Buenas

Prcticas de laboratorio

Segunda parte

Curso intersemestral
M. en I. Pedro S. Valadez Eslava
 2

TEMARIO
Equipos e instrumentos: Verificacin, calibracin y
calificacin
Reactivos y soluciones: Solicitud, recepcin, manejo,
identificacin, almacenamiento, preparacin,
procedimiento de operacin relacionados, trazabilidad
en la preparacin de soluciones.
Manejo y ubicacin segura de reactivos Sistema
CRETIB
Importancia del lavado y verificacin de la limpieza del
material de vidrio.
Sustancias de referencia: Solicitud, recepcin, manejo,
identificacin, almacenamiento, preparacin,
procedimiento de operacin relacionados, trazabilidad,
estndares primarios, secundarios, estandarizacin.
Pureza en base seca y base hmeda.
 3

TEMARIO
Pesado correcto en la balanza analtica: Orden y
limpieza, tipos de pesada, verificacin de la exactitud
y precisin.

Registros y reportes: procedimientos relacionados,

buenas prcticas de documentacin y registros
electrnicos.

Evaluacin de resultados de anlisis: Anlisis de

tendencias: Definicin, registros de tendencias,
evaluacin de tendencias.

Investigacin de resultados fuera de especificaciones:

Definicin, objetivo de la investigacin, pasos de la
investigacin, plan de accin.
 4

TEMARIO

Controles de Cambio y Desviaciones:

Definiciones, objetivo, generacin, seguimiento
hasta su cierre o implementacin.

Evaluacin de los resultados.

Certificados de anlisis
 5

CALIDAD

Humana
Moral
Vida
Proceso (analtico)
Producto (Resultados de anlisis)
 6

DEFINICIN DE CALIDAD

Calidad: Conjunto de caractersticas de un bien

o servicio que nos permiten cumplir y an
rebasar las expectativas del consumidor

Calidad: Cumplimiento con las especificaciones

Servicio o producto de calidad: para que tenga

calidad debe cumplir con una serie de
estndares o requisitos
 7

Calidad
Cumplir en su totalidad con los
requerimientos y expectativas del
cliente.
Hacer las cosas bien desde la primera
vez todo el tiempo.
Mejora continua.
 8

Estudios empricos muestran lo siguiente

* 10 = 10 nuevos clientes
potenciales

* 30

Perdida potencial de clientes

para el futuro y clientes
actuales
 9

Normas internacionales y nacionales

 10

DEFINICIN BPL

Los principios de las BPL definen una serie de

reglas y criterios para los sistemas de calidad en
cuanto los anlisis son planeados, monitoreados,
registrados archivados y reportados1

1
 11

Consecuencias regulatorias del NO

cumplimiento de las BPL

Rechazo de los estudios sometidos a las

autoridades.
Solicitud de la repeticin del estudio.
Inhabilitacin para completar el estudio.
Fallas para alcanzar el registro del producto y
licencia.
Cierre del laboratorio tercero autorizado.
Prdida de clientes y credibilidad de la compaa.
Retiro de la licencia del producto.
Retiro de producto del mercado.
 12

Los resultados confiables se basan en:

Personal Gestin Mtodo

Equipo Ambiente Material

 13

Impacto social y econmico de un

anlisis errneo,
De un ejemplo para:

Un anlisis forense.

En el comercio.

Monitoreo ambiental.
 14

Estudios internacionales comparativos

de aptitud
 15

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Los equipos deben adquirirse de proveedores
que tengan la capacidad de proporcionar
soporte tcnico y mantenimiento.
 16

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Antes de poner en
servicio un equipo: se
debe calificar, calibrar
o verificar.

Cuando aplique el
equipo debe ser
verifcado o calibrado
antes de su uso.
 17

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Contar con los PNOs para su uso,
limpieza y mantenimiento de los equipos.

Contar con los manuales proporcionados

por el fabricante.

Equipos que no cumplen con las

calibraciones deben ser puestos fuera de
servicio.
 18

Validacin vs Calificacin
El trmino validacin se usa para procesos de
fabricacin, procedimientos analticos y
software.
El trmino calificacin se emplea para
instrumentos.
AIQ : Calificacin de instrumentos analticos =
proceso de garantizar que un instrumento es
adecuado para el uso al que est destinado.

Referencia USP 37 2013 <1058> Calificacin de

instrumentos analticos
 19

Calificacin de instrumentos
analticos*
Coleccin de pruebas documentadas de que un
instrumento se desempea adecuadamente
para su uso previsto.

El uso de un instrumento calificado en los

anlisis contribuye a la confianza en la validez
de los datos generados.

