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Facultad de Ciencias Qumicas y de la Salud, Universidad Tcnica de Machala, Machala, Ecuador.
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Facultad de Ciencias de la Ingeniera, Universidad Estatal de Milagro, Milagro, Ecuador. E-mails: hdarmasr@unemi.edu.ec; htrinidad86@
hotmail.com
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Anlisis efecto antimicrobiano plantas medicinales de uso ancestral. Azuero et al
del Oro: 65-85 % de humedad relativa y temperatura dimetro en milimetros de los halos de inhicin del
promedio de 26 C), Ecuador, en julio y agosto crecimiento bacterianio.
de 2014; siendo procesados en el laboratorio, sin Para evaluar la actividad antimictica se
almacenamiento previo. La identificacin de las sigui la tcnica descrita por Madubunyi (1995),
especies fue realizada por el Botnico Jess Inca del utilizando cepas de un hongo patgeno (Candida
Herbario de Quito, Ecuador. albicans) de origen clnico. Dicha cepa se incub por
Obtencin de los extractos: de cada planta se un periodo de 5 a 7 das a temperatura ambiente en un
utilizaron slo las hojas, stas se lavaron con agua tubo con Agar Papa Dextrosa (PDA). Al cabo de este
destilada y fueron secadas a temperatura ambiente por tiempo, se aadi 10 ml de agua destilada estril al
24 horas y posteriormente en una estufa (MEMMERT tubo, se agit vigorosamente y se filtr a travs de un
SNB 400 con flujo de aire) a 37 C por 24 horas. Luego, embudo con gasa previamente estril, para as obtener
se pulverizaron con un molino (Lab. Mill serial No. una suspensin de esporas. La cepa de C. albicans se
56969, Type AR 400 Erweka, Germany) y se pesaron. trat siguiendo la metodologa de la comparacin con
Los extractos se obtuvieron por maceracin del polvo un estndar de turbidez 0,5 McFarland. La solucin
de las hojas con metanol 100% puro por 72 horas, espongorial obtenida se coloc sobre cpsulas de
para la extraccin de los compuestos polares como los Petri, previamente preparadas con PDA, empleando
no polares, ya que se quera averiguar la sensibilidad hisopos estriles. Posteriormente, se colocaron los
microbiana ante una gama amplia de metabolitos discos de papel Whatman N 3 de 5 mm de dimetro
secundarios. Los extractos fluidos se filtraron y el impregnados previamente con el extracto, y luego, se
residuo se reextrajo con metanol por 48h; los filtrados incubaron por dos das a temperatura ambiente. La
combinados fueron concentrados a presin reducida aparicin de halos de inhibicin alrededor del disco
(aprox. 11 mbar) y 40 C en un rotaevaporador marca indic la actividad fngica del extracto, los cuales se
Hidolph, obtenindose el extracto metanlico crudo verificaron tomando en cuenta el dimetro (mm) de
para cada especie. Se determin la masa de cada uno los mismos.
de los extractos de las plantas estudiadas. Los experimentos de analisis del efecto
Actividad antimicrobiana: para determinar antimicrobiano de los extractos, se realizaron por
la actividad antibacteriana se utiliz la tcnica de triplicado para cada una de las especies vegetales
difusin en agar, segn la metodologa descrita por estudiadas. Para establecer los diferentes grados de
Bauer et al. (1966), emplendose cepas de bacterias inhibicin del crecimiento bacteriano, se consideraron
certificadas: una Gram positiva (Staphylococcus los rangos de los dimetros de inhibicion, como
aureus) y dos Gram negativas (Escherichia coli los sugieren Rios et al (2009), aplicados a los
y Pseudomonas aeruginosa), pertenecientes a la extractos de las especies empleadas en este estudio,
Coleccin Americana de Cultivos Tipo (ATCC). La establecindose posteriormente rangos de la actividad
misma consisti en impregnar discos estriles de antimicrobial.
papel de filtro Whatman N 3 de 5 mm de dimetro
con 10 l de una solucin preparada (40 mg/ml) 2.Resultados y discusin
del extracto a analizar. Estos discos se colocaron Obtencin de los extractos
dentro de cajas de Petri que contenan agar Mueller- Obtenidos todos los extractos metanlicos de las hojas
Hinton, inoculadas con una suspensin bacteriana de las plantas estudiadas, se determin la masa de los
de concentracin conocida (1x108 bacterias/ml), diversos extractos, as como tambin, su porcentaje de
preparada por comparacin con un patrn comercial rendimiento. En la Tabla 1 se encuentran reflejados
estndar N 0,5 de McFarland. Posteriormente, las todos estos resultados, tomando como referencia
cajas se preincubaron a 5C durante 12 horas, para la masa inicial de las hojas de cada especie vegetal y
permitir la difusin del extracto, y luego, se incubaron la masa del extracto crudo de las hojas, los cuales se
a 37C durante 48 horas, para permitir el crecimiento usaron luego para analizar el efecto antimicrobiano
bacteriano. Las zonas claras que se formaron alrededor de dichos extractos. En dicha tabla se observan los
de los discos, se consideraron halos de inhibicin, los porcentajes de rendimientos de extraccin de las hojas
cuales fueron medidos, registrando para cada caso el secas, pudindose notar que T. officinale (diente de
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Tabla 1. Porcentajes de rendimiento de los extractos metanlicos de las hojas de las plantas estudiadas.
