ALMACENAMIENTO
Para ms informacin, consulte el apartado Advertencias y
precauciones en este prospecto.
1
PRECAUCIONES DE MANIPULACIN Identificacin de colonias
1. No utilice los reactivos transcurrida la fecha de caducidad.
2. Se debe evitar la contaminacin microbiolgica de los reactivos, ya Paso 1 Dispense aproximadamente 200 l de solucin salina en un tubo
de suspensin. Se puede utilizar el dispensador de muestras
que puede reducir la duracin del producto y producir resultados
desechable que est graduado para aproximadamente 200 l.
errneos.
Paso 2 Despus de incubar el cultivo durante una noche, recoja con la
3. Antes del uso, deje que los reactivos y las muestras alcancen la parte plana del bastoncillo para mezclar 1 2 colonias que crea
temperatura ambiente (entre 18 y 30C). Tan pronto haya terminado son de Shigella de tamao medio (entre 1 mm y 2 mm) de la
de usar los reactivos almacnelos a la temperatura recomendada. placa de cultivo y emulsione con cuidado las bacterias con la
Los reactivos de ltex que presenten agregacin cuando los solucin salina. Si las colonias son pequeas, es necesario
dispense por primera vez pueden haber estado congelados y no se recoger una cantidad mayor cubriendo el extremo del bastoncillo.
deben utilizar. Deseche el bastoncillo de manera adecuada.
4. Almacene los reactivos de ltex en posicin vertical a una Paso 3 Resuspenda los reactivos de ltex 1 y 2 agitndolos bien durante
temperatura entre 2 y 8C. Despus de un perodo de unos segundos. Mantenga el frasco cuentagotas en posicin
almacenamiento prolongado, es posible que el ltex se haya vertical y dispense 1 gota (formada libremente por accin de la
agregado o secado en la boca del frasco. En este caso, se deben gravedad, sin forzar) de cada reactivo de ltex en crculos
agitar bien los frascos de ltex durante unos segundos hasta que el diferentes en una tarjeta de reaccin. Elimine las burbujas de
contenido se haya resuspendido totalmente. aire con el extremo del bastoncillo.
Paso 4 Manteniendo el dispensador de muestras desechable en
5. Los usuarios con problemas para distinguir los colores deberan
posicin vertical transfiera 1 gota (formada libremente por accin
poder ver las aglutinaciones; sin embargo, les puede resultar difcil
de la gravedad, sin forzar) (40 l) de suspensin de bacterias
diferenciar las reacciones de coloracin. En este caso, otro usuario en cada uno de los 2 crculos. Asegrese de que no se formen
sin problemas para distinguir los colores debe examinar la reaccin. burbujas de aire. Deseche el dispensador de manera adecuada.
6. Cuando utilice frascos cuentagotas, es importante que los mantenga Paso 5 Mezcle el contenido de cada crculo con un bastoncillo para
en posicin vertical y que las gotas se formen en la punta del mezclar y extindalo para cubrir todo el crculo. Se puede utilizar
cuentagotas. Si la boca del frasco se humedece, se forma un el mismo bastoncillo con los 2 crculos y, a continuacin, se
volumen incorrecto en el extremo del cuentagotas y no en la punta; debe desechar de manera adecuada.
en este caso, seque la boca del frasco antes de seguir con el ensayo. Paso 6 Coloque la tarjeta en un rotador plano adecuado y agtela a una
7. Es importante que utilice un rotador plano. Para obtener resultados velocidad de 150 5 rpm durante 2 minutos (para ms
ptimos, asegrese de que el rotador est nivelado y que est infor macin, consulte el apar tado Precauciones de
ajustado para funcionar a una velocidad de 150 5 rpm. manipulacin en este prospecto). Apague el rotador y observe
sin extraer la tarjeta del rotador si se produce aglutinacin.
