Resistensi intrinsik bakteri gram negatif

Bakteri gram negatif umumnya lebih tahan terhadap antiseptik dan disinfektan daripada
bakteri bakteri gram positif non sporulasi, bakteri gram positif non mikobakteri (Gambar 2).

Contoh MIC terhadap organisme gram positif dan negatif disajikan pada Tabel 6.

Berdasarkan data, ada perbedaan yang mencolok dalam sensitivitas S. aureus dan E. coli
terhadap QAC (benzalkonium, benzethonium, dan cetrimide), hexachlorophene , diamidin, dan
triclosan namun sedikit perbedaan pada kerentanan chlorhexidine. P. aeruginosa jauh lebih tahan
terhadap sebagian besar agen tersebut, termasuk chlorhexidine, dan Proteus spp. memiliki
resistansi di atas rata-rata terhadap agen kationik seperti klorheksidin dan QAC.
 Membran luar bakteri gram negatif bertindak sebagai penghalang yang membatasi
masuknya beberapa jenis zat antibakteri. Hal ini didasarkan pada sensitivitas relatif stafilokokus
dan bakteri gram negatif. Bakteri wild type dan smooth type serta mutan kasar (heptose-less)
memiliki permukaan sel yang hidrofobik. Mutan ini cenderung hipersensitif terhadap antibiotik
dan desinfektan hidrofobik. Molekul hidrofilik yang memiliki berat molekul rendah (Mr < 600)
dengan mudah melewati pori ke dalam sel gram negatif, namun molekul hidrofobik menyebar di
lapisan luar membran (Tabel7). Pada bakteri gram negatif wild type, molekul LPS yang utuh
mencegah akses molekul hidrofobik ke fosfolipid dan kemudian ke bagian dalam sel.

