Anlisis cuantitativo es el que tiene como objetivo determinar la

An
Leccin 16. INTRODUCCIN cantidad o proporcin en que se encuentran los analitos en un
material. Origina una respuesta numrica que est caracterizada
AL ANLISIS CUANTITATIVO. por la incertidumbre implcita en toda medida experimental.

Mtodos absolutos: Se relacionan directamente con patrones bsicos.

Ej.: Mtodos gravimtricos kg patrn
Anlisis cuantitativo: Conceptos bsicos.
estequiomtricos: Se relacionan con patrones de tipo
Mtodos estequiom
Propiedades analticas de inters. qumico-analtico que no contienen al analito
Ej.: Volumetras sustancias patrn que no contienen al
Trazabilidad. analito la determinacin se basa directamente en la relacin
estequiomtrica de la reaccin entre el valorante y el analito de la
Materiales de referencia. muestra.
Mtodos relativos: que precisan calibracin metodolgica de la
Calibracin instrumental y metodolgica. respuesta del instrumento de medida respecto a la concentracin
del componente de inters mediante patrones qumico-analticos
Validacin. que s contiene el mismo analito objeto posterior de determinacin.
Ej.: Mtodos instrumentales CALIBRACI
CALIBRACIN

Informacin
Informacin cuali
cuali oo cuantitativa
cuantitativa
Nivel
Nivel de
de exactitud
exactitud deseado
deseado PARMETROS DE CALIDAD DE UN
Nivel de precisin deseado
Nivel de precisin deseado MTODO ANALTICO
Informacin
Informacin requerida
requerida Rapidez
Rapidez
Muestra
Muestra Coste
Coste
Analitos
Analitos Supremos Bsicos Complementarios
Recursos
Recursos instrumentales
instrumentales
yy humanos
humanos
Coste
Coste Exactitud Lmite de deteccin Coste
Representatividad Sensibilidad Rapidez
Problema
Problema Precisin Seguridad
Analtico
Analtico
TRAZABILIDAD Selectividad
Robustez
Mtodo
Mtodo
Adecuado EXACTITUD
Adecuado
Lmite
Lmite de
de deteccin
deteccin Proximidad entre el resultado obtenido y el valor de referencia adecuado
Exactitud
Exactitud
Precisin
Precisin
Selectividad
Selectividad REPRESENTATIVIDAD
Robustez
Robustez
Requerimientos Propiedad relacionada con la generacin de resultados coherentes con
Requerimientos instrumentales
instrumentales
Tiempo las muestras recibidas en el laboratorio, el sistema en estudio y el
Tiempo anlisis
anlisis
Coste
Coste
problema analtico planteado.
 ROBUSTEZ o SOLIDEZ
LMITE DE DETECCIN Evala la influencia de pequeos cambios en las condiciones analticas sobre la
Mnima cantidad de analito que proporciona una seal significativamente fiabilidad del mtodo analtico.
diferente de la seal del blanco Se determina introduciendo pequeos cambios en el mtodo (por ejemplo, en
las condiciones analticas) y examinando las consecuencias (factores que originan
LMITE DE DETERMINACIN
las fluctuaciones o influencias sobre la seal analtica).
Mnima cantidad de analito capaz de ser determinada por un mtodo analtico con
una exactitud y precisin aceptables Se define como la capacidad que tiene un mtodo analtico para permanecer
relativamente insensible a ligeros cambios
en el procedimiento,
SENSIBILIDAD en la calidad de los reactivos o
Cambio que experimenta una determinada seal analtica por unidad de
en las condiciones experimentales
concentracin

SELECTIVIDAD
PRECISIN
Es una medida del grado de interferencia que producen los compuestos que
Dispersin de los valores obtenidos alrededor del valor medio o acompaan al analito en la muestra.
proximidad entre los resultados obtenidos por aplicacin del mismo
procedimiento experimental varias veces bajo condiciones predescritas.
COSTE, RAPIDEZ, SEGURIDAD
Repetibilidad
Caractersticas que tambin deben conocerse para hacer la seleccin de forma
Reproducibilidad
correcta.

