UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI EKSTRAK

BUAH PARIJOTO (Medinilla speciosa Blume)

MENGGUNAKAN METODE DIFUSI CAKRAM

SKRIPSI

LUKLUATUN NISWAH

1110102000032

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

SEPTEMBER 2014

i UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI DARI EKSTRAK
BUAH PARIJOTO (Medinilla speciosa Blume)
MENGGUNAKAN METODE DIFUSI CAKRAM

SKRIPSI
Diajukan sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Far)

LUKLUATUN NISWAH
1110102000032

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

SEPTEMBER 2014

ii
iii
iv
v
 ABSTRAK

Nama : Lukluatun Niswah

Program Studi : Farmasi
Judul : Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Buah Parijoto (Medinilla
speciosa Blume) Menggunakan Metode Difusi Cakram

Parijoto (Medinilla speciosa Blume) adalah tanaman tropis yang mempunyai buah
berwarna merah muda keunguan. Penelitian terdahulu menyebutkan bahwa, buah
tanaman ini mempunyai kandungan senyawa tanin, saponin, flavonoid dan
glikosida serta mempunyai aktivitas antioksidan yang tinggi. Uji aktivitas
antibakteri dari ekstrak metanol, etil asetat dan n-heksana buah parijoto ini
dilakukan dengan metode difusi cakram. Ketiga ekstrak buah parijoto lebih aktif
terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dibandingkan dengan bakteri
Escherichia coli ATCC 25922. Pada konsentrasi 200, 100, 50, 25, 12,5mg/mL
ekstrak etil asetat mempunyai aktivitas antibakteri lebih besar daripada ekstrak
metanol dan ekstrak n-heksana dengan diameter hambat 17,67; 16,33; 15,67; 14,67;
13,33mm terhadap bakteri S. aureus dan 12,33; 11,33; 10,67; 9; 8mm terhadap
bakteri E. coli.

Kata kunci : Medinilla speciosa Blume, antibakteri, difusi cakram

vi
 ABSTRACT

Name : Lukluatun Niswah

Program Study : Pharmacy
Title : Antibacterial Activity Assay of Parijoto (Medinilla speciosa
Blume) Fruit Extract by Disc Diffusion Method

Parijoto (Medinilla speciosa Blume) is tropic plant that has pink-purplish fruit. In
the previous research, this fruit has tannin, saponin, flavonoid and glicoside
compounds and also has high antioxidant activity. This assay of antibacterial
activity of methanol, ethyl acetate and n-hexane extracts of parijoto fruit were
determined by disc diffusion method. These extracts were more active against
Staphylococcus aureus ATCC 25923 than Escherichia coli ATCC 25922. Ethyl
acetate extract was more active than methanol and n-hexane extracts at
concentration 200, 100, 50, 25, 12,5mg/mL with diameter zone inhibition 17,67;
16,33; 15,67; 14,67; 13,33mm to S. aureus bacteria and 12,33; 11,33; 10,67; 9;
8mm to E. coli bacteria.

Keywords : Medinilla speciosa Blume, antibacterial, disc diffusion

vii
 KATA PENGANTAR

Alhamdulillah, segala puji bagi Allah SWT atas segala nikmat dan limpahan
rahmat-Nya sehingga saya dapat menyelesaikan penelitian dan penulisan skripsi.
Serta shalawat dan salam selalu tercurahkan kepada baginda Rasul Muhammad
SAW yang membawa petunjuk dan penerang bagi umat manusia, semoga kita
mendapat syafaat beliau.

Skripsi dengan judul Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak Buah

Parijoto (Medinilla speciosa Blume) Menggunakan Metode Difusi Cakram ini
disusun untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi
di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas
Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.

Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak,
dari masa perkuliahan hingga penyusunan skripsi ini terasa sulit bagi penulis untuk
menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terima kasih
kepada:

1. Prof. Dr. Atiek Soemiati, M.S., Apt selaku pembimbing pertama dan Ibu
Puteri Amelia, M.Farm., Apt selaku pembimbing kedua, yang memiliki
andil besar dalam proses penelitian hingga penulisan skripsi saya ini,
semoga semua bantuan dan bimbingan yang Ibu berikan mendapat imbalan
yang lebih baik disisi Nya.
2. Kementrian Agama RI yang telah memberikan beasiswa sehingga penulis
bisa menempuh pendidikan di Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran
dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.
3. Drs. Umar Mansur, M.Sc. selaku Kepala Program Studi Farmasi dan Ibu
Ofa Suzanti Betha, M.Si., Apt selaku dosen Penasehat Akademik yang telah
banyak memberikan dukungan moril kepada penulis.
4. Bapak dan Ibu staf pengajar dan karyawan yang telah memberikan
bimbingan dan bantuan selama saya menempuh pendidikan di Program
Studi Farmasi

viii
 5. Kedua orang tua, Bapak Abdul Khafid dan Ibu Siti Rohmah yang selalu
memberikan doa, dukungan, dan ketenangan hati dengan nasihat-
nasihatnya; adik-adikku M. Adib Nuril Mubin, Ahmad Rifai, dan terutama
adik tersayang M. Ali Ridlo yang selalu dengan senang hati memberikan
bantuan, terutama saat pengumpulan sampel dari Desa Colo serta Ahmad
Noor Solikhin, S.H.I. yang selalu memberikan semangat dan berbagi
pengalaman.
6. Teman-teman angkatan 2010 ANDALUSIA, terkhusus untuk teman-
teman terbaik : Ninik, Rifa, Farida, Finti, Yanti, Liana, Nurul, Citra, Chaya,
Maya, Hanny, Deisy, Desti yang selalu menemani dan mengobati
kegalauan dengan memberi keceriaan dari awal perkuliahan sampai
selesainya penulisan skripsi ini.

Penulis sepenuhnya menyadari bahwa skripsi ini masih banyak kekurangan dan
jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu dengan segala kerendahan hati, penulis
mengharapkan kritik dan saran yang membangun demi kesempurnaan skripsi ini
Penulis berharap skripsi ini dapat bermanfaat dan dapat memberi sumbangan
wawasan bagi pembaca, terutama di Prodi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta.

Ciputat, 17 September 2014

penulis

ix
x
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................................ ii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ............................................... iii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................. iv

HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ...............................................................v

ABSTRAK .......................................................................................................... vi

ABSTRACT ....................................................................................................... vii

KATA PENGANTAR ....................................................................................... viii

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .........................x

DAFTAR ISI ....................................................................................................... xi

DAFTAR GAMBAR..........................................................................................xiv

DAFTAR TABEL ............................................................................................... xv

DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................xvi

BAB 1 PENDAHULUAN .....................................................................................1

1.1 Latar Belakang ......................................................................................1

1.2 Rumusan Masalah .................................................................................2

1.3 Tujuan Penelitian...................................................................................2
1.4 Manfaat Penelitian .................................................................................2
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................3

2.1 Medinilla speciosa Blume .....................................................................3

2.1.1 Klasifikasi Tanaman .....................................................................3
2.1.2 Sinonim Medinilla speciosa Blume ...............................................3
2.1.3 Deskripsi Tanaman .......................................................................3
2.1.4 Tempat Tumbuh ...........................................................................4

2.1.5 Kandungan Kimia .........................................................................4

2.1.6 Khasiat .........................................................................................4

xi
 2.2 Ekstraksi ...............................................................................................5
2.2.1 Pengertian Ekstrak ........................................................................5
2.2.2 Metode Ekstraksi ..........................................................................5
2.3 Pewarnaan Bakteri.................................................................................6

2.4 Bakteri Patogen .....................................................................................7

2.4.1 Staphylococcus aureus ..................................................................7

2.4.2 Escherichia coli ............................................................................8

2.5 Antibiotik ..............................................................................................8

2.6 Metode Skrining Antimikroba ...............................................................9

2.6.1 Metode Difusi ............................................................................. 10
2.6.2 Metode Dilusi ............................................................................. 10
2.6.3 Metode Bioautografi ................................................................... 11
2.7 Konsentrasi Hambat Minimum ............................................................ 11

BAB 3 METODE PENELITIAN ....................................................................... 12

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian .............................................................. 12

3.2 Alat dan Bahan .................................................................................... 12

3.2.1 Alat ............................................................................................ 12
3.2.2 Bahan ......................................................................................... 12
3.3 Cara Kerja ........................................................................................... 13
3.3.1 Determinasi Tanaman ................................................................. 13
3.3.2 Penyiapan Bahan ........................................................................ 13
3.3.3 Pembuatan Ekstrak ..................................................................... 13

3.3.4 Partisi Ekstrak Metanol ............................................................... 13

3.3.5 Uji Kadar Air Ekstrak ................................................................. 14
3.3.6 Penapisan Fitokimia .................................................................... 14
3.3.7 Skrining Antibakteri ................................................................... 16
3.3.7.1 Pembuatan Media dan Sterilisasi ..................................... 16
3.3.7.2 Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Uji................................. 16

xii
 3.3.7.3 Kontrol Positif dan Kontrol Negatif ................................ 17
3.3.7.4 Pembuatan Suspensi Bakteri ........................................... 17
3.3.7.5 Prosedur Uji Antibakteri ................................................. 17
3.3.7.6 Pewarnaan Bakteri Uji .................................................... 18
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................ 19

4.1 Determinasi Tanaman ......................................................................... 19

4.2 Ekstraksi dan Partisi ............................................................................ 19

4.3 Penapisan Fitokimia ............................................................................ 21

4.4 Uji Antibakteri .................................................................................... 22

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 27

5.1 Kesimpulan ......................................................................................... 27

5.2 Saran ................................................................................................... 27

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 28

LAMPIRAN

xiii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Tanaman Parijoto (Medinilla speciosa Blume) .....................................4

Gambar 4.1 Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol terhadap Bakteri S. aureus dan
E. coli ............................................................................................... 24