*USP 36 2013 <1058> Calificacin de instrumentos analticos

 20

Fases de la calificacin

1 Calificacin de diseo

2 Calificacin de instalacin

3 Calificacin de operacin

4 Calificacin de desempeo
 21

CALIBRACIN = ____________
 22

VERIFICACIN

Cuando se requieran comprobaciones

intermedias para mantener la confianza en el
estado de la calibracin.
 23

EQUIPO E INSTRUMENTOS

Todas las operaciones

realizadas con los equipos
deben quedar registradas,
incluyendo soporte de
resultados y los criterios de
aceptacin, documentacin
de la falla encontrada, como
y cuando se detect el
problema y la accin
tomada.
 24

EQUIPO E INSTRUMENTOS
Rotular los equipos
calibrados incluyendo la
fecha en la que fueron
calibrados y su fecha de
vencimiento.

Los procedimientos
deben indicar que
hacer en caso de
fallas.
 25

NIVELES DE SEGURIDAD

Debe protegerse la
configuracin del
hardware y software
para que no se hagan
cambios que puedan
invalidar los
resultados
 26

Equipos que procesan datos

Para los sistemas que manejan datos se debe asegurar
que:
Calculos y la transferencia de datos son
sistemticamente sujetas a verificaciones apropiadas.
Se cuenta con software validado
Se cuenta con procedimientos para proteger la
integridad de los datos
Se les da mantenimiento para que trabajen
adecuadamente
Existen procedimientos para la generacin y el control
de los cambios.
Se cuenta con un sistema de respaldo continuo, el cual
controla el acceso a los datos.
 27

PREGUNTA

Las autoridades regulatorias han establecido

guas respecto a la frecuencia de calibracin de
balanzas? Con base en qu se puede
establecer la frecuencia?
 2
8

PREGUNTA
Para la adquisicin de equipos,
Cul (es) de los siguientes
enunciados no corresponde?

a) Especificaciones del equipo y/o

sistema

b) Que se desea medir

c) Instalaciones

d) Adquirir Tecnologa obsoleta

e) Mantenimiento

f) Alta complejidad en su manejo

 29

PESADO EN LA BALANZA ANALTICA

Manejo adecuado Clculos

Cunto pesar? Pesar de la muestra

Manejar el vocabulario Tipo de pesada Evitar prdida o Manejar las

contaminacin. unidades y la
Tomar la can:dad a Balanza vericada pureza
pesar de la tcnica y calibrada. correctamente
o calcularlo uno mismo.
Registrar el dato.

29
 30

USO PESAS Y BALANZAS (41) USP

Pesar aproximadamente con exactitud: la

incertidumbre de la medicin (error sistemtico
+ error aleatorio), debe ser menor al 0.1 % de la
lectura

30
 31

Criterio de aceptacin
2 veces la desviacin estndar de al menos 10
pesadas, dividida entre la cantidad pesada no
excede el 0.001.

2 x DE
=
X

31

 32

Ejercicio
La balanza que estoy usando es adecuada para pesar 20 mg ?

32
 33

Respuesta

33
 34

Pregunta
Indique con qu paso inicia la pesada:

P
__________

Indique con que paso termina la pesada:

R E
________ _ _ _ ____
 35

Reactivos
El laboratorio debe contar con una poltica y
procedimientos para la seleccin y compra de
los suministros que afectan la calidad de los
anlisis.

Deben existir procedimientos para la compra,

recepcin y el almacenamiento de reactivos,
deben recibirse con su certificado de anlisis

Los reactivos no deben ser utilizados hasta que

hayan sido inspeccionados, o verificados.
 36

Reactivos

En algunos casos una lista de proveedores

previamente calificados debe establecerse.

Etiquetas de los reactivos deben indicar:

Nombre, fabricante, fecha de recepcin, cuando

aplique la concentracin, factor de
estandarizacin, fecha de caducidad,
condiciones de almacenamiento.
 37

Reactivos

Para reactivos preparados en el laboratorio

adems:
Fecha de preparacin y nombre y/o iniciales de
quien prepar.

Para soluciones preparados por dilucin:

nombre del fabricante de la solucin original,
fecha de preparacin, fecha de estandarizacin,
factor de dilucin, nombre y/o iniciales de quien
prepar.
 38

Transportancin - subdivisin de
reactivos

Siempre que sea posible transportar en su

contenedor original.

Si se requiere subdividir es necesario:

Limpieza escrupulosa, uso de contenedores

completamente indentificados.
 39

Reactivos y soluciones
Deben estar etiquetadas, indicando la identidad,
ttulo o concentracin, requerimientos de
almacenamiento y fecha de expiracin.
Soluciones que presenten deterioro o fuera de
la fecha de uso no deben ser utilizadas.
 40

Reactivos y soluciones

Preparacin de reactivos en el laboratorio.