8. No toque las zonas de reaccin de las tarjetas. Es importante que Mantenga la tarjeta a una distancia de lectura normal de los
se asegure de que las tarjetas de reaccin se coloquen en posicin ojos (de 25 a 35 cm). No utilice lupa. El aspecto de la aglutinacin
horizontal en el rotador; en caso contrario, no se obtienen debe ser fcilmente observable y reconocible bajo iluminacin
aglutinaciones claramente visibles. normal. Si no est seguro de si se ha producido la aglutinacin,
9. Asegrese de que los controles positivos se resuspendan repita el ensayo utilizando una gota de 40 l de solucin salina.
agitndolos bien manualmente o con un agitador de tubos tipo Vortex No se debera producir una aglutinacin visible y este resultado
durante 10 segundos. NO agite los reactivos de ltex con un agitador se puede utilizar para la comparacin.
de tubos tipo Vortex. Paso 7 Deseche las tarjetas de reaccin usadas de manera adecuada.
Vuelva a almacenar los reactivos de ltex en el refrigerador (de
RECOGIDA DE LAS MUESTRAS Y PREPARACIN DE LOS 2 a 8C).
CULTIVOS
Para ms informacin sobre la recogida de las muestras y la preparacin RESULTADOS
de los cultivos, se debe consultar un libro especializado2,3,4. Con este LECTURA DE LOS RESULTADOS
ensayo se pueden utilizar colonias que no fermenten la lactosa crecidas
Para ms informacin, consulte la gua de resultados Wellcolex* Colour
en cultivos primarios con medios de cultivo selectivos (p.ej., agar de Shigella.
MacConkey, agar entrico Hektoen o agar de xilosa lisina desoxicolato),
en subcultivos del caldo enriquecido en estos medios de cultivo o en Resultados positivos
cultivos puros (p.ej., agar nutriente en placas o en tubos inclinados). Se produce un cambio en el color de la reaccin debido a la aglutinacin
Si es necesario confirmar los resultados del ensayo, se puede realizar de una de las suspensiones de ltex con color de la mezcla que provoca
un subcultivo de la suspensin bacteriana utilizada con el ensayo para un cambio de color del fondo (consulte las ilustraciones 1 y 2).
su posterior identificacin y adems se puede utilizar la misma Normalmente se aglutina un solo color en un reactivo de ltex, pero en
suspensin con el ensayo Wellcolex* Colour Salmonella (n de lista los cultivos mixtos de Shigella se pueden aglutinar ambos colores en
ZC50/30858301). un reactivo de ltex (en este caso, se deben realizar procedimientos de
aislamiento suplementarios) o un slo color en ambos reactivos. Ambas
PROCEDIMIENTO reacciones se pueden distinguir fcilmente. Si el tipo de reaccin es
MATERIALES SUMINISTRADOS diferente a las que se muestran en las ilustraciones 1 y 2, se debe
El kit Wellcolex* Colour Shigella (n de lista ZC51/30858401) contiene comprobar la velocidad del rotador y, si es necesario, ajustarla.
materiales suficientes para 50 ensayos para ms informacin, consulte
el apartado Contenido del kit en este prospecto. Resultados negativos
Ninguno de los reactivos de ltex se aglutina y apenas cambia el color
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS violeta suave durante el ensayo (consulte la ilustracin 3). Sin embargo,
1. Solucin salina estril al 0,85%. debe tener en cuenta que puede observar una granulosidad dbil en
2. Podr conseguir un rotador plano adecuado a travs de su las muestras negativas, lo que depende de la capacidad visual del
representante (n de lista RT63 (30365401)). Tambin se pueden usuario.
utilizar otros rotadores con un dimetro orbital parecido (38 mm)
que funcionen a una velocidad de 150 rpm. La velocidad y el Resultados inespecficos
dimetro orbital son fundamentales para realizar el ensayo de Todas las partculas se aglutinan dando lugar a aglutinaciones violeta
manera correcta. con un fondo claro (consulte la ilustracin 4). Es posible que aparezcan
algunas aglutinaciones de color violeta en presencia de reacciones
No son necesarios otros materiales o instrumentos.
positivas o negativas. Si se produce un cambio de color claro en el
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO ensayo o si el fondo no cambia de color (permanece violeta), no tenga
ATENCIN: se deben tomar las precauciones adecuadas cuando en cuenta estas aglutinaciones violeta.
manipule los cultivos vivos durante el procedimiento del ensayo.