Gambar 4.2 Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat terhadap Bakteri S. aureus
dan E. coli ....................................................................................... 25

Gambar 4.3 Aktivitas Antibakteri Ekstrak n-heksana terhadap Bakteri S. aureus dan
E. coli .............................................................................................. 25

xiv
 DAFTAR TABEL

Tabel 1.1 Perbedaan Bakteri Gram-Positif dan Gram-Negatif ................................7

Tabel 4.1 Karakterisasi Ekstrak ............................................................................ 20

Tabel 4.2 Berat Ekstrak n-heksana, Etil Asetat dan Metanol ................................. 20

Tabel 4.3 Hasil Uji Kadar Air .............................................................................. 21

Tabel 4.4 Hasil Uji Penapisan Fitokimia Ekstrak n-heksana, Etil Asetat dan
Metanol ................................................................................................ 21

Tabel 4.5 Hasil Pengukuran Diameter (mm) Zona Hambat Ekstrak Metanol, Buah
Parijoto terhadap bakteri S. aureus dan E. coli ...................................... 23

Tabel 4.6 Hasil Pengukuran Diameter (mm) Zona Hambat Ekstrak Etil Asetat Buah
Parijoto terhadap Bakteri S. aureus dan E. coli ...................................... 23

Tabel 4.7 Hasil Pengukuran Diameter (mm) Zona Hambat Ekstrak n-heksana Buah
Parijoto terhadap Bakteri S. aureus dan E. coli ..................................... 24

xv
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman Parijoto (Medinilla speciosa Blume)

Lampiran 2. Bagan Alur Kerja Ekstraksi dan Uji Antibakteri Ekstrak Buah
Tanaman Parijoto (Medinilla speciosa Blume)

Lampiran 3. Hasil Uji Antibakteri Ekstrak Buah Parijoto (Medinilla speciosa

Blume) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

Lampiran 4. Skrining Fitokimia Ekstrak Buah Parijoto (Medinilla speciosa Blume)

xvi
 BAB 1
PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Indonesia merupakan negara tropis yang memiliki keanekaragaman hayati
tinggi. Hal tersebut seharusnya menjadi aset yang perlu digali sehingga dapat
dimanfaatkan. Tanaman dari genus Medinilla adalah tanaman yang tumbuh di
daerah tropis. Salah satu diantaranya adalah Medinilla speciosa. Di Indonesia
tanaman ini dikenal dengan nama daerah parijoto yang merupakan salah satu
tanaman khas dari Desa Colo-Kudus, Jawa Tengah. Tanaman parijoto tumbuh
di lereng-lereng gunung, di hutan dan sekarang sudah mulai dibudidayakan
sebagai tanaman hias (Wibowo et al, 2012; Maria, 2012).
Parijoto adalah tanaman perdu khas, daunnya melengkung, tunggal, dan
bersilang berhadapan; buahnya berwarna merah muda keunguan dan rasanya
asam dan sepat. Secara tradisional, buah parijoto biasa digunakan sebagai obat
sariawan sedangkan daunnya dapat digunakan sebagai obat antiradang.
Masyarakat sekitar daerah Colo, kabupaten Kudus percaya bahwa ibu hamil
yang mengkonsumsi buah parijoto ini anak yang dilahirkan akan terlihat cakap
jika laki-laki dan cantik jika perempuan (Wibowo et al, 2012).
Pada penelitian sebelumnya, disebutkan bahwa buah tanaman parijoto ini
mempunyai kandungan senyawa tanin, flavonoid, saponin dan glikosida
(Wachidah, 2013). Kemudian Wachidah (2013) juga melaporkan bahwa
ekstrak metanol buah tanaman parijoto ini mempunyai kandungan antioksidan
yang cukup tinggi.
Xia JinYao et al (2009) melaporkan sembilan tanaman herbal Cina dari
provinsi Yunnan yang salah satu diantaranya adalah Medinilla luchuenensis
mempunyai nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dengan rentang 0,78-
12,50 mg/mL terhadap bakteri E. coli. Sedangkan Guo-Ying Zuo et al (2011)
menyebutkan bahwa Medinilla luchuenensis mempunyai nilai KHM sebesar
3,12 mg/mL terhadap bakteri E.coli.
Dengan adanya persamaan genus dengan tanaman Medinilla luchuenensis,
diasumsikan bahwa tanaman parijoto juga mempunyai kandungan senyawa

1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 2

antibakteri. Untuk itu perlu dilakukan penggalian lebih lanjut terhadap

bioaktivitas kandungan kimia dari tanaman parijoto. Hal inilah yang
melatarbelakangi penelitian uji aktivitas antibakteri dari ekstrak buah parijoto.

1.2 Rumusan Masalah

1. Belum diketahuinya aktivitas antibakteri dari ekstrak buah parijoto
(Medinilla speciosa Blume) terhadap bakteri Gram-negatif Escherichia
coli dan bakteri Gram-positif Staphylococcus aureus.
2. Manakah dari ketiga ekstrak (metanol, etil asetat dan n-heksana) buah
parijoto (Medinilla speciosa Blume) yang mempunyai aktivitas tertinggi
terhadap bakteri Gram-negatif Escherichia coli dan bakteri Gram-positif
Staphylococcus aureus.

1.3 Tujuan Penelitian

Dari rumusan masalah di atas, tujuan penelitian ini adalah sebagai berikut :
1. Untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak buah parijoto (Medinilla
speciosa Blume) terhadap bakteri Gram-negatif Escherichia coli dan
bakteri Gram-positif Staphylococcus aureus dengan metode Difusi
Cakram.
2. Untuk mengetahui ekstrak buah parijoto (Medinilla speciosa Blume)
manakah yang mempunyai aktivitas tertinggi terhadap bakteri Gram-
negatif Escherichia coli dan bakteri Gram-positif Staphylococcus aureus.

1.4 Manfaat Penelitian

1. Penelitian ini dapat memberikan informasi ilmiah mengenai potensi
aktivitas ekstrak n-heksana, etil asetat, dan metanol dari buah tanaman
Medinilla speciosa Blume sebagai antibakteri
2. Dapat dijadikan dasar penelitian lebih lanjut yang berhubungan dengan
aktivitas antibakteri di bidang kesehatan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 3

BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Medinilla speciosa Blume

2.1.1 Klasifikasi tanaman
Klasifikasi tanaman Medinilla speciosa Blume adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae
Filum : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Myrtales
Famili : Melastomataceae
Genus : Medinilla
Spesies : Medinilla speciosa Blume
(GBIF, 2013)

2.1.2 Sinonim Medinilla speciosa Blume

Medinilla speciosa (Reinw. ex Blume) Blume, Melastoma speciosum
Reinw. ex Blume (GBIF, 2013).

2.1.3 Deskripsi Tanaman

Parijoto merupakan tanaman perdu dengan tinggi 1-2m; batang
berbentuk bulat, kulit mempunyai lapisan gabus jika tua, bergerigi, kasar,
putih kecoklatan; daun berupa daun tunggal, bersilang berhadapan, tangkai
pendek, bulat, lunak, warna ungu kemerahan, helai daun berbentuk
lonjong, pangkal dan ujung daun runcing, tepi rata, panjang 10-20cm,
lebar 5-15cm, pertulangan daun melengkung, permukaan atas licin,
berwarna hijau, permukaan bawah kasar, warna hijau kelabu; berbunga
majemuk, terletak di ketiak daun, bunga sempurna, kelopak 5 helai, ujung
runcing, pangkal berlekatan, panjang 3-8mm, benang sari 2 kali lipat
jumlah mahkota, kepala sari berupa kuncup membengkok, kepala putik
duduk di atas bakal buah, kepala putik bulat, ungu, mahkota lepas, 5 helai,
panjang 5-8mm, warna merah muda; buah bulat, bagian ujung berbenjol

3 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3
 4

bekas pelekatan kelopak, diameter 5-8mm, warna merah keunguan; biji

berbentuk bulat, kecil, jumlah banyak, berwarna putih; akar berupa akar
serabut, berwarna putih kotor (Anonim, 2014).

Gambar 2.1 Tanaman Parijoto (Medinilla speciosa Blume)

[Sumber : Koleksi Pribadi, Februari 2014; www.plantillustrations.org]

2.1.4 Tempat Tumbuh

Medinilla speciosa tumbuh liar di lereng-lereng gunung atau dihutan-
hutan dan kadang dibudidayakan sebagai tanaman hias, tumbuh baik pada
tanah yang berhumus tinggi dan lembab pada ketinggian 800-2300m di
atas permukaan laut, berbunga pada bulan November-Januari dan waktu
panen yang tepat bulan Maret-Mei (Anonim, 2014).

2.1.5 Kandungan Kimia

Daun dan buah parijoto mengandung saponin dan kardenolin, di
samping itu buahnya juga mengandung flavonoid dan daunnya
mengandung tanin (Anonim, 2014). Menurut Wachidah (2013), buah
parijoto mengandung senyawa tanin, flavonoid, saponin dan glikosida.

2.1.6 Khasiat
Secara tradisional buah dan daun parijoto digunakan sebagai obat
sariawan dan anti radang (Anonim, 2014). Sedangkan masyarakat Colo,
Kudus mempunyai keyakinan jika ibu hamil mengonsumsi Parijoto, kalau

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 5

anaknya laki-laki maka terlihat cakap, kalau perempuan terlihat cantik.

Artinya bukan hanya secara fisik anak tapi juga perilakunya yang baik
(Wibowo dkk, 2012).

