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V.

DETERMINACIN DE 4-O--D-GALACTOPIRANOSIL-D-
FRUCTOFURANOSA (LACTULOSA) Y
5-(HIDROXIMETIL)-2-FURALDEHDO (HMF) EN LECHES UHT
COMERCIALES COLOMBIANAS POR ESPECTROFOTOMETRA
ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Maite Rada-Mendoza1*, Sandra P. Rojas2 y Marisol Salazar3


1
Departamento de Qumica, Grupo de Investigacin BICAMSA,
Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educacin.
Universidad del Cauca. Calle 5 No. 4-70. Sector Tulcn.
Popayn, Colombia. 2-8209800
1*
mrada@unicauca.edu.co

RESUMEN

En este estudio se implement la tcnica de espectrofotometra UV-Vis para


determinar la concentracin de Lactulosa y HMF en 21 diferentes tipos de leches UHT
colombianas con diferentes contenidos de grasa y enriquecidas con vitaminas, minerales,
fibra y deslactosadas, disponibles comercialmente; se encontraron niveles de HMF entre
4,3 y 27,8 mg/10mL y de Lactulosa entre 7 y 68 mg/10mL. Las leches deslactosadas
mostraron los ms bajos niveles de HMF y Lactulosa y las enriquecidas con minerales las
mayores. Estas leches tambin fueron caracterizadas fisicoqumica y
microbiolgicamente; los valores obtenidos estuvieron de acuerdo con lo reportado por el
Ministerio de Salud y por tanto, son aptas para el consumo humano.

Palabras clave: control de calidad, hidroximetilfurfural, lactulosa, leches enriquecidas,


parmetros fisicoqumicos y microbiolgicos

I. INTRODUCCIN alimentacin, poca de lactancia del


ao, entre otros. El constituyente ms
La leche es el lquido segregado por la caracterstico y que la distingue de
glndula mamaria, producto del ordeo cualquier otro alimento es el azcar
ininterrumpido de animales sanos, que lactosa (4-O--D-galactopiranosil-D-
se realiza ocho das despus del parto glucopiranosa) (Badui 1989).
(Gaviria y Bernal 1993); contiene
componentes nicos que la hacen Dada su composicin, la leche no slo
imprescindible para una correcta es un excelente alimento para el hombre
nutricin, tales como agua, protenas, sino tambin un caldo de cultivo ideal
carbohidratos, lpidos, vitaminas y para bacterias y otros microorganismos;
minerales, en una proporcin que vara por ello, se hace necesario asegurar que
de acuerdo a factores tales como raza, la leche vendida para el consumo
humano sea un producto ntegro que dentro de estos, los productos lcteos
conserve bien su calidad. Para lograr son muy susceptibles al pardeamiento no
esto, se deben desarrollar sistemas de enzimtico durante los tratamientos
manejo y procesado que destruyan todos trmicos a los que se someten, debido a
los microorganismos patgenos y su alto contenido de lactosa y lisina; a
prolonguen la vida til del producto; el pesar de que la lactosa es un reductor
mtodo ms eficaz es el tratamiento dbil, puede interaccionar con la lisina
trmico (pasteurizacin, ultra- presente en las protenas de la leche
pasteurizacin (UHT) y esterilizacin) durante el almacenamiento por varios
(Garza 1998). A pesar de que los das (Valero y col. 2001).
tratamientos trmicos son necesarios
para garantizar una leche de ptima Los mtodos empleados para la
calidad, tienen como desventaja que determinacin de HMF y Lactulosa, han
pueden ocasionar una serie de incluido desde tcnicas colorimtricas y
modificaciones en los componentes de la espectrofotomtricas como tambin
misma; as, por ejemplo la lactosa, polarogrficas y cromatogrficas
carbohidrato predominante en la leche de (Bonvehi 2000; De Rafael y col. 1996).
vaca (4-6%), es propensa a sufrir
alteraciones como consecuencia del Para establecer si una leche es apta
calentamiento, tales como: isomerizacin para el consumo humano y que su
mediante la transformacin Lobry de composicin es genuina, es necesario
Bruyn-Alberda Van Ekenstein (Berg verificar su calidad mediante una
1993), reaccin con grupos aldehdicos caracterizacin fisicoqumica y
aminados (reaccin de Maillard) (Morales microbiolgica; los valores obtenidos
y col. 1997), descomposicin con debern estar de acuerdo con las
formacin de cidos orgnicos (frmico, normas y procedimientos reglamentarios
lctico, actico, pirvico y propinico) de la industria de alimentos (Decreto 476
(Badui 1989), etc., que disminuyen el de 1998); cualquier discrepancia en los
valor nutritivo de la leche. resultados, pondr al descubierto
posibles alteraciones, adulteraciones
El HMF y la Lactulosa son fraudes (Veisseyre 1980).
reconocidos indicadores de tratamiento
trmico y han sido determinados en una El objetivo de este trabajo, es
gran variedad de alimentos sometidos a presentar los valores obtenidos de la
procesos de calentamiento caracterizacin fisicoqumica y
almacenamiento inapropiado y microbiolgica de las leches UHT
prolongado tales como leche y productos comerciales colombianas analizadas, y
lcteos (Boekel 1998; Akalin y Gn las concentraciones de HMF y Lactulosa,
1997; Rada-Mendoza y col. 2002), miel con el fin de establecer si son aptas para
(Sanz y col. 2003; Vias y col. 1992), el consumo humano y proporcionan el
jugos de frutas (Blanco y col. 1991), nivel de nutrientes necesarios.
alimentos infantiles (Chvez-Servn y col.
2006; Rada-Mendoza y col. 2002, 2004),
cerveza (Bravo y col. 2002), entre otros;
II. MATERIALES Y MTODOS. 2.4 Condiciones experimentales de
la estandarizacin del mtodo
2.1 Muestras. espectrofotomtrico UV-Vis.

