos.

7.1. Generalidades de la espectroscopa de anlisis


elemental.
En absorcin atmica, los tomos absorben parte de la
radiacin procedente de una fuente, y el resto de radiacin
llega al detector. La emisin atmica procede de tomos que
se encuentran en estado excitado por la gran energa
trmica de la llama. Para observar la fluorescencia se tiene
que excitar a los tomos mediante una lmpara externa o un
lser. Un tomo puede emitir las mismas longitudes de onda
que absorbe, o puede decaer a otros estados y emitir otras
longitudes de onda (ver figura 7.1.).
Por otra parte, el coste de la instrumentacin utilizada
aumenta a medida que lo hace la sensibilidad alcanzada,
como se puede observar en la figura 7.2.
Las configuraciones bsicas para las tcnicas de
espectroscopa de absorcin atmica (AAS) y emisin
atmica (AES) con atomizador de llama se muestran en la
figura 7.3.

169
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.1. Representacin esquemtica de la absorcin,


emisin y fluorescencia de tomos en la llama.

Miles

125 ICP-MS

100

75 ICP-OES

50 GF- AAS
AES- llama
25 AAS- llama

100 % 0.1 % ppm ppb ppt ppq [ ]

Fig. 7.2. Comparacin del coste de diferente instrumentacin


para la determinacin de trazas/ultratrazas de elementos en
disolucin.

170
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Emisin
atmica

Absorcin
atmica

Fig. 7.3. Esquemas de instrumentacin en espectroscopa


de absorcin y emisin atmica de llama.

7.2. Mtodos de introduccin de muestra.


El siguiente esquema resume diferentes posibilidades de
introduccin de la muestra en los mtodos de
espectroscopa de anlisis elemental, aunque slo se
comentarn de manera ms detallada las correspondientes
a muestras en disolucin o en suspensin (slurry).
La muestra debe atomizarse para encontrarse en su forma
elemental. Para ello se pueden utilizar diferentes tcnicas de
atomizacin: llama, horno calentado elctricamente, plasma
de radiofrecuencia.
Qu le ocurre a una muestra diluida en un
espectrofotmetro de absorcin/emisin atmica?

171
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

MTODOS DE INTRODUCCIN DE MUESTRA

En disolucin y en Slidas Gases


suspensin (slurry)

Insercin Vapor frio


Nebulizadores
directa
neumticos

Nebulizadores Descarga
ultrasnicos luminiscente

Vaporizadores
Ablacin por lser,
electrotrmicos
arco o chispa

Generacin de
hidruros

En un instrumento con atomizador de llama, la muestra pasa


por diversas etapas desde que es aspirada a travs de un
nebulizador, el aerosol formado se mezcla con los gases que
formarn la llama (en cmara de premezcla), la seleccin de
partculas de tamao adecuado por reduccin de las gotas
mediante aspas (spoiler) y la introduccin de la mezcla en el
quemador. Es aqu donde, tras la prdida de disolvente se
obtiene un aerosol slido-gas que sufrir el proceso de
atomizacin.
La figura 7.4. muestra dos tipos de nebulizador neumtico.
El sistema de atomizacin de llama est basado en un
mechero de premezcla que utiliza un sistema de introduccin
de muestra basado en el nebulizador neumtico (ver figura
7.5.)

172
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

LIQUID PASSAGE LIQUID PASSAGE

Fig. 7.4. Esquema de nebulizador neumtico de trayectoria


paralela (izquierda) y de tubo concntrico (derecha).

Fig, 7.5. Mechero de premezcla

La figura 7.6. muestra un esquema de un nebulizador


ultrasnico. Las gotas se forman por el flujo de gas
turbulento, despus chocan con una placa vibradora a
frecuencias ultrasnicas que rompe las gotas grandes para
formar otras mucho ms finas.

173
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.6. Esquema de nebulizador ultrasnico.

El evaporador electrotrmicco est situado en una cmara


cerrada a travs de la cual un gas inerte (Ar) transporta la
muestra vaporizada hasta el atomizador. Una pequea
cantidad de muestra slida o lquida se situa sobre un
conductor (filamento de Tntalo o barra de carbono). Una
corriente elctrica evapora rpida y completamente la
muestra mezclndose con el argn. La figura 7.7. muestra
un sistema de introduccin de muestra mediante
vaporizacin electrotrmica, que se acopla a un atomizador
de plasma.

174
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

ICP

Fig. 7.7. Esquema de vaporizador electrotrmico.

La figura 7.8. muestra una configuracin instrumental para la


introduccin de muestra de arsnico mediante generacin de
hidruros. Una muestra de cido arsenioso en disolucin
acuosa acidificada, reacciona con NaBH4 para producir un
hidruro voltil (arsina) que es arrastrado por un gas inerte
hacia la cmara de atomizacin, segn la siguiente reaccin.

3 BH4- + 3 H+ + H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O

175
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.8. Sistema de generacin de hidruros para


espetrometra de absorcin atmica con atomizacin de
llama.

7.3. Mtodos de atomizacin.


La absorcin atmica y la fluorescencia atmica se aplican a
los tomos obtenidos, mientras que stos deben ser
excitados para que puedan emitir radiacin que es medida
en el detector (emisin atmica). La figura 7.9. muestra los
diferentes procesos previos a la atomizacin de la muestra.
En primer lugar se nebuliza la muestra que se introduce por
aspiracin. Las pequeas gotas de disolucin se calientan
en el sistema para evaporar el disolvente. La volatilizacin
de las partculas slidas es una etapa crtica.

176
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.9. Procesos que tiene lugar durante la atomizacin.

Existen diferentes posibilidades de atomizacin de la


muestra en los mtodos de espectroscopa de anlisis
elemental.

7.3.1. Atomizacin electrotrmica.


La atomizacin electrotrmica se basa en la utilizacin de
una cmara de grafito. Atomiza slidos, suspensiones y
disoluciones en espectroscopa de absorcin atmica. Se
calienta (2000-3000 C) al hacer pasar una corriente

177
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

elctrica a travs del tubo de grafito que acta como


resistencia. Algunas cmaras u hornos incluyen en su
interior una plataforma de grafito (plataforma de Lvov)
donde se coloca la muestra (figura 7.10.). La plataforma slo
toca los lados del horno por el canto inferior, de forma que el
calor de sus paredes no calienta la muestra directamente. La
muestra se calienta principalmente por medio de calor
radiado que tiende a producir un calentamiento ms
uniforme. En primer lugar se calientan las paredes del horno
y despus se evapora la muestra.
El horno se calienta a una temperatura intermedia elevada
(>100 C) para vaporizar algunas interferencias de la matriz
(etapa de calcinacin o pirolisis). Para ello, el analito debe
ser trmicamente estable. Despus se eleva la temperatura
para la atomizacin (figura 7.11.). Se trabaja en atmsfera
inerte (Ar) durante calentamiento para reducir reacciones
qumicas no deseadas.
A veces, se utilizan modificadores de matriz que forman
complejos con el analito y permiten incrementar la
temperatura de vaporizacin y eliminar efectos de
interaccin entre el analito el horno. Aumentan la volatilidad
de la matriz o disminuye la volatilidad del analito, mejorando
la separacin entre matriz y analito. En el anlisis de
manganeso en agua de mar, gran parte de la absorbancia
aparente que se produce se debe a la dispersin de la
radiacin producida por el humo formado durante la
calefaccin de NaCl siguiendo el perfil de temperaturas
(figura 7.11) en un horno de grafito. Se produce una
interferencia en la medida de Mn (durante la atomizacin)
que puede ser significativamente reducida al aadir NH4NO3
a la muestra. Este compuesto reacciona con NaCl para dar
NH4Cl y NaNO3 que son ms voltiles que NaCl y se
evaporan limpiamente sin formar humo.

178
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.10. Seccin longitudinal de un horno de grafito


(arriba). Plataforma de Lvov y su posicin en el horno de
grafito (abajo).

179
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Temp.(C)
2800
limpieza
2200

800 calcinacin

120 secado

Tiempo(seg)
6010300,51,5

Fig. 7.11. Ciclo de calentamiento en el proceso de


separacin entre los analitos y la matriz en un horno de
grafito.

7.3.2. Atomizacin con llama.


Es un sistema de atomizacin utilizado para muestras
lquidas en espectroscopa de absorcin y de emisin
atmica. Como los gases de la llama diluyen la muestra, se
necesita una llama con trayectoria larga para obtener altas
sensibilidades (la absorcin aumenta al aumentar la
trayectoria del paso ptico). Para ello se utiliza un quemador
de ranura en un mechero de flujo laminar conectado con un
nebulizador neumtico de tubo concntrico (figura 7.12.).

180
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.12. Quemador de flujo laminar para la atomizacin con


llama.

El aerosol formado en el nebulizador se mezcla con el flujo


de gas oxidante y de combustible y pasa a travs de una
serie de deflectores que eliminan las gotas de disolucin que
no sean suficientemente finas. La mayor parte de la muestra
se recoge en el fondo de la cmara de mezcla donde se
drena hacia un contenedor de desechos. El 5-10% del
aerosol, el oxidante y el combustible se queman en el
mechero de ranura (5-10 cm de largo). Los mecheros de
flujo laminar proporcionan una llama relativamente estable y
larga que permite aumentar la sensibilidad y la
reproducibilidad. Existen reguladores de presin de doble
diafragma y vlvulas de aguja para disminuir la presin,
porque la mezcla es potencialmente explosiva en la cmara
de mezcla si el caudal es demasiado bajo y pudiese haber
retroceso en la llama.
La eleccin del combustible y el oxidante para generar la
llama depende de la temperatura que se desea alcanzar as

181
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

como de los elementos que se quieren determinar (ver tabla


7.1.).

Tabla 7.1. Propiedades de las llamas

El combustible y el oxidante se mezclan en proporcin


estequiomtrica. Sin embargo, en la determinacin de
metales que forman xidos estables es ms conveniente el
empleo de una llama que contenga un exceso de
combustible.
El sistema de medida de caudal de gases ms empleado es
el rotmetro (tobo cnico graduado y transparente, montado
en vertical. El flujo de gas levanta un flotador liviano, esfrico
o cnico, cuya posicin determina el caudal.
La figura 7.13. muestra las diferentes regiones de
temperatura de la llama. El cono interno o zona de
combustin primaria es donde ocurre la desolvatacin de la
muestra. En esta zona no se alcanza el equilibrio trmico. En
la regin interconal (un centmetro por encima del cono
interno) se alcanza la temperatura mxima y es la regin de
inters, donde se produce la atomizacin. Por eso, debe
ajustarse la altura del quemador para encontrar la regin de
absorbancia/emisin ptima para cada elemento. Los
productos formados en la zona interior de la llama se

182
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

convierten en xidos moleculares estables que se dispersan


en el cono externo o zona de combustin secundaria.

Mxima
Temperatura
1863

Fig. 7.13. Estructura de la llama (izquierda). Perfiles de


temperatura en C para una llama de gas/aire (derecha)

La velocidad de combustin es importante porque las llamas


slo son estables en ciertos intervalos. El tamao de la llama
vara dependiendo del combustible y del oxidante.
En zonas menos calientes de la llama, existe una
concentracin de tomos no excitados que absorben
(autoabsorcin) radiacin emitida por los tomos excitados
(AES). El efecto es un ensanchamiento de banda y una
menor seal registrada en el detector.

7.3.3. Atomizacin con plasma


Un plasma es un gas ionizado por interaccin con un campo
electromagntico en unas condiciones de presin
adecuadas. Para originar el plasma es necesario un aporte
externo de energa que provoque la ionizacin del gas y la
mantenga estacionaria. En funcin de cmo se aporte esa
energa externa, se han desarrollado tres tipos de fuentes de
alimentacin:
Fuente de corriente continua (DCP)

183
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fuente de microondas (MIP)


Campo de radiofrecuencia (ICP)
La figura 7.14 muestra una antorcha de plasma ICP, el ms
utilizado en espectrometra de emisin atmica. El argn se
excita e ioniza mediante la energa de radiofrecuencia que
se emite desde una bobina de induccin situada en la base
del plasma. El plasma que se forma es hueco, y el analito
pasa a travs de la regin hueca mediante una corriente de
gas. Los gases que transportan la muestra nebulizada fluyen
de abajo arriba junto con otra corriente de gas refrigerante
para enfriar la antorcha de cuarzo. El plasma se suspende
alejado de las paredes de cristal a travs de una
combinacin de la ruta helicoidal del flujo del gas enfriador y
la forma de la radiofrecuencia del campo electromagntico.
La separacin evita que las altas temperaturas alcanzadas
(3000-8000 K) fundan la slice. Tanto el flujo helicoidal del
gas como la forma del plasma ayudan a mantener la
antorcha con los gases ms calientes.
La introduccin de muestra al sistema puede realizarse
mediante nebulizador neumtico, ultrasnico y vaporizacin
electrotrmica.

Fig. 7.14. Esquema de una antorcha de plasma ICP.

184
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Ventajas de la utilizacin del plasma ICP como sistema de


atomizacin:
- Elimina muchas interferencias por la presencia del gas
inerte.
- Alcanza mayor temperatura y ms uniforme que la llama.
- Tiempo de residencia mayor que en la llama.
- Atomizacin del analito ms completa y seal mayor.
- Formacin despreciable de xidos e hidrxidos del analito.
- Libre de radiacin de fondo.
- Autoabsorcin poco importante con respecto a llama.
- Curvas de calibrado lineales (5 rdenes de magnitud).
- Posibilidad de configuracin vertical o radial y horizontal o
axial (alineada con el espectrmetro) (figura 7.15.).

Fig. 7.15. Diferente diseo de antorcha ICP. La configuracin


axial proporciona un volumen de plasma observado mayor.
Esto se traduce en una mayor sensibilidad. La desventaja es
que requiere penetrar a travs de penacho, dando lugar a
variaciones de temperatura que producen interferencias
analticas. Se debe utilizar un gas inerte de desvo.

185
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

El plasma inducido por microondas (MIP) se utiliza en la


interfase de cromatografa de gases cuando se utiliza un
detector de emisin atmica (GC-MIP-AED), como se
muestra en la figura 7.16.

Refrigeracin de
tubo de descarga

de He
de espectrmetro

Fig. 7.16. Cavidad de plasma MIP.

La muestra llega a la cavidad del plasma o tubo de descarga


a travs de la columna cromatogrfica. Una vez que el
analito es atomizado y excitado emite radiacin que es
detectada. Existe un sistema de control de venteo para que
el disolvente de la muestra no entre en el plasma,
produciendo depsitos de carbn en el tubo de descarga.

186
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

7.4. Instrumentacin en espectrometra de absorcin


atmica (AAS). Aplicaciones.

LMPARA DE CTODO
HUECO
FUENTES DE RADIACIN
LMPARA DE DESCARGA
SIN ELECTRODOS

LLAMA
SISTEMAS DE ATOMIZACIN
ELECTROTRMICA

HAZ SENCILLO

DOBLE HAZ
ESPECTROFOTMETROS
FILTROS / MONOCROMADORES
TUBOS FOTOMULTIPLICADORES

La figura 7.17. muestra el despiece general de un


espectrmetro atmico para absorcin.

Fig. 7.17. Componentes bsicos de un instrumento AAS con


atomizacin de llama.

187
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

7.4.1. Fuentes de radiacin


Fuentes de radiacin que emiten una nica lnea estrecha
del elemento que se analiza. En la figura 7.18. se comparan
las anchuras de lneas correspondientes al espectro
producido por la emisin de una fuente (a), el espectro de
absorcin de la muestra (b) y el espectro de emisin de la
muestra (c). La anchura de la lnea del espectro de
absorcin es 10-100 veces mayor que la lnea de emisin

Ancho de
banda del
monocromador

Espectro de
Potencia de
la radiacin

emisin de la
fuente

Espectro de
Absorbancia

absorcin de
una muestra

Espectro de
Potencia de
la radiacin

emisin tras
atravesar la
muestra y el
monocromador

Longitud de onda

Fig. 7.18. Comparacin de anchuras de lneas de espectros.

Lmpara de ctodo hueco


De uso ms corriente en AAS, porque producen lneas de
emisin estrechas de los elementos que la componen.
Consta de un nodo de wolframio y ctodo cilndrico del

188
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

metal de inters (de 1 a 3 elementos). Ambos electrodos


estn encerrados hermticamente en un tubo de vidrio con
neon o argn en su interior (figura 7.19.).

NeoAra15torr
Ctodohueco
Ventanade
cuarzooPyrex

Carcasadevidrio
Conexinelctrica

nodo

Fig. 7.19. Lmpara de ctodo hueco (abajo). Esquema de


seccin transversal (arriba).

Cuando se aplica un potencial del orden de 300 v entre los


dos electrodos se produce la ionizacin del gas inerte y da
lugar a una corriente de 5-15 mA y los iones y electrones
migran hacia los electrodos. Si el potencial es lo
suficientemente grande, los cationes gaseosos arrancan
tomos metlicos de la superficie del ctodo y producen una
nube atmica (sputtering). Una parte de los tomos
metlicos desprendidos se encuentran en estado excitado y
al volver al estado fundamental emiten su radiacin
caracterstica. Los tomos metlicos se vuelven a depositar
en el ctodo o en las paredes de vidrio del tubo. Su
configuracin cilndrica aumenta la probabilidad de
deposicin del metal sobre el ctodo.

189
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

La eficacia de la lmpara de ctodo hueco depende de su


geometra y del potencial aplicado. Potenciales elevados
producen intensidades de corriente elevadas. Las corriente
elevadas pueden producir un aumento del nmero de
tomos no excitados, que son capaces de absorber la
radiacin emitida por los tomos excitados. Esta
autoabsorcin reduce la intensidad sobre todo en el centro
de la banda de emisin.
Lmpara de descarga sin electrodos
Son fuentes de espectros atmicos de lneas que producen
intensidades radiantes 1-2 rdenes de magnitud mayores
que la lmpara de ctodo hueco. Consta de un tubo de
cuarzo hermticamente cerrado que contiene un gas inerte a
baja presin y una pequea cantidad de metal o su sal,
cuyo espectro se desea obtener (figura 7.20.). Para su
activacin se utiliza radiacin de microondas o un campo
intenso de radiofrecuencias, que produce la ionizacin del
argn. Los iones de Ar acelerados excitan a los tomos del
metal. Estas fuentes existen para 15 o ms elementos.
Presentan el inconveniente de ser menos estables que las
lmparas de ctodo hueco, produciendo un aumento de la
relacin S/R.

