RESUMEN
La infeccin por Citomegalovirus (CMV) es considerada un problema de salud
pblica de suma gravedad cuando es adquirida durante el embarazo.
Citomegalovirus es la infeccin congnita ms frecuente, demostrado en el 1%
de recin nacidos en pases desarrollados. Es la primera causa de sordera y
alteraciones del desarrollo neurolgico infantil. Las vas congnita, oral y
sexual, las transfusiones sanguneas y los trasplantes de tejidos constituyen las
principales formas de transmisin del CMV.
INTRODUCCIN
El Citomegalovirus, es un virus ADN perteneciente a la subfamilia
Betaherpesviriniae, es uno de los miembros ms grandes de los Herpesvirus
(200 nm de dimetro) (1). CMV se ha detectado en varios fluidos corporales
incluyendo saliva, orina, leche, lgrimas, heces, secreciones vaginales y
cervicales, sangre y semen por lo que su transmisin puede producirse por
distintas vas. Adicionalmente la infeccin puede producirse por transfusiones
sanguneas y transplante de rganos (2,3).
Se estima que de los 4 millones de bebs que nacen en los Estados Unidos
cada ao, aproximadamente 1% estar infectado congnitamente por el CMV.
El 90% de los bebs con infeccin congnita estarn libres de sntomas, pero
el 10% restante pueden tener una o mltiples anormalidades.
Virologa
Los virus son entidades que poseen genoma de ADN o ARN. No poseen
estructura celular y procesos metablicos independientes, se replican
nicamente en clulas vivas. Los virus son partculas infecciosas que difieren
del resto de microorganismos por varias caractersticas: no tienen estructura
celular, contienen nicamente ADN o ARN y sus procesos metablicos son
dependientes de las clulas vivas del hospedador. Los virus son capaces de
infectar bacterias, plantas, animales y humanos.
Tamao
Estructura y clasificacin
Los virus son los agentes infecciosos de menor tamao, dentro de los que
poseen capacidad de replicacin. Se diferencian de otros microorganismos por:
o Poseer un menor tamao (10-300 nm).
o Tener un genoma compuesto por un solo tipo de cido nucleico (ARN o
ARN).
o Carecer de actividad metablica. Slo pueden multiplicarse y por tanto
cultivarse en clulas vivas, ya que no poseen mecanismos propios de
sntesis de protenas ni de produccin de energa, debiendo utilizar
obligatoriamente para su replicacin y metabolismo los sistemas
metablicos de la clula parasitada.
o No se cultivan en los medios utilizados para las bacterias.
o Son resistentes a los antimicrobianos habituales.
Bsicamente los virus estn constituidos por una estructura central formada por
cido nucleico, rodeada y protegida por una capa proteica, especfica para
cada tipo de virus, con capacidad antignica, llamada cpside, compuesta por
unidades estructurales o capsmeros.
cido nucleico
El cido nucleico es el soporte de la informacin gentica, de la capacidad de
replicacin y, por tanto, de la infecciosidad. Los virus presentan las siguientes
caractersticas:
Contienen un solo tipo de cido nucleico que puede ser ADN o ARN
Pueden estar constituidos por una sola cadena de cido nucleico o por
dos (bicatenario)
El cido nucleico es el soporte de la infecciosidad
Protenas
Constituyen cuantitativamente la fraccin ms importante de los virus (50-90 %)
y pueden contener segn su tamao y complejidad de 2 a 30 polipptidos
diferentes. Se pueden considerar en el virin:
Protenas internas
- Virus envueltos
Entran por fusin con la membrana plasmtica. Algunos
virus envueltos se fusionan directamente con la membrana
plasmtica. Por lo que los componentes internos del virin
son inmediatamente llevados al citoplasma celular.
Entada va endosomas en la superficie celular. Algunos
virus envueltos requieren de un pH cido para que ocurra
la fusin y no son capaces de fusionarse directamente con
la membrana celular. Estos virus acogidos o tomados
mediante invaginacin de la membrana en endosomas. A
medida que los endosomas se acidifican la actividad de
fusin, hasta ahora latente, de las protenas virales se
activa, y la membrana del virin se fusiona con la
membrana del endosoma. Esto resulta en el transporte de
los componentes internos del virus hacia el citoplasma de
la clula.
