CPIA NO
CONTROLADA
Aprovado por
Cristine Ferreira 30/10/2012
Eliane Bressa Dalcin 30/10/2012
SUMRIO
1 Objetivo
CPIA NO
2 Campo de aplicao CONTROLADA
3 Definies
4 Siglas
5 Condies gerais
6 Condies especficas
7 Responsabilidades
8 Referncias
9 Anexos
A DOC MCT 01 - 01 Procedimentos para coleta, acondicionamento e
transporte de amostras biolgicas
1 OBJETIVO
2 CAMPO DE APLICAO
3 DEFINIES
a) Amostra biolgica
Parte do material biolgico de origem humana utilizada para anlises laboratoriais.
b) Amostra rejeitada
Amostra biolgica fora das especificaes determinadas pelo Lacen.
c) Requisio de Exame
Formulrio que contm informao suficiente para identificar o paciente e o requisitante
autorizado e fornecer os dados clnicos pertinentes.
d) Unidade de Sade
Estabelecimento de sade destinada a realizar assistncia sade, a uma populao
determinada (hospitais, clnicas, postos de sade, vigilncia epidemiolgica, etc.).
f) Caixa trmica
Caixa para transporte de amostra biolgica (tipo geladeira porttil) de polietileno ou similar,
lavvel, resistente desinfeco e portando a identificao de Infectante ou Risco
Biolgico.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
h) Amostra congelada
CPIA NO
Amostra biolgica conservada em temperatura abaixo de 20C negativos.
CONTROLADA
i) Amostra em temperatura ambiente
Amostra biolgica conservada na temperatura de 17 a 27C.
4 SIGLAS
5 CONDIES GERAIS
A qualidade dos resultados dos exames laboratoriais est intimamente relacionada fase
pr-analtica, que se inicia desde o preenchimento correto da requisio, preparao do
paciente, coleta e identificao da amostra, armazenamento temporrio da amostra no local
de coleta, transporte ao laboratrio, at o recebimento e cadastramento das amostras no
Lacen.
5.1 Requisies
5.1.1 Exames que devem vir acompanhados das respectivas Fichas de Notificao de
Surto - SINAN:
a) Conjuntivite bacteriana;
b) Faringite estreptoccica / escarlatina;
c) Botulismo.
A solicitao dos kits para coleta e transporte das amostras biolgicas fornecidos pelo
Lacen dever ser feita mediante solicitao prvia Diviso de Controle da Rede por meio
do fax (48) 3251-7952.
A retirada do kit no Lacen de responsabilidade da Regional de Sade ou VE de cada
municpio.
A caixa de transporte no deve ser a mesma onde tenham sido encaminhadas amostras
biolgicas de qualquer espcie.
CPIA NO
CONTROLADA
5.3 Horrio de recebimento das amostras no Lacen
CPIA NO
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Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Figura 3: Modelo de estante para transporte de tubos Figura 4: Modelo de frasco para coleta de amostras
biolgicas como escarro, fezes, urina
CPIA NO
O
CONTROLADA
A
5.5.2 Condies de transporte
O transporte de amostras biolgicas em veculos com circulao de pessoas deve ser feito
em condies de segurana e em rea separada dos passageiros, sendo que deve ser
observado o que segue:
a) as caixas trmicas devem vir bem vedadas e fixadas para no virar durante o transporte
e protegidas do sol e de umidade;
b) o motorista deve ser orientado de como proceder em caso de acidente com as amostras.
Para isso, o veculo deve conter um kit com EPI: guarda-p, luvas de procedimento, uma p
com escova (caso tenha que recolher material derramado), pano de limpeza, um frasco com
lcool 70% para limpeza do local e das mos, saco para lixo infectante e fita adesiva;
c) em caso de acidente com as amostras, todos os materiais recolhidos e utilizados na
operao devem ser colocados no saco para lixo infectante bem fechado com a fita adesiva,
para que sejam esterilizados e descartados adequadamente. Neste caso, a pessoa
responsvel pela remessa das amostras, cuja identificao deve estar na caixa de
transporte (ver item 5.7.1), deve ser avisada do ocorrido.
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Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
6 CONDIES ESPECFICAS
A coleta de amostra biolgica bem feita uma etapa muito importante no processo de
realizao do exame pelo laboratrio. Tem como finalidade obter um resultado preciso e de
qualidade, fundamental para uma orientao epidemiolgica e/ou clnica correta.
CPIA NO
6.1 Coleta, preparo e identificao da amostra biolgica CONTROLADA
A fase anterior coleta deve ser objeto de ateno por parte de todas as pessoas
envolvidas no atendimento com a finalidade de se prevenir a ocorrncia de enganos.
A coleta de amostras de material humano deve ser realizada rigorosamente dentro das
normas de biossegurana vigentes no pas, ocasio em que se deve observar o que segue:
a) ao iniciar o procedimento de coleta, o profissional de sade deve organizar todo o
material de acordo com as amostras a serem coletadas, conferir todos os dados da
requisio e solicitar ao paciente que diga seu nome completo para confirmao dos dados
da requisio;
No necessrio jejum prolongado para coleta dos exames enviados ao Lacen. Para evitar
lipemia das amostras deve-se obedecer a um jejum de pelo menos 3 a 4 horas antes da
coleta de sangue.
a) Sangue total
Coletar o sangue com o anticoagulante recomendado para a realizao do exame, logo
aps a coleta homogeneizar suavemente e identificar corretamente o tubo.
b) Soro
Coletar o sangue em tubo sem anticoagulante. Recomendamos a utilizao de TUBO
COM GEL SEPARADOR e ativador de cogulo (tampa amarela) Este contm uma barreira
de gel que est presente no fundo do tubo.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Apos este perodo centrifugar o tubo com sangue entre 2.500 a 3.000 rpm por 10 minutos
para obteno do soro (sobrenadante).
CPIA NO
O tempo entre a coleta e a centrifugao no deve exceder uma hora. CONTROLADA
Durante a centrifugao a barreira de gel move-se para cima at a interface entre o soro e o
cogulo, onde forma uma barreira estvel que separa o soro da fibrina e das clulas. Neste
caso, o soro pode ser utilizado pelo laboratrio diretamente no tubo de coleta, eliminando a
necessidade de transferncia de um tubo para outro.
Aps a centrifugao, os tubos com gel devem permanecer por uma hora na posio
vertical, para minimizar o risco de danificar a barreira formada pelo gel, atravs dos
movimentos de vibrao durante o transporte.
Manter as amostras centrifugadas no tubo original de coleta com gel separador sob
refrigerao (2 a 8C) at o acondicionamento correto (sob refrigerao) para envio ao
Lacen.
c) Plasma
O sangue total deve ser coletado em tubo com anticoagulante. Seguir a tcnicas de coleta
e homogeneizao adequada do sangue, para evitar hemlise.
a amostra de escolha para a realizao de testes moleculares como Carga Viral do HBV e
HIV. Obedecer s orientaes de coleta, envio no tubo primrio ou se necessrio separao
de plasma para envio, nas informaes especficas para cada exame que seguem neste
manual e no DOC MCT 01 - 01 (anexo A).
Nota: No sero aceitas amostras com as seguintes caractersticas:
hemlise, lipemia e hiperbilirrubinemia;
mal conservadas (sem refrigerao), transportadas inadequadamente (tubos
quebrados, derramados), e
Tubos sem identificao.
Para estas amostras, etiquetar o frasco com nome completo e legvel do paciente, data e
hora da coleta, tipo de exame e amostra biolgica;
O DOC MCT 01 01 est estruturada em ordem alfabtica por patologia, visando facilitar a
consulta. Para cada patologia est disponvel o nome dos exames realizados no Lacen ou
em Laboratrios de Referncia, a(s) amostra(s) biolgica(s) utilizadas na realizao de cada
exame, volume necessrio para realizao do exame, acondicionamento e temperatura de
transporte, o perodo ideal da coleta e o tempo crtico para a chegada da amostra no Lacen
e prazo mximo de liberao dos exames.
No item a seguir, as patologias com os respectivos exames esto agrupadas por Setor
Tcnico que realiza o exame e as informaes sobre coleta esto descritas
detalhadamente.
CPIA NO
6.2.1 Setor de Bacteriologia UO BACTO CONTROLADA
Cancro mole
Material necessrio para coleta:
swab de algodo, haste plstica, estril (swab comum);
lmina de microscopia nova, limpa e desengordurada;
Conjuntivite bacteriana
Difteria
Para a garganta (G) com auxlio de um abaixador de lngua, pressionar a lngua para
baixo e com swab estril, fazer a coleta no redor da superfcie da garganta, passando o
swab pelas amgdalas, vula e toda a parede da garganta (Figura 8). Na coleta em
doentes, o swab deve ser passado cuidadosamente apenas ao redor das leses, para
que no haja descolamento da placa (pseudomembrana) imediatamente aps a coleta,
introduzir o swab no meio de transporte Amies com carvo. Ateno para que o swab
fique submerso no meio de cultura. Fechar firmemente o tubo.
Notas:
1) Os swab devem ser armazenados, antes da sua utilizao, em temperatura ambiente e em local seco.
2) O meio de transporte deve ser armazenado, antes de sua utilizao, em refrigerador, observando sempre a
data de vencimento.
3) Na solicitao de exames dos contatos/comunicantes, acrescentar o nome do doente ao qual est
vinculado.
4) Por ser doena de transmisso respiratria, o uso de mscara e luvas de procedimento essencial para a
proteo do profissional que realiza a coleta e devem ser utilizadas tanto para caso suspeito como para os
comunicantes sadios.
Febre tifide
da temperatura (evitar o pico febril). Paciente com febre constante, fazer a coleta em
qualquer horrio. Paciente em uso de terapia antimicrobiana, colher antes da prxima
dose do antibitico;
fezes: coletar a partir da 2 semana at a 5 semana do incio dos sintomas, no estgio
de convalescena e na pesquisa de portador.
CPIA NO
d) Nmero de amostras de sangue e intervalo da coleta CONTROLADA
recomenda-se a coleta de 2 a 3 amostras de sangue;
deve existir um intervalo de 15 a 20 minutos entre as coletas, intercalando os stios da
puno (ex.: brao direito, brao esquerdo).
e) Nmero de amostras de fezes e intervalo da coleta
recomenda-se a coleta de 3 amostras com intervalo de 3 dias cada uma;
no caso de portadores assintomticos, particularmente aqueles envolvidos na
manipulao de alimentos: 7 amostras em dias seqenciais.
sete dias aps o trmino do tratamento com antimicrobiano, realizar 3 (trs)
coproculturas com intervalos de 30 dias. Caso uma delas seja positiva, essa srie pode
ser suspensa e o indivduo deve ser novamente tratado.
f) Procedimento para a coleta de sangue:
identificar os frascos de meio de cultura lquido (TSB ou BHI) com o nome do paciente,
data e hora da coleta e nmero da amostra (se 1, 2 ou 3 amostra);
retirar a parte superior (circular) do lacre metlico dos frascos;
realizar a desinfeco da tampa de borracha com lcool 70%, e deixar sobre a rolha
uma gaze ou algodo embebido com lcool a 70%. Manter o algodo sobre o frasco at
o momento da puno;
realizar a anti-sepsia rigorosa do local da puno, deixar agir por 1 minuto. Evitar tocar
no local da puno;
colher a amostra, com seringa e agulha descartveis e transferir para o frasco, sem
trocar a agulha. Coletar um volume de sangue correspondente a aproximadamente 5
10% do volume do meio de cultura;
homogeneizar delicadamente o frasco por inverso.
g) Procedimento para coleta de fezes:
ver orientaes sobre coleta de fezes no item DOENAS DIARRICAS
Gonorria
a) Amostras biolgicas
paciente do sexo masculino: secreo uretral ou 1 jato urinrio.
paciente do sexo feminino: secreo endocervical, secreo uretral ou, no caso de
crianas e mulheres histerectomizadas, secreo do fundo do saco vaginal.
outras amostras: secreo anal e secreo de orofaringe.
b) Tipo de swab utilizado para coleta
secreo uretral: swab de algodo alginatado ultrafino.
secreo endocervical, orofaringe, anal e vaginal: swab de algodo alginatado.
c) Meio de transporte
meio de Transporte Amies com carvo.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Preparo do paciente do sexo feminino: a coleta da secreo feminina deve ser feita
aps 3 horas da ltima mico. A paciente deve estar em abstinncia sexual de 2 dias
pelo menos. No estar fazendo uso de antisspticos locais ou cremes vaginais,
antibiticos ou quimioterpicos e no estar menstruada. No ter realizado exames
ginecolgicos com toque ou ultrasom transvaginal nas 48 horas que antecedem o
exame.
