111

Lampiran 1. Prosedur Pembuatan Pereaksi Pendeteksi

1. Pereaksi pendeteksi Flavonoid

Pereaksi NaOH 10%

Sebanyak 10 gram NaOH dilarutkan dengan aquades dalam gelas beker

kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 MI dan ditambahkan

aquades sampai tanda batas.

Pereaksi H2SO4 50%

Sebanyak 50 mL asam sulfat pekat dipipet dengan pipet volume, kemudian

dituangkan ke dalam labu ukur 100 mL yang telah berisi sedikit aquades.

Selanjutnya,aquades ditambahkan ke dalam labu ukur sampai tanda batas.

2. Pereaksi Pendeteksi Alkaloid

Pereaksi Mayer

Larutan A : Sebanyak 1,36 g HgCl2 dilarutkan dalam 60 mL aquades.

Larutan B : sebanyak 0,5 g Kl dilarutkan dalam 10 mL aquades.

Larutan A dan B dicampur dan diencerkan dengan aquades dalam labu

ukur 100 mL sampai tanda batas, disimpan dalam botol coklat.

Pereaksi Dragendroff

Larutan A : sebanyak 0,85 gram bismuth nitrat ditambahkan 2 mL asam

klorida pekat dan 10 mL aquades.

Larutan B : sebanyak 8 gram kalium iodida ditambahkan 10 mL aquades.

 112

Larutan A dicampur dengan larutan B dengan perbandingan 1:1 dan

disimpan dalam botol. Jika akan digunakan, 5 mL larutan stok

ditambahkan 7 mL asam klorida pekat ke dalam 5 mL aquades.

3. Pereaksi Pendeteksi Triterpenoid

Pereaksi Lieberman Burchard

Sebanyak 5 mL asam asetat anhidrat dicampur dengan asam sulfat pekat

sambil didinginkan, kemudian campuran tersebut ditambahkan ke dalam

50 mL etanol dalam keadaan dingin.

4. Pereaksi Pendeteksi Tanin/Polifenol

Pereaksi FeCl31%

Sebanyak 1 gram besi (III) klorida ditimbang dalam gelas beker,

kemudian dilarutkan dengan sedikit aquades. Larutan ini kemudian

dituang ke dalam labu ukur 100 mL dan ditambahkan aquades sampai

tanda batas.
 113

Lampiran 2. Pembuatan Larutan untuk Uji Toksisitas terhadap Larva

Artemia salina Leach

A. Diambil 20 mg sampel dilarutkan dalam pelarut hingga volumenya 2 mL

untuk membuat larutan stok
Perhitungan :

Konsentrasi larutan = =

= ppm
Jadi larutan stok yang tersedia mempunyai konsentrasi 10.000 ppm dalam
volume (Vs) 2 mL = 2000 L (1L = 103 mL = 106 L)

B. Membuat Larutan 1000 ppm

Digunakan rumus pengenceran :
Volume larutan x konsentrasi larutan = volume stok (Vs) x Konsentrasi
Stok

Vs =

Dibuat larutan 1000 ppm dalam volume 5 mL, sehingga :

5 mL x 1000 ppm = Vs x 10.000 ppm

Vs =
Vs = 0,5 mL
Vs = 500 L
Jadi, diambil larutan stok 500 L untuk membuat 5 mL larutan 1000 ppm

C. Membuat Larutan 100 ppm

Dibuat larutan 100 ppm dalam volume 5 mL, sehingga :
5 mL x 100 ppm = Vs x 10.000 ppm

Vs =

Vs = 0,05 mL
Vs = 50 L
 114

Jadi, diambil larutan stok 50 L untuk membuat 5 mL larutan 100 ppm

D. Membuat larutan 10 ppm

Dibuat larutan 10 ppm dalam volume 5 mL, sehingga :
5 mL x 10 ppm = Vs x 10.000 ppm
Vs =

Vs = 0,005 mL
Vs = 5L
Jadi, diambil larutan stok 5 L untuk membuat 5 mL larutan 10 ppm
 115