Especie Masa inicial de las hojas (g) Masa del extracto (g) Rendimiento
(%)
L. citriodora (cedrn) 12,00 0,8611 7,18
A. artemisifolia (altamisa) 11,00 0,9722 8,84
T. officinale (diente de len) 10,00 0,9654 9,65
A. conyzoides (mastrante) 10,00 0,8199 8,20
P. carpunya (guaviduca) 12,00 0,9008 7,51
B. officinalis (borraja) 12,00 0,8874 7,40
C. sativum (cilantro) 11,00 0,8983 8,17
M. officinalis (toronjil) 10,00 0,5446 5,45
C. citratus (hierba luisa) 12,00 0,4698 3,92
A. absithium (ajenjo) 10,00 0,7604 7,60
M. charantia (achochilla) 10,00 0,6442 6,44
M. oleifera (moringa) 10,00 0,7527 7,53
Actividad antimicrobiana
La Tabla 2 muestra los resultados promedios ensayadas por el mtodo del antibiograma, con
obtenidos, sobre los halos de inhibicin del tres cepas de bacterias Gram (+) y (-), y un hongo
crecimiento bacteriano y fngico, por efecto de los patgeno.
extractos metanlicos de doce especies vegetales
Tabla 2. Actividad antimicrobiana mostrada por algunos extractos metanlicos de las hojas frente a
las cepas utilizadas.
A. artemisifolia
A. conyzoides
M. officinalis
M. charantia
L. citriodora
B. officinalis
A. absithium
P. carpunya
T. officinale
M. oleifera
Microorganismos
C. sativum
C. citratus
Bacterias
Staphylococcus aureus - 1+ 2+ 1+ - 2+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+
Escherichia coli 2+ 1+ 3+ 2+ 3+ 1+ 1+ 2+ 2+ 2+ 2+ 1+
Pseudomonas 2+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 1+ 2+ 1+
aeruginosa
Hongos
Candida albicans 3+ 3+ 2+ 3+ 3+ 3+ 3+ 3+ 3+ 3+ 3+ 3+
Dimetros de los halos de inhibicin: (-) <6 mm ninguna actividad antimicrobiana; (1+) 6-8 mm poca actividad antimicrobiana; (2+) 8-10 mm
mediana actividad antimicrobiana; (3+) 10-14 mm alta actividad antimicrobiana.
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En la Tabla 2, se puede observar que todos rpida y total recuperacin de la mucosa gstrica,
los extractos analizados, a excepcin de los de L. evidencindose en el anlisis macroscpico y con el
citriodora y A. conyzoides, exhibieron una accin estudio histopatolgico de los estmagos de ratas de
bactericida contra todas las cepas bacterianas experimentacin (Quintana, 2012).
ensayadas, lo cual refleja la importancia de El extracto de B. officinalis (borraja) present
estas especies en la produccin de fitofrmacos un efecto antibacteriano leve en contra de las todas
antibiticos. L. citriodora (cedrn) mostr un las cepas bacterianas ensayadas (Tabla 2). No
efecto antibacteriano mediano contra E. coli y P. existen reportes en la literatura sobre la actividad
aeruginosa; no obstante, S. aureus no present antibacteriana que posee esta especie vegetal. Un
sensibilidad frente a el extracto de esta especie; sin comportamiento similar a la borraja, lo mostraron
embargo, en otra investigacin se reporta que L. los extractos de C. sativum (cilantro) y M. olefera
citriodora mostr un efecto antibacteriano contra E. (moringa) (actividad antibacteriana leve) (Tabla
coli y S. aureus, pero no present accin inhibitoria 3). C. sativum ha sido utilizado para tratar algunas
contra P. aeruginosa (Snchez et al., 2012). Adems, dolencias no relacionadas con las enfermedades
se puede apreciar que A. artemisifolia (altamisa) infecciosas; mas se ha demostrado cientficamente
muestra un efecto bactericida leve tanto contra que tiene actividad antimicrobiana frente a
las bacterias Gram (+) como Gram (-). Similar diferentes gneros de bacterias Gram Positivas
efecto inhibitorio frente al S. aureus, se observ en (Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus)
otra muestra de altamisa recolectada en Bolivia, y Gram negativas (Ardila et al. 2009), lo cual est en
demostrando tambin actividad antibacteriana en concordancia con lo generado en el presente estudio.