2.2 Ekstraksi
2.2.1 Pengertian Ekstrak
Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi
senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan
pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan
dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga
memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 2000).
Dalam parameter standar umum ekstrak tumbuhan dari Depkes RI
(2000) disebutkan bahwa faktor yang berpengaruh pada mutu ekstrak
adalah:
a. Faktor Biologi
Mutu ekstrak dipengaruhi dari bahan asal (tumbuhan obat), dipandang
secara khusus dari segi biologi yaitu identitas jenis, lokasi tumbuhan
asal, periode pemanenan, penyimpanan bahan, umur tumbuhan dan
bagian yang digunakan.
b. Faktor Kimia
Mutu ekstrak dipengaruhi dari bahan asal (tumbuhan obat), dipandang
secara khusus dari kandungan kimia, yaitu :
1. Faktor internal, seperti jenis senyawa aktif dalam bahan, komposisi
kualitatif senyawa aktif, kadar total rata-rata senyawa aktif.
2. Faktor eksternal, seperti metode ekstraksi perbandingan ukuran alat
ekstraksi, pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, kandungan
logam berat, ukuran kekerasan, dan kekeringan bahan

2.2.2 Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut
sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut dengan pelarut cair.
Cara ekstraksi dengan menggunakan pelarut ada dua, yaitu cara dingin dan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 6

cara panas. Ekstraksi cara dingin ada dua macam metode, yaitu maserasi
dan perkolasi. Maserasi ialah proses pengekstrakan simplisia dengan
menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan
pada temperatur ruangan. Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan
prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi
kinetik berarti dilakukan pengadukan yang kontinyu (terus-menerus).
Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah
dilakukan penyaringan maserat pertama, dan seterusnya. Cara ini dapat
menarik zat-zat berkhasiat yang tahan pemanasan maupun yang tidak
tahan pemanasan (Depkes RI, 2000).
Metode perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru
sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada
temperatur ruangan. Proses ini terdiri dari tahapan pengembangan bahan,
tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetesan/penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak
(perkolat) yang jumlahnya 1-5 kali bahan. Ekstraksi ini membutuhkan
pelarut yang lebih banyak. Sedangkan ekstraksi cara panas ada beberapa
macam metode, yaitu refluks, sokletasi, digesti, infus dan dekok (Depkes
RI, 2000).

2.3 Pewarnaan Bakteri

Bakteri adalah organisme berukuran kecil dan terkadang berkelompok.
Untuk memudahkan pengamatan di bawah mikroskop diperlukan pewarnaan
mikroorganisme menggunakan zat pewarna. Pewarnaan yang sering
digunakan adalah pewarnaan Gram, yaitu pewarnaan diferensial yang
menggunakan lebih dari satu zat pewarna dan memiliki reaksi yang berbeda
untuk setiap bakteri, sehingga digunakan untuk membedakan jenis bakteri.
Pewarnaan Gram ini mampu membedakan dua kelompok besar bakteri, yaitu
Gram-positif dan Gram-negatif (Pratiwi, 2008).
Perbedaan warna antara bakteri Gram-positif dan bakteri Gram-negatif
disebabkan oleh adanya perbedaan struktur pada dinding selnya. Dinding sel

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 7

bakteri Gram-positif banyak mengandung peptidoglikan, sedangkan dinding

bakteri Gram-negatif banyak mengandung lipopolisakarida (Pratiwi, 2008).

Tabel 2.1 Perbedaan bakteri Gram-Positif dan Gram-Negatif

(Sumber : Johnson dkk, 2011)
Gram-Positif Gram-Negatif
Dinding sel peptidoglikan berlapis- Selubung sel memiliki lapisan
lapis (dan biasanya tebal), peptidoglikan tipis (1-3 lapis) yang
beranyam rapat yang mengurung terhubung dengan suatu membran
kompleks besar kristal ungu- luar; peptidoglikan ini tidak teranyam
iodium. rapat, sehingga mudah kehilangan
kompleks ungu kristal-iodium pada
proses pelunturan dengan alkohol.
Bakteri Gram positif tidak Membran luarnya memiliki
memiliki membran luar maka tidak lipopolisakarida, yang paling sering
memiliki penghalang (barrier) dikeluarkan pada saat kematian sel
hidrofobik untuk membatasi jalan dan memiliki komponen toksik
masuk untuk antibiotika besar.
Contoh : Bacillus, Staphylococcus, Contoh : Neisseria, Moraxella,
Streptococcus, Peptostreptoccus, Brucella, Francisella, Bordetella dan
Clostridium, Enterococcus, dan lain sebagainya
lain sebagainya

2.4 Bakteri Patogen

2.4.1 Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus adalah bakteri Gram-positif, berbentuk bola
atau kokus, berkelompok tidak teratur, berantai pendek atau bergerombol,
diameter 0,8-1,0m, tidak membentuk spora dan tidak bergerak, koloni
berwarna kuning, tidak berkapsul, dan dinding selnya mengandung dua
komponen utama yaitu peptidoglikan dan asam teikoat, tumbuh cepat pada
suhu 370C. Koloni pada pembenihan padat berbentuk bulat halus,
menonjol, berkilau. Bakteri ini terdapat pada kulit, selaput lendir, bisul dan
luka. S. aureus dapat menimbulkan penyakit melalui kemampuannya

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 8

berkembang biak dan menyebar luas dalam jaringan. Metabolisme dapat

dilakukan secara aerob dan anaerob. Infeksi yang disebabkan di golongkan
sebagai penyakit menular/lokal (biasanya) atau menyebar (jarang).
S. aureus menghasilkan koagulase, suatu protein mirip enzim yang dapat
menggumpalkan plasma yang telah diberi oksalat atau sitrat dengan
bantuan suatu faktor yang terdapat dalam banyak serum. Bakteri yang
membentuk koagulase dianggap mempunyai potensi menjadi patogen
invasif (Jawetz, 1996).

2.4.2 Escherichia coli

Escherichia coli adalah bakteri Gram-negatif, aerob atau anaerob
fakultatif, berbentuk bulat cenderung ke batang panjang biasanya
berukuran 0,5 x 1-3, terdapat dalam bentuk tunggal, berpasang-pasangan
dan rangkaian pendek, bergerak menggunakan flagella peritrik atau tidak
bergerak, biasanya tidak berbentuk kapsul, tidak membentuk spora. E. coli
merupakan flora normal saluran usus manusia dan hewan. Oleh karena itu
dianggap sebagai organisme indikator adanya kontaminasi pada makanan
dan minuman. E. coli merupakan bakteri patogen penyebab infeksi paling
sering pada manusia. Infeksi ekstraintestinal termasuk infeksi saluran
kemih yang terjadi ketika saluran terhambat atau secara spontan
disebabkan oleh UPEC (Uropathogenic E. coli). Infeksi serius lainnya
adalah kolesistitis, usus buntu, peritonitis, infeksi luka pasca operasi, dan
sepsis. Dalam infeksi saluran kemih akut, E.coli merupakan organisme
penyebab 70-80 % pada kasus kronik, 40-50 % penyebab infeksi persisten
(Kayser, et al., 2005).

2.5 Antibiotik
Pada awalnya istilah yang digunakan adalah antibiosis, yang berarti
substansi yang dapat menghambat pertumbuhan organisme hidup yang lain
dan berasal dari mikroorganisme. Namun pada perkembangannya, antibiosis
ini disebut antibiotik dan istilah ini tidak hanya terbatas untuk substansi yang
berasal dari mikroorganisme, melainkan semua substansi yang diketahui

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 9

memiliki kemampuan untuk menghalangi pertumbuhan organisme lain

khususnya mikroorganisme. Berdasarkan mekanisme kerjanya, antibiotik
dibedakan menjadi (Pratiwi, 2008) :
1. Antibiotik yang menghambat sintesis dinding sel
Antibiotik ini adalah antibiotik yang merusak lapisan peptidoglikan pada
bakteri Gram-positif maupun bakteri Gram-negatif.
2. Antibiotik yang merusak membran plasma
Antibiotik golongan ini umumnya adalah antibiotik golongan peptida yang
bekerja dengan mengubah permeabilitas membran plasma sel
mikroorganisme.
3. Antibiotik yang menghambat sintesis protein
Antibiotik ini berikatan pada subunit 30S ribosom bakteri (beberapa juga
terikat pada subunit 50S ribosom) dan menghambat translokasi peptidil-
tRNA dan menyebabkan kesalahan pembacaan mRNA dan mengakibatkan
bakteri tidak mampu melakukan proses sintesis protein vital untuk
pertumbuhannya.
4. Antibiotik yang menghambat sintesis asam nukleat
Penghambatan pada sintesis asam nukleat berupa penghambatan terhadap
transkripsi dan replikasi mikroorganisme.
5. Antibiotik yang menghambat sintesis metabolit esensial
Penghambatan terhadap sintesis metabolit esensial antara lain dengan
adanya kompetitor berupa antimetabolit, yaitu substansi yang secara
kompetitif menghambat metabolit mikoorganisme karena memiliki
struktur yang mirip dengan substrat normal bagi enzim metabolisme.

2.6 Metode Skrining Antimikroba

Metode skrining yang sering digunakan untuk mendeteksi aktivitas
antimikroba produk alam dibagi menjadi 3 kelompok yaitu metode difusi,
dilusi dan bioautografi. Metode difusi dan bioautografi merupakan teknik
secara kualitatif karena metode ini hanya akan menunjukkan ada atau tidaknya
senyawa dengan aktivitas antimikroba. Sedangkan metode dilusi digunakan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 10

untuk kuantitatif yang akan menentukan Konsentrasi Hambat Minimum

(Choma, 2010).

2.6.1 Metode Difusi

Metode difusi dibagi lagi menjadi tiga, yaitu difusi cakram, difusi
silinder dan hole plate. Dalam prosedur cakram, kertas cakram
(berdiameter +6 mm) yang mengandung senyawa uji ditempatkan pada
permukaan agar yang sebelumnya diinokulasi dengan mikroorganisme uji.
Senyawa uji berdifusi ke medium Agar menyebabkan penghambatan
pertumbuhan mikroorganisme. Cawan petri diletakkan pada suhu kamar
sebelum inkubasi, kemudian zona hambat diukur. Konsentrasi Hambat
Minimum (KHM) ditentukan secara visual, karena konsentrasi senyawa
uji terendah, yang dapat menyebabkan zona hambat pertumbuhan dapat
dikenali. Namun, metode difusi kurang cocok untuk menentukan nilai
KHM dari pada dilusi, karena tidak mungkin mengukur jumlah senyawa
uji yang berdifusi ke dalam medium agar (Choma, 2010).

