ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI PENGHASIL BIOSURFAKTAN ASAL

LIMBAH RUMAH POTONG AYAM TRADISIONAL DI KOTA MALANG

ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF BIOSURFACTANT PRODUCING

BACTERIA FROM WASTE OF TRADITIONAL POULTRY SLAUGHTERHOUSE
IN MALANG

Roosy Margaretha Riupassa*, Masdiana C. Padaga, Dyah Kinasih Wuragil

Program Studi Pendidikan Dokter Hewan Program Kedokteran Hewan Universitas Brawijaya
*roosyriupassa@gmail.com

ABSTRAK

Biosurfaktan adalah senyawa surfaktan yang dihasilkan oleh mikroorganisme. Biosurfaktan

memiliki kemampuan untuk menurunkan tegangan permukaan antar cairan yang berbeda. Penelitian
ini bertujuan untuk mengisolasi, mengarakterisasi, dan mengetahui potensi bakteri penghasil
biosurfaktan asal limbah rumah potong ayam tradisional di Dinoyo, Kota Malang. Penelitian ini
menggunakan sampel limbah cair rumah potong ayam tradisional, berupa limbah pemotongan dan
cucian karkas. Karakterisasi bakteri dilakukan dengan uji morfologi dan biokimia berdasarkan fenotip
dan analisis profil pita protein menggunakan Sodium Dodecyl Sulphat-Polyacrylamide Gel
Electrophoresis (SDS-PAGE). Untuk mengetahui kemampuan isolat dalam memproduksi
biosurfaktan dilakukan tes hemolisa, emulsifikasi, dan perhitungan tegangan permukaan. Dari hasil
karakterisasi didapatkan 3 isolat yang memiliki kemampuan menurunkan tegangan permukaan lebih
besar dari 10 dyne/cm. Isolat tersebut mendekati genus Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. dan
didukung dengan hasil analisis profil pita protein. Dapat disimpulkan bahwa isolat bakteri yang
didapat dari limbah cair rumah potong ayam tradisional memiliki kemampuan sebagai penghasil
biosurfaktan.

Kata kunci: rumah potong ayam tradisional, biosurfaktan, tegangan permukaan, SDS-PAGE

ABSTRACT

Biosurfactants are surfactant compounds produced by microorganisms. They have

capabilitiy to reduce surface and interfacial tension. In this study, isolation, characterization and
pottential of biosurfactant producing bacteria assays were assessed from traditional poultry
slaughterhouse waste in Dinoyo, Malang. Samples were collected from waste water of traditional
poultry slaughterhouse, were scalding waste and carcasses washing. Morphological and biochemical
assays were conducted for characterization based on phenotype and profile of protein bands were
using Sodium Dodecyl Sulphat-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE). Analyzed of
haemolysist test, emulsification, and measurement of surface tension were conducted to confirm the
ability of result isolated in biosurfactan production. The results showed that three isolates collected
had the ability to reduce the surface tension more than 10 dyne/cm. Phenotypic characteristics showed
that isolates had genus Bacillus sp. and Pseudomonas sp. and supported by the results of band profile
based on molecular weight protein found in waste water of traditional poultry slaughterhouse. It could
be bear that the bacterial isolates obtained from waste water traditional poultry slaughterhouse, such
as scalding waste and carcasses washing have the ability as a producer of biosurfactant.

Keywords: traditional poultry slaughterhouse, biosurfactant, surface Tension, SDS-PAGE

