Anda di halaman 1dari 13

Nama : Putu Rina Widhiasih

NIM : P07134014002
Semester : V (lima)

TUBEX TES

Tanggal praktikum : Rabu, 21 September 2016

Materi praktikum : TUBEX TES

I. TUJUAN

Untuk mendeteksi antibodi IgM pada serum pasien terhadap antigen Salmonella Typhii
O9 Lipopolisakarida dan untuk membantu menegakkan diagnosis terhadap demam tifoid akut

II. METODE

Inhibition Magnetic Binding Immunoassay

III. PRINSIP
Tubex TF mendeteksi antibodi anti-O9 pada sampel serum dengan mengukur
kemampuannya dalam menghambat reaksi antara antigen yang dilapisi reagen cokelat dan
antibodi yang dilapisi reagen biru. Tingkat penghambatannya sebanding dengan konsentrasi
antibodi anti-O9 dalam sampel. Pemisahannya diaktifkan oleh gaya magnet. Hasil dibaca secara
visual terhadap skala warna.

IV. DASAR TEORI

Tifoid dan paratifoid (secara kolektif disebut sebagai demam enterik) disebabkan oleh
Salmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi) dan serovar Paratyphi A, B, C. Demam enterik
menyebabkan morbiditas dan mortalitas yang tinggi di seluruh dunia. Mayoritas kasus demam
enterik yang disebabkan oleh S. Typhi, dengan sekitar 22 juta kasus demam tifoid terjadi setiap
tahun, yang menghasilkan lebih dari 100.000 kematian di seluruh dunia setiap tahun. Di daerah
endemis, beban tertinggi pada anak-anak. Insiden demam tifoid yang menginfeksi warga di
Dhaka, Bangladesh adalah sekitar 2,0 / 1000 orang per tahun dengan insiden yang lebih tinggi
ditemukan pada anak usia <5 tahun (10,5 / 1.000 orang per tahun) dari pada orang yang lebih tua
(0,9 / 1000 orang per tahun). diagnosis klinis demam sering enterik sulit karena sifatnya non-
spesifik (non-lokalisasi penyakit demam). BMC Res Notes. 2015
Demam tifoid adalah penyakit demam berkepanjangan sistemik yang disebabkan oleh
serotipe Salmonella tertentu termasuk Salmonella typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B dan
makhluk S. paratyphi C. Manusia adalah satu-satunya tuan rumah reservoir untuk demam tifoid,
dan penyakit ini ditularkan oleh air yang terkontaminasi dengan tinja manusia dan makanan di
daerah endemik terutama dengan menangani makanan operator. Demam tifoid menjadi masalah
kesehatan utama di negara-negara berkembang. Kurangnya pasokan air minum yang aman dan
bersih serta pembuangan limbah yang tidak ditangani dengan baik adalah alasan utamanya.
(BMC Res Notes.2014)
Berbagai tes aglutinasi telah dikembangkan, metode Widal adalah yang tertua dan tetap yang
paling banyak digunakan. Tes ini pertama kali diperkenalkan oleh F. Widal pada tahun 1896
dan didasarkan pada serum makroskopik terlihat reaksi aglutinasi antara S. typhi
lipopolisakarida O antigen somatik (TO) dan antigen flagellar H (TH). Pemeriksaan widal
ditujukan untuk mendeteksi adanya antibodi (didalam darah) terhadap antigen kuman
Salmonella typhi / paratyphi (reagen). Sebagai uji cepat (rapit test) hasilnya dapat segera
diketahui. Hasil positif dinyatakan dengan adanya aglutinasi. Karena itu antibodi jenis ini
dikenal sebagai Febrile agglutinin. Hasil uji ini dipengaruhi oleh banyak faktor sehingga
dapat memberikan hasil positif palsu atau negatif palsu. (J Clin Diagn Res.2015)