2.6.2 Metode Dilusi

Keuntungan utama dari metode dilusi dapat memperkirakan
konsentrasi senyawa uji dalam medium agar atau suspensi broth, biasanya
digunakan untuk penentuan nilai KHM. Pada metode dilusi agar, medium
diinokulasi dengan organisme uji dan sampel yang diuji dicampur dengan
inokulum. Material yang diinokulasi dan pertumbuhan mikroorganisme
dapat terlihat dan dibandingkan dengan kultur kontrol yang tidak
mengandung sampel uji. Pengujian diulang dengan variasi dilusi sampel
uji dalam medium kultur dan menentukan dilusi yang paling tinggi dapat
mencegah pertumbuhan mikroorganisme sampel (Rahman, et al., 2005).
Dalam tabung uji, berbagai konsentrasi senyawa uji dicampur dengan
suspensi bakteri pada beberapa tabung, konsentrasi terendah menyebabkan
penghambatan pertumbuhan mikroorganisme sesuai dengan nilai KHM.
Pada uji mikrodilusi cair, mikroorganisme yang tumbuh di sumur plat,
dimana berbagai konsentrasi senyawa uji ditambahkan. Pertumbuhan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 11

mikroorganisme ditunjukkan oleh adanya kekeruhan dalam sumur

(Choma, 2010).

2.6.3 Metode Bioautografi

Prosedur dalam metode bioautografi mirip dengan yang digunakan
dalam metode difusi agar. Perbedaannya adalah bahwa senyawa uji
berdifusi dari kertas kromatografi ke media agar yang diinokulasi. Metode
bioautografi dibagi lagi menjadi bioautografi kontak, imersi dan langsung.
(Choma, 2010).

2.7 Konsentrasi Hambat Minimum

Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) didefinisikan sebagai konsentrasi

terendah obat yang akan menghambat pertumbuhan dari organisme setelah
inkubasi semalam (periode ini diperpanjang untuk organisme seperti bakteri
anaerob, yang membutuhkan inkubasi lama untuk pertumbuhan). KHM
dianggap sebagai "gold standard" untuk menentukan kerentanan organisme
terhadap antimikroba dan digunakan untuk menilai kinerja dari semua metode
pengujian kerentanan. KHM digunakan di laboratorium diagnostik untuk
mengkonfirmasi resistensi yang tidak biasa, untuk memberikan jawaban pasti
ketika hasil batas diperoleh dengan metode lain yang tidak sesuai, misalnya
ketika menentukan kerentanan koagulase-negatif staphylococci. Kisaran
konsentrasi antibiotik yang digunakan untuk menentukan KHM diterima
secara universal menggandakan dilusi diatas dan dibawah konsentrasi 1 mg/L
sesuai yang diperlukan (Andrew, 2001).

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 BAB 3
METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia dan
Pusat Laboratorium Terpadu (PLT) Universitas Islam Negeri Syarif
Hidayatullah Jakarta mulai dari bulan Februari-Juli 2014 menggunakan
metode eksperimental.

3.2 Alat dan Bahan

3.2.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah timbangan
analitik (AND, GH202), blender (Philip), peralatan gelas standar (Duran),
pompa vakum (ULVAC DTC-21), vacuum rotary evaporator (N-1001S-
W, EYELA-USA), digital waterbath (SB-1000 EYELA-USA), corong
pisah, Laminar Air Flow, autoklaf, inkubator (MEMMERT), pembakar
bunsen, cawan petri, pinset, tabung reaksi, jarum ose.

3.2.2 Bahan
Sampel uji yang digunakan adalah ekstrak metanol, ekstrak etil asetat
dan ekstrak n-heksana dari buah tanaman parijoto (Medinilla speciosa
Blume) yang diperoleh dari daerah Gunung Muria, desa Colo kabupaten
Kudus, Nutrient Agar (Pronadisa), Nutrient Broth (Criterion), cakram
kertas (diameter 6 mm), cakram antibiotik kloramfenikol 30g (Oxoid),
Alkohol 70%, Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli
ATCC 25922 yang didapatkan dari laboratorium Mikrobiologi FKUI,
pelarut n-heksana (teknis), etil asetat (teknis), metanol (teknis), aquades
dan reagen untuk skrining fitokimia (Mayer, Dragendorff, FeCl3 0,1%,
H2SO4 10%, NaOH 1M, HCl 1N dan CHCl3).

12 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 13

3.3 Cara Kerja

3.3.1 Determinasi Tanaman
Untuk memastikan kebenaran simplisia yang digunakan dalam
penelitian ini, maka dilakukan determinasi di Pusat Penelitian Herbarium
Bogoriense, LIPI, Cibinong, Bogor (Lampiran 1).

3.3.2 Penyiapan Bahan

Tiga kilogram buah segar parijoto (Medinilla speciosa Blume) diambil
buahnya yang berwarna ungu dan disortasi basah untuk dipisahkan dari
kotoran-kotoran atau bahan-bahan asing, kemudian dicuci dengan air
mengalir hingga bersih, ditiriskan dan dikering-anginkan sehingga bebas
dari sisa air. Buah parijoto diblender +2 menit sehingga didapatkan sampel
buah parijoto halus. Didalam buah parijoto terdapat biji yang berukuran
sangat kecil dan banyak didalamnya.

3.3.3 Pembuatan Ekstrak

Sebanyak 1748 gram buah parijoto (Medinilla speciosa Blume) yang
telah diblender dimaserasi menggunakan metanol di dalam wadah tertutup
dan terhindar dari cahaya. Hasil maserasi disaring menggunakan kapas
kemudian disaring kembali dengan kertas saring 2 lapis. Remaserasi
dilakukan 1-3 hari sekali hingga warna pelarut metanol bening. Filtrat
yang diperoleh dikumpulkan dan dipekatkan dengan vaccum rotary
evaporator pada suhu 40oC hingga diperoleh ekstrak kental. Ekstrak
yang diperoleh kemudian ditimbang dan dihitung rendemennya terhadap
berat sampel awal.

% kadar ekstrak =

3.3.4 Partisi Ekstrak Metanol

Ekstrak metanol yang didapatkan kemudian dilarutkan dengan 100mL
metanol, dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambahkan 100mL
n-heksana yang telah didestilasi. Corong pisah dikocok dengan hati-hati

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 14

selama 5 menit, sesekali keran corong pisah dibuka. Corong pisah

didiamkan hingga terdapat lapisan antara metanol dan n-heksana. Lapisan
n-heksana di bagian atas dan lapisan metanol di bagian bawah. Keran
corong pisah dibuka untuk memisahkan kedua lapisan. Lapisan atas
dikumpulkan dan lapisan bawah dimasukkan kembali ke dalam corong
pisah dan dipartisi dengan n-heksana baru dengan melakukan prosedur
yang sama sampai lapisan n-heksana bening. Fraksi n-heksana
dikumpulkan dan dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator
hingga diperoleh ekstrak kental n-heksana.
Ekstrak metanol dipartisi kembali dengan 100mL etil asetat yang telah
didestilasi. Corong pisah dikocok dengan hati-hati selama 5 menit dan
sesekali keran corong pisah dibuka. Corong pisah didiamkan hingga
terdapat lapisan antara lapisan etil asetat dan metanol. Partisi dilakukan
lagi sampai lapisan etil asetat bening. Fraksi etil asetat dikumpulkan dan
dipekatkan menggunakan rotary evaporator hingga didapatkan ekstrak
kental etil asetat.
Fraksi metanol yang telah dipisahkan dari etil asetat dipekatkan
menggunakan rotary evaporator hingga didapatkan ekstrak kental
metanol. Masing-masing ekstrak kemudian ditimbang.

3.3.5 Uji Kadar Air Ekstrak

Uji kadar air dilakukan untuk mengetahui sisa air dalam ekstrak.
Prosedur pengujian kadar air ekstrak adalah sebagai berikut: sebanyak 1g
ekstrak metanol dan etil asetat dimasukkan ke dalam cawan porselen yang
telah ditara secara terpisah kemudian dikeringkan dalam oven 105C
selama 5 jam dan ditimbang. Pengeringan dilanjutkan kemudian ditimbang
pada jarak 1 jam sampai perbedaan antara 2 penimbangan berturut-turut
tidak lebih dari 0,25%. (Depkes RI, 2000)

3.3.6 Penapisan Fitokimia

Penapisan fitokimia dilakukan pada ekstrak metanol, ekstrak etil asetat
dan ekstrak n-heksana. Pengujian ini dilakukan untuk menguji adanya

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 15

golongan senyawa metabolit sekunder flavonoid, terpenoid, saponin,

tanin, alkaloid dan glikosida. Prosedur pengujiannya adalah sebagai
berikut :

a. Uji Alkaloid
Ekstrak dilarutkan dalam asam klorida encer dan disaring. Filtrat
dibagi menjadi dua bagian, salah satu bagian ditetesi dengan pereaksi
Mayer dan bagian lain ditetesi dengan pereaksi Dragendroff.
Pembentukan endapan berwarna kuning pada ekstrak yang ditetesi
dengan pereaksi Mayer dan pembentukan endapan merah pada ekstrak
yang ditetesi dengan pereaksi Dragendroff menunjukkan adanya
alkaloid (Tiwari et al, 2011).

b. Uji Flavonoid
Ekstrak ditetesi dengan larutan NaOH. Pembentukan warna kuning
intens, yang kemudian memudar saat penambahan larutan asam,
menunjukkan adanya flavonoid (Tiwari et al, 2011).

c. Uji Tanin
Sebanyak 0,5g ekstrak direbus dalam 10mL air dalam tabung reaksi
dan kemudian disaring. Ditambahkan beberapa tetes FeCl3 0,1% dan
diamati warna hijau kecoklatan atau biru kehitaman (Ayoola et al,
2008).

d. Uji Terpenoid
Pada sejumlah 0,5g masing-masing ekstrak ditambahkan 2mL
kloroform. Sebanyak 3mL konsentrat H2SO4 hati-hati ditambahkan
untuk membentuk lapisan. Terbentuknya warna coklat kemerahan pada
permukaan menunjukkan adanya terpenoid (Ayoola et al, 2008).