Selain jalur masuk hidrofilik dan hidrofobik, telah diusulkan untuk jalur ketiga masuknya
agen kationik seperti QAC, biguanidies, dan diamidines. Diklaim bahwa agen kationik merusak
membran luar, sehingga menyebabkan dapat terserap ke dalam bakteri. Polycation mengacaukan
membran luar E. coli. Akan tetapi QAC dan diamidin kurang aktif melawan strain wild type
daripada melawan strain kasar, sedangkan klorheksidin memiliki urutan aktivitas yang sama
(MIC meningkat sekitar 2 sampai 3 kali lipat) terhadap kedua jenis strain E. coli. Namun, mutan
S. typhimurium lebih sensitif terhadap klorheksidin strain kasar daripada wild type.
Bakteri gram negatif yang menunjukkan tingkat resistensi yang tinggi terhadap banyak
antiseptik dan desinfektan meliputi P. aeruginosa, Burkholderia cepacia, Proteus spp., dan
Providencia stuartii. Membran luar P. aeruginosa bertanggung jawab pada resistansi tinggi;
dibandingkan dengan organisme lain karena ada perbedaan komposisi LPS dan kandungan
kation membran luar. Kandungan Mg2+ yang tinggi membantu dalam menghasilkan link LPS-
LPS yang kuat. Selain itu, karena ukurannya yang kecil, pori mungkin tidak mengizinkan
terjadinya difusi. B. cepacia sering jauh lebih tahan di lingkungan rumah sakit dibandingkan
dengan media kultur artifisial. Kandungan arabinosa terkait fosfat yang tinggi dalam LPS-nya
menurunkan afinitas membran luar untuk antibiotik polymyxin dan molekul kationik serta
polikasi lainnya. Sebaliknya, Pseudomonas stutzeri sangat sensitif terhadap banyak antibiotik
dan desinfektan, yang menyiratkan bahwa agen semacam itu memiliki sedikit kesulitan dalam
menyebrangi outerlayer sel organisme ini.
Anggota genus Proteus selalu tidak peka terhadap klorheksidin. Beberapa strain yang
sangat resisten terhadap klorheksidin, QAC, EDTA, dan diamidin telah diisolasi dari sumber
klinis. Adanya tipe LPS membran luar yang kurang asam bisa menjadi faktor pendukung
resistensi intrinsik ini.
Sebuah masalah terutama beberapa anggota genus Providencia adalah P. stuartii. Seperti
strain Proteus spp., P. stuartii telah diisolasi dari infeksi saluran kemih pada pasien paraplegis
dan resisten terhadap berbagai tipe antiseptik dan desinfektan termasuk klorheksidin dan QAC.
Strain P.stuartii yang menunjukkan resistansi rendah, menengah, dan tinggi terhadap
klorheksidin membentuk dasar serangkaian studi mekanisme resistensi (s). Perbedaan kotor
komposisi lapisan luar dari strain ini tidak terdeteksi, dan disimpulkan bahwa (i) perubahan halus
dalam susunan struktural sel envelop dari strain ini dikaitkan dengan resistensi ini dan (ii)
membran dalam tdk terlibat.
Beberapa penulis telah menganggap peptidoglikan dalam bakteri gram negatif sebagai
penghalang potensial untuk masuknya zat penghambat. Kandungan peptidoglikan dari organisme
ini jauh lebih rendah daripada stafilokokus, yang secara inheren lebih sensitif terhadap banyak
antiseptik dan desinfektan. Namun demikian, ada contoh di mana organisme gram negatif yang
ditanam pada konsentrasi subinhibitor penisilin memiliki hambatan permeabilitas yang tidak
pasti. Lebih jauh lagi, telah diketahui selama bertahun-tahun bahwa spheroplast yang diinduksi
penisilin dan enzim "lopozyme-EDTA-Tris" dari bakteri gram negatif cepat dilisis oleh agen
aktif-membran seperti klorheksidin. Bisa dibayangkan bahwa sifat membentang dari membran
luar dan dalam pada organisme yang diobati dengan b-laktam dapat berkontribusi pada
peningkatan kerentanan ini.
Kemungkinan ada bahwa membran sitoplasma (dalam) menyediakan satu mekanisme
resistensi intrinsik. Membran ini terdiri dari lipoprotein dan diharapkan dapat mencegah difusi
pasif molekul hidrofilik. Hal ini juga diketahui bahwa perubahan komposisi membran
mempengaruhi sensitivitas terhadap etanol. Lannigan dan Bryan mengusulkan bahwa penurunan
kerentanan Serratia marcescens terhadap klorheksidin dikaitkan dengan membran dalam, namun
Ismaeel dkk tidak dapat menemukan peran tersebut dengan P. stuartii yang tahan chlorhexidine.
Saat ini, hanya ada sedikit bukti yang mempengaruhi membran dalam resistensi biosida. Selain
itu, degradasi klorheksidin dilaporkan untuk S. marcescens, P. aeruginosa, dan Achromobacter /
Alcaligenes xylosoxidans.

Fisiologis (fenotipik) adaptasi sebagai mekanisme intrinsik.