PENDAHULUAN
Industri Rumah Potong Ayam
(RPA) dalam bidang peternakan
menjalankan fungsinya dalam pemotongan
ayam hidup dan mengolah menjadi karkas
yang siap konsumsi untuk memenuhi
kebutuhan protein hewani masyarakat
(Kariana dan Singgih, 2001). Ayam broiler
merupakan salah satu kontributor bahan
mentah dalam penyediaan karkas ayam.
Diperkirakan bahwa jumlah limbah berupa
lemak dari seekor ayam segar utuh adalah
sekitar 7,80 17,7% dari bobot ayam
tersebut. Satu ekor ayam broiler berukuran
sedang (berat sekitar 2 3 kg) dapat
menghasilkan sekitar 100 gram lemak
yang menempel pada bagian ampela dan
ekor, serta sekitar 2,10% lemak terdapat
pada bagian dada (Nafiah, 2010). Namun,
lemak tersebut belum termanfaatkan
dengan baik oleh masyarakat dan sering
dibuang sebagai limbah pemotongan
hewan. Limbah ini menjadi salah satu
permasalahan lingkungan di sekitar rumah
potong ayam (Singgih dan Kariana, 2008).
Limbah yang ada, sebaiknya
dimanfaatkan untuk mencegah polusi
lingkungan yang dapat meresahkan
masyarakat. Pemanfaatan limbah industri
merupakan salah satu kebijakan
pemerintah dalam melestarikan fungsi
lingkungan hidup, sesuai dengan Undang-
Undang Republik Indonesia Nomor 23
tahun 1997 tentang Pengelolaan
Lingkungan Hidup. Undang-undang
tersebut menjelaskan bahwa pengelolaan
lingkungan hidup adalah upaya terpadu
untuk melestarikan fungsi lingkungan
hidup yang meliputi kebijakan penataan,
pemanfaatan, pemeliharaan, pemulihan,
pengawasan, dan pengendalian lingkungan
hidup. Pelestarian fungsi lingkungan hidup
tidak terlepas dari pemanfaatan limbah
rumah potong ayam dengan prinsip zero
waste, yaitu mengurangi atau
meminimalisasi pencemaran lingkungan
dengan cara pemanfaatan limbah.
Dalam upaya meningkatkan
industri rumah potong ayam dan tetap
menjaga kelestarian fungsi lingkungan
hidup, maka perlu adanya penanganan
terhadap dampak limbah rumah potong
ayam. Salah satu alternatif yang dapat
dilakukan, yaitu dengan metode
bioremediasi cemaran limbah tersebut.
Bioremediasi adalah proses perbaikan dan
pemulihan kondisi lingkungan yang telah
rusak dengan bantuan mikroorganisme
dalam hal ini mikroorganisme penghasil
surfaktan (Kholiq, 2012).
Penelitian biosurfaktan telah
mengalami banyak perkembangan
beberapa tahun ini karena memiliki potensi
untuk dimanfaatkan dalam industri
pertanian, farmasi, minyak, dan kertas.
Perkembangan penelitian ini menjadi
sangat penting dalam upaya perlindungan
lingkungan. Keuntungan yang paling
signifikan dalam penggunaan bakteri
surfaktan dibanding kimia surfaktan
(surfaktan sintetis) adalah penerimaan
lingkungan, karena kemampuan
biodegradasi dan tidak memberikan efek
racun untuk lingkungan (Maslin and
Maier, 2000).
Parra et al. (2000) menyatakan
bahwa bakteri penghasil biosurfaktan
banyak ditemukan pada daerah yang
tercemar minyak maupun lemak. Oleh
karena itu, penelitian ini dilakukan untuk
memperoleh isolat bakteri penghasil
biosurfaktan asal limbah minyak rumah
potong ayam (RPA) tradisional dan
mengetahui sejauh mana isolat bakteri
tersebut dapat menghasilkan biosurfaktan.
Dengan karakterisasi berdasarkan uji
morfologi dan biokimia, pengukuran
tegangan permukaan dengan metode
Cincin Du-Nouy dan analisa profil pita
protein isolat terpilih dengan
menggunakan Sodium Dodecyl Sulphat-
Polyacrylamide Gel Electrophoresis
(SDS-PAGE) pada kandidat bakteri
penghasil biosurfaktan.
MATERI DAN METODE
ALAT DAN BAHAN
Peralatan yang digunakan adalah
seperangkat alat steril pengambilan
sampel, glass ware, vortex (Maxi Mix II),
Laminar Air Flow (LAF) (Nuaire Labgard
Class II), inkubator (MMM Medcenter),
mikroskop cahaya (Olympus TL2), foto
digital mikroskopik (Olympus CX41),
seperangkat alat pengukur tegangan
permukaan, dan seperangkat alat
elektroforesis. Sedangkan bahan-bahan
yang digunakan adalah Peptone
(HIMEDIA REF RM 001-500G),
Tryphtone Soya Agar (TSA) OXOID