Diagnosis pasti bergantung pada pemeriksaan laboratorium yang baik. Untuk banyak
penyakit, diagnosis penyakit dilakukan dengan cara Isolasi dan identifikasi agen infeksi dalam
media kultur, dan deteksi antigen dari agen infeksi, atau antibodi yang diinduksi oleh antigen ini,
di serum atau cairan tubuh lain dari pasien yang terinfeksi. PLoS One. 2012
Diagnosis handal dan cepat dari bakteri sangat penting untuk konfirmasi dari semua
kasus yang diduga terinfeksi demam tifoid. Selain tes Typhidot, Rapid tes untuk diagnosis
demam tifoid, yaitu Tubex. Tes ini tersedia secara komersial berdasarkan pemisahan partikel
untuk mendeteksi imunoglobulin M diarahkan Salmonella Typhi O9 lipopolisakarida di sera.
BMC Infect Dis. 2011
V. ALAT DAN BAHAN
a. Alat

Mikropipet

Yellow Tip
Skala Warna
Tape Sealing
Reaction Well Strips
b. Bahan
Serum atau plasma heparin, tidak dianjurkan dengan antikoagulan EDTA dan
citrate. Sampel tidak boleh ikterik, lipemik, hemolisis, dan kontaminasi bakteri.
(bila tidak segera diperiksa maka serum dapat disimpan pada suhu 2-8 oC sampai
24 jam atau -20 oC sampai 4 minggu
Reagen Biru (antibodi yang dilapisi dengan protein buffer pH 8,2)
Reagen Cokelat (antigen yang dilapisi dengan protein buffer pH 8,2)
Kontrol Positif (Control antibodi yang dilapisi dengan protein buffer pH 8,2)
Kontrol Negatif (Protein Buffer pH 8,2)

VI. CARA KERJA


1. Alat dan bahan di siapkan pada meja praktikum
2. Kondisikan reagen dan serum dalam suhu ruang 30 menit
3. Homogenkan reagen sebelum digunakan
4. Siapkan 3 well, well pertama sebagai tes well, yang kedua sebagai kontrol positif
dan yang ketiga sebagai kontrol negatif
5. Dipipet 45 l reagen coklat kedalam 3 well tersebut
6. Pada Well 1 tambahakn 45 l sampel, pada well 2 tambahkan 45 l kontrol positif
dan pada well 3 tambahakn 45 l kontrol negatif
7. Homogenkan dengan menggunakan mikropipet baru 5-10 kali lalu inkubasi selama 2
menit
8. Tambahkan 90 l reagen biru pada 3 well tersebut
9. Tutup well dengan tape sealing
10. Goyangkan dengan posisi horizontal selama 2 menit
11. Inkubasi selama 5 menit diatas skala warna, setelah terjadi pemisahan, bandingkan
supernatan dengan skala warnanya dan catat skornya

VII. INTERPRETASI HASIL


Bandingkan warna supernatan dengan skala warna baru beri skor dari 0(merah muda) 10(biru
jelas)
Skor Interpretasi Hasil
0-2 Negatif (-)
2-4 Inconclusive Skor
4-10 Positif (+)

VIII. HASIL PENGAMATAN

Identitas Probandus

Nama : I Nyoman Ariasa

Jenis Kelamin : Laki-laki

Kualitatif

AO BO CO DO
- - - -
AH BH CH DH
+ + - -

Semi Kuantitatif

Volume Serum
Antigen Titer
10 l 5 l
Salmonella Paratyphi AH + - 1/160
Salmonella Paratyphi BH + + 1/320

Nb : + = adanya aglutinasi

- = tidak adanya aglutinasi

Reaksi Antigen-
antibodi
Salmonella
paratyphi O

Reaksi Antigen-
antibodi
Salmonella
paratyphi H
Terbentuknya
Tidak terbentuknya
Aglutinasi ditandai
Aglutinasi
gumpalan seperti
pasir