TRAZABILIDAD
Se define de forma genrica como la aptitud de rastrear (conocer la
historia, aplicacin o localizacin de una entidad (producto, proceso,
servicio, organizacin) por medio de identificaciones registradas.
El trmino trazabilidad puede ser usado con tres enfoques principales:
TRAZABILIDAD
Aquella caracterstica de un resultado analtico que implica su
relacin inequvoca con estndares o materiales de referencia
apropiados a travs de una cadena ininterrumpida de
comparaciones en las que la calibracin juega un papel
preponderante

a) Si se refiere a un producto,
producto est relacionado con el origen de los Definicin y relacin de los
Resultado estndares entre s
materiales y de las piezas, la historia de su produccin y la distribucin y
localizacin del producto despus de que haya sido entregado o
distribuido.

b) Si se refiere a la calibraci
calibracin, se aplica a la relacin de los equipos de TRAZABILIDAD ESTNDARES
medida con los estndares nacionales o internacionales, con los
estndares primarios, con las constantes o propiedades fsicas bsicas o
con los materiales de referencia.

c) Si se refiere a la adquisici
adquisicin de datos,
datos se relaciona con los datos Instrumentos de
Calibracin
generados y los clculos utilizados. medida
 ESTANDARES DE REFERENCIA
PATRONES
Instituto Nacional de Normas y Tecnologa
(National Institute of Standards and Tecnology, NIST)
Farmacopea de los Estados Unidos
(United States Pharmacopeia)
MATERIAL DE REFERENCIA
(RM) (Reference Material)
MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO
(CRM) (Certified Reference Material)
MATERIAL ESTANDAR DE REFERENCIA (SRM)
(Standard Reference Material)
CALIBRACI
CALIBRACIN
El uso de estndares de medida apropiados es
fundamental en Anlisis Cuantitativo ya que sin
ellos no se podra medir ni comparar.
El objetivo de la calibracin
CALIBRACIN instrumental es garantizar el
INSTRUMENTAL
funcionamiento correcto del
instrumento empleado para la
cuantificacin ( ej. balanza,
bureta, espectrofotmetro,etc.)
La calibracin metodolgica
CALIBRACIN tiene como meta establecer
METODOLGICA una relacin clara e inequvoca
entre la respuesta instrumental
y la cantidad/concentracin del
analito.
MATERIAL DE REFERENCIA
material o sustancia, en el cual una o ms de sus propiedades estn
suficientemente bien establecidas para que sea usado en la
calibracin de un aparato, la estimacin de un mtodo de medicin
o para asignarles valores a los materiales
MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO
es un material en el que los valores de una o ms de sus
propiedades estn certificados por un procedimiento tcnicamente
vlido, bien sea que est acompaado de, o pueda obtenerse, un
certificado u otra documentacin emitida por un ente certificador.
MATERIAL ESTANDAR DE REFERENCIA
material emitido por la oficina de normas de Estados Unidos (U.S.
National Bureau of Standards, NBS) cuyo nombre fue cambiado a
Instituto Nacional de Normas y Tecnologa (National Institute for
Standards and Technology, NIST). Tienen propiedades fsicas o
qumicas especficas certificadas (son emitidos con certificados).
MTODOS DE CALIBRADO
En muchos tipos de anlisis qumicos se mide la respuesta
del procedimiento analtico a cantidades conocidas de
analito, y basndose en ellas se puede interpretar la
respuesta de una muestra de contenido desconocido
12
Implican la obtencin de una
10
funcin de calibrado que
8
define la respuesta Funcin de calibrado
6
equivalente a concentraciones 4
conocidas del componente 2
analizado. Una vez conocida 0
esta funcin, se utiliza para 0 1 2 3 4 5 6
determinar la concentracin a
partir de la seal instrumental Ajuste por mnimos cuadrados
obtenida.
 MTODO PATRN EXTERNO
Patrn Externo (directo) Comparacin de las seales de la muestra
con las correspondientes a las del calibrado
(disoluciones patrn)
Adicin patrn (adicin
Estndares de diferente concentracin del analito
estandar) (preparados artificialmente para que su matriz sea
semejante a la de la muestra real- El uso de
estnadates puros puede conducir a errores
sistemticos importantes).
Patrn Interno
Se someten al proceso los patrones y la
muestra de forma independiente.