CM0131, Oksidase stick, OF Basal
medium (MERCK 1.10282), H2O2 3 %,
NaOH, Oksidase kit, n-heksan, pewarna
gram, perwarna spora, Gel
Polyacrylamide, 0,3 % Tris, 1,44%
glycine, 0,1% SDS, Coomassie blue R-250
(MP001), 50% methanol, 10 % acetic
acid, Page Ruler TM Prestained Protein
Ladder Plus (SM1811).
Prosedur Penelitian
Isolasi Bakteri
Isolasi bakteri dilakukan sesuai
dengan standar metode uji mikrobiologi
menrut Standar Nasional Indonesia (SNI)
6887-1:2012. Limbah cair rumah potong
ayam tradisional, berupa limbah
pemotongan dan limbah cucian karkas di
daerah Dinoyo, kota Malang diambil
sebanyak 60 ml yang dimasukkan ke
dalam botol steril. Limbah diperlakukan
pengenceran berseri 10-1-10-6
menggunakan larutan pepton steril. Hasil
pengenceran 10-2, 10-4, dan 10-6 ditanam
menggunakan metode pour plate pada
media Trypthone Soya Agar (TSA),
diinkubasi pada suhu 30C selama 48 jam.
Hasil koloni yang ditumbuh dilakukan
penghitungan koloni serta pengamatan
morfologi koloni. Pemurnian bakteri
dilakukan dengan menanam pada media
TSA diinkubasi pada suhu 30C selama 48
jam. Target pemurnian adalah setiap
koloni yang memiliki perbedaan
morfologi. Selanjutnya, dipilih 7 jenis
koloni dominan untuk dilakukan
karakterisasi koloni dan sel bakteri yang
didapat dari 4 kali ulangan secara duplo
sehingga diperoleh 56 isolat yang berasal
dari limbah pemotongan dan limbah
cucian karkas. Hasil permunian
ditumbuhkan pada agar miring media TSA
diinkubasi pada suhu 30C selama 48 jam
dan disimpan pada suhu -20C. Untuk uji
selanjutnya, dilakukan penanaman pada
agar miring media TSA untuk
mendapatkan fresh culture.
Karakterisasi Bakteri
Karakterisasi isolat berpedoman
pada buku Cowan and Steels Manual for
the identification of medical bacteria
(Barrow & Feltham, 1993). Sifat
morfologi yang diamati meliputi morfologi
koloni dan morfologi sel bakteri; dari
pewarnaan gram dan pewarnaan spora.
Sedangkan karakterisasi secara biokimiawi
yang dilakukan antara lain; uji motilitas,
katalase, oksidase, Indol, uji MR-VP,
oksidatif-fermentatif (OF) dan TSIA.
Uji Seleksi Bakteri Penghasil Biosurfaktan
a) Blood Haemolysist Test
Fresh culture dari isolat murni
di-streak pada Blood Agar Plate dan
diinkubasi 48-72 jam pada suhu 37oC.
Koloni bakteri yang diamati akan terlihat
zona bening yang mengindikasikan adanya
bakteri penghasil biosurfaktan.
b) Pengukuran Aktivitas Emulsifikasi
Aktivitas emulsifikasi diukur
dengan menggunakan 4,5 ml supernatan
ditambah dengan 0,5 ml hidrokarbon (n-
heksan) divorteks selama 1 menit.
Campuran tersebut diukur kestabilan
emulsinya dengan mengukur nilai OD
campuran setelah inkubasi selama 2 jam,
pada panjang gelombang 610 nm.
Pengukuran Tegangan Permukaan
Nilai tegangan permukaan 50 ml
supernatan bakteri diukur menggunakan
alat tensinometer Du Nouy. Penurunan
nilai tegangan permukaan sebesar lebih
dari 10 dyne/cm menunjukkan bahwa
bakteri tersebut berpotensi baik
menghasilkan biosurfaktan.
Analisa Profil Pita Protein menggunakan Isolasi dan Karakterisasi Bakteri
SDS-Page Isolasi bakteri meggunakan
Analisa profil pita protein sampel limbah cair rumah potong ayam
dilakukan untuk mendukung hasil tradisional, berupa limbah pemotongan
karakteristik fenotip isolat bakteri dan cucian karkas yang ditumbuhkan pada
penghasil biosurfaktan dengan media selektif Tryphone Soya Agar (TSA).
menggunakan Sodium Dodecyl Sulphat- Penelitian ini dilakukan empat kali
Polyacrylamide Gel Electrophoresis ulangan secara duplo dan diperoleh 56
(SDS-PAGE). Analisa profil pita protein koloni yang dilakukan karakterisasi koloni
menggunakan SDS-PAGE meliputi, dengan uji morfologi koloni dan bakteri.
preparasi sampel protein bakteri, Hasil karakterisasi koloni dan bakteri pada
electrophoresis dan pengukuran berat limbah pemotongan dan cucian karkas
molekul protein. didapatkan 7 koloni berbeda dapat dilihat
pada Tabel berikut:
HASIL DAN PEMBAHASAN

