Aula 1: Biorreatores e Biorreaes

Prof. Gabriel de Castro Fonseca (DQBIO/UFSJ)

Projeto de Biorreatores

Leis de velocidade

O que uma reao ele- Uma reao elementar uma reao que ocorre em
mentar? uma nica etapa. Esse tipo de reao interessante
porque como a reao qumica simples e previsvel,
fcil deduzir uma lei de velocidade para essa reao.

As leis de velocidade de reaes elementares seguem

leis de potncia e so proporcionais concentrao
dos reagentes elevados aos seus coeficientes estequi-
omtricos.
Por exemplo, uma reao

A A + B B C C (1)

teria uma lei de velocidade dada por

rA = kA CAA CBB (2)

O que uma reao no- Na prtica, dificilmente uma reao qumica envol-
elementar? vendo mais do que duas molculas ser uma reao
elementar. A probabilidade de trs molculas ou mais
se chocarem ao mesmo tempo e reagirem em um nico
passo muito pequena.

Essas reaes mais complicadas ocorrem em v-

rias etapas, podem formar intermedirios instveis,
envolver reaes paralelas, etc.

Como encontrar a lei de Embora a reao global estudada seja no elementar,

velocidade de uma reao cada uma de suas etapas elementar, ento possvel
no-elementar? encontrar uma lei de velocidade para reaes complica-
das, desde que seu mecanismo (nome dado sequncia
de etapas) seja bem conhecido.

Resumo

Reaes elementares e Reaes elementares ocorrem em um nico passo

no-elementares e tm leis de velocidade previsveis. Reaes no-
elementares contm vrios passos elementares e dedu-
zir suas leis de velocidade depende do conhecimento do
seu mecanismo.

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Reaes enzimticas

Biorreaes so rea- Biorreaes so reaes catalisadas por microrga-

es elementares ou nismos ou por enzimas, que so macromolculas
no-elementares? produzidas por microrganismos.

Reaes catalticas nunca ocorrem em uma nica

etapa, pois geralmente envolvem adsoro, formao
de complexos-ativos, reao e dessoro.

Naturalmente, biorreaes so muito complicadas.

Mas vamos estudar algumas das mais simples.

Como o mecanismo de A biorreao com mecanismo mais simples que se

uma reao limitada pelo conhece uma reao enzimtica limitada pelo subs-
substrato? trato, ou seja, uma reao onde a concentrao de
substrato a nica coisa que afeta a velocidade da
reao.

Nessa reao a molcula de substrato (S) se liga

enzima (E) e elas formam um composto intermedirio
chamado complexo enzima-substrato (ES). A reao
acontece enquanto o substrato est conectado en-
zima formando o produto (P), que ento se desprende
da enzima.

Esse mecanismo pode ser escrito como

k1 k2
E + S  ES E + P (3)
k1

Se a velocidade de formao de produto uma etapa

elementar, pode-se escrever a velocidade de formao
de produto como
rP = k2 CES (4)
A velocidade de formao de produto depende da con-
centrao de complexo enzima-substrato na soluo,
mas essa grandeza de difcil mensurao.

Uma aproximao que se pode fazer para eliminar

a varivel CES considerar que a Equao 3 est em
equilbrio. Assim, pode-se escrever

CE CS k1
Km = = (5)
CES k1

A Equao 5 permite eliminar CES , mas a grandeza CE

tambm de difcil mensurao. Precisamos introduzir
mais uma equao para poder eliminar as duas.