IX. PEMBAHASAN
Demam tifoid disebabkan oleh bakteri Salmonella typhi atau Salmonella paratyphi dari
Genus Salmonella. Bakteri ini berbentuk batang, gram negatip, tidak membentuk spora, motil,
berkapsul dan mempunyai flagella (bergerak dengan rambut getar). Bakteri ini dapat hidup
sampai beberapa minggu di alam bebas seperti di dalam air, es, sampah dan debu. Bakteri ini
dapat mati dengan pemanasan (suhu 60 0C) selama 15 20 menit, pasteurisasi, pendidihan dan
khlorinisasi. Salmonella typhi mempunyai 3 macam antigen, (Clin Immunol.2011) yaitu :
a. Aglutinin O
Antigen O (Antigen somatik), yaitu terletak pada lapisan luar dari tubuh kuman. Bagian
ini mempunyai struktur kimia lipopolisakarida atau disebut juga endotoksin. (PLoS One.2016)
b. Aglutinin H (flageller)
Antigen H (Antigen Flagella), yang terletak pada flagella, fimbriae atau pili dari kuman.
(J Clin Microbiol.2011)
c. Aglutinin Vi (Envelop)
Antigen Vi yang terletak pada kapsul (envelope) dari kuman yang dapat melindungi
kuman terhadap fagositosis. (PLoS One.2016)

Demam enterik dibagi menjadi 2, yaitu demam tifoid dan demam paratifoid (tipe A, B
atau C). demam tifoid menginfeksi sekitar 2 juta orang per tahun sementara demam paratifoid A,
yang dibedakan secara klinis dari tifus, baru-baru ini muncul dan bahayanya hampir sama
dengan demam enterik. Penyakit ini disebabkan oleh berbagai anggota keluarga Salmonella.
Sebenarnya ada lebih dari 2.000 anggota atau serotipe Salmonella, yang diidentifikasi oleh
permukaan "O" dan antigen "H" ditemukan dalam lipopolisakarida (LPS) dan flagela dari
organisme tersebut. Serotipe dengan antigen umum "O" membentuk serogrup. Sementara O9
yang dipasangkan dengan antigen O12 struktural ditemukan di serogrup D, yang terdiri dari
Salmonella enterica serovar Typhi (S. Typhi) yang menjadi penyebab demam tifoid, dan
beberapa anggota lain yang tidak menyebabkan tifus tetapi dapat menyebabkan penyakit usus
gastroenteritis (umumnya dikenal sebagai keracunan makanan). Dari serotipe yang menyebabkan
demam paratifoid, O2 dan O12 ditemukan di S. Paratyphi A, O4 dan O12 di S. Paratyphi B,
sementara O6 dan O7 ditanggung oleh S. Paratyphi C. Dengan demikian, O12 adalah umum
untuk S. Typhi, S. Paratyphi A dan S. Paratyphi B. Semua serotipe lain tidak menyebabkan
demam enterik tapi gastroenteritis. Baru-baru ini, bagaimanapun, beberapa serotipe ini, terutama
S. Typhimurium (O4, O12) dan S. enteritidis (O9, O12), ditemukan menyerang aliran darah di
Afrika sub-Sahara yang menyebabkan penyakit demam parah baru yang disebut nontyphoidal
salmonellosis (NTS). PLoS One. 2012.

Gejala demam pada umumnya adalah sakit kepala dan kehilangan nafsu makan.
Sementara gejala umum jika pasien positif tipus. Gejala mutlak adalah demam, sakit kepala,
kehilangan nafsu makan panas dingin, ketidaknyamanan perut, mialgia, muntah, sembelit,
ketelitian, diare, dan dysuria. Maka dari itu antara demam tipus atau thypoid susah dibedakan
dengan demam pada umumnya. Diagnosis yang bisa dilakukan untuk mendeteksi bakteri ini
adalah tanda-tanda dan gejala klinis, tes serologi, kultur bakteri, deteksi antigen dan amplifikasi
DNA. Isolasi agen etiologi Salmonella enterica (serovar typhi) dari kultur sumsum tulang adalah
standar yang ideal digunakan untuk mendeteksi deman thypoid itu sendiri karena kita tahu jika
menggunakan tes kultur darah maka kita dapat langusung mengetahui adanya bakteri salmonella
sehingga kita dapat langsung mendeteksi bahwa itu merupakan demam thypoid. (BMC Infect
Dis.2015).