Deben emplearse procedimientos escritos que

estn de acuerdo con farmacopeas u otros
estndares. Se deben guardar los registros de
la preparacin y la estandarizacin
(normalizacin) de las soluciones volumtricas
 41

Reactivos y soluciones

Para soluciones volumtricas preparadas por

dilucin:

Nombre del fabricante original del reactivo.

Fecha de preparacin.
Fecha de estandarizacin o normalizacin.
Factor de dilucin.
Nombre de la persona que la prepar.
 42

Reactivos y soluciones

Inspeccin

Todos los contenedores de reactivos deben

inspeccionarse para asegurarse que el sello est
intacto, antes de enviarse al cuarto o central de
almacenamiento o laboratorio.

Estas inspecciones deben de ser registradas en la

etiqueta del reactivo, anotando la fecha y las
iniciales de la persona que realiz la inspeccin
 43

Reactivos y soluciones
Almacenamiento.

Los stocks de reactivos deben ser almacenados en

un rea condiciones de almacenamiento
apropiadas. El almacn debe contar con botellas
limpias, viales, cucharas o esptulas, embudos y
etiquetas, segn se requiera para el dispensado de
reactivos de su contenedor original a uno de
pequeo volumen. Se debe contar con equipo de
seguridad especial, para la transferencia de
grandes volmenes de lquidos corrosivos.
 44

Pregunta

Qu informacin debe contener la etiqueta de

un reactivo?
 45

Pregunta

La primera tarea que debe realizar al llegar a

nuevo trabajo, es asignar fecha de caducidad a
los reactivos y soluciones, Con base en qu
establecera la fecha de caducidad?
 46

SUSTANCIAS DE REFERENCIA
 47

SUSTANCIA DE REFERENCIA

Para qu tipo de determinaciones se

emplean las sustancia de referencia?
 48

SUSTANCIA DE REFERENCIA
SECUNDARIA

Es obtenida valorando una materia

prima contra una sustancia de
referencia primaria.

Se la llama tambin Estndar de

trabajo.
 49

Pureza en base seca y base hmeda

Pureza en base seca Pureza en base

(BS): hmeda (BH):

Pureza de la Pureza del estndar

sustancia de tal cual se encuentra
referencia despus (As it is).
de someterla al
procedimiento de
secado indicado en
la etiqueta.
 50

EJERCICIO

Escriba que significa que un estndar de

Mebendazol tenga una pureza de 99.3% en
base seca:

99.3 %(BS) =--------------------------------------------

 51

Registro de las sustancias de referencia

Nmero de identificacin del material
Descripcin precisa del material.
Fuente de sumistro del material
Fecha de recepcin
Nmero de lote u otro cdigo de indentifiacin
Uso desigando del material de referencia: por ejemplo:
material de referencia para infrarrojo o impureza para
cromatografa en capa fina.
Ubicacin de almacenamiento en el laboratorio
Condiciones de almacenamiento
Cualquier otra informacin adicional
OECD solicita incluir el nmero de CAS
 52

INSPECCIN DE LAS SUSTANCIAS DE

REFERENCIA

Inspeccionar a intervalos regulares: verificar que

no se han deteriorado y que se estn
empleando las condiciones de almacenamiento
adecuadas

Registrar los resultados de la inspeccin en una

bitcora, firmar y fechar.
 53

Sustancias de refefencia
Registro y etiquetado:

Identificar con un nmero nico, ya sea que sean

recin recibidos o preparados en el laboratorio.
(Estndares de trabajo o sustancias de referencia
secundarias).
Un nuevo nmero de identificacin debe ser
asignado para cada nuevo lote.
El nmero de identificacin debe estar indicado en
cada vial.
El nmero de identificacin debe anotarse en el
registro analtico, cada vez que la sustancia de
referencia es usada.
 54

RESGUARDO DE LAS SUSTANCIAS DE

REFERENCIA
 55

MUESTRAS

Sin una muestra no hay anlisis,

sin una muestra adecuada no
debera haber anlisis.
 56

MUESTRAS

Cada muestra recibida debe contar

con una solicitud de anlisis
 57

VERIFICACIN DE LA TEMPERATURA
 58

TRAZABILIDAD
 59

PATRONES DE REFERENCIA
 60

PATRON DE REFERENCIA
Contar con un programa y procedimiento para la
calibracin de los patrones de referencia.
Los patrones deben calibrarse por un organismo
que pueda proveer trazabilidad.
Los patrones de calibracin se deben utilizar
solo para ese propsito.
Los patrones de referencia deben calibrarse
antes y despus de cualquier ajuste.
 61

CONTROL DE CAMBIOS

Debe existir un procedimiento que incluya

identificacin, documentacin, revisin y aprobacin
de los cambios en: insumos, especificaciones,
procedimientos, mtodos de anlisis, procesos de
fabricacin, instalaciones, equipos, sistemas crticos
y sistemas de cmputo.