Preparo do paciente do sexo masculino: estar h pelo menos 3 horas sem urinar.
Evitar relaes sexuais e medicamentos tpicos nas 24 horas que antecedem o exame.
Preferencialmente no usar antibitico nos 3 dias que antecedem o exame.
Coleta da secreo uretral masculina
solicitar ao paciente para retrair o prepcio;
limpar a secreo emergente com gaze estril (no coletar a secreo emergente);
introduzir o swab alginatado ultrafino, cerca de 2 cm, no canal uretral, atravessando a
fossa navicular;
girar o swab, delicadamente, de 8 a 10 vezes para absorver a secreo;
retirar o swab; fazer um esfregao fino e homogneo em uma lmina identificada com o
nome do paciente;
proceder a nova coleta para cultura e inocular a amostra em meio de transporte Amies
com carvo.
Coleta da amostra de 1 jato urinrio
caso o paciente no esteja com secreo aparente colher a primeira urina da manh ou
reter a urina por pelo menos 3 horas antes de realizar o exame;
realizar higiene prvia da regio genital;
coletar os primeiros 10 mL de urina (1 jato urinrio) em frasco estril de boca larga com
tampa de rosca.
CPIA NO
Coleta da secreo endocervical CONTROLADA
introduzir o espculo (no utilizar espculo lubrificado);
limpar, com gaze estril, a secreo do fundo do saco vaginal e a que recobre o colo do
tero;
introduzir o swab alginatado cerca de 1cm no canal endocervical, girando-o
delicadamente de 8 a 10 vezes, para absorver a secreo. Cuidado para no tocar a
parede vaginal;
retirar o swab; fazer um esfregao fino e homogneo em uma lmina identificada com o
nome do paciente;
proceder a nova coleta para cultura e inocular a amostra em meio de transporte Amies
com carvo.
Coleta da secreo uretral feminina
fazer a expresso da secreo das glndulas parauretrais pressionando a parede
vaginal com o dedo mdio;
introduzir o swab alginatado cerca de 2 cm na uretra;
coletar a secreo girando delicadamente o swab de 8 a 10 vezes para absorver a
secreo.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
retirar o swab; fazer um esfregao fino e homogneo em uma lmina identificada com o
nome do paciente;
proceder a nova coleta para cultura e inocular a amostra em meio de transporte Amies
com carvo.
CPIA NO
Coleta da secreo de fundo de saco vaginal CONTROLADA
introduzir o espculo;
coletar a amostra do saco vaginal com auxlio de um swab alginatado;
retirar o swab alginatado; fazer um esfregao fino e homogneo em uma lmina
identificada com o nome do paciente;
proceder a nova coleta para cultura e inocular a amostra em meio de transporte Amies
com carvo.
Coleta de secreo anal
introduzir o swab alginatado no reto, cerca de 2 cm;
fazer movimentos circulares junto parede retal raspando o material das criptas por 30
segundos, para absorver a secreo. Repetir o procedimento com novo swab, caso o
swab toque as fezes;
retirar o swab alginatado e inocular a amostra em meio de transporte Amies com
carvo.
Coleta de secreo de orofaringe
com auxlio de um abaixador de lngua, pressionar a lngua para baixo e com swab
estril alginatado, fazer a coleta passando o swab pelas amgdalas e faringe posterior;
imediatamente aps a coleta, introduzir o swab no meio de transporte Amies com
carvo. Ateno para que o swab fique submerso no meio de cultura. Fechar
firmemente o tubo.
Hansenase
c) Tcnica de Coleta
Para realizar a coleta necessrio que o procedimento ocorra em sala especfica.
importante que ela seja arejada, limpa e com boa iluminao.
Para realizao da coleta, seguir os passos descritos abaixo:
acomodar o paciente confortavelmente;
explicar o procedimento que ser realizado. No caso de criana explicar tambm para a
pessoa responsvel;
observar indicaes dos stios de coleta na solicitao mdica;
manusear a lmina pelas bordas evitando colocar os dedos no local onde a amostra
ser distribuda;
identificar a lmina com as iniciais do nome do paciente, o nmero de registro da
unidade e data da coleta;
no momento de cada coleta fazer antissepsia com lcool a 70 GL ou 70%, dos stios
indicados na solicitao mdica;
com o auxlio da pina Kelly, fazer uma prega no stio de coleta, pressionando a pele o
suficiente para obter a isquemia, evitando o sangramento. Manter a presso at o final
da coleta tomando o cuidado de no travar a pina (Figura 9);
CPIA NO
CONTROLADA
I
D
E
N
T
I
F
I
C
A
LO CE
O
d) Fixao do esfregao
a lminas, contendo os raspados intradrmicos, deve permanecer em superfcie plana e
temperatura ambiente, durante 5 a 10 minutos at estarem completamente secos.
aps esta etapa os esfregaos devem ser fixados passando-se as lminas 2 a 3 vezes,
rapidamente, na chama de uma lamparina ou bico de Bunsen, com os esfregaos
voltados para cima. Evitar o aquecimento da lmina durante a fixao, para que no
haja alterao das caractersticas morfo-tintoriais do bacilo; em locais ou dias em que o
ar esteja mais mido, o tempo de secagem do esfregao poder ser maior.
Infeco de pele/ouvido/bipsia
a) Bipsias
procedimento mdico.
b) Leso aberta CPIA NO
no recomendada cultura de leses secas ou crostas; CONTROLADA
descontaminar as margens e a superfcie da leso;
proceder nova limpeza com soluo fisiolgica estril;
coletar o material purulento na parte mais profunda da leso utilizando seringa e agulha.
Transferir a amostra para um frasco estril. Se no for possvel a coleta por puno,
utilizar swab com meio de transporte Amies com carvo.
c) Abscesso fechado
fazer anti-sepsia com produto adequado;
aspirar o exsudato com agulha e seringa. Transferir a amostra para um frasco estril.
No usar swab.
d) Pstula e vescula
selecionar uma pstula intacta. Fazer anti-sepsia com produto adequado e puncionar.
Se a leso for seca, com crosta, sem vescula ou pstula evidente, remover o material
superficial aps anti-sepsia e passar firmemente o swab estril sobre a leso.
e) Secreo de ouvido externo
usando um swab limpar o canal do ouvido com anti-sptico seguido de lavagem com
soluo fisiolgica estril;
com outro swab obter material fazendo rotao no canal do ouvido;
introduzir o swab no meio de transporte de Amies.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Inoculao e incubao
identificar os frascos de meio de cultura lquido (TSB ou BHI) com o nome do paciente,
data e hora da coleta e nmero da amostra (se 1, 2 ou 3 amostra);
retirar a parte superior (circular) do lacre metlico dos frascos;
realizar a desinfeco da tampa de borracha com lcool etlico 70%, e deixar sobre a
rolha uma gaze ou algodo embebido com lcool etlico a 70%. Manter o algodo sobre
o frasco at o momento da puno;
transferir o sangue coletado para o frasco, sem trocar a agulha;
homogeneizar delicadamente o frasco por inverso.
CPIA NO
c) Soro p/ pesquisa de antgenos bacterianos e PCR CONTROLADA
volume ideal: 3 a 5 mL ou no mnimo 1.0 mL;
coletar o sangue sem o uso de anticoagulante e separar o soro.
Para a realizao dos exames, o Lacen fornece um kit de meningite (Figura 11), onde se
encontram as instrues de uso.
lquor (LCR): colocar o restante do volume de LCR no frasco estril para o lquor
(frasco com tarja azul);
lmina: depositar sobre a lmina 1 gota de lquor centrifugado e deixar secar em
temperatura ambiente. No usar chama do bico de Bunsen para a fixao do esfregao;
frasco com meio de TSB (hemocultura): com auxlio de seringa e agulha estreis,
introduzir 1 mL de sangue direto no frasco para coleta peditrica (frasco com tarja
vermelha). No caso de frasco para coleta de adulto, com 45 mL de meio de cultura,
introduzir 5 mL de sangue. Respeitar sempre a proporo da quantidade de sangue de
1:10 em relao ao meio de cultura.
Soro: colocar 3 a 5 mL de soro no frasco estril para soro (frasco com tarja laranja).
Nota: Se o volume do lquor for muito pequeno, deve-se priorizar o inculo em gar chocolate para
a preservao do microrganismo e colocar a gota do LCR sem centrifugar em lmina de vidro para
a realizao da bacterioscopia pelo mtodo de Gram.
CPIA NO
e) Orientao para o caso de envio de lquor in natura (sem kit do Lacen) CONTROLADA
realizar puno lombar (procedimento mdico);
identificar um frasco estril e uma lmina com o nome do paciente e tipo de amostra;
acondicionar a amostra no frasco estril;
conservar em temperatura ambiente;
em uma lmina de microscopia nova, depositar 1 gota de lquor, de preferncia
centrifugado e deixar secar a temperatura ambiente. No fazer esfregao.
f) Orientao para encaminhamento de cepas bacterianas
quando a cultura do LCR ou hemocultura for realizada no laboratrio local e houver
crescimento de Neisseria meningitidis, Haemophilus spp e Streptococcus pneumoniae
enviar o microrganismo isolado para confirmao no Lacen.
realizar o repique do microrganismo isolado (cepa pura) no frasco de agar chocolate
(frasco com tarja verde); na falta deste, usar um tubo ou placa de meio de cultura
adequada (gar sangue ou gar chocolate, dependendo do microrganismo isolado).
Incubar em estufa bacteriolgica a 34C - 36 C por 18-24 horas;
identificar o tubo/placa com o nome do paciente e data do repique;
fechar com fita crepe ou film plstico;
encaminhar o tubo/placa em temperatura ambiente, imediatamente aps o perodo de
incubao.
Notas:
1) As cepas enviadas devero ser provenientes de repiques recentes (24 horas de incubao) para evitar que
haja perda da mesma por ressecamento.
2) Ao enviar cepas bacterianas para identificao, o laboratrio local dever especificar qual a amostra
biolgica de origem (sangue ou lquor).
Oftalmia gonoccica
a) Material utilizado na coleta:
swab de algodo alginatado;
meio de transporte Amies com carvo.
b) Orientaes para a coleta das amostras:
afastar a plpebra e limpar a secreo acumulada nos cantos do olho;
coletar material dentro da conjuntiva, com auxlio do swab;
inocular o material, imediatamente, em meio de transporte Amies com carvo;
encaminhar ao Lacen at 8 horas aps a coleta, em temperatura ambiente.
Pneumonia bacteriana
Amostra biolgica
sangue (preferencialmente) CPIA NO
escarro, lavado brnquico, lavado broncoalveolar CONTROLADA
Nota: o escarro no considerado ideal para avaliao microbiolgica do trato respiratrio por ser uma
mostra muito contaminada, portanto sangue, lavado brnquico ou lavado brocoalveolar pode fornecer
resultado mais confivel.
a) Sangue
ver procedimento em meningites bacterianas.
b) Escarro
colher, de preferncia, a primeira amostra da manh;
orientar o paciente para enxaguar previamente vrias vezes a boca com gua para
remover a flora bacteriana superficial dessa regio;
respirar fundo vrias vezes e tossir profundamente, recolher a amostra diretamente em
um frasco de boca larga (explicar ao paciente a diferena entre uma amostra obtida
aps tosse profunda e a saliva, a fim de se obter um material de melhor qualidade).
