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LABORATORIO DE BIOLOGA
GUA 2: EL MICROSCOPIO Y SUS APLICACIONES

MICROSCOPIO
El microscopio compuesto es un instrumento ptico que se emplea para aumentar las imgenes de
objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres
sistemas:
El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes
que permiten el movimiento para el enfoque.
El sistema ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el
aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas
El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan
la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio.

OBJETIVOS

Al final de la prctica, el estudiante estar en capacidad de identificar cada una de las partes del
microscopio y el estereoscopio adems de conocer su funcin; utilizarlo correctamente, describir el tipo
de imagen que proporciona dicho instrumento y conocer los cuidados que requiere.

Describir la imagen obtenida y mirar un objeto a travs de una gota de agua, y compararla con la
imagen obtenida al mirar un objeto en el microscopio compuesto y el estereoscopio.

Comparar la estructura de un microscopio simple con la de un microscopio compuesto,

describiendo la importancia de cada uno de ellos en la investigacin.

Identificar algunas caractersticas de la ptica del microscopio y del estereoscopio como son: poder
de ampliacin, poder de definicin, capacidad de resolucin, etc.

Explicar la forma de utilizar las lminas portaobjetos y lminas cubreobjetos con sus respectivas
funciones en las observaciones con el microscopio.

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MATERIALES
Agua destilada Microscopio Estereoscopio
Agua del lago y/o humedal Tira de papel impreso: peridico y otro de
Algodn, hilos mejor calidad
Papa Trozos de diferentes telas (fibra natural y
Harina de trigo fibra sinttica
Harina de maz Granos de polen
Hojas de Elodea Baja lenguas madera
Lminas portaobjetos y lminas
cubreobjetos
Lugol
Azul de metileno diluida en proporcin 1:3
Laminas portaobjetos con rayones.
Papel milimetrado

PROCEDIMIENTO

PARTE 1: IDENTIFICACIN DE LAS PARTES DEL MICROSCOPIO:

Para usar el microscopio apropiadamente, primero se debe familiarizar con este instrumento que es
delicado y costoso. Conserve presentes las siguientes precauciones:
Siempre transporte el microscopio en posicin vertical.
Use una mano para agarrar el brazo y otra para sujetar la base.
Mientras no se est utilizando el microscopio, el objetivo de menor aumento objetivo aro - color rojo)
debe estar en la posicin de visin.

Actividad:

1. Identifique el sistema mecnico: base, revlver, platina, carro, tornillo macro y micromtrico,
pinza.
2. Identifique el sistema ptico del microscopio, familiarizndose con la localizacin y funcin de
cada una de las partes: Objetivos (desde 10X hasta 100X) y oculares. En los objetivos hay
informacin inscrita importante como el aumento, apertura mecnica, longitud del tubo en mm y
grosor mximo de cubraobjetos en mm.
3. Identifique el sistema de iluminacin: condensador, diafragma, fuente de luz.

El poder de resolucin depende de tres factores:

La apertura angular (): cuyo valor ptimo corresponde al valor del ngulo de luz que produce un
cono del dimetro del objetivo. Si el ngulo es pequeo, la resolucin es pobre. Una de las
funciones del condensador es producir el ngulo ideal del cono de luz.
Indice de refraccin (n): el medio atravesado por la luz, afecta la forma del cono de luz y su
resolucin. El aire tiene un ndice de refraccin n = 1, el aceite de 1.5 y es usado para incrementar
la resolucin del microscopio, al aumentar el ngulo del cono de luz () que pasa al objetivo.
Longitud de onda de la luz (): a menor longitud de onda de la luz, mayor es la resolucin del
objetivo. El valor de puede cambiarse con filtros de colores.

Altibajos: las dimensiones del microscopio

Para poder observar muestras ntidas hay que coordinar la apertura de diafragma. Si el diafragma esta
demasiado abierto la luz no permitir distinguir los detalles. Si se cierra el diafragma se podrn ver mas
los detalles.

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Coloque un portaobjetos rayado. Observe a menor aumento y con diafragma totalmente abierto.
Luego cierre el diafragma y observe. Compara resultados.

Ahora de lo que se observa que est arriba y que abajo?

Utilice objetivo de menor aumento para enfocar la muestra de tela y luego observe a mayor aumento.
Observe la disposicin espacial de los hilos que se entrecruzan. Luego enfoque uno de los hilos
elevando la platina lentamente. Si eleva mas la platina enfoca niveles bajos de la muestra. Observe el
algodn y el hilo y realice observaciones bajando y subiendo la platina.

Observacin de diferentes objetos (tela, algodn, hilo).