2
CONTROL DE CALIDAD 2. El gnero Shigella est estrechamente relacionado con otros
Examen visual miembros de la familia de los Enterobacteriaceae y comparte
Se debe comprobar siempre que los reactivos de ltex no se hayan muchos antgenos somticos con otras especies, especialmente
agregado cuando los dispense en la tarjeta de reaccin. Si se observa con Escherichia coli, pero tambin con Hafnia alvei, Plesiomonas
aglutinacin antes de dispensar la muestra de caldo o suspensin shigelloides y otras especies. Estas representan antgenos comunes
bacteriana, estos no se deben utilizar. y no reacciones cruzadas y se pueden diferenciar mediante pruebas
bioqumicas; muchas especies, aunque no todas, fermentan la
Procedimientos de control lactosa.
Se deben realizar los procedimientos siguientes con cada envo de
3. Algunas cepas de Shigella tienen antgenos de la envoltura que
reactivos y en cada serie analtica. En la prctica, una serie analtica
inhiben la aglutinacin O de las suspensiones. Este hecho no se
se puede definir como un perodo de anlisis de hasta 24 horas.
ha observado durante la evaluacin de los reactivos; si es necesario,
Procedimiento de control positivo puede inactivar la envoltura calentando la suspensin a una
Compruebe el funcionamiento de los reactivos de ltex con los controles temperatura de 100C durante 2 horas 2 . Si un aislado bien
positivos suministrados. caracterizado bioqumicamente no reacciona con los reactivos, se
Paso 1 Dispense 2 gotas de reactivo de ltex 1 y 2 gotas de reactivo de
debe enviar a un laboratorio de referencia para su investigacin.
ltex 2 en 4 crculos en una tarjeta de reaccin (1 gota en cada 4. La calidad del modelo de aglutinacin obtenido depende de la
crculo). velocidad y del dimetro orbital del rotador y del uso de tarjetas de
Paso 2 Aada 1 gota de cada control positivo en 2 crculos de la tarjeta reaccin planas.
(un crculo contiene el reactivo de ltex 1 y el otro contiene el
RESULTADOS PREVISTOS
reactivo de ltex 2).
Las cepas pertenecientes a los serogrupos S. sonnei, S. flexneri,
Paso 3 Mezcle los reactivos utilizando un bastoncillo para mezclar
desechable para cada control positivo. S. dysenteriae y S. boydii producirn una aglutinacin roja o azul con
el componente del reactivo de ltex 1 2 correspondiente.
Paso 4 Agite la tarjeta en un rotador automtico a 150 5 rpm durante
2 minutos. Despus de los dos minutos, debe ser visible la CARACTERSTICAS ESPECFICAS DEL FUNCIONAMIENTO
aglutinacin final en los 4 crculos.
Evaluacin externa
Paso 5 Deseche las tarjetas de reaccin usadas de manera adecuada.
Se realiz un estudio en diferentes laboratorios (un laboratorio
El color del ltex aglutinado del reactivo 1 y del reactivo 2 debe perteneciente a un hospital pblico en Gran Bretaa, 3 laboratorios de
corresponder al color de los controles positivos (azul o rojo). hospitales en EE.UU., 2 laboratorios en la pennsula arbiga y 3
Se pueden utilizar cultivos de serogrupos de Shigella conocidos en laboratorios en el sudeste de Asia) con cultivos rutinarios para Shigella
lugar de los controles positivos. para evaluar el funcionamiento del ensayo Wellcolex* Colour Shigella.
Procedimientos de control negativo Cada laboratorio realiz los anlisis en 1 o en ms de las siguientes
muestras de heces.