Lampiran 3. Perhitungan Nilai LC50 Ekstrak Kasar Metanol dan Etanol

terhadap Larva Artemia Salina Leach

A. Ekstrak Kasar Metanol

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 4 3 4
100 7 6 6
1000 10 9 10

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rereta

Konsentrasi (ppm)
Mortalitas
I II III
10 40 30 40 36,67
100 70 60 60 63,34
1000 100 90 100 96,67

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No Xi Yi xi2 yi2 xy
1 1 36,67 1 1344,69 36,67
2 2 63,34 4 4011,96 126,68
3 3 96,67 9 9345,09 290,01
Jumlah 6,00 196,68 14 14701,74 453,36
Rerata 2,00 65,56

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil Perhitungan gradien (b)

xy
1
xy
b= n
x 2 x
1 2

n
 116

453,36
1
6 x196,68
= 3
14 6
1 2
3

453,36
1
1180,08
= 3
14 12
453,36 393,36
=
2
60
= 30
2
Hasil perhitungan konstanta (a)

a =
1
y bx
n

=
1
196,68 30 x6
3

=
1
196,68 180
3

=
1
16,68
3
= 5,56
Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a
y = 30 x 5,56
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 ekstrak Metanol Spons Clathria (Thalysias) sp
 117

Grafik Log Konsentrasi Ekstrak

metanol Vs % Mortalitas
120
100 y = 30x + 5.56
R = 0.995
% Mortalitas

80
60
40
20
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
X=
b

50 5,56
=
30

44,44
= 1,48
30

LC50 = anti log 1,48= 30,19 ppm

 118

B. Ekstrak Kasar Etanol

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi (ppm)
1 2 3
10 3 3 3
100 6 6 6
1000 10 10 9

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rereta

Konsentrasi (ppm)
Moralitas
1 2 3
10 30 30 30 30,00
100 60 60 60 60,00
1000 100 100 90 96,67

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No Xi Yi xi yi xy
1 1 30 1 900,00 30
2 2 60 4 3600,00 120
3 3 96,67 9 9345,09 290,01
jumlah 6,00 186,67 14,00 13845,09 440,01
rerata 2,00 62,22

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil Perhitungan gradien (b)

xy
1
xy
b = n
x 2 x
1 2

n
440 6 x186,67
1
= 3
14,00 6
1 2
3
440 373,34
=
14 12
 119

66,66
=
2
= 33,33

Hasil perhitungan konstanta (a)

a =
1
y bx
a

=
1
186,67 3,34 x6
3

=
1
186,67 199,98
3

=
1
13,31
3
= -4,446
Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a
y = 33,33 x - 4,446
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 ekstrak etanol Spons Clathria (Thalysias) sp

Grafik Log Konsentrasi Vs % Mortalitas

120

100 y = 33.33x - 4.446

R = 0.996
80
% Mortalitas

60

40

20

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)
 120

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
x=
b
50 4,446
x=
33,33
x = 1,63

LC50 = anti log 1,63 = 42,66 ppm

 121

Lampiran 4. Perhitungan Nilai LC50 Hasil Partisi Ekstrak Kasar Metanol

terhadap Larva Artemia salina Leach

A. Ekstrak n-Heksana

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 1 0 2
100 3 3 1
1000 10 10 7

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rereta

Konsentrasi (ppm)
Moralitas
I II III
10 10 0 10 6,67
100 30 30 10 23,33
1000 100 100 70 90

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No xi yi xi2 yi2 xy
1 1 6,67 1 44,49 6,67
2 2 23,33 4 544,29 46,66
3 3 90 9 8100 270
Jumlah 6,00 120 14 8688,78 323,33
Rerata 2,00 40

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil perhitungan gradien (b)
1
xy xy
b = n
x2 x
1 2

n
 122

1
6 x120
323,33 -
= 3
14 - 6
1 2
3
323,33 240
=
2
83,33
= 41,67
2
Hasil perhitungan konstanta (a)
a = y bx
1
n
= 120 41,67 x6
1
3
= 130,02
1
3
= - 43,34

Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a

y = 41,67 x 43,34
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 ekstrak n-heksana Spons Clathria (Thalysias) sp