contra de cepas de Bacillus subtilis y Micrococcus Hace dos dcadas se reportaron resultados
oxford (Velsquez L, 2007). cientficos que confirman la accin antibacteriana de
T. officinale (diente de len) mostr una actividad M. olefera al inhibir el crecimiento de P. aeruginosa
antibacteriana alta contra E. coli, y en menor y S. aureus (Cceres et al., 1991); y en otro ms
proporcin inhibi el crecimiento de las bacterias P. reciente, se demostr la actividad antifngica
aeruginosa y S. aureus (Tabla 2). Caso contrario, fue de aceites esenciales de las hojas y de extractos
lo reportado en otra investigacin donde esta planta alcohlicos de las semillas y las hojas de M. olefera
no demostr tener actividad inhibitoria frente a E. contra dermatofitos como Trichophyton rubrum
coli, P. aeruginosa, B. cereus y S. aureus (Ramos, y Trichopyton metagrophytes, aunque no se han
2013). El extracto de A. conyzoides (mastrante) reportado ensayos con C. albicans (Chuang et al.,
exhibi un efecto antibacteriano mediano contra E. 2007).
coli, pero tambin actu contra la P. aeruginosa y La Tabla 2 muestra que los extractos de M.
S. aureus aunque en menor proporcin. Adetutu et officinalis (toronjil), C. citratus (hierba luisa) y
al. (2012) reportaron halos de inhibicin de hasta A. absithium (ajenjo) exhibieron una actividad
12 mm (3+) al evaluar la sensibilidad bacteriana de antibacteriana mediana o moderada contra la
la cepa E. coli frente a un extracto etanlico de A. bacteria Gram (-) E. coli, y a su vez una actividad leve
conyzoides obtenido tambin por maceracin. contra las otras dos cepas P. aeruginosa y S. aureus
P. carpunya (guaviduca) present un efecto ensayadas. En la literatura no se ha informado sobre
antibacteriano alto contra E. coli, similar a T. la actividad antibacteriana de Melissa officinalis;
officinale, y una actividad antibacteriana leve solo se ha reportado su efecto antioxidante en un
contra P. aeruginosa (Tabla 2); se podra decir estudio realizado por Caldern (2011), lo cual indica
que ambos extractos son una fuente de principios que dicho extracto puede convertirse en candidato
bioactivos, posibles antibiticos contra la cepa para el aislamiento de compuestos antioxidantes
Gram (-) E. coli. No existen reportes en la literatura activos.
sobre la actividad antibacteriana que pueda poseer En otra investigacin realizada con C. citratus, su
la planta P. carpunya; sin embargo, presenta otras extracto mostr un efecto antibacteriano significativo
propiedades teraputicas, tales como poseer una en contra de las cepas S. aureus, Sh. flexneri, S. typhi,
actividad gastroprotectora, produciendo una S. enteritidis, V. cholerae, y baja actividad frente a
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P. aeruginosa, similar al resultado hallado en esta segn un estudio realizado por Pattnaik et al. (1996).
investigacin donde esta cepa se muestra un poco No se han reportado investigaciones en este campo
resistente, indicando que C. citratus (hierba luisa) para las especies Piper carpunya y B. officinalis contra
puede utilizarse para tratamientos de afecciones ninguna cepa fngica; no obstante, se recomienda
intestinales como la salmonelosis y el clera, as como usar el aceite de B. officinalis ya sea administrado
tambin en el tratamiento de procesos respiratorios por va oral como por va tpica en el tratamiento de
causados por la bacteria S. aureus (Alzamora et al. afecciones de la piel.
2001). Guerra et al. (2001) realizaron un estudio con Otros estudios con C. sativum y M. officinalis, han
el extracto fluido etanlico al 70% de A. absinthium demostrado la sensibilidad de la cepa C. albicans frente
y el mismo mostr tanto actividad antigiardisica a dichos extractos, como es la investigacin realizada
como antimicrobiana, contra E. coli, P. vulgaris, P por Inouye et al. (2006), donde se demostr que C.
aeruginosa, K. pneumoniae, S. aureus, B. subtilis sativum tiene un efecto antifngico contra C. albicans,
y C. albicans, lo que justifica su uso en la medicina P. islandicum y Aspergillus flavus, determinndose
tradicional. que su actividad antifngica se fue reduciendo de
En la Tabla 2 tambin se observa que el extracto acuerdo a los componentes de esta planta; y en otra
de M. charantia (achochilla) ejerci su efecto investigacin realizada a Melissa officinalis, donde
antibacteriano en contra de las tres cepas bacterianas esta planta exhibi un efecto anti fngico frente a C.