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Como o mecanismo de Essa equao o balano de massa das enzimas. A
uma reao limitada pelo quantidade de enzimas livres (CE ) somada quantidade
substrato? de enzimas formando um complexo (CES ) deve ser igual
concentrao inicial de enzimas (CE0 )

CE0 = CE + CES (6)

Substituindo a Equao 5 na Equao 6 pode-se isolar

CES em funo de CE0 , que uma grandeza conhecida.
Km
CE = C
CS ES
!
K
CE0 = CES 1+ m
CS
!
CS
CES = CE0
Km + CS

k2 CE0 CS
rP = (7)
Km + CS
Costuma-se fazer a substituio rmax = k2 CE0 na Equa-
o 7, que escrita como

rmax CS
rP = (8)
Km + CS

A Equao 8 conhecida como Equao de Michaelis-

Menten e foi a primeira lei de velocidade enzimtica de-
duzida a partir de um mecanismo de reao. Foi desco-
berta em 1913 pelo bioqumico alemo Leonor Micha-
elis e pela mdica canadense Maud Leonora Menten.
Uma curiosidade que Maud Menten tambm era m-
sica, pintora, alpinista, poliglota e astrnoma amadora.
Ela foi uma das primeiras mulheres a se formar em me-
dicina no Canad, em 1911. Mas ainda no permitiam
que mulheres seguissem carreira cientfica no Canad.
Por isso ela foi estudar nos Estados Unidos e depois na
Alemanha, onde encontrou o Michaelis, que j era um
cientista renomado na poca e eles fizeram esse traba-
lho juntos.

O que significam esses A soluo da Equao de Michaelis-Menten est ilus-

parmetros de veloci- trada na Figura 1. A partir da anlise do grfico poss-
dade? vel compreender o significado dos parmetros cinticos
que aparecem na equao. A interpretao de rmax
simples, o valor assinttico para o qual a velocidade
da reao tende quando a concentrao de substrato
tende a infinido Isso pode ser confirmado tomando o li-
mite da Equao 8

rmax CS
lim = rmax (9)
CS Km + CS

3
 Figura 1: Soluo da equao de Michaelis-Menten

rmax

Velocidade (rP )
rmax
2

CS = Km
Concentrao (CS )

O que significam esses A interpretao do significado de Km um pouco menos

parmetros de veloci- evidente. Pelo grfico pode-se observar que essa cons-
dade? tante equivale concentrao de substrato para a qual
a velocidade da reao igual metade da velocidade
mxima. De fato, se fizermos a substituio CS = Km e
substituirmos na Equao 8:
rmax Km r
= max (10)
Km + Km 2
Quanto maior o valor da constante Km , maior a perda
de velocidade da reao com o consumo de substrato.

Valores grandes de CS significam que a reao

est no incio. Se Km tambm for grande, isso significa
que a velocidade da reao vai cair para a metade do
valor mximo terico muito cedo.

J com Km baixo, a velocidade da reao vai ser

alta por um longo perodo, s vai cair pela metade
quando muito substrato j tiver sido consumido.

Ento podemos compreender essa constante Km

como um fator de desacelerao da reao.

Como seria uma reao Algumas reaes enzimticas envolvem mais de um

mais complicada? substrato. Outras dependem de um cofator para ativar
a enzima. Tambm existem cadeias de reaes enzim-
ticas envolvendo reaes em srie ou paralelo. Outro
fator que pode tornar a lei de velocidade de uma reao
enzimtica mais complicada a presena de inibidores
enzimticos.

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O que um inibidor enzi- Enzimas so altamente especficas, h poucas molcu-
mtico? las que conseguem se ligar a seus stios ativos. Faz-se
uma analogia de que substrato e enzima so como uma
chave e uma fechadura. Mas podem existir molculas
indesejadas que enganam a enzima e se ligam ao seu
stio ativo sem reagir formando o produto desejado.

Existem inibidores reversveis e irreversveis. Me-

tais pesados, como chumbo, mercrio e cdmio so
classificados como inibidores irreversveis porque
formam complexos muito estveis com as enzimas e s
podem ser removidos mediante o uso de substncias
quelantes como EDTA e citrato. E esse um dos motivos
porque a intoxicao com metais pesados perigosa.

Inibidores reversveis se dissociam com mais faci-

lidade e atrapalham a reao, mas no desativam
permanentemente a enzima. H trs mecanismos
principais de inibio reversvel.