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
100
y = 41.66x - 43.33
80
R = 0.892
% Mortalitas

60

40

20

-20 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

Log Konsentrasi (ppm)
-
 123

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
=
b

50 43,34
=
41,67

93,34
= 2,24
41,67

LC50 = anti log 2,24= 173,78 ppm

B. Ekstrak Kloroform

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 2 2 1
100 7 8 5
1000 9 7 10

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rereta

Konsentrasi (ppm)
Moralitas
I II III
10 20 20 10 16,67
100 70 80 50 66,67
1000 90 70 100 86,67

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No Xi Yi xi2 yi2 xy
1 1 16,67 1 277,89 16,67
2 2 66,67 4 4444,89 133,34
3 3 86,67 9 7511,69 260,01
Jumlah 6,00 170,01 14 12234,47 410,02
Rerata 2,00 56,67
 124

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil perhitungan gradien (b)

xy
1
xy
b = n
x 2 x
1 2

n
410,02 6 x170,01
1
= 3
14 6
1 2
3
410,02 1020,06
1
= 3
14 12

410,02 340,02
=
2
70
= 35
2

Hasil perhitungan konstanta (a)

a = y bx
1
n
= 170,01 35 x6
1
3
= 170,01 210
1
3
= 39,99
1
3
= -13,33

Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a

y = 35 x 13,33
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 ekstrak Kloroform Spons Clathria (Thalysias) sp
 125

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
100
y = 35x - 13.33
80
R = 0.942
% Mortalitas

60
40
20
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 9
x=
b
50 13,33
=
35
63,33
= 1,81
35
LC50 = anti log 1,81= 64,57 ppm

C. Ekstrak Air
1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 0 1 2
100 2 3 3
1000 8 8 7
 126

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rereta

Konsentrasi (ppm)
Moralitas
I II III
10 0 10 20 10
100 20 30 30 26,67
1000 80 80 70 76,67

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No Xi Yi xi2 yi2 xy
1 1 10 1 100 10
2 2 26,67 4 711,29 53,34
3 3 76,67 9 2878,29 230,01
Jumlah 6,00 113,34 14 6689,58 293,35
Rerata 2,00 37,78

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil Perhitungan Gradien (m)
1
xy xy
b = n
x 2 x
1 2

n
293,35 6 x113,34
1
= 3
14 6
1 2
3
293,35 226,68 66,67
= 33,34
2 2
Hasil perhitungan konstanta (a)
a = y bx
1
3
= 113,34 33,34 x6
1
3
= 113,34 200,04
1
3
= 86,7
1
3
= -28,9
Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a
y = 33,34x 28,9
 127

- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 ekstrak air Spons Clathria (Thalysias) sp

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
100
80 y = 33.33x - 28.89
% Mortalitas

60 R = 0.923

40
20
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
x =
b
50 28,9
=
30
78,9
= 2,37
33,34
LC50 = anti log 2,37= 234,42 ppm
 128

Lampiran 5. Perhitungan Harga Rf Hasil KLT Ekstrak Kental Kloroform

dengan Berbagai Campuran Eluen

Rf =

A. Perhitungan Rf dengan Eluen Kloroform : n-heksana

1. Perbandingan 9 : 1 ( 2 Noda )

2,2
Noda 1 : Rf 0,259
8,5
5. Perbandingan 5 : 5 ( 3 Noda )
3,1
Noda 2 : Rf 0,365
8,5 0,4
Noda 1: Rf 0,047
3,7 8,5
Noda 3 : Rf 0,435
8,5 0,7
Noda 2 : Rf 0,082
8,5
2. Perbandingan 8 : 2 ( 1 Noda )
8
Noda 3 : Rf 0,941
1,7 8,5
Noda 1: Rf 0,2
8,5
6. Perbandingan 4 : 6 ( 1 Noda )
3. Perbandingan 7 : 3 ( 4 Noda )
0,5
Noda 1: Rf 0,059
1 8,5
Noda 1: Rf 0,118
8,5
7. Perbandingan 3 : 7 ( 1 Noda )
1,4
Noda 2 : Rf 0,165
8,5 0,4
Noda 1: Rf 0,047
7,8 8,5
Noda 3 : Rf 0,859
8,5
7,8 8. Perbandingan 2 : 8 ( 2 Noda )
Noda 4 : Rf 0,918
8,5
0,3
Noda 1: Rf 0,035
4. Perbandingan 6 : 4 ( 1 Noda ) 8,5
6,7
Noda 2 : Rf 0,788
0,8 8,5
Noda 1: Rf 0,94
8,5
 129
129