The TUBEX TF adalah immunoassay kompetitif yang mendeteksi adanya


antibodi Typhi anti-09Salmonella enterica serovar dalam serum pasien dengan
menilai kemampuan mereka untuk menghambat reaksi antara antigen dan antibodi
dalam reagen. Tingkat inhibisi sebanding dengan konsentrasi antibodi anti-
09Salmonella dalam sampel. Metode khusus mendeteksi antibodi IgM terhadap
antigen lipopolisakarida Salmonella enterica serovar Typhi 09. BMC Res Notes. 2015

Untuk pemeriksaan kultur Salmonella typhi dapat diisolasi dari darah, urine, tinja dan
sumsum tulang tetapi tes ini memakan waktu 2-3 hari sehingga diagnosis tertunda dan lama. Tes
serologis berdasarkan deteksi antibodi telah digunakan sebagai alternatif untuk kultur darah
dalam diagnosis demam tifoid. Paling banyak digunakan uji serologi adalah tes widal yang
mendeteksi agglutinasi antibodi O dan H antigen salmonella typhi. Banyak tes komersial yang
mendeteksi keberadaan Salmonella enterica serovar typhi antigen / antibodi telah dikembangkan
untuk diagnosis dini yaitu tes Typhidot (dot enzim Immunosorbent Assay) yang mendeteksi
antibodi IgM dan IgG terhadap antigen tifoid. J Clin Diagn Res. 2015

Uji Widal adalah suatu reaksi aglutinasi antara antigen dan antibodi (aglutinin). Tes Widal ini
memiliki sensitivitas 75%, spesifisitas 98%. Aglutinin yang spesifik terhadap Salmonella typhi
terdapat dalam serum penderita demam tifoid, pada orang yang pernah tertular Salmonella typhi
dan pada orang yang pernah mendapatkan vaksin demam tifoid. Antigen yang digunakan pada
uij Widal adalah suspensi Salmonella typhi yang sudah dimatikan dan diolah di laboratorium.
Tujuan dari uji Widal adalah untuk menentukan adanya aglutinin dalam serum penderita yang
diduga menderita demam tifoid. Dari ketiga aglutinin (aglutinin O, H, dan Vi), hanya aglutinin O
dan H yang ditentukan titernya untuk diagnosis. Semakin tinggi titer aglutininnya, semakin besar
pula kemungkinan didiagnosis sebagai penderita demam tifoid. Pada infeksi yang aktif, titer
aglutinin akan meningkat pada pemeriksaan ulang yang dilakukan selang waktu paling sedikit 5
hari. Peningkatan titer aglutinin empat kali lipat selama 2 sampai 3 minggu untuk memastikan
diagnosis demam tifoid. Uji Widal ini hanya untuk diagnosis dini atau diagnosis penunjang untuk
memastikan tetap menggunakan tes isolasi bakteri kultur darah. Diagnosis Demam Tifoid /
Paratifoid dinyatakan bila a/titer O = 1/160. Titer O meningkat setelah akhir minggu.(PLoS
One.2015)