Bobinade
radiofrecuencia

Ventana
decuarzo
Lmpara
Soporte
cermico

Fig. 7.20. Seccin de una lmpara de descarga sin


electrodos.

190
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

7.4.2. Sistemas de atomizacin


Habitualmente los sistemas de atomizacin utilizados en
AAS son la atomizacin con llama y con cmara de grafito o
atomizacin electrotermia (ambas descritas en los apartados
7.3.1 y 7.3.2. de este tema).

7.4.3. Espectrofotmetros
La figura 7.21. muestra configuraciones instrumentales de
espectrmetro de haz simple y doble haz, respectivamente.

Fig. 7.21. Espectrmetros de haz simple (a) y doble haz (b).

En ambos casos el detector es un tubo fotomultiplicador. El


cortador (chopper) de la figura 7.21.b proporciona un haz de
radiacin intermitente, desde la fuente, que permite modular

191
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

y eliminar la corriente continua que proviene de la llama


(interferencias de tomos excitados que emiten radiacin).
La figura 7.22 muestra dos equipos comerciales de AAS, con
atomizacin de llama y con cmara de grafito.

Fig. 7.22. Equipo AAS con atomizador de llama (arriba) y


con atomizacin electrotrmica (abajo). Detalle de la cmara
de grafito.

La figura 7.23. muestra la configuracin para un equipo de


AAS-SF (en modo secuencial rpido). La diferencia respecto
al AAS convencinal radica en la disponibilidad de un sistema

192
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

de lmparas de ctodo hueco fijas y un espejo rotatorio que


las puede enfocar secuencialmente.

Espejo rotatorio

Espejo rotatorio

4 lmparas fijas

Fig. 7.23. Equipo de AAS-SF (modo secuencial rpido) con 4


lmparas y con 8 lmparas (cuadro superior derecha).

Ventajas de AAS convencional:


- Tcnica sencilla y muy establecida.
- Coste de inversin asequible y bajo coste de operacin.
- Interferencias de matriz conocidas e interferencias
espectrales escasas.

Ventajas de AAS-SF:
- Medir 5-10 elementos en la misma muestra (mayor rapidez
de anlisis)
- Varias lmparas y un enfoque mvil motorizado (espejo)
- Entrada de muestras con 1 bomba que permite dilucin on-
line.
- Entrada de muestras con 2 bombas que permite utilizar el
mtodo de adicin o la adicin de matriz.

193
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

En la actualidad tambin existen diseos instrumentales que


permiten combinar dos sistemas de atomizacin en el mismo
equipo (AAS-DUO) para analizar simultneamente
concentraciones traza y ultratraza de elementos y
beneficiarse de las ventajas de ambas tcnicas de
atomizacin.
Caractersticas de la atomizacin con llama:
- Alto factor de dilucin.
- Aporte de 10% de muestra (90% va al desecho).
- Mnimo tiempo de residencia.
- Atomizacin afectada por muchas variables.
- Menor tiempo de anlisis.
- Adecuada para gran nmero de elementos.
- Mide concentraciones traza.

Caractersticas de la atomizacin con cmara de grafito:


- No existe dilucin.
- Aporte de 100% de muestra.
- Alto tiempo de residencia, hasta 1000 veces ms
sensibilidad
- Mayor tiempo de anlisis.
- Volumen de trabajo relativamente bajo.
- Adecuada para menos elementos.
- Mide concentraciones ultratraza.

7.5. Interferencias qumicas en espectroscopa de


absorcin atmica (AAS).

Son las interferencias ms importantes que aparecen en


esta tcnica. Surgen cuando un compuesto qumico
presente en la muestra o que se forma en la llama, reduce el
grado de atomizacin del analito de inters.
1. Formacin de xidos, hidrxidos, carburos o nitruros
metlicos trmicamente estables (Al, V, Zn, Si, Ta, W). Se
corrige utilizando:

194
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

- Llamas reductoras al aumentar el flujo de combustible. Esto


permite reducir las especies oxidadas del analito que podan
impedir la atomizacin.
-Llamas con altas temperaturas (utilizando xido nitroso,
N2O, como oxidante) para aumentar el grado de disociacin
de estos compuestos.
2. Presencia de aniones que forman compuestos muy
estables con el analito, difciles de disociar y que reducen la
poblacin de tomos neutros (SO42-, PO43-, SiO42-). Se
corrige utilizando:
- Agentes liberadores como La o Sr, que reaccionan con los
aniones interferentes, impidiendo que stos lo hagan con el
analito de inters.
-Agentes complejantes como AEDT, que forma complejos
estables con muchos cationes metlicos (el analito de
inters) que se descomponen fcilmente en la llama.
3. Ionizacin del analito de inters que se produce a altas
temperaturas de la llama. La absorcin de los iones es
diferente que la absorcin atmica. Se corrige utilizando:
- Un supresor de ionizacin. La presencia un elemento
fcilmente ionizable de modo que las concentraciones de
dicho ion y de los electrones aumentan en la llama,
disminuyendo la ionizacin del analito de inters. El grado de
ionizacin depende del potencial de ionizacin del supresor,
de la concentracin del analito (la ionizacin aumenta al
disminuir la concentracin), la temperatura de la llama y la
presencia de elementos fcilmente ionizables. La figura 7.24.
muestra un ejemplo de aplicacin de supresor de ionizacin.
Las concentraciones de potasio y de electrones aumentan
produciendo una disminucin de la ionizacin de analito de
inters (Sr).
Aumenta la pendiente de la curva de calibrado al anular la
ionizacin del analito, aumentando la sensibilidad.
Aumenta sensibilidad al utilizar N2O en lugar de aire,
aumentando la temperatura en la llama, lo que produce un
aumento de la velocidad de descomposicin y volatilizacin
de los compuestos del analito.

195
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.24. Efecto de la concentracin de potasio sobre la


curva de calibrado del Sr. Las curvas con puntos blancos se
realizaron con N2O como oxidante en la llama.

7.6. Instrumentacin en espectroscopa de emisin


atmica (AES). Aplicaciones.
La metodologa de espectroscopa de emisin atmica es
para anlisis cuantitativo y cualitativa (unielemental). Es
adecuada para gran nmero de elementos pero presenta
ciertos inconvenientes: necesita elevada resolucin,
presenta problemas con interferencias espectrales (utilizar
correctores de fondo para solventar problemas de
radiaciones procedentes de otros elementos y la
superposicin de lneas de emisin sobre bandas emitidas
por xidos, gases de la llama y otros compuestos de la
muestra) y son dependientes de la temperatura.
Los espectrmetros para emisin atmica con llama utiliza la
misma instrumentacin que en AAS (ver figura 7.23.
superior). En este caso no se utiliza la fuente externa
(lmpara de ctodo hueco), la atomizacin y la excitacin de

196
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

los tomos ocurre con la temperatura de la llama (figura


7.25.)

Fig. 7.25. Componentes bsicos en un diseo de AES con


llama.

En este caso es necesario optimizar una serie de


parmetros con el fin de mejorar la sensibilidad de las
medidas:
a) Caudal de gases.
b) Posicin del mechero (llama).
c) Seleccin de longitud de onda de lnea espectral.
d) Seleccin del ancho de rendija.

La instrumentacin ms utilizada con fuente de plasma


(atomizacin y excitacin de la muestra) para el anlisis de
concentraciones traza, responde al diseo de un
espectrmetro de emisin atmica con plasma de
acoplamiento inductivo (ICP-AES) como el de la figura 7.26.
Se utiliza para el anlisis de cationes y metales en todo tipo
de muestras lquidas o slidas disueltas en diferentes tipos
de disolventes, bien sea orgnicos u inorgnicos.
Las caractersticas tcnicas ms importantes son:
- Sistema ptico basado en doble monocromador.
- Rango de longitud de onda: 160-900 nm.
- Detector de estado slido con matriz de diodos.
- Generador de radiofrecuencias de 40 MHz. Plasma axial y
radial.
- Cmara de premezcla, nebulizador de flujo cruzado.
- Nebulizador ultrasnico.

197
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.26. Equipo ICP-AES.

Para completar la instrumentacin ICP-AES, existen diseos


que permiten trabajar con un mayor rango dinmico (lineal)
pero que presentan mayor nmero de interferencias (se
excitan ms sustancias a mayor temperatura) y por tanto
exigen un mayor coste en la inversin y el mantenimiento
operacional. Se trata de sistemas:
ICP-AES secuencial que dispone de un detector y un
sistema dispersivo (red de difraccin) mvil. Permite un
volumen de trabajo moderadamente alto (anlisis de 12
elementos en 3 min). Es flexible para programar las y
ofrece una buena resolucin espectral (0.005 nm).
ICP-AES simultneo (multicanal) que dispone de varios
detectores (tubos fotomultiplicadores, CCD) y un sistema
dispersivo especial (un prisma y una red combinados o un
monocromador de red cncava) inmvil (figura 7.27.). El
tiempo de anlisis disminuye considerablemente y los
resultados son ms completos (mapas de imgenes con
70.000 pixels, con CCD). Consigue analizar 73 elementos en
unos pocos segundos.

198
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Generador de
radiofrecuencia Fuente
ICP

Fig. 7.27. Policromador ICP-AES. La radiacin procedente


de varias rendijas se refleja en espejos y se dirige hacia los
tubos fotomultiplicadores.

Este tipo de instrumentacin se utiliza para el anlisis de


rutina de control de fabricacin de aleaciones. Consigue
medir ms de 20 elementos en 5 min. Destacar la utilizacin
de hasta 60 fotomultiplicadores colocados detrs de rendijas
en un plano focal curvado de un monocromador de red
cncava (crculo de Rowland).
Otro diseo interesante, desarrollado en Japn, es el
utilizado en el control de proceso en un alto horno para el
anlisis in-line de metales calientes (Si, Mn) y azufre en
acero fundido (figura 7.28.)

199
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

+
+
-
-

Tubo de Cu
Espectrmetro
Sonda ICP de emisin
Antorcha
Chispa de plasma

Se generan partculas por


descarga elctrica y son
transmitidas por una sonda, en
un flujo de Ar hasta antorcha ICP
Acero fundido de equipo situado a 40 m

Fig. 7.28. Esquema de un generador de aerosol mediante


excitacin con chispa y espectrometra ICP-AES de una
analizador in-line.

El anlisis de detergentes, que normalmente contienen


surfactantes aninicos y varios ingredientes, necesitan
disolventes orgnicos (Ej. cloroformo) para las extracciones
y valoraciones. Estos mtodos analticos quedan desfasados
por costes y efectos nocivos en el medioambiente, en
detrimento del anlisis instrumental mediante ICP-AES.
Siguiendo el protocolo de la figura 7.29. en la preparacin de
la muestra se redisuelve e hidroliza el precipitado,
eliminando los disolventes y reduciendo el tiempo de
anlisis.

200
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Detergente

Disolver

Compuestosorgnicos
+
inorgnicosdisueltosy
ensuspensin
1. Aadir CaCl2
2. Filtrar a travs de filtro
de 0.1 de poro

Precipitado
Filtrados
Caorgnicos
Silicatos
Cafosfatos
Sulfatos
Zeolitas
Digerir/Hidrolizar
conHNO3

Disolucinpara Disolucinpara
ICPAESAnlisis: ICPAESAnlisis:
S,P,Al,Si S,Si

Fig.7.29. Esquema de las etapas del anlisis de los


componentes de un detergente mediante ICP-AES.

La figura 7.30. muestra una tabla peridica con los


elementos y sus correspondientes lmites de deteccin
(LODs) para la tcnica de ICP-AES.

Laser-Induced Breakdown Spectroscopy (LIBS) es un tipo de


espectroscopa de emisin atmica que utiliza la potente
energa del lser pulsado como fuente de excitacin. El lser
se enfoca sobre el material para formar un plasma, que
disocia por ablacin (descomposicin) el material. Se
produce la atomizacin y excitacin las muestras. No
requiere preparacin de muestra y se utiliza para el anlisis
elemental de diversos materiales (figura 7.31.).

201
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

Fig. 7.30. Lmites de deteccin en ICP-AES para los


elementos de la tabla peridica.

Fig. 7.31. Configuracin instrumental para LIBS. La


transmisin de radiacin emitida por el material excitado por
el lser se realiza a travs de fibra ptica, conectada a un
detector CCD.

202
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

7.7. Interferencias qumicas en espectroscopa de


emisin atmica (AES).

Similar a lo descrito en AAS. Se utilizan los mismos


procedimientos de correccin (Ej. Agentes liberadores).
El anlisis cuantitativo requiere el uso de curvas de calibrado
con un intervalo lineal adecuado. En AES se producen dos
fenmenos dependiendo de la concentracin del analito de
inters:
- Ionizacin (descrito en el apartado 7.5. de este tema): se
produce a baja concentracin del analito, con llamas a
temperaturas relativamente bajas. Es necesario utilizar
supresores de ionizacin que limiten la ionizacin del analito
de inters.
- Autoabsorcin: se produce a concentracin alta del analito.
El centro de la llama est ms caliente que la parte externa.
Por ello, la radiacin emitida por los tomos excitados de la
zona central de la llama puede ser, en parte, absorbida por
los tomos de analito de la zona ms fra que no han sido
excitados. Se corrige utilizando alguna lnea que no sea de
resonancia o utilizar un calibrado de patrn interno.

203
TEMA 7. Mtodos espectroscpicos de anlisis elemental

7.8. Bibliografa

D.A. SKOOG, D.M. WEST, F.J. HOLLER and S.R. CROUCH


Fundamentos de Qumica Analtica 8 Ed. Thomson Madrid
(2005).

D.A. SKOOG, F.J. HOLLER and T.A. NIEMAN Principios de


Anlisis Instrumental 5 Ed. Mc Graw Hill Madrid (2001).

K.A. RUBINSON and J.F. RUBINSON Anlisis Instrumental Ed


Prentice Hall. Madrid (2000).

D.C. HARRIS Anlisis Qumico Cuantitativo 2 Ed. Ed. Revert


S.A. Barcelona (2001).

http://www.shsu.edu/%7Echm_tgc/sounds/pushmovies/ICP.gif

204
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

TEMA 8. MTODOS CROMATOGRFICOS DE ANLISIS I


Objetivos
9 Adquirir los conceptos bsicos necesarios para
optimizar una separacin cromatogrfica
9 Conocer el fundamento de las separaciones por
cromatografa de gases
9 Adquirir los conocimientos bsicos de los diferentes
componentes de un cromatgrafo de gases
9 Resaltar los parmetros que afectan al desarrollo de
mtodos.
9 Mostrar la viabilidad para el anlisis cualitativo y
cuantitativo de mezclas de compuestos voltiles y no
voltiles mediante cromatografa de gases.
9 Interpretar y aplicar los conocimientos bsicos sobre
cromatografa de gases al control de procesos.

8.1. Generalidades de la cromatografa


La cromatografa es un mtodo analtico utilizado
ampliamente en la separacin, identificacin y determinacin
de compuestos qumicos en mezclas complejas.
Existe una gran variedad de sistemas y tcnicas
cromatogrficas pero todos tienen en comn la utilizacin de
una fase mvil (FM), gas o lquida, que transporta los
componentes de la muestra a travs de la fase estacionaria
(FE). Los componentes a separar deben de ser solubles en
la FM, pero deben de ser capaces de interaccionar con la
FE. As, durante la separacin cromatogrfica, los analitos
se distribuyen entre las dos fases. La separacin est
basada en la diferencia de velocidad de migracin entre los
componentes de muestra. El movimiento relativo de cada
molcula es resultado de un equilibrio dinmico entre dos
fuerzas antagonistas:
- Las que desplazan a las molculas en el seno de la
FM.

205
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

- Las que frenan el desplazamiento por interacciones


con la FE y son de distinta naturaleza segn el tipo de
cromatografa.

Gary Christian, Analytical Chemistry, 6th Ed. (Wiley)

El botnico ruso Mikhail Tswett consigui separar por


primera (1903) vez pigmentos de plantas (xantofila, clorofila
y y -caroteno) formando bandas de color en una columna
de partculas finamente divididas en carbonato clcico al
aadir ter de petrleo.

8.2. Clasificacin de los mtodos cromatogrficos.


8.2.1. Mecanismos de separacin.
a) Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin)
Basada en la diferente afinidad de los componentes de la
muestra sobre la superficie de un slido activo
(componentes con polaridad baja o media).
b) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de
permeacin de gel, de tamiz molecular o de exclusin por
tamaos).
La FE slida es un gel poroso que retiene molculas
dependiendo de su tamao.

206
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

c) Separacin por Intercambio inico


La separacin se basa principalmente en la diferente
afinidad de una FE slida para el intercambio de iones de
los componentes de la muestra.
d) Separacin por reparto (cromatografa de reparto)
Basada en la diferente solubilidad en fases estacionaria y
mvil (Componentes con polaridad media o alta).

8.2.2. Mtodos de anlisis cromatogrfico.


a) Anlisis por desarrollo (cromatografa en papel o capa
fina).
b) Anlisis frontal.
c) Anlisis por desplazamiento.
d) Anlisis por elucin (cromatografa de gases,
cromatografa lquida). La muestra o soluto se reparte
entre dos fases (equilibrio) y la separacin se basa en la
retencin relativa. Si aumenta la longitud de la columna,
el grado se separacin se ve incrementado (figura 8.1.).

Fig. 8.1. Anlisis por elucin.

207
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

8.2.3. Clasificacin de acuerdo con la forma del lecho


cromatogrfico.
a) Cromatografa en columna
- Columna empaquetada
- Columna tubular abierta
b) Cromatografa plana (o de lecho abierto)
- Cromatografa en papel
- Cromatografa en capa fina (TLC) (figura 8.2.).