Repita el procedimiento de ensayo con solucin salina en lugar de la
muestra. No se debera producir una aglutinacin significativa. 1. Colonias negativas para lactosa de cultivos primarios en placas de
agar selectivo-diferencial (MacConkey, XLD, DCA, SS y Hektoen).
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS
2. Colonias negativas para lactosa de subcultivos con caldos
Los resultados positivos (aglutinacin coloreada) indican la presencia enriquecidos en placas de agar selectivo-diferencial.
e identifican, al mismo tiempo, las especies de Shigella presentes en
3. Subcultivos puros de colonias lactosa negativas en agar nutriente.
las muestras d la manera siguinte:
Durante el estudio se utiliz un rotador Remel (n de lista RT63/
Color de Reactivo
30365401). En la tabla 1 se muestran los resultados obtenidos.
Las aglutinaciones Fondo 1 2
Se determin el funcionamiento del ensayo Wellcolex* Colour Shigella
Rojo Azul Shigella sonnei Shigella dysenteriae comparando los resultados de muestras analizadas con ensayos
Azul Rosa Shigella flexneri Shigella boydii bacteriolgicos tradicionales.
Ninguno Violeta Negativos En este estudio, la sensibilidad del ensayo Wellcolex* Colour Shigella
Violeta Claro No interpretable (son necesarios fue del 98,9% (88/89) con cultivos primarios, del 100% (58/58) con
procedimientos de aislamiento suplementarios) subcultivos de caldo enriquecido y del 100% (299/299) con cultivos
Los reactivos detectan las formas I y II de Shigella sonnei, los serotipos puros (consulte la tabla 1).
1 a 6 y las variantes X e Y de Shigella flexneri, los serotipos 1 a 12 de En este estudio, la especificidad del ensayo Wellcolex* Colour Shigella
Shigella dysenteriae y los serotipos 1 a 15 de Shigella boydii. fue del 99,4% (521/524) con cultivos primarios, del 100% (320/320)
Los resultados negativos indican que los organismos no pertenecen a con subcultivos de caldo enriquecido y del 95,2% (60/63) con cultivos
los serotipos de las especies de Shigella de los reactivos. Si lo desea, puros.
se pueden realizar ensayos suplementarios con procedimientos El valor predictivo positivo de cultivos en placas fue del 98,7% (445/
convencionales3,4. En los cultivos de heces se encuentran presentes 451) y el negativo fue del 99,9% (901/902).
habitualmente crecimientos mixtos de bacterias que no fermentan la La incidencia de Shigella en las muestras analizadas fue del 33,0%
lactosa y, si se obtienen resultados negativos, puede ser necesario (446/1353).
repetir el ensayo con otras colonias lactosa negativas antes de desechar La frecuencia de las reacciones inespecficas con el ensayo Wellcolex*
el cultivo como negativo. Colour Shigella fue del 3,0% (19/632) con cultivos primarios, del 2,1%
Si se obtiene una reaccin inespecfica, el resultado se considera (8/385) con subcultivos de caldo enriquecido y del 1,8% (7/385) con
como no interpretable y se deben realizar procedimientos cultivos puros. Estas muestras se han excluido de la tabla 1.
convencionales para la identificacin 3,4. Se analizaron otros organismos como Escherichia coli, Proteus spp.,
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Enterobacter spp. y Citrobacter
freundii con el ensayo Wellcolex* Colour Shigella y presentaron
1. El ensayo Wellcolex* Colour Shigella identifica las especies de los
resultados negativos.
aislados de Shigella. Si desea realizar una identificacin serolgica
completa de los tipos dentro de la especie, utilice los procedimientos Adems, se analizaron en un estudio independiente 208 cultivos de
convencionales. Se puede servir de los resultados del ensayo cepas de referencia de Shigella, en los que se incluyeron hasta 5 cepas
Wellcolex* para elegir el antisuero adecuado. de cada serotipo de cada especie de Shigella6. El ensayo Wellcolex*
Colour Shigella identific correctamente 195 cultivos e identific
correctamente como negativos 13 aislados de los serotipos 16 a 18 de
Shigella boydii.