Tabel 5.1 Karakteristik Morfologi Koloni dan Bakteri Asal Limbah Pemotongan RPA
Rerata Jumlah Koloni
Morfologi Koloni Morfologi Bakteri
Kode Bakteri (cfu/ml)*
Isolat Limbah Pemotongan
Warna Bentuk Tepi Bentuk Gram
(102cfu/ml)*
P1 Putih Bulat Rata Coccobacill Negatif 275.20
P2 Putih Bulat Rata Bacill Positif 5.32.30
P3 Putih Tak beraturan Tidak rata Bacill Positif 3.51.90
Total 35.89.40

Tabel 5.2 Karakteristik Morfologi Koloni dan Bakteri Asal Limbah Cucian Karkas RPA
Rerata Jumlah Koloni
Morfologi Koloni Morfologi Bakteri
Kode Bakteri (cfu/ml)*
Isolat Limbah Cucian Karkas
Warna Bentuk Tepi Bentuk Gram
(103cfu/ml)*
C1 Putih Bulat Rata Coccobacill Negatif 356.00
C2 Putih Bulat Rata Bacill Positif 4.42.09
C3 Putih Bulat Rata Cocccus Negatif 1.41.20
C4 Kuning Bulat Rata Coccobacill Negatif 8.53.00
Total 49.312.29
Keterangan: * Rerata jumlah bakteri dihitung dari duplikat sampel yang ditanam pada duplikat
cawan dengan 4 ulangan.
P: Limbah Pemotongan,
L: Limbah Cucian Karkas