B. Perhitungan Rf dengan eluen Etil asetat : Kloroform

1. Perbandingan 9 : 1 (2 Noda) 4. Perbandingan 6 : 4 ( 1 Noda )

8,1
7,8 Noda 1: Rf 0,953
Noda 1: Rf 0,918 8,5
8,5
8
Noda 2 : Rf 0,941 5. Perbandingan 3 : 7 ( 2 Noda )
8,5
0,6
2. Perbandingan 8 : 2 (2 Noda) Noda 1: Rf 0,071
8,5
8,3
7,4 Noda 2 : Rf 0,976
Noda 1: Rf 0,871 8,5
8,5
8,3 6. Perbandingan 2 : 8 ( 1 Noda )
Noda 2 : Rf 0,976
8,5
0,9
Noda 1: Rf 0,106
3. Perbandingan 7: 3 (2 Noda) 8,5

4,9 7. Perbandingan 1 : 9 ( 1 Noda )

Noda 1: Rf 0,576
8,5
0,2
8,3 Noda 1: Rf 0,024
Noda 2 : Rf 0,976 8,5
8,5

C. Perhitungan Rf dengan Eluen Etanol : n-heksana

1. Perbandingan 8 : 2 ( 2 Noda )

1,2
Noda 1: Rf 0,141
8,5
1,5
Noda 2 : Rf 0,176
8,5

2. Perbandingan 7 : 3 ( 2 Noda)

7,4
Noda 1: Rf 0,871
8,5
7,9
Noda 2 : Rf 0,929
8,5
 130

D. Perhitungan Rf dengan Eluen n-heksana : Etil asetat

1. Perbandingan Rf 9 : 1 ( Noda )

0,3 5. Perbandingan 7 : 3 ( 4 Noda )

Noda 1: Rf 0,035
8,5
0,2
0,8 Noda 1: Rf 0,024
Noda 2 : Rf 0,094 8,5
8,5
3,2
1,9 Noda 2 : Rf 0,376
Noda 3 : Rf 0,224 8,5
8,5
4,6
3,6 Noda 3 : Rf 0,541
Noda 4 : Rf 0,423 8,5
8,5
5,4
Noda 4 : Rf 0,635
2. Perbandingan 8,5 : 1,5 ( 3 Noda) 8,5
0,8
Noda 1: Rf 0,094 6. Perbandingan 6 : 4 ( 3 Noda )
8,5
2
1,7 Noda 1: Rf 0,235
Noda 2 : Rf 0,2 8,5
8,5
3
3,7 Noda 2 : Rf 0,353
Noda 3 : Rf 0,435 8,5
8,5
4,6
3. Perbandingan 8 : 2 ( 4 Noda ) Noda 3 : Rf 0,541
1,5 8,5
Noda 1: Rf 0,176
8,5
3,3 7. Perbandingan 5 : 5 ( 3 Noda )
Noda 2 : Rf 0,388
8,5 1,4
4,2 Noda 1: Rf 0,165
Noda 3 : Rf 0,494 8,5
8,5 3
4,8 Noda 2 : Rf 0,353
Noda 4 : Rf 0,565 8,5
8,5 3,4
4. Perbandingan 7,5 : 2,5 ( 4 Noda) Noda 3 : Rf 0,4
8,5
2,2
Noda 1: Rf 0,259
8,5
4,3
Noda 2 : Rf 0,506
8,5
4,7
Noda 3 : Rf 0,553
8,5
5,3
Noda 4 : Rf 0,624
8,5
 131

Lampiran 6. Gambar Hasil Kromatografi Lapis Tipis dengan Berbagai

Eluen

Keterangan :