Fueron adquiridas en supermercados Inicialmente se llev a cabo la


de la ciudad de Popayn de forma calibracin del espectrofotmetro con
aleatoria y con fechas de vencimiento una solucin de dicromato de potasio,
entre 5 y 6 meses. Se seleccionaron 21 midiendo la absorbancia a una longitud
tipos de leches en envases Tetrapak: de onda de 373 nm. Para la eleccin de
Enteras, semi-descremadas y la longitud de onda, se prepararon
descremadas, enriquecidas con soluciones patrn de HMF de 0,3, 0,9,
vitaminas y minerales, fibra, 1,2 y 1,5 mg/mL y de Lactulosa de 3 y 15
deslactosadas y deslactosadas mg/mL.
enriquecidas con vitaminas y minerales.
2.5 Mtodo de cuantificacin.
2.2 Preparacin de las muestras.
Se realiz utilizando una curva de
Ya adquiridas, se envasaron en calibracin por el mtodo de los mnimos
frascos de vidrio y se refrigeraron en cuadrados, preparada con patrones de
nevera a 5 C, para llevar a cabo las HMF de concentracin entre 0,039 y
pruebas de caracterizacin, 0,232 mg/mL y de Lactulosa entre 0,07 y
determinacin y cuantificacin de HMF y 1 mg/mL. Se grafic la absorbancia
Lactulosa. versus la concentracin de las soluciones
patrn. La concentracin del analito en
2.3 Caracterizacin microbiolgica las muestras de leche, se determin a
y fisicoqumicas. partir de su absorbancia.

Se sigui la metodologa descrita en 2.6 Estandarizacin del mtodo


los Mtodos Oficiales de Anlisis de la analtico.
AOAC Internacional (AOAC 2003), la
cual fue implementada y estandarizada Se determinaron los parmetros que
en el departamento de Qumica de la servirn como criterio de confianza del
Universidad del Cauca. Cada ensayo se mtodo analtico tales como: linealidad,
realiz por triplicado. De los parmetros precisin, sensibilidad y exactitud.
microbiolgicos, se determin la
Reductasa y Fosfatasa; de los 2.7 Extraccin y anlisis espectro
Parmetros fisicoqumicos se determin fotomtrico de HMF.
la Acidez, Densidad, Grasa, Extracto
seco (ES), Extracto seco desengrasado Se midieron 2 mL de leche y aforaron
(ESD), pH, Cenizas y Protena. a 25 mL con agua destilada. En un tubo
para centrifugar, se adicionaron 5 mL de
la solucin anterior y 0,5 mL de la
solucin de Carrez I (ferrocianuro de
potasio trihidratado al 15%) y 0,5 mL de
la solucin de Carrez II (sulfato de zinc 0,065 mg/mL y una muestra de leche
heptahidratado al 14,4%). La mezcla se (PEFeV) y patrones de Lactulosa de
agit en un vortex durante 5 minutos y concentracin 0,07, 0,1 y 0,3 mg/mL y
fue centrifugada a 4000 rpm durante 20 una muestra de leche (ApSCaV). Se
minutos. Transcurrido este tiempo, se guardaron en la nevera durante 10 das y
tom 1 mL del sobrenadante y se afor a cada da se realiz la lectura de la
10 mL con agua destilada. Finalmente, absorbancia.
se midi la absorbancia de la muestra en
el espectrofotmetro UV-Vis. Cada 2.10 Tratamiento estadstico.
determinacin se llev a cabo por
triplicado y utilizando un blanco de Se utiliz el programa SPSS versin
reactivos. 10. Se calcularon adems las
desviaciones estndar y coeficientes de
2.8 Extraccin y anlisis espectro- variacin para cada anlisis.
fotomtrico de Lactulosa.