CITOMEGALOVIRUS
Huspedes normales
La colitis o la esofagitis por CMV pueden afectar hasta al 10% de los pacientes
aquejados de SIDA. El CMV tambin es responsable del fracaso de un gran
nmero de trasplantes de rin como consecuencia de la replicacin del virus
en el injerto tras su reactivacin en el rin trasplantado
DATOS DE LABORATORIO
Histologa
Cultivo
Serologa
Normalmente la seroconversin es un detector excelente de una infeccin
primaria por CMV. Los anticuerpos IgG anti-CMV indican infeccin pasada (y la
posibilidad de experimentar reactivacin). Los ttulos de anticuerpo IgM
especfico del CMV pueden ser muy elevados en los pacientes con SIDA. Sin
embargo, tambin pueden aparecer anticuerpos IgM especficos del CMV
durante su reactivacin, por lo que no es un indicador fiable de una infeccin
primaria (8).
ENZIMOINMUNOANLISIS
Tratamiento
Instrumentos:
FASE PREANALTICA
FASE ANALTICA
PRINCIPIO DE LA PRUEBA IMMUNOCOMB II CMV IGM (ANEXO 6-7)
Preparacin de la prueba:
Instrucciones de la prueba:
Un punto con una intensidad mayor que o igual a la del Control Positivo
indica la presencia de anticuerpos IgM anti-CMV en la muestra
Instrucciones de la prueba:
Validacin
A fin de confirmar el funcionamiento correcto de la prueba y demostrar que los
resultados son vlidos, deben cumplirse las siguientes tres condiciones:
El Control Positivo debe producir dos puntos en el diente del Peine.
El Control Negativo debe producir un punto superior (Control Interno). El
punto inferior no aparece o aparece muy tnuemente, sin afectar la
interpretacin de los resultados.
Cada muestra analizada debe producir un punto superior (Control
Interno).
Interpretacin Semicuantitativa por Lectura Visual
El nivel de IgG anti-CMV en cada muestra puede ser evaluado comparando la
intensidad del color del punto inferior en cada diente, con la escala de color del
CombScale suministrado con el kit. Esto se hace como sigue:
FASE POSTANALTICA
Poblacin de estudio
Lugar de Frecuenc Porcenta
procedencia
Cantn Machala ia
70 je
72%
Otros cantones de la Provincia
de El Oro 15 15%
Otras ciudades del 11 11%
pas
Per 2 2%
TOTAL 98 100%
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
GRFICO N 1
100%
80% 72%
60%
40%
20% 15%
11%
2%
0%
Cantn Machala Dems cantones Otras ciudades Per
de la Provinciadel pas
de El Oro
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
Frecuenc Porcenta
Prevalencia IgG e IgM anti- ia
2 je
2%
CMV
Prevalencia IgG anti-CMV 93 95%
TOTAL 95 97%
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital
teofilo davila
GRFICO N 2
100% 95% 97%
80%
60%
40%
20%
2%
0%
Prevalencia IgG e IgM anti- Prevalencia IgG anti-CMV TOTAL
CMV
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
Prevalen Prevalen
% %
Grupo Frecuen cia IgM cia IgG
Prevalenci Prevalenci
etario cia anti- anti-
a IgM anti- a IgG anti-
14 - 18 CMV CMV
aos 21 0 0% 21 100
19 - 24 %
aos 39 1 2,6 37 95
25 - 39 % %
aos 38 1 2,6 37 97
TOTAL 98 % %
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
GRFICO N 3
100% 100% 95% 97%
80%
60%
40%
20%
0% 2,6% 2,6%
0%
14 - 18 aos 19 - 24 aos 25 - 39 aos
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
Prevalen Prevalen
Edad % %
Frecuen cia IgM cia IgG
gestacio Prevalenci Prevalenci
cia anti- anti-
nal a IgM anti- a IgG anti-
4 - 12 CMV CMV
57 2 4% 54 95
seman
%
13as-24
19 0 0% 19 100
seman
%
25as- 37
22 0 0% 22 100