Fig. 8.2. Fundamento de la cromatografa plana (FE sobre


superficie plana) y en columna (FE en interior de un tubo
cilndrico).

8.2.4. Clasificacin segn la naturaleza fsica de las fases.

ESTACIONARIA MVIL TIPO

SLIDA LQUIDA C. LQUIDO-SLIDO


GAS C. GAS-SLIDO
LQUIDA C. Lquido-lquido
LQUIDA GAS C. Gas-Lquido
FLUIDO C. Fase supercrtica
SUPERCRTICO

208
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Tanto la cromatografa de gases (c. gas-lquido) como la


cromatografa lquida (c. lquido-lquido) se desarrollan en
una columna. Si al final de ella se coloca un detector que
responde a la concentracin del soluto y se registra su
respuesta en funcin del tiempo o del volumen de FM que ha
pasado a travs de la columna, se obtienen una serie de
picos ms o menos simtricos que constituyen el
cromatograma.

8.3. Parmetros bsicos en cromatografa.


Los procesos cromatogrficos no son estticos. Diversos
parmetros caracterizan el proceso de separacin dinmico:
a) Retencin: capacidad real de la fase estacionaria para
retardar la salida de un componente. El tiempo de retencin
de un soluto (tR) es el tiempo que transcurre desde el inicio
hasta la seal mxima (Figura 8.3.).

Inicio
tR

Pico
cromatogrfico

Lnea base

wb
tiempo

Fig. 8.3. Caractersticas de un pico cromatogrfico.

La lnea base es el registro cuando por la columna slo pasa


FM.
El pico cromatogrfico es la seal del detector cuando
emerge un componente de la columna.

209
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

El ancho de pico en la base (Wb) es utilizado para el clculo


del rea de pico y para fijar su altura. Ambos parmetros
estn directamente relacionados con la concentracin del
analito y se utilizan en el anlisis cuantitativo.
Martin y Synge en 1941
desarrollaron los aspectos tericos
de la separacin cromatogrfica. La
llamada Teora de platos est
basada en procesos de destilacin,
tratando la columna como un
sistema esttico en equilibrio
formado por una serie de estrechas
capas horizontales (platos tericos).
En cada plato se produce una
interaccin o equilibrio entre el
soluto y la FE (figura 8.4.).
b) Eficacia de la columna cromatogrfica: poder de
separacin o resolucin de la columna cromatogrfica. Est
relacionada con el ensanchamiento de banda. Implica la
obtencin de picos estrechos y puntiagudos (gaussianos) y
bien separados. La eficacia se mide en funcin de dos
parmetros:
L
- Altura de plato terico, H H=
n
(L, longitud de columna)
2
t L
- Nmero de platos tericos, n n = 16 R n=
b H
Cuanto menor es la altura del plato terico, mayor es el
nmero de platos o equilibrios, lo que supone una mayor
resolucin de la columna cromatogrfica.
Debe evitarse el ensanchamiento de bandas. Depende de
las caractersticas de columna, la velocidad de fase mvil,
las caractersticas de los disolventes utilizados en la
separacin. La ecuacin de Van Deemter relaciona todos

210
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

estos aspectos. Las variables importantes que afectan a la


eficacia de la columna son: el dimetro de las partculas que
constituyen el relleno (que sea reducido); el dimetro de la
columna (que sea reducido); el espesor de la FE (cuando es
un lquido adsorbido sobre soporte slido, que sea reducido);
los coeficientes de difusin en la FE que sean elevados,
mientras que en la FM deben ser bajos (pueden reducirse
bajando la temperatura).
c) Resolucin: medida cuantitativa de la capacidad de la
columna para separar los analitos. Est relacionada con la
eficacia (figura 8.4.).

Fig. 8.4. Parmetros cromatogrficos para el clculo de la


resolucin entre los picos A y B teniendo en cuanta su ancho
en la base del pico y sus respectivos tiempos de retencin.
Z representa la distancia entre mximos de seal.

2 Z 2(t R ( B ) t R ( A) )
RS = =
wb ( A ) + wb ( B ) wb ( A ) + wb ( B )
Se busca un valor de resolucin mxima en un tiempo de
anlisis mnimo. La resolucin se mejora aumentando la

211
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

longitud de la columna. Esto aumenta el nmero de platos


tericos. Pero al incrementar la L y n tambin lo hace el
tiempo requerido para la separacin. La figura 8.5. muestra
tres ejemplos de resolucin. Se observa que a a partir de un
valor de Rs=1.5 se consiguen picos cromatogrficos
completamente resueltos.

Rs=0,75

Rs=1
Solapado 4 %

Rs=1,5

Completamente
resuelto (linea de
base)

Fig. 8.5. Grfico correspondiente a tres cromatogramas con


diferente resolucin entre picos.

8.4. Aplicaciones: anlisis cualitativo y cuantitativo.


La utilidad de la cromatografa es clara, tanto para anlisis
cualitativo (la posicin de los picos sirve para identificarlos
segn su tiempo de retencin), como anlisis cuantitativo
(las reas bajo los picos y las alturas son una medida
cuantitativa de la cantidad de cada especie presente en la
muestra).

212
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Los picos cromatogrficos son seales proporcionales a la


concentracin de los analitos que deben ser lineales en la
calibracin. Adems cada compuesto responde
cromatogrficamente de forma diferente dando lugar a
diferentes picos (factor de respuesta).
La presencia o ausencia de compuestos se puede confirmar
comparando los tR de los picos con los de patrones
disponibles para esos compuestos, utilizando varios
detectores buscando resultados selectivos y utilizando
hibridacin o acoplamiento con otras tcnicas: GC-MS, LC-
MS, etc.
Los resultados obtenidos a partir de reas de pico (medida
ms precisa pues se ve menos afectada por
irreproducibilidades) y de alturas (medida ms adecuada
cuando los picos son agudos y bien separados) son
utilizadas en la calibracin (mtodo de patrn externo y
patrn interno) y el tratamiento de datos (normalizacin de
reas).

8.5. Cromatografa de gases (Gas-Lquido)


Distribucin de un componente entre una fase mvil (FM)
gaseosa y una lquida inmovilizada sobre la superficie de un
slido inerte (FE). La muestra se volatiliza y es arrastrada
por la fase mvil (gas inerte) a la cabeza de la columna
cromatogrfica. La FM y la FE no interaccionan. En la
columna se produce la interaccin de los solutos con la fase
estacionaria, producindose la separacin de los mismos.
La cromatografa de gases es el mtodo de separacin
adecuado para analizar tanto compuestos orgnicos voltiles
(con un punto de ebullicin por debajo de los 250C), como
gases. Ambos grupos de compuestos poseen presiones de
vapor suficientemente elevadas como para ser arrastrados
por la fase mvil gaseosa.
Cuando los analitos no son voltiles, puede realizarse una
reaccin de derivatizacin, transformando ciertos grupos
qumicos que originan presiones de vapor bajas, en otros
grupos que dan lugar a compuestos ms voltiles (con

213
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

presiones de vapor relativamente altas). Por ejemplo


transformando R-COOH en R-COOCH3.
Tan solo el 20% de los compuestos orgnicos conocidos son
analizados por cromatografa de gases.

8.6. Instrumentacin en cromatografa de gases.


La muestra y el fin del anlisis determinan la configuracin
del instrumento. Los componentes bsicos (figura 8.6.) son:
-Gas portador (He, Ar, N2, CO2, H2). Es la FM y se comporta
como un gas ideal y no contribuye al proceso de separacin,
slo sirve como portador de los componentes de la muestra
a travs de la FE.
-Sistemas de introduccin/inyeccin de muestra. Los
inyectores reciben la muestra, la vaporizan
instantneamente y envan el material vaporizado a la
cabeza de columna.
-Columna cromatogrfica. Elemento esencial en
cromatografa de gases, pues en ella ocurren los procesos
fsico-qumicos en los que se basa la separacin. Los
solutos tienen distinta movilidad segn los valores relativos
de volatilidad/solubilidad.
-Sistemas de deteccin. Sistemas continuos de deteccin
por el que pasa el gas portador procedente de la columna.
Su misin es poner de manifiesto el paso de los analitos
originando una seal elctrica que es amplificada, registrada
y enviada al procesador.
-Sistema de adquisicin y procesado de datos. Sistema
informtico que permite la integracin de las seales y la
calibracin.

214
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Filters/Traps Data system


H

RE SET

Regulators Syringe/Sampler

Inlets

Gas Carrier N2, He Detectors


Hydrogen
Air

Column

Fig. 8.6. Componentes bsicos de un sistema GC.

8.6.1. Gas portador.


La eleccin de gas portador depende de la naturaleza de la
muestra, de la FE y del detector que se utilice. El suministro
de la FM se realiza desde botellas de gas que est a presin
entre 10-50 psi (figura 8.7.). Los manmetros y reguladores
de presin controlan el caudal de flujo (1-15 mL min-1 para
columnas capilares y 25-150 mL min-1 para columnas
empaquetadas. La medida del caudal en cabeza de columna
se realiza automticamente mediante un rotmetro; al final
de la columna cromatogrfica la medida se lleva a cabo con
un medidor de burbuja o mediante un dispositivo electrnico
del propio sistema GC (figura 8.8.). Estos sensores de flujo
electrnicos son detectores de conductividad trmica
modificado. Permiten una medida continua del flujo. Debe
ser calibrado para que las medidas sean exactas. La
respuesta variar en funcin del gas portador.

215
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

A: Botella de gas comprimido


B: Regulador de presin
C: Vlvula
D: Filtro

Fig. 8.7. Contenedor de gas para FM en sistema GC.

b
a

Fig. 8.8. Medidores de caudal de gas portador (a) rotmetro,


(b) medidor de burbuja.

8.6.2. Sistemas de inyeccin


Dependen de la naturaleza de la muestra, del rango de
concentracin de los solutos y de las condiciones
cromatogrficas (columna, detector, flujo). Su objetivo es
evaporar la muestra e introducirla en la columna. La figura
8.9. muestra un inyector de muestras en disolucin. Es un
dispositivo metlico y termostatizado (a una temperatura
superior a 50 C la temperatura de la columna). La inyeccin

216
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

se realiza mediante una microjeringa, a travs del septum o


diafragma de silicona. Este septum debe ser estable a la
temperatura del inyector y es necesario reemplazarlo
regularmente. En el interior del inyector se introduce una
cmara de vaporizacin de vidrio o liner para aislar la
muestra del metal del inyector.

Septum

Entrada gas portador

Sistema calefactor

Liner

Columna

Fig. 8.9. Inyector de muestras lquidas en un sistema GC.

Cuando se trata de muestras gaseosas el sistema de


muestreo es una vlvula ya que es difcil introducir una
cantidad constante de gas con una jeringa. La precisin es
elevada: 0,1 % y el equipo es sencillo pero requiere
temperatura constante (figura 8.10.).

Muestra Muestra
Venteo Venteo

Columna Columna

Gas portador Gas Portador

Fig. 8.10. Vlvula de muestre para gases en un sistema GC.

217
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

8.6.3. Modos de inyeccin.


Inyeccin directa. Permiten flujos elevados para columnas
empaquetadas o capilares de dimetro interno de 0.53 mm
(figura 8.11.).

Regulador
de presin
Microjeringa

Septum
Liner Aguja
Aerosol de
muestra
Bloque metlico
Tra elevada
Columna
empaquetada

Fig. 8.12. Inyeccin directa con microjeringa.

Inyeccin Split/splitless. En la inyeccin en modo Split la


muestra se mezcla con el gas portador y se divide en dos
partes; la mayor se ventea y la menor entra en la columna.
Es el modo adecuado para introducir muestras con
componentes mayoritarios. Es poco sensible para el anlisis
de concentraciones traza (llega poca cantidad de muestra a
la columna y al detector). La relacin de Split se mide segn
la siguiente expresin:

Flujo de venteo
Relacin de split = ------------------
Flujo en columna

El modo de inyeccin en splitless es una tcnica de


preconcentracin de la muestra, adecuado para el anlisis
de muestras muy diludas (trazas, solutos trmicamente
inestables o que eluyen prximos al frente del disolvente). La

218
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

vlvula del inyector est cerrada durante el tiempo de


splitless. La muestra vaporizada es transferida desde la
cmara de vaporizacin a la columna. Despus se hace
pasar el flujo por el divisor (Split) para purgar la cmara de
vaporizacin, una vez que la mayora de la muestra ha
pasado a la columna (esta transferencia dura entre 30-90
segundos) produciendo un ensanchamiento inicial de la
banda. La preconcentracin se lleva a cabo por efecto del
disolvente o mediante una trampa fra o crioenfoque (figura
8.13.).

Purga de septum

Split de venteo

Vlvula de divisin
programable

Columna capilar de CG

Fig. 8.13. Sistema para inyeccin en Split/splitless.

Inyeccin directa en columna (on-colum). La muestra lquida


se inyecta directamente en la columna (sin cmara de
vaporizacin). La funcin del inyector es soportar la columna
y suministrar el gas portador (figura 8.14.). El inyector se
mantiene relativamente frio para permitir la evaporacindel
disolvente en la aguja de la jeringa. La columna se mantiene
a una temperatura inferior al punto de ebullicin del
disolvente y evitar la evaporacin sbita del disolvente en la
aguja. Inmediatamente despus se eleva la temperatura de
la columna hasta la temperatura de trabajo. Este modo de
inyeccin se aplica para compuestos de baja volatilidad y
mezclas de solutos con un rango amplio de volatilidades.

219
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Micro-jeringa

Gas Inyector
Portador

Horno Muestra
lquida

Columna

Fig. 8.14. Sistema de inyeccin on-column.

Inyeccin con temperatura programada (PTV). La


temperatura inicial del inyector es 20-30 C inferior del punto
de ebullicin del disolvente. Durante la inyeccin se
programa la temperatura (200 C min-1) hasta la temperatura
de trabajo (mayor que la temperatura de la columna).
Inyeccin de grandes volmenes. Se inyectan volmenes
menores de 100 L (el volumen habitual de inyeccin es
menor de 2 L). Es un modo de inyeccin ventajoso para el
anlisis de trazas. La muestra se introduce sin retencin o
precolumna. Se evapora la mayor parte del disolvente a
bajas temperaturas (Split). Las muestras se reconcentran
mediante splitless (efecto del disolvente o crioenfoque).

Cmaras de vaporizacin o liners. Estos insertos de vidro


representan el rea en la que se produce la vaporizacin de
la muestra. Deben de ser reemplazados regularmente
porque los compuestos no son voltiles y otros productos de
degradacin quedan retenidos en l (figura 8.15.).

220
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

4.0 mm ID Split / Splitless FocusLiner

4.0 mm ID Spilt, with quartz wool

4.0 mm ID Split / Splitless with single taper

4.0 mm ID Split / Splitless with double taper

1.8 mm ID Packed column liner for


Agilent Technology

Fig. 8.15. Cuatro tipos de insertos/liners para columnas


capilares y uno para columnas empaquetadas.

Jeringas de inyeccin: La muestra debe ser inyectada


rpidamente para que sea introducida como un pequeo
tapn.
Se utilizan diferentes tipos (agujas fijas, agujas separables)
de varias longitudes, volmenes y biseles, con una precisin
de 1 %. El tamao de muestra tambin vara dependiendo
del tipo de cromatografa: 0.1-10 L en cromatografa lquida
y 0.5-5 ml en cromatografa de gases (figura 8.16.).

221
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.16. Diferentes tipos de jeringas utilizadas para la


introduccin de muestra en cromatografa.

8.6.4. Columnas cromatogrficas.


Es el elemento esencial en CG, ya que en ella tienen lugar
los procesos fsico-qumicos en los que se basa la
separacin.
Los solutos tendrn distinta movilidad segn sus valores
relativos de volatilidad-solubilidad.
Columna empaquetada o de relleno (figura 8.17.). Son tubos
de acero inoxidable o vidrio de 3-6 mm de dimetro y 1-5 m
de longitud. Lleva en su interior un soporte de grano fino
recubierto con un lquido no voltil de estructura qumica
similar a los componentes de la muestra (fase estacionaria,
FE). A veces, el propio slido es la FE. Las caractersticas
de este soporte slido son: poseer una gran rea superficial,
no existir interacciones con los solutos y tener propiedades
mecnicas y trmicas adecuadas.

222
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.17. Columna empaquetada o de relleno.

Columna capilar o abierta (figura 8.18.). Conducen a la


obtencin de una mayor resolucin debido a su mayor
longitud (12-60 m), un menor tiempo de anlisis debido a la
menor cantidad de FE (se inyecta menor cantidad de solutos
que se retienen menos tiempo), una mayor sensibilidad
debido a que en el detector se puede aadir una corriente de
gas portador (gas auxiliar o make-up). De esta forma los
contaminantes del septum son purgados continuamente, se
reduce el paso de FE al detector y las fluctuaciones del gas
portador (FM) son amortiguadas por la longitud de la
columna capilar. Adems los picos cromatogrficos
obtenidos son ms estrechos y con un rea mayor
(aumenta la relacin seal/ruido, S/R).

223
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.18. Columnas capilares.

Las columnas estn recubiertas exteriormente por una capa


de poliimida. La fase estacionaria est retenida en la pared
interna de la columna de diferentes modos (figura 8.19.):
- La columna capilar puede tener la pared recubierta:
columna de slice fundida con la FE lquida depositada
directamente en el interior, sin soporte.
- En otros casos la fase est enlazada: la FE est enlazada
qumicamente a la slice de la columna mediante un enlace
silano.

La superficie de la slice puede ser modificada con


trimetilclorosilano para reducir la polaridad de la superficie.

224
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fase estacionaria Soporte slido


Fase estacionaria con FE lquida
lquida slida

Pared Capa Soporte


recubierta porosa recubierto
(WCOT) (PLOT) (SCOT)

Fig. 8.19. Diferentes tipos de columnas capilares: WCOT,


columna tubular abierta de pared recubierta directamente
con FE; PLOT, columna tubular abierta con pared interna
porosa que retiene la FE; SCOT, columna tubular abierta
con pared interna recubierta de partcula de soporte slido
(50 m) que retiene la FE.