Se tom 1 mL de la muestra con III. RESULTADOS Y DISCUSIN


pipeta volumtrica y se afor a 10 mL
con metanol. A continuacin, la 3.1 Caracterizacin microbiolgica.
disolucin se transvas rpidamente a un
tubo de ensayo, se agit en un vortex En la tabla 1 se muestran los
durante 1 minuto y se dej en reposo en parmetros microbiolgicos analizados
la nevera hasta el da siguiente para para las leches. Como se observa, los
evitar la volatilizacin del metanol y resultados no mostraron diferencias
precipitar la protena. De esta muestra se estadsticas significativas (p0,01). Las
tom una alcuota de 0,2mL, la cual se pruebas de reductasa y fosfatasa
coloc a ebullicin y una vez fra se le demostraron que las leches analizadas
adicion cido actico glacial. estn exentas de microorganismos
Finalmente, se midi la absorbancia de la contaminantes, es decir, fueron
muestra en el espectrofotmetro UV-Vis. calentadas mediante adecuados
Cada determinacin se llev a cabo por procesos de ultra-pasteurizacin, y por
triplicado y utilizando un blanco de tanto, son leches de primera calidad,
reactivos. aptas para consumo humano para ser
empleadas como materia prima de
2.9 Prueba de estabilidad. derivados lcteos; adicionalmente,
cumplen con la normativa del Ministerio
Se prepararon soluciones patrn de de Salud (Ministerio de Salud 1998).
HMF de concentracin 0,039, 0,051 y
Tabla 1. Fosfatasa y reductasa en leches UHT comerciales. Determinaciones por
triplicado.

Muestra Reductasa Fosfatasa


(Horas)
Leche entera
ALE 7 Negativa
CEV 7 Negativa
PEFeV 7 Negativa
Leche semi-descremada
PSOV 7 Negativa
PS 7 Negativa
CSV 7 Negativa
APSV 7 Negativa
APSMV 7 Negativa
APSCaV 7 Negativa
SFS 7 Negativa
Leche descremada
CDV 7 Negativa
ALDF 7 Negativa
APD 7 Negativa
APDF 7 Negativa
Leche deslactosada
SFSD 7 Negativa
PSD 7 Negativa
ALSDF 7 Negativa
APSD 7 Negativa
CSDV 7 Negativa
PDD 7 Negativa
APDD 7 Negativa

3.2 Caracterizacin fisicoqumica. natural, debida a la presencia de fosfatos


cidos, casena, CO2 disuelto y citratos
En la tabla 2 se detallan los resultados cidos. Esto demuestra que las leches
de los parmetros de densidad, acidez y estn libres de la accin de
pH. Todas las leches analizadas, microorganismos (ej. Streptococcus
presentaron valores de densidad y lcticos) y que no ha habido falsificacin
acidez acordes a la norma (Ministerio de adulteracin. Como se esperaba, a
Salud 1998). Los valores de densidad, medida que el contenido graso
mostraron diferencias significativas disminuy, la densidad de las muestras
(p0,01). El pH y la acidez (Lozano 1988) de leche, aument.
determinada, constituyen la acidez
Tabla 2. Densidad (g/mL), acidez (%) y pH en leches UHT comerciales.
Datos promedio ( desviacin estndar) de determinaciones por triplicado.