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 16

e. Uji Saponin
Pada 0,5g ekstrak ditambahkan 5mL air suling dalam tabung reaksi.
Kocok campuran ekstrak dan air dan diamati hingga terbentuk buih
yang stabil (Ayoola et al, 2008).

f. Uji Glikosida
Sejumlah 0,5g ekstrak yang diencerkan dengan 5mL air ditambah
dengan asam asetat glasial yang berisi satu tetes larutan FeCl3.
Kemudian ditambah dengan 1mL asam sulfat pekat. Terbentuknya
cincin coklat pada permukaan mengindikasikan adanya gula deoksi
kardenolida (Ayoola et al, 2008).

3.3.7 Skrining Antibakteri

3.3.7.1 Pembuatan Media dan Sterilisasi
Serbuk Nutrient agar ditimbang sebanyak 2,3g dan dicampur dengan
100mL aquades dalam erlenmeyer kemudian dipanaskan dan diaduk
menggunakan stirer diatas hotplate hingga larut. Dengan perlakuan yang
sama, 0,8g Nutrient broth dicampur dengan 100mL aquades dalam
erlenmeyer, kemudian dipanaskan dan diaduk menggunakan stirer diatas
hotplate hingga larut. Cawan petri, tabung reaksi, vial, tip beserta wadah
yang telah dicuci bersih dan dikeringkan dibungkus dengan kertas dan
plastik, sedangkan kertas cakram dimasukkan ke dalam cawan petri bersih.
Media dan semua alat disterilisasi dalam autoklaf 1210C selama 15 menit
(Pelczar, 2005). Setelah disterilisasi, semua alat dan bahan disimpan dalam
Laminar Air Flow yang sebelumnya sudah disterilisasi dengan lampu UV
selama 30 menit dan dibersihkan dengan alkohol 70%.

3.3.7.2 Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Uji

Pada penelitian ini seri konsentrasi ekstrak uji (ekstrak metanol,
ekstrak etil asetat dan ekstrak n-heksana) yang digunakan adalah 200, 100,
50, 25 dan 12,5mg/mL dengan pelarut dimetilsulfoksida (DMSO) (Natheer
et al, 2012). Ekstrak uji 200mg/mL dibuat dengan cara menimbang 400mg

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 17

ekstrak dan dilarutkan dalam 2mL DMSO. Konsentrasi 100, 50, 25 dan
12,5mg/mL dibuat dengan melakukan serial pengenceran ekstrak dengan
DMSO. Kertas cakram steril dijenuhkan dengan 10L larutan ekstrak uji
dan dikeringkan dalam cawan petri steril pada suhu ruangan.

3.3.7.3 Kontrol Positif dan Kontrol Negatif

Kontrol positif yang digunakan adalah cakram antibiotik kloramfenikol
30g sedangkan kontrol negatif yang digunakan adalah pelarut DMSO
(Natheer et al, 2012).

3.3.7.4 Pembuatan Suspensi Bakteri

Sebanyak satu ose koloni bakteri diinokulasikan dalam 10mL
Nutrient broth kemudian diinkubasi pada suhu 37C selama 24 jam.
Densitas optik kultur tersebut diukur menggunakan spektrofotometer pada
panjang gelombang 625nm (OD625). OD625 yang dihasilkan kemudian
dikonversi menjadi 0,1. OD625 0,1 senilai dengan standar 0,5McFarland
(kepadatan sel bakteri 1x108 sel/mL). Suspensi bakteri kemudian
diencerkan menjadi suspensi bakteri dengan kepadatan sel 106 sel/mL
dengan mengambil sebanyak 1mL suspensi bakteri 108 sel/mL
dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9mL Nutrient broth
kemudian divortex dan dihasilkan suspensi bakteri dengan kepadatan sel
107 sel/mL. Kemudian 1mL suspensi bakteri 107 sel/mL dimasukkan ke
dalam tabung reaksi yang berisi 9mL Nutrient broth, divortex dan
dihasilkan suspensi bakteri dengan kepadatan sel 106 sel/mL (Lopez, 2003;
Widiastomo, 2013).

3.3.7.5 Prosedur Uji Antibakteri

Sebanyak 1mL suspensi bakteri dengan kepadatan sel 106 sel/mL
dimasukkan ke dalam cawan petri steril, kemudian ditambahkan 15mL
Nutrient agar cair. Cawan petri kemudian digoyangkan berlawanan arah
jarum jam sebanyak 5-10x dan digoyangkan lagi searah jarum jam
sebanyak 5-10x agar media dan suspensi tercampur. Pembuatan media

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 18

dilakukan di dekat api bunsen dalam Laminar Air Flow. Setelah agar
memadat, setiap cawan petri dibuat diagram 6 bagian. Kertas cakram
kontrol positif, kontrol negatif dan cakram yang telah dijenuhkan dengan
larutan ekstrak, diletakkan pada masing-masing bagian dan kemudian
diinkubasi pada suhu 370C selama 24 jam (Nufailah, 2008). Uji antibakteri
ini dilakukan pengulangan tiga kali. Area jernih disekeliling cakram
menunjukkan tidak adanya pertumbuhan bakteri yang kemudian diukur
menggunakan mistar. Hasil pengukuran zona hambat diklasifikasikan
berdasarkan tabel 3.1.
Tabel 3.1 Klasifikasi Aktivitas Antibakteri (Greenwood, 1995)
Diameter zona hambat Aktivitas antibakteri
(mm)
<10 Tidak aktif
11-15 Lemah
16-20 Sedang
>20 Kuat

3.3.7.6 Pewarnaan Bakteri Uji

Pewarnaan bakteri uji yang dilakukan adalah pewarnaan Gram. Pewarnaan
bakteri dilakukan untuk identifikasi dan untuk memastikan tidak ada
kontaminan pada kultur kerja. Kaca obyek yang akan digunakan terlebih
dahulu dibersihkan dengan alkohol 70% dan dikeringkan. Dibuat
lingkaran dengan pensil warna di bagian bawah kaca obyek untuk
menandai tempat bakteri. Satu ose bakteri diambil dan ditempatkan dalam
batas lingkaran yang sudah ditetesi dengan NaCl 0,9% dan dicampur
hingga merata. Bakteri difiksasi dengan cara melewatkan kaca obyek
diatas api bunsen sehingga membentuk noda pada kaca objek. Preparat
diwarnai dengan crystal violet selama 1 menit kemudian dicuci dengan air
mengalir. Selanjutnya preparat diwarnai dengan iodin selama 1 menit,
dicuci dengan air mengalir dan ditetesi dengan alkohol 96% selama 30
detik. Setelah alkohol 96% dicuci, preparat diwarnai dengan safranin
selama 1 menit. Bakteri yang tetap berwarna ungu digolongkan ke dalam
bakteri Gram positif sedangkan bakteri yang berwarna merah digolongkan
ke dalam bakteri Gram negatif (Pratiwi, 2008).

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 19

BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman parijoto telah dilakukan di Herbarium Bogoriense,
Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-LIPI Bogor. Hasil determinasi
menunjukkan bahwa sampel tanaman yang digunakan dalam penelitian ini
adalah Medinilla speciosa Blume dari famili Melastomataceae (Lampiran 1).

4.2 Ekstraksi dan Partisi

Pada penelitian ini sampel yang digunakan adalah buah segar parijoto.
Didalam buah parijoto terdapat biji sangat kecil dan banyak sehingga dalam
penelitian ini biji tidak dipisahkan dari buahnya. Sampel yang diambil adalah
buah yang berwarna ungu kemudian disortasi untuk dipisahkan dari kotoran
atau bahan asing. Dari hasil sortasi didapatkan buah parijoto sebanyak 1748g.
Buah parijoto kemudian diblender dan dimaserasi dengan 12,5 liter metanol
yang telah didestilasi. Setelah difiltrasi, maserat kemudian diuapkan dengan
vaccum rotary evaporator.
Proses ekstraksi buah parijoto dilakukan dengan metode maserasi dengan
pelarut metanol tanpa pemanasan, tujuannya agar senyawa-senyawa yang
sensitif dengan suhu tidak terdekomposisi. Pada saat maserasi berlangsung
pelarut berdifusi ke dalam sampel dan melarutkan senyawa-senyawa yang
mempunyai kepolaran yang mirip dengan pelarut. Penghalusan sampel
bertujuan untuk meningkatkan luas permukaan sehingga meningkatkan proses
ekstraksi dan mempersingkat waktu maserasi (Ncube et al, 2008). Dari hasil
maserasi diperoleh ekstrak kental metanol berwarna merah kecoklatan
sebanyak 60,84 gram dengan rendemen 3,48%. Kecilnya hasil rendemen
kemungkinan disebabkan oleh sampel yang digunakan adalah bagian buah
yang mana mengandung banyak lemak sehingga tidak bisa ditarik oleh
metanol.
Sebanyak 51,46 gram ekstrak metanol yang didapatkan kemudian dipartisi
dengan pelarut n-heksana dan etil asetat yang telah didestilasi menggunakan

