ANALITIKE

UV opticki test
ENZIMI

AMILAZA

1. maltopentoza ----(alfa-amilaza)----> maltoza + maltotrioza ----(alfa-

glukozidaza)---> glukoza
glukoza + ATP ---(heksa kinaza)---> glukoza 6 gosfat + ADP
G6P + NAD+ ---(glukoza-6-fosfat dehidrogenaza)----> 6 fosfoglukonolakton
+ NADH2

mjeri se rast apsorbance na 340nm

2. maltotetroza ---(alfa-amilaza)---> 2maltoze

maltoza + Pi ----(fosforilaza)----> glukoza + beta-Glukoza-1-fosfat
B-glukoza-1-fosfat ---(mutarotaza)----> glukoza-6-fosfat
glukoza-6-fosfat + NAD+ ------(g6p-dehidrogenaza)----> 6-
fosfoglukonolakton + NADH2

mjeri se rast aposorbance na 340nm

LDH

1. piruvat + NADH2 ---(LDH; pH 7,4)----> laktat + NAD+

mjeri pad apsorbance na 339nm

GLDH

1. glutaminska kiselina + NAD+ ----(GLDH)----> NADH2 + NH4+ + alfa-

ketoglutarat

mjeri se rast aposrbance na 339nm.

ALT

1. alanin + alfa-ketoglutarat (2-oksoglutarna kis) ---(ALT)----> glutaminska

kiselina + piruvat
piruvat + NADH2 ---(LDH)----> laktat + NAD+

Mjeri se pad apsorbance na 339nm

AST

1. L-asparaginska kiselina + alfa-ketoglutarat ----(AST)----> glutaminska kis.

+ oksaloacetat
oksaloacetat + NADH2 ----(malat dehidrogenaza)----> malat + NAD+

mjeri se pad apsorbance na 339nm.

CK (kreatin kinaza)

1. kreatin-fosfat + ADP ---(kreatin kinaza; pH 7)----> kreatin + ATP

ATP + glukoza -----(heksokinaza)----> glukozo-6-fosfat + ADP
NAD+ + glukozo-6-fosfat ----(glukozo-6-fosfat dehidrogenaza)----> NADH2
+ 6-fosfo-glukonolakton

Mjeri se proast apsorbance na 340nm. Kreatin kinaza je jako nestabilna. Da

bi se otklonile interference adenilat kinaze iz miia, dodaje se di-adenozin-
pentafosfat. Da bi se otklonile interference adenilat kinaze iz jetre, dodaje
se AMP. Takoer se dodaje i EDTA da vee Ca2+ koji inhibiraju CK.

2. Starija metoda:
kreatin + ATP ---(CK; pH 9)----> kreatin-P + ADP
ADP + fosfoenolpiruvat ----(piruvat kinaza)----> ATP + piruvat
piruvat + NADH2 ---(Laktat dehidrogenaza)----> laktat + NAD+

Mjeri se pad apsorbance na 339nm

NPN

AMONIJAK

1. alfa-ketoglutarat + NH4+ + NADPH2 ----(glutamat dehidrogenaza)---->

glutaminska kiselina + NADP+ + H2O

Mjeri se pad apsorbance na 339nm

UREA

1. urea ---(ureaza)---> NH3 + CO2

NH3 + 2-ketoglutarna kis. + NADH2 ---(GLDH)---> glutaminska kiselina +
NAD+

mjeri se pad apsorbance na 339nm

KREATININ

1. kreatinin ---(kreatinin hidrolaza)----> kreatin

ATP + kreatin ----(kreatin kinaza)----> kreatin fosfat + ADP
ADP + fosfoenolpiruvat ---(piruvat kinaza)----> ATP + piruvat
piruvat + NADH2 ---(LDH)---> laktat + NAD+