Berbagai tes aglutinasi telah dikembangkan, metode Widal adalah yang tertua dan tetap yang
paling banyak digunakan. Tes ini pertama kali diperkenalkan oleh F. Widal pada tahun 1896
dan didasarkan pada serum makroskopik terlihat reaksi aglutinasi antara S. typhi
lipopolisakarida O antigen somatik (TO) dan antigen flagellar H (TH). Pemeriksaan widal
ditujukan untuk mendeteksi adanya antibodi (didalam darah) terhadap antigen kuman
Salmonella typhi / paratyphi (reagen). Sebagai uji cepat (rapit test) hasilnya dapat segera
diketahui. Hasil positif dinyatakan dengan adanya aglutinasi. Karena itu antibodi jenis ini
dikenal sebagai Febrile agglutinin. Hasil uji ini dipengaruhi oleh banyak faktor sehingga
dapat memberikan hasil positif palsu atau negatif palsu. (J Clin Diagn Res.2015)
Pada praktikum kali ini, hal yang perlu diperhatikan adalah setelah penetesan serum
dilanjutkan penetesan reagen yang diteteskan disebelah serum, hidari meneteskan reagen diatas
serum untuk mencegah reaksi atau aglutinasi lebih cepat sehingga saat membaca hasil tersebut
akan lebih dari 1 menit karena pembacaan lebih dari 1 menit menyebabkan hasil positif palsu.
Lakukan penghomongenan dengan lidi sebagai pengaduk dan usahakan saat mengaduk
memenuhi 1 lingkaran agar memudahkan dalam interpretasi hasil dan goyangkan selama 1 menit
lalu dibaca. Identitas probandus pada praktikum kali ini bernama I Nyoman Ariasa dengan jenis
kelamin laki-laki, dimana hasilnya adalah positif pada antigen Salmonella Paratyphi AH dan BH
dengan titer untuk AH adalah 1/160 dan BH adalah 1/320. Dapat diartikan probandus memiliki
antibodi terhadap bakteri Salmonella ini.

Namun kelemahan dari diagnosis kultur darah adalah durasi waktu 3 hari untuk diagnosis
sehingga terjadi penundaan pengobatan dan kehilangan peran sebagai diagnosis dini, selain itu
harga untuk tes ini sangat mahal dan jika menggunakan antibiotik sebelum pemeriksaan akan
menyebabkan hasil negatif palsu. Ada pula pemeriksaan yang memiliki sensitifitas dan spesifik
yang lebih baik dibanding tes Widal yaitu Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) yang
berdasarkan akan IgM dan IgG dan yang terakhir terdapat pemeriksaan Tubex TF. Tes Widal
sampai saat ini masih aktif digunakan untuk deteksi dini demam thypoid ini karena relatif lebih
murah, mudah dilakukan dan membutuhkan pelatihan yang minimal dan peralatan. Untuk
diagnosis demam thypoid ini diperlukan titer Salmonella typhi anti O adalah > 1:180 sementara
itu > 1: 160 untuk anti H. (BMC Infect Dis.2015)

Hasil positif palsu dapat berhubungan dengan antibodi bereaksi silang dari serum pasien
demam selain demam tifoid, adanya vaksinasi, mempunyai riwayat penyakit tifus sebelumnya
penyakit Tifus, C. neoformance meningitis, gangguan imunologi dan penyakit hati kronis. Hasil
negatif palsu karena darah dikumpulkan terlalu dini dalam proses penyakit, atau beban bakteri
diinokulasi tidak memadai untuk menginduksi produksi antibody. Sebelumnya telah mendapat
perawatan antibiotik juga dapat menyebabkan negatif tes Widal aglutinasi. (BMC Res Notes.
2014)
Nilai tes Widal tergantung pada standarisasi dan pemeliharaan antigen untuk
menghasilkan hasil yang konsisten. Mereka juga menyebutkan bahwa bahkan sejak 1936 ketika
Welch menyatakan bahwa tidak ada komposisi dan standarisasi antigen tes Widal yang
digunakan sudah sesuai, dan dengan demikian tidak mungkin bahwa setiap akan dikembangkan
akan menurunkan validitas isolasi agen etiologi. Namun , lebih dari 70 tahun setelah Welch
menerbitkan makalahnya, masalah ketidakpekaan dan non-kekhususan antigen Widal terus
terjadi yang menyatakan bahwa agglutinin H kurang sensitif tapi lebih spesifik dari agglutinin O
dan menghasilkan nilai prediksi positif yang lebih baik. (Ann Clin Microbiol Antimicrob.2011)