Muestra Densidad Acidez pH


(g/mL) (%)
Leches enteras
ALE 1,030a 0,000 0,15a 0,00 6,5a 0,0
a
CEV 1,033 0,000 0,14a 0,00 6,7a 0,0
PEFeV 1,032a 0,000 0,15a 0,00 6,6a 0,0
Leches semi-descremadas
PSOV 1,032a 0,000 0,15a 0,00 6,6a 0,0
PS 1,032a 0,000 0,15a 0,00 6,6a 0,0
a
CSV 1,033 0,000 0,14a 0,00 6,6a 0,0
APSV 1,034a 0,001 0,15a 0,00 6,6a 0,0
a
APSMV 1,034 0,000 0,15a 0,00 6,6a 0,0
a
APSCaV 1,033 0,000 0,15a 0,00 6,6a 0,1
SFS 1,032a 0,001 0,14a 0,00 6,6a 0,0
Leches descremadas
CDV 1,034a 0,000 0,14a 0,00 6,7a 0,1
ALDF 1,034a 0,000 0,15a 0,00 6,5a 0,0
b
APD 1,035 0,000 0,15a 0,00 6,5a 0,0
b
APDF 1,036 0,000 0,14a 0,00 6,5a 0,0
Leches deslactosadas
SFSD 1,032a 0,000 0,15a 0,00 6,5a 0,0
a
PSD 1,034 0,000 0,14a 0,00 6,6a 0,0
ALSDF 1,034a 0,000 0,15a 0,00 6,5a 0,0
a
APSD 1,034 0,000 0,15a 0,00 6,6a 0,0
a
CSDV 1,034 0,000 0,14a 0,00 6,6a 0,0
PDD 1,034a 0,001 0,15a 0,00 6,5a 0,0
b
APDD 1,035 0,000 0,15a 0,00 6,5a 0,0

hallados en las leches enriquecidas con


En la tabla 3, se resumen los valores
Fe, Ca y Zn (APSMV y APSCaV), que se
obtenidos para ceniza, protena, grasa,
encuentran en forma de cloruros,
extracto seco y extracto seco
fosfatos y citratos tanto en estado
desengrasado. Teniendo en cuenta que
coloidal como en solucin (Veisseyre
los minerales representan alrededor del
1980). La protena calculada estuvo muy
0,6-0,8% del peso de la leche (Lozano
por debajo (2,4-2,7%) de los valores
1988), se encontr un contenido dentro
referenciados por otros autores (Cheftel
de ste rango, siendo significativos los
2000); esto puede deberse a que al ser
las protenas sensibles a la accin del se encontr que las leches contienen los
calor, se desnaturalizan a temperaturas valores mnimos exigidos de ES y ESD
de ultra-pasteurizacin. Los contenidos (Ministerio de Salud 1998).
de grasa presentaron valores dentro de
lo reglamentado (Ministerio de Salud
1998). Al aplicar la frmula de Richmond,

Tabla 3. Ceniza, protena, grasa, extracto seco (ES) y extracto seco desengrasado
(ESD) (%) en leches UHT comerciales. Datos promedio ( desviacin estndar) de
determinaciones por triplicado.