1) Inibio competitiva
Quando o substrato e o inibidor disputam os mesmos
stios ativos na enzima, ocorre inibio competitiva.
Esse tipo de interao pode ser descrita pelo seguinte
mecanismo
EI


I
+
E+S  ES E + P (11)
Usando o mesmo mtodo empregado para deduzir a
Equao de Michaelis-Menten (e considerando KI a
constante de equilbrio da reao E + I  EI), pode-se
chegar lei de velocidade de uma equao desse tipo:

rmax CS
rP =  CI
 (12)
1 + K Km + CS
I

2) Inibio no-competitiva
Quando o substrato e o inibidor no disputam os mes-
mos stios ativos e o inibidor apenas inibe a afinidade
entre entre enzima e substrato, diz-se que a inibio
no-competitiva. Reaes desse tipo podem ser descri-
tas pelo mecanismo

EI+S  EIS


I I
+ +
E+S  ES E + P (13)

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 O que um inibidor enzi- Uma vez que I e S no disputam os mesmos stios ati-
mtico? vos, as constantes de equilbrio para a reao que une o
substrato enzima igual da reao que une o subs-
trato ao complexo enzima-inibidor. O mesmo vale para
as reaes envolvendo a ligao entre enzima e inibi-
dor. Isso significa que pode-se usar as seguintes rela-
es de equilbrio

CE CS CEI CS
Km = =
CES CESI

CE CI CES CI
KI = =
CEI CESI
Pode-se deduzir a partir da a lei de velocidade
rmax CS
rP =  CI
 (14)
1+ KI (Km + CS )

3) Inibio anticompetitiva
Quando o inibidor no pode se ligar diretamente en-
zima, mas pode se ligar ao complexo enzima-substrato
e impedir que a reao para formao de produto acon-
tea, esse um caso de reao anticompetitiva. Essas
reaes podem ser descritas pelo seguinte mecanismo

EIS


I
+
E+S  ES E + P (15)

Considerando-se KI a constante de equilbrio da reao

ES + I  EIS, pode-se deduzir a lei de velocidade
rmax CS
rP =  CI
 (16)
Km + CS 1 + K
I

Um caso especial da inibio anticompetitiva a inibi-

o pelo substrato. Ela acontece quando o prprio subs-
trato age como inibidor. A frmula de uma reao ini-
bida pelo subtrato pode ser obtida substituindo CI = CS
na Equao 16.

rmax CS
rP = (17)
CS2
Km + CS + KI

Tambm possvel ocorrer inibio pelo produto, mas

nesse caso a inibio pode ser competitiva, no-
competitiva ou anticompetitiva.

Resumo

Reaes enzimticas Reaes enzimticas podem ter mecanismos complica-

dssimos. Todavia, possvel deduzir uma lei de velo-
cidade para esse tipo de reao se seu mecanismo for
conhecido.

6
Reaes microbianas

Qual a diferena entre Reaes microbianas so muito mais complicadas do

reaes microbianas e en- que reaes enzimticas. As reaes microbianas so
zimticas? resultados de numerosas redes de reaes qumicas e
bioqumicas complicadas que envolvem mltiplas fases
e sistemas multicomponentes.

Durante o crescimento existe uma mistura hetero-

gnea de clulas jovens e velhas constantemente
mudando e se adaptando ao meio reacional que tam-
bm sofre mudanas em suas caractersticas fsicas e
qumicas.

Por isso, uma modelagem matemtica precisa da

cintica de reaes microbianas impossvel. E mesmo
que a modelagem fosse possvel, ela iria depender
de um nmero enorme de parmetros cujos valores
todos tambm seriam praticamente impossveis de
determinar.

Como so as leis de velo- Devido dificuldade de se encontrar um mecanismo

cidade das reaes micro- de reao para as reaes microbianas, so usados
bianas? modelos empricos para a velocidade de crescimento
celular.