19 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 20

corong pisah. Partisi ekstrak bertujuan untuk memisahkan senyawa-senyawa

berdasarkan tingkat kepolarannya. Senyawa non-polar pada ekstrak metanol
akan terlarut dalam pelarut n-heksana sedangkan senyawa semi polar akan
terlarut dalam pelarut etil asetat. Hasil partisi yang diperoleh kemudian
diuapkan dengan vaccum rotary evaporator dan dihasilkan tiga ekstrak, yaitu
ekstrak n-heksana 1,88 gram (3,65%), ekstrak etil asetat 15,44 gram (30%)
dan ekstrak metanol 31,72 gram (61,64%). Masing-masing karakterisasi dan
berat ekstrak disajikan dalam tabel 4.1 dan 4.2 berikut :

Tabel 4.1 Karakterisasi ekstrak

Ekstrak Metanol Ekstrak etil asetat Ekstrak n-heksana
Bentuk Ekstrak kental Ekstrak kental Ekstrak kental
Warna Coklat Merah Hijau
Bau Tidak ada Tidak ada Tidak ada

Tabel 4.2 Berat ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol

No. Ekstrak Berat (gram) Rendemen (%)
1 n-heksana 1,88 3,65
2 Etil asetat 15,44 30
3 Metanol 31,72 61,64

Hasil ekstrak kemudian di freeze dry yang bertujuan untuk mengurangi sisa
pelarut sehingga tidak mengganggu hasil uji antibakteri.
Selanjutnya dilakukan uji kadar air pada ekstrak metanol dan etil asetat.
Ekstrak n-heksana tidak diuji kadar air karena jumlah ekstrak yang dihasilkan
sedikit. Uji kadar air dijadikan indikator sisa air dalam ekstrak. Dalam
penelitian ini, uji kadar air dilakukan dengan metode gravimetri, yaitu dengan
mengeringkan ekstrak metanol dan etil asetat secara terpisah dalam oven
105C selama 5 jam kemudian dilanjutkan pengeringan pada jarak 1 jam
sampai perbedaan antara 2 penimbangan berturut-turut tidak lebih dari 0,25%.
Hasil uji kadar air ekstrak metanol dan etil asetat dapat dilihat pada tabel 4.3
berikut ini:

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 21

Tabel 4.3 Hasil Uji Kadar Air

Bobot Bobot Kadar air Rata-rata
No. Sampel
awal (g) akhir (g) (%) (%)
Ekstrak 1,0420 0,9402 9,76
1 9,72
Metanol 1,0020 0,9051 9,67
Ekstrak Etil 1,0045 0,8361 16,76
2 17,55
Asetat 1,0090 0,8239 18,34

Hasil uji kadar air ekstrak metanol yang diperoleh adalah 9,72% dan
ekstrak etil asetat adalah 17,55% sedangkan dalam parameter standar umum
ekstrak tumbuhan dari Depkes RI (2000) batas kadar air ekstrak adalah <10%.
Hal ini menunjukkan bahwa kadar air ekstrak etil asetat melebihi parameter
standar kadar air ekstrak. Kadar air yang tinggi pada ekstrak etil asetat
kemungkinan disebabkan oleh pengerjaan partisi yang tidak sempurna pada
saat pemisahan lapisan metanol dan etil asetat.

4.3 Penapisan Fitokimia

Ekstrak n-heksana, etil asetat dan metanol yang diperoleh kemudian diuji
penapisan fitokimia menggunakan metode yang dikembangkan oleh Ayoola
et al (2008) dan Tiwari et al (2011).
Tabel 4.4 Hasil uji penapisan fitokimia ekstrak n-heksana, etil asetat dan
metanol

Metabolit Ekstrak Ekstrak Ekstrak

No.
Sekunder n-heksana Etil Asetat Metanol
1 Alkaloid - - -
2 Flavonoid - + +
3 Saponin - + +
4 Tanin - + +
5 Glikosida - + +
6 Terpenoid + - -
Keterangan:
+ = memberikan reaksi positif
- = memberikan reaksi negatif

Penapisan fitokimia dilakukan untuk mengetahui adanya metabolit

sekunder seperti flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, glikosida dan terpenoid
dalam ekstrak uji. Dari hasil skrining fitokimia ekstrak metanol dan ekstrak
etil asetat mengandung senyawa flavonoid, saponin, tanin dan glikosida

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 22

sedangkan ekstrak n-heksana mengandung senyawa terpenoid. Adanya

senyawa metabolit sekunder pada masing-masing ekstrak dikarenakan sifat
kepolaran dari tiap pelarut yang dapat menarik senyawa tersebut. Senyawa
flavonoid, saponin, tanin dan glikosida umumnya dapat ditarik oleh pelarut
polar seperti metanol (Ncube et al, 2008) dan etil asetat sedangkan senyawa
terpenoid adalah senyawa non-polar yang umumnya dapat tertarik pada
pelarut non polar seperti kloroform dan n-heksana (Tiwari et al, 2011).

4.4 Uji Antibakteri

Metode uji aktivitas antibakteri yang digunakan adalah metode difusi
cakram. Proses peremajaan bakteri dilakukan dengan menggunakan media
nutrient broth sehingga lebih mudah pada saat pengukuran kepadatan sel
bakterinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Panjang gelombang yang
digunakan adalah 625nm. Hasil absorban yang didapatkan kemudian
dikonversi menjadi 0,1 dengan menambahkan nutrient broth sebagai
pengencer (Lopez et al, 2003). Suspensi bakteri dengan absorban 0,1 setara
dengan suspensi bakteri dengan kepadatan sel bakteri 10 8 sel/mL (Widiastomo
et al, 2012). Pada saat inokulasi, suspensi bakteri yang digunakan adalah
suspensi dengan kepadatan sel 106 sel/mL yang telah diencerkan dengan
menambahkan nutrient broth (Lopez et al, 2003).
Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini adalah pelarut
DMSO yang diteteskan pada cakram kertas steril. Natheer et al (2012)
menyebutkan bahwa zat yang dijadikan sebagai kontrol negatif adalah pelarut
yang digunakan sebagai pengencer ekstrak. Tujuannya adalah sebagai
pembanding bahwa pelarut yang digunakan sebagai pengencer tidak
mempengaruhi hasil uji antibakteri ekstrak. Oleh karena itu kontrol negatif
yang digunakan adalah DMSO 100%. Hasil zona hambat kontrol negatif
terhadap kedua bakteri uji adalah 0 mm. Hal ini menunjukkan bahwa
penggunaan pelarut DMSO tidak mempengaruhi hasil uji antibakteri dari
ekstrak.
Kontrol positif yang digunakan adalah cakram antibiotik kloramfenikol
30g. Kloramfenikol merupakan golongan antibiotik berspektrum luas.
Kloramfenikol dikatakan resisten apabila diameter hambat pertumbuhan

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 23

bakteri yang dihasilkan <20mm dan sensitif apabila hasil diameter hambat
>21mm (Andrews, 2011). Hasil diameter hambat kloramfenikol terhadap
kedua bakteri uji dalam penelitian ini berkisar antara 26-31mm. Hal ini
menunjukkan bahwa cakram kloramfenikol yang digunakan sensitif terhadap
kedua bakteri uji.
Tabel 4.5 Hasil pengukuran diameter hambat ekstrak metanol buah
Parijoto terhadap bakteri S. aureus dan E. coli
Diameter Zona Hambat (mm)
Konsentrasi
S. aureus E. coli
Ekstrak
I II III Rata2 I II III Rata2
200 mg/mL 18 14 15 15,67 10 10 12 10,67
100 mg/mL 15 15 14 14,67 9 10 11 10
50 mg/mL 13 14 14 13,67 8 9 8 8,33
25 mg/mL 13 14 11 12,67 0 0 0 0
12,5 mg/mL 11 8 10 9,67 0 0 0 0
Kontrol positif
(cakram
28 25 29 27,33 27 28 28 27,67
kloramfenikol
30g)
Kontrol negatif
0 0 0 0 0 0 0 0
(DMSO)
Keterangan : I = pengulangan pertama; II = pengulangan kedua; III = pengulangan ketiga

Tabel 4.6 Hasil pengukuran diameter hambat ekstrak etil asetat buah
Parijoto terhadap bakteri S. aureus dan E. coli
Diameter Zona Hambat (mm)
Konsentrasi
S. aureus E. coli
Ekstrak
I II III Rata2 I II III Rata2
200 mg/mL 19 16 18 17,67 12 13 12 12,33
100 mg/mL 16 15 18 16,33 11 12 11 11,33
50 mg/mL 17 14 16 15,67 10 11 11 10,67
25 mg/mL 15 13 16 14,67 10 9 8 9
12,5 mg/mL 15 13 16 13,33 9 8 7 8
Kontrol positif
(cakram
28 27 28 27,67 29 30 29 29,33
kloramfenikol
30g)
Kontrol negatif
0 0 0 0 0 0 0 0
(DMSO)
Keterangan : I = pengulangan pertama; II = pengulangan kedua; III = pengulangan ketiga

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 24

Tabel 4.7 Hasil pengukuran diameter hambat ekstrak n-heksana buah

Parijoto terhadap bakteri S. aureus dan E. coli
Diameter Zona Hambat (mm)
Konsentrasi
S. aureus E. coli
Ekstrak
I II III Rata2 I II III Rata2
200 mg/mL 17 11 10 13 8 7 7 7,33
100 mg/mL 14 8 9 10,33 6 6 6 6
50 mg/mL 10 0 0 3,33 0 0 0 0
25 mg/mL 0 0 0 0 0 0 0 0
12,5 mg/mL 0 0 0 0 0 0 0 0
Kontrol positif
(cakram
30 26 30 28,67 29 28 28 28,33
kloramfenikol
30g)
Kontrol negatif
0 0 0 0 0 0 0 0
(DMSO)
Keterangan : I = pengulangan pertama; II = pengulangan kedua; III = pengulangan ketiga

Berdasarkan data diatas dapat dilihat perbandingan diameter hambat rata-

rata ekstrak metanol, etil asetat dan n-heksana terhadap bakteri S. aureus dan
E.coli pada kurva berikut ini:
20
15.67
Zona Hambat (mm)