Muestra Ceniza Protena Grasa ES ESD


(%) (%) (%) (%) (%)
Leche entera
c a
ALE 0,73 0,01 2,4 0,1 3,5c 0,1 11,8c 0,1 8,3a 0,0
CEV 0,75c 0,01 2,6a 0,1 3,1c 0,1 12,1c 0,1 9,0a 0,0
PEFeV 0,71c 0,01 a
2,6 0,0 3,0c 0,1 11,7c 0,5 8,7a 0,0
Leche semi-descremada
PSOV 0,75c 0,02 2,6a 0,1 1,8b 0,0 10,3b 0,0 8,5a 0,0
PS 0,76c 0,04 a
2,5 0,1 1,6b 0,0 10,1b 0,0 8,5a 0,0
CSV 0,75c 0,01 a
2,6 0,1 1,6b 0,1 10,3b 0,1 8,7a 0,0
APSV 0,76c 0,01 2,6a 0,1 1,8b 0,1 10,7b 0,1 8,9a 0,1
APSMV 0,79b 0,00 a
2,7 0,0 1,8b 0,0 10,8b 0,0 9,0a 0,0
APSCaV 0,81b 0,01 2,6a 0,0 1,9b 0,1 10,7b 0,1 8,8a 0,0
SFS 0,72c 0,00 a
2,4 0,0 1,6b 0,1 10,2b 0,1 8,6a 0,1
Leche descremads
CDV 0,71c 0,01 2,6a 0,1 0,0a 0,0 8,6a 0,0 8,6a 0,0
ALDF 0,78c 0,02 a
2,6 0,1 0,2a 0,0 8,9a 0,0 8,7a 0,0
APD 0,77c 0,01 a
2,7 0,1 0,1a 0,0 9,0a 0,0 8,9a 0,0
APDF 0,75c 0,01 2,6a 0,0 0,1a 0,0 9,3a 0,0 9,2b 0,0
Leche deslactosada
SFSD 0,64a 0,01 2,7a 0,1 2,0b 0,1 10,7b 0,1 8,7a 0,0
PSD 0,73c 0,02 2,5a 0,1 1,6b 0,1 10,6b 0,1 9,0a 0,0
ALSDF 0,72c 0,02 a
2,6 0,1 1,8b 0,1 10,8b 0,1 9,0a 0,0
APSD 0,74c 0,01 a
2,6 0,0 1,8b 0,1 10,8b 0,1 9,0a 0,0
CSDV 0,72c 0,01 2,6a 0,1 1,8b 0,1 10,8b 0,1 9,0a 0,0
PDD 0,76c 0,02 a
2,5 0,1 0,1a 0,0 8,8a 0,1 8,7a 0,1
APDD 0,74c 0,00 a
2,7 0,0 0,0a 0,0 8,9a 0,0 8,9a 0,0
3.3 Estandarizacin del mtodo colombianas, y a su posterior perodo y
espectrofotomtrico UV-Vis para condiciones de almacenamiento. De
determinar HMF y Lactulosa. acuerdo a los resultados mostrados en la
tabla 4, el contenido de HMF y Lactulosa
Se obtuvo un mximo pico de no est influenciado por la composicin
absorcin a 285 nm para el HMF y de en cuanto a materia grasa se refiere;
425 nm para Lactulosa. Las curvas de esta conclusin es similar a la propuesta
calibracin construidas se usaron para por Berg en 1993 quien concluy que los
determinar las concentraciones de HMF valores de grasa entre 0,01 y 4,5%, no
y Lactulosa en las muestras de leche y tienen un efecto significativo sobre las
las ecuaciones obtenidas fueron: reacciones de degradacin de la lactosa.
Las leches deslactosadas mostraron los
Y=3,916X-0,0105 (r de 0,9965) ms bajos niveles de HMF y Lactulosa,
Y=0,0483X-0,0023 (r de 0,9992) posiblemente debido a su contenido de
lactosa hidrolizada y en mnima cantidad,
respectivamente, demostrando as, la que limita las reacciones de degradacin.
linealidad de los mtodos. La
repetitividad del mtodo y del sistema Las leches PEFeV y APSMV,
completo mostr valores inferiores a: presentaron contenidos altos de HMF y
5,10 y 0,38% para patrones de HMF y de Lactulosa, debido a que generalmente la
8,3 y 9% para patrones de Lactulosa; fortificacin con Fe se realiza con sales
para la muestra PEFeV, mostr valores frricas que requieren un aumento
inferiores a 4,17 y 0,08% y para APSCaV alrededor de 10 C ms (142 C) en la
fue de 0,0%. El lmite de deteccin para temperatura de ultra-pasteurizacin y es
HMF fue de 0,011 mg/mL y para precisamente este aumento, el que
Lactulosa de 0,015mg/mL; el lmite de ocasiona una mayor produccin de
cuantificacin fue 0,036 mg/mL para ambos indicadores, en comparacin con
HMF y de 0,049 mg/mL para Lactulosa. las que no han sido adicionadas con este
En el clculo de la exactitud, los mineral. La leche APSCaV, tambin
porcentajes de recuperacin estuvieron present un alto contenido, ya que la
alrededor del 91% para HMF y de 93% fortificacin de los alimentos con Ca se
para Lactulosa. realiza con fosfatos de Ca di y tribsico y
carbonatos; sin embargo, el uso de estos
3.4 Cuantificacin de HMF y cationes divalentes en alimentos, puede
Lactulosa. crear problemas de estabilidad en las
protenas (Chvez-Servn y col. 2006),
En la tabla 4 se muestran los valores principalmente en las casenas, y por
correspondientes a la determinacin de tanto, los residuos de aminocidos como
HMF y Lactulosa. La variacin la lisina, podran fcilmente reaccionar
encontrada en los valores, puede con la lactosa para formar HMF en mayor
deberse a las diferentes condiciones de proporcin. La adicin de vitaminas no
higienizacin (UHT, 132C, 5 s), a los present influencia en el contenido de
cuales se someten las leches en las HMF ni de Lactulosa, debido a que stas
diferentes industrias lcteas constan de estructuras qumicas
terpnicas y anillos heterocclicos, involucradas en las reacciones de
piridoxnicos y piridnicos, que no estn degradacin de la lactosa.