La tabla 8.1. presenta las caractersticas de las columnas


empaquetadas y capilares de forma comparativa.
La seleccin de la columna cromatogrfica para un
determinado proceso se lleva a cabo mediante consulta
bibliogrfica, de aplicaciones de catlogos comerciales o
utilizando la columna recomendada por un mtodo estndar
oficial (mtodos de la EPA). La figura 8.20 presenta diversas
composiciones de fases estacionarias ulilizadas en
columnas capilares. En funcin de sus caractersticas de
polaridad son utilizadas para la separacin de diferentes
analitos. As si stos son polares requerirn la utilizacin de
una columna con FE polar.

225
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Tabla 8.1. Caractersticas de las columnas cromatogrficas.

Empaquetadas Capilares
Longitud (m) 0,5-5 5-100

DI, mm 2-4 0,1-0,7

Flujo (mL/min) 10-60 0,5-15

Presin cabeza (Psi) 10-40 3-40

N Platos 4000 250000

Capacidad* 10 g/pico 100 ng/pico

Espesor FE (m) 1-10 0,1-8

*Capacidad=factor de retencin (K) relacionado con la termodinmica


del proceso de reparto que cambia con la temperatura y la composicin
de la FE (K=1-5)

(1,4-bis(dimetilsiloxi)fenilen)siloxano (50%-fenil)-metilpolisiloxano
No polar Temp.<350C Polaridad media Temp.<280C

50%cianopropilfenilmetilpolisiloxano
Polaridad media/alta Temp.<220C

(5%-fenil)-metilpolisiloxano
No polar Temp.<325C

(35%trifluoropropil)-metilpolisiloxano
Polaridad media Temp.<320C
Polietilenglicol
Polaridad alta Temp.<260C

100% dimetilpolisiloxano
No polar Temp.<350C

Fig. 8.20. Composicin de diferentes fases estacionarias


utilizadas en las columnas capilares.

226
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

8.6.5. Control de la temperatura.


La temperatura juega un papel decisivo en las separaciones
mediante cromatografa de gases.
Existen tres zonas en el cromatgrafo donde esta variable
debe ser controlada con precisin: inyector, horno
cromatogrfico (columna) y detector (Figura 8.21.)

a b c

Fig. 8.21. El control de la temperatura en GC se realiza en el


inyector (a), el horno que alberga la columna cromatogrfica
(b) y el detector (c).

En el inyector, la temperatura vara dependiendo del modo


de inyeccin. En general se necesita una temperatura alta,
superior a la de la columna, para vaporizar por completo la
mezcla de solutos. Sin embargo, debe ser lo suficientemente
baja como para evitar que se produzca la descomposicin
trmica de los solutos.
En el detector debe utilizarse una temperatura adecuada
para evitar condensaciones que daran lugar a prdidas de
compuestos menos voltiles y a solapamiento de picos.
La mayor incidencia de la temperatura sobre la separacin
tiene lugar en la columna cromatogrfica ya que afecta a la
relacin de distribucin. A menor temperatura, mejor
separacin, pero mayor tiempo de anlisis. La temperatura
ptima de trabajo depende de los puntos de ebullicin de los
solutos, no debe ser inferior a la de stos. Los tiempos de

227
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

retencin se duplican cuando la temperatura desciende


30C.
Desde el punto de vista prctico existen dos modos de
trabajar con la temperatura de la columna.
Modo isotermo: la temperatura se mantiene constante
durante la separacin. Los picos ms voltiles eluyen de la
columna con picos ms prximos y estrechos. Los
componentes menos voltiles eluyen con picos ms
espaciados, anchos y bajos. Se utiliza cuando los puntos de
ebullicin varan poco (figura 8.22.a).

a Separacin C9-C15

Isotermo 120

b
Temperatura
programada
80200(6/min)

Fig. 8.22. Mejora de un cromatograma obtenido en modo


isotermo (a) cuando se aplica programacin de temperatura
en columna (b). Los componentes se eluyen con buena
separacin de picos estrechos con un tiempo de anlisis
menor.

Temperatura programada: la temperatura vara de forma


progresiva durante la separacin cromatogrfica. En series
homlogas, el tiempo de retencin aumenta
exponencialmente con el nmero de tomos de carbono. Al
incrementar el tR, aumenta el ancho de pico y disminuye la
altura, haciendo difcil la deteccin. Como la solubilidad de
un gas en un lquido disminuye al aumentar la temperatura,

228
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

se reducir el tiempo de retencin al aumentar la


temperatura de la columna. As se reduce el tiempo de
anlisis (figura 8.22.b).

8.6.6. Seleccin del detector.


Se debe tener en cuenta:
- Caractersticas de la muestra: los compuestos de inters,
otros componentes de la muestra y la concentracin de
ambos.
- Caractersticas del detector ideal y su aplicabilidad:
Adecuada sensibilidad (alta a ser posible en funcin de la
pendiente de la recta de calibrado).
Buena estabilidad y reproducibilidad.
Una respuesta lineal para los componentes que se extienda
a varios rdenes de magnitud.
Ruido de fondo bajo pues determina la relacin seal/ruido
(S/R=10 para calcular el lmite de cuantificacin).
Intervalo trmico de trabajo (25-400 C).
Baja sensibilidad a las variaciones de flujo, presin y
temperatura.
Un tiempo de respuesta corto que lo haga independiente del
Caudal.
Alta fiabilidad y manejo sencillo.
Respuesta semejante para todos los componentes.
No destructivo.
No existe un detector que resuelva todo tipo de problemas y
muestras. Los ms utilizados son enumerados a
continuacin (figura 8.23.):
1. Conductividad trmica
2. Ionizacin de llama
3. Nitrgeno-fsforo
4. Fotomtrico de llama
5. Captura electrnica
6. Emisin atmica
7. Espectrometra de masas
8. IR con transformada de Fourier

229
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.23. Rango de Sensibilidades de los detectores ms


utilizados en GC.

8.6.7. Detector de ionizacin de llama (FID).


Consta de dos electrodos situados en la base de la llama
(electrodo negativo) y alrededor de la llama (de
hidrgeno/aire), en forma de cestilla (electrodo colector
positivo) (figura 8.24.). Los componentes de la muestra
llegan con el gas portados a la base del detector, se mezclan
con hidrgeno y entran en la llama. Se produce la ionizacin
de los analitos en la llama resultando una corriente de
partculas (iones y electrones) que hace disminuir la
resistencia entre los electrodos y origina una seal medida
posteriormente. Algunas de las caractersticas ms
importantes de este detector son: es un detector universal
(responde a la mayora de compuestos orgnicos),
especfico (la muestra debe ser combustible), destructivo
(se produce la pirlisis de la muestra), muy sensible (Lmite
de deteccin 5 pg carbono seg-1), rango lineal 107, utiliza
gas auxiliar (make-up) en columnas capilares.
Los grupos funcionales, tales como carbonilo, alcohol,
halgeno y amina, originan en la llama pocos iones o

230
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

prcticamente ninguno. Adems, el detector es insensible a


los gases no combustibles como H2O, CO2, SO2, y NOx.

Colector Encendedor

Aire Llama H2/ire

Cuerpo del
quemador
Hidrgeno

Extremo de salida
de la columna

Fig.8.24. Esquema de un detector de ionizacin de llama.

Esas propiedades hacen del detector de ionizacin de llama


uno de los detectores generales ms utilizado para el
anlisis de la mayora de compuestos orgnicos, incluyendo
aquellos que estn contaminados con agua y con xidos de
nitrgeno y de azufre.
La respuesta del FID se basa en el nmero de tomos de
carbono. Si otros elementos como halgenos u oxgeno
estn presentes se reducen la combustin y la seal (figura
8.25.).
Butano
cido butanico
cido pentanoico

Propano
cido propinico
cido actico
cido frmico

Etano
Metano

Fig. 8.25. Efecto de la presencia de tomos de oxgeno


(izquierda) en la seal de los analitos detectados con FID.

231
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

8.6.8. Detector de captura electrnica (ECD).


El efluente de la columna pasa sobre un emisor , como
nquel-63 o tritio (adsorbido sobre una lmina de platino o de
titanio). Un electrn del emisor provoca la ionizacin del gas
portador (con frecuencia se trata de nitrgeno) y la
produccin de una rfaga de electrones. De este proceso de
ionizacin, en ausencia de especies orgnicas, resulta una
corriente constante entre un par de electrodos. Cuando al
detector llega una molcula que posee grupos funcionales
electronegativos capturan algunos de los electrones y
reducen la corriente (seal elctrica) medida entre los dos
electrodos (figura 8.26.).
El detector de captura de electrones es de respuesta
selectiva, siendo muy sensible a las molculas que
contienen grupos funcionales electronegativos tales como
halgenos, perxidos, quinonas, y grupos nitro; en cambio,
no es sensible a grupos funcionales como aminas, alcoholes
e hidrocarburos. Es un detector no destructivo, con un lmite
de deteccin 0,1 pg seg-1, tan sensible como el FID, posee
un rango lineal 104.

Purga de nodo
Venteo
NODO
Superficie plateada
63
de Ni

Gas de purga
Columna

Fig. 8.26. Esquema de un detector de captura electrnica.

Como desventaja, se trata de un detector radiactivo. Una


aplicacin importante del detector de captura de electrones

232
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

es la deteccin y determinacin de insecticidas clorados. El


ECD es altamente sensible y tiene la ventaja de no alterar la
muestra de manera significativa (a diferencia del FID). Por
otra parte, su intervalo lineal de respuesta normalmente se
limita a unos dos rdenes de magnitud.
La figura 8.27 muestra los esquemas correspondientes al
ECD convencional y al ECD que permite aumentar,
considerablemente la sensibilidad.

Fig. 8.27. Esquema del ECD estndar y ECD, provisto de


microcelda.

Los gases principales de efecto invernadero en la atmsfera


terrestre son CO2, CH4 y N2O. La medida continuada de
estos gases proporciona informacin significativa para
evaluar la tendencia de las emisiones de gases en procesos
industriales. Existen analizadores de procesos basados en
cromatografa de gases para el control de emisin de gases
que utilizan FID y -ECD como sistemas de deteccin (figura
8.28.).
La muestra se inyecta en una columna corta (columna1) que
separa aire, CO2 y CH4 del agua. Todos los analitos que

233
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

salen despus del N2O se envan al exterior (vent 1). N2O,


CO2 y CH4 se separan en la columna 2. El aire (O2) debe
enviarse fuera del metanizador y del -ECD a travs de vent
2. El CO2 se convierte en CH4 mediante el metanizador y se
mide en el FID. Una vez el CO2 eluye de la columna 2, el
flujo se desva hacia el detector -ECD para medir el N2O.

Fig. 8.28. Analizador GC con dos detectores FID y -ECD


para determinar N2O, CO2 y CH4.

8.6.9. Detector de emisin atmica (AED).


En este dispositivo, el eluyente procedente de la columna
cromatogrfica se introduce en un plasma de helio obtenido
con microondas, que se acopla a un espectrmetro de
emisin con series de diodos. El plasma es suficientemente
energtico como para atomizar todos los elementos de una
muestra, excitarlos, y as obtener sus espectros de emisin
caractersticos. Esos espectros son recogidos en un

234
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

espectrmetro que utiliza una serie de diodos configurados


en un plano mvil, que es capaz de detectar la radiacin
emitida desde 170 a 780 nm. La serie de diodos mvil es
capaz de controlar simultneamente de dos a cuatro
elementos en cada posicin (figura 8.29.).

Fig. 8.29. Esquema de funcionamiento de un AED.

La Figura 8.30 ilustra las posibilidades de este tipo de


detector. En este caso la muestra es una gasolina que
contiene una pequea concentracin de metil-terc-butilter
(MTBE), un agente antidetonante, adems de varios
alcoholes alifticos a bajas concentraciones.

235
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.30. Ejemplo de un cromatograma para una gasolina


que contiene una pequea cantidad de MTBE y varios
alcoholes alifticos. Monitorizacin de la lnea 777 nm para
el oxgeno.

8.7. Acoplamiento CG-espectrometra de masas (MS).


La espectrometra de masas (MS) no es un mtodo
espectroscpico, pues no se mide la interaccin con la
radiacin electromagntica. Se trata de una tcnica de
separacin, los iones son separados fsicamente en funcin
de su relacin masa/carga y detectados cualitativamente y
cuantitativamente por sus respectivas m/z y abundancias
relativas (figura 8.31.). La espectrometra de masas
comprende un conjunto de tcnicas utilizadas para la medida
de la masa de los iones y su abundancia en la fase gaseosa.
Mediante el acoplamiento entre GC y MS, tras la
vaporizacin y separacin de analitos en mezclas complejas
el anlisis por espectrometra de masas permite obtener
informacin de la masa molecular de los compuestos
analizados as como obtener informacin estructural de los
mismos (figura 8.32.).

236
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.31.Diferencia entre espectroscoa y espetrometra de


masas.

Para ello es necesario ionizar las molculas y obtener los


iones formados en fase gaseosa. Este proceso tiene lugar
en una fuente de ionizacin y actualmente, existen diferentes
tcnicas que permiten llevarlo a cabo como Impacto
Electrnico (EI), Bombardeo con tomos rpidos (FAB),
Ionizacin Qumica a Presin Atmosfrica (APCI), Matrix-
Assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI) o
Electrospray (ESI). Los iones generados son acelerados
hacia un analizador como la trampa de iones, cuadrupolo o
triple cuadrupolo, y separados en funcin de su relacin
(m/z) mediante la aplicacin de campos elctricos,
magnticos simplemente determinando el tiempo de
llegada a un detector. Los iones que llegan al detector, un
multiplicador de electrones, un detector de tiempo de vuelo
(TOF), que producen una seal elctrica que es procesada,
ampliada y enviada a un ordenador. El registro obtenido se
denomina Espectro de masas y representa las abundancias
inicas obtenidas en funcin de la relacin masa/carga de
los iones detectados.

237
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Fig. 8.32. Instrumentacin de un equipo GC-MS

8.7.1. Ionizacin por impacto electrnico.


En la fuente de ionizacin por impacto electrnico la muestra
gaseosa se ioniza entre dos placas cargadas, por
bombardeo con un haz de electrones de alta energa. Los
electrones son emitidos por un filamento caliente de Renio o
Wolframio y se aceleran mediante un potencial de unos 70 V
(figura 8.33.).

Fig. 8.33. Formacin de iones para anlisis por MS.

238
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Al incidir un haz de electrones de baja energa (10 eV) sobre


una molcula se arranca un electrn y se forma el in
molecular. Cuando el haz de electrones es de alta energa
(70 eV) se forma el in molecular y la fragmentacin de la
molcula en iones, molculas neutras y radicales.
Los iones formados son extrados del haz de electrones,
acelerados y colimados en un haz de iones que se focalizan
utilizando campos elctricos o rendijas (figura 8.34.)

Fig. 8.34. Fuente de ionizacin por impacto electrnico.

8.7.2. Analizador de trampa de iones


Los iones formados deben ser separados en funcin de su
relacin m/z. El analizador de trampa de iones consta de tres
electrodos que forman una cavidad en la que se completa la
ionizacin, fragmentacin, almacenamiento y filtracin de los
iones formados.
Los iones del analito procedente de la fuente, penetra a
travs de una rejilla en el electrodo colector superior. Se
realiza un barrido del potencial de radiofrecuencia (aplicado

239
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

al electrodo anular) y los iones son atrapados, cuando se


desestabilizan, aquellos iones que tengan una m/z
determinada abandonan la cavidad del electrodo anular a
travs de una abertura en el electrodo colector inferior y
pasan al detector (figura 8.35.).

Fig. 8.35. Analizador de trampa de iones.

8.7.3. Analizador de cuadrupolo


El filtro de masas de cuadrupolo consta de cuatro barras
cilndricas paralelas que actan como electrodos. Las barras
opuestas se conectan elctricamente, un par est unido al
polo (+) de una fuente de corriente continua (DC) y el otro
par se une al polo (-). Adems, se aplica a cada par de
barras potenciales variables de corriente alterna de
radiofrecuencias (RF) que estn desfasados 180. Estos
potenciales de DC y RF se van variando de forma que slo
los iones con cierta relacin (m/z) son capaces de atravesar
completamente el analizador alcanzando el detector (figura
8.36.).

240
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

Ion resonante
Ion no resonante

Detector

Fuente
de iones
Voltaje de corriente
continua y radiofrecuencia

Colector de iones

Fuente de
ionizacin Detector

Fig. 8.36. Esquemas de la configuracin del analizador de


cuadrupolo.

La aplicacin a cada par de barras opuestas de un voltaje y


una radiofrecuencia posibilita un control de la trayectoria de
los iones. Esto permitir al in m/z seguir una trayectoria
rectilnea y cruzar el tnel alcanzando el detector, mientras
que las dems masas, al ser inestables sus trayectorias, no
alcanzan el detector, siendo desviadas fuera del conjunto de
barras.

8.7.4. Detectores
Uno de los detectores que han sido ms utilizados en
espectrometra de masas, es el multiplicador de electrones
de dnodos. El ctodo y los sucesivos dnodos tienen
superficies de Cu/Be de las que se emiten rfagas de
electrones al ser alcanzadas por iones o electrones de
elevada energa. Su funcionamiento puede verse en la figura

241
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

8.37a. El detector Channeltron es similar al multiplicador de


electrones clsico, con la principal diferencia de que no tiene
mltiples dnodos discretos, sino que est formado por un
tubo de vidrio en forma de corneta, a veces terminado en
forma de espiral o caracol (figura 8.37b), cuyo interior est
recubierto por un xido de plomo semiconductor de
composicin y caractersticas especiales.

Fig. 8.37. Multiplicador de electrones de dnodos discreto (a).


Detector Channeltron (b).