14.67 13.67
15 12.67
10.67 10 9.67
10 8.33
S. aureus
5 E. coli
0 0
0
200 100 50 25 12.5
Konsentrasi ekstrak metanol (mg/mL)

Gambar 4.1 Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol terhadap Bakteri

S. aureus dan E. coli

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 25

20 17.67
16.33 15.67

Zona Hambat (mm)

14.67
15 12.33 13.33
11.33 10.67
9 8
10
S. aureus
5 E. coli
0
200 100 50 25 12.5
Konsentrasi ekstrak etil asetat (mg/mL)

Gambar 4.2 Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etil Asetat terhadap Bakteri

S. aureus dan E. coli

15 13
Zona Hambat (mm)

10.33
10 7.33
6
3.33 S. aureus
5
0 0 0 E. coli
0
200 100 50 25 12.5
Konsentrasi ekstrak n-heksana (mg/mL)

Gambar 4.3 Aktivitas Antibakteri Ekstrak n-heksana terhadap Bakteri

S. aureus dan E. coli

Dari hasil pengukuran diameter hambat pada tabel 4.5-4.7, secara umum
menunjukkan bahwa ekstrak etil asetat mempunyai daya hambat yang lebih
besar dibandingkan ekstrak metanol dan ekstrak n-heksana. Hal tersebut
dikarenakan adanya senyawa metabolit sekunder pada ekstrak uji. Hasil uji
penapisan fitokimia menunjukkan ekstrak etil asetat dan metanol mempunyai
kandungan senyawa tannin, flavonoid, saponin dan glikosida sedangkan
ekstrak n-heksana mengandung senyawa terpenoid.
Okeke et al (2001) dan Rahman et al (2010) menyebutkan bahwa beberapa
senyawa metabolit sekunder seperti glikosida, saponin, tanin, flavonoid,
terpenoid dan alkaloid telah dilaporkan mempunyai aktivitas antibakteri.
Quercetin, salah satu senyawa turunan golongan flavonoid dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (Bimlesh Kumar et al, 2011)
sedangkan Indoquinolin dari Cryptolepsis sanguinolenta mempunyai aktivitas

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 26

antibakteri terhadap bakteri Gram negatif dan kapang (Silva et al, 1996).
Tanaman menyintesis senyawa flavon, flavonoid dan flavonol untuk merespon
infeksi mikrobial (Ncube et al, 2008). Anyasor et al (2011) menyatakan
bahwa aktivitas antibakteri dari ekstrak tanaman kemungkinan disebabkan
oleh adanya senyawa tanin dan flavonoid yang berikatan dengan dinding sel
bakteri dan menghambat biosintesisnya.
Dari daya hambat terhadap bakteri uji, ketiga ekstrak buah parijoto lebih sensitif
terhadap bakteri S. aureus daripada E. coli. Hal ini mungkin dikarenakan perbedaan
susunan dinding sel bakteri dimana E. coli mempunyai lapisan dinding sel yang lebih
kompleks dibandingkan S. aureus (Natheer et al, 2012).

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 27

BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian uji antibakteri dari ekstrak metanol, etil asetat
dan n-heksana buah parijoto yang dilakukan, maka dapat disimpulkan sebagai
berikut :
1. Dari ketiga ekstrak uji dengan konsentrasi 200, 100, 50, 25, 12,5mg/mL
secara berturut-turut ekstrak etil asetat mempunyai diameter hambat
pertumbuhan bakteri paling tinggi yaitu 17,67; 16,33; 15,67; 14,67;
13,33mm terhadap bakteri S. aureus dan 12,33; 11,33; 10,67; 9; 8mm
terhadap bakteri E. coli.
2. Dari ketiga ekstrak uji, ekstrak etil asetat buah parijoto mempunyai potensi
aktivitas antibakteri tertinggi daripada ekstrak metanol dan n-heksana
terhadap bakteri E. coli dan S. aureus.

5.2 Saran
Saran yang dapat diberikan untuk penelitian selanjutnya adalah :
1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap senyawa aktif pada ekstrak
buah parijoto yang mempunyai aktivitas antibakteri.
2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui bioaktivitas lain
dari ekstrak buah parijoto.

27 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 28

DAFTAR PUSTAKA

Andrews, Jennifer M. 2001. Determination of Minimum Inhibitory Concentration.

Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2001) 48, Suppl. S1,5-16
Andrews, J.M. and R.A. Howe. 2011. BSAC standardized disc susceptibility
testing method (version 10). J. Antimicrob Chemotheraphy 2011; 66: 2726
2757
Anonim.2013.http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs194/en.[30 November
2013]
Anonim.2014.http://www.warintek.ristek.go.id/pangan_kesehatan/tanaman_obat/
depkes/5-062.pdf. [19 januari 2014]
Anyasor GN, Aina DA, Olushola M, Aniyikaya AF (2011). Phytochemical
constituent, proximate analysis, antioxidant, antibacterial and wound
healing properties of leaf extracts of Chromolaena odorata. Ann. Biol. Res.,
2: 441-451.
Arora, D.S., Jasleen Kaur. 1999. Antimicrobial activity of spices. International
Journal of Antimicrobial Agents 12 (1999) 257262
Arora, D.S., G.J. Kaur. 2007. Antibacterial activity of some Indian medicinal
plants. J Nat Med (2007) 61:313317
Ayoola, GA., dkk. 2008. Phytochemical Screening and Antioxidant Activities of
Some Selected Medicinal Plants Used for Malaria Therapy in Southwestern
Nigeria. Tropical Journal of Pharmaceutical Research, September 2008; 7
(3): 1019-1024
Basri DF, Fan SH (2005). The potential of aqueous and acetone extracts of galls
of Quercus infectoria as antibacterial agents. Ind. J. Pharmacol., 37(1): 26-
29.
Bimlesh Kumar, Harleen Kaur Sandhar, Sunil Prasher, Prashant Tiwari, Manoj
Salhan, Pardeep Sharma. 2011. A Review of Phytochemistry and
Pharmacological of Flavonoids. International Pharmaceutica Sciencia
Choma, Irena M, Edyta M Grzelak. 2010. Bioautography Detection in Thin-Layer
Chromatography. Journal of Chromatography A Chroma-351708
CLSI.2012.Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests;
Approved StandardEleventh Edition. Clinical and Laboratory Standards
Institute, 950 West Valley Road, Suite 2500 Wayne, PA 19087 USA
Djide dan Sartini. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi Farmasi. Lephas, Makasar.

Depkes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Direktorat
Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Direktorat Pengawasan Obat
Tradisional, Jakarta.

28 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 29

European Committee for Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) of the

European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases
(ESCMID). 2000. Determination of minimum inhibitory concentrations
(MICs) of antibacterial agents by agar dilution. EUCAST DEFINITIVE
DOCUMENT E.Def 3.1

Greenwood. 1995. Antibiotics, Susceptibility (Sensitivity) Test Antimicrobial And

Chemoterapy. Mc. Graw Hill Company, USA
Guo-Ying Zuo, Fan-Yan Meng, Jun Han, Xiao-Yan Hao, Gen-Chun Wang, Yun-
Ling Zhang and Qing Zhang. In Vitro Activity of Plant Extracts and
Alkaloids against Clinical Isolates of Extended-Spectrum -Lactamase
(ESBL)-Producing Strains. Molecules 2011, 16, 5453-5459;
doi:10.3390/molecules16075453
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia : Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan, terbitan ke-2, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan
Iwang Soediro. Penerbit ITB : Bandung
Jawetz, Ernest. 1996. Mikrobiologi Kedokteran edisi 20. EGC : Jakarta

Johnson, Arthur G. dkk. 2011. Essensial Mikrobiologi dan Imunologi, edisi

kelima, diterjemahkan oleh Prof. Dr. Julius E. Surjawidjaja. Binarupa
Aksara Publisher : Tangerang Selatan

Kayser, Fritz H., Kurt A. Bienz, Johannes Eckert, Rolf M. Zinkernagel, . 2005.
Medical Microbioly. New York : Thieme Stuttgart
Lopez, Crisanto Maglaque., Sunee Nitisiprasert., Penkhae Wanchaitanawong and
Ngamtip Poovarodom. Antimicrobial Activity of Medicinal Plant Extracts
Against Foodborne Spoilage and Pathogenic Microorganisms. Kasetsart J.
(Nat. Sci.) 37 : 460-467 (2003)
Maria, C., Buta Erszebet, Hor Denisa. 2012. Medinilla: An Exotic and Attractive
Indoor Plant With Great Value. Journal of Horticulture, Forestry and
Biotechnology. 16 (2) : 9-12
Melki, dkk. 2011. Uji Antibakteri Ekstrak Gracilaria sp (Rumput Laut) Terhadap
Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.

Natheer, S.E., C. Sekar., P. Amutharaj., M. Syed Abdul Rahman and K. Keroz

Khan. 2012. Evaluation of Antibacterial Activity of Morinda citrifolia,
Vitex trifolia and Chromolaena odorata. African journal of Pharmacy and
Pharmacology Vol. 6 (11), pp. 783-788
Ncube, NS, Afolayan AJ, Okoh AI. Assesment Technique of Antimicrobial
Properties of Natural Compounds of Plant Origin: Current Methods and
Future Trends. African Journal of Biotechnology 2008; 7 (12): 1797-1806

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 30

Nufailah, Dina.,dkk. 2008. Uji Aktivitas Antibakteri Produk Reduksi Asam

Palmitat Dalam Sistem NaBH4/ BF3.Et2O Terhadap Escherichia coli Dan
Staphylococcus aureus. Universitas Diponegoro

Okeke MI, Iroegbu CU, Eze EN, Okali AS, Esimone CO (2001). Evaluation of
extracts of the root of Landolphia owerrience for antibacterial activity. J.
Ethnopharmacol., 78: 119-127.
Pratiwi, Sylvia T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Erlangga : Jakarta

Radji, Maksum., Ratna Chandra Sari, Atiek Sumiati. 2008. Uji Aktivitas
Antimikroba Dan Uji Sitotoksik Ekstrak Etanol Akar Tanaman Akar Kucing
(Acalypha Indica Linn), Daging Buah Mahkota Dewa (Phaleria
Macrocarpa (Sheff) Boerl) Dan Sari Buah Merah (Pandanus Conoideus
Lam). Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. V, No. 1, April 2008, 40 - 46
Rahman, Md Ajijur, Md Mohamad Zahidul Islam, Md.Anwar U.I. Islam. 2011.
Antibacterial Activities of Actinomcete Isolates Collected from Soils of
Rajshahi, Bangladesh. Biotechnology Research International 2011, Article
ID 857925\
Rahman MA, Ahsna T, Islam S. (2010). Antibacterial and antifungal properties of
methanol extract from the stem of Argyreia argentea. Bang. J. Pharmacol.,
5: 41-44.

