Universidad Nacional Del Callao

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
Ao del Buen Servicio al Ciudadano

ESCUELA: Ingeniera De Alimentos.
PROFESORA: Blga. Ms.C. Alicia Cecilia Decheco.
ASIGNATURA: Bioqumica.
TEMA: GRUPO: 90G MESA: 01
INTEGRANTES: DETERMINACION FOTOCOLORIMETRICA DE LA
OVOALBUMINA
Asato Arakaki , Yukio Javier 1524110156
Beteta Len, Israel 1524110147
Cuenca Chirinos, Sebastin 1524110183
Guzman Urteaga, Mishelle 1524110227
Mamani Snchez, Lizbeth 1424125069
Universidad Nacional Del Callao
FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA Y ALIMENTOS
PRACTICA DE LABORATORIO N3
DETERMINACION FOTOCOLORIMETRICAS DE LA OVOALBULINA
I.- INTRODUCCION
Las tcnicas colorimtricas se basan en la medida de la absorcin de radiacin en la zona
visible por sustancias coloreadas. En algunas ocasiones, la muestra que
deseamos determinar no posee color por s misma; en tal caso, es
preciso llevar a cabo un desarrollo de color empleando reactivos que
den lugar a sustancias coloreadas con la muestra que interesa
estudiar.
La colorimetra y fotocolorimetra no son en realidad tcnicas distintas y
la diferencia estriba en el tipo de instrumental empleado, de forma que se
denomina colormetro a aquellos aparatos en los que la longitud de onda con
la que vamos a trabajar se selecciona por medio de filtros pticos;
en los fotocolormetros o espectrofotmetros la longitud de onda se
selecciona mediante dispositivos mono-cromadores.
En este laboratorio utilizaremos el mtodo de la espectrofotometra con
la cual analizaremos la concentracin de ovoalbmina de una muestra mediante una serie de
pasos. El clculo de concentracin desconocida lo hallaremos aplicando la frmula de
absorbancia.
La ovoalbmina es la principal protena de la clara del huevo (60-65% del peso de la clara del
huevo). Pertenece a la sper familia protenica de las serpinas, aunque a diferencia de la
mayora de estas la ovoalbmina no es capaz de inhibir cualquier peptdicas
La funcin biolgica de la ovoalbmina es desconocida, aunque se presume que esa una sirve
de protenas para la cra del ave. Otros autores sealan la capacidad que posee la
ovoalbmina de anular los enzimas digestivos y por esta razn sealan que es un mecanismo
protector contras las bacterias exteriores agresoras al huevo.
II.-FUNDAMENTO TEORICO
Por espectrofotometra visible entendemos a un mtodo especfico que es
el encargado del anlisis ptico Es un mtodo cuantitativo de anlisis
qumico que utiliza la luz para medir las concentraciones de las
sustancias qumicas. Es la medicin de la cantidad de
energa radiante que absorbe o transmite un sistema qumico en funcin
de la longitud de onda
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la

concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas absorben las
radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en
el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y medir la
cantidad de luz absorbida por la misma.
La luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al detector. Las mediciones fotomtricas

se hacen en base a la relacin entre la potencia de luz que alcanza al detector cuando est
interpuesta la muestra (P) y cuando no lo est (P0) o cuando est interpuesto un blanco.
LUZ VISIBLE
Es una regin muy estrecha pero la ms importante, ya que

nuestra retina es sensible a las radiaciones de estas
frecuencias.
A su vez, se subdivide en seis intervalos que definen los

colores bsicos (rojo, naranja, amarillo, verde, azul y
violeta).
EL ESPECTROFOTOMETRO
Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis

qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de
onda, la relacin entre valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones y la
concentracin o reacciones qumicas que se miden en una
muestra. Tambin se utiliza en laboratorios de qumica para la
cuantificacin de sustancias y microorganismos.1
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTOMETRO:
FUENTE DE LUZ
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las siguientes
condiciones: estabilidad, direccionalidad, distribucin de energa
espectral continua y larga vida. Las fuentes empleadas son: lmpara
de wolframio (tambin llamado tungsteno), lmpara de arco de
xenn, lmpara de deuterio y lmpara LED que se utilizan en los
laboratorios.
MONOCROMADOR
El monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada que