Mjeri se pad apsorbance na 339nm

MOKRACNA KISELINA
 1. mokrana kis + O2 + H2O ---(urikaza)---> alantoin + CO2 + H2O2
H2O2 + etanol ---(katalaza)--> acetaldehid + H2O
acetaldehid + NAD+ ----(aldehid dehidrogenaza)---> siretna kiselina +
NADH2

mjeri se rast apsorbance na 339nm

LIPIDI

HOLESTEROL

1. Holesterol-ester + H2O ---(holesterol esteraza ili alkalna baza)--->

Holesterol + masna kis
Holesterol + O2 -----(holesterol oksidaza)----> Holestenon + H2O2
H2O2 + etanol ---(katalaza)----> acetaldehid + H2O
acetaldehid + NADP+ ------(aldehid dehidrogenaza)----> acetat + NADPH2

mjeri se rast apsrobance na 339nm

TRIGLICERIDI

1. trigliceridi + H2O ---(lipaza)---> glicerol + 3masne kiseline

glicerol + ATP ---(glicerol kinaza)----> glicerol-3-fosfat + ADP
ADP + fosfoenol piruvat ---(piruvat kinaza)---> ATP + piruvat
piruvat + NADH2 ----(LDH)---> laktat + NADP+

mjeri se pad apsorbance na 339nm

2. trigliceridi + H2O ---(lipaza)---> glicerol + 3masne kiseline

glicerol + ATP ---(glicerol kinaza)----> glicerol-3-fosfat + ADP
glicerol-3-fosfat + NAD+ ----(G3P dehidrogenaza)---> dihidroksiaceton +
NADH2

mjeri se rast apsorbance na 339nm

UGLJIKOHIDRATI

GLUKOZA

1. Glukoza + O2 + H2O --(glukozooksidaza)--> glukonolakton + H2O2

H2O2 + etanol ---(katalaza)---> acetaldehid + 2H2O
acetaldehid + NAD+ + H2O ---(aldehid dehidrogenaza)---> CH3COOH +
NADH2

mjeri se rast apsorbance na 339nm

2. D-glukoza + ATP ---(heksokinaza; Mg2+, K+)---> Glukozo-6-fosfat + ADP

glukozo-6-fosfat + NADP ---(glukozo-6-fosfat dehidrogenaza)----> 6-
fosfoglukonolakton + NADPH2
 mjeri se rast apsorbance na 339nm

3. alfa-D-glukoza ---(mutarotaza)---> beta-D-glukonolakton

beta-D-glukonolakton + NAD+ ----glukozo dehidrogenaza----> D-glukono-
delta-lakton + NADPH2

mjeri se rast apsorbance na 339nm

ELEKTROLITI (KATIONI I ANJONI)

KALIJ

1. triptofan + piridoksal-5-P --(K-triptofanaza)--> indol + piruvat + NH4

NH4 + 2-oksoglutarna kiselina + NADPH2 --(GLDH)--> glutamimnska
kiselina + NADP

pad apsorbance na 340 nm

2. fosfoenolpiruvat + ADP --(K piruvat kinaza)--> piruvat + ATP

piruvat + NADH2 --(LDH)--> laktat + NAD+

pad apsorbance na 340 nm

FOSFATI

3

1. gliceraldehid-3-fosfat +3 PO 4 + NADP+ ---(gliceraldehid 3 fosfat

dehidrogenaza)---> 1,2-difosfoglicerat + NADPH2

mjeri se rast apsorbance na 339nm

3
2. glikogen +3 PO 4 ----(glikogen fosforilaza)---> Glukoza 1 fosfat

glukoza 1 fosfat ---(mutaza)---> glukoza 6 fosfat

glukoza 6 fosfat + NADP+ ----(glukoza 6 fosfat dehidrogenaza)----> 6
fosfoglukonolakton + NADPH2

mjeri se rast apsorbance na 339nm

HIDROGEN KARBONATNI JON ( HCO3-)

1. HCO3- + fosfoenol piruvat ---(karboksilaza)----> oksoacetat (vjerovatno

oksalacetat) + fosfat
oksalacetat + NADH2 ---(malat dehidrogenaza)----> malat + NAD+

mjeri se pad apsorbance na 339nm.

