DETERMINACIN DE FSFORO EN HARINA DE ARVEJA

RESUMEN

La presente prctica se realiz en los Laboratorios de Qumica de la Universidad

Tcnica Particular de Loja, con la finalidad de determinar el fsforo presente en
una muestra de harina de arveja. El fsforo se encuentra presente en alimentos en
forma de fosfatos, reaccionando con el reactivo molibdato de amonio y
metavanadato de amonio lo cual origina un compuesto de color amarillo
denominado fosfomolibdovanadato de amonio el cual se mide en un
espectrofotmetro a 400 nm. La determinacin de fsforo se realiz tomando
3,001 g de muestra de harina la cual fue incinerada previamente para obtener
cenizas; posteriormente fueron diluidas en10 ml de solucin de HCL 1:5 y aforadas
a 100ml, de Para realizar la curva de calibrado se utiliz ocho estndares de 0.25;
0.5; 1;2.5; 5; 10; 15 y 25 ppm. Estos estndares fueron preparados a partir de una
solucin patrn de 1000 ppm de fsforo, se calcul el volumen requerido para
cada estndar, se agreg 5 ml de reactivo de color, se afor a 25 ml y de igual
forma se dej reaccionar por 10 minutos. Las muestras fueron ledas en el
espectrofotmetro UV visible a una longitud de onda de 400 nm. La curva de
calibrado obtuvo un coeficiente de correlacin R2 = 0.9432. Finalmente se obtuvo
0.0007188, 0.0006083 y 0,0001038 ppm de fsforo para las muestras de 2, 5 y
10 ml.

Palabras clave: Fsforo, molibdato de amonio, metavanadato de amonio,

coeficiente de correlacin, espectrofotmetro.

ABSTRACT

This practice was conducted in the Laboratories of Chemistry, Technical University

of Loja, in order to determine the phosphorus present in a sample of wheat
flour. Phosphorus is found in foods as phosphate, reacting
with ammonium molybdate reagent and ammonium metavanadate which
produces a yellow compound named ammonium fosfomolibdovanadato which is
measured in a spectrophotometer at 400 nm. The determination of phosphorus
was made on 3,001 g of flour sample which was previously burned for ashes were
later en10 ml diluted 1:5 HCL solution and volumetrica100ml. To perform the
calibration curve was used eight standards of 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 15 and 25
ppm. These standards were prepared from a stock solution of 1000 ppm of
phosphorus, calculated the required volume for each standard was added 5 ml of
color reagent was diluted to 25 ml and similarly allowed to react for 10
minutes. Samples were read in the visible UV spectrophotometer at a wavelength
of 400 nm. The calibration curve obtained a correlation
coefficient R2 = 0.9432. Finally it was 0.0007188, 0.0006083 and 0,0001038
ppm phosphorus for samples of 2, 5 and 10 ml.

Keywords: Phosphorus, ammonium molybdate, ammonium metavanadate,

correlation coefficient, spectrophotometer.
INTRODUCCIN
Fsforo (1)
El fsforo presente en forma de
fosfatos en los alimentos, reacciona
con el reactivo llamado molibdato de
amonio y metavanadato de amonio lo
cual origina un compuesto de color
amarillo denominado
fosfomolibdovanadato de amonio. La
cantidad de compuesto formada es
directamente proporcional a la
cantidad de fsforo presente en la
muestra. La medicin de la cantidad de
fosfomolibdovanadato formado se mide
en un espectrofotmetro calibrado a
una longitud de onda de 400
nanmetros.
(2)
Espectrofotometra
Medicin cuantitativa de las
propiedades de reflexin o transmisin
de un material en funcin de la
longitud de onda.
Espectrofotometra implica el uso de
un espectrofotmetro. Un
espectrofotmetro es un fotmetro que
puede medir la intensidad como una
funcin de la longitud de onda fuente
de luz. Las caractersticas importantes
de espectrofotmetros son ancho de
banda espectral y el rango lineal de
medicin de la absorcin o reflexin.
Un espectrofotmetro se usa
comnmente para la medicin de la
transmitancia o reflectancia de
soluciones, slidos transparentes u
opacos, tales como vidrio pulido, o de
gases. Sin embargo, tambin pueden
ser diseados para medir
la difusividad en cualquiera de los
rangos de luz listadas que cubren por
lo general alrededor de 200nm -
2500nm utilizando diferentes controles
y calibraciones . Dentro de estos
intervalos de luz, las calibraciones se
necesitan en la mquina utilizando
estndares que varan en escriba en
funcin de la longitud de onda de
la determinacin fotomtrica.
Fig.1-Espectrofotometro UV visible
(2) (3)
Espectrofotometra UV visible
Los espectrofotmetros ms comunes
se utilizan en los UV y visibles las
regiones del espectro, y algunos de
estos instrumentos tambin operan en
el cercano infrarrojo regin.
La regin visible de 400-700
nanmetros en la espectrofotometra
se utiliza ampliamente en
colorimetra. Los fabricantes de tintas Las muestras se preparan
de impresin, empresas, proveedores habitualmente en cubetas ,
de textiles, y muchos ms, necesitan dependiendo de la regin de inters,
los datos proporcionados a travs de la que puede estar construido
colorimetra. Se toman lecturas en la de vidrio , plstico , o de cuarzo .
regin de cada 5-20 nanmetros a lo
largo de la regin visible, y producir
una reflectancia espectral curva o una
secuencia de datos para 1. MATERIALES Y MTODOS
presentaciones alternativas. Estas
curvas se pueden utilizar para probar PREPARACIN DE MATERIAL PARA
un nuevo lote de colorante para CENIZAS
comprobar si tiene un partido a las Los 2 crisoles fueron colocados en la
especificaciones, por ejemplo, las mufla a 500oC durante 30 minutos, con
normas de impresin ISO. una pinza se coloc los crisoles en el
desecador durante 15 minutos.
Tradicionales espectrofotmetros
regin visible no puede detectar si un
colorante o el material de base tienen
fluorescencia. Esto puede hacer que
sea difcil de manejar problemas de
color si, por ejemplo una o ms de las
tintas de impresin es fluorescente. FIG. 2: crisoles vacos dentro del
Cuando un colorante contiene desecador
fluorescencia, un espectrofotmetro
fluorescente bi-espectralse utiliza. Hay PREPARACIN DE LA MUESTRA
dos configuraciones principales para PARA CENIZAS
espectrofotmetros espectro visual,
D/8 (esfrica) y 0/45. Los nombres se Se pes en uno de los crisoles 3,001gr
deben a la geometra de la fuente de de la muestra (harina de arveja), en la
luz observador, y el interior de la ventana de la mufla se coloc el crisol
cmara de medicin. Los cientficos
hasta quemar la muestra teniendo en
utilizan este instrumento para medir la
cuenta que no deba observarse la
cantidad de compuestos en una
salida de humos.
muestra. Si el compuesto es ms
concentrado ms ser absorbida por la
OBTENCIN DE CENIZAS
muestra; dentro de los rangos
pequeos, la ley de Beer-
Se coloc en la mufla la muestra
Lambert sostiene y la absorbancia
incinerada a 600oC hasta obtener
entre las muestras vara con la
concentracin lineal. En el caso de las cenizas permaneciendo
mediciones de impresin dos aproximadamente 2 a 3 horas
configuraciones alternativas se utilizan observando que la muestra tuviera un
comnmente-con/sin filtro UV para color blanquecino-grisceo.
controlar mejor el efecto de
abrillantadores UV dentro de la pasta
de papel.
Fig. 3: Incineracin de muestras en la
mufla
Una vez obtenidas las cenizas
nuevamente se colocaron en un
desecador hasta el da en que se
realiz la prctica.
FIG.4: mezclando el reactivo de color
PREPARACIN DE REACTIVOS
SOLUCIONES ESTANDARES DE
FOSFORO
HCl 1:5
En un baln de aforo se coloc 16,7 ml
Blanco de estndar
de HCl y se afor con agua destilada.
En un baln de 25ml se aadi 5ml de
reactivo de color y se afor.
1 ml HCl 6 ml Estndar de 0.25ppm
1 ml HCl 6 ml
X Con una micropipeta se tom 6.25L
X 100 ml
100 ml de la solucin patrn de 1000ppm, se
X= 16,7 ml
X= 16,7 ml aadi 5ml de reactivo de color, y se
afor en un baln de 25ml.
Solucin de molibdato de V1=C2V2/C1
amonio V1=0,25ppm*25ml/1000
Se pes 15g de molibdato de amonio, ppm
los cuales fueron disueltos en agua V1= (6.25x10-3ml)*1x103
destilada previamente calentada, y V1= 6.25 l
aforada en 250ml.
Estndar de 0.50ppm
Solucin de metavanadato de Con una micropipeta se tom 12.5L
amonio de la solucin patrn de 1000ppm, se
Se pes 0,375g de metavanadato de aadi 5ml de reactivo de color, y se
amonio, los cuales fueron disueltos en afor en un baln de 25ml.
agua destilada previamente calentada, V1=C2V2/C1
se aadi 75 ml de HNO 3 y se afor en V1=0,50ppm*25ml/1000
250ml. ppm
V1= (0.0125ml)*1x103
PREPARACIN DEL REACTIVO DE V1= 12.5 l
COLOR
Estndar de 1.00ppm
Se mezcl la solucin del molibdato de Con una micropipeta se tom 25L de
amonio con la solucin de la solucin patrn de 1000ppm, se
metavanadato de amonio, formndose aadi 5ml de reactivo de color, y se
una solucin de color ligeramente afor en un baln de 25ml.
amarillenta. V1=C2V2/C1
V1=1.00ppm*25ml/1000
1 ml HCl 6 ml ppm
V1= (0.025ml)*1x103
X 100 ml
V1=25 l
X= 16,7 ml
 Estndar de 25.00ppm
Con una micropipeta se tom 625L de
la solucin patrn de 1000ppm, se
aadi 5ml de reactivo de color, y se
Estndar de 2.5 ppm afor en un baln de 25ml.
Con una micropipeta se tom 62.5 L
de la solucin patrn de 1000ppm, se
aadi 5ml de reactivo de color, y se
afor en un baln de 25ml.
V1=C2V2/C1
V1=C2V2/C1
V1=2,5ppm*25ml/1000
V1=25ppm*25ml/1000
ppm
ppm
V1= (0.0625ml)*1x103
V1= (0.625)*1x103
V1=62.5 l
V1= 625 l
Estndar de 5.00ppm
Con una micropipeta se tom 125L de
la solucin patrn de 1000ppm, se
aadi 5ml de reactivo de color, y se
afor en un baln de 25ml.
V1=C2V2/C1
V1=5ppm*25ml/1000 Fig. 5 Estndares preparados
ppm
V1= (0.125ml)*1x103 PREPARACION DE LAS CENIZAS
V1= 125l
En el crisol se coloc 10ml de la
Estndar de 10.00ppm
solucin de HCl, esta solucin fue
Con una micropipeta se tom 250L de
aforada en un baln de 100 ml (el
la solucin patrn de 1000ppm, se
mismo procedimiento se realizo para el
aadi 5ml de reactivo de color, y se
crisol vaco, blanco de muestra.
afor en un baln de 25ml.
V1=C2V2/C1
V1=10ppm*25ml/1000p PREPARACIN DE LA MUESTRA
pm PARA LA DETERMINACIN DE
V1= (0.25ml)*1x103 FOSFORO
V1=250 l
Para el blanco de muestra, tomamos
5ml de la solucin en un baln de
Estndar de 15.00ppm
25ml, se aadi 5ml del reactivo de
Con una micropipeta se tom 375L de color y se afor con agua destilada.
la solucin patrn de 1000ppm, se Tanto a los estndares como a las
aadi 5ml de reactivo de color, y se diferentes muestras fueron recubiertas
afor en un baln de 25ml. con papel aluminio, (ya que son
V1=C2V2/C1 sensibles a la luz) y se dejaron en
V1=15ppm*25ml/1000 reposo por 30mminutos
ppm aproximadamente para que
V1= (0.375ml)*1x103 reaccionen.
V1= 375 l
LECTURA DE ABSORBANCIA
0,25 0.09 0,014
8
0,5 0.12 0,052
3
1 0.15 0,099
8
2.5 0.29 0,400
7
5 0.50 0,866
FIG.6: parte interna del
8
espectrofotmetro
10 0.89 1,145
3
Se prende el equipo con 30min de
15 1.75 1.677
anticipacin una vez transcurrido este
tiempo y ya con los estndares y 3
muestras listas se puede leer la 25 1,9
1,871
absorbancia. 47
Antes de leer se fij la longitud de onda
en el equipo que fue de 400nm, Curva de calibrado
posterior a ello se coloc cada uno de
las muestras en cubetas, stas se Segn las absorbancias alcanzadas con
colocaron verticalmente en el los estndares se obtuvo la curva de
espectrofotmetro (UV- Visible) y se calibracin la misma que nos dio un
procedi a la lectura de cada una de valor de R2 = 0,9432 mostrndonos la
las muestras, primero se ley el blanco linealidad de la curva
de estndares, seguido de los 8
estndares, despus el blanco de
muestra y por ltimo las muestras.