seman
%
TOTA
as 98
LFuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
GRFICO N
80%
60%
40%
20%
4%
0% 0%
0%
4 - 12 semanas 13 -24 semanas 25 - 37 semanas
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
Prevalen % Prevalen
%
Frecuen cia IgM Prevalenci cia IgG
Prevalenci
cia anti- a IgM anti- anti-
a IgG anti-
Pacient CMV CMV CMV
45 0 0 42 93
es
% %
Pacient
53 2 4 53 100
es
% %
TOTA 98
L
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
GRFICO N 5
100% 100%
93%
80%
60%
40%
20%
4%
0%
0%
Pacientes nulparas Pacientes multparas
% Prevalencia IgM anti-CMV % Prevalencia IgG anti-CMV
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo
davila Autor: David nieves
Prevalen Prevalen
% %
Aborto Frecuen cia IgM cia IgG
Prevalenci Prevalenci
s cia anti- anti-
a IgM anti- a IgG anti-
1 12 CMV
2 17 CMV
12 100%
aborto
2 %
abort 4 0 0 4 100%
os
3 %
abort 1 0 0 1 100%
os
TOTA 17 %
L Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
GRFICO N
6
80%
60%
40%
20%
17%
0%
0% 0%
Fuente: Hoja de registro del rea de consulta externa del hospital teofilo davila
Autor: David nieves
Un estudio realizado por Naessens y cols. (22) determin que de 7140 mujeres
embarazadas que tuvieron su parto en el Brussels University Hospital, en
Blgica, durante junio de 1996 hasta febrero de 2003, se encontr una
prevalencia de Citomegalovirus de 56%. Investigaciones indican una
asociacin directa de la infeccin por CMV con las condiciones socio-
econmicas de la poblacin en diferentes mbitos geogrficos, siendo las
poblaciones con menores recursos econmicos los ms afectados por la
infeccin (2,6,20). Resulta muy interesante este dato, pues al observar la
prevalencia de CMV en investigaciones hechas en naciones ms desarrolladas
como Francia y Blgica (53,1% y 56%) (20,22) son notablemente inferiores a
las encontradas en pases latinoamericanos como Brasil (95%), Venezuela
(96%), Mxico (97%), Costa Rica (95%) y Cuba (92,7%) (6,23,24,23), sin
embargo, estos porcentajes son muy similares a los encontrados en mujeres
gestantes que acudieron al rea de consulta externa del hospital teofilo davila
de la ciudad de machala, pues es de 97%.
11. Sapp JP, Eversole LR, Wysocki GP. Patologa oral y maxilofacial
contempornea. 2 Edicin. Elsevier Espaa. Madrid: 2005.
12. Behrman RE, Kliegman RM, Jenson HB. Nelson Tratado de Pediatria.
17 Edicin. Elsevier Espaa. Madrid: 2004.
25. Correa, C. B., Kour, V., Verdasquera, D., Martnez, P. A., Alvarez, A.,
Alemn, Y., Prez, L., Viera, J., Gonzlez, R., Prez, E., Moro, I.,
Navarro, M. A. and Melin, P. (2010), HCMV seroprevalence and
associated risk factors in pregnant women, Havana City, 2007 to 2008.
Prenatal Diagnosis, 30: 888892. doi: 10.1002/pd.2587
26. Tagawa, M., Minematsu, T., Masuzaki, H., Ishimaru, T. and Moriuchi, H.
(2010), Seroepidemiological survey of cytomegalovirus infection among
pregnant women in Nagasaki, Japan. Pediatrics International, 52: 459
462. doi: 10.1111/j.1442-200X.2009.03005.x
Lugar de procesamiento....ANEXO 1
Encuesta..ANEXO 2
Base de datos.....ANEXO 3
Consentimiento informado....ANEXO 4
Toma de muestra...ANEXO 5
Difusin de resultados..ANEXO 12
ANEXO
1
Instalaciones del Laboratorio
Clnico del rea de Salud No. 3
de Loja
Entrada al rea de
Salud No. 3 de Loja
Lugar de toma de muestra
Lugar donde se realizan los
diferentes anlisis
ANEXO 2
ENCUESTA
Cdigo Paciente: .