TRINDER (500-520 nm)

 ENZIMI

LIPAZA

1. 1-oleil-2,3-diacetilglicerol + H2O ---(lipaza)----> 2,3-diacetilglicerol +

oleilska kiselina
2,3-diacetilglicerol + H2O ----(diacetilaza)----> glicerol + 2xacetat
glicerol + ATP ---(glicerol-kinaza)----> L,alfa-glicerolfosfat + ADP
L-alfaglicerolfosfat + O2 ---(oksidaza)---> dihidroksiaceton fosfat + H2O2
H2O2 + PAP+ fenol ---(POD)----> kinonimin

2. 1,2-diacetil glicerol ---(lipaza)----> 2-monoacilglicerol + MK

2-monoacilglicerol + H2O ---(lipaza)----> glicerol + MK
glicerol + ATP ---(glicerol-kinaza)----> L,alfa-glicerolfosfat + ADP
L-alfaglicerolfosfat + O2 ---(oksidaza)---> dihidroksiaceton fosfat + H2O2
H2O2 + PAP+ fenol ---(POD)----> kinonimin

AMILAZA

1. maltoza + maltotrioza ----(alfa-glukozidaza)----> glukoza

glukoza + 1/2 O2 -----(glukozooksidaza)----> glukonolakton + H2O2
H2O2 + fenol + PAP ---(POD)---> kinonimin

NPN

UREA

1. Nema reakcije napisane al se u praktikumu u tekstu spominje sljedece:

urea ---(ureaza)---> NH3 + CO2
Dobiveni NH3 reaguje s glutamatom i ATP i uz prisustvo glutamin
sintetaze se dobije ADP. ADP se zatim kvantificira uz koritenje piruvat
kinaze i piruvat oksidaze. Dobije se H2O2 koji stupa u Trinderovu
reakciju.

KREATININ

1. kreatinin ---(amino hidrolaza)----> kreatin

kreatin---(amino hidrolaza)---->sarkozin + urea
sarkozin + O2---(sarkozin oksidaza)---->glicin + H2O2
H2O2 + fenol + PAP ---(POD)---> kinonimin

MOKRACNA KISELINA

1. mokrana kis + O2 + H2O ---(urikaza)---> alantoin + CO2 + H2O2

H2O2 + Fenol + 4-aminoantipirin ----(peroksidaza)---> kinonimin + H2O

LIPIDI

HOLESTEROL
 1. Holesterol-ester + H2O ---(holesterol esteraza ili alkalna baza)--->
Holesterol + masna kis
Holesterol + O2 -----(holesterol oksidaza)----> Holestenon + H2O2
H2O2 + fenol + 4-amino-antipirin ---(peroksidaza)----> Kinonimin

TRIGLICERIDI

1. trigliceridi + H2O ---(lipaza)---> glicerol + 3masne kiseline

glicerol + ATP ---(glicerol kinaza)----> glicerol-3-fosfat + ADP
glicerol-3-fosfat + O2 ----(G3P oksidaza)---> dihidroksiaceton fosfat + H2O2
H2O2 + fenol + 4-amino-antipirin ----(peroksidaza)---> kinonimin

FOSFOLIPIDI

1. Fosfolipidi + H2O -----(fosfolipaza D)---> kolin + esteri fosforne kiseline

kolin + 2O2 ----(kolin oksidaza)----> betain + 2H2O2
2H2O2 + 4-amino-antipirin + fenol ---(peroksidaza)----> kinonimin

UGLJIKOGIDRATI

GLUKOZA

1. Glukoza + O2 + H2O --(glukozooksidaza)--> glukonolakton + H2O2

H2O2 + fenol + 4-amino-antipirin ----(peroksidaza)---> kinonimin

ELEKTROLITI (KATIONI I ANJONI)

FOSFATI

1. HPO4(2-) + inozin ---(fosforilaza)---> hipoksantin + Riboza 1 fosfat

hipoksantin + riboza 1 fosfat + H2O + O2 ---(ksantin oksidaza)--->
mokrana kis + H2O2
H2O2 + fenol + 4-amino-antipirin ----(peroksidaza)---> kinonimin

