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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS


QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO

OBTENCION DE HIGADO DE RATA APARTIR DE HIGADO DE RATA Y SU


CARACTERIZACION QUIMICA

INTRODUCCIN

El glucgeno es la forma de almacenamiento de la 9.- Se centrifuga de nuevo por la misma razn explicada
glucosa en los tejidos animales. Se encuentra en el paso 6.
principalmente en el hgado y en el msculo
representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso
hmedo, respectivamente. Est formado por unidades 10.- Se decanta el sobrenadante para juntarlo con el
de glucosa unidas por enlaces (1-4) y ramificaciones sobrenadante inicial para poder obtener la mayor
(1-6). cantidad de glucgeno posible.

11.-Se le agrega etanol para que se separe el glucgeno


1.- del sobrenadante y se precipite.
1.- Sacrificar una
Sacrificar una
rata
rata con
con eter
eter 11.- Aadir
11.- Aadir 2 volumenes
2 volumenes 12.-
12.- Centrifugar
Centrifugar a
a
(procurando 12.- Se centrifuga para que el glucgeno quede2000 rpm
(procurando nono de
de etanol
etanol por
por volumen
volumen de
de 2000 rpm
excitarla) precipitado.
sobrenadante. agitar esta durante 5 min.
excitarla) sobrenadante. agitar esta durante 5 min.
mezcla
mezcla yy dejar
dejar en
en reposo
reposo
DIAGRAMA FLUJO
hasta que
hasta que el glucogeno
el glucogeno
flocule
flocule
OBJETIVOS

Se realizar el aislamiento y purificacin del


glucgeno a partir del hgado de 2.-
un organismo
Extraer
vivo. 2.- Extraer 13.- Desechar el
el
rapidamente
rapidamente el 13.- Desechar
los productosel sobrenadante
Se identificar la composicin de
sobrenadante yy
por medio de hidrlisis cida y enzimtica por al
higado
higado y
y lavarlo
lavarlo al resuspender
resuspender elel
medio de reacciones qumicaschorro
chorro de
de agua
agua
caractersticas. precipitado
10.- precipitado con
con 55 ml
ml de
de
10.- Decatar
Decatar elel liquido
liquido agua
agua destilada
destilada
PROCEDIMIENTO sobrenadante
sobrenadante yy
reunirlo
reunirlo con
con el
el obteido
obteido
1.- La rata no debe excitarse puesto que si esto sucede en el
en el paso
paso 7.
7.
esta empezara a segregar glucgeno lo que ocasionara
que obtengamos menos de lo estimado.
3.-
3.- pesar
pesar yy cortar
cortar
rapidamente
rapidamente el
el higado
higado
2.- El Hgado debe extraerse de manera rpida puesto
en
en pedazos
pedazos pequeos
pequeos
que entre ms nos tardemos se producirn enzimas que
degraden el glucgeno esta se tiene que lavar para 14.-
14.- Volver
Volver a
a
quitar la sangre pues esta es una impureza para nuestra precipitar con
precipitar con 22
extraccin de glucgeno. 9.- dejar reposar
9.- dejar reposar volumenes
volumenes de de
por
por 5 min yy
5 min etanol.
etanol.
3.- Se debe pesar el hgado pues necesitamos este dato centrifugar a
centrifugar a
4.- 2000 rpm.
2000 rpm.
4.- colocar
para el clculo de rendimiento, se cortara los
los pedazon
en pedazos
colocar pedazon
es
es un
pequeos para que sea ms sencillo triturarlo. un mortero
mortero
previamete sumergido
previamete sumergido
en
en hielo.
4 y 5.- El tratamiento posterior con cido tricloroactico
hielo.
(TCA) hace que precipiten las protenas y cidos
nucleicos de la mezcla.
15.-
15.- centrifugar
centrifugar a
a
2000 rpm durante
2000 rpm durante 3 3
8.- min.
min.
6.-Se centrifuga para que todos los componentes que no 8.- Lavar
Lavar el
el mortero
mortero yy
necesitas queden en el precipitado que se formara como pisilo
pisilo con 10 ml
con 10 ml de
de TCA
TCA
5.- al 5% yy en
en este
este liquido
protenas, mezcla de clulas y la arena que5.- Aadir
se utilizacido
Aadir acido al 5% liquido
para triturar. tricloroacetico (TCA) al reuspender
reuspender en el
en el
tricloroacetico (TCA) al
10% precipitado de
10% enen proporcion
proporcion dede precipitado de
7.- Se decanta el sobrenadante 1ml/g
para quede tejido
tejido
en elhepatico, centrifugacion
centrifugacion aterior
aterior
1ml/g de hepatico,
obtengamos el glucgeno, y de triturar
igual el higado
manera
triturar el se hasta
higado hasta
encontraran en esta agua y TCA. formar
formar una
una pasta
pasta 16.-
16.- Decantar
Decantar yy
homogenea.
homogenea. suspender con
suspender con la
la
8.- Se lava el mortero y el pistilo con el TCA para que menor
recolectemos la pasta homognea que quedo en ellos.
menor cantidad
cantidad
posible
posible de
de alcohol
alcohol
absoluto
absoluto yy pasarlo
pasarlo a a
un
un vidrio
vidrio reloj
reloj para
para
6.- 1 que
que seque
seque yy cristalice
cristalice
6.- centrifugar
centrifugar el
el 7.-Decantar
7.-Decantar el
el .un
.un
homogenizado
homogenizado vaso de 250
vaso de 250 ml
ml yy
durante
durante 5 5 min a
min a mantenerlo
mantenerlo en
en hielo.
hielo.
2000
2000 rpm.
rpm.
INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS
QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO

OBTENCION DE HIGADO DE RATA APARTIR DE HIGADO DE RATA Y SU


CARACTERIZACION QUIMICA

RESULTADOS CARACTERIZACION QUIMICA

Caracterizacin
qumica del Acida Testigo Enzimtica Blanco
glucgeno. Glucge
Hidrolisis 1 2 4
no sin Conc. 1:2 Agua
N N N
a) Preparar 15mL de hidrolizar
una solucin de Fehling + + + - + + -
glucgeno de 5mg/ml. Lugol - - - + - - - DISCUSIN Y ANLISIS
Seliwanoff + + + DE RESULTADOS
TUBO 1 2 3 4 5 6 - + + -

Glucgeno (ml) 2 2 2 2 2 2
Prueba de Fehling.-En la hidrlisis cida como en la
HCl 1N (ml) 2 hidrlisis enzimtica se obtuvieron resultados positivos
HCl 2N (ml) 2 en los tubos hidrolizados, esta prueba se realiza para
identificar los carbonilos potencialmente libres que estn
HCl 4N (ml) 2
involucrados en enlaces glucosidicos (azucares
Amilasa con. (ml) 2 reductores) gracias a esto podemos decir que en nuestra
Amilasa 1:2 (ml) 2 muestra probablemente hay presencia de glucosa,
maltosa o fructosa. En el tubo testigo del glucgeno sin
NaCl al 5% 1gota 1gota hidrolizar dio negativo, debido a que sus grupos estn
Agua dest. 2 bloqueados debido a los enlaces alfa-1,4 y alfa-1,6; no
posee iones libres par que se lleve a cabo la reaccin.
Incubar 30min 92C 37C
b) Preparar una serie de tubos segn la tabla. Prueba de Seliwanoff.- Los resultados fueron positivos
para 5 tubos, el tubo testigo del glucgeno dio negativo
debido a que no se hidrolizo. En esta prueba podemos
diferenciar aldosas de cetosas, las cetosas dan rpido y
% GLUCOGENO EN HIGADO DE RATA las aldosas lento, por lo tanto podemos decir que el
azcar presente es una aldosa (glucosa).

Charola= 1.3905g Prueba de lugol.- Dio positivo en el tubo testigo del


glucgeno, debido a que al no ser hidrolizado el
Charola con Glucgeno= 1.8979g
glucgeno es capaz de atrapar al lugol por ser un
Glucgeno= (1.8979g-1.3905g)= 0.5074g peso seco polisacrido lineal, formando caltratos.
Peso de Hgado= 13.7g 100%
Peso de hgado X % de glucgeno
13.7g 100% CONCLUSIONES
0.5074g X
Los seres vivos almacenan glcidos en forma de
X= 3.7036% de glucgeno presente en el hgado de
polisacridos, que sirven como materiales de reserva
nuestra rata. como es el caso del glucgeno en los animales.

Prueba Observaciones El glucgeno contiene unidades de glucosa unidas por


Negativo. Nos indica que nuestro enlaces glicosdicos alfa-1,4 y alfa-1,6.
problema no hay aminocidos, ya que es
Ninhidrina
una reaccin caracterstica para grupos Se caracteriz al problema por reacciones qumicas,
amino libres. dando como resultado la identificacin del glucgeno.

Negativo. En nuestro problema no hay


presencia de protenas debido a q la BIBLIOGRAFA
Biuret
reaccin es para identificar protenas y
pptidos de cadena menor a 3 unidades. Lenhinger AL, Nelson DL. Principios de
Bioquimica. 5 Ed.Barcelona: Ediciones
Positivo. Se identific que nuestro Omega; 2005.
Molish problema es un carbohidrato. La reaccin Pia Garza, Eduardo Laguna, Jose.
de Molish es general para carbohidratos. Bioquimica De Laguna 7a Ed. Mxico Editorial:
El Manual Moderno; 2013.