Nombre: .. HC:
Edad:
Lugar de procedencia: .
Lugar de residencia: .
Parejas sexuales: ..
Partos: .
Abortos:
Observaciones:
.
TOMA DE DATOS PERSONALES Y ENCUESTA
Al ingresar las pacientes al Laboratorio Clnico del rea de Salud No. 3 se les
solicit su permiso para realizar la encuesta, con el fin de recopilar datos para
realizar la investigacin de Prevalencia de Citomegalovirus en mujeres
gestantes.
ANEXO 3
Period Parejas
RESULTADOS
Cdi Ed Proceden Residen o de sexuale Part Abort
IgM IgG
go ad cia cia gestaci s os os
n (seman
1 23 Loja Loja 1 2 1 - Ausencia 4 U/ml
6
2 24 Loja Loja 1 1 3 - Ausencia 8 U/ml
2
3 24 Catamayo Loja 6 1 - - Ausencia 10 U/ml
4 22 Macar Loja 8 2 1 2 Ausencia 8 U/ml
5 32 Yanzatza Loja 6 6 1 1 Ausencia 8 U/ml
6 18 Espndola Loja 8 2 - 1 Ausencia 4 U/ml
7 24 Loja Loja 8 1 1 1 Ausencia 10 U/ml
8 28 Loja Cuenca 3 1 - - Ausencia 8 U/ml
4
9 19 Loja Loja 5 1 - - Ausencia 8 U/ml
10 16 Loja Loja 8 1 - - Ausencia 4 U/ml
11 16 Zapotillo Loja 4 1 - - Ausencia 4 U/ml
12 24 Loja Loja 3 1 - - Ausencia 10 U/ml
2
13 31 Loja Loja 1 1 3 - Ausencia 8 U/ml
0
14 21 Loja Loja 1 2 - - Ausencia 4 U/ml
6
15 32 Loja Loja 8 1 1 - Ausencia 2 U/ml
16 21 Loja Loja 9 1 - - Ausencia 2 U/ml
17 19 Loja Loja 8 1 - Ausencia 4 U/ml
18 19 Loja Loja 1 1 - Ausencia 1 U/ml
2
19 20 Loja Loja 5 1 - - AUSENCI AUSENC
A IA
20 28 Loja Loja 9 1 1 Ausencia 2 U/ml
21 19 Loja Loja 8 1 - - Ausencia 1 U/ml
22 22 Loja Loja 7 1 1 1 Ausencia 4 U/ml
23 22 Loja Loja 1 4 - - Ausencia 4 U/ml
2
24 19 Zamora Loja 5 3 - - Ausencia 8 U/ml
25 33 Loja Loja 3 1 3 - Ausencia 8 U/ml
5
26 18 Loja Loja 2 1 1 - Ausencia 1 U/ml
7
27 34 Catacocha Loja 2 1 4 - Ausencia 8 U/ml
1
28 33 Loja Loja 1 1 3 1 Ausencia 2 U/ml
7
29 21 Loja Loja 2 1 1 2 Ausencia 8 U/ml
4
30 29 Loja Loja 7 1 - - Ausencia 2 U/ml
31 21 Loja Loja 2 1 1 - Ausencia 8 U/ml
8
32 32 Caar Loja 5 2 - - AUSENCI AUSENC
A IA
33 39 Loja Loja 5 1 3 - Ausencia 10 U/ml
34 20 Quilanga Loja 3 1 - - Ausencia 4 U/ml
4
35 29 Loja Loja 1 1 1 - Ausencia 8 U/ml
8
36 28 Loja Loja 5 1 2 - Ausencia 4 U/ml
37 23 Zamora Loja 4 1 - - Ausencia 4 U/ml
38 14 Loja Loja 6 1 - - Ausencia 8 U/ml
39 20 Loja Loja 4 1 - - AUSENCI AUSENC
A IA
40 1 Loja Loja 1 3 - - Ausencia 4 U/ml
6 6
41 2 Machala Loja 8 1 1 2 Ausencia 8 U/ml
8
42 2 Loja Loja 3 1 1 - Ausencia 8 U/ml
4 2
43 2 Loja Loja 8 1 1 - Ausencia 8 U/ml
2 Sto.
44 2 Domin Loja 1 1 2 1 PRESENC 10 U/ml
6 go 2 IA
45 2 Loja Loja 9 1 - - Ausencia 4 U/ml
2
46 1 Loja Loja 6 1 - - Ausencia 10 U/ml
8
47 1 Loja Loja 4 2 - - Ausencia 10 U/ml
7
48 3 Loja Loja 1 1 3 - Ausencia 10 U/ml
0 1
49 2 Zamora Loja 6 1 1 - Ausencia 8 U/ml
3
50 2 Loja Loja 2 2 1 - Ausencia 8 U/ml
5 0