HAN (405 nm)-samo 3 analitike

TRIGLICERIDI

1. Prije odreivanja triglicerida potrebno je izvriti:

- denaturaciju lipoproteina i lizu triglicerida, uz otapala kao to su etanol,
metanol i hloroform. Interference poput glukoze i fosfolipidda uklanjaju se
adsorbensima (zeolit i salicilna kiselina)
- hidrolizu triglicerida na glicerol i masne kiseline, to se vri etanolnim
rastvorom KOH i zagrijavanjem
- osloboeni glicerol reaguje sa perjodatom, nastaje formaldehid, mravlja
kiselina i jodat

glicerol + perjodat --------> formaldehid + mravlja kiselina + jodat + H2O

formaldehid + acetilaceton + NH4 -----> lutidin

HOLESTEROL

1. Holesterol-ester + H2O ---(holesterol esteraza ili alkalna baza)--->

Holesterol + masna kis
 Holesterol + O2 -----(holesterol oksidaza)----> Holestenon + H2O2
H2O2 + metanol ---(katalaza)---> formaldehid + 2H2O
formaldehid + acetil-aceton + NH4(+) ------> lutidin

MOKRACNA KISELINA

1. mokrana kis + O2 + H2O ---(urikaza)---> alantoin + CO2 + H2O2

H2O2 + metanol ---(katalaza)---> formaldehid + 2H2O
formaldehid + acetil-aceton + NH4(+) ------> lutidin

ISE-jon selektivne elektrode

NATRIJ

1. Odreuje se razlika elektrohemijskog potencijala izmeu staklene

membranske elektrode i referentne elektrode, koja je proporcionalna
koncentraciji natrijevih jona u serumu (urinu ili likvoru). Mjerna elektroda
sadri:
Na2O (11%)
Al2O3 (18%)
SiO2 (71%)
Referentna elektroda je:
Ag/AgCl

KALIJ

1. Elektrode koje na povrini imaju valinomicin koji proputa samo K+ jone.

Moe se koristiti i metoda kao kod Na+:
mjerna elektroda sadri 68% SiO2, 27% Na2O i 5% Al2O3
referentna elektroda je Ag/AgCl

KALCIJ

1. Najbolje je koristiti selektivne elektrode koje direktno mjere jonsku

aktivnost u uzorku.Zatim se odredi razlika potencijala izmeu selektivne i
referentne elektrode. Razlika je proporcionalna konc. Ca2+

HLORIDI

1. Selektivna elektroda za Cl se sastoji od kristala AgCl, koji su odvojeni od

uzorka specifinom membranom. Joni mogu prolaziti kroz membranu i
mogu se privrstiti na kristalni AgCl. Tako na graninom sloju dolazi do
pojave potencijala. Mjeri se razlika potencijala izmeu selektivne i
referentne elektrode.

AMONIJAK

1. Amonijak se oslobodi iz uzorka alkalinizacijom,i potom difundira preko

hidrofobne gasno permeabilne membrane u rastvor amonijum hlorida sve
dok se parcijalni pritisak ne izjednaci na obje strane membrane. Hidroliza
 male klicine otopljenog amonijaka sa staklenom elektrodom.a uz koristenje
AgCl kao referentne elektrode,dovodi do rasta vrijednost pH koji se potom
mjeri.

pCO2-potencijometrijsko mjerenje ( isti fazon kao jon selektivne pa

mislim da je to to)

1. pCO2 se mjeri direktno pomou staklene elektrode za pCO2. Sistem se

sastoji od staklene elektrode i referentne u termostatiziranom omotau.
Staklena elektroda se nalazi uiza teflonske membrane koja je propusna za
gasove i male nenabijene molekule, tako da je propusna za CO2. U
elektrodi se nalazi otopina HCO3-, dok CO2 prolazi iz krvi kroz teflonsku
membranu, te s vodom iz bikarbonatne otopine stvara H2CO3. Nastankom
H2CO3 se mijenja pH otopine i ta se promjena pH vrijednosti mjeri. pH krvi
ne utie, jer H+ joni ne mogu proi membranu. Izmeu izmjerenog pH i
logpCO2 postoji linearan odnos, pa se tako rauna pCO2.