Extienda directamente la tela sobre la platina y enfoque con el aumento ms pequeo; ilumine bien.
Observe las hebras que forman la trama.
Compare las hebras y la trama de diferentes telas.

PARTE 2. MANEJO DEL MICROSCOPIO

OBJETIVOS

Usar correctamente el microscopio.

Aprender la posicin apropiada de las muestras y ajuste del microscopio para uso ptimo.
Calcular el aumento de una muestra.
Definir Resolucin.

PROCEDIMIENTO

El mundo patas arriba

Para obtener el mximo rendimiento del microscopio, se debe ajustar la iluminacin y enfocar
apropiadamente. NUNCA toque los lentes con los dedos.

Ajuste la distancia entre los dos oculares, con la de sus ojos. Cuando el ajuste es correcto, ver un
campo nico redondo.
Mueva el revlver hasta que el objetivo de exploracin (4X) est perpendicular a la platina; se oye
un clic cuando el objetivo est colocado apropiadamente en su posicin.
Encienda el interruptor de luz y ajuste la iluminacin. Con objetivos de 4X y 10X, los lentes
superiores del condensador deben estar 5 mm debajo del portaobjetos, pero usando objetivos de
mayor aumento, el condensador debe estar ms arriba. El diafragma tambin debe ser ajustado
para conseguir un balance apropiado entre iluminacin y contraste.

Enfoque de la muestra:
Sobre la platina, que debe estar completamente abajo, coloque un montaje hmedo de la tira de
papel peridico, cubierta con laminilla.
Observe por el ocular y al mismo tiempo utilice el tornillo macromtrico para SUBIR lentamente
la platina, hasta que localice la imagen del objeto; mueva ahora lentamente el tornillo
micromtrico para lograr un ajuste ms fino.
Corra lentamente la tira de papel, hasta localizar una letra "e" minscula; trate de colocarla en el
centro del campo visual del microscopio.
Dibuje lo observado y anote el aumento total correspondiente, para luego hacer una completa
descripcin de la imagen que usted dibuj.
Ahora gire suavemente el revlver y coloque el objetivo de amplitud media, perpendicular a la
platina.

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 Ajuste la imagen moviendo lentamente el tornillo micromtrico para nitidez.
Dibuje lo observado con el correspondiente aumento total.
Nuevamente gire el revlver suavemente y coloque el siguiente objetivo, perpendicular a la
platina: Observe y ajuste la imagen.
Dibuje lo observado con el aumento total correspondiente.

Mueva el portaobjetos a la derecha y observe las relaciones espaciales de la letra e analizada.

Repita la observacin con una tira de papel impreso de mejor calidad.

El mundo en una gota de agua

Sobre un portaobjetos coloque una muestra de agua de lago y/o humedal, coloque una lmina
cubreobjetos soltndola suavemente sobre la lamina tratando que no queden burbujas de aire. Para
esto debe poner el cubreobjetos en un ngulo aprox de 45 o . Elimine el agua que se desborde utilizando
papel absorbente. Debe evitar que caiga agua sobre la platina para evitar que el portaobjetos se adhiera
a sta. Observe al microscopio desde el aumento de lupa, hasta 40X. Anote y dibuje todo lo que
observe. Cuente el nmero de clulas que pueda ver en un campo de 4X a 10X.

El aumento total de la muestra se obtiene multiplicando las cifras de aumento del ocular con el objetivo
(ej ocular 10x ; objetivo 40 x ; aumento total de 400x). Calcule el aumento para una de las muestras
observadas.

Use una regla milimtrica transparente para calcular el tamao de las observaciones (ej. 0,5 mm =500
m).

Practique el movimiento de la platina, hasta que lo haga suavemente. Localice un objeto grande que
pueda seguir moviendo el carro; mueva el tornillo micromtrico para estudiar distintos planos del
espcimen.
Despus de hacer anlisis completo con objetivo 4X, centre el objeto en el campo y cambie al objetivo
10X.

PARTE 3: CLCULO DEL REA DEL CAMPO VISUAL

Supongamos que usted observa el siguiente cuadro donde cada lado mide 1 mm (papel milimetrado):

En la imagen anterior, h representa tanto el dimetro del crculo como la hipotenusa de los tringulos en
los que se puede dividir el cuadro del papel milimetrado (Secciones a y b). Para calcular el valor
de h, es necesario aplicar el teorema de Pitgoras, teniendo en cuenta la longitud de los lados
del tringulo, de la siguiente manera:

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 h 2 = c2 + c2

Recuerde que el valor de c viene dado por la cantidad de cuadros completos de 1 mm y una estimacin
del tamao de los cuadros incompletos de los extremos (ej.: medio cuadro=0.5 mm), que usted
aprecia dentro del campo visual.