En la determinacin de un analito (A) por un mtodo

instrumental se obtienen los siguientes datos de calibracin:

CA(ppm) 0 2 6 10 14 18
Seal 0,031 0,173 0,422 0,702 0,956 1,248

1.-Representar la curva de calibracin

2.-Calcular la concentracin M de A (PFA=207,2) en una
muestra cuya seal analtica es 0,532
3.-Calcular el limite de deteccin y el de cuantificacin
sabiendo que la desviacin estndar del blanco es s=0,0079

La relacin entre la seal y la concentracin de analito, se

denomina "recta de calibrado" y es vlida en el intervalo de
concentraciones ensayado.

La concentracin de analito en la muestra problema se

determina por interpolacin
 En la determinacin de un analito (A) por un mtodo
instrumental se obtienen los siguientes datos de calibracin:

CA(ppm) 0 2 6 10 14 18
Seal 0,031 0,173 0,422 0,702 0,956 1,248

1.-Representar la curva de calibracin

2.-Calcular la concentracin M de A (PFA=207,2) en una
muestra cuya seal analtica es 0,532
3.-Calcular el limite de deteccin y el de cuantificacin
sabiendo que la desviacin estndar del blanco es s=0,0079
1.-
1.-
1.2 2.-
2.- 0,532 = 0,067 ppm + 0,030
1.0
7,49 = ppm (mg/l)

0.8 M = (g/l) / PF M =7,49x10-3 / 207,2

Seal

0.6 mm == 0,067
0,067 M = 3,62 x 10-5
bb == 0,030
0,030
0.4
CC == 0,999
CC 0,999
3.-
3.- CLD = 3 sB/m
CLC = 10 sB /m
0.2

CLD = 0,354 ppm

Para eliminar los efectos de la matriz se trabaja sobre
0.0
0 5
ppm
10 15
CLC = 1,179 ppm la matriz real

ADICION PATR
PATRN (ADICI
(ADICIN EST
ESTNDAR) ADICION PATR
PATRN (ADICI
(ADICIN EST
ESTNDAR)
Se desea asegurar un comportamiento similar de
patrones y problema.
Muestras complejas o matrices difciles de reproducir
(alimentos, muestras biolgicas o medio ambientales)
Calibracin metodolgica "in situ.
PROCEDIMIENTO
-Consiste en preparar los patrones con la misma muestra
a analizar y aadir una cantidad conocida de la especie
qumica a determinar.

-A n alcuotas de la muestra real se la aaden

concentraciones crecientes, por ejemplo de 0 a 5
unidades arbitrarias, del estndar puro del analito.
Todas ellas contienen una concentracin de analito que
es la suma de la original (se busca) y la aadida
 -Se someten las n alcuotas de muestras
reales enriquecidas al proceso analtico, Siendo C= Cx + Cs Y
obtenindose una seal para cada alcuota.
Concentracin del patrn adicionado

-Se representan las seales en funcin de la Concentracin del problema

concentracin del estndar aadido. Se
obtiene una recta de calibrado paralela a la
que se obtendra con los estndares puros
Yx = Seal debida al problema
Y Cs
Ys = Seal debida al patrn Cx

-La seal sobre el eje de ordenadas es la que origina la muestra

original.

-La concentracin de analito en la muestra se obtiene por

extrapolacin de la recta de calibrado, su cruce con la
prolongacin del eje de abscisas proporciona el dato buscado.
La determinacin de Fe en vinos se realiza por AA usando el mtodo de la La determinacin de Fe en vinos se realiza por AA usando el mtodo de la
adicin patrn. Se aaden 10 ml de muestra y cantidades variables de una adicin patrn. Se aaden 10 ml de muestra y cantidades variables de una
disolucin de Fe patrn de 10 ppm enrasndose a 50 ml con agua desionizada disolucin de Fe patrn de 10 ppm enrasndose a 50 ml con agua desionizada
y midiendo la AA, obtenindose los siguientes datos: y midiendo la AA, obtenindose los siguientes datos:
Hay que pasarlos a ppm Hay que pasarlos a ppm
ml Fe 0 5 10 15 20 ml Fe 0 5 10 15 20
AA 0,040 0,062 0,081 0,102 0,135 AA 0,040 0,062 0,081 0,102 0,135