inciden o se reflejan desde el conjunto, se usa para obtener luz
monocromtica.
Est constituido por las rendijas de entrada y salida,

colimadores y el elemento de dispersin. El colimador se ubica
entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz
de luz que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el
cual separa todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra
lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida
COMPARTIMIENTO DE MUESTRA
Es donde tiene lugar la interaccin con la materia (debe

producirse donde no haya absorcin ni dispersin de las
longitudes de onda). Es importante destacar, que durante este
proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su mxima
expresin, con base en sus leyes de absorcin, en lo que
concierne al paso de la molcula de fundamental-excitado.
DETECTOR
El detector es el encargado de captar la radiacin y, a su vez, dejarla en evidencia para su

estudio posterior. Existen dos tipos:
a) los que responden a fotones;
b) los que responden al calor.
FOTODETECTORES
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16

fotodetectores para percibir la seal en forma simultnea en 16
longitudes de onda, cubriendo el espectro visible. Esto reduce el
tiempo de medida, y minimiza las partes mviles del equipo.
CELDAS O CUBETAS
Celdas de espectofotometra. En un primer plano, dos de cuarzo

aptas para el trabajo con luz ultravioleta; en segundo plano, de
plstico, para colorimetra (es decir, empleando luz visible).
Son los recipientes donde se depositan las muestras lquidas a

analizar. El material del cual estn hechas vara de acuerdo a la
regin que se est trabajando; son de vidrio o plstico si se trabaja
en la regin visible, de cuarzo si se trabaja en la ultravioleta y de
NaCl si se trabaja la regin de infrarrojo. Se caracterizan por tener
dos paredes correspondientes a los lados pticos por donde cruza el
haz de luz.
LA MEDIDA DE LA DENSIDAD OPTICA (D.O)
De las soluciones se leen en una escala

expresada en unidades logartmicas que van de
0.00 al 2.000, al cero corresponde al 100% de
transmitancia es decir a una absorcin igual a 0 y
al 2000 corresponde a una absorcin del 100% y
n se transmite la luz .Las unidades de la escala
equivalen a multiplicar la medida de la densidad
ptica por 500 ,as una lectura U.K corresponde a
una D.0: 2.00
DONDE
l Grosor de la muestra en cm
A La absorcin a longitud de onda
I Intensidad del rayo de luz
transmitido
T La transmitancia por unidad
I0 Intensidad del rayo de luz incidente
CALCULO DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA
Para calcular la concentracin que tiene una muestra problema se puede usar 2 mtodos:
1.-METODO DEL FACTOR DE CALIBRACION
Se conoce como factor de calibracin a la cantidad de una sustancia (en peso) de

concentracin conocida que corresponde del estndar que corresponde a una lectura de
fotocolormetro.
Se obtiene dividiendo la concentracin del estndar entre su lectura:
DONDE
FC Factor de calibracin
FC = (S.t) /L (S.t) Concentracin de estndar
L Lectura del estndar D-O
2.-METODO DE LA CURVA DE ABSORCION
Este mtodo consiste en utilizar varios mtodos estndares

de concentracin progresiva y construir una grfica en un
sistema de coordenadas en la que se colocan las lecturas
en el eje de las ORDENADAS y las concentraciones en el
eje de las ABSCISAS.
Es un marco de referencia que se construye de cantidades

conocidas de una sustancia (por ejemplo, la albmina srica
bovina) que se utiliza para determinarla cantidad de
protenas presente en una muestra incgnita.
CURVA PATRON
Es un grfico que permite conocer la cantidad de

protenas en una muestra problema a partir de
concentraciones conocidas de protenas utilizando la
ecuacin de la recta o interpolando la absorbancia
obtenida.
LEY DE LAMBERT-BEER
PRINCIPIOS
LEY DE LAMBERT LEY DE BEER