A. Kloroform : n-heksana (9:1) E. Kloroform : n-heksana (5:5)

B. Kloroform : n-heksana (8:2) F. Kloroform : n-heksana (4:6)

C. Kloroform : n-heksana (7:3) G. Kloroform : n-heksana (3:7)

D. Kloroform : n-heksana (6:4) H. Kloroform : n-heksana (2:8)

Keterangan :

A. Etil asetat : Kloroform (9:1) E. Etil asetat : Kloroform (3:7)

B. Etil asetat : Kloroform (8:2) F. Etil asetat : Kloroform (2:8)

C. Etil asetat : Kloroform (7:3) G. Etil asetat : Kloroform (1:9)

D. Etil asetat : Kloroform (6:4)

 132

Keterangan :

A. n-heksana : etil asetat (9:1) E. n-heksana : etil asetat (7:3)

B. n-heksana : etil asetat (8,5:1,5) F. n-heksana : etil asetat (6:4)

C. n-heksana : etil asetat (8:2) G. n-heksana : etil asetat (5:5)

D. n-heksana : etil asetat (7,5:2,5)

Keterangan :

A. Etanol : n-heksana (8:2)

B. Etanol : n-heksana (7:3)

 112

Lampiran 7. Perhitungan Nilai LC50 Hasil Kromatografi Kolom terhadap

larva Artemia salina Leach

A. Fraksi A

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 1 1 3
100 2 2 3
1000 9 8 8

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rereta

Konsentrasi (ppm)
Mortalitas
I II III
10 10 10 30 16,67
100 20 20 30 23,34
1000 90 80 80 83,34

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No Xi Yi xi2 yi2 xy
1 1 16,67 1 277,89 16,67
2 2 23,34 4 544,76 46,68
3 3 83,34 9 6945,56 250,02
Jumlah 6,00 123,35 14,00 7768,21 313,37
Rerata 2,00 41,12

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil perhitungan gradien (b)

xy
1
xy
b = n
x 2 x
1 2

n
313,37 6 x123,35
1
= 3
14 6
1 2
3
 113

313,37 246,7
=
2
66,67
=
2
= 33,33

Hasil Perhitungan konstanta (a)

a = y bx
1
n
= 123,35 33,33 x 6
1
3
= 123,35 200,04
1
3
= 76,69
1
3
= -25,55

Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a

y = 33,33x 25,55
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 Fraksi A Spons Clathria (Thalysias) sp

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
100
80 y = 33.33x - 25.55
R = 0.824
% Mortalitas

60
40
20
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
 114

50 a
x=
b
50 25,56 75,56
= 2,27
33,34 33,34
LC50 = anti log 2,27= 186,21 ppm

B. Fraksi B

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 2 2 3
100 5 5 6
1000 8 9 9

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rerata

Konsentrasi (ppm)
Mortalitas
I II III
10 20 20 30 23,34
100 50 50 60 53,34
1000 80 90 90 86,67

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No xi yi xi2 yi2 xy
1 1 23,34 1 544,76 23,34
2 2 53,34 4 2845,16 106,68
3 3 86,67 9 7511,69 260,01
Jumlah 6,00 163,35 14 10901,61 390,03
Rerata 2,00 54,45
 115

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil perhitungan gradien (b)

xy
1
xy
b = n
x 2 x
1 2

n
390,03 6 x163,35
1
= 3
14 6
1 2
3
390,03 980,1
1
= 3
14 12
390,03 326,7
=
14 12
63,33
= 31,66
2
Hasil perhitungan konstanta (a)
a = y bx
1
n
= 163,35 (31,66 x6
1
3
= 163,35 190,02
1
3
= 26,67
1
3
= -8,88

Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a

y = 31,66 x 8,88
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 fraksi B Spons Clathria (Thalysias) sp
 116

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
100
80 y = 31.66x - 8.88
% Mortalitas

60 R = 0.999
40
20
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
x=
b
50 8,89 58,89
= 1,86
31,67 31,67
LC50 = anti log 1,86 = 72,44 ppm