51 2 Loja Loja 1 3 2 - Ausencia 10 U/ml
8 2
52 2 Paltas Loja 5 1 - - Ausencia 8 U/ml
2
53 2 Loja Loja 1 1 2 1 Ausencia 10 U/ml
5 2
54 1 Loja Loja 3 1 - - Ausencia 10 U/ml
6 2
55 3 Catamayo Loja 9 2 4 3 Ausencia 10 U/ml
8
56 2 Macar Loja 3 1 2 - Ausencia 4 U/ml
7 4
57 1 Zumba Zumba 2 1 - - Ausencia 4 U/ml
6 0
58 1 Amaluza Loja 3 1 - - Ausencia 4 U/ml
7 0
59 2 Loja Loja 2 1 - - Ausencia 8 U/ml
0 8
60 2 Loja Loja 7 1 3 - Ausencia 8 U/ml
5
61 1 Loja Loja 2 1 - - Ausencia 10 U/ml
6 2
62 3 Loja Loja 8 2 2 1 Ausencia 4 U/ml
0
63 2 Loja Loja 1 1 - - Ausencia 2 U/ml
1 6
64 1 Zapotillo Loja 2 2 - - Ausencia 10 U/ml
8 0
65 2 Loja Loja 1 4 1 - Ausencia 8 U/ml
3 7
66 1 Loja Loja 5 1 - - Ausencia 4 U/ml
8
67 3 Zapotillo Loja 8 1 3 - Ausencia 10 U/ml
1
68 2 Loja Loja 3 1 2 - Ausencia 10 U/ml
8 5
69 1 Loja Loja 3 1 - - Ausencia 4 U/ml
6 0
70 3 Loja Loja 4 1 1 - Ausencia 10 U/ml
0
71 1 Suyo Loja 2 3 - - Ausencia 10 U/ml
8 (Per) 8
72 1 Loja Loja 5 1 - - Ausencia 1 U/ml
8
73 3 Cuenca Loja 7 1 1 - Ausencia 10 U/ml
1
74 3 Amaluza Loja 1 1 1 - Ausencia 8 U/ml
0 4
75 2 Loja Loja 3 2 - - Ausencia 10 U/ml
0 2
76 1 Cuenca Loja 9 1 1 - Ausencia 10 U/ml
9
77 3 Loja Loja 2 1 2 - Ausencia 8 U/ml
8 0
78 1 Loja Loja 1 1 - - Ausencia 4 U/ml
5 6
79 2 Piura Loja 4 2 2 - Ausencia 4 U/ml
8 (Per)
80 2 Loja Loja 3 1 - - Ausencia 2 U/ml
4 6
81 2 Loja Loja 3 2 1 1 Ausencia 2 U/ml
5 5
82 2 Loja Loja 8 1 3 - Ausencia 2 U/ml
3
83 2 Amaluza Loja 2 3 2 - Ausencia 1 U/ml
9 4
84 2 Loja Loja 3 1 - - Ausencia 2 U/ml
0 7
85 3 Loja Loja 1 1 2 1 Ausencia 10 U/ml
3 2
86 2 Loja Loja 8 3 1 - Ausencia 1 U/ml
5
87 2 Macar Loja 1 1 1 2 Ausencia 8 U/ml
7 6
88 3 Loja Loja 2 1 2 - Ausencia 2 U/ml
1 4
89 2 Loja Loja 1 1 1 1 Ausencia 10 U/ml
4 0
90 1 Los Ros Loja 4 1 - - Ausencia 4 U/ml
5
91 3 Loja Loja 6 1 2 1 Ausencia 8 U/ml
0
92 1 Loja Loja 3 1 1 - Ausencia 10 U/ml
9 2
93 2 Loja Loja 1 1 3 - Ausencia 8 U/ml
9 2
94 2 Loja Loja 2 1 - - Ausencia 10 U/ml
4 8
95 2 Loja Loja 3 1 1 - Ausencia 10 U/ml
4 7
96 2 Loja Loja 8 1 1 - PRESENC 8 U/ml
2 IA
97 1 Loja Loja 3 1 - - Ausencia 2 U/ml
6 2
98 1 Loja Machala 9 1 - - Ausencia 4 U/ml
7
ANEXO 4
Prevalencia de Citomegalovirus en mujeres gestantes que acuden al rea de consulta externa del hospital teofilo davila de la
ciudad de machala
Investigadores:
Lugar donde se realizar el estudio: consulta externa del hospital teofilo davila de la ciudad de machala
A usted se le est invitando a participar en este estudio de investigacin. Antes de decidir si participa o no, debe conocer y
comprender cada uno de los siguientes apartados. Este proceso se conoce como consentimiento informado. Sintase con absoluta