Un cuerpo que radia obedece a
la ley de Lambert si su La absorbancia de una sustancia o
luminancia espectral energtica especie es directamente
es la misma para un elemento proporcional a la concentracin de
cualquiera de su superficie, y la misma.
no depende de la direccin de
emisin
DEFINICION
La Absorbancia de una especie en solucin homognea es

directamente proporcional a su actividad ptica, longitud del
paso ptico y su concentracin. Es una relacin emprica que
relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material
atravesado.
Es de mucha utilidad en el laboratorio bioqumico porque

relaciona la absorbancia de una sustancia coloreada en solucin
con la concentracin de la misma.
DONDE
A Absorbancia
a Absortividad Especifica
b Camino ptico
A= a x b x c c Concentracin del Absorbente
ABSORBANCIA
Podemos definir absorbancia como la cantidad

de la intensidad de la luz que es absorbida por la
muestra de la siguiente formula:
EXTINCION
Conocido como coeficiente masico de atenuacion es un parametro que nos ayuda a conocer
con que potencia una muestra o sustancia absorbe una luz a una determinada longitud de onda
DENSIDAD OPTICA
La densidad ptica es una magnitud fsica que mide la absorcin de un elemento ptico por
unidad de distancia, para una longitud de onda.
TRANSMITANCIA PORCENTUAL
Se refiere al porcentaje de luz que atraviesa una muestra para una determinada longitud
de onda
ABSORTIVIDAD
Esla magnitud de luz que una solucion puede absober .relaciona su absorbancia con la
concentracion de dicha solucion por la longitud de la celda que la almacena ,tambien se le
llama: constante de absorcion .
ABSORTIVIDAD MOLAR
Se define igual que la absortividad normal pero especificamente cuando las concentraciones
de la muestra sean tomadas en unidad mol xlitro.
COEFICIENTE DE EXTICION MOLAR
Es una medida de la cantidad de luzabsorbida por unidad de

concentracin. Un compuesto con un alto valor decoeficiente de
extincin molar es muyeficiente en la absorcin de luz de la
longitudde onda adecuada y, por lo tanto, puededetectarse por
medidas de absorcin cuandose encuentra en disolucin
aconcentraciones muy bajas.
ESPECTRO DE ABSORCION
El espectro de absorcin de una materia muestra la fraccin

de la radiacin electromagntica incidente que un material absorbe
dentro de un rango de frecuencias. Es, en cierto sentido, el
opuesto de un espectro de emisin.
CURVA ESTANDAR
La curva de calibracin es un mtodo muy utilizado en

qumica analtica para determinar la concentracin de una
sustancia (analito) en una muestra desconocida, sobre todo
en disoluciones. El mtodo se basa en la relacin
proporcional entre la concentracin y una determinada seal
analtica (propiedad).
LIMITACIONES DE LA LEY DE LAMBERT-BEER
Es una ley limite (<0.01 M)
A concentraciones mayores >0.01 M la distancia promedio entre las especies disminuye

hasta el punto en que cada una afecta la distribucin de carga de sus vecinas alterando la
capacidad de absorcin a una .
En soluciones de baja concentracin del absorbente pero a concentraciones elevadas de
otras especies (electrolitos), la gran proximidad de iones al absorbente altera (interacciones
electrostticas) la absortividad molar.
CAUSAS QUE AFECTAN LA LEY DE LAMBERT-BEER
La fuente de radiacion debido a que la fuente no sumisnistra una radiacion
completamente monocromatica, es decir que hay fallas en la emision.
Variacion de la intensidad de la fuente debido a fallas de voltaje esto hace que
tambien disminuya el amperaje
El monocromador (prisma o red de difraccion) es decir que el sistema optico n
suministra longitudes de ondas separadas
El ancho de la rendija : Puede ser muy ancho como resultado nos daria un espectro de
baja resolcion . Es decir la pureza de la longitud de onda esta limitada por la
sensibilidad del detector.
CAUSAS QUIMICAS
a) El solvente
El solvente debe ser el mismo en la muestra y estandar .