La espectrometra de masas es probablemente de entre


todas las herramientas analticas al alcance del cientfico la
de aplicacin ms general en el sentido que la tcnica es

242
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

capaz de suministrar informacin sobre (1) la composicin


cualitativa y cuantitativa tanto de analitos orgnicos como
inorgnicos en muestras complejas, (2) las estructuras de
una amplia variedad de especies moleculares complejas, (3)
las relaciones isotpicas de los tomos en las muestras y (4)
la estructura y composicin de superficies slidas.
Para que todos los procesos descritos anteriormente, que
ocurren en el interior del espectrmetro de masas, puedan
realizarse con xito, debe hacerse en un ambiente de alto
vaco, donde el recorrido libre medio de las molculas y de
los iones formados sea consistente con la longitud de la
trayectoria que deben recorrer en su camino hasta el
detector. Los principales tipos de bombas que se utilizan
para conseguir el alto vaco en espectrometra de masas son
las difusoras y las turbomoleculares.
Los espectrmetros de masa pueden operar en modo
barrido (scan), detectando todas las seales en un rango de
(m/z) dado o en modo de monitorizacin de un in
seleccionado (selected ion monitoring, SIM). En este ltimo
caso, el analizador es capaz de estar mucho ms tiempo
haciendo un muestreo de cada uno de los valores (m/z)
seleccionados. En SIM, si se seleccionan apropiadamente
los valores de (m/z) se puede reducir significativamente el
ruido de fondo inespecfico.
Las siguientes figuras ilustran dos aplicaciones de GC-MS.
La primera es para el anlisis de aromas de anchoado en
extractos de diclorometano de muestras de anchoas (figura
8.38.). La segunda es una de las muchas aplicaciones
medioambientales (determinacin de pesticidas en aguas,
PAHs en suelos, txicos en aire, etc.) de un equipo GC-MS
transportable (figura 8.39.).

243
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

TIC: cromatograma total

CH3-CH=CH-CH=CH-CH2-COH
m/ z:67
Pm=110
-CHO;Pm =81

m/ z: 81
2,4-heptadienal en la muestra

m/ z: 110 Referencia: patrn 2,4-heptadienal

Fig. 8.38. Localizacin e identificacin del pico


correspondiente a 2,4-heptadienal, desde el cromatograma
total (TIC).

Fig. 8.39. Configuracin de GC-MS transportable para


control on-line de compuestos orgnicos voltiles (VOCs)

244
TEMA 8. Mtodos cromatogrficos de anlisis I

8.8. Bibliografa

D.A. SKOOG, D.M. WEST, F.J. HOLLER and S.R. CROUCH


Fundamentos de Qumica Analtica 8 Ed. Thomson Madrid
(2005).

D.A. SKOOG, F.J. HOLLER and T.A. NIEMAN Principios de


Anlisis Instrumental 5 Ed. Mc Graw Hill Madrid (2001).

R. CELA, R.A. LORENZO, M DEL CARMEN CASAIS. Tcnicas


Analticas de Separacin en Qumica Analtica Ed. Sntesis,
Madrid (2002).

M.V. DABRIO Cromatografa y electroforesis en columna Ed.


Springer-Verlag Ibrica. Barcelona (2000)

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8249/4/T5masas.pdf

245
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

TEMA 9. MTODOS CROMATOGRFICOS DE ANLISIS II


Objetivos
9 Conocer el fundamento de las separaciones por
cromatografa lquida.
9 Adquirir los conocimientos bsicos de los diferentes
componentes de un cromatgrafo de lquidos de alta
resolucin
9 Resaltar los parmetros que afectan al desarrollo de
mtodos.
9 Mostrar la viabilidad para el anlisis cualitativo y
cuantitativo de mezclas de compuestos no voltiles
mediante cromatografa de gases.
9 Interpretar y aplicar los conocimientos bsicos sobre
cromatografa liquida al control de procesos

9.1. Fundamento de la cromatografa lquida (LC).


La fase mvil (FM) es un lquido que pasa a travs de la fase
estacionaria (FE) que es un slido o lquido retenido en
columna. En una primera etapa la cromatografa lquida se
realizaba en columnas de vidrio con dimetros de 1 a 5 cm y
longitudes de 50 a 500 cm. Se observ que la eficacia
aumenta al disminuir el tamao de las partculas de los
rellenos de columna. Sin embargo, fue a finales de los aos
sesenta, cuando se desarroll la tecnologa adecuada para
producir y utilizar rellenos de tamao de partcula del orden
de los 3 o 10 m. Esta tecnologa requiere una
instrumentacin sofisticada, que contrasta con las simples
columnas de vidrio de la cromatografa de lquidos clsica.
Para distinguir estos procedimientos ms nuevos de los
mtodos bsicos, que todava se utilizan con fines
preparativos, se emplea la denominacin de cromatografa
de lquidos de alta resolucin (HPLC).
Ventajas de la cromatografa lquida:
- Aplicada a la separacin de compuestos no voltiles
solubles en fases lquidas (compuestos biolgicos, frmacos,

246
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

polmeros sintticos o naturales) y compuestos no voltiles


presentes en el medioambiente.
- Aplicada a la separacin de compuestos trmicamente
lbiles (fases mviles lquidas y bajas temperaturas).
- La retencin de los solutos se basa en su interaccin con la
FE y FM; es ms flexible la optimizacin de la separacin
que en GC.
- La mayora de los detectores no destruyen la muestra.
Desventajas de la cromatografa lquida (LC):
- Mayor ensanchamiento de banda.
- Menor resolucin.

9.2. Clasificacin de los mtodos de cromatografa


lquida.
La Figura 9.1 pone de manifiesto que los distintos
procedimientos que utilizan la cromatografa de lquidos
tienden a ser complementarios con respecto a los campos de
aplicacin.

9.2.1. Mecanismos de separacin.


a) Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria es un
slido. La separacin es debida a una serie de pasos de
adsorcin/desorcin.

FM FE

El fundamento es la separacin/retencin: diferencias de


solubilidad (en FM) y de retencin por adsorcin (en FE) de
la mezcla de solutos sometidos al sistema cromatogrfico.

247
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.1. Aplicaciones de la cromatografa de lquidos

La elucin se produce por competencia entre molculas de


soluto y de disolvente por los sitios activos de la superficie
del adsorbente (FE) que rellena la columna.
Los grupos funcionales polares de molculas de soluto o
disolvente (FM) interaccionan irreversiblemente con grupos
hidroxilo del gel de slice o almina (FE polar). La FM es
poco polar (diclorometano, cloroformo, ter dietlico, hexano,
etc.) aunque normalmente se utiliza una mezcla de 2 o ms
disolventes. Se debe tener en cuenta la fuerza eluotrpica
del disolvente, que es una medida de la polaridad relativa del
disolvente (ordenacin de los disolventes de acuerdo con su
capacidad relativa para desplazar solutos de un determinado
adsorbente) y el ndice de polaridad: utilizado en mtodos de
fase reversa.
El gradiente de fuerza eluotrpica hace que primero eluyan
los solutos menos retenidos (menos polares) con un

248
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

disolvente poco polar y, se va mezclando gradualmente un


disolvente ms polar para ir aumentando la fuerza eluyente.
Se aplica en separaciones de compuestos orgnicos no
polares o poco polares, solubles en disolventes orgnicos.
b) Cromatografa de cambio inico. La FE tiene una
superficie con carga inica opuesta a la de los solutos.

FM FE

El fundamento es que la FE es una resina cambiadora de


iones (redes tridimensionales de macromolculas con cargas
electrostticas) que capta reversiblemente iones de la
disolucin, cediendo una cantidad equivalente de iones de la
misma carga.

R - A + B+ <===> R - B + A+ PROCESO CATINICO


R - A + B- <===> R - B + A- PROCESO ANINICO

La separacin se lleva a cabo en 2 etapas:


1.- Los analitos (B +) compiten con los cationes de la FM
(H+) por los sitios libres del cambiador (FE), y se unen a l
por atraccin electrosttica y quedan retenidos.

RSO3-H+ + B+ RSO3-B+ + H+

2.- La elucin de los analitos se realiza despus, modificando


el pH de la FM o su fuerza inica.
c) Cromatografa de exclusin por tamaos. La separacin se
basa en el tamao molecular. La FE (gel) es un material con
el tamao de poro controlado.

249
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

El fundamento es que los analitos de mayor tamao no


pueden penetrar en los poros de la FE y son excluidos,
viajando en el frente de la FM (figura 9.2.). Los analitos ms
pequeos difunden mejor que los ms grandes en los poros
de la FE, siguiendo trayectorias ms largas (son los ltimos
en ser eluidos). El orden de elucin es inverso del tamao
molecular.

Fig. 9.2. La FE (geles de dextrano, poliacrilamida o sacarosa)


retiene molculas pequeas son retenidas en funcin del
lmite de exclusin y permeabilidad. Las molculas mayores
eluyen con la FM.

Se aplica en bioqumica (separacin de protenas, azcares,


cidos grasos), en determinacin de peso molecular en
grandes polmeros, etc.

250
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

d) Cromatografa de reparto. La separacin se basa en el


reparto del soluto entre 2 fases lquidas (en funcin de la
solubilidad).

FM FE

La FM y la FE deben ser inmiscibles. La solubilidad de la FE


en la FM debe ser mnima para evitar la progresiva
eliminacin de la pelcula de FE. El flujo de la FM debe ser
bajo para evitar el arrastre de la FE.
Las especies altamente retenidas tienen una gran afinidad
(solubilidad) por la FE comparado con la FM.
La diferencia entre tcnicas se basa en cmo est retenida la
FE sobre un soporte (slice):
1. Fase mvil: lquido - Fase estacionaria: lquido adsorbido
La fase estacionaria lquida se retiene sobre la superficie del
soporte por adsorcin fsica.
2. Fase mvil: lquido - Fase estacionaria: fase enlazada
La fase estacionaria se une qumicamente a la superficie del
soporte.

9.3. Cromatografa de lquidos de fase enlazada


En la actualidad los mtodos de fase enlazada son los que
predominan debido a las desventajas de los sistemas lquido-
lquido. Una de esas desventajas es la prdida de FE por
disolucin en la FM, lo que hace necesario un peridico
recubrimiento de las partculas del soporte. Por otra parte, el
problema de la solubilidad de la FE impide el uso de los
rellenos de fase lquida en la elucin con gradiente.
En cromatografia de reparto, los soportes para casi todos los
rellenos con FE unidas qumicamente, se preparan con

251
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

composiciones constituidas bsicamente por slice. El


proceso de anclaje de la FE al soporte de slice se conoce
como reaccin de silanizacin (figura 9.3.). Se introduce una
cadena orgnica (o grupo inico) en la estructura de la slice
por formacin del enlace siloxano. Se forma una monocapa
de radicales anclados en la superficie de la slice. Es la
naturaleza del radical R la que determina los distintos tipos
de cromatografa (reparto, cambio inico, etc.).

Slice

Slice Reactivo organo


cloro silano Siloxano

Fig. 9.3. Reaccin de silanizacin.

9.4. Modos de operacin.


En relacin con las polaridades relativas de las fases mvil y
estacionaria, se distinguen dos tipos de cromatografia de
reparto:
1. Fase normal: Inicialmente, se utiliza FE de elevada
polaridad tales como grupos funcionales ciano (-C2H4CN),
diol (-C3H6OCH2CHOHCH20H), amino (-C3H6NH2) y los
dimetilamino (-C3H6N(CH3)2 unidos a la estructura de
siloxano. La elucin se realiza con disolventes (FM)
relativamente no polares, tales como el etilter, el cloroformo
y el n-hexano
2. Fase inversa (o reversa), la FE es no polar, con frecuencia
se trata de un hidrocarburo. Por lo general, el grupo R del
siloxano en estos recubrimientos o FE es una cadena C8 (n-

252
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

octilo) o una cadena C18 (n-octadecilo). La elucin se lleva a


cabo con una FM de elevada polaridad como es el caso de
una solucin acuosa conteniendo concentraciones diversas
de disolventes como metanol, acetonitrilo o tetrahidrofurano.
En cromatografia en fase normal, el componente menos
polar eluye primero, debido a que relativamente es el ms
soluble en la fase mvil y un aumento de la polaridad de la
fase mvil provoca un aumento del tiempo de elucin. Por
contraste, en los mtodos en fase inversa, los componentes
ms polares aparecen primero, y un aumento de la polaridad
de la fase mvil disminuye el tiempo de elucin.
La mayor parte de HPLC se llevan a cabo con rellenos de
fase inversa, ya que muchos de los analitos en las muestras
a analizar (alimentos, frmacos, contaminantes, etc.) son de
naturaleza hidroflica y, por tanto, solubles en disolventes
(FM) polares.
Ventajas de HPLC en fase reversa:
- Mayor reproducibilidad.
- tR ms cortos (solutos polares).
- Velocidad de muestreo alta.
- No se producen retenciones irreversibles.
Inconvenientes de HPLC en fase reversa:
- pH (2.0 7.5) para evitar la hidrlisis del siloxano, lo que
originara la degradacin o destruccin del relleno.
Al elegir una columna para una separacin cromatogrfica de
reparto, la polaridad de la fase estacionaria ha de ser
bastante similar a la de los analitos, y para la elucin se
utiliza una fase mvil con una polaridad considerablemente
distinta. En fase reversa, la FM sueles ser acuosa, pero tiene
un dbil poder de elucin de analitos apolares debido a su
alta polaridad. Por eso se utilizan el agua en gradiente con
otros disolventes que tiene menor polaridad y por tanto
aumentan el poder de elucin de analitos apolares. Para
conseguir el poder de elucin deseado se utilizan mezclas de
disolventes teniendo en cuenta la serie eluotrpica siguiente:

253
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

hexano < tolueno < cloroformo < diclorometano < acetona <
acetato de etilo < etanol < metanol < H2O

Los analitos son ms retenidos en la FE, cuanto menos


solubles son en H2O (menos polares). La retencin aumenta
con la hidrofobicidad. Los tR aumentan con el n de tomos
de C en la molcula. Cuanto mayor es la proporcin de agua
en la FM, mayor es la retencin de los analitos poco polares.
En las siguientes mezclas de disolventes se observa el
cambio en el poder de elucin a medida que cambia el
gradiente en la mezcla:

Mayor poder de elucin


Hexano: Acetato de etilo, 100: 1
Hexano: Acetato de etilo, 20: 1
Hexano: Acetato de etilo, 10: 1
Hexano: Acetato de etilo, 1: 1

Las aplicaciones de HPLC en fase reversa son amplias


debido a que todas las molculas orgnicas poseen grupos
funcionales hidrofbicos capaces de interaccionar con la FE.
Destacar el control de calidad de productos alimentarios
(bebidas alcohlicas y no alcohlicas, leche y derivados,
antibiticos en piensos, presencia de aditivos como
edulcorantes, cidos orgnicos, colorantes, deteccin de
fraudes); y el control de contaminacin de aguas (PAHs,
pesticidas organoclorados y organofosforados, fenoles, etc)
(figura 9.4.).

254
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.4. Cromatogramas obtenidos para mezclas de


pesticidas en suelos mediante HPLC y detector de
fluorescencia. (a) preparacin de muestra mediante
extraccin asistida por microondas (MAE) (b) preparacin de
muestra mediante dispersin de la matriz en fase slida
(MSPD).
Peak assignment: 1, Naph (39.07 ng g1); 2, Ace (38.96 ng g1); 3, Flu
(21.54 ng g1); 4, Phen (138.88 ng g1); 5, Anth (26.38 ng g1); 6, Flt
(153.95 ng g1); 7, Pyr (186.91 ng g1); 8, B[a]A (33.13 ng g1); 9, Chry
(74.16 ng g1); 10, B[e]P (65.18 ng g1); 11, B[b]F (76.40 ng g1); 12, B[k]F
(20.59 ng g1); 13, B[a]P (45.86 ng g1); 14, DB[a,h]A (10.10 ng g1); 15,
B[g,h,i]P (47.47 ng g1); 16, I[1,2,3-c,d]P (69.67 ng g1).

9.5. Instrumentacin bsica en HPLC


Las Figuras 9.5 y 9.6 muestran esquemas de los
componentes fundamentales de un cromatgrafo de lquidos
de alta resolucin tpico. Cada uno de los componentes se
tratar a continuacin.

255
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.5. Componentes bsicos de un instrumento de HPLC.

Fig. 9.6. Esquema de un equipo de HPLC.

9.5.1. Fase mvil.


Los disolventes utilizados como FM deben de tener las
siguientes caractersticas:
- No contener partculas en suspensin, para ello se requiere
una filtracin previa a su utilizacin (filtro de 0.2 m).
- Alta a pureza (grado HPLC), puesto que las impurezas
degradan la columna e interfieren en la medida.

256
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

- La presencia de gases disueltos (O2 y N2) en la FM pueden


originar problemas (reacciones indeseables entre los gases y
los compuestos de la muestra, irregularidades en el flujo
dentro de la columna que reducen la eficacia y la
reproducibilidad de la separacin, variaciones en las
respuestas del detector que produce cambios en la lnea
base del cromatograma). Por ello la FM debe ser
desgasificada mediante alguno de los siguientes sistemas:
vaco moderado, ultrasonidos, burbujeo de una corriente de
gas inerte (helio) a travs del disolvente (figura 9.7.). Este
tratamiento elimina los gases adems de la materia en
suspensin.

Fig. 9.7. Esquema de HPLC con sistema de difusin que


permiten arrastrar los gases disueltos fuera de la solucin
mediante finas burbujas de un gas inerte de baja solubilidad.

257
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

- El material de los recipientes o contenedores suele ser de


vidrio, pero en algunos casos puede ser de
politetrafluoretileno (PTFE). Con frecuencia estos sistemas
tambin poseen un dispositivo para la filtracin del polvo
(para partculas mayores de 2-5 m) y de las partculas
slidas en suspensin de los disolventes, como el mostrado
en la figura 9.8.

Fig. 9.8. Tubo de entrada del disolvente (FM) al cromatgrafo


provisto de un filtro de poro fino.

