22/04/2017 AtlasEletrnicodeHistologiaAPrep.

deLminasHistolgicas

AtlasEletrnicodeHistologia
APreparaodeLminasHistolgicas

APREPARAODELMINASHISTOLGICAS:FIXAOECOLORAO

Amaiorpartedostecidosnopodeserobservadainvivo.Devidoaessefato,elesdevemser
submetidosaprocessosdefixaoparaquesuasestruturasmorfolgicasmantenhamsepreservadas.Vrios
processosdegenerativosdeautlisecelularocorremlogoapsamortedostecidos.Seuconjuntorecebeo
nomededegeneraopostmortem.Paraevitaressaautlisequeiniciaapsamortedostecidoseaprpria
digestodomaterialporbactriasdecompositoras,devemseempregarsubstnciasque,aoseligaraos
principaiscomponentesestruturaisdotecido(geralmenteprotenas),mantenhamaestruturadomaterialaser
estudado.Esseprocessodepreservaodoscomponentesestruturaisdostecidosdenominasefixao.As
substnciasqueexecutamoprocessodefixaosochamadasfixadores.Omecanismodeaodos
fixadorespoucoconhecidoetodospossuemvantagensedesvantagens.Oscientistasdesenvolveram
misturasempricasdefixadoresparacompensarsuasprincipaisdesvantagens.Osprincipaisfixadoresso:
formol,lquidodeBouin,lquidodeHelly,aldedoglutricoetetrxidodesmio.

Paraqueoscomponentesdotecidopossamservisualizados,aluzdeveatravesslos,dirigindoseaos
olhosdoobservador.Istolimitaaespessuradoscortesapoucosmicrometros.Afimdequeostecidos
suportemoprocessodecorte,devemserimpregnadoscomparafinaouresinasepxi(casoocortesejamais
delgado,utilizadoemmicroscopiaeletrnica).Esseprocessochamaseimpregnao.Antesdaimpregnao,
apeadevepassarpelosprocessosdedesidrataoediafanizao.

Osprocessoshistoqumicosdecoloraopermitemaobservaodoscomponentesdostecidosdevido
aocontrastequeproduzemaoligaremsedistintamenteaeles.

Princpiosdahistoqumica:oprincpiobsicodahistoqumicaalocalizaodedeterminados
compostosqumicosapartirdetcnicasdepreparao.Aobservaodapresenadestescompostosnas
clulaspodeauxiliarmuitonadeterminaodascaractersticascelulares.

Paraqueosmtodoshistoqumicosobtenhamsucesso,sonecessriosalgunsrequisitosbsicos:o
produtodareaohistoqumicadeveserinsolvelenodifusvel,paraqueadeterminaodesua
localizaosejaprecisa.Tambmimportantequeomtodoutilizadosejaespecficoparaasubstnciaou
grupoqumicoqueestsendoanalisado,paraquenoocorramconclusesequivocadas.

SubstnciasbasfilaseacidfilasHE:aprincipaltcnicadecoloraodetecidosparaoestudode
HistologiabsicaatcnicaHE(HematoxilinaEosina).Atravsdessatcnica,podemosdiferenciarpores
basfilaseacidfilasdotecidoestudado.Ahematoxilinabasfila,ouseja,temafinidadeporsubstnicas
bsicas.Sendoassim,elacostumacorarosncleoeoRetculoEndoplasmticoRugoso,locaisondeh
grandequantidadedeprotenas(bsicaspeloseugrupamentoamina).Aeosinaacidfila,tendoafinidade
pelocitoplasma,fibrascolgenaseoutrassubstniciascidasdasclulas.

Localizaodelipdios:Paraalocalizaodelipdios,soutilizadoscorantesquepossuemaltograude
dissoluoemgorduras.Oscorantes,misturadoscomumasoluoalcolicasaturadapelaqualpossuem
baixograudedissociao,socolocadosemcontatocomotecidoeentotransferemsedasoluoalcolica
paraoslipdios.OsprincipaisexemplosdecorantesespecficosparalipdiossooSudanIVeoSudan
Negro.

Localizaodecidosnuclicos:AlocalizaodoscidonuclicosbaseiasenomtododeFeulgen.
Nestemtodo,oDNAreagecomumasoluodecidoclordrico,queretiraasbasespricaseforma
grupamentosaldedosnadesoxirribose.Ento,adicionadooreativodeSchiff(fucsinabsicadescorada
peloanidridosulfuroso)quesecombinacomosradicaisaldedoparaformarumcompostoinsolvele
vermelho.EssemtodopossuiumaproporcionalidadeentreaintensidadedacoloraoeoteordeDNA,de
modoquezonasmaiscoradaspossuemmaiorteordeDNA.

http://www.danielbranco.com.br/atlasi/txt_prep.html#PAS 1/2
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ParamaisinformaessobreoreativodeSchiff,veratcnicadecoloraoPAS,nestemesmotexto.

ORNApodeseridentificadoporquepossuialtabasofilia(afinidadecomcorantesbsicos).Porm,
comoemdeterminadostecidosexistemoutrassubstnciasdenaturezabasfila,necessrioum
procedimentoadicional,casosedesejelocalizarapenasoRNA:devemseprepararduaslminas,uma
contendoaenzimaribonucleaseeoutrasemestaenzima.EstaenzimadigeriroRNApresentenalmina.
Ento,coramseasduaslminascomumcorantebasfilo.Fazendoseasubstraodasduasimagens,
perceberseooslocaisondepreviamentehaviaRNA.

Localizaodepolissacardeos:Apresenadepolissacardeospodeserdeterminadapelatcnicado
PAS(PeriodicAcidSchiff).Ocidoperidicooxidaosgrupamentos12glicol,produzindoaldedos.Estes
aldedosreagirocomafucsinadescorada,chamadadereativodeSchiff,dandoumcompostodeadio,
violetaeinsolvel.Atravsdessatcnicapossvelvisualizarpolissacardeossimplesouassociadosa
protenas,sendomuitoutilizadanaslminasdefgado(acmulosdeglicognio),estmago(camadade
revestimentodemucopolissacardeos,modernamentechamadosdeglicosaminoglicanas),cartilagemhialina
(glicosaminoglicanaspertencentessproteoglicanasdamatriz).

Certassubstniciastmacapacidadedealteraracororiginaldocorantepeloqualforamcoradas.
Chamamosissodemetacromasia.

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