libertad para preguntar sobre cualquier aspecto que le ayude a aclarar sus dudas al respecto.
Una vez que haya comprendido el estudio y si usted desea participar, entonces se le pedir que firme esta forma de consentimiento.
En nuestro medio, la poblacin en riesgo, como mujeres gestantes y pacientes inmunosuprimidos, no conocen los riesgos de la patogenicidad del
Citomegalovirus (CMV), adems en nuestra localidad no contamos con estudio alguno que nos hable sobre la prevalencia de este virus. Estudios
realizados en diferentes puntos del mundo afirman que la prevalencia de CMV es mayor en pases en vas de desarrollo, dicha tesis no se ha podido
corroborar o invalidar en nuestra ciudad.
A usted se le est invitando a participar en un estudio de investigacin que tiene como objetivos
-Determinar la prevalencia de Citomegalovirus en mujeres gestantes que acuden al rea de consulta externa del hospital teofilo davila durante los
meses de noviembre y diciembre de 2015.
Con este estudio conocer si presenta anticuerpos IgM o IgG especficos para Citomegalovirus manera clara si usted. Este estu dio permitir establecer
la prevalencia de Citomegalovirus en mujeres embarazadas, lo que marcar una pauta para futuros estudios a realizarse sobre el tema en nuestra
ciudad.
En caso de aceptar participar en el estudio se le realizarn algunas preguntas sobre usted, y sus antecedentes mdicos, y se le realizar una extraccin
de sangre.
5. ACLARACIONES
-No habr ninguna consecuencia desfavorable para usted, en caso de no aceptar la invitacin.
Yo, _ _ __ he ledo y comprendido la informacin anterior y mis preguntas han sido respondidas de manera
satisfactoria. He sido informado y entiendo que los datos obtenidos en el estudio pueden ser publicados o difundidos con fines cientficos. Convengo
en participar en este estudio de investigacin.
_ _ _
_ __ _
Universidad Nacional
OBTENCIN DE LA
Carrera de Laboratorio MUESTRA
Clnico
Procedimiento:
Complicaciones
Desmayo: En caso de que la persona muestre signos de nerviosismo
o decaimiento, al realizarle la extraccin sangunea puede
desmayarse por lo que procederemos a lo siguiente:
o Recostar al paciente en un lugar cmodo, como una camilla
o Llevar una torunda de alcohol a su nariz y esperar una reaccin
o De no reaccionar el paciente, llamar inmediatamente a un mdico o
enfermera del hospital
o Esperar a que el paciente est totalmente restablecido para enviarlo
a su casa o de lo contrario que acuda a un mdico
TOMA DE MUESTRA
Se alist el material
necesario para realizar la
extraccin sangunea
Insert el Peine en los pocillos de la fila A, que contienen las muestras y los
controles, Se dej el Peine en la fila A por 30 minutos