Modelos cinticos de crescimento celular so clas-

sificados em

estruturados no-estruturados: nos modelos

estruturados as clulas so vistas como mltiplos
componentes diferentes, pode-se diferenciar, por
exemplo, clulas jovens de clulas velhas ou clu-
las ativas de inativas. Nos modelos no estrutura-
dos as clulas so vistas todas como um mesmo
componente, todas so iguais.
modelos segregados distribudos: nos modelos
segregados as clulas formam uma mistura hete-
rognea, enquanto que nos distribudos elas for-
mam uma mistura homognea.
O modelo de crescimento microbiano mais simples o
modelo de Monod, que segue uma cintica semelhante
de Michaelis-Menten.
max CS
= (18)
KS + CS

Reaes microbianas frequentemente envolvem inibi-

o pelo substrato ou pelo produto, de maneira que v-
rios modelos de cintica microbiana copiam a forma de
modelos enzimticos ou incluem outros termos para re-
presentar a inibio.

7
 O que so essas variveis Repare que a lei de velocidade para o crescimento
e max ? celular usa uma varivel , em vez do r que usamos
para a reao enzimtica.

Essa alterao no mera conveno, as duas

grandezas tm dimenses diferentes. Diferentemente
da enzima, que no gerada e nem destruda durante
a reao (salvo o caso de inibio irreversvel), a quan-
tidade de clulas microbianas pode aumentar durante
uma reao bioqumica.

Por isso clculos envolvendo as velocidades de cres-

cimento celular, de consumo de substrato e formao
de produto so escritas em funo de uma velocidade
especfica de crescimento

1 dCX
= (19)
CX dt
A velocidade de crescimento celular dada por

rX = CX (20)

Resumo

Reaes microbianas As reaes microbianas so muito mais complexas do

que as reaes enzimticas, o que torna praticamente
impossvel usar uma lei de velocidade deduzida a par-
tir de um mecanismo. Leis de velocidade para reaes
microbianas so empricas e se baseiam na velocidade
especfica de crescimento celular.

8
Biorreatores

Como so a estequiome- A Equao 20 d a velocidade de reao de formao de

tria e os balanos de
massa em um biorreator?
novas clulas em uma reao microbiana. H coefici-
entes estequiomtricos empricos que relacionam essa
velocidade s velocidades de formao de produto e de
consumo de substrato. So os chamados coeficientes
de rendimento (YX/S e YX/P ).

dCX dCX
YX/S = YX/P = (21)
dCS dCP

Calcula-se as velocidades de formao de produto e de

consumo de substrato como

rS = C rP = CX (22)
YX/S X YX/P

A partir da pode-se calcular as equaes gerais para o

balano de massa de cada componente:

dCX F
= (CX0 CX ) + CX (23)
dt V
dCS F
= (CS0 CS ) C (24)
dt V YX/S X
dCP F
= (CP 0 CP ) + C (25)
dt V YX/P X

O que um quimiostato? Um quimiostato um reator de tanque agitado cont-

nuo e em estado estacionrio. No caso do quimiostato,
considerando-se que a concentrao de clulas na cor-
rente de entrada nula, a equao de balano de clulas
se simplifica para
F
C + CX = 0
V X
=D (26)
Onde D = VF chamado de coeficiente de dilui-
o. O quimiostato mantido no estado estacionrio
ajustando-se a vazo que atravessa o tanque de modo
que o coeficiente de diluio seja igual velocidade es-
pecfica de crescimento celular. Nessa situao, para
cada nova clula criada durante a reao, uma clula
antiga ser removida do reator e a populao celular
permanecer constante.

Bibliografia
[1] H.S. Fogler. (2006). Elementos de Engenharia das Reaes Qumicas. LTC, 4a ed., Captulos 1,
3 e 7.
[2] R. Dutta. (2008). Fundamentals of Biochemical Engineering. Springer. 1a ed., Captulo 2.