Kumpulan mikroorganisme dengan permukaan padat mengarah pada biofilm, yang
didefinisikan sebagai konsorsium organisme yang diorganisasikan dalam exopolymer
exopolysaccharide yang ekstensif. Biofilm dapat terdiri dari monokultur, beberapa spesies
beragam, atau fenotip campuran dari spesies tertentu. Tersedia beberapa publikasi bagus yang
berhubungan dengan alam, formasi, dan kandungan biofilm. Biofilm penting karena beberapa
alasan, terutama biokorosi, berkurangnya kualitas air, dan fokus pada kontaminasi produk
higienis. Kolonisasi juga terjadi pada biomaterial dan peralatan medis implan, yang
mengakibatkan tingkat infeksi meningkat dan kemungkinan kambuhnya infeksi.
Bakteri di berbagai bagian biofilm memperoleh nutrisi lingkungan yang berbeda, dan
sifat fisiologisnya terpengaruh. Di kedalaman sebuah biofilm, misalnya, keterbatasan nutrisi
cenderung mengurangi tingkat pertumbuhan, yang dapat mempengaruhi kerentanan terhadap
agen antimikroba. Dengan demikian, fenotipe organisme polip sessile dalam biofilm sangat
berbeda dari sel plankton yang ditemukan di laboratorium. Bakteri yang tumbuh lambat sangat
tidak dapat diserap.
Beberapa alasan dapat menjelaskan berkurangnya sensitivitas bakteri dalam biofilm
(Tabel 8). Mungkin ada (i) mengurangi akses desinfektan (atau antibiotik) ke sel-sel di dalam
biofilm, (ii) interaksi kimia antara desinfektan dan biofilm itu sendiri, (iii) modulasi lingkungan
mikro, (iv) produksi enzim degradatif (Dan menetralisir bahan kimia), atau (v) pertukaran
genetik antar sel dalam film biologis. Namun, bakteri yang tercemar dari media tanam dan media
penyemaian umumnya tidak tahan dibandingkan sel planktonik biasa dari spesies tersebut.