Karakteristik morfologi koloni mikroskopis, yaitu koloni isolat P2, C2

diihat dari warna, bentuk, dan tepi dari dan P3. Isolat P2 dan C2 ditemukan pada
koloni yang diamati, sedangkan limbah cair pemotongan dan cucian
karakteristik morfologi bakteri dilihat dari karkas, sedangkan isolat P3 hanya
penataan dan Gram dari bakteri tersebut. ditemukan di limbah cair pemotongan.
Bentuk coccus pada morfologi bakteri Begitu pula dengan morfologi bakteri
isolat C3 hanya ditemukan pada limbah berbentuk coccobacill yang dimiliki isolat
cucian karkas. Morfologi bakteri P1, C1 dan C4. Isolat P1 dan C1
berbentuk bacil pada pengamatan ditemukan pada limbah cair pemotongan
dan cucian karkas, sedangkan isolat C4
hanya ditemukan pada limbah cucian
karkas. Hal ini menunjukkan adanya
perbedaan pada jenis koloni bakteri
berdasarkan tempat pengambilan sampel
yang digunakan dalam penelitian ini.
Pengamatan morfologi bakteri
pada isolat C2, P2 dan P3 yang memiliki
koloni berwarna putih, bentuk koloni bulat
maupun tidak beraturan, tepian koloni rata
dan tidak rata, berbentuk bacill, dan
bersifat Gram positif. Isolat bakteri C2, P2
dan P3 memiliki morfologi koloni dan
bakteri mendekati genus Bacillus sp.
Menurut Corbin (2004), koloni bakteri
Bacillus sp. memiliki ciri berwarna putih
sampai kekuningan, tepi koloni pada
umumnya tidak rata, dan bentuk koloni
bulat. Pada pengamatan morfologi bakteri
pada isolat P1, C1, C3 dan C4 yang
memiliki koloni berwarna putih maupun
kuning, bentuk koloni bulat, tepian koloni
rata, berbentuk coccobacill maupun coccus
dan bersifat Gram negatif. Dari ciri
tersebut isolat bakteri P1, C1, C3 dan C4
memiliki morfologi koloni dan bakteri
mendekati genus Pseudomonas sp. Bakteri
Pseudomonas sp. memiliki ciri koloni
berwarna putih kekuningan, bentuk koloni
bulat, dengan tepian koloni yang rata
(Fatimah, 2007).
Limbah pemotongan memiliki
jumlah total koloni bakteri 35.89.40x102
cfu/ml. Nilai ini lebih kecil dibandingkan
limbah cucian karkas memiliki jumlah
koloni bakteri dengan rerata
49.312.29x103 cfu/ml. Besarnya nilai
standar deviasi pada limbah cucian karkas
menunjukkan bahwa tingkat populasi
bakteri di limbah cair rumah potong ayam
tradisional cukup besar. Menurut Tarntip
dan Thungkao (2011), jumlah koloni
bakteri limbah cucian karkas dipengaruhi
beberapa faktor antara lain, sumber air dan
tempat cucian karkas yang digunakan
selama proses pencucian karkas.
Diketahui pada Tabel 5.1 dan
Tabel 5.2 isolat bakteri berbentuk bacill
ditemukan pada limbah pemotongan
berjumlah 8.84.2x102 cfu/ml dan limbah
cucian karkas berjumlah 4.42.09x103
cfu/ml. Hal ini menunjukkan bahwa
bakteri berbentuk bacill memiliki jumlah
yang cukup besar pada populasi mikroba
limbah cair rumah potong ayam. Diketahui
bahwa Bacillus sp. termasuk bakteri yang
kuat terhadap cemaran lingkungan karena
mampu membentuk endospora (Kumar &
Nussinov, 2011).
Isolat bakteri berbentuk
coccobacil berdasakan Tabel 5.1 dan Tabel
5.2 didapat pada pengamatan
mikroskopis, yaitu koloni isolat P1, C1
dan C4. Jumlah koloni yang ditemukan
pada limbah pemotongan berjumlah
275.20x102 cfu/ml dan limbah cucian
karkas berjumlah 43.59.0x103 cfu/ml.
Isolat P1 dan C1 ditemukan di limbah cair
pemotongan dan cucian karkas, sedangkan
isolat C4 hanya ditemukan di limbah
cucian karkas. Ada pula isolat bakteri
berbentuk coccus hanya ditemukan pada
limbah cucian karkas dengan jumlah
koloni 1.41.20x103 cfu/ml.
Setelah diketahui karakteristik
morfologi, dilakukan karakterisasi
biokimia dari isolat bakteri berdasarkan
Manual for the Identification of Medical
Bacteria (Barrow & Feltham, 1993).
Berdasarkan hasil pengamatan
karakteristik biokimia diperoleh genus
Bacillus sp. dan Pseudomonas sp. sesuai
pada Tabel 5.3.
 Tabel 5.3 Karakteristik Bakteri Asal Limbah Cair RPA Tradisional
Karakteristik
Karakteristik Biokimia
Morfologi
Kode

Oksidase
Motilitas

Katalase
Genus

Aerobik

MR-VP
Spora

Gram

Indol

TSIA
Isolat

O/F
P1 - - + + + + - - + + Pseudomonas sp.
P2 + + + + + + F - + + Bacillus sp.
P3 + + + + + + - - + + Bacillus sp.
C1 - - + + + + F - + + Pseudomonas sp.
C2 + + + + + + F - + + Bacillus sp.
C3 + + + + + + F - + + Bacillus sp.
C4 - - + + + + F - + + Pseudomonas sp.
Keterangan:
(-) negatif (P) sampel limbah pemotongan (F) Fermentatif
(+) positif (C) sampel limbah cucian karkas

Tabel 5.3 menunjukkan bahwa positif, tidak berspora, dan bersifat motil.
isolat P2, P3, C2 dan C3 memiliki Pseudomonas sp. terdapat pada limbah
karakteristik mendekati genus Bacillus sp.. yang mengandung minyak yang dapat
Barrow (1993) menyatakan bahwa dimanfaatkan untuk pengolahan limbah
Bacillus sp. merupakan bakteri berbentuk cair (Tantrip, 2009).
batang, tergolong bakteri bersifat motil
(reaksi non-motil kadang terjadi), Uji Seleksi Bakteri Penghasil
menghasilkan spora yang biasanya resisten Biosurfaktan
pada panas, bersifat aerob (beberapa Setelah didapatkan isolat bakteri
spesies bersifat anaerob fakultatif), asal limbah pemotongan dan cucian karkas
katalase positif, dan oksidasi bervariasi. rumah potong ayam tradisional, dilakukan
Isolat P1, C1 dan C4 setelah uji seleksi bakteri dengan menggunakan 2
dilakukan karakterisasi memiliki metode, yaitu Blood Haemolysis Test dan
karakteristik mendekati genus emulsifikasi. Uji seleksi dilakukan untuk
Pseudomonas sp. yang memiliki morfologi mengetahui kemampuan bakteri tersebut
bakteri berbentuk batang, Gram negatif, sebagai penghasil biosurfaktan. Hasil dari
bersifat aerob, katalase positif, oksidasi uji seleksi dapat dilihat pada Tabel 5.4