9.5.2. Modos de elucin.


A diferencia de GC, la variacin de la temperatura tiene
efectos mnimos en la separacin mediante LC. Variaciones
en la polaridad del disolvente afectan enormemente a la
retencin/elucin. Esto se logra alterando la FM pura o
mezcla de disolventes durante el anlisis. Una separacin
que utiliza un solo disolvente de composicin constante se
denomina una elucin isocrtica. Con frecuencia, la eficiencia
de la separacin se aumenta notablemente por una elucin
con gradiente. En este caso se utilizan dos (y a veces ms)
disolventes con una polaridad significativamente distinta. Una
vez comienza la elucin, se vara la relacin de los
disolventes de forma programada, a veces continuamente y a
veces mediante una serie de etapas escalonadas.
La Figura 9.9. ilustra la ventaja de la utilizacin de una
elucin con gradiente en la separacin de una mezcla de
clorobencenos. El cromatograma (a) muestra la elucin con
gradiente, que se inicia con una mezcla 40:60 de los dos
disolventes y se va aumentando la concentracin de metanol

258
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

un 8%min-1. El cromatograma (b) corresponde a la elucin


isocrtica con metanol/agua 50:50 (v/v).

Fig. 9.9. Mejora de la eficiencia de la separacin mediante la


elucin con gradiente. Columna de 1 m x 2.1 mm d.i. de
acero inoxidable, relleno 1% Permaphase ODS. Muestra: 5
L de bencenos clorados en isopropanol. Detector: fotmetro
de UV (254 nm). Condiciones: temperatura 60C, presin 80
kgcm-2. (a) elucin con gradiente: metanol 40% / agua 60% e
incremento de la proporcin de metanol a una velocidad de

259
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

un 8%min-1 (b) Elucin isocrtica con metanol 50% / agua


50%.

Se observa que la elucin con gradiente acorta notablemente


el tiempo de separacin sin sacrificar la resolucin de los
primeros picos, mejorando su forma y la sensibilidad.
Adems, la elucin con gradiente produce unos efectos
similares a los producidos por la programacin de
temperatura en cromatografa de gases.
Se debe tener en consideracin la fuerza desplazante que
equivale a la polaridad para disolventes no electrolticos.
Cuanto ms polar es el disolvente, mayor poder de elucin.
No todos los mtodos de LC permiten el uso del modo de
elucin con gradiente:

Cambio inico Si
Lquido-lquido Difcil
Fase enlazada Si
Exclusin por tamao No
Adsorcin Si

9.5.3. Sistemas de bombeo.


Los requisitos para un sistema de bombeo en HPLC son
rigurosos e incluyen:
- Operar en un rango amplio de presiones (500-10000 psi).
- Operar con flujos variables (0,1-10 mL/min).
- Control y reproducibilidad del flujo (variaciones < 0,5%).
- Flujo libre de pulsaciones.
- Componentes inerte qumicamente y resistentes a la
corrosin (materiales utilizados de tefln, acero inoxidable).
Se utilizan tres tipos de bombas, cada una con sus propias
ventajas y desventajas: bombas neumticas o de presin
constante, bombas de flujo constante y bombas recprocas.

260
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Bombas neumticas o de presin constante. Se aplica


presin de gas desde un tanque externo mediante un
regulador de presin, no hay pulsos de presin, el depsito
es limitado y el coste es bajo. Tiene problemas para
introducir el gas en el disolvente y no permite trabajar en
modo gradiente (figura 9.10).

Fig. 9.10. Contenedor cilndrico que contiene la FM y un tubo


por el que penetra un gas a presin que impulsa la FM.

Bombas de flujo constante. De jeringa o desplazamiento.


Consta de un depsito cilndrico que contiene la FM y que es
recorrido por un pistn impulsado por un tornillo a cierta
velocidad. Slo se usan en aplicaciones excepcionales (figura
9.11.). Permiten obtener un flujo uniforme, trabajar a
presiones y flujos altos y su mantenimiento es sencillo al
carecer de vlvulas. Sin embargo presenta inconvenientes
como su elevado precio o su reducida capacidad volumtrica
para contener FM.

261
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.11. Esquema de jeringa de desplazamiento.


Bombas recprocas de pistn simple. Las bombas recprocas,
que se utilizan en aproximadamente el 90% de los sistemas
de HPLC comercializados, consisten, por lo general, en una
pequea cmara en la que el disolvente es impelido por el
movimiento de vaivn de un pistn accionado por un motor.
Dos vlvulas con cierre de bola, que se abren y cierran
alternativamente, controlan el flujo del disolvente hacia dentro
y hacia afuera de un cilindro (figura 9.12.). Las bombas
recprocas tienen la desventaja de que producen un flujo con
pulsaciones, las cuales se han de amortiguar dado que su
presencia se manifiesta como ruido en la lnea base en el
cromatograma.
Muchos de los detectores utilizados en HPLC son sensibles a
variaciones de flujo. Un mtodo sencillo de amortiguacin
contiene un fuelle flexible o un gas compresible en la porcin
superior cerrada de un tubo en T para absorber parte de la
energa de pulsacin. Cuando la bomba se rellena esta
energa se libera para ayudar a suavizar la pulsacin de
presin. Los amortiguadores electrnicos de pulsos
proporcionan una carrera hacia delante corta y rpida del
pistn, y enseguida la carrera rpida de recarga de la bomba.
El pequeo impulso hacia delante amortigua el pulso de flujo
llevando disolvente a la presin del sistema. Entre las
ventajas de las bombas recprocas se pueden citar el control
estricto de flujo y presin, trabajar con flujos ms constantes,
presiones de salida elevadas (> 800 atm), fcil adaptacin a
la elucin con gradiente y mantenimiento escaso y sencillo.

262
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.12. Esquema de una bomba recproca de pistn simple.

Bombas recprocas de doble pistn. Para producir un flujo


uniforme, libre de pulsaciones llevan dos pistones de zafiro.
Segn el esquema de la figura 9.13., del depsito de la
izquierda pasa disolvente a travs de una vlvula electrnica
de entrada, sincronizada con el primer pistn y diseada para
minimizar la formacin de burbujas. La vlvula de salida, de
resorte, mantiene una presin de salida constante y el
amortiguador reduce aun ms las variaciones de presin.
Cuando el primer pistn absorbe lquido, el segundo impulsa
disolvente hacia la cmara y el resto a la columna. La rapidez
del flujo se controla reduciendo el camino recorrido por los
pistones (cuanto menor sea, mayor ser el nmero de
emboladas por tiempo).

263
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

1
2

Fig. 9.13. Esquema de funcionamiento de una bomba


recproca de doble pistn.

9.5.4. Control de gradiente.


Como una parte de sus sistemas de bombeo, muchos
instrumentos comerciales se equipan con dispositivos
controlados por ordenador que permiten medir el caudal
mediante la determinacin de la cada de presin a travs de
un restrictor colocado en la salida de la bomba. Cualquier
diferencia entre la seal y un valor preestablecido se utiliza
para aumentar o disminuir la velocidad del motor de la
bomba. Por otro lado, la mayor parte de los instrumentos
pueden variar la composicin del disolvente bien sea de una
forma continua o bien de forma escalonada.
1. Mezcla a alta presin. Los disolventes que formarn
parte de la FM se mezclan una vez presurizados
(figura 9.14.).
2. Mezcla a baja presin. Se presuriza la FM despus de
obtener la mezcla de disolventes (figura 9.15.).

264
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

D1 B1

D2 B2 mezcla Columna

D3 B3

MICROPROCESADOR

Fig. 9.14. Mezcla de disolventes (FM) a alta presin.

D1

D2 mezcla Bomba Columna

D3

MICROPROCESADOR

Fig. 9.15. Mezcla de disolventes (FM) a baja presin.

9.5.5. Sistemas de inyeccin.


Los volmenes que se emplean han de ser muy pequeos, de
unas pocas dcimas de microlitro a tal vez 500 L para
conseguir picos estrechos. Adems, no se deben alterar las
caractersticas hidrodinmicas del sistema e introducir la
muestra sin despresurizar el sistema y sin interrumpir el flujo
de FM. La introduccin de la muestra se puede realizar de
forma manual o automtica, por acoplamiento a un
muestreador. En este ltimo caso la inyeccin puede ser
mediante jeringa, mediante vlvula rotatoria o de bucle
(externo o interno) como muestra la figura 9.16. y mediante
vlvula con jeringa. Este ltimo dispositivo es verstil, pues
admite volmenes variables, sin necesidad de cambiar el
bucle. La inyeccin se efecta off-line a presin ambiental, sin

265
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

interrumpir el sistema de flujo. La muestra pasa directamente


a la columna, evitando la dilucin en el disolvente (FM).

Muestra B
eliminacin
Bucle
Bucle
A la
A la columna
columna

Bomba
Bomba

Fig. 9.16. Vlvula rotatoria de 6 vas con bucle externo y dos


posiciones al girar un rotor: carga o llenado (A) e inyeccin
(B). Para evitar contaminaciones de las muestras, el bucle
debe lavarse antes de la inyeccin de una nueva muestra con
disolvente.

9.5.6. Columna
Para aumentar la vida de la columna analtica, se coloca una
precolumna que aumenta la vida media de la columna
actuando como filtro. Elimina la materia en suspensin y los
contaminantes de los disolventes. La composicin del relleno
de la precolumna debe ser semejante al de la columna; sin
embargo, el tamao de partcula es mayor para minimizar la
cada de presin (figura 9.17.).

266
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

3 cm x 8 mm 15 x 4.6 mm

Fig. 9.17. Precolumnas utilizadas en HPLC.

La mayora de las columnas para cromatografa de lquidos


tienen una longitud entre 5 y 25 cm y 4.6 mm de dimetro
interno, y empaquetada con partculas de 5 m. Los tipos de
relleno en las columnas convencionales pueden ser:
1. Empaquetamiento con partculas peliculares (figura 9.18.).
La FE est formada por esferas de vidrio o polmero sobre las
que se deposita una pelcula delgada y porosa de slice (o
una resina de intercambio inico, etc.). Tienen menor
resistencia a la presin.

10-40 m

Fig. 9.18. Columnas de HPLC de empaquetamiento con


partculas peliculares.

2. Empaquetamiento con partculas microporosas (figura


9.19.). Las partculas son de slice, almina o resinas de
intercambio inico o poliestireno, aunque la slice es el
material ms comn, tambin pueden ser slice con una fase
ligada. (d = 3- 10 m).

267
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.19. Partculas de slice para el empaquetamiento de


columnas de HPLC con partculas microporosas.

Tambin, se han empezado a fabricar columnas de alta


resolucin ms rpidas, las cuales tienen menores
dimensiones que las anteriormente descritas. Las ventajas de
la disminucin del tamao de partcula son la mayor
capacidad y eficacia (especialmente con partculas esfricas)
y soportan mayor presin que las partculas peliculares (figura
9.20.).

Fig. 9.20. Ejemplo de utilizacin de columnas HT de


resolucin rpida. Se reduce el tiempo de anlisis un 80%
respecto a las columnas convencionales sin perder
resolucin.

268
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Se puede trabajar a temperatura ambiente o con alta


temperatura (con aire en un horno, desde temperatura
ambiente hasta 200 C) en el desarrollo de mtodos ms
rpidos.
Con la termostatizacin se logra:
-Disminuir la viscosidad de la FM. Esto permite trabajar con
mayor flujo, separaciones ms rpidas, mayor eficacia y el
uso de columnas con 2 m.
-La transferencia de masa es ms rpida que permite mejorar
la eficacia y disminuir el tiempo de anlisis con separaciones
ms rpidas sin prdida de resolucin.
-Puede cambiar la selectividad optimizando la resolucin.
FE para cromatografa de adsorcin
Almina. FM: hexano, cloroformo, 2-propanol.
Ej. de aplicacin: aminas.
Slice. FM: hexano, cloroformo, 2-propanol.
Ej. de aplicacin: teres, steres, porfirinas, vitaminas
liposolubles.
FE para cromatografa de reparto.
Fase normal: materiales polares enlazados a soporte amino,
ciano, diol
Fase reversa: materiales no polares enlazados a soporte C2,
C8, C18
Fase intermedia
FE para cromatografa de cambio inico.
Catin fuerte: grupo cido sulfnico.
Anin fuerte: amina cuaternaria.
Anin dbil: amina primaria.
Catin dbil: grupo cido -COOH.
FE para cromatografa de exclusin por tamao.
Geles orgnicos o acuosos.
Partculas de vidrio o slice de poro controlado.

269
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

9.5.7. Sistemas de deteccin.


Un detector ideal para cromatografa de lquidos debera
poseer todas las propiedades listadas en relacin con la
cromatografa de gases (sensibilidad y respuesta lineal,
insensible a los cambios de composicin de la FM y de las
condiciones ambientales de presin, caudal, temperatura),
con la excepcin de que un detector para cromatografa de
lquidos no es necesario que sea sensible en un intervalo tan
grande de temperaturas. Adems, un detector de HPLC debe
tener un volumen interno mnimo a fin de reducir el
ensanchamiento de banda.
En HPLC se suelen adaptar a la situacin dinmica de
circulacin de la FM instrumentos de medida como
refractmetros, espectrofotmetros, etc. Para obtener mxima
informacin en continuo sobre los analitos en muestras muy
complejas, la tendencia actual se dirige hacia la hibridacin
instrumental: HPLC-MS, HPLC-RMN, HPLC-AAS.
Detectores de absorbancia.
Utilizan celdas de flujo en forma de Z con volumen bajo (1-10
L), y longitud de 2-10 mm (figura 9.21.). La FM debe
absorber la mnima radiacin a la longitud de onda
seleccionada para los analitos. La deteccin no debe
afectarse por las fluctuaciones del flujo de FM ni de
temperatura.
Muchos detectores de absorbancia son dispositivos de doble
haz, en los que uno de los haces pasa por la cubeta de flujo y
el otro a travs de un filtro que reduce su intensidad. Para
comparar las intensidades de los dos haces se utilizan
detectores fotoelctricos. Tambin se utilizan instrumentos de
un solo haz. Los detectores de absorcin UV ms simples son
los fotmetros de filtros con una lmpara de mercurio como
fuente. Lo ms comn en estos casos es aislar la lnea
intensa a 254 nm por medio de filtros, pero carecen de
flexibilidad para cambiar de zona de absorbancia (figura
9.22.). En algunos equipos tambin se pueden utilizar las
lneas a 250, 313, 334 y 365 nm empleando otros filtros. Este

270
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

tipo de detector se utiliza de forma restringida para aquellos


solutos que absorben a alguna de estas longitudes de onda.

Fig. 9.21. Celda del detector de absorbancia UV en HPLC.

Fig. 9.22. Detector de HPLC basado en un fotmetro de filtros


de longitud de onda fija

La mayora de los fabricantes de instrumentos de HPLC


ofrecen detectores que consisten en un espectrofotmetro de
barrido con ptica de red de difraccin. Algunos se limitan a la
radiacin UV; mientras que otros abarcan la radiacin UV y la

271
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

visible. Son espectofotmetros de longitud de onda variable


que poseen una mayor selectividad. Los detectores de barrido
estn basados en series de diodos (DAD) y son los
instrumentos ms potentes (figura 9.23.).

Fig. 9.23. Detector de HPLC basado en un espectrofotmetro


multicanal de serie de diodos.

No existe un monocromador antes de la celda de flujo. La


muestra recibe la radiacin lumnica total. Lleva una red de
difraccin para dispersar la radiacin despus de pasar por la
muestra. El detector posee entre 200 y 1000 diodos. Se
detectan varias longitudes de onda, permitiendo la deteccin
simultnea de varios compuestos sin repetir la inyeccin.
Algunos fabricantes ofrecen este tipo de instrumentos, que
permiten recoger los datos de un espectro completo en
aproximadamente un segundo. De esta forma, los datos
espectrales para cada pico cromatogrfico se pueden recoger

272
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

y almacenar a medida que van saliendo de la columna. Una


de las formas de presentacin de los datos espectrales, que
resulta til para la identificacin de las especies y para elegir
las condiciones de la determinacin cuantitativa, consiste en
un grfico tridimensional tal como el que se muestra en la
figura 9.24.

Fig.9.24. Espectro tridimensional (absorbancia/longitud de


onda/tiempo).

Detectores de fluorescencia.
Los detectores para HPLC son semejantes en diseo a los
fluormetros y espectrofluormetros. En la mayora de ellos, la
fluorescencia se detecta por medio de un detector
fotoelctrico colocado perpendicularmente respecto al haz de
excitacin. Los detectores ms sencillos utilizan una fuente de
excitacin de mercurio, y uno o ms filtros para aislar la
radiacin fluorescente. Los futuros desarrollos en los
detectores de fluorescencia probablemente se basarn en el
uso de fuentes de lser sintonizables, las cuales permiten una
mayor sensibilidad y selectividad.
Una ventaja inherente a los mtodos de fluorescencia es su
alta sensibilidad, que resulta ser ms de un orden de
magnitud mayor que la de los sistemas de absorbancia. En
cromatografa de lquidos se ha aprovechado esta ventaja

273
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

para la separacin y determinacin de los componentes


fluorescentes de las muestras.
Detectores electroqumicos.
Los fabricantes de instrumentos proporcionan en la actualidad
varios tipos de detectores electroqumicos. La electroqumica
abarca los procesos qumicos y fsicos que implican la
transferencia de carga:
1. De constante dielctrica: Medida del cambio de polaridad
de la FM que pasa a travs de la clula.
2. Voltamperomtrico: Medida de la corriente con fines
analticos a potencial controlado.
3. Conductimtrico: Medida de la conductividad del disolvente
(FM) (disolucin de iones).
4. Polarogrfico: Medida de corriente entre electrodo de
trabajo de Hg y electrodo auxiliar inerte. El voltaje se mide y
controla entre electrodo de Hg y electrodo de referencia.
5. Potenciomtrico: Medida del potencial de clula
electroqumica en ausencia de corriente apreciable.
6. oulombimtrico: Medida de los electrones consumidos para
llevar a cabo una reaccin qumica, a potencial controlado.