3
NOTA: se pueden obtener ms detalles sobre los procedimientos de BIBLIOGRAFA
las pruebas serolgicas y bioqumicas en la publicacin de EWING, 1
Advisory Committee on Dangerous Pathogens. (1984). Categorisation of
W.H. (1986), (consulte la segunda referencia de la bibliografa en este Pathogens According to Hazard and Categories of Containment, H.M.S.O.,
prospecto). London.
2
Ewing, W.H. (1986). Edwards and Ewings Identification of Enterobacteriaceae,
Tabla 1 4th Ed., Elsevier Science Publishing Co., Inc, New York. Pages 166-167.
3
Identificacin de Shigella en placas de cultivos Isenberg, H.D., Washington, J.A., et al (1985). Manual of Clinical Microbiology,
4th Ed., Edited by Lennette, E.H., Balows, A., Hausler, W.J. and Shadomy, H.J.
Resultados del American Society for Microbiology, Washington D.C. Pages 73-98.
4
ensayo Wellcolex* Resultados habituales Kelly, M.T., Brenner, D.J., et al (1985). Manual of Clinical Microbiology, 4th
Colour Shigella Positivosa Negativos Total Ed., Edited by lenette, E.H., Balows, A., Hausler, W.J. and Shadomy, H.J.
American Society for Microbiology, Washington D.C. Pages 263-277.
Cultivos Positivos 88 3b,c 91 5
WHO Scientific Working Group. (1980). Bulletin of the World Health
primarios Organisation, 58, 519-537.
6
Negativos 1d 521 522 Datos disponibles.
Fabricado por:
Remel Europe Ltd
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
UK
Pimlo.!D
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minu tes. care.
remel
Apogent MICROBIOLOGY PARASITOLOGY IMMUNOLOGY SEROLOGY MYCOLOGY VIROLOGY HEMATOLOGY
Wellcolex '" Colour Salmonella Rapid late agglutination shde test for screemng. detec!lon, and presumptive serogroup SO Tests/KM 30858301
Jdenlif,callon of Salmonella A, B, C. D. E. G. and VI antigen from Selemte Broth or solld med1a. The 2 reagents Incorporate mixtures 200 Tests/Kit 30858302
of 3 colors of latex particles, each calor has been sens1bzed wh an antibody specific to a drlferent gm up. Kit IS complete with 2 test
latex reagents, pos1tive controls. sample dispensers, mix mg sticks. suspenSion tubes (50 Test K1t only), and reacllon cards.
Wellcolex "' Colour Shigella Rapid latex agglutination sl ide test for detecllon and presumptive spec1es identification of 50 Tests/Kit I 30858401
Shtge/18 on solid med i a. The 2 reagents 1ncorporate mtxtures of 2 calo!'S of latex partides, each calor has tleen sensitized w1th
an anti body speaf1c to a different species. K1t IS complete With 2 test latex reagents. positive controls sample dispensers, mhong
st1cks. suspensiOn tubes, and reaction cards
\Vellcole ' "' E. coli 0157 Raptd red latex agglutinatiOn shde test for presumptive 1denlificatian of E coli 0157 Isolates or1 50 Tests/Kit 30959501
sol1d media K1t ts complete Wllh test latex reagent, pooitive and negatiYe controls, mtxlng sllcks, and reaction cards.
WeUcolex"' E. coli 0157:07 Rapid latex agglutination slide test for presumphYe identiiJcalion of E. coli0157:H7 50 Testsll<1t , 30959601
ISOlates an solid medta Red lalex particles spec1flc for 0 157 antigen and blue latex pariLCies specifiC for H7 antigen. Kil is complete
with test latex reagents, p oSiti ve and negahYe controls, mixing st1cks. and reaction cards.
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Reagent 2-serog. E or G Reagern 2-V' anttgen Aeageot 2-lierogr A
SHIGELLA Blue Positive SHIGELLA Red Positive.
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