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Tracoma
Swab
raspado uretral: algodo alginatado, rayon ou dracon, ultrafino estril.
raspado endocervical: algodo alginatado, rayon ou dracon estril.
Swab
swab de dracon ou rayon.
a) Exame a fresco:
introduzir o espculo;
coletar a amostra do fundo do saco vaginal com auxlio de um swab de algodo haste
plstica (swab comum);
retirar o swab, introduzir em tubo com 1,0 mL de salina estril, previamente identificado.
b) Cultura:
a) introduzir o espculo;
b) coletar a amostra do fundo do saco vaginal com auxlio de um swab de algodo haste
plstica (swab comum);
c) retirar o swab e inocular a amostra imediatamente no meio de transporte Amies com
carvo, identificando o mesmo.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Figura 12: coleta de secreo de nasofaringe Figura 13: coleta de secreo de orofaringe
b) Aspirado de Nasofaringe
utilizar a tcnica de aspirado de nasofaringe quando a unidade de sade dispuser de
frasco coletor de secreo, pois a amostra obtida por essa tcnica pode
concentrar maior nmero de clulas.
Nota: frasco coletor de plstico descartvel acoplado com sonda n 6 e com controle de vcuo (tipo
bronquinho).
CPIA NO
CONTROLADA
VIROSES RESPIRATRIAS
Programa sentinela de Influenza
As orientaes das tcnicas de coleta devem seguir as mesmas orientaes descritas
acima para deteco do vrus Influenza A.
a coleta deve ser realizada na fase aguda, at cinco dias do incio dos sintomas clnicos.
Quanto mais cedo, maior a chance de detectar o vrus;
o material coletado tem que ser processado at 24 horas aps a coleta por isso deve-se
enviar a amostra para o Lacen logo aps a coleta, manter e transportar em temperatura
de 2 a 8 C (refrigerao);
atualmente esta coleta realizada somente nas Unidades Sentinelas:
Em Florianpolis: UPA Sul, UPA Norte;
Em So Jos: Unidade Sanitria Forquilhinhas
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Genotipagem do HIV
o manuseio correto das amostras imprescindvel para proteger o RNA viral do HIV-1
de degradao;
seguir as mesmas orientaes de coleta, preparao de amostra (plasma) da Carga
Viral do HIV. Porm deve ser observado:
Sempre transportar o plasma em gelo seco.
Nota: Recomendamos nunca enviar amostras s sextas-feiras, sbados e domingos ou vsperas de feriado
sem autorizao do LACEN.
Todas as coletas devero ser realizadas em ambulatrio mdico referenciado pela Diretoria
de Vigilncia Epidemiolgica.
necessria a realizao do Teste de Montenegro como forma de Triagem.
Leishmaniose Visceral Humana
Sorologia
Teste de aglutinao bacteriana para a deteco qualitativa e semi-quantitativa de
anticorpos do anti-Brucella no soro humano corado pelo Rosa Bengala.
Este exame detecta a presena de anticorpos anti-brucella no soro de indivduos que
apresentam sintomatologia atual ou pregressa.
Seguir orientaes do Protocolo Estadual de Vigilncia e Manejo Clnico de Brucelose
Humana, material elaborado pelo Grupo Tcnico da Diretoria de Vigilncia Epidemiolgica
de Santa Catarina (DIVE) e Lacen, disponveis nas home page do Lacen e DIVE.
Amostra: Soro lmpido, sem hemlise e/ou lipemia, sob refrigerao seguindo orientaes
de armazenamento e transporte deste manual, acompanhada da requisio prpria com
informao de diagnstico ou seguimento sorolgico.
Amostra: Soro lmpido, sem hemlise e/ou lipemia, sob refrigerao seguindo orientaes
de armazenamento e transporte deste manual e acompanhada da requisio especfica.
Contagem de linfcitos T CD4+/CD8+/CD45+
No necessrio jejum do paciente, porm sugerimos que seja orientado ao paciente no
ingerir alimentos gordurosos antes da coleta, para evitar lipemia da amostra.
O exame deve ser realizado no prazo mximo de 48 horas aps a coleta, portanto a
amostra deve chegar ao Lacen dentro do prazo vivel para processamento. Portanto, as
amostras devero chegar ao Lacen em no mximo 40 horas aps a coleta. Caso cheguem
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Sorologia
Deteco do Antgeno NS1 dengue
Deteco do anticorpo IgM - dengue
Para as amostras de sangue (soro) coletadas com menos de cinco dias de incio de
sintomas sero realizadas a deteco do antgeno NS1 (detectvel at o 9 dia de incio
dos sintomas). As mesmas sero tambm armazenadas a 80C para realizao do
isolamento viral em Laboratrio de Referncia Nacional, caso seja necessrio.
Para deteco de anticorpos IgM, a coleta de sangue deve ser realizada a partir do 6 dia
do incio dos sintomas (febre).
Amostra: Soro lmpido, sem hemlise e/ ou lipemia, sob refrigerao seguindo orientaes
de armazenamento e transporte deste manual, acompanhada da requisio especfica.
Em caso de bito:
No mximo 12 horas aps o bito, coletar sangue por puno intracardaca e
amostras de fgado, rim, bao e linfonodo por necropsia. Acondicionar este
material isoladamente em frascos estreis, devidamente identificados.
Manter e transportar - 70 C.
Sorologia
ELISA detecta anticorpos totais (IgM e IgG) anti- Tripanossoma cruzi e
Imunofluorescncia Indireta - Deteco de anticorpos IgG anti- Tripanossoma cruzi
Amostra: Soro lmpido, sem hemlise e/ou lipemia, sob refrigerao seguindo as
orientaes de armazenamento e transporte deste manual, acompanhada da requisio
especfica.
Doena Diarrica - Rotavrus
Em caso de surtos, coletar trs amostras de cada local (creche, escola ou local trabalho).
As amostras de sangue de caso suspeito, contato com caso suspeito, gestante sintomtica,
gestante assintomtica (contato com caso suspeito), gestante vacinada inadvertidamente e
recm-nascido com suspeita de sndrome da rubola congnita devem ser coletadas
sempre que possvel no primeiro atendimento do paciente. Informar esta condio
epidemiolgica na requisio.
A coleta de segunda amostra ser solicitada pelo LACEN ou DIVE. Esta dever ser
coletada entre duas a 3 semanas aps a primeira ( nas amostras oportunas).
Sfilis
Amostra: Soro lmpido, sem hemlise e/ou lipemia, sob refrigerao, seguindo as
orientaes de armazenamento e transporte deste manual, acompanhada da requisio
especfica.
Toxoplasmose
CPIA NO
CONTROLADA
Sorologia
Deteco de anticorpos IgM/IgG
Teste de Avidez dos anticorpos da classe IgG
Coleta de sangue (soro) para deteco de anticorpos IgM e IgG recomendada em 8 a 10
dias aps incio dos sintomas. Em alguns casos, ttulos altos de IgM podem permanecer
por meses ou anos.
Micoses Superficiais
a) Pele
descontaminar a pele com lcool etlico 70% e esperar total evaporao, antes da
coleta;
as amostras de leses de pele como escamas, crostas ou cascas devem ser
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
CPIA NO
CONTROLADA
c) Cabelos e Plos
descontaminar a pele ou o couro cabeludo com lcool 70% e esperar total
evaporao, antes da coleta;
se a leso for ao longo do cabelo ou plo, como ndulos, por exemplo, esses devem
ser cortados com tesoura;
a amostra biolgica coletada deve ser acondicionada em placas de Petri estreis
(Figura 15) ou em pedao de papel escuro esterilizado.
d) Unha
os fragmentos de unhas alteradas podem ser colhidos, raspando-os com o bisturi ou
com o auxlio de uma tesoura limpa;
material que se deposita embaixo da unha pode ser retirado cuidadosamente com o
bisturi, com um palito (tipo de manicure), previamente esterilizado ou outro objeto
pontiagudo estril;
em casos de paronquia (leses na regio da cutcula), colhem-se as escamas e, se
possvel, o pus, com um swab em salina estril;
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
CPIA NO
CONTROLADA
j) Secreo Vaginal
com auxlio de espculo, coletar o material da leso ou do fundo do saco vaginal
com swab estril;
enviar o swab umedecido em salina estril ao Lacen.
Notas:
1) para todas as coletas descritas acima, colher todo o material disponvel na leso. Quanto mais material
mais viabilidade na visualizao e no crescimento em cultura.
2) todas as vezes que a coleta for com swab, este deve ser umedecido em salina ou gua estril antes da
coleta. Aps a coleta, deve permanecer em um frasco estril com salina suficiente para mant-lo mido at
o procedimento do exame.
Micoses Sistmicas
a) Escarro
preferencialmente deve ser colhido por broncoscopia: lavado ou aspirado brnquico;
quando no for possvel, o escarro deve ser colhido da mesma maneira como
colhido para o exame de tuberculose, no esquecendo da higiene da boca antes da
coleta, para diminuir a contaminao pelos saprfitas da cavidade bucal e da faringe.
Nota: o exame de escarro, (direto e cultura), nem sempre satisfatrio e confivel, por ser uma amostra
muito contaminada. Quando houver a possibilidade do exame sorolgico, deve-se optar pelo ltimo.
Nota: no recomendvel que a mesma amostra seja utilizada para os exames bacteriolgicos, micolgicos
ou de tuberculose porque pode haver contaminao. O ideal uma alquota da amostra para cada setor.
h) Sangue (Hemocultura)
Tcnica de coleta:
lavar as mos com gua e sabo, enxaguar bem, enxugar com papel toalha e calar
as luvas;
fazer a anti-sepsia rigorosa do local da puno, deixar agir por 1 minuto. Evitar tocar
no local da puno;
coletar assepticamente no mnimo 5mL de sangue de adulto e 1mL de criana,
cuidar para que no haja bolhas de ar na seringa. Coletar um volume de sangue
correspondente a aproximadamente 5-10% do volume do meio de cultura;
no trocar de agulha antes de injetar o sangue no frasco.
Volume de sangue para cada amostra
recomendado no mnimo duas amostras de cada paciente, sendo uma do brao
direito e outra do esquerdo, ou a critrio mdico.
deve ser respeitada a quantidade de sangue de 1:10 em relao ao meio de cultura,
isto : 5 mL de sangue para 45 mL de meio de TSB -Trypticase Soy Broth e 1 mL de
sangue para 9 mL de TSB (frasco peditrico).
Inoculao
romper o lacre central dos frascos e fazer a desinfeco na tampa de borracha dos
frascos de meio com TSB (frasco de hemocultura) com lcool etlico 70%;
inocular o sangue direto da seringa de coleta no frasco de hemocultura. Misturar
bem (sem agitar) para evitar coagulao.
i) Aspirado de Medula ssea
procedimento mdico;
aspirado de medula ssea coletado assepticamente em frasco estril contendo
heparina estril 1:1000 (0,5 mL de heparina diluda 1:1000);
aceita-se com restrio quando coletado em frasco para hemocultura.
Escarro espontneo
a) Orientao
lavar a boca / bochechos;
a coleta deve ser realizada em local arejado, ar livre;
CPIA NO
abrir o pote; CONTROLADA
forar a tosse: inspirar profundamente;
prender a respirao, escarrar no pote.
b) Comentrios
a 1 amostra coletada na Unidade de Sade no momento da consulta;
a 2 amostra coletada na manh seguinte ao despertar;
coletar em 2 dias consecutivos;
conservar em refrigerao (2a 8C);
transportar ao laboratrio ao abrigo da luz solar.
Escarro induzido
a) Orientao
a sala equipada deve ser equipada com cuidados de biossegurana para evitar
contaminao do ambiente;
acompanhamento de tcnico treinado;
no dia anterior deve-se ingerir muito lquido;
a nebulizao deve ser feita com soluo salina hipertnica a 3%, durante 5 a 20
minutos;
seguir as mesmas instrues do escarro espontneo.
b) Comentrios
indicado quando o paciente tem pouca secreo ou no consegue expelir;
a nebulizao fluidifica a secreo do pulmo e provoca irritao que leva tosse e
expulso do escarro;
amostra menos viscosa e semelhante saliva;
escrever no pote escarro induzido.
