2.1.

Analisis Most Probable Number (MPN)

MPN adalah suatu metode perhitungan mikroorganisme berdasarkan data

kualitatif hasil pertumbuhan mikroorganisme pada medium cair spesifik dalam seri

tabung untuk memperoleh kisaran data kuantitatif jumlah mikroorganisme tersebut

(MPN/ml(g)). MPN merupakan suatu metode uji pengenceran bertingkat (serial

dilution) untuk mengukur konsentrasi mikroorganisme target dengan perkiraan.

MPN sangat berguna untuk menetukan jumlah mikroorganisme dengan

konsentrasi rendah (<100/g). Metode ini umumnya dipakai untuk menganalisa susu,

pangan, air, dan tanah yang mungkin pada jenis sampelnya terdapat kemungkinan

partikular sampel yang mampu mengganggu pertumbuhan koloni pada agar (United

States Department of Agriculture, 2008)

Beberapa uji yang digunakan dalam metode MPN :

1. Uji Penduga (Presumptive Test)

Di dalam medium cair tersebut lebih dulu di letakkan tabung durham dalam

posisi terbalik. Jika dalam waktu 48 jam tabung-tabung durham mengandung gas,

dinyatakan positif. Sebaliknya jika setelah 48 jam tidak ada gas, dinyatakan negatif

(Widiyanti dan Ristiati, 2004).

2. Uji Penguat (Confirmed Test)

Sampel yang telah diinkubasi dan dinyatakan positif yang ditandai dengan

terbentuknya gas. Warna hijau berlian pada media BGLB berguna untuk menghambat
pertumbuhan bakteri gram positif dan menumbuhkan bakteri golongan koloni. Jika

timbul gas sebelum 48 jam berarti tes ini positif (Widiyanti dan Ristiati, 2004).

3. Uji Pelengkap (Completed Test)

Pengujian selanjutnya dilanjutkan dengan uji kelengkapan untuk menentukan

bakteri E. coli. Dari koloni yang berwarna pada uji ketetapan diinokulasikan ke dalam

medium kaldu laktosa dan medium Nutrient Agar Slant (NAS). Kemudian dari media

NAS dibuat pewarnaan gram, di mana bakteri E. coli menunjukkan gram negatif

berbentuk bacil (Widiyanti dan Ristiati, 2004).

4. Uji Identifikasi

Dengan melakukan uji IMVIC (Indole, Methyl Red, Voges-Proskauer test, dan

Cimon Citrat), (Widiyanti dan Ristiati, 2004).

Pada metode MPN dengan menggunakan medium cair di dalam tabung reaksi.

Perhitungan MPN berdasarkan pada jumlah tabung reaksi yang positif dapat dilihat

dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas di dalam tabung kecil

(tabung durham) yang diletakan pada posisi terbalik, yaitu untuk bakteri yang

membentuk gas. Untuk setiap pengenceran pada umumnya dengan menggunakan zat

atau 5 seri tabung. Lebih banyak tabung yang digunakan menunjukan ketelitian yang

lebih tinggi, tetapi tabung reaksi yang digunakan jauh lebih banyak (Dwidjoseputro,

2005).

Prinsip utama metode ini adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu

sehingga didapatkan konsentrasi mikroorganisme yang pas atau sesuai dan jika

ditanam dalam tabung menghasilkan frekuensi pertumbuhan tabung positif kadang-

kadang tetapi tidak selalu. Jumlah sampel atau pengenceran yang baik adalah yang

menghasilkan tabung positif. Tabung positif yang dihasilkan sangat mempengaruhi

metode ini. Frekuensi positif atau negatif ini menggambarkan konsentrasi

mikroorganisme pada sampel sebelum diencerkan (Dwidjoseputro, 2005).

Inkubasi dilakukan pada suhu 37oC selama 24 jam, dan tabung dinyatakan

positif jika terbentuk gas sebanyak 10% atau lebih dari volume di dalam tabung

durham. Tabung yang menunjukkan pembentukan gas diperpanjang lagi inkubasinya

sampai 48 jam. Jika tetap tidak terbentuk gas, dihitung sebagai tabung negatif. Jumlah

tabung yang positif dihitung dengan melihat tabel MPN 3, MPN 7 atau MPN 15

tabung.
Table 4. syarat mutu minuman herbal dan sari buah SNI 3719-2014

No Kriteria uji satuan persyaratan

1 keadaan
1.1. bau - Khas, normal
1.2. rasa - Khas, normal
1.3. warna - Khas, normal
2 Cemaran logam
2.1. timbal (pb) Mg/kg Maks 0,2
2.2. cadmium (cd) Mg/kg Maks 0,2
2.3. timah (sn) Mg/kg Maks 40,0 / maks 250

2.4.merkuri (hg) Mg/kg Maks 0,03

3 Cemaran arsen (as) Mg/kg Maks 0,1
4 Cemaran mikroba
1.1. angka lempeng Koloni/ml Maks 1 x 104

total
1.2. koliform Koloni/ml Maks 20
1.3. Escherichia coli Apm/ml ,3