Beberapa contoh diketahui adanya kontaminasi larutan antiseptik atau desinfektan oleh
bakteri. Misalnya, Marrie dan Costerton menggambarkan kelangsungan hidup S. marcescens
yang berkepanjangan dalam larutan klorheksidin 2%, yang dikaitkan dengan pembentukan bahan
makanan ini yang mengandung jamur yang menempel pada dinding wadah penyimpanan.
Kesimpulan serupa dicapai oleh Hugo dkk mengenai kelangsungan hidup B. cepacia pada
klorheksidin dan oleh Anderson dkk mengenai kontaminasi antiseptik iodophor dengan
Pseudomonas. Dalam studi oleh Anderson et al., Biofilm Pseudomonas ditemukan pada
permukaan interior pipa polivinil klorida yang digunakan selama pembuatan antiseptik
providone-iodine. Perlu ditanyakan apakah alasan serupa dapat diajukan untuk kontaminasi oleh
S. marcescens dari larutan benzalkonium chloride yang terlibat dalam meningitis. Baru-baru ini,
sebuah strategi baru dideskripsikan untuk mengendalikan biofilm melalui pembangkitan
hidrogen peroksida pada antarmuka permukaan biofilm daripada hanya menerapkan desinfektan
secara ekstrinsik. Dalam prosedur ini, permukaan kolini dengan katalis menghasilkan senyawa
aktif dari agen perlakuan.
Patogen gram negatif dapat tumbuh sebagai biofilm dalam kantung kemih dan mampu
bertahan dalam konsentrasi klorheksidin yang efektif melawan organisme pada individu yang
tidak bereputasi. Menariknya, agen permeabilitas EDTA hanya memiliki efek potensial
sementara di kandung kemih dengan kateter, dengan pertumbuhan bakteri yang kemudian
berulang. B. cepacia yang baru saja diisolasi dari lingkungan rumah sakit seringkali jauh lebih
tahan terhadap klorheksidin dibandingkan saat ditanam di media kultur artifisial, dan glikosidik
dapat dikaitkan dengan resistensi intrinsik terhadap bisbiguanida. Legionella pneumophila sering
ditemukan di sistem distribusi air rumah sakit dan menara pendingin. Klorinasi yang
dikombinasikan dengan pemanasan terus menerus (60 C) air masuk biasanya merupakan
ukuran desinfeksi yang paling penting; Namun, karena produksi biofilm, organisme yang
terkontaminasi mungkin kurang rentan terhadap perawatan ini. Peningkatan resistensi terhadap
klorin telah dilaporkan untuk Vibriocholerae, yang mengekspresikan eksoksi sakarida amorf
yang menyebabkan agregasi sel (morfologi rugosa) tanpa kehilangan patogenisitas.
Seseorang dapat mencapai kesimpulan tertentu tentang biofilm. Interaksi bakteri dengan
permukaan bersifat reversibel dan akhirnya tidak dapat diubah. Adhesi ireversibel diprakarsai
oleh pengikatan bakteri ke permukaan melalui polimer glycocalyx exopolysaccharide. Sel induk
kemudian timbul oleh pembelahan sel dan terikat dalam matriks glikocalyx. Perkembangan
mikrokontroler yang patuh diprakarsai, sehingga akhirnya sebuah biofilm berkelanjutan
diproduksi di permukaan yang terjajah. Bakteri dalam biofuel ini berada di lingkungan mikro
spesifik yang berbeda dengan sel yang tumbuh dalam kondisi laboratorium normal dan dengan
demikian menunjukkan variasi respons mereka terhadap antiseptik dan desinfektan.
Epidemi nosokomial baru-baru ini karena M. chelonae, M. tuberculosis dan HCV
menggarisbawahi pentingnya pembentukan senyawa pseudo-biofilm dalam kontaminasi
fiberoptic scope yang fleksibel. Wabah ini dikaitkan dengan pembersihan ruang yang tidak
memadai, yang kemudian mengkompromikan sterilisasi dengan glutaraldehida. Sementara
organisme ini tidak membentuk spesies biofuel sejati, tindakan cross-linking glutaraldehyde
dapat menyebabkan penumpukan residu yang tidak larut dan mikroorganisme terkait pada ruang
lingkup dan dalam reprocessors otomatis.
Biofilm memberikan contoh paling penting tentang bagaimana adaptasi fisiologis
(fenotipik) dapat berperan dalam memberikan perlawanan intrinsik. Contoh lainnya juga
diketahui. Sebagai contoh, sel ganas S. aureus yang diproduksi oleh subkultur yang mengandung
zat pengemas yang mengandung zat pembawa biokimiawi terhadap alkil fenol dan
benzilpenisilin daripada strain tipe wild. Subkultur sel-sel ini dalam media kultur rutin
menghasilkan pembalikan sensitivitas. Kultur planktonik tumbuh dalam kondisi keterbatasan
nutrisi atau tingkat pertumbuhan yang rendah memiliki sel dengan sensitivitas yang berubah
terhadap desinfektan, mungkin sebagai konsekuensi modifikasi di membran luarnya. Selain itu,
banyak mikroorganisme aerobik telah mengembangkan sistem pertahanan intrinsik yang
memberi toleransi terhadap tekanan peroksida (khususnya H2O2) secara in vivo. Respon
oksidatif atau respons SOS yang telah diteliti telah dipelajari dengan baik di E. coli dan
Salmonella dan mencakup produksi enzim penetral untuk mencegah kerusakan sel (termasuk
peroksidase, katalase, glutathione reduktase) dan untuk memperbaiki lesi DNA (misalnya
eksonuclease III ). Pada kedua organisme tersebut, peningkatan toleransi dapat diperoleh dengan
perlakuan awal dengan dosis subinhibit hidrogen peroksida. Pretreatment menginduksi
serangkaian protein, banyak di antaranya berada di bawah kontrol positif protein sensor /
pengatur (OxyR), termasuk katalase dan glutathione reduktase dan protein non-penting lainnya
yang terakumulasi untuk melindungi sel. Resistensi silang terhadap panas, etanol, dan asam
hipoklorosa juga telah dilaporkan. Respon stres oksidatif pada bakteri gram positif kurang
dipelajari, namun toleransi Bacillus terhadap H2O2 telah dijelaskan bervariasi selama fase
pertumbuhan dan pada strain mutan. Mekanisme pertahanan inducible serupa dijelaskan untuk
Campylobacter jejuni, Deinococcus, dan Haemophilus yang mengembang. Namun, tingkat
toleransi yang meningkat terhadap H2O2 selama respons stres oksidatif mungkin tidak memberi
perlindungan yang signifikan terhadap konsentrasi yang digunakan pada antiseptik dan
desinfektan (umumnya> 3%). Sebagai contoh, mutan B.subtilis telah dijelaskan lebih tahan pada
~0,5% H2O2 dibandingkan strain wild type pada ~0,34% H2O2.