Maka dari itu direkomendasi untuk

- Sebuah upaya harus dilakukan untuk membangun sebuah protokol untuk standarisasi
merek Widal yang berbeda tersedia secara komersial untuk memastikan hasil yang
konsisten dengan merek yang berbeda.
- Sampai pencapaian standarisasi ini, kami merekomendasikan penggunaan ganda dua
merek Widal untuk meningkatkan sensitivitas dan spesifisitas tes, pertama dengan
skrining serum dengan merek yang sangat sensitif dan kedua dengan menelusuri kasus
positif palsu dengan menguji serum positif dalam pertama pengujian oleh merek yang
sangat spesifik.
- Jika hanya satu merek yang akan digunakan, nilai titernya dari merek ini harus ditentukan
dengan populasi masyarakat. Misalnya diIndonesia untuk mendiagnosis demam thypoid
diperlukan titer >1/80 akan berbeda dengan Negara lainnya, maka harus ditetapkan nilai
standarnya pada tiap daerah
- Sebaiknya menggunakan serum pada fase akut untuk mendiagnosa kasus demam tifoid
dan tidak bergantung pada peningkatan 4 kali lipat dalam titer antibodi.
(Ann Clin Microbiol Antimicrob.2011)

X. KESIMPULAN

Dari hasil praktikum pemeriksaan Widal pada serum pasien atas nama I Nyoman Ariasa,
jenis kelamin laki-laki didapatkan hasil titer antibodi :

Salmonella typhi O : Negatif (-)

Salmonella paratyphi AO : Negatif (-)


Salmonella paratyphi BO : Negatif (-)

Salmonella paratyphi CO : Negatif (-)

Salmonella typhi H : Negatif (-)

Salmonella paratyphi AH : Positif (+) 1/160

Salmonella paratyphi BH : Positif (+) 1/320

Salmonella paratyphi CH : Negatif (-)


DAFTAR PUSTAKA

Ann Clin Microbiol Antimicrob.2011.The dilemma of widal test - which brand to use? a study of
four different widal brands: a cross sectional comparative study.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3050682/.[diakses 19 Maret 2016 10.59]

BMC Infect Dis.2015.Evaluation of sensitivity and specificity of ELISA against Widal test for
typhoid diagnosis in endemic population of Kathmandu.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4647669/.[diakses 19 Maret 2016 11.04]

BMC Res Notes.2014.A comparative study of Widal test with blood culture in the diagnosis of
typhoid fever in febrile patients.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4177418/.[diakses 19 Maret 2016 11.23]

Clin Immunol. 2011 .Oral priming with Salmonella Typhi vaccine strain CVD 909 followed by
parenteral boost with the S. Typhi Vi capsular polysaccharide vaccine induces
CD27+ IgDS. Typhi specific IgA and IgG B memory cells in humans.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3035995/.[diakses 19 Maret 2016 12.01]

J Clin Diagn Res.2015.Comparative Evaluation of Tubex TF (Inhibition Magnetic Binding


Immunoassay) for Typhoid Fever in Endemic Area.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4668408/.[diakses 19 Maret 2016 10.30]

J Clin Microbiol. 2011 .Molecular Determination of H Antigens of Salmonella by Use of a


Microsphere-Based Liquid Array.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3043481/.[diakses 19 Maret 2016 09.02]
PLoS One.2015.A Meta-Analysis of Typhoid Diagnostic Accuracy Studies: A Recommendation
to Adopt a Standardized Composite Reference.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4643909/.[diakses 19 Maret 2016 10.23]

PLoS One.2016. Differential Killing of Salmonella enterica Serovar Typhi by Antibodies


Targeting Vi and Lipopolysaccharide O:9 Antigen.[online].tersedia :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4712142/.[diakses 19 Maret 2016 09.34]