No debe absorber radiacion en la region que se mide
No debe evaporarse ( aumenta la cocentracion)
Debe ser lo mas puro posible (grado espectroscopico)
b) La muestra
Debe ser homogenea no debe tener particular de suspension
c) La Muestra
Debe ser el mismo y permanecer constantemente tanto en patrones como en la

muestra.
d) Formacion de complejos
Al formarse complejos pueden deviar el maximo de absorcion de lamuestra por analizar
CUANTIFICACION DE PROTEINAS
Determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica es una tcnica de rutina

bsica cuando se aborda un esquema de purificacin de una protena concreta,
cuando se quiere conocer la actividad especfica de una
preparacin enzimtica, para el diagnstico de enfermedades, as
como para otros muchos propsitos.
Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de

protenas. Muchos de estos mtodos se basan en:
a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV,
b) para la formacin de derivados qumicos
c) la capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes.

ABSORBANCIA EN LAS PROTEINAS
Absorbancia a 280 nm
La mayor parte de las protenas poseen un pico de absorcin mxima a 280 nm. Los
grupos responsables de tal caracterstica son los aminocidos aromticos (Tirosina y
Triptofano).Las protenas poseen coeficientes de extincin molar (E280nm) que puede variar de
acuerdo a su composicin aminoacdica entre 0,4-1,5. Como aproximacin se puede
considerar que una unidad de absorbancia se corresponde con una concentracin (C)
de 1mg/ml de proteinas:
Abs280nm . E280nm = C, si E280nm se considera = 1
Abs280nm = 1 mg/ml
Si la solucin de protenas contiene DNA y/o RNA se introduce un error en la
medicin, dado que estos absorben a 280 nm.
Absorbancia a 205-210 nm
A dicha longitud de onda absorbe la unin peptdica, por lo tanto es un mtodo ms
sensible y no dependiente de los aminocidos que componen la protena en estudio.
La limitacin de esta tcnica esta dada por que la mayora de los buffers utilizados
tambin absorben a esa longitud de onda.
BIURET
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los

enlaces peptdicos en medio bsico.
1Cu2+ se acompleja con 4 NH.
La intensidad de coloracin es directamente

proporcional a la cantidad de protenas (enlaces
peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas
sustancias interfieren.
La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda

para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados
(por ejemplo en suero).
La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula

formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la
ms sencilla que da positiva esta reaccin, comn a todos
los compuestos que tengan dos o ms enlaces
peptdicos consecutivos en sus molculas.
III.-OBJETIVOS
-Detectar la concentracin de una muestra de protena por fotocolorimetra
-Adquirir destreza en el majeo del fotocolormetro y en la manipulacin del

materia biolgico de laboratorio
-Desarrollar habilidad para desarrollar anlisis y para la sntesis oral y escrita
-Mediante el uso del reactivo de Biuret obtener la calibracin de la ovoalbmina
IV.-MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
GRADILLA Y TUBOS DE ENSAYO
PROPIPETA
PIPETA
PISETA
REACTIVOS
REACTIVO DE BIURET
MUESTRAS
HUEVO
EQUIPOS
FOTOCOLORIMETRO
Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis qumico que sirve
para medir, en funcin de la
longitud de onda, la relacin
entre valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a dos haces de
radiaciones y la concentracin o
reacciones qumicas que se miden en
una muestra.
METODOS
METODO DE BIURET
TUBOS ALBUMINA AGUA (ml)