Los cambios deben ser aprobados por el

responsable de la Unidad de Calidad, asegurando
su seguimiento y cierre.
 62

PREGUNTA

Usted va a someter un control de Cambios para

cambiar el ensayo de un mtodo microbiolgico
a un mtodo HPLC, Qu soporte documental
debe anexar para realizar el cambio?
 63

Desviacin
DE: Separar , Alejar

VA: Camino
 64

17025 Desviaciones
Las desviaciones respecto de los mtodos de
ensayo y de calibracin deben ocurrir solamente si
la desviacin ha sido documentada, justificada
tcnicamente, autorizada y aceptada por el cliente.

Auditoras adicionales. Cuando la identificacin de

no conformidades o desvos ponga en duda el
cumplimiento del laboratorio con sus propias
polticas y procedimientos, o el cumplimiento con
esta Norma Internacional, el laboratorio debe
asegurarse de que los correspondientes sectores
de actividades sean auditados, segn el apartado
4.14, tan pronto como sea posible.
 65

17025 Desviaciones
Acciones preventivas.

4.12.1 Se deben identificar las mejoras necesarias y

las potenciales fuentes de no conformidades.
Cuando se identifiquen oportunidades de mejora o
si se requiere una accin preventiva, se deben
desarrollar, implementar y realizar el seguimiento de
planes de accin, a fin de reducir la probabilidad de
ocurrencia de dichas no conformidades y
aprovechar las oportunidades de mejora.
 66

LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

El xito de muchas valoraciones y pruebas

farmacopeicas depende de la limpieza del
material del material de vidrio utilizado.
 67

PREENJUAGUE DEL MATERIAL

 68

DETERGENTES

Los detergentes deben

ser proporcionados por
proveedores
certificados.
 69

VERIFICACIN DE LA LIMPIEZA
Implementar una prueba para dictaminar si el
material esta limpio.

cido Alcalino Neutro

 70

LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

Algunas pruebas donde la limpieza es crtica:

Pirgenos, carbono orgnico total, valoraciones

de heparina sdica y actividad de vitamina B12,
determinacin de minerales y componentes a
niveles de trazas.
 71

OTRAS SOLUCIONES PARA LA LIMPIEZA

DEL MATERIAL
Mezcla crmica

Hidrxido de potasio en alcohol

Fosfto disdico o trisdico al 10 %

Peroxidisulfato de amonio
 7
2

PREGUNTA
Qu enunciados no corresponden para evitar posible
contaminacin debida al uso previo del material en otro
anlisis? Indique al menos tres cuidados que debe tener con
este material.

a) Contener soluciones inorgnicas por periodos prolongados en el material

de vidrio y mucho mejor si es volumtrico.

b) Lavar lo mas pronto posible material que este en contacto con

soluciones concentradas.

c) Dejar separadas las juntas, llaves y vlvulas esmeriladas despus de su

uso.

d) Limpiar el material con cepillos gastados para rayar el vidrio y aumentar

las posibilidades de contaminacin.

e) Evitar poner el vidrio en contacto con soluciones de cido fluorhdrico

lcalis concentrados.
 73

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-052-SEMARNAT-2005, QUE ESTABLECE LAS

CARACTERSTICAS, EL PROCEDIMIENTO DE IDENTIFICACIN, CLASIFICACIN
Y LOS LISTADOS DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS.

Esta Norma Oficial Mexicana establece el

procedimiento para identificar si un residuo es
peligroso, el cual incluye los listados de los residuos
peligrosos y las caractersticas que hacen que se
consideren como tales.

Los residuos peligrosos, en cualquier estado fsico,

por sus caractersticas corrosivas, reactivas,
explosivas, inflamables, txicas, y biolgico-
infecciosas, y por su forma de manejo pueden
representar un riesgo para el equilibrio ecolgico, el
ambiente y la salud.
 74

CRETIB.- El acrnimo de clasificacin de las

caractersticas a identificar en los reactivos.