Tabel 5.4 Uji Seleksi Bakteri Asal Limbah Cair RPA Tradisional
Kode Blood Haemolysist
Emulsifikasi Keterangan
Isolat Test
P1 - Tidak Diuji Pseudomonas sp.
P2 + 0,083 Bacillus sp.
P3 + 0,167 Bacillus sp.
C1 + 0,032 Pseudomonas sp.
C2 + 0,052 Bacillus sp.
C3 + 0,050 Bacillus sp.
C4 + 0,086 Pseudomonas sp.
Keterangan: Emulsifikasi diukur dengan nilai OD pada 610 nm
(+) membentuk zona bening
(-) tidak membentuk zona bening
 Hasil positif ditunjukkan dari
Blood Haemolysist Test pada Tabel 5.4
didapat 6 isolat yang menghasilkan zona
bening, yang mengindikasikan adanya
bakteri penghasil biosurfaktan. Zona
bening dibentuk oleh bakteri penghasil
surfaktan yang memiliki kemampuan
untuk memecah dan mengurai materi
organik yang terdapat pada media agar
darah (Anandaraj et al., 2010).
Biosurfaktan juga memiliki
kemampuan mengemulsikan zat cair yang
berbeda polaritas, hal ini dapat diketahui
dengan melakukan uji emulsifikasi. Prinsip
uji emulsifikasi adalah perbandingan tinggi
minyak yang teremulsi di dalam air dengan
tinggi campuran minyak dan air.
Campuran minyak dan air yang dikocok
dengan kecepatan tinggi akan
mengakibatkan kedua zat cair menyatu.
Namun, adanya perbedaan polaritas akan
mengakibatkan campuran air dan minyak
memisah setelah dibiarkan hingga stabil.
Biosurfaktan di dalam campuran tersebut
akan mencegah terjadinya pemisahan
tersebut dan akan menghasilkan lapisan
minyak teremulsi (Willumsen et al, 2000).
Emulsi yang terjadi pada permukaan
cairan dapat terjadi karena kemampuan
senyawa surfaktan untuk menggabungkan
senyawa polar (cairan media Nutrient
Broth) dan senyawa non polar (N-heksan).
Bodour & Miller-Maier (1998)
menyatakan bahwa jumlah senyawa
surfaktan yang terbentuk dapat dinyatakan
melalui kemampuan surfaktan mengurangi
tegangan pada permukaan cairan. Dengan
adanya emulsi yang terbentuk di antara
cairan media dan N-heksan, maka volume
Tabel 5.5 Hasil Perhitungan Tegangan Permukaan
Tegangan Permukaan
Isolat
(dyne/cm)
Kontrol 48,26
P2 37,67
P3 39,99
C4 41,19
N-heksan yang berada di atas cairan media
pasti akan menurun.
Berdasarkan Tabel 5.4
menunjukkan bahwa isolat P2, P3, dan C4
memiliki aktivitas emulsifikasi yang baik
karena memiliki nilai emulsi yang besar.
Hasil uji emulsifikasi dinyatakan adanya
aktivitas emulsifikasi. Aktivitas
emulsifikasi berhubungan dengan
konsentrasi surfaktan, karena semakin
besar konsentrasi biosurfaktan,
kemampuan senyawa tersebut untuk
mengemulsifikasi minyak mentah juga
semakin bertambah (Walter et al. 2010).
Kosaric (2001) menyatakan bahwa
emulsifikasi dari biosurfaktan dapat terjadi
akibat adanya beberapa faktor.
Diantaranya adalah keberadaan senyawa
hidrofob dan senyawa hidrofil, kondisi air,
temperatur dan komponen ataupun
molekul biosurfaktan itu sendiri.
Pengukuran Tegangan Permukaan
Hasil koleksi isolat Bacillus sp.
dan Pseudomonas sp. dengan konsentrasi
aktivitas emulsifikasi yang besar diukur
tegangan permukaannya dengan metode
Cincin Du-Nouy. Semakin besar
konsentrasi biosurfaktan, kemampuan
senyawa tersebut untuk mengemulsifikasi
minyak mentah juga semakin baik.
Surfaktan adalah senyawa yang dapat
menurunkan tegangan permukaan
air/larutan. Aktivitas surfaktan diperoleh
karena memiliki sifat ganda dari
molekulnya. Molekul surfaktan memiliki
sifat polar (gugus hidrofilik) dapat dengan
mudah larut di dalam air dan sifat non
polar (gugus hidrofobik) yang mudah larut
dalam minyak (Willumsen, 2000).
Penurunan Tegangan
Permukaan (dyne/cm)
0,00
10,59
9,27
7,07
 Perhitungan tegangan permukaan
ini bertujuan untuk mengetahui seberapa
besar kemampuan bakteri penghasil
biosurfaktan tersebut terhadap penurunan
tegangan permukaan antar cairan. Tabel
5.5 menunjukkan bahwa terdapat
perbedaan nilai tegangan permukaan
supernatan ketiga kultur yang
dibandingkan dengan kontrol. Turunnya
nilai tegangan permukaan supernatan
dievaluasi untuk mengetahui potensi
bakteri dalam menghasilkan biosurfaktan.
Sheppard dan Mulligan (2000)
menyatakan bahwa efektivitas dari suatu
senyawa surfaktan dapat dinyatakan
melalui kemampuan surfaktan dalam
menurunkan tegangan permukaan cairan.
Nilai tegangan permukaan
terendah dicapai pada kultur dengan
substrat N-heksan (37,67 dyne/cm),
dengan penurunan sebesar 10,59 dyne/cm
dibanding kontrol. Menurut Tang et al.
(2011) penurunan nilai tegangan
permukaan melebihi 10 dyne/cm
merupakan indikasi bakteri tersebut
berpotensi menghasilkan biosurfaktan.
Perbedaan penurunan tegangan permukaan
setiap isolat diduga karena jenis dan tipe
dari biosurfaktan yang dihasilkan setiap
isolat berbeda-beda. Rosenberg et al.
(2003) menyatakan bahwa perbedaan tipe
dan komponen biosurfaktan yang
dihasilkan tiap-tiap isolat juga akan
mempengaruhi aktivitas emulsifikasi yang
terjadi pada permukaan cairan. Hal ini
pastinya akan memberikan hubungan
antara aktivitas emulsi yang tinggi dapat
menyebabkan aktivitas biosurfaktan juga
akan meningkat.
Analisa Profil Pita Protein Bakteri
Penghasil Biosurfaktan
Analisa profil protein
menggunakan 3 isolat representatif dipilih
berdasarkan uji seleksi bakteri dengan
Blood Haemolysist Test dan emulsifiikasi
untuk diketahui profil proteinnya
menggunakan SDS-PAGE. Hasil dari
analisa profil protein isolat berdasarkan
berat molekul akan mendukung dari hasil
karakterisasi isolat bakteri penghasil
biosurfaktan berdasarkan uji morfologi dan
biokimia. Sesuai dengan pendapat Ghazi et
al (2009) yang menyatakan metode analisa
SDS-PAGE dengan ekspresi profil protein
dapat digunakan untuk mendukung hasil
karakterisasi isolat bakteri penghasil
biosurfaktan. Hasil profil protein isolat
bakteri penghasil biosurfaktan dapat dilihat
pada Gambar 5.1.