ensayadas, mostrando actividad antibacteriana albicans, en pacientes con sntomas de vulvovaginitis,
moderada contra las cepas Gram (-) P. aeruginosa indicando as la eficacia de esta planta (Mrquez,
y E. coli, y leve contra S. aureus. Estos resultados 2012).
estn en concordancia con lo reportado por Lagarto Alzamora et al. (2001) realizaron una investigacin
et al. (2008), cuya investigacin demuestra que con el aceite esencial de C. citratus, observndose un
el extracto etanlico de Momordica charantia efecto antimictico fuerte contra C. albicans, al igual
exhibi actividad antibacteriana sobre Shiguella, que el mostrado por el extracto de hierba luisa en este
P. aeruginosa, Salmonella, E. coli y S. aureus. trabajo de investigacin; adems, ejerciendo un efecto
Adems, esta planta present actividad antitumoral, similar al del micosatin que fue el control utilizado,
antiinflamatoria y antihelmntica; efecto antimictico como dato adicional para un tratamiento tpico de
e inhibicin de radicales libres, es decir el extracto de una ua del pie afectada por hongos, con gotas de
esta especie posee un potencial teraputico avalado aceite esencial puro de hierba luisa, el cual exhibi
cientficamente, que se utiliza en el tratamiento de su potente efecto sanando rpidamente, se podra
mltiples enfermedades, en especial la diabetes. decir que esta especie se perfila como una opcin en
En relacin a la actividad antifngica observada, el tratamiento de micosis ocasionadas por C. albicans.
se puede decir que todas las especies vegetales Existen otros trabajos realizados en relacin a la
analizadas muestran un efecto antifngico fuerte bioactividad de A. absithium (ajenjo) y M. charantia
contra la cepa del hongo C. albicans; sin embargo (achochilla) con resultados similares a los obtenidos en
dicha cepa mostr sensibilidad bacteriana moderada esta investigacin, entre los cuales estn el de Guerra
ante el extracto de T. officinale (Tabla 2). No se han et al. (2001) donde un anlisis realizado al extracto de
reportado investigaciones cientficas sobre la posible ajenjo indic que tuvo actividad en contra de la cepa C.
actividad de L. citriodora, A. artemisifolia y T. albicans a un rango de 26 mg/dl, lo que justifica su uso
officinale contra la cepa C. albicans; sin embargo en tradicional. As como el de Lagarto et al., (2008) que
un estudio reciente se demuestra que las dos ltimas demostr que M. charantia posee una fuerte actividad
especies si tienen actividad antifngica contra el antifngica frente a C. albicans, como tambin otras
hongo Mycosphaerella fijiensis Morelet conocida actividades antitumorales, antiespermatognico
como Sigatoka negra (Viveros et al., 2006). antilipoltica entre otras, pudiendo ser utilizada esta
El aceite esencial de A. conyzoides demostr planta en diversas enfermedades, siempre y cuando
tener un potente efecto antifngico contra los hongos sea caracterizado su potencial txico para avalar su
Candida albicans, Cryptococcus neoformans, empleo como agente teraputico.
Sclerotium rolfsii y Trichophyton mentagrophytes,
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Ruiz, J., y Roque, M. (2009). Actividad antimicrobiana palustris, Baccharis latifolia, Cestrum parqui
de cuatro plantas del nor-oriente peruano. Ciencia y Piper asperifolium frente a Staphylococcus
e Investigacin, 12 (1), 41-47. aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa
Snchez, C., Bedoya, J., y Acosta, E. (2012). Estudio y Enterococcus fecalis (tesis de pregrado).
del Efecto Antimicrobiano del Aceite esencial de Universidad Mayor de san Andrs, La Paz, Bolivia.
Aloysia triphylla sobre cepas S. aureus y B. cereus, Viveros, J., & Castao, J. (2006). Evaluacin in vitro de
E. coli, Salmonella sp, Listeria monocytogenes y extractos vegetales sobre Mycosphaerella fijiensis
Pseudomonas aeruginosa. Memorias del XXVI Morelet (tesis de pregrado). Universidad de Caldas,
Congreso Interamericano de Ingeniera Qumica. Manizales, Colombia.
Recuperado de http://aiquruguay.org/congreso/ Vivot, E., Snchez, C., Cacik, F., Sequin, C. (2012).
download/TL18.pdf. Actividad antibacteriana en plantas medicinales de
Velsquez, L. (2007). Actividad antimicrobiana de la flora de Entre Ros (Argentina). Cienc. docencia
extractos de Franseria artemisioides, Rumex tecnol., 45, 177-189.
Agradecimientos
Los autores expresan su agradecimiento al Proyecto Prometeo de la Secretara Nacional de Educacin Superior, Ciencia y
Tecnologa de la Repblica de Ecuador (SENESCYT) por el financiamiento de esta investigacin.
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