Rinawati, N.D._____. Daya Antibakteri Tumbuhan Majapahit (Crescentia cujete L.)

terhadap Bakteri Vibrio alginolyticus. Biologi, Fakultas Matematika Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember
Silva, O., Duarte A, Cabrita J, Pimentel M, Diniz A and Gomez E. 1996.
Antimicrobial Activity of Guinea-Bissau Traditional Remedies. J.
Ethnopharmacol. 50: 53-59
Tapas, AR., DM Sarkarkar dan RB Kakde. 2008. Flavonoids as Ntraceuticals: a
Review. Tropical Journal of Pharmaceutical Research
The Global Biodiversity Information Facility: GBIF Backbone Taxonomy, 2013-
07-01. Accessed via http://www.gbif.org/species/3870285 on 2014-02-11
Tiwari, Phrasant., Bimlesh Kumar., Mandeep Kaur., Gurpreet Kaur., Harleen
Kaur. Phytochemical Screening and Extraction : A Review. Internationale
Pharmaceutica Sciencia Jan-March 2011, Vol. 1, Issue 1.
Wachidah, Leliana.N. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan serta Penentuan
Kandungan Fenolat dan Flavonoid Total dari Buah Parijoto (Medinilla
speciosa Blume). Skripsi. Jakarta : UIN Syarif Hidayatullah
Wibowo, H.A., Wasino & Dewi Lisnoor Setyowati. 2012. Kearifan Lokal dalam
Menjaga Lingkungan Hidup (Studi Kasus Masyarakat di Desa Colo
Kecamatan Dawe Kabupaten Kudus). Journal of Educational Social Studies
1 (1) : 25-30

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 31

Widiastomo, Bobby Wahyu.,dkk. 2013. Efek Antimikroba Ekstrak Etanol Daun

Pepaya (Carica papaya L) Terhadap Bakteri Shigella dysentriae Kode
Isolat 2312-F Secara In Vitro. Universitas Brawijaya.

Wiegand, Irith., Kai Hilpert & Robert E W Hancock. 2008. Agar and broth
dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC)
of antimicrobial substances. NATURE PROTOCOLS | VOL.3 NO.2 | 2008
Xia JinYao; Zuo GuoYing; Wang GenChun; Xu GuiLi; Zhao YiBin. Screen of
Chinese herbal medicines originated in Yunnan province against drug
resistant, Escherichia coli producing ESBLs in vitro. Journal Medical Journal
of National Defending Forces in Southwest China 2009 Vol. 19 No. 7 pp. 664-666.
http://www.cabdirect.org/abstracts/20093239234.html;jsessionid=F9DDA0
DEA880EE78CB4AD971DDCB41C0#

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 32

Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman Parijoto (Medinilla speciosa Blume)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 33

Lampiran 2. Bagan Alur Kerja Ekstraksi dan Uji Antibakteri Buah Tanaman
Parijoto (Medinilla speciosa Blume)

Pembuatan Ekstrak Buah Parijoto

Buah parijoto (Medinilla Dicuci dengan air mengalir Sampel dihaluskan

speciosa Blume) segar kemudian ditiriskan menggunakan blender
disortasi basah

Sampel dimaserasi menggunakan Sampel ditimbang

Maserat difiltrasi metanol yang sudah didestilasi sebanyak 1748g

Ampas filtrat
Dievaporasi dg Vaccum
rotary evaporator
Ekstrak kental
+ 100mL metanol
dipartisi dengan 100mL n-heksana
hingga fase n-heksana jernih

Fraksi n-heksana Fraksi metanol

dipartisi dengan 100mL etil asetat
hingga fase etil asetat jernih

Fraksi etil asetat Fraksi metanol

Dievaporasi dg Vaccum
rotary evaporator
Ext. n-heksana Ext. etil asetat Ext. metanol

Penapisan fitokimia Uji antibakteri menggunakan

metode difusi cakram

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 34

Pembuatan Media dan Sterilisasi (Pelczar, 2005)

Erlenmeyer 250mL diisi dg Erlenmeyer 250mL diisi dg 0,8g

2,3g NA 100mL aqudes steril NB dan 100mL aquades steril

Dipanaskan diatas hotplate dan diaduk

dg magnetic stirrer sampai mendidih

Medium NA dan NB

Disterilisasi menggunakan autoklaf

suhu 1210C selama 15 menit
Cawan petri, tabung reaksi, vial, tip
beserta wadah dicuci bersih, dikeringkan
dan dibungkus dengan kertas

Preparasi Ekstrak Uji

Kertas cakram steril dijenuhkan dengan 10L larutan ekstrak uji dan dikeringkan
dalam cawan petri steril pada suhu ruangan.

Pembuatan Suspensi Bakteri (Lopez, 2003; Widiastomo 2012)

Satu ose bakteri diinokulasikan
ke dalam 10mL NB
Diinkubasi pada suhu
37C selama 24 jam
OD625 diukur menggunakan
spektrofotometer
Hasil OD625 kemudian dikonversi menjadi 0,1 dg
menambahkan NB.
Suspensi bakteri OD625 0,1
OD625 0,1 setara dg 0,5McF, sementara standar 0,5McF setara
dg kepadatan sel bakteri 108 cfu/mL.
. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
 35

Suspensi divortex
dahulu sebelum
Suspensi bakteri OD 9mL NB diambil 1mL
0,1 = 108 cfu/mL

107 cfu/mL 106 cfu/mL

Uji Aktivitas Antibakteri

1 mL

Diinokulasikan ke
petri kosong

Suspensi bakteri
106 cfu/mL

Ditambahkan NA cair

Petri diputar agar media NA

dan bakteri tercampur

1 2 Keterangan :
Cakram ditanam diatas media 1 = cakram berisi ekstrak uji konsentrasi 200 mg/mL
yang sudah memadat 3 2 = cakram berisi ekstrak uji konsentrasi 100 mg/mL
(+)
(-)
3 = cakram berisi ekstrak uji konsentrasi 50 mg/mL
4 = cakram berisi ekstrak uji konsentrasi 25 mg/mL
Cawan diinkubasi pada suhu
5 = cakram berisi ekstrak uji konsentrasi 12,5 mg/mL
370C, selama 24 jam 4 (-) = cakram berisi pelarut DMSO
5 (+) = cakram antibiotik kloramfenikol 30g

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 36

Lampiran 3. Hasil Uji Antibakteri Ekstrak Buah Parijoto (Medinilla speciosa

Blume) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

a. Pewarnaan Gram Bakteri Uji

Staphylococcus aureus Escherichia coli

b. Uji Antibakteri

Ekstrak Ekstrak Etil Ekstrak n-

Bakteri Pengulangan
Metanol Asetat heksana

Staphylococcus
II
aureus

III

Escherichia
II
coli

III

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 37

Lampiran 4. Skrining Fitokimia Ekstrak Buah Parijoto (Medinilla speciosa

Blume)

Skrining Gambar
fitokimia Eksrak metanol Ekstrak etil asetat Ekstrak n-heksana

Uji
Alkaloid
(Pereaksi Penambahan
Penambahan P. Penambahan P.
Filtrat Filtrat P. Dragendorf
Dragendorf) Dragendorf Filtrat ekstrak Dragendorf
ekstrak ekstrak etil
Tidak terdapat n-heksana + Tidak terdapat
metanol + asetat + Tidak terdapat
endapan merah HCl encer endapan merah
HCl encer HCl encer endapan merah
(-) (-)
(-)

Uji
Alkaloid
(Pereaksi Penambahan P. Penambahan Penambahan P.
Filtrat Filtrat
Meyer) Meyer P. Meyer Filtrat ekstrak Meyer Tidak
ekstrak ekstrak etil
Tidak terdapat Tidak terdapat n-heksana + terdapat
metanol + asetat +
endapan endapan HCl encer endapan kuning
HCl encer HCl encer
kuning (-) kuning (-) (-)

Uji
Flavonoid Penambahan
Penambahan Penambahan
ekstrak ekstrak etil ekstrak n- H2SO4
H2SO4 H2SO4
metanol + asetat + heksana + warna kuning
warna kuning warna kuning
NaOH NaOH NaOH tidak memudar
memudar (+) memudar (+)
(-)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

 38

Uji Saponin

Terbentuk busa yang stabil Terbentuk busa yang stabil (+) Tidak terbentuk busa yang stabil
(+) (-)

Uji Tanin

Terbentuk warna kehitaman Terbentuk warna kehitaman Tidak terbentuk warna

(+) (+) kehitaman (-)

Uji
Terpenoid

Tidak terbentuk cincin coklat Tidak terbentuk cincin coklat Terbentuk cincin coklat
kemerahan (-) kemerahan (-) kemerahan (+)

Uji
Glikosida

Terbentuk cincin coklat (+) Terbentuk cincin coklat (+) Tidak terbentuk cincin coklat (-)

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta