UNIVERSIDAD DEL CAUCA

Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educacion

Departamento de Quimica
Laboratorio de Bioquimica
I Periodo de 2011

Pruebas Generales para Aminocidos y Protenas

David Alejandro Mera Benavides1, Mnica Alexandra Rodrguez Burbano1, Daniel Mauricio Sarmiento Torres1
1
Ingenieria Ambiental, Facultad de Ingeniera Civil, Universidad del Cauca, Carrera 2 con Calle 15 Norte Esquina, Sector
Tulcn - Edificio de Ingenieras, Popayn, Cauca, Colombia

Recibido: 4 de Abril de 2011

Resumen
En la prctica de laboratorio, se usaron distintas pruebas para la caracterizacin de aminocidos tales como: la
prueba Xantoprotica, la de Biuret, la de Nihidrina, Hopkins-Cole, Ehrlich. Esto con el fin de ver las
caractersticas y propiedades de las pruebas y de los aminocidos estudiados. La muestra problema en la
prctica, es el triptfano, aunque haya dado negativo para la prueba de Ehrlich.
Palabras claves: estructuras de aminocidos, pruebas de cualificain de aminocidos
Abstract
In the actual laboratory, different tests for the characterization from amino acids were used such as: the
Xantoprotica test, the one of Biuret, the one of Nihidrina, Hopkins-Cole, Ehrlich. This with the purpose of to
see the characteristics and properties of the tests and the studied amino acids. The sample problem actually, is the
triptfano, although it has given negative for the test of Ehrlich.
Key words: structures of amino acids, tests of cualificain of amino acids

Introduccin: proteica. Se basan en reacciones tpicas de los aminocidos

dependiendo de la estructura de stos y con eso lleva a la
Los aminocidos forman parte de todas las clulas de los
distinta coloracin o incoloracin de las sustancias.
seres vivos, y participan en muchas reacciones bioqumicas
del cuerpo. Los aminocidos son los componentes de las
protenas de tejidos estructurales del cuerpo, y son
esenciales para la vida. Desempean un papel importante en Objetivos:
funciones de neurotransmisores, regulacin del factor pH,
metabolismo del colesterol, control del dolor y de Reconocer la presencia de Aminocidos y
inflamacin y en los procesos de desintoxicacin. La Protenas en una muestra a travs de la realizacin
medicin de de cualificacin y cuantificacin de de pruebas generales bioqumicas de
aminocidos es una parte integral de toda evaluacin identificacin.
metablica y alimenticia.
Conocer la importancia y sus principales
caracterstica de los Aminocidos y Protenas en
Las protenas son compuestas de carbono, oxigeno Bioqumica.
hidrogeno y nitrgeno. La mayora de ellas contienen
adems azufre, y algunos fsforos. Sus molculas son de Consultas Preliminares:
proporciones coloidales, todas son muy complejas
molecularmente y tienen alto peso molecular. La molcula
proteica esta compuesta de una combinacin de 1. Aminocidos Esenciales y no Esenciales:
aminocidos por condensacin. Las pro teosas, peptonas,
pptidos y aminocidos son derivados de las protenas De los 20 aminocidos que se combinan para formar las
formados en sntesis e hidrlisis. protenas, algunos pueden ser sintetizados por el organismo,
por lo que se denominan no esenciales (alanina, arginina,
cido asprtico, asparragina, cistena, cido glutmico,
Hay ciertas reacciones coloreadas que dan las protenas y
glutamina, glicina, prolina, serina y tirosina). Hay otros, los
dependen de los aminocidos presentes en la molcula
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denominados aminocidos esenciales o indispensables que, S26: En caso de contacto con los ojos, lvense
sin embargo, no pueden ser sintetizados por el hombre por inmediata y abundantemente con agua y acdase a
lo que tienen que ser aportados por los alimentos, por la un mdico.
dieta, condicionando su esencialidad. Estos son: histidina, S30: No echar jams agua a este producto.
isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, treonina,
triptfano y valina. La arginina puede ser esencial para los S45: En caso de accidente o malestar, acdase
nios muy pequeos ya que sus requerimientos son mayores
inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele
que su capacidad para sintetizar este aminocido. Hay
la etiqueta).
tambin dos aminocidos no esenciales que se forman a
partir de otros esenciales: cistena (y cistina) a partir de
Hidrxido de Sodio:
metionina y tirosina a partir de fenilalanina. Si la dieta no
R35: Provoca quemaduras graves.
aporta suficiente cantidad de fenilalanina o si el organismo
no puede transformar la fenilalanina en tirosina por algn
motivo -como sucede en la enfermedad hereditaria S26: En caso de contacto con los ojos, lvense
denominada fenilcetonuria-, entonces la tirosina se inmediata y abundantemente con agua y acdase a
convierte en esencial. un mdico.
S37/39: sense guantes adecuados y proteccin
2. Frases R y S: para los ojos/la cara.

Acido Ntrico: S45: En caso de accidente o malestar, acdase

R35: Provoca quemaduras graves. inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele
la etiqueta).
S23: No respirar los
gases/humos/vapores/aerosoles [denominacin(es) Acido Sulfanilico:
adecuada(s) a especificar por el fabricante]. R36: Irrita los ojos.
S26: En caso de contacto con los ojos, lvense R38: Irrita la piel.
inmediata y abundantemente con agua y acdase a R43: Posibilidad de sensibilizacin en contacto
un mdico. con la piel.
S36/37/39: sense indumentaria y guantes S24: Evtese el contacto con la piel.
adecuados y proteccin para los ojos/la cara. S37: sense guantes adecuados.

S45: En caso de accidente o malestar, acdase Hidrxido de Amonio:

inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele R34: Provoca quemaduras.
la etiqueta).
R50: Muy txico para los organismos acuticos.
Sulfato Cprico: S26/37/39: sense indumentaria y guantes
R22: Nocivo por ingestin. adecuados y proteccin para los ojos/la cara.
R36/38: Irrita los ojos y la piel.
S22: No respirar el polvo. S45: En caso de accidente o malestar, acdase
inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele
la etiqueta).
Ninhidrina:
S61: Evtese su liberacin al medio ambiente.
R22: Nocivo por ingestin.
Recbense instrucciones especficas de la ficha de
R36/37/38: Irrita los ojos, la piel y las vas
datos de seguridad.
respiratorias.
Acido Actico:
Acido Sulfrico: R10: Inflamable.
R35: Provoca quemaduras graves. R35: Provoca quemaduras graves.
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S23: No respirar los S45: En caso de accidente o malestar, acdase

gases/humos/vapores/aerosoles [denominacin(es) inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele
adecuada(s) a especificar por el fabricante]. la etiqueta).
S26: En caso de contacto con los ojos, lvense
inmediata y abundantemente con agua y acdase a Datos y Resultados:
un mdico.
S36/37/39: sense indumentaria y guantes
adecuados y proteccin para los ojos/la cara.

S45: En caso de accidente o malestar, acdase

inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele
La etiqueta).

Nitrito de Sodio:
R8: Peligro de fuego en contacto con materias
combustibles.
R25: Txico por ingestin.

Tabla #1: Resultados de las pruebas de coloracin de Aminocidos y Protenas.

PRUEBA XANTOPROTEICA BIURET NINHIDRINA HOPKINS - COLE EHRLICH

Ovoalbumina +(Amarillo) + + (Violeta) + + (Rojo)

Gelatina - (Incolora) + - (Incolora) - - (Naranja Oscuro)

Asparagina - (Incolora) + + (Naranja) - -(Naranja)

Histidina - (Incolora) - + (Violeta) - + (Rojo)

Triftofano +(Naranja) - + (Azul Oscuro) + + (Rojo)

Muestra Problema +(Naranja) - + (Violeta) + -(Naranja)

Agua - (Incolora) - - (Incolora) - - (Naranja)

Identificacin de Muestra Triptfano Prueba Xantoprotica

problema: Algunos aminocidos contienen grupos aromticos que
derivan del benceno. Una reaccin caracterstica del
benceno y sus derivados, es la nitracin del benceno con
Anlisis y Discusion cido ntrico. Los aminocidos tirosina y triptfano
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contienen anillos aromticos activos (lo que indica que

pueden nitrarse). El aminocido fenilalanina tambin tiene
en su estructura un anillo aromtico pero no est activado,
por lo tanto no va por el proceso de nitracin fcilmente.

La reaccin de nitracin, cuando se usa para identificar la

presencia de un benceno activo, es llamada la prueba
xantoprotica. Es llamada xantoprotica porque la palabra
xantoprotica viene de la palabra griega xanthos , que
significa amarillo. El producto de la reaccin es amarillo.
La intensidad del color depende si la reaccin ocurre en una
solucin bsica. Esta reaccin tambin ocurre cuando se
derrama cido ntrico en la piel. Las protenas de la piel que
contienen tirosina y triptfano, se vuelven amarillas porque
se nitratan.

En la prctica del laboratorio, la prueba dio positivia para la
muestra problema, el triptfano y la la albmina.
Este resultado es debido a que en la estructura del triptfano
se encuentra un anillo aromtico:
(fig 2. Estructura de la fenilalanina)
Reaccin de biuret
Al llevar a cabo esta reaccin se noto un cambio de color
para la albumina, gelatina y la asparagina, el color al que
cambio fue violeta, mientras que para los restantes se torno
azul. La presencia de protenas en una solucin se puede
determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo de
Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina gracias a
la presencia de NaOH . La reaccin se basa en la formacin
de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de
un complejo de coordinacin entre los iones Cu 2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma
parte de los enlaces peptdicos.

(Figura 1. Estructura del triptfano)

O C C O
En la albmina tambin da positiva la prueba ya que en su
estructura contienen aminocidos como la leucina, H N N H
isoleucina, lisina, fenilalanina, treonina, triptfano y valina.
De los cuales la fenilalanina (fig 2.) y el triptfano tienen un R C H H C R
anillo aromtico, por lo tanto reaccionara con estos dos C u2+
aminocidos para que de una coloracin amarilla. En la O C C O
muestra problema, la prueba nos di positiva; indicando que
en la sustancia desconocida, se encuentra un anillo H N N H
aromtico.
R C H H C R
En las dems muestras, nos dio negativa. Esto se debe a que
ninguna de las dems muestras posee un anillo aromtico en
su estructura.
La gelatina, aasparagina y albumina poseen enlaces
peptidicos y protenas para las cuales la prueba debera ser
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positiva, las dems soluciones dan negativas ya que estas produciendo el anillo coloreado caracterstico de esta
muestras no presentan pptidos ni protenas. prueba.
Con las soluciones de gelatina, asparagina, histidina, y agua
Prueba de Ninhidrina la prueba dio negativa, pero con la albumina, el triptfano y
la muestra problema se evidencio la formacin del anillo
El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos indolico, por lo que esta ultima debe tener como uno de sus
coloreados con la ninhidrina: violeta azuloso en la mayora componentes el triptfano.
de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo
para la prolina e hidroxiprolina y caf para la asparagina
que tiene un grupo amino en la cadena lateral. Esta reaccin
tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes en
pptidos y protenas.

- Ovoalbumina: La prueba es postiva, en la gran cadena

larga de aminocidos, esta protena contiene a lo largo de
su cadena de aminocidos grupos amino el cual es primario.
-
- Gelatina: La prueba es negativa, la gelatina esta compuesta
de colgeno, la cual no contiene en su estructura grupos
aminos, por tanto es incolora a esta prueba.
-
- Asparagina: La prueba es postiva, dando un color naranja o
amarillo oscuro, es color tenue entre el color caf tambin,
esto demuestra que la Asparagina contiene un grupo amino
en la cadena lateral.
-
- Histidina: La prueba es positiva, este aminocido contiene
un grupo amino en uno de sus extremos. Prueba de Ehrlich
-
- Triftofano: La prueba es positiva, al igual que la La presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados
Ovoalbumina, la Asparagina y la Histidina, este aminocido en la cadena lateral de los Aminocidos se puede identificar
contiene un grupo amino en su estructura. mediante la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de Sodio
- por formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas
- Muestra Problema permitiendo as detectar la presencia de Tirosina e Histidina
- La prueba es positiva, para seguir constryendo la estructura libres o formando pptidos y protenas.
de este aminoacido o protena, un elemento que la
constituye, es un grupo amino en su cadena. Ovoalbumina: La prueba es positiva, demostrando asi la
- presencia de aniilos fenolicos o nitrogenados, ambos
- Agua: La prueba es negativa, por no ser un aminoacido o provenientes de benceno, en la cadena de aminocidos de
una protena, obviamente adems de su estructura, no esta protena.
contiene ningn grupo amino en su estructura, su formula
Gelatina: La prueba es negativa, observndose un color
como se sabe es H2O.
peculiar naranja oscuro, como se muestra el colgeno no
contiene anillos fenolicos o nitrogenados.
Reaccin de Hopkins-Cole
Asparagina: La prueba es negativa, este aminoacido no
El resultado positivo de esta prueba se puede evidenciar con contiene en su estructura ningn anillo fenolico o
el anillo indolico que degrada el aminocido triptfano a nitrogenado.
Indol produciendo compuestos de color rojizo- anaranjado. Histidina: La prueba es positiva, debido a que la prueba de
A diferencia del triptfano, el Indol es soluble en el alcohol Elrich identifica en protenas, aminoacidos como la
y slo este compuesto reaccionar con el aldehdo Histidina y la Tirosina, por lo tanto esta prueba da un colo
rojo intenso.
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Triftofano: La prueba es positiva, fuerte color rojo, el