kDa
250__
130__
100__
70__
55__

35__

25__

15__
10__
M P2 P3 C4

Gambar 5.1 Profil Pita Protein Isolat Bakteri Penghasil Biosurfaktan menggunakan SDS-
PAGE.
Keterangan: M: Marker; P2 dan P3: dugaan isolat Bacillus sp.; C4: dugaan
isolat Pseudomonas sp.
 Dari hasil running dengan gel
elektroforesis menggunakan SDS-PAGE
dapat terdeteksi berat molekul isolat
bakteri penghasil biosurfaktan dengan
kisaran 11,60 kDa hingga 136,72 kDa,
berat molekul protein dan jumlah pita
masing-masing isolat bakteri penghasil
biosurfaktan yang memiliki kemiripan
dapat dilihat pada Tabel 5.5.
Tabel 5.5 Karakterisasi Bakteri Penghasil
Biosurfaktan berdasarkan Berat
Molekul Hasil SDS-PAGE
dengan Satuan kDa
P2 P3 C4
104,57 104,57 - sama. Semakin banyak jumlah kemiripan
- - 69,94
68,09 68,09 - kesamaan karakteristik isolat bakteri
61,17 61,17 - semakin tinggi. Berbeda dengan isolat
- - 57,97
- - 50,70
46,78 46,78 - kedua isolat tersebut berdasarkan berat
- - 44,34
Dari hasil SDS-PAGE pada
Tabel 5.5 dapat dilihat karakteristik pita
protein isolat P2, P3 dan C4 yang
memperlihatkan jumlah pita protein
beserta berat molekul protein terdeteksi.
Hal tersebut menunjukkan bahwa
karakteristik fenotip ketiga isolat memiliki
variasi bakteri penghasil biosurfaktan yang
dikelompokkan dalam genus berbeda
(Bacillus sp. dan Pseudomonas sp.)
berdasarkan berat molekul pita protein.
Didapat dua isolat, P2 dan P3
(Bacillus sp.) yang berasal dari limbah cair
pemotongan memiliki kemiripan
ditunjukan dengan adanya pita protein
dengan berat molekul 104,57 kDa, 68,09
kDa, 61,17 kDa, dan 46,78 kDa. Menurut
Mubarik (2001) Bacillus sp. memiliki
berat molekul pada profil pita protein 44-
78 kDa. Pada isolat C4 (Pseudomonas sp.)
yang berasal dari limbah cucian karkas
memiliki perbedaan dengan kedua isolat
tersebut dapat dilihat dari profil pita
protein dengan berat molekul 69,94 kDa,
57,97 kDa, 50,70 kDa, dan 44,34 kDa.
Pseudomonas sp. memiliki profil
pita protein fungsional dengan berat
molekul 20 60 kDa dari hasil isolasi
protein ekstraselular (Liao et al., 1998,
McKevitt et al., 1989, and Sexton et al.,
1994).
Profil pita protein yang terdeteksi
berkaitan erat dengan karakteristik dari
isolat bakteri penghasil biosurfaktan hasil
isolasi. Kemiripan pita protein yang
terdeteksi antara isolat bakteri penghasil
biosurfaktan yang didapat dari limbah
pemotongan menunjukan bahwa isolat
hasil isolasi mempunyai karakteristik yang
pita protein yang terdeteksi, maka tingkat
penghasil biosurfaktan hasil isolasi
yang didapat dari limbah cucian karkas
tidak menunjukkan kemiripan dengan
molekul dari profil pita proteinnya. Hal ini
dapat disimpulkan bahwa adanya variasi
bakteri penghasil biosurfaktan pada limbah
cair rumah potong ayam tradisional
berdasarkan profil pita protein dengan
menggunakan metode SDS-PAGE.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian
maka disimpulkan bahwa dari hasil isolasi
bakteri penghasil biosurfaktan asal dari
limbah cair rumah potong ayam tradisional
didapatkan jumlah bakteri 8,84,2x102
cfu/ml dari limbah pemotongan dan jumlah
bakteri 8,53,0x103 cfu/ml dari limbah
cucian karkas. Bakteri penghasil
biosurfaktan asal limbah cair rumah
potong ayam tradisional memiliki
karakteristik fenotip mendekati genus
Bacillus sp. dan Pseudomonas sp.. Hasil
karakteristik profil pita protein mendukung
adanya variasi genus bakteri penghasil
biosurfaktan. Isolat penghasil biosurfaktan
hasil isolasi limbah cair rumah potong
ayam tradisional diketahui mempunyai
potensi yang cukup baik sebagai penghasil
biosurfaktan yang ditunjukkan dengan
kemampuan bakteri tersebut terhadap
penurunan tegangan permukaan.
UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada direktorat
jenderal DIKTI karena telah memberikan
pembiayaan penelitian ini. Terima kasih
kepada Laboratorium Sentral Ilmu Hayati,
Laboratorium Mikrobiologi Program
Kedokteran Hewan, serta Laboratorium
Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Brawijaya
sebagai tempat pelaksanaan penelitian.
DAFTAR PUSTAKA
Amara, Amro A, et al. 2009. The
Possibility to Use Bacterial Protease
and Lipase as Biodetergent. Global
Journal of Biotechnology &
Biochemistry 4 (2): 104-114
Anandaraj, B and P.Thivakaran. 2010.
Isolation and Production of
Biosurfactant Producing Organism
from Oil Spilled Soil. Journal
Bioscient Technology, vol 1
(3),2010,120126 p.g. Department of
Microbiology, Thanthai Hans
Roever College, Peramabalur 621
212. Tamilnadu., India.
Aqi. 2008. Biosurfaktan dalam Operasi
Teknik Lingkungan. Teknologi.
Forum Sains Indonesia.
Asian Productivity Organiztion. (2001),
Green Productivity Training
Manual. Tokyo: APO
Barrow dan Feltham. 1993. Manual for
identification of medical bacteria.
3rd Edn. Cambridge University
Press, Cambridge, London.
Berber, Ismet. 2004. Characterization of
Bacillus species by numerical
analysis of their SDS-PAGE protein
profiles. Journal of Cell and
Molecular Biology 3: 33-37. Hali
University, Printed in Turkey.
Bird, T. 1993. Kimia Fisika Untuk
Universitas. Jakarta: Gramedia
Pustaka Utama.
Bodour, A. A. and R. M Miller-Maier.
1998. Application of a Modified
Drop Collapsing Technique for
Surfactant Quantitation and
Screening of Biosurfactant
Producing Microorganisms. Journal
of Microbiological Methods. 32:
273-280.
Brenner, Don J., Noel R. Krieg, J.T.
Staley. 2005. Bergeys Manual of
Systematic Bacteriology. Second
Edition. Vol. 2. Springer.
Brown, M. J. 1990. Biosurfactants for
Cosmetic Applications. International
Journal of Cosmetic Science. 13: 61-
64.
Cameotra, S. S. and R. S. Makkar. 2004.
Recent Applications of Biosurfactant
as Biological and Immunological
Molecules. Cur. Opin. Microbiol. 7:
262-266.
Dehghan, G. G., E. Behravan, and M.
Moshafi. 2008. Studies on
Biosurfactants Production by
Bacillus licheniformis. Iran:
Pharmaceutics Research Center,
Kerman University of Medical
Sciences.
Devrise, L.A., Pot, B., Vandamme, P.,
Kersters, K., and Haesebrouck, F.,
1995. Identification of Enterococcus
spesies isolated from food product of
animal origin. Int. J. Food
Microbiol. 26, 187-197.
Fatimah. 2007. Uji produksi biosurfaktan
oleh pseudomonas sp. pada substrat
yang berbeda. Jurusan Biologi
FMIPA Universitas Airlangga
Surabaya
Francy DS, Thomas JM, Raymond RL and
Ward CH, 1991. Emulsification of
Hydrocarbons by Surface Bacteria. J
ind Microbiol 8: 234246.
Garrity, G. M. 2005. Bergeys Manual of
Systematic Bacteriology. Second
Edition. Vol. 2. Part B. Springer.
Handayani D.T. 2006. Karakterisasi
Protein Imunoglobulin Y (IgY)
Kuning Telur H5N1, H5N2, H5N9
Menggunakan Metode Sodium
Dodecyl Sulphate-Polyacrylamide
Gel Electrophoresis (SDS-PAGE).
Bogor: Fakultas Kedokteran Hewan,
Institut Pertanian Bogor.
Jennings, E. M. and R. S. Tanner. 2000.
Biosurfactant - Producing Bacteria
Found in Contaminated and
Uncontaminated Soils. Proceedings
of the 2000 Conference on
Hazardous Waste Research. Dept. of
Botany and Microbiology,
University of Oklahoma.
Johnsons V, Sigh M, Saini VS, Andikari
DK, Sista V and Yadav NK, 1992.
Bioemulsifer Production Using Non
Aseptic Fermentation of Mixed
Cultures. J Biotechnol and Bioeng
44: 661666.
Kholiq, Ing M. Abdul. 2012. Balai
Teknologi BPPT mengembangkan
Biosurfaktan untuk Bioremediasi
Hidrokarbon. Serpong.
Kosaric, N. 2001. Biosurfactants and
Their Applications for Soil
Bioremediation. Food Technol.
Biotechnol. 39(4): 295304.
Kumar, S. dan Nussinov, R. 2001. How
do Thermophilic Protein Deal with
Heat. Cellular and Molecular Life
Science. 58, 1216-1233.
Lay, B. W. 1994. Analisis Mikroba di
Laboratorium. Edisi pertama. P.T.
Raja Grafindo Persada. Jakarta.
Lestari, Septianingtyas. Fitri W. Hartanti.
2010. Tegangan Permukaan Cairan
dengan Metode Cincin Du Nouy.
Departemen Kimia. Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam. Institut Teknologi Bandung.
Liao, C.H. and D.E. McCallus. 1997.
Biochemical and genetic
characterization of an extracellular
protease from Pseudomonas
fluorescens CY091. Appl. Environ.
Microbiol. 64:914-921.
Maslin, P and R. M. Maier. 2000.
Rhamnolipid-Enhanced ineralization
of Phenanthrene in Organic-Metal
Co-Contaminated Soils.
Bioremediation Journal. 4(14): 295-
308
Mubarik, Rachmania. 2011. Penapisan
Bacillus dan Karakterisasi Protease
dan Amilase Ekstraseluler yang
Dihasilkan untuk Degradasi Sisa
Pakan pada Budi Daya Udang.
Institut Pertanian Bogor: Maret.
Mulligan, C.N. 2005. Environmental
application for biosurfactants.
Environ.Pollut. 133:183-198. Saeki,
H., M. Sasaki, K. Komatsu, and H.
Matsuda. 2007. Remediation of
Spilled Oil Using Biosurfactant
Produced by Gordonia sp. JE-1058.
Bioresearch Center. Japan Energy
Corporation.
Nafiah. 2010. Lemak Ayam Cegah Global
Warming. http://id.shvoong.com/
exactsciences/chemistry/2035780 -
lemak - ayam -cegah-global-
warming/. (18 Maret 2011).
Nugroho, Astri. 2006. Produksi
Biosurfaktan oleh Bakteri Pengguna
Hidrokarbon dengan Penambahan
Variasi Sumber Karbon. Jurusan
Teknik Lingkungan. Universitas
Trisakti. Grogol. Jakarta Barat. Hal:
312-316.
Nur, M. A. dan H. Adijuwana. 1989.
Teknik Pemisahan dalam Analisis
Biologi. Departemen Pendidikan dan
Kebudayaan. Direktorat Jendral
Pendidikan Tinggi Pusat Antar
Universitas Ilmu Hayat Institut
Pertanian Bogor, Bogor.
Parra, J. L., J. Guinea, M. A. Manresa, M. SNI 2897-2008. Metode Pengujian
Robert, M. E. Mercade, F. Comelles Cemaran Mikroba Dalam Daging,
and M. P. Bosch. 2000. Chemical Telur Dan Susu, Serta Hasil
Characterization and Olahannya. ICS 67.120.20
Physicochemical Behavior of Soo, Y. D., Seok, B. L. and Eun, K. K.
Biosurfactant. J. Am. Oil Chem. 2005. Characteristics of Microbial
Soc. 66: 141-145. Biosurfactant as an Antifungal Agent
Rantam, F. A. 2003. Metode Imunologi. Against Plant Pathogenic Fungus.
Edisi 1. AUP. Surabaya Journal of microbiology and
biotechnology. 15: 1164-1169.
Reynold, J. 2004. O/F Glucose Media.
http/:www.rlc.deccd.edu Tang, Muhamad dan Veinardi Suendo.
2011. Pengaruh Penambahan
Riffiani, Rini. 2010. Bakteri Penghasil
Pelarut Organik Terhadap
Biosurfaktan yang Diisolasi dari
Tegangan Permukaan Larutan
Pulau Laki Kepulauan Seribu.
Sabun. Prosiding Simposium
Bidang Mikrobiologi. Vol.5.
Nasional Inovasi Pembelajaran dan
Desember. Bogor.
Sains 2011 (SNIPS 2011), Bandung,
Rosenberg, M., D. Gutnick, and E. Indonesia
Rosenberg. 2003. Adherence of
Tarntip. R dan Thungkao Sirichom. 2011.
Bacteria to Hydrocarbons: A Simple
Isolation of proteolytic, lipolytic, and
Method for Measuring Cell-surface
bioemulsifying bacteria for
Hydrophobicity.FEMS Microbiology
improvement of the aerobic
Letters. 9: 29-33.
treatment of poultry processing
Sheppard, J. D. and C. N. Mulligan. 2000. wastewater. African Journal of
The Production of Surfactin by Microbiology Research Vol. 5(30)
Bacillus subtilis Grown on Peat
Wardhana, W. A. 2001. Dampak
Hydrolysate. Appl. Microbiol.
Pencemaran Lingkungan.
Biotechnol. 27: 110-116.
Yogyakarta: Penerbit Andi.
Singh, A., Van Hamme J.D. and Ward
Willumsen PA, and Karlson U, 2000.
O.P. 2006. Surfactants in
Screening of Bacteria, Isolated from
Microbiology and Biotechnology:
PAH Contaminated Soils, for
Parts 2, Applications Aspects.
Production of Biosurfactans dan
Biotechnol. Adv. 25(1): 99-121.
Bioemulsifiers. Biodegradation 7:
Singgih M.L dan M. 415423.
Kariana.2008. Peningkatan
Produktifitas & Kinerja Lingkungan
Dengan Pendekatan Green
Productivity Pada Rumah
Pemotongan Ayam XX ,Purifikasi
Jurnal Teknologi & Manajemen
Lingkungan, ISSN: 1411-
3465, Jurusan Teknik Lingkungan
FTSP-ITS & Ikatan Ahli Teknik
Penyehatan & Teknik Lingkungan
Indonesia-Jawa Timur, Volume
9,Nomor 2, Surabaya, Juli 2008