C. Fraksi C

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 1 2 2
100 4 4 3
1000 8 8 7

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rerata

Konsentrasi (ppm)
Mortalitas
I II III
10 10 20 20 16,67
100 40 40 30 36,67
1000 80 80 70 76,67
 117

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No xi yi xi2 yi2 xy
1 1 16,67 1 277,89 16,67
2 2 36,67 4 1344,69 73,34
3 3 76,67 9 5878,29 230,01
Jumlah 6,00 130,01 14 7500,87 320,02
Rerata 2,00 43,34

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil perhitungan gradien (b)

xy
1
xy
b = n
x 2 x
1 2

n
320,02 6 x130,01
1
= 3
14 6
1 2
3
320,02 780,06
1
= 3
14 12
320,02 260,02
=
2
60
= 30
2

Hasil perhitungan konstanta (a)

a = y bx
1
n
1
= (130,01-30x6)
3
= 130,01 180
1
3
= 49,99 = -16,66
1
3

Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a

y = 30 x 16,66
 118

- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 fraksi C Spons Clathria (Thalysias) sp

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
100
80 y = 30x - 16.66
% Mortalitas

R = 0.964
60
40
20
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
x=
b
50 16,66 66,66
= 2,22
30 30
LC50 = anti log 2,22 = 165,96 ppm

D. Fraksi D

1. Tabel jumlah larva udang yang mati

Jumlah larva udang yang mati

Konsentrasi
I II III
10 1 1 2
100 3 4 3
1000 6 6 5
 119

2. Tabel Perhitungan Persentase Mortalitas

Persentase Mortalitas % Rerata

Konsentrasi (ppm)
Mortalitas
I II III
10 10 10 20 13,34
100 30 40 30 33,34
1000 60 60 50 56,67

3. Tabel Pembantu Perhitungan LC50

No xi yi xi2 yi2 xy
1 1 13,34 1 177,96 13,34
2 2 33,34 4 1111,56 66,68
3 3 56,67 9 3211,49 170,01
Jumlah 6,00 103,35 14 4501,01 250,03
Rerata 2,00 34,45

Nilai b dan a diperoleh sebagai berikut :

Hasil Perhitungan gradien (b)
1
xy x 2
b = n
x 2 x
1 2

n
250,03 6 x103,35
1
= 3
14 6
1 2
3
250,03 620,1
1
= 3
14 12
250,03 206,7
=
2
43,33
= 21,66
2
Hasil perhitungan konstanta (a)
a = y by
1
n
= 103,35 21,66 x6
1
3
= 26,66 = -8,88
1
3
 120

Sehingga diperoleh persamaan garis lurus : y = bx + a

y = 21,66 x 8,88
- Dari persamaan diatas dibuat grafik plot antara Log konsentrasi (ppm) pada
sumbu x dengan % mortalitas pada sumbu y.
- Grafik perhitungan LC50 fraksi D Spons Clathria (Thalysias) sp

Grafik Log Konsentrasi Vs %

Mortalitas
60
50 y = 21.66x - 8.88
R = 0.998
% Mortalitas

40
30
20
10
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Log Konsentrasi (ppm)

- Nilai LC50 diperoleh dari anti log x, dimana x merupakan logaritma konsentrasi
bahan toksik pada y = 50, yaitu nilai probit 50 % hewan uji, sehingga persamaan
regresi menjadi :
50 a
x=
b
50 8,88 58,89
= 2,72
21,66 21,66

LC50 = anti log 2,72 = 524,81 ppm

 121

Lampiran 8. Perhitungan Harga Rf Hasil KLT Penggabungan Kromatografi

Kolom Ekstrak Kloroform

Retardation Faktor ( Rf )

Jarak Tempuh Sampel

Rf =
Jarak Tempuh Elven

1. Perhitungan Rf Fraksi A (FA)

4,4
Rf : 0,518
8,5

2. Perhitungan Rf Fraksi B ( FB)

3
Rf : 0,353
8,5

3. Perhitungan Rf Fraksi C (FC)

1,8
Rf : 0,212
8,5

4. Perhitungan Rf Fraksi D ( FD)

1
Rf : 0,118
8,5
 122

Lampiran 9. Gambar Hasil KLT Penggabungan dengan Pengembang n-

heksana : etil asetat (8:2)