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Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
b) Comentrios
material rico em microbiota associada;
no aceitar pool de amostras colhidas em 24 horas; CPIA NO
no aceitar volumes inferiores a 40 mL; CONTROLADA
coletar de 3 a 6 amostras em dias consecutivos.
Lquido cefalorraquidiano (LCR)
Procedimento mdico
Procedimento mdico
Pus e secrees
a) Orientao
de cavidade fechada: por puno;
de cavidade aberta: com swab;
de preferncia aspirar ou passar o swab na parte mais profunda da leso.
Envio de culturas do Mycobacterium tuberculosis para o LACEN
a) os tubos com a cultura do M. tuberculosis devem ser com tampa de rosca, a prova de
vazamento;
b) para o transporte, este tubo deve ser envolvido com papel absorvente, em quantidade
suficiente para absorver o material e proteg-lo em caso de acidente;
c) o tubo embalado deve ser colocado dentro de um recipiente de paredes rgidas,
inquebrvel a prova de vazamentos, contendo etiqueta com as caractersticas da amostra;
d) este recipiente deve ser colocado dentro de outra embalagem - como caixa de trmica
para transporte de amostras, que deve conter o rtulo de material infectante ou de risco
biolgico juntamente com o nome, telefone e endereo da pessoa que deve ser avisada em
caso de acidente com a(s) cultura(s);
e) completar o espao da caixa com papel amassado ou polibolha, para evitar o movimento
do recipiente contendo a cultura;
f) fechar e vedar bem a caixa;
g) colocar as requisies correspondentes, devidamente preenchidas, dentro de um saco
plstico;
h) vedar bem o saco e fix-lo na FACE EXTERNA da tampa ou na lateral da caixa
trmica. Nunca coloc-los dentro da caixa.
i) identificar com destinatrio e remetente;
j) enviar ao laboratrio.
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a) Preenchimento da requisio de exame para Hepatites Virais ver tem 5.1 deste
manual.
Assinalar a condio epidemiolgica e/ou clnica do paciente;
Cada condio epidemiolgica ou clnica est relacionada com um perfil de
marcadores sorolgicos. Por isto, de extrema importncia assinalar apenas uma
condio - clnica ou epidemiolgica - para que no haja equvoco na avaliao das
fichas e cadastro dos marcadores que sero realizados pelo laboratrio.
Identificar o profissional solicitante (assinatura e carimbo).
Nota: As requisies incompletas ou com condies clnicas em desacordo com as preconizadas sero
devolvidas e o soro armazenado por 15 dias. Aps este perodo, sero desprezadas.
Anti- HBs
O teste para verificar eficcia da
vacina (Anti-HBs) no realizado,
Paciente Anti-Hbc Reagente
exceto nos casos de pacientes com
(Exame Realizado Em Banco De Sangue)
Anti-HBc reagente e Anti-HBs negativo
que necessitarem do exame para
verificar imunidade;
HBsAg
Recm nascido (RN) de me portadora de
hepatite B Anti-HBs aos 9 meses e 15
meses de idade
CASO CONDIES
Dois resultados de HBsAg reagentes com intervalo
mnimo de seis meses (para comprovao de
Indicao de tratamento infeco crnica)
Preencher a Ficha de Quantificao de cido
Nuclico Carga viral do HBV
Anexar o resultado da carga viral anterior
Monitorar tratamento Preencher a Ficha de Quantificao de cido
Nuclico - Carga viral do HBV
a) Coleta e preparo da amostra
Para cada paciente, coletar 2 tubos de 5 mL com anticoagulante EDTA (tampa
roxa). No utilizar Heparina;
O sangue total dever ser enviado ao Lacen em at 20 horas aps a coleta e at
as 5 feiras de cada semana;
Se as amostras de sangue total no puderem chegar ao Lacen em at 20 horas, as
mesmas devero ser centrifugadas a 3.000 rpm por 10 minutos para a obteno do
plasma;
Separar o plasma, utilizando ponteira com filtro estril e acondicionar em 2
criotubos com tampa de rosca estreis, adicionando 2,0 mL de plasma em cada
criotubo estril;
CPIA NO
b) Armazenamento e transporte da amostra CONTROLADA
3 Genotipagem do HCV
Para a realizao da Genotipagem do HCV necessrio:
a) Preenchimento do Laudo Mdico para Emisso do BPA-I Genotipagem do Vrus
da Hepatite C:
Preencher com letra legvel todos os dados referentes instituio e paciente;
Assinalar o motivo pelo qual o exame est sendo solicitado;
Preencher o nmero da Notificao;
Identificar o mdico solicitante (assinatura e carimbo).
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Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Diante disso, antes da coleta das amostras biolgicas dever ser feito contato prvio com o
Lacen para verificar a possibilidade da realizao do exame e a fim de se estabelecer o fluxo
de encaminhamento das amostras.
Algumas patologias possuem requisies prprias disponveis na home page do Lacen, no
seguinte endereo eletrnico: http://lacen.saude.sc.gov.br.
A saliva deve ser coletada por meio de raspado de mucosa lingual com
utilizao de swab estril.
Acondicionar o swab em tubo hermeticamente fechado e em temperatura
ambiente.
Raiva Humana Acondicionar e encaminhar as amostras para laboratrio em caixas
isotrmicas distintas. Identificar todas as amostras adequadamente e enviar
a ficha de investigao do caso de raiva humana.
b) Coleta ps mortem
Coleta de Tecido Nervoso (Crebro, cerebelo e medula):
O rgos di Sistema Nervoso Central (crebro, cerebelo e medula) devero
ser coletados com bisturis descartveis, no devendo estes serem
reutilizados nem mesmo para coletar diferentes amostras de um mesmo
paciente.
Manter e enviar as amostras conservadas sob refrigerao em at 24 horas
aps a coleta, e congeladas, aps este prazo.