(ml)
La presencia de protenas en
Tubo #1 0 2.0
una mezcla se puede
Tubo #2 0.2 1.8 determinar
mediante la
Tubo #3 0.4 1.6 reaccin del
Biuret. El
Tubo #4 0.6 1.4
reactivo de
Tubo #5 0.8 1.2 Biuret contiene
CuSO4 en solucin acuosa alcalina
Tubo #6 1.0 1.0 (gracias a la presencia de NaOH o KOH).
Tubo #7 1.2 0.8 La
Tubo #8 1.4 0.6
reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la

formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de
electrones no compartidos d el nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos.
PROCEDIMIENTO
1) En primer lugar se coloca 8 tubos de ensayo en una gradilla y los tubos se enumera del
1 al 8.
2) Se le coloca a cada tubo a cierta cantidad de albumina de la clara de huevo y agua con
la ayuda de pipeta y pro pipeta.
3) Se agita bien cada tubo con la bagueta.
4) Se le aade 3 ml de reactivo de biuret a cada tubo.
5) La gradilla con los tubos se coloca con

doble bolsa negra a la estufa por 15 min a
unos 37C.
6) Luego de pasado los 15 min se saca la gradilla con los

tubos de la estufa y se mide cada tubo en el
fotocolormetro a 540nm.
7) Se ajusta el cero de absorbancia con la solucin

blanco de protena del tubo 1.
8) Se miden la absorbancia de los tubos 2 al 8.
9) Se anota las medidas de absorcin y se limpian los tubos, pipetas y gradilla.
V.-RESULTADOS Y DISCUSIN
RESULTADOS
TUBO
DE ABSORBA TRANSMITA
ENSA NCIA
YO NCIA
1 0 100%
2 1.077 8.4%
3 1.017 9.47%
4 1.086 8.3%
5 1.115 7.4%
6 1.037 9%
7 0.941 11.5%
8 1.298 5.3%
DATOS ARROJADO POR EL FOTOCOLORIMETRO:

ABSORBANCIA
ABSORBANCIA
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
1 2 3 4 5 6 7 8
ABSORBANCIA
Podemos definir absorbancia como la cantidad de la intensidad de la luz que es absorbida por
la muestra. En este caso la cantidad de la intensidad de la luz debe ascender al aumentar el
contenido de ovoalbmina que hay respectivamente en cada tubo de ensayo
ERROR
Como podemos observar el grafico tiene punto donde desciende la absorbancia esto se debe
que los tubos de ensayos N2,6,7 tuvieron error, esto se deber a que las muestra no fueron
medidas exactamente o por diversos factores.
TRANSMITANCIA
TRANSMITANCIA
14%
12%
10%
8%
6%
4%
2%
0%
1 2 3 4 5 6 7 8
TRANSMITANCIA
Se refiere al porcentaje de luz que

atraviesa una muestra para una determinada longitud de onda.
Normalmente el porcentaje de transmitancia que debe atravesar las muestras debe
desenden cada vez que aumenta el porcentaje de la ovoalbumina.
ERROR
Se puede observar en el grafico que las muestras N 2, 6,7 aumentaron la transmitancia
porcentual se puede decir que estos tuvieron ,esto se debe a diversos factores como la
medicion de muestras
HALLAR LA CONCENTRACION A PARTIR DE SIGUIENTE FORMULA:
DONDE
A Absorbancia
A= a x b x c a Absortividad Especifica
b Camino ptico
c Concentracin del Absorbente
DESPEJANDO TENDRIAMOS:
C = A /b x a
CALCULO DE CONCENTRACION DE LAS MUESTRAS:
TUBO DE CALCULO DE LA
ENSAYO CONCENTRACION
N 1 0
N2 C= 1.077/ (2.34X O.15) = 3.06
N3 C= 1.017 / (2.34 X0.16) = 2.71
N4 C=1.086 /(2.34 X0.15) =3.09
N5 C= 1.15 / (2.34 X 0.15) =3.27
N6 C=1.037 /(2.34 X 0.16)=2.76
N7 C= 0.941 / (2.34X 0.16) =2.51
N 8 C= 1.298/ (2.34 X 0.15) =3.69
DISCUSIN
Para el anlisis de muestra se necesit que los