Finalmente, para calcular el rea del campo visual, recurrimos a la expresin del rea del crculo en
trminos del valor de h calculado anteriormente:

A = (h/2)2

IMPORTANTE: Recuerde que esta medida es una estimacin, ya que usted no pudo medir el espacio
sobrante sino que calcul de acuerdo a su habilidad particular.

PROCEDIMIENTO:

1. Ponga sobre el portaobjetos una gota de agua y dentro de ella coloque un recorte de 1 cm 2 de
papel milimetrado.
2. Cubra con la laminilla y enfoque a 4x.
3. Adjunte fotografas de lo observado y calcule el valor del rea del campo visual.
4. Enfoque con el objetivo de 10x, dibuje lo observado y calcule su respectiva rea.
5. Complete la siguiente tabla de resultados:

REA DEL CAMPO

OBJETIVO DIMETRO
VISUAL
4x
10x
40x
100x

6. Sobre el cuadro de papel milimetrado que utiliz anteriormente, coloque un poco de polen y
observe la imagen al microscopio en 10x.
7. Adjunte fotografas de lo observado y calcule el dimetro de un grano de polen en micras
(recuerde que 0.1 mm = 100 micras).

PARTE 4: OBSERVACION DE CELULAS VEGETALES

Las clulas vegetales se distinguen fcilmente por su pared celular., segn el caso se pueden observar
organelos tales como cloroplastos, ncleo.
Corte un pedazo de papa delgado y observe. Adicione una gota de lugol. Podr diferenciar los
amiloplastos.

Observe los grnulos en la harina de trigo y de maz. Registre las diferencias en la forma y composicin
de los grnulos.

Coloque una muestra de harina y adale un poco de saliva, ponga el cubra objetos y observe. Que
fenmeno puede detectar despus de unos minutos? Que compuesto(s) presentes en la saliva actan
para degradar el almidn?

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PARTE 5: OBSERVACION DE CLULAS ANIMALES

Vida microscpica en nuestra boca

Utilizando un baja lenguas frote el interior de su mejilla. Obtendr saliva y clulas de la mucosa bucal
que se desprenden con facilidad.
Coloque la saliva en un extremo del la lamina y luego mezcle con igual cantidad de agua destilada.
Registre lo observado.
Agregue una gota de azul de metileno diluida en proporcin 1:3 y registre nuevamente lo observado.

PARTE 6. EL ESTEREOSCOPIO

OBJETIVOS

Localizar y describir la funcin de cada una de sus partes.

Aprender a usarlo correctamente y conocer al aumento de cada muestra.

Procedimiento:

Ubique el ocular, objetivo, platina, tornillo de aumento y la fuente de luz.

Seleccione una muestra tridimensional y pngala sobre el platillo; ajuste los oculares hasta ver un solo
campo con los dos ojos y enfoque con el tornillo de ajuste.
Ilumine la muestra con luz transmitida y reflejada.

Repita el procedimiento usado para el microscopio observando tambin muestras biolgicas, animales y
vegetales.

ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS:

Mediante un esquema compare el microscopio y el estereoscopio desde el punto de vista del

fundamento ptico, aumentos, tipo de imagen, utilidad..
Cual es la diferencia entre microscopa ptica, microscopia de fluorescencia y microscopia electrnica?
Cmo se relacionan el aumento del objetivo y el tamao del rea visual?
Porque se debe utilizar aceite de inmersin para objetivo de 100X? Que precauciones se debe tener con
el aceite de inmersion?
Que puede ocurrir si accidentalmente se utiliza agua en lugar de aceite de inmersin?

LECTURAS COMPLEMENTARIAS:

Ishiwata, H.; Itoh, M.; Yatagai, T.; A new method of three-dimensional measurement by differential
interference contrast microscope, Optics Communications 260 (2006), pp. 117-126.

Electron microscopy in biology : a practical approach Robin Harris 1991Disponible en Bib

Central Ciencia y Tecnologa (578.45 E38 )
Laboratory experiments in microbiology Ted R. Johnson 1946- Christine L Case 1948-2007
Disponible en Bib Central Ciencia y Tecnologa (579.078 J66l 2007 )

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 Biology in the laboratory Doris R Helms; Carl W Helms; Robert J Kosinski; John R Cummings
1998 Disponible en Bib Central Ciencia y Tecnologa (571.5 B615 1998 )

La clula Geoffrey M. Cooper Robert E Hausman; N Wright tr. 2010 Recurso

electrnico. La Biblioteca tiene ejemplares fsicos.