Tabla 4. Hidroximetilfurfural (mg/10mL) en leches UHT comerciales. Datos promedio


( desviacin estndar) de determinaciones por triplicado.

Muestra HMF Lactulosa

(mg/10mL) (mg/10mL)

Leche entera
ALE 13,6c 0,2 17e 0,0
CEV 13,6c 0,2 13d 0,0
PEFeV 27,8g 0,0 17e 0,0
Leche semi-descremada
PSOV 10,4b 0,1 11c 0,0
PS 10,3b 0,1 7a 0,0
CSV 13,5c 0,1 16e 0,1
APSV 20,1d 0,1 15e 0,0
APSMV 25,0f 0,1 32g 0,0
APSCaV 21,0e 0,2 19f 0,0
SFS 13,7c 0,1 11c 0,0
Leche descremada
CDV 13,6c 0,1 11c 0,0
ALDF 13,6c 0,0 19f 0,1
APD 20,1d 0,1 9b 0,0
APDF 10,4b 0,1 68h 0,4
Leche deslactosada
SFSD 4,4a 0,1 11c 0,0
PSD 4,5a 0,1 9b 0,0
ALSDF 4,3a 0,1 9b 0,0
APSD 4,4a 0,1 9b 0,0
CSDV 4,3a 0,1 7a 0,0
PDD 4,5a 0,2 9b 0,0
APDD 4,4a 0,2 9b 0,0
Letras diferentes en una misma columna, indican diferencias significativas (p0,01)
3.5 Estabilidad. Finalmente, es importante tener en
cuenta que durante la fortificacin de los
Las pruebas de estabilidad alimentos, se requiere conocer muy bien
demostraron que la determinacin de los efectos fsicos y qumicos que el
HMF y Lactulosa es estable hasta 3 das. nutrimento puede tener sobre ellos; por
eso, antes de efectuar cualquier adicin,
se deben determinar perfectamente las
IV. CONCLUSIONES condiciones de procesamiento y
almacenamiento al que va a ser sometido
Los valores tan elevados obtenidos de el producto, las necesidades del
HMF libre y de Lactulosa de las leches consumidor y el tipo de alimento. De esta
UHT colombianas comparadas con las de manera se evita en mayor proporcin, que
otros pases (Berg 1993), nos llevan a ocurran reacciones secundarias (como las
pensar que los tratamientos trmicos a los de pardeamiento no enzimtico) en un
que se someten las leches son muy alimento tan susceptible como la leche,
severos, para contrarrestar la menor con la posterior formacin de productos
calidad microbiolgica de la leche cruda indeseables (como en ste caso el HMF),
adquirida como materia prima para que reducen drsticamente el valor
procesamiento; los procedimientos en nutritivo de dicho alimento.
Colombia, podran estar careciendo de un
estricto control de calidad y a que el
almacenamiento es prolongado y a V. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
temperaturas y condiciones inadecuadas;
todo lo anterior ocasiona la prdida de Akalin AS, Gn S. (1997). Lactulose and 5-
protenas, de vitaminas y otros HMF contents in market milks.
componentes y afecta gravemente la Milchwissenschaft. 52 (7), 377-380
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la destruccin de aminocidos esenciales, AOAC. (2003), Association of Official
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y txicos, y cambios organolpticos y Analysis of AOAC Internacional (AOAC),
funcionales, lo que obliga a la industria 17th Ed. Maryland
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Uno de los efectos ms negativos del
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producto se emplea para elaborar Ph.D. Thesis, Agricultural University,
frmulas infantiles para la alimentacin de Wageningen, p.105-106, 112.
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nica fuente de protenas, en una poca Blanco, D., Gutirrez, M.D., Sopea, L.,
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