DISCUSIN DE Curva de Calibrado

RESULTADOS
f(x) = 0.08x + 0.04
Absorbancia R = 0.94 Linear ()
Determinacin del coeficiente de
la curva de calibracin. 0 20 40
Concentracin ppm
Concentra Abs Abs. real
cin (n
(ppm) m)
blanco 0,07
6 Cuantificacin de la concentracin
de fsforo en harina de arveja.

W Volu Alc Volu Se Con

de men uota men FD al cent
400 mue de (ml) de 400 raci
stra afor afor nm n
(g) o o (pp
origi final m)
 nal cantidad desconocida de soluto, y una
(ml)
(ml) que contiene una cantidad conocida de
Blan 0.07 la misma sustancia.
- 25 -
co 8
12.5 0.42 0.34
3 2 25
3 5 En esta prctica se pudo cumplir
50
3 5 25
5 0.81 0.73 positivamente con los objetivos
4 6 propuestos, los cuales fueron:
2.5 2.57 2.49 Determinar el efecto de la cantidad
3 10 25
0 2
de reactivo de molibdovanadato
siendo directamente proporcional a
la cantidad de fsforo presente en
la muestra
Para determinar la concentracin final Cuantificar la concentracin de
de fsforo utilizamos la siguiente fsforo en una harina, teniendo
concentraciones insignificantes en
C0 FD Aforo la harina de arveja
ppm P=
Wm Verificar la curva de calibracin,
frmula: teniendo una curva lineal con un
valor de R= 0.9432, la cual nos
indica que los estndares no fueron
tan bien preparados.

PREGUNTAS
0.345 12.5 0.5
ppm P2= Por qu debemos realizar las
3000
lecturas en la longitud de onda
sealada por la tcnica?
ppm P2=0,0007188
Porque la tcnica nos indica que a 400
nanmetros el haz de luz detecta el
0.73 5 0.5
ppm P5= fosforo de la muestra indica.
3000
Qu nos indica el coeficiente de
correlacin en la curva de
ppm P5=0,0006083
calibracin?

2.49 2.5 0.5 El coeficiente de correlacin es un

ppm P10= estadstico que proporciona
3000
informacin sobre la relacin lineal
existente entre dos variables.
ppm P10=0,0001038
Bsicamente, esta informacin se
refiere a dos caractersticas de la
CONCLUSIONES relacin lineal: la direccin o sentido y
la cercana o fuerza.
Se concluy que
la espectrofotometra es el mtodo Cul es el efecto del reactivo de
molibdato en el resultado final?
de anlisis ptico ms usado en las
investigaciones qumicas y biolgicas. El fsforo inorgnico reacciona con
La cual determina molibdato de amonio en un medio
la radiacin absorbida o transmitida de cido para formar un complejo de
una solucin que contiene una
fosfomolibdato que absorbe a una
longitud de onda
Cul es el principio de la
metodologa AOAC 970.39?
El principio de esta metodologa es la
determinacin de fsforo en frutas y
productos frutales mediante el mtodo
MOLIBDOVANADATO
ESPECTROFOTOMTRICO
La muestra utilizada cumple con
los requisitos de las normas?
No se puede hacer comparaciones de
nuestros resultados con los datos de
ninguna norma debido a que no se
encuentra registro en las normas INEN
acerca del contenido de fsforo en
harinas de arveja.
REFERENCIAS
BIBLIOGRAFA
(1) MARTINEZ, Juan. Prctica de
determinacin de fsforo. Blog en
lnea, enlace permanente
http://nutricionanimalpracticas.blog
spot.com/2010/04/practica-no-12-
determinacion-de-fosforo.html
(2) Allen, D., Cooksey, C., &Tsai, B.
(2010, 05 de
octubre). Espectrofotometra. Obten
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http://www.nist.gov/pml/div685/grp
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(3) Schwedt, Georg. (1997). La gua
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Analtica. (Brooks Haderlie,
trad.).Chichester, Nueva York: Wiley.
(Trabajo original publicado en
1943).
(4) Universidad Autnoma de Madrid.
Qumica Analtica Instrumental. En
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http://www.uam.es/personal_pdi/cie
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