Excepcionalmente, pode-se conservar as amostras em soluo salina com
glicerina a 50%, em recipientes de paredes rgidas, hermeticamente
fechados, com identificao de material de risco biolgico juntamente com
cpia da ficha de notificao ou de investigao. No usar formol. A
qualidade do resultado laboratorial depender do estado de conservao da
amostra. Materiais autolisados interferem nas tcnicas laboratoriais, muitas
vezes tornando impossvel a emisso do laudo.
Juntamente com as amostras, devem ser enviadas as fichas epidemiolgicas
completas, onde devem constar os dados do caso suspeito. Quando
enviados dois ou mais fragmentos de tecidos, especificar no pedido e
identificar os mesmos.
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Requisito: 7.5
Manual de orientao para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
O LACEN estabelece prazos de liberao dos laudos de exames. Estes prazos esto
disponveis no DOC MCT 01- 01 (anexo A)
CPIA NO
CONTROLADA
ANEXO A
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Requisito: 7.5
Procedimentos para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Microscopia
esfregao em lmina de microscopia
aps colorao
nova, limpa e desengordurada
pelo mtodo de
CANCRO MOLE leso genital antes do uso de imediatamente 05 dias
Gram (para acondicionar em porta-lmina
antibitico (coleta no Lacen)
pesquisa de
Haemophilus manter e enviar temperatura
ducreyi) ambiente
at 5 dias aps a
ELISA 2,0 ml de soro coleta, desde que a
sangue (soro) na suspeita clnica amostra centrifugada Sem previso
Western Blot
DOENA DE manter e enviar sob refrigerao seja mantida sob
refrigerao (2 a 8C) Enviado para
LYME-SIMILE (2 a 8C) Laboratrio
Exame realizado para perodos de
em Laboratrio maiores fracionar Referncia
de Referncia soro e congelar
(-20C)
sangue total 6 ml
ELISA - na suspeita clnica Sem previso
IgM e IgG sangue total soro ou plasma no mnimo 3 ml imediatamente ou
at 24 horas aps a Enviado para
manter e enviar sob refrigerao
HANTAVIROSE soro ou plasma coleta Laboratrio
(2 a 8C)
* casos bitos ver de
Exame enviado condies manter sob refrigerao (2 a 8C) Referncia
a Laboratrio de especficas do por, no mximo, 24horas, aps este
referncia manual perodo congelar (-20 C)
ANEXO A
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DOC MCT 01 - 01 02/00 MCT 01.pdf 10/28 Seo: 03
Requisito: 7.5
Procedimentos para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
PCR at o 6 dia do incio 5 ml em tubo com EDTA at 72 horas aps a Sem previso
sangue total dos sintomas coleta, sob
Exame realizado transportar sob refrigerao refrigerao (2 a 8C) Enviado para
em laboratrio para esclarecimento (2 a 8C) Laboratrio
de referencia de bito de
Referncia
Identificao de
cepa semeada em meio de cultura imediatamente aps
LEVEDUROSES leveduras
agar Sabouraud a incubao (repique 22 dias
incubar a cepa de levedura isolada de 24 a 48h)
cepa de levedura isolada NA
Infeco hospitalar Teste de entre 25 a 30C por 48 horas
ou resistncia ao Sensibilidade a
enviar temperatura ambiente
tratamento Antifngicos
(TSAF)
ANEXO A
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Requisito: 7.5
Procedimentos para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
Microscopia aps leso genital na suspeita clnica esfregao em lmina de microscopia imediatamente 07 dias
colorao pelo nova e desengordurada (coleta no Lacen)
mtodo Fontana -
Tribondeau manter e transportar temperatura
ambiente
SFILIS
Teste No coletar sangue em tubo sem at 5 dias aps a
Treponmico anticoagulante com gel separador coleta, desde que a
(triagem) (tampa amarela)
amostra centrifugada
VDRL aguardar 30 minutos a temperatura seja mantida sob
RPR sangue (soro) na suspeita clnica ambiente e aps centrifugar para refrigerao (2 a 8C)
separao do soro a 3000 rpm 10 10 dias
minutos
Testes para perodos
Treponmicos enviar no tubo original na posio maiores fracionar
(confirmatrio) vertical ou fracionar soro para outro soro e congelar
tubo (-20C).
ELISA
transportar sob refrigerao (2 a 8C)
FTA Abs
ANEXO A
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Requisito: 7.5
Procedimentos para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
se conservada
esfregao em lmina padronizada p/
Imuno temperatura
quando solicitado IFD, embalada em papel alumnio
TRACOMA Fluorescncia ambiente: at 8 horas
pela Vigilncia
Direta IFD raspado da conjuntiva aps a coleta 15 dias
Epidemiolgica p/ acondicionada em porta-lmina
para pesquisa esclarecimento de se conservada sob
Somente em caso de Chlamydia surto refrigerao
de surtos trachomatis (2 a 8C): at 72
horas aps a coleta
CPIA NO
CONTROLADA
Deteco de
anticorpos IgM e
IgG coletar sangue em tubo sem at 5 dias aps a
- ELISA. anticoagulante com gel separador coleta, desde que a
(tampa amarela) amostra centrifugada
Deteco de sangue (soro na suspeita clnica seja mantida sob 15 dias
Anticorpos IgM aguardar 30 minutos a temperatura refrigerao (2 a 8C)
- ELFA. ambiente e aps centrifugar para
TOXOPLASMOSE separao do soro: 3000 rpm 10
minutos para perodos
maiores fracionar
enviar no tubo original na posio soro e congelar
vertical ou fracionar soro para outro (-20C)
Teste de a critrio clnico, em tubo
Avidez caso de gestante
com sorologia IgM transportar sob refrigerao (2 a 8C) 15 dias
reagente
ANEXO A
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DOC MCT 01 - 01 02/00 MCT 01.pdf 26/28 Seo: 03
Requisito: 7.5
Procedimentos para coleta, acondicionamento e transporte de amostras biolgicas
NA No se aplica
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FOR RD 4.3 - 03 01/04 POP RD 4.3.pdf 1/1 Seo: 02
Requisito: 4.3
Controle de alterao de documentos
CPIA NO
CONTROLADA
NO SE APLICA
Data/Assinatura do revisor