9.6. Acoplamiento de LC y espectrometra de masas


(MS).
El factor limitante para el desarrollo del acoplamiento LC-MS
ha sido la obtencin de interfases que permitieran la
introduccin directa del flujo de LC en el detector de MS.
Haba varios problemas a resolver:
1. Un flujo de FM alto (1 mL min-1), para vaporizar en MS.
2. Caractersticas de la FM (disolventes orgnicos, acuosos,
sales inorgnicas no voltiles...) incompatibles con MS.
3. Caractersticas de los compuestos eluidos: molculas
complejas de peso molecular alto, de baja volatilidad, alta
polaridad, o termolbiles.
Las primeras interfases utilizadas eliminaban el disolvente,
con el fin de simular el proceso de evaporacin del analito y
posterior ionizacin, como ocurra en el acoplamiento GC-MS.

274
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Es el caso de la interfase de haz de partculas. Sin embargo


se observ que la presencia de disolvente no tena porque
perturbar el anlisis por MS e incluso poda ayudar a la
ionizacin de los analitos. Las interfases ms utilizadas
actualmente son la nebulizacin trmica (termospray) la
ionizacin qumica a presin atmosfrica (APCI) y la
electronebulizacin o electrospray (ESI).

9.6.1. Termospray.
La muestra se calienta y se produce un chorro de vapor
mediante un nebulizador que es conducido al vaco. Las
gotas formadas reducen su tamao por desolvatacin y se
produce una carga esttica. Las partculas cargadas entran
en el MS (figura 9.25.)

Chorro de
vapor

Columna Al vaco

Calentadores

Fig. 9.25. Esquema de nebulizacin trmica o termospray

9.6.2. Ionizacin qumica a presin atmosfrica (APCI).


El flujo de LC procedente del sistema cromatogrfico se
nebuliza en un tubo vaporizador de slice fundida caliente
donde el disolvente es evaporado prcticamente en su
totalidad. La mezcla de gas-vapor entre en la fuente a presin
atmosfrica, donde la ionizacin qumica es iniciada por los
electrones generados en una aguja (corona) por descarga. El
vapor de disolvente acta como gas reactivo. Los iones
generados son transferidos por el alto vaco del detector MS
(figura 9.26.).

275
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Montaje de
vaporizacin

Cmara de spray

Fig. 9.26. Esquema de de interfase APCI (arriba). Mecanismo


de formacin de iones (abajo).

Los iones primarios (N2+; O2+ H2O+ y NO+ del aire) reaccionan
con el disolvente para formar iones reactivos secundarios
([X+H+], en modo positivo y ([X-H+] en modo negativo), donde
X son las molculas de disolvente de la fase mvil. Los iones
reactivos reaccionan con los analitos para formar iones
(positivos o negativos, dependiendo del modo) que son
dirigidos a la ptica del MS. La interfaz APCI es efectiva para
la ionizacin de compuestos trmicamente estables, de baja a
media polaridad, como por ejemplo pesticidas o esteroides.

276
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

9.6.3. Electrospray (ESI).


El flujo procedente de la LC, en el que estn disueltos los
analitos, pasa a travs de un capilar a presin atmosfrica,
manteniendo a alto voltaje que dispersa la corriente de
lquido, formndose gotas altamente cargadas (nebulizacin)
que son desolvatadas, a medida que pasan a travs de la
regin a presin atmosfrica de la fuente del espectrmetro
de masas. La desolvatacin es asistida por una corriente de
gas caliente (nitrgeno). A medida que disminuye el tamao
de las gotas se alcanza un punto en el cual las fuerzas
repulsivas entre las cargas en la superficie de las gotas son
suficientes para superar las fuerzas cohesivas de tensin
superficial. Se producen por explosin, gotas ms pequeas
hasta que se alcanza un punto en el cual los iones pasan a
fase gas, siendo transferidos a travs de una serie de lentes
focalizadoras hacia el analizador del espectrmetro de
masas. La ionizacin tiene lugar directamente en la disolucin
y las molculas trmicamente lbiles pueden ser ionizadas sin
degradacin (figura 9.27.).

Fig. 9.27. Mecanismo de formacin de iones mediante ESI.

Aunque la interfase ESI es la ms indicada para compuestos


inicos o muy polares y la APCI para los menos polares, hay
un amplio rango de polaridades en las que ambas interfases
pueden trabajar aceptablemente, dependiendo la eleccin de

277
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

una u otra en funcin de la sensibilidad alcanzada y de la


matriz de la muestra. En general ESI es ms efectiva, por lo
que suele dar lugar a determinaciones ms sensibles.

9.6.4. Analizador de triple cuadrupolo.


Se puede obtener informacin adicional a la requerida por los
iones generados en el proceso de ionizacin, a partir de la
fragmentacin de estos iones (MS en tndem). En el caso de
filtro cuadrupolar, el uso de MS/MS implica la adicin de dos
cuadrupolos extra a un instrumento de cuadrupolo lineal,
como se muestra en la figura 9.28. La fragmentacin se
produce por colisin del ion seleccionado (ion precursor) con
molculas de gas inerte (generalmente argn). Este proceso,
llamado disociacin inducida por colisin (CID) se produce en
dos pasos: en primer lugar, la energa transicional del in se
convierte en energa interna tras colisionar con las molculas
del gas inerte; en segundo lugar, esta energa interna se
utiliza para romper el ion en varios fragmentos (iones
producto). En el primer cuadrupolo se puede aislar un ion de
m/z determinada que pasa al segundo cuadrupolo, usado
como celda de colisin. El ion se fragmenta en funcin de la
estructura del analito. La transmisin de los iones desde la
celda de colisin al tercer cuadrupolo debe ser lo ms efectiva
posible para que se pueda realizar un barrido de los iones o
seleccionar uno de ellos con el fin de obtener una transicin
selectiva del analito. La geometra de la celda puede ser un
hexpolo o un octapolo para favorecer la transmisin.

278
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.28. Esquema de un triple cuadrupolo en un equipo LC-


MS/MS

Se pueden utilizar distintos modos de barrido en funcin del


objetivo final del anlisis. En modo MS se puede realizar un
barrido de todos los iones (full scan). En este caso, todos los
iones que alcanzan el detector son monitorizados. Se
generan cromatogramas en tres dimensiones (tiempo de
retencin, intensidad y relacin m/z). Tambin se puede
seleccionar un ion concreto para ser monitorizado (selected
ion monitoring, SIM) (figura 9.29.).

Fig. 9.29. Monitorizacin selectivo de iones (SIM).

279
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Cuando se trabaja en MS/MS se pueden realizar barridos de


iones producto, barridos de iones precursores, de prdidas
neutra o la monitorizacin de una transicin concreta, la
fragmentacin de un determinado in precursor para dar un
determinado ion producto (selected reaction monitoring, SRM)
aumentando la sensibilidad y la selectividad.

9.6.5. Analizador de tiempo de vuelo (TOF).


Los iones son separados en funcin del tiempo que tardan en
atravesar un tubo de vuelo de longitud conocida, que
depende de la relacin m/z. Como todos los iones inician su
viaje en un intervalo de tiempo suficientemente corto, los
iones ms ligeros llegan al detector antes que los ms
pesados. Por eso los iones que llegan de la interfase pasan
mediante un pulso al TOF (operando en modo discontinuo).
Esto se consigue mediante la aceleracin ortogonal de los
iones y muestreando una fraccin de este haz de iones (el
25% de los generados). Mediante la introduccin de
reflectrones o espejos inicos, que reenfocan los iones de la
misma masa sobre el detector, se aumenta notablemente la
resolucin del analizador TOF (figura 9.30.).

Fig. 9.30. Esquema de un analizador TOF con reflectrn.

280
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

9.6.6. Analizador hbrido cuadrupolo tiempo de vuelo


(QTOF).
En este caso, el trabajo en modo MS/MS se realiza con dos
analizadores distintos, un cuadrupolo y un TOF,
constituyendo un instrumento hbrido. Es un diseo similar al
triple cuadrupolo, en el que se ha sustituido el ltimo
cuadrupolo por un TOF (figura 9.31.). Una vez fragmentado el
ion precursor en la celda de colisin, todos los iones producto
son determinados mediante el TOF (Product ion mode). La
posibilidad de obtener el espectro de iones producto con
masa exacta aumenta la calidad de los datos.

Fig. 9.31. Esquema de un analizador QTOF con doble


reflectrn.

9.6.7. Cromatografa lquida en el control de procesos.


Presenta algunas diferencias significativas con la LC de
laboratorio:
- Bombas neumticas
- Columnas multiples
- Detectores utilizados: UV, de ndice refraccin, MS, MS/MS.

281
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Las figuras 9.32. y 9.33 muestran esquemas generales de LC


en el control de proceso.

Fig. 9.32. Sistema de LC para el control de procesos en la


industria farmacutica

282
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

Fig. 9.33. Control de procesos on-line mediante cromatografa


lquida con elucin en gradiente. Sensores de presin (P1, P2
y P3).
Otro interesante ejemplo de la aplicacin de LC en el control
de procesos es la determinacin de acrilamida en patatas
fritas mediante extraccin en fase slida y determinacin por
cromatografa lquida acoplada a espectrometra de masas
(SPE-LC-MS). La acrilamida es un compuesto con
propiedades potencialmente cancergenas, que se forma
durante la fabricacin y procesado a altas temperaturas de
alimentos ricos en almidn (patatas fritas, cereales, snacks).
La figura 9.34. muestra dos cromatogramas obtenidos
mediante la metodologa propuesta.

Fig. 9.34. Cromatogramas de una muestra con adicin de


acrilamida (arriba) y de un patrn (abajo).

283
TEMA 9. Mtodos cromatogrficos de anlisis II

9.7. Bibliografa

D.A. SKOOG, D.M. WEST, F.J. HOLLER and S.R. CROUCH


Fundamentos de Qumica Analtica 8 Ed. Thomson Madrid
(2005).

D.A. SKOOG, F.J. HOLLER and T.A. NIEMAN Principios de


Anlisis Instrumental 5 Ed. Mc Graw Hill Madrid (2001).

R. CELA, R.A. LORENZO, M DEL CARMEN CASAIS. Tcnicas


Analticas de Separacin en Qumica Analtica Ed. Sntesis,
Madrid (2002).

M.V. DABRIO Cromatografa y electroforesis en columna Ed.


Springer-Verlag Ibrica. Barcelona (2000)

K.A. BAKEEV (Ed.) Process Analytical Technology Blackwell


Publishing .Oxford (2005)

http://www.waters.com/waters/nav.htm?locale=en_US&cid=511505

http://niobio.grasa.csic.es/jrios/weblab/grafesiapci.html

http://www.waters.com/waters/nav.htm?locale=es_ES&cid=10046886

http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8249/4/T5masas.pdf

http://tdx.cat/bitstream/handle/10803/10536/ibanyez2.pdf?sequence=
1

284
TEMA 10. Sensores electroanalticos

TEMA 10. SENSORES ELECTROANALTICOS


Objetivos
9 Conocer el fundamento de los sensores
electroanalticos.
9 Distinguir los diferentes sensores en funcin de su
clasificacin.
9 Adquirir los conocimientos bsicos de los diferentes
componentes de un electrodo.
9 Mostrar las aplicaciones ms importantes de los
diversos sensores electroanalticos.

10.1. Fundamento de los sensores electroanalticos


(ISE).
Un sensor electroqumico es un dispositivo qumico que
responde a cambios especficos en el potencial o en la
corriente elctrica como consecuencia de la presencia de
una especie qumica que interacta de manera muy
selectiva con l (ion selective electrodes, ISE). Son
dispositivos muy simples y fcilmente miniaturizables, lo que
permite hacer medidas en pequeos volmenes de
muestras o en zonas de dimensiones reducidas.
Consta esencialmente de dos partes: el elemento de
reconocimiento que interacta con el analito y concede
selectividad al sensor y el transductor que permite convertir
esa interaccin en una seal analtica. Cuando el
transductor es un electrodo, el sensor ser un sensor
electroqumico y cuando en el elemento de reconocimiento
intervienen especies biolgicas (enzimas, anticuerpos,
cidos nucleicos, etc) estaremos en presencia de un
biosensor.
Tanto los ISE como los biosensores utilizan transductores
que se basa, fundamentalmente en mtodos
electroqumicos de interfase.
Los mtodos electroqumicos de interfase, la seal medida
depende de los fenmenos que se producen en la interfase

285
TEMA 10. Sensores electroanalticos

entre un electrodo y la disolucin en contacto que se halla


con l. Estos mtodos se dividen en:
-Estticos, cuando no pasa corriente entre los electrodos y
las concentraciones de las especies permanecen
constantes en la clula electroqumica. Es el caso de los
sensores potenciomtricos, en los cuales la seal primaria,
fruto de la interaccin entre el analito y el elemento de
reconocimiento, es un potencial elctrico, cuya medida se
realiza normalmente a intensidad nula y frente a un
elemento adicional denominado electrodo de referencia.
-Dinmicos, en los que fluye la corriente y las
concentraciones cambian como consecuencia de una
reaccin redox. Dentro de estos, estn los mtodos a
potencial controlado, como los biosensores
amperomtricos, que requieren de un ampermetro como
sistema de medicin en el que se aplica un potencial
constante durante el anlisis.
La clula electroqumica consiste en dos o ms electrodos y
los componentes electrnicos asociados que permiten
controlar y medir la corriente y el potencial. La ms sencilla
consta de dos electrodos: El potencial de uno de ellos es
sensible a la concentracin del analito de inters (electrodo
indicador o de trabajo). El segundo electrodo
(contraelectrodo) sirve para completar el circuito elctrico y
proporciona un potencial de referencia contra el que se mide
el potencial del electrodo indicador.
En los mtodos dinmicos, el paso de corriente puede
alterar el potencial del contraelectrodo. Para evitar esto, se
sustituye el contraelectrodo por dos electrodos:
- un electrodo de referencia, a travs del cual no pasa
corriente y cuyo potencial permanece constante,
- un electrodo auxiliar que completa el circuito, a travs
del cual pasa corriente.

286
TEMA 10. Sensores electroanalticos

10.2. Clasificacin de los sensores potenciomtricos


Los sensores potenciomtricos pueden definirse como
electrodos con una membrana cuyo potencial indica la
actividad del analito. Pueden considerarse como medias
celdas electroqumicas que estn formadas por un adecuado
sistema electrodo de referencia/disolucin de referencia,
separado de la muestra por una membrana. Aunque
frecuentemente los sensores potenciomtricos contienen un
electrodo de referencia interno y una disolucin interna de
referencia, a veces slo es necesario un contacto metlico,
como ocurre con algunos sensores de estado slido.
La naturaleza de la membrana determina el in al cual el
sensor es sensible. La membrana tiene una respuesta
originaria del intercambio de uno de los iones entre la fase
slida y la disolucin externa. Este intercambio crea una
variacin en la carga elctrica de la membrana y una
diferencia de potencial de potencial de la interfase que
depende directamente de la actividad en la disolucin del in
al que es sensible.
Los sensores potenciomtricos suelen clasificarse
dependiendo de la membrana donde se encuentra el
material selectivo. En la Figura 10.1. se muestra un
esquema con esta clasificacin. En primer lugar se
distinguen dos grupos bien diferenciados los sensores
primarios y los sensores compuestos.
Los sensores potenciomtricos compuestos utilizan dos
membranas, una selectiva a iones y otra que puede ser
permeable a gases pero capaz de retener lquidos, o
selectiva a molculas de naturaleza enzimtica. La eleccin
de esta segunda membrana depende de si el sensor es
sensible a gases o sensible a un sustrato enzimtico
(biosensor).
Los sensores potenciomtricos primarios se dividen
dependiendo de la naturaleza de la membrana en cristalinos
o no cristalinos. Los sensores cristalinos contienen unos
sitios fijos cargados de un signo, e iones mviles de carga
puesta. Esta estructura se consigue mediante el empleo de

287
TEMA 10. Sensores electroanalticos

ciertas sales inorgnicas. Si solamente utilizan un nico


compuesto se denominan membranas homogneas, en caso
contrario se denominan membranas heterogneas.

Sensores
potenciomtricos

Primarios Compuestos

Cristalinos No cristalinos Sensibles De substrato


a gases enzimtico

Membrana Membrana Portador Matriz


homognea heterognea mvil rgida

Fig. 10.1. Clasificacin de los sensores potenciomtricos


segn el tipo de membrana.

Los sensores potenciomtricos no cristalinos presentan una


membrana selectiva formada a partir de una matriz soporte
que aloja sitios activos capaces de coordinar con el analito
de la muestra en la interfase membrana/disolucin. Pueden
utilizarse mltiples soportes que se clasifican dando lugar a
sensores potenciomtricos de portador mvil o lquido,
donde se incluyen los de membrana polimrica y sensores
potenciomtricos de matriz rgida, tales como el electrodo de
vidrio.

10.3. Electrodo de vidrio para medir pH


La categora de electrodos no cristalinos de matriz rgida
incluye principalmente las membranas de vidrio silceo.
En 1906 se desarroll el primer ESI para medir la acidez y
alcalinidad utilizando como elemento selectivo un bulbo de
vidrio formado por SiO2, R2O y MO M2O3, siendo R un
metal alcalino y M un ion metlico (alcalinotrreo o de tierras

288
TEMA 10. Sensores electroanalticos

raras) en composicin determinada. Un modelo tpico es el


formado por un electrodo indicador y un electrodo de
referencia como en la Figura 10.2. Se usa una escala
denominada escala de pH. Esta escala posee valores
comprendidos entre 0 y 14. Las soluciones cidas presentan
valores menores de 7, mientras que las soluciones alcalinas
presentan valores superiores a 7. El valor pH igual a 7 indica
un medio neutro.
La disolucin de referencia contenida en el electrodo es en
general una disolucin 0.1 M de cido clorhdrico. El
electrodo interno de referencia es el de Ag/AgCl o el de
calomelanos saturado. La notacin taquigrfica de la clula
electroqumica sera:

(Ag/AgCl) Ag (s) l AgCl (sat), KCl (x M) ll

(calomelanos saturado) Hg (l) l Hg2Cl2 (sat), KCl (aq, sat) ll

ELECTRODO DE ELECTRODO
REFERENCIA INDICADOR

Filamento Pt Filamento de Ag con


Orificio de llenado revestimiento de AgCl

Mezcla Hg, Hg2Cl2, KCl KCl saturada

Lana de vidrio
Membrana
Fibra de amianto de vidrio

Fig. 10.2. Diagrama esquemtico del electrodo de referencia


de calomelanos saturado y un electrodo indicador de vidrio.