huevos sean los ms frescos dentro del total, ya que
la albmina se encuentra en su esplendor cuando
esta en este estado. Tambin se debe analizar que el
reactivo de Biuret debe estar en condiciones ptimas o
podra haber complicaciones a la hora del anlisis. En
nuestro caso, el anlisis tuvo 4 errores que despus
se redujo a 3 gracias a que hubo un intercambio de
muestra (huevo), con esto pudimos concluir que, a pesar
de ser un huevo fresco, puede haber ciertos
problemas a la hora del anlisis.
VII- CONCLUSIONES
El conocer el adecuado uso del fotocolormetro permiti obtener en el laboratorio resultados

con alta calidad analtica en las mediciones emitidas por este.
La absorcin de luz y la intensidad de la misma, estn determinadas por los grupos funcionales
y los enlaces que presentan la molcula proteica, (ovoalbmina).
Las muestras se deben combinar con otras sustancias (reactivo de Biuret) que le permita
colorearse para que as puedan ser determinadas su Absorbancia por fotocolorimetra.
Se calcul la curva de absorcin, con los datos obtenidos en laboratorio.
VIII.-RECOMENDACIONES
-Tratar en lo posible que las medidas de albumina, agua y reactivo de
biuret sean exactas a las que se les indica.
-Al momento de agitar el tubo con bagueta de tal manera de que no

salgan burbujas y sobre todo tener cuidado de no quebrar el tubo.
-Cuando se le agregue el reactivo de biuret a los tubos inmediatamente

taparlos con las bolsas de plsticos ya que la solucin es muy sensible a
la luz ultravioleta.
IX.-BIBLIOGRAFIA
X.-CUESTIONARIO
3.-Qu tipo de detectores se utilizan en fotocolormetros y espectrofotmetros?
DETECTORES DE RADIACION
Los primeros detectores fueron el ojo humano y las pelculas o placas

fotogrficas, posteriormente se han sustituido por transductores que
convierten la energa radiante en una seal elctrica. El detector ideal debe
responder a un amplio rango de longitudes de onda, tener alta sensibilidad,
una elevada relacin entre la seal/ruido, una respuesta constante. Adems,
la seal producida debe ser proporcional a la potencia y amplificarle. Se
utilizan dos tipos de detectores, los que responden a los fotones y los que
responden al calor.
DETECTORES DE FOTONES
Cuando la radiacin incide sobre el detector puede producir un

desprendimiento de electrones (efecto fotoelctrico) o promover electrones
a otros niveles energticos (fotoconduccin). Existen diferentes tipos de
detectores de fotones:
Clulas fotovoltaicas: Al incidirle la radiacin electromagntica al

ctodo promueve electrones a niveles energticos ms altos,
provocando huecos que favorecen el paso de corriente elctrica. Se
utilizan en la zona visible.
Detectores semiconductores: Al igual que los anteriores se basan en
la fotoconduccin. Sensibles al infrarrojo cercano. Ampolla de vidrio
nodo Ctodo Luz Clula fotoelctrica A
Fototubos: Constan de un ctodo semicilndrico y un nodo. Cuando
le llega la radiacin al ctodo se desprenden electrones. Aplicando
una diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo se crea una
corriente elctrica. Se utilizan en la regin ultravioleta-visible.

Fotomultiplicadores: Como los anteriores se basan en el efecto

fotoelctrico. Llevan ctodos adicionales llamados dnodos que
vuelven a emitir ms electrones amplificando la seal. 3.4.2.
Detectores de calor.
DETECTORES TERMICOS
compuestos por un cuerpo negro que absorbe toda la radiacin que le llega
aumentando su temperatura que es lo que medimos. Se utiliza sobre todo
en el infrarrojo. Existen varios tipos de detectores de calor:
Termopar: Consiste en dos metales unidos por dos puntos, uno

protegido de la radiacin electromagntica y otro expuesto a ella por
lo que aumenta su temperatura. Entre las dos uniones se genera un
potencial que vara dependiendo de la diferencia de temperatura.
Bolmetro o termmetro de resistencia: Compuesto por materiales
que forman un puente elctrico y presentan un cambio de resistencia
relativamente grande con los cambios de temperatura. luz Ctodo
200V 400V 100V 300V 500V e- Fotomultiplicador
Clulas de Golay o termmetro de gas: Compuesto por un gas
encerrado en un compartimento de pared elstica, al llegar la
radiacin el gas aumenta su temperatura y por lo tanto aumenta el
volumen provocando cambios en la pared elstica. Esto hace que se
modifique el haz de radiacin sobre un espejo y eso es lo que se
mide.