Calcular la ecuacin de la recta de regresin y la concentracin (ppm) de Fe Calcular la ecuacin de la recta de regresin y la concentracin (ppm) de Fe
en el vino. en el vino.
0.16 V.10 = 50 ppm 0 1 2 3 4
AA
0.14
0.12 y = b + mx
y = 0
x = -b / m
0.1
0.08
ppm = -0,038 / 0,023
ppm = 1,65
0.06
Vinicial Cinicial = Vfinal Cfinal
0.04 mm == 0,023
0,023
0.02 bb == 0,038
0,038 10 x ppm = 50 x 1,65
CC
CC = 0,994
= 0,994
0
-2 -1 0 1 2 3 4 5 R.-
R.- 8,26 ppm
ppm

MTODO DEL EST

ESTNDAR INTERNO
OBJETIVO:
-minimizar fluctuaciones instrumentales
-establecer referencias con fines cualitativos y cuantitativos.
Estndar o patrn interno diferente al de la calibracin convencional.
PROCEDIMIENTO
Supongamos una muestra que contiene el analito X que queremos determinar, el
procedimiento consiste en:
1.- Preparar mezclas conocidas del patrn interno (I) y de los patrones
del analito/os a determinar (X) para construir una curva patrn.

El patrn interno es una cantidad conocida de un compuesto o

elemento, no presente en la matriz de la muestra, que se
adiciona tanto a los estndares como a la muestra problema
 2.- Cuando una cantidad conocida de patrn se agrega a una muestra
problema, la curva de calibrado puede utilizarse para hallar la
concentracin del problema. Seal debida X
Seal debida I Y I
3.-Las fluctuaciones en la seal afectan por igual al analito y al patrn
pero no a la relacin. X

Concentracin X
Concentracin I

Caractersticas del patrn interno

-compatibilidad (p.e. solubilidad) con la muestra y el patrn
-caractersticas qumicas y fisico-qumicas similares al analito
-respuesta discriminada respecto del analito

Se determina mediante HPLC la concentracin de cido acetilsaliclico (AAS) y Cafena (CAF) Se determina mediante HPLC la concentracin de cido acetilsaliclico (AAS) y Cafena (CAF)
en comprimidos analgsicos usando cido saliclico (AS) como estndar interno. Para ello se en comprimidos analgsicos usando cido saliclico (AS) como estndar interno. Para ello se
preparan una serie de patrones con concentraciones conocidas de AAS y CAF, se les aaden preparan una serie de patrones con concentraciones conocidas de AAS y CAF, se les aaden
100 ml de metanol y 10 ml de una disolucin estndar de p.i. y se enrasan a 250 ml 100 ml de metanol y 10 ml de una disolucin estndar de p.i. y se enrasan a 250 ml
obtenindose los siguientes resultados obtenindose los siguientes resultados
Una muestra de un comprimido analgsico se Una muestra de un comprimido analgsico se
patrones AAS(mg) CAF(mg) HAAS/HAS HCAF/HAS patrones AAS(mg) CAF(mg) HAAS/HAS HCAF/HAS
coloca en un matraz de 250 ml, se disuelve en coloca en un matraz de 250 ml, se disuelve en
100 ml de metanol, se le aaden 10 ml del p.i. 100 ml de metanol, se le aaden 10 ml del p.i.
1 200 20 20,5 10,6 1 200 20 20,5 10,6
y se filtra. El anlisis de esta muestra da una y se filtra. El anlisis de esta muestra da una
2 250 40 25,1 23,0 relacin de alturas de picos de 23,2 para AAS 2 250 40 25,1 23,0 relacin de alturas de picos de 23,2 para AAS
y 19,7 para CAF. Calcular los mg de AAS y y 19,7 para CAF. Calcular los mg de AAS y
3 300 60 30,9 36,8 CAF en el comprimido 3 300 60 30,9 36,8 CAF en el comprimido

HAAS/H AS m = 0,104 HCAF/H AS m = 0,655

b = -0,5 b = -2,73
CC = 0,998 CC = 0,999

mg AAS mg CAF
y=mx + b y=mx + b
23,2 = 0,104 x -0,5 17,9 = 0,655 x -2,73
x = 288 mg / comprimido x = 31,5 mg / comprimido