FA

FB

FD
FC
 123

Lampiran 10. Perhitungan Harga Rf Uji Kemurnian Fraksi B

Retardation Faktor ( Rf)

Jarak Tempuh Sampel

Rf
Jarak Tempuh Eluen

1. Etil asetat : n-heksana (2:8)

2,3
Noda 1 0,271
8,5

2. Kloroform : etil asetat (7:3)

1,3
Noda 1 0,153
8,5

3. N-heksana : Kloroform (1:1)

6,3
Noda 1 0,741
8,5

4. Etil asetat : Etanol (2:3)

4,8
Noda 1 0,565
8,5
 124

Lampiran 11. Hasil Kromatogram Fraksi B Ekstrak Kloroform Spons

Clathria (Thalysias) sp
 125

Lampiran 12. Hasil Spektroskopi Massa Senyawa-Senyawa Fraksi B Ekstrak

Kloroform Spons Clathria (Thalysias) sp

Puncak 1
 126

Puncak 3
 127

Puncak 6
 128

Puncak 7
 129

Puncak 8
 130

Puncak 9
 131

Puncak 13
 132

Lampiran 13. Data Hasil Uji Aktivitas Antikanker Fraksi B Terhadap Sel
HeLa dengan Metode MTT

Sampel (ppm) Ulangan Rata-rata % inhibisi

ODI ODII ODIII
1000 0.284 0.309 0.286 0.293 17.31
500 0.316 0.304 0.317 0.312 11.85
250 0.302 0.314 0.310 0.309 12.89
125 0.304 0.299 0.294 0.299 15.62
62.5 0.301 0.281 0.309 0.297 16.18
39.01 0.301 0.282 0.312 0.298 15.80
31.25 0.283 0.297 0.290 0.290 18.16
19.53 0.310 0.323 0.304 0.312 11.85
15.52 0.313 0.282 0.290 0.295 16.75
7.81 0.291 0.298 0.276 0.288 18.63
3.9 0.317 0.296 0.315 0.309 12.70
1.95 0.314 0.315 0.319 0.316 10.82
Cell control 0.353 0.358 0.352 0.354 0.00

Sampel (ppm) Ulangan Rata-rata % inhibisi

ODI ODII ODIII
100 0.285 0.303 0.295 0.294 16.93
50 0.303 0.335 0.309 0.316 10.91
25 0.321 0.276 0,321 0.306 13.64
12.5 0.316 0.333 0,307 0.319 10.07
9.76 0.298 0.335 0.342 0.325 8.28
6.25 0.317 0.331 0.339 0.329 7.15
4.88 0.320 0.336 0.295 0.317 10.54
3.12 0.293 0.325 0.318 0.312 11.95
1.55 0.310 0.348 0.306 0.321 9.31
0.78 0.315 0.325 0.343 0.328 7.53
0.39 0.309 0.336 0.340 0.328 7.34
0.19 0.309 0.325 0.348 0.327 7.62
Cell control 0.353 0.358 0.352 0.354 0.00

% Inhibisi = x 100 %
 133

Lampiran 14. Perhitungan IC50 Fraksi B Terhadap Sel HeLa

Inhibisi terhadap Sel HeLa

18
16 y = 0.081x + 8.608
14 R = 0.675
12
% inhibisi

10
8
6
4
2
0
0 20 40 60 80 100 120
Konsentrasi (ppm)

Grafik % inhibisi vs konsentrasi sampel (ppm)

Berdasarkan grafik dapat ditentukan IC50 dengan perhitungan sebagai
berikut
y = 0,081x + 8,608
jika y = 50
maka
x= ppm

Jadi IC50 fraksi B adalah 511,012 ppm (tidak toksik)

 134

Lampiran 15. Surat Keterangan Identifikasi Spons Clathria Thalysias (sp)

 135

Lampiran 16. Deskripsi Spons Clathria (Thalysias) sp