Universidad Nacional Del Callao

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Universidad Nacional Del Callao

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Ao del Buen Servicio al Ciudadano

DETERMINACION FOTOCOLORIMETRICAS DE LA OVOALBULINA

La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar la

La luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al detector. Las mediciones fotomtricas

Es una regin muy estrecha pero la ms importante, ya que

A su vez, se subdivide en seis intervalos que definen los

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en el anlisis

COMPONENTES DEL ESPECTROFOTOMETRO:

El monocromador asla las radiaciones de longitud de onda deseada que

Est constituido por las rendijas de entrada y salida,

Es donde tiene lugar la interaccin con la materia (debe

El detector es el encargado de captar la radiacin y, a su vez, dejarla en evidencia para su

a) los que responden a fotones;

b) los que responden al calor.

En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16

Celdas de espectofotometra. En un primer plano, dos de cuarzo

Son los recipientes donde se depositan las muestras lquidas a

LA MEDIDA DE LA DENSIDAD OPTICA (D.O)

De las soluciones se leen en una escala

CALCULO DE LA CONCENTRACION DE UNA MUESTRA

1.-METODO DEL FACTOR DE CALIBRACION

Se conoce como factor de calibracin a la cantidad de una sustancia (en peso) de

Se obtiene dividiendo la concentracin del estndar entre su lectura:

2.-METODO DE LA CURVA DE ABSORCION

Este mtodo consiste en utilizar varios mtodos estndares

Es un marco de referencia que se construye de cantidades

Es un grfico que permite conocer la cantidad de

LEY DE LAMBERT LEY DE BEER

La Absorbancia de una especie en solucin homognea es

Es de mucha utilidad en el laboratorio bioqumico porque

Podemos definir absorbancia como la cantidad

COEFICIENTE DE EXTICION MOLAR

Es una medida de la cantidad de luzabsorbida por unidad de

El espectro de absorcin de una materia muestra la fraccin

La curva de calibracin es un mtodo muy utilizado en

LIMITACIONES DE LA LEY DE LAMBERT-BEER

Es una ley limite (<0.01 M)

A concentraciones mayores >0.01 M la distancia promedio entre las especies disminuye

El solvente debe ser el mismo en la muestra y estandar .

Debe ser homogenea no debe tener particular de suspension

Debe ser el mismo y permanecer constantemente tanto en patrones como en la

Al formarse complejos pueden deviar el maximo de absorcion de lamuestra por analizar

Determinar la concentracin de protenas en una muestra biolgica es una tcnica de rutina

Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de

a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz en el UV,

b) para la formacin de derivados qumicos

c) la capacidad que tienen las protenas de unir ciertos colorantes.

grupos responsables de tal caracterstica son los aminocidos aromticos (Tirosina y

acuerdo a su composicin aminoacdica entre 0,4-1,5. Como aproximacin se puede

Abs280nm . E280nm = C, si E280nm se considera = 1

Si la solucin de protenas contiene DNA y/o RNA se introduce un error en la

medicin, dado que estos absorben a 280 nm.

A dicha longitud de onda absorbe la unin peptdica, por lo tanto es un mtodo ms

sensible y no dependiente de los aminocidos que componen la protena en estudio.

tambin absorben a esa longitud de onda.

Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los

1Cu2+ se acompleja con 4 NH.

La intensidad de coloracin es directamente

La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda

La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula

-Detectar la concentracin de una muestra de protena por fotocolorimetra

-Adquirir destreza en el majeo del fotocolormetro y en la manipulacin del

-Desarrollar habilidad para desarrollar anlisis y para la sntesis oral y escrita