Mekanisme perolehan resistensi bakteri

Seperti antibiotik dan obat kemoterapi lainnya, resistensi yang didapat terhadap antiseptik dan
desinfektan dapat timbul baik mutasi atau perolehan bahan genetik dalam bentuk plasmid atau
transposon. Penting untuk dicatat bahwa "resistensi" sebagai istilah sering dapat digunakan
secara longgar dan dalam banyak kasus harus diinterpretasikan dengan beberapa kehati-hatian.
Hal ini terutama berlaku dengan analisis MIC. Tidak seperti antibiotik, "resistensi", atau
peningkatan MIC biosida, tidak harus berkorelasi dengan kegagalan terapeutik. Peningkatan
MIC antibiotik dapat memiliki konsekuensi yang signifikan, yang sering mengindikasikan bahwa
organisme target tidak terpengaruh oleh tindakan antimikrobanya. Peningkatan MIC biosida
karena mekanisme yang diperoleh juga telah dilaporkan dan dalam beberapa kasus disalahartikan
sebagai indikasi resistensi. Penting bahwa isu-isu termasuk tindakan pleiotropik sebagian besar
biosida, aktivitas bakterisida, konsentrasi yang digunakan dalam produk, aplikasi produk
langsung, efek formulasi, dan lain-lain, dipertimbangkan dalam mengevaluasi implikasi klinis
dari laporan ini.

Plasmid dan resistensi bakteri terhadap antiseptik dan desinfektan.

Chopra meneliti peran plasmid dalam mengkodekan resistensi (atau peningkatan toleransi)
terhadap antiseptik dan desinfektan; Topik ini dianggap lebih jauh oleh Russell. Disimpulkan
bahwa terlepas dari beberapa contoh spesifik seperti perak, logam lain, dan organomercurial,
plasmid biasanya tidak bertanggung jawab atas peningkatan resistensi antiseptik atau desinfektan
yang terkait dengan spesies atau strain tertentu. Sejak itu, ada banyak laporan yang
menghubungkan adanya plasmid pada bakteri dengan toleransi tochlorhexidine, QACs, dan
triclosan yang meningkat, serta diamidin, akridin dan etidium bromida, dan topik tersebut
dipertimbangkan kembali (Tabel 9).
 Resistansi terstruktur plasmid terhadap antiseptik dan disinfektan pada suatu waktu telah
diselidiki secara ekstensif dengan senyawa perak, senyawa perak, dan kation dan anion lainnya.
Mercurial tidak lagi digunakan sebagai desinfektan, namun garam fenilkurik dan tioferal masih
digunakan sebagai pengawet pada beberapa jenis produk farmasi. Ketahanan terhadap merkuri
adalah plasmid yang ditanggung, dapat diinduksi, dan dapat ditransfer melalui konjugasi atau
transduksi. Merkuri anorganik (Hg21) dan resistensi organomkury adalah sifat umum isolat
klinis S.aureus yang mengandung plasmid penisilin. Plasmid yang memberikan perlawanan
terhadap merkuri adalah spektrum sempit, menentukan ketahanan terhadap Hg21 dan beberapa
organomercurial, atau spektrum luas, dengan ketahanan terhadap senyawa di atas dan pada
tambahan organomercuria. Garam perak masih digunakan sebagai agen antimikroba topikal.
Resistensi yang dikodekan plasmid terhadap perak telah ditemukan di Pseudomonas stutzeri,
anggota Enterobacteriaceae, dan Citrobacter spp. Mekanisme resistensi belum dijelaskan secara
lengkap namun mungkin terkait dengan akumulasi perak.