DEGRADACIN DEL ALMIDN POR LA AMILASA SALIVAL

INTRODUCCIN. Parte del alumno

OBJETIVO

Determinar la degradacin del almidn por la -amilasa salival; donde el

almidn es una de las principales fuentes de glucosa en el metabolismo.

Hiptesis : La debe poner el alumno

MATERIAL
25 tubos de ensaye Papel filtro
4 pipetas de 1 ml Embudo
1 vaso de precipitado de 250 ml Cristalizador
1 mechero Termmetro
1 anillo metlico Agua destilada
1 soporte universal

REACTIVOS
Almidn al 0.2%, hervido
Lugol ( 0.3 g de yodo y 1.5 g de KI)
Carbonato sdico, 0.2 M
Suero fisiolgico (0.9% NaCl)
Reactivo de Benedict: disolver 90g de carbonato sdico en 600 ml de agua
caliente, disolver inmediatamente 174g de citrato sdico; llevar a 850 ml con
agua y filtrar. Por otro lado se disuelven 17 g de sulfato de cobre en 100 ml de
agua, una vez disuelto se lleva a 150 ml con agua y se aade lentamente a la
disolucin de citrato-carbonato, agitando constantemente.

PROCEDIMIENTO

a). Obtencin de -amilasa salival.

Se prepara un tubo de ensaye limpio sobre el que se coloca un embudo con
un papel de filtro plegado. Este filtro se humedece con suero fisiolgico hasta
que se adapte al embudo y salga el filtrado. Se deposita, entonces, una pequea
cantidad de saliva (de dos personas) sobre el embudo y se aaden 12 ml de suero
para diluir la secrecin y permitir la filtracin de la -amilasa. Se deja unos
minutos el tubo con el embudo en la gradilla hasta recoger el filtrado, que ser
nuestra fuente de enzima. Antes de utilizarlo, se debe de agitar el tubo para
obtener una solucin homognea.

b). Obtencin de la cantidad de -amilasa adecuada.

En cinco tubos, marcados como A, B, C, D y E, pipetear las cantidades de
reactivos (en ml) que se especifican a continuacin:

Reactivo A B C D E
Almidn a 5 5 5 5 5
37C
Suero 1 0.9 0.8 0.5 0
fisiolgico
-amilasa 0 0.1 0.2 0.5 1
salival

Aadir la -amilasa lo ms rpidamente posible. Agitar los tubos hasta

homogeneizar la mezcla de almidn y amilasa, e incubar cinco minutos a 37C,
contados desde el momento en que se acaba la agitacin tras la adicin de la
enzima. Pasados los cinco minutos, aadir rpidamente a cada tubo, 1 ml de
disolucin de yodo y observar la posible aparicin de color. Seleccionar el tubo en
el que se haya producido la digestin total del almidn con la menor cantidad de
-amilasa.

c). Seguimiento de la cintica de desaparicin de almidn y la aparicin de

azcares reductores.
Preparar seis tubos con 1 ml de disolucin de yodo en cada uno, y otros
dos tubos con 3 ml de Reactivo de Benedict. Pipetear, en un tubo aparte, 10 ml
de almidn, atemperarla a 37C durante cinco minutos y aadirle, al final de ese
tiempo, el doble de la cantidad elegida de -amilasa, de acuerdo con el
resultado del apartado anterior. Mezclar lo ms rpidamente posible. Pipetear,
inmediatamente, 1 ml de dicha mezcla a uno de los tubos con yodo y al primero
de los dos tubos con Benedict. A intervalos de un minuto, ir pipeteando 1 ml de
la mezcla sobre los restantes tubos con yodo. Transcurridos los 5 minutos, aadir
1 ml de la mezcla almidn/amilasa sobre el segundo de los tubos que contiene
Benedict. Acabada la serie, poner los dos tubos con Benedict en el calefactor,
que debe de estar hirviendo, y dejarlos all 10 minutos. Anotar las variaciones de
color producidas en cada tubo de yodo y en los dos tubos con Benedict. Discutir
los resultados obtenidos.
CUESTIONARIO.
1. Cul es el color original que aparece en los tubos en los que se mezcla
almidn con yodo? por qu?
2. Por qu la -amilasa hace desaparecer el color de la mezcla
almidn/yodo?
3. Nombra dos productos que pueden estar presentes en el medio cuando el
yodo deje de producir su coloracin tpica con el almidn
4. Cmo es la digestin del almidn en el ser humano?
5. En plantas en dnde se encuentra el almidn y cuntos tipos se
distinguen?
6. Clasificacin de carbohidratos
7. Explica por qu a la celulosa y derivados se les conoce como fibra para
el hombre y constituye el alimento de los animales rumiantes.
8. Cita un polisacrido relevante en el hombre (distinto del queratn-
sulfato), escribe su estructura y explica su funcin

REFERENCIAS.
David L. Nelson; Michael M. Cox. LEHNINGER. PRINCIPIOS DE BIOQUMICA.
Ediciones Omega. ISBN: 8428212082. ISBN-13: 9788428212083.
Bruce Alberts, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, and
Peter Walter. MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL. Fourth edition. 2002