triftofano en su estrucura contiene un anillo nitrogenado.
Muestra Problema: La prueba es negativa, esta proteinao
aminocido no contiene ningn anillo nitrogenado o
fenolico.
Agua: La prueba es negativa, el agua no contiene en su
estructura anillos organicos de ningn tipo.

Identificacin de la muestra problema

Se estableci que la muestra problema era una solucin con
el aminocido triptfano. Esto se debe a lo siguiente:
En la prueba de la nihidrina, se obtuvo que es positiva, por
2. Reaccin con la albmina:
lo tanto deba ser una protena, un polipptido o un
aminocido ya que estos tienen grupos amino.
La muestra problema dio negativa para el test de Biuret,
indicando que se trata de un aminocido y no de una
protena o un polipptido. Esto se debe a que da positiva
para las sustancias con enlaces peptdicos las cuales son
protenas y polipptidos.
Sabiendo que es un aminocido, la prueba Xantoprotica
nos ayuda a determinar ms especficamente qu tipo de
aminocido es. La muestra dio positiva, indicando que en la
estructurta de la muestra problema, se encuentra un anillo
aromtico. Por lo tanto, el aminocido puede ser la
fenilalanina, tirosina o triptfano.
Cuando En la prueba de Hopkins-Cole, di positiva para la
muetra problema, se pudo determinar que el aminocido es
triptfano. Esto se debe a que esta prueba da positiva
3. Las protenas que dan positivo para la prueba de
especficamente para el aminocido triptfano ya que en la
Hopkins-Cole son las protenas que contengan el
prueba, se evidencia la presencia del anillo indolico,
aminocido triptfano ya que la prueba da positiva
indicando que se ha degradado el aminocido triptfano.
indicando un anillo indlico cuando hay presencia de este
La prueba de Ehrlich dio positiva con el triptfano ya que aminocido
ste contienen un anillo nitrogendo (fig 1.). Pero con la
muestra problema, di negativa, indicando una
contradiccin. Esto se puede deber a que al ser la ltima
prueba que se realizara, tuvo ms probabilidad de que sta
Conclusiones
fuera contaminada o que los materiales utilizados estuviesen
ms propensos al ser contaminados con otros reactivos y/o Existen diferentes pruebas para la identificacin de
sustancias usadas en la prctica. protenas y aminocidos que permiten establecer un
resultado positivo o negativo de acuerdo a las caractersticas
y composicin de cada una de ellas, evidenciado en
Preguntas Complementarias: coloraciones, presencia de anillos, etc. Se establecieron las
caractersticas de estas pruebas para la identificin
1.
cualitativa de sustancias que pueden contener aminocidos,
protenas o pptidos. Y cuando se usan varias pruebas en la
muestra, se pueden determinar ciertas sustancias en
especfico

El aminocido de la muestra problema fue el triptfano.
Aunque en la prueba de Ehrich haya dado negativo, esto se
debe a la contaminacin de la muestra problema y
materiales usados en la prctica.
Bibliografa:
http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales
%20PDF/EXPERIMENTO%202%20IDENT%20AA
%2006-04.pdf visitado el 01 de Abril de 2011
Pruebas Generales de Aminoacidos y Proteinas
http://www.cerlabs.com/experiments/10875404480.pdf
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http://es.scribd.com/doc/2309987/Proteinas-y-sus-
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visitado el 02 de Abril de 2011
GRANADOS Jairo Enrique, y GARCA Anselmo. fsico
qumica aplicada. primera edicin. Editorial Unisur. Santa
fe de Bogot, Colombia, 1995. pgs. 351-377, 383.