La membrana del electrodo de vidrio separa dos lquidos de


diferentes concentraciones de iones H+; en los lados de la

289
TEMA 10. Sensores electroanalticos

membrana se desarrolla un potencial proporcional a la


diferencia de pH entre los dos lquidos, que se mide en
relacin con un potencial de referencia. El electrodo
indicador y el electrodo de referencia pueden estar
combinados en un solo electrodo de vidrio (Figura 10.3.)
simplificando la medida de pH. Si la actividad del ion
hidrgeno es mayor o menor en la solucin procesada que
dentro del electrodo, existir una diferencial de potencial
mayor o menor en la extremidad del vidrio.

Fig. 10.3. Componentes de un electrodo de vidrio


combinado. El electrolito gelificado es AgCl, KCl.

10.3.1. Errores en la medida de pH con electrodo de vidrio.


Como el espesor de la membrana es de unos 50 m, deben
de ser manipuladas con cuidado para evitar roturas. Antes
de utilizar el electrodo debe ser acondicionado,
sumergindolo durante varias horas en una disolucin que
contenga el analito. No deben dejarse secar para que no se
destruya la capa hidratada de la membrana. Si un electrodo

290
TEMA 10. Sensores electroanalticos

de vidrio se seca, habr que reacondicionarlo antes de


utilizarlo de nuevo. La composicin de la membrana de vidrio
cambia con el tiempo, alterando el rendimiento del electrodo,
aunque la vida media de un electrodo son varios aos.
Algunos errores en la medida pueden ser:
a) Error alcalino. A pH mayores que 10 el electrodo de vidrio
ordinario se hace algo ms sensible al ion Na+. En una
disolucin 1M de Na+ se obtiene un error negativo de casi
una unidad de pH a un pH 12. Existen diseos para
reducir este error.
b) Error cido. A pH menor que cero tienden a ser algo ms
altos los valores obtenidos con un electrodo de vidrio.
c) Deshidratacin. Cuando el agua que contiene el vidrio se
elimina por secado al aire o por tratamiento durante
perodos prolongados con un agente deshidratante, se
pierde la sensibilidad del electrodo para el pH y no se
obtienen valores de pH reproducibles.
d) Errores en disolucin neutra no regulada. Debido al
tiempo necesario para que se establezca el equilibrio entre
la capa superficial del electrodo y la disolucin.
e) Error en el pH de la disolucin reguladora. Puesto que el
electrodo de vidrio debe ser calibrado regularmente,
cualquier inexactitud en la preparacin o cambios en la
concentracin de la disolucin reguladora sern reflejados
como errores en las medidas de pH.

10.4. Electrodos de vidrio selectivos de iones.


Adems del electrodo convencional de vidrio para el pH, se
incluyen dispositivos sensibles a las bases que son
mejorados para ser electrodos selectivos a otros iones como
Li+, Na+, K+, o NH4+.
Los primeros electrodos de vidrio se fabricaron usando
Corning 015, un vidrio con una composicin de alrededor del
22% de Na2O, 6% de CaO y 72% de SiO2. Cuando se
introducen en una disolucin acuosa durante varias horas,
se hidrata la membrana de vidrio dando lugar a lugares de
carga negativa en la estructura de silicio. Los iones Na+,

291
TEMA 10. Sensores electroanalticos

capaces de moverse a travs de la capa hidratada, actan


como contrapones. Los H+ de la disolucin difunden hacia la
membrana, unindose con fuerza al vidrio y desplazando los
iones Na+. As se produce la selectividad de la membrana
para H+. El transporte de carga a travs de la membrana
depende de los iones Na+. Sustituyendo Na2O y CaO por
Li2O y BaO se amplan los lmites tiles de pH de los
electrodos de membrana de vidrio hasta valores de pH
superiores a 12.
La respuesta de la membrana de vidrio Corning 015 a los
cationes monovalentes distintos de H+ a pH alto llev al
desarrollo de membranas de vidrio que poseyeran mayor
selectividad para otros cationes. Variando la composicin del
vidrio se puede hacer que el electrodo sea ms sensible a
un catin que a otro:
Composicin de 11% de Na2O, 18% de Al2O3 y 71% de SiO2
se utiliza como electrodo selectivo de Na+.
Composicin de 15% de Li2O, 25% de Al2O3 y 60% de SiO2
se utiliza como electrodo selectivo de Li+.
Composicin de 27% de Na2O, 5% de Al2O3 y 68% de SiO2
se utiliza como electrodo selectivo de K+.

10.5. Electrodos selectivos de iones en estado slido


cristalizado.
Se han diseado electrodos selectivos de iones en estado
slido utilizando membranas formadas por sales inorgnicas
policristalinas escasamente solubles.
En la Tabla 10.1. se citan varios ejemplos de electrodos
selectivos de iones policristalinos. La selectividad depende
de la solubilidad. Estos IES son todava poco selectivos y se
buscan nuevos elementos ms selectivos a los analitos de
inters.

292
TEMA 10. Sensores electroanalticos

Tabla 10.1. Electrodos selectivos de iones policristalinos.

Analito Material selectivo Interferencias


Fl- Cristal de LaF3 OH-
Cl-, S2- AgCl Halogenuros, CN-,
NH4+, S2O32-, S2-
Br- AgBr CN-, S2-
I- AgI CN-, S2-
CN- AgI I-, S2-
S2- AgSCN, Ag2S Ag+
Ag+ Ag2S S2-
Cd2+ CdS H+, Mn2+, Pb2+,
Fe3+, Cr2O72-
Pb2+ PbS Cu2+, Cd2+
Cu2+ CuS Cu+
S2- Ag2S en hule de silicn ninguna
+
Cs Tunngstoarsenato de Cs en ninguna
resina epxica
Tl+ Molibdofosfato de talio en ninguna
resina epxica

El elemento activo de un electrodo de membrana cristalina


homognea tiene un material slido como LaF3, Agul, Ag2S o
una mezcla. La disolucin interna contiene el ion primario en
actividad constante en contacto con un electrodo de
referencia, de modo que el potencial del electrodo vara
solamente con la actividad de los iones de la disolucin
externa. Destacar el electrodo de fluoruro que slo se ve
afectado por OH-, por lo que las disoluciones a medir
debern ser ligeramente cidas.

293
TEMA 10. Sensores electroanalticos

La selectividad de los electrodos de membrana cristalina


depende principalmente de La solubilidad de las sales
involucradas.
Los electrodos de membrana heterognea se preparan
incorporando los cristales activos pulverizados, dentro de
una matriz inerte como el fluoruro de polivinilo o los
elastmeros silceos. La naturaleza flexible de la membrana
es til pues resiste a la ruptura.
Las membranas de haluros de plata estn muy extendidas,
no slo por responder a los iones haluro, sino tambin a
otros iones que forman precipitados poco solubles con la
plata como el sulfuro, o los agentes formadores de
complejos como el cianuro.

10.6. Electrodos selectivos de iones de matriz lquida.


Son electrodos selectivos de iones en los que se incorpora
un agente quelante a una membrana hidrfoba, por ejemplo
de cloruro de polivinilo (PVC). Los electrodos de membrana
lquida intercambiadora de especies catinicas son
importantes, pues son sensibles a muchos aniones.
Destacar los electrodos de ClO4- y NO3-.aunque son poco
selectivos. Tambin se han fabricado electrodos que
responden a aniones como trifluoroacetato, maleato y ftalato.
Estos electrodos contienen un intercambiador de iones que
tiene forma lquida; se trata de una sustancia que tiene
capacidad de entrar en equilibrio heterogneo con el ion de
inters al ser disuelto en un disolvente orgnico. Un material
slido poroso se impregna con la fase orgnica formando
una membrana separadora entre las disoluciones interna y
externa. Los equilibrios de extraccin sustituyen a los
equilibrios de solubilidad de las membranas cristalinas, al
determinar la selectividad.
Algunos de estos electrodos se han construido utilizando
derivados del o-fenantroleno y compuestos de cadena larga
de iones de amonio sustituidos. La principal desventaja es
que son poco selectivos.

294
TEMA 10. Sensores electroanalticos

Los electrodos de membrana lquida intercambiadora de


especies aninicas son similares a los anteriores, pero el
intercambiador contiene un anin voluminoso que hace que
el electrodo sea sensible a cationes como Ca2+, Mg2+, K2+. El
anin puede ser borato de tetraclorofenilo o derivado de
cido didecilfosfrico. Tampoco tiene una selectividad
excelente pero como ventaja, los electrodos de transportador
mvil poseen una resistencia relativamente baja, lo que
facilita la miniaturizacin necesaria con fine biolgicos o
clnicos.
Los electrodos de membrana lquida intercambiadora de
especies catinicas y aninicas han sido adaptados a los
contactos metlicos por recubrimiento de alambre con el
material activo, proporcionando buenos resultados con las
ventajas de bajo coste, sencillez y resistencia, aunque tiene
poca durabilidad.
Los electrodos de membrana lquida neutra se basan en una
gran molcula neutra que puede inducir a la formacin de un
complejo con el ion de inters o diana para formar un
agregado que sea soluble en un disolvente orgnico. La
disolucin as formada se carga en un slido poroso, que
puede ser una resina epxica, pasta de carbn o un
polmero (Figura 10.4.). El transportador puede ser ser un
compuesto macrocclico o un compuesto de cadena abierta.
Muchas de las molculas transportadas neutras tienen
actividad biolgica. Un ejemplo de electrodo IES de
membrana lquida neutra est basado en un antibitico
(valinomicina, cuya estructura se muestra en la Figura 10.5. )
en difenil ter, que es capaz de atrapar iones de K+.

295
TEMA 10. Sensores electroanalticos

Electrodo de
Disolucin referencia
interna de K+

ter corona
inmovilizado

Fig. 10.4. Diagrama esquemtico de un ISE de membrana


lquida neutra.

Fig. 10.4. Estructura macrocclica de la valinomicina.

10.7. Electrodos selectivos de iones sensibles a gases.


Los electrodos sensibles a los gases son importantes por su
sensibilidad natural ya que se utilizan dos membranas para
generar la respuesta. Su diseo se basa en de una delgada
membrana que separa la muestra (por ejemplo gases de
combustin) de una disolucin interna que contiene un
electrodo selectivo de iones. La membrana es permeable al

296
TEMA 10. Sensores electroanalticos

analito gaseoso, pero no a los compuestos no voltiles de la


muestra. Un electrodo sensible a CO2 consta de un electrodo
de vidrio para determinar pH, en contacto con una delgada
capa de NaHCO3 (Figura 10.4). La membrana externa,
fabricada con un polmero orgnico, es hidrfoba y los
lquidos acuosos no pueden penetrarla. La disolucin de
bicarbonato est localizada en el estrecho espacio entre las
membranas de polmero y de vidrio.

Electrodo de
vidrio

Membrana
permeable al gas

CO2 + H2O HCO3- + H+


Disolucin interna
CO2

Fig. 10.4. Sensor de gases con electrodo de vidrio, sensible


a CO2.

El CO2 reacciona en la disolucin interna as:

CO2 (aq) + 2 H2O (l) HCO3- (aq) + H3O+ (aq)

Tiene interferencias para SO2, NH3, cido actico y vapor de


agua, que podra atravesar la membrana cambiando la
concentracin de la capa de bicarbonato. Este inconveniente
puede ser eliminado mediante el uso de un regulador de
fuerza osmtica para igualar las presiones.
Se han desarrollado electrodos sensibles a varios gases. La
composicin de la disolucin interna cambia segn el uso.

297
TEMA 10. Sensores electroanalticos

Deben guardarse en una disolucin similar a la interna para


reducir al mnimo su exposicin a los gases atmosfricos.

10.8. Biosensores.
Los electrodos potenciomtricos puede utilizar biomolculas
que reaccionan muy selectivamente con diversos analitos.
Se fabrican de forma similar a los sensores de gases. El uso
de enzimas o anticuerpos, en forma pura o en forma de
extractos crudos, clulas o tejidos completos, permite
construir biosensores altamente selectivos hacia molculas
de inters bioqumico (Figura 10.5.). El electrodo enzimtico
tiene una enzima atrapada o inmovilizada en la superficie de
un ESI. La reaccin entre el analito de inters y la enzima da
lugar a un producto que puede medirse con un ESI.

Analito de inters

Parte
Muestra Elemento de
Transductor electrnica
reconocimiento

Fig. 10.5. Esquema de de un biosensor y su funcionamiento.

Un problema a resolver en los diseos es la forma de


inmovilizar la biomolcula seleccionada sin que pierda su
actividad biolgica. Esto se podra resolver mediante: la
adsorcin sobre un soporte (conductor metlico), una unin
qumica covalente sobre un sustrato (carbn vtreo), una
unin qumica a una red inerte, atrapamiento sobre un gel o
polmero conductor, encapsulamiento dentro de una
membrana de dilisis, pastas de carbn formadas

298
TEMA 10. Sensores electroanalticos

mezclando la biomolcula con polvo de carbn conductor


con un aglomerante inerte como el aceite mineral o una
disolucin salina a pH controlado.
Son pocos los biosensores potenciomtricos
comercializados, pero existen adaptaciones de los ESI y
sensibles a gases.

10.9. Aplicaciones de los sensores potenciomtricos.


Entre los requisitos ideales que deberan cumplir los
sensores potenciomtricos se encuentran el ser de fcil
manipulacin, robustos, duraderos y no contaminantes, dar
resultados reproducibles y significativos y tener tiempos de
respuesta cortos.
Pueden actuar como electrodos indicadores en valoraciones,
sin tener en cuenta el color o la turbidez de la muestra, sin
afectar a la disolucin de anlisis, y el hecho de que tales
determinaciones requieran equipamientos relativamente
baratos y porttiles.
Se han utilizado en anlisis de rutina en investigaciones
mdicas y para procesos de control de calidad en la industria
farmacutica (drogas, jabones y pastas de dientes) y de
comestibles (productos lcteos, cereales, azcar, bebidas y
caramelos), y para ensayos minerales de rocas, arcillas y
otros procesos de refino, residuos industriales y mineros.
Otras aplicaciones industriales importantes implican baos
de electrochapado, estampado en madera, pinturas,
pigmentos, algicidas, fungicidas, pesticidas, fertilizantes,
cermicas, vidrio, fotografa, explosivos, emisin de gases
de combustin por chimenea, tabaco, plsticos, resinas y
aceites lubricantes.
Los sensores potenciomtricos tambin tienen aplicaciones
en el anlisis de aguas de ros, estuarios, lagos, aguas
residuales, fangos y lodos. En los anlisis de estas aguas
tienen gran importancia los sensores de fluoruro, nitrato y
amonio. Adems, en los ltimos aos han surgido electrodos
de enzimas que han causado un gran impacto en los anlisis

299
TEMA 10. Sensores electroanalticos

de rutina de aguas y pueden encontrar grandes aplicaciones


en el control de la contaminacin.
El control de acidez y alcalinidad es de vital importancia en
algunas disoluciones como agua potable, agua de piscinas,
en plantas de tratamiento de aguas, residuos industriales.
Para la determinacin del ion H+ de una disolucin se utilizan
IES como el electrodo de vidrio.

10.10. Sensores amperomtricos.


La amperometra consiste em aplicar um potencial constante
AL electrodo de trabajo y medir La corriente em funcin Del
tiempo. Una aplicacin es el sensor destinado a medir el O2
disuelto en la sangre. En la figura 10.6 se muestra el diseo
de un sensor amperomtrico, propuesto por Clark, similar a
los electrodos de membrana potenciomtricos.

Fig. 10.6. Sensor amperomtrico de Clark para la


determinacin de O2 disuelto.

A travs del extremo del sensor se estira una membrana


permeable al gas que se mantiene separada del electrodo
de trabajo y del contraelectrodo por una delgada capa de
disolucin de KCl. El electrodo de trabajo es un disco
catdico de Pt y el contraelectrodo es un nodo formado por
un anillo de Ag. Aunque por la membrana pueden difundirse
varios gases (O2, N2 y CO2), slo el oxgeno se reduce en el
ctodo:

O2 (aq) + 4H3O+ (aq) + 4 e- 6H2O (l)

300
TEMA 10. Sensores electroanalticos

Otro ejemplo de sensor amperomtrico es el biosensor de


glucosa. En este caso, la membrana nica del sensor de
Clark se sustituye por tres membranas. La ms externa es
de policarbonato, permeable a la glucosa y al O2. La
segunda contiene una preparacin inmovilizada de glucosa
oxidada que cataliza la oxidacin de la glucosa a
gluconolactona y perxido de hidrgeno:

-D-glucosa (aq) + O2 (g) + H2O (l) gluconolactona (aq) +


H2O2 (aq)

El perxido de hidrogeno difunde a travs de La membrana


ms interna, compuesta por acetato de celulosa, y se oxida
en el nodo de Pt:

H2O2 (aq) + 2OH- (aq) O2 (g) + 2 H2O (l) + 2 e-

El oxgeno acta como mediador, transportando electrones


al electrodo. La Figura 10.7. muestra un biosensor
amperomtrico para glucosa.

Electrodo de Electrodo de trabajo de carbn 1 recubierto


referencia Ag/AgCl con glucosa oxidasa y mediador

Muestra de
Contactos sangre
elctricos

Electrodo de trabajo de carbn 2 recubierto Malla


con mediador pero sin enzima hidrfila

Fig. 10.7. Biosensor amperomtrico para glucosa.

301
TEMA 10. Sensores electroanalticos

10.11. Bibliografa

D. HARVEY Qumica Analtica Moderna McGraw-


Hill/Interamericana Madrid (2002).

D. C. HARRIS. "Anlisis Qumico Cuantitativo" 3 Ed. Ed.


Revert S.A. Barcelona (2007).

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Articulo_Sensores_y_Bio
sensores_2085.pdf

302
La Qumica Analtica es una ciencia de medicin que utiliza mtodos
qumicos e instrumentales aplicables en muchos campos tecnolgicos para
obtener informacin de la composicin qumica de un material o muestra.

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