C: Corrosivo
R: Reactivo
E: Explosivo
T: Txico
I: Inflamable
B: Biolgico - Infeccioso
 75

IDENTIFICAR CON EL CDIGO CRETIB

 76

Biolgico-Infeccioso

Son aquellos materiales generados durante los

servicios de atencin mdica que contengan
agentes biolgico-infecciosos segn son
definidos en esta Norma, y que puedan causar
efectos nocivos a la salud y al ambiente.
77
 78

El laboratorio de microbiologa debe contar con reas

separadas:
rea separada para poder realizar pruebas
Limpia
de esterilidad
Cuenta con diferenciales de presin que
ayuden al control de la contaminacin a
travs de barreras de entrada de aire
(presin positiva) .

Barreras: Vestimenta de proteccin, procedimientos de sanitizacin,

cabinas de seguridad dedicadas, procedimiento para manejar derrames de
reas cultivos y personal entrenado.

Cepario rea separada para poder realizar el

manejo de los microorganismos (presin
negativa).
Lavado

Incubacin
 79

Se debe establecer la limpieza y sanitizacin de reas

donde se ejecuten actividades que necesitan ambientes
controladas (manufactura y acondicionamiento de
productos farmacuticos estriles y no estriles,
anlisis microbiolgicos).

La limpieza y sanitizacin se debe realizar con agentes

que hayan probado su efectividad para disminuir la
carga microbiana (agentes clorados, fenlicos, aminas
cuaternarias, etc.)

Estos agentes de limpieza se preparan con agua

purificada con una calidad microbiolgica
comprobable.
 80

Preparacin
Seguir al pie de la letra la preparacin de acuerdo a lo
especificado en marbete del fabricante o de la tcnica.
Precaucin en el calentamiento! El oscurecimiento de
los medios es una indicacin del sobre calentamiento
(Reaccin de Maillard).

Esterilizacin
Autoclave calificada y bajo un modelo de carga validado.
Hay medios de cultivo que solo se hierven y no necesitan
esterilizacin. El procedimiento debe especificar los
cuidados que deben tenerse con estos medios (dosificar
bajo campana de flujo laminar, en contenedores
estriles, etc.)
Filtracin por membrana.

Verificacin del registro de esterilizacin

Verificar los parmetros de esterilizacin (temperatura,
tiempo y presin).
 81

Verificacin del pH

Verificar pH una vez que el medio se encuentre a

temperatura ambiente (25C).

Extraer aspticamente la muestra.

Para superficies de agar se recomienda usar un

electrodo plano.

El valor de pH de los medios deber estar en un

intervalo de +/- 0.2 del valor indicado por el
fabricante.
82
83
 84

Se evala cada lote de medio listo para usar y cada partida de

medio preparado.

Procedimiento
Lista de microorganismos a utilizar para realizar la promocin a
cada medio de cultivo.

Realizacin de la cuenta viable.

Preparacin de la solucin estandarizada de los

microorganismos a emplear. La cantidad de microorganismos a
usar debe estar entre 10-100 UFC/inculo.

Almacenamiento e identificacin de la solucin estandarizada.

Inoculacin de los medios e incubacin.

Interpretacin de resultados.
 85

Evaluacin de los resultados de los

ensayos
Al terminar los anlisis, se revisan los resultados
y cuando sea apropiado se evaluan
estadsticamente para determinar si son
congruentes y si cumplen con las
especificaciones.
 86

ANLISIS DE TENDENCIAS

Sistema que se establece para evaluar la

distribucin de los resultados con respecto
al tiempo, con la finalidad de identificar
alguna tendencia en los resultados
 87

ANLISIS DE TENDENCIAS
17025:

Para establecer acciones correctivas se

podra incluir el anlisis de las tendencias.

Los resultados de los ensayos deben ser

registrado en forma tal que se puedan
detectar tendencias.
 88

Implementacin del sistema

Generar alertas en tiempo real para

detectar problemas potenciales, at the
Bench, para iniciar oportunamente la
investigacin.
 89

Mtodo grfico para determinar

resultados OOT
 90

Tres resultados consecutivos estn de un

solo lado del lmite central

Tiempo % Valoracin
(meses)
0 99.4
3 98.2
6 97.1
9 96.0
 91

INVESTIGACIN DE RESULTADOS
FUERA DE ESPECIFICACIONES (OOS)

DEFINICIN: RESULTADOS QUE NO

CUMPLEN CON LAS ESPECIFICACIONES
 92

RESULTADOS FUERA DE
ESPECIFICACIONES (OOS)

Falla para cumplir cualquier

especificacin registrada, en controles
en proceso, o especificaciones de
liberacin o estabilidad.
 93

Especificaciones

Lmites farmacopeicos o lmites registrados

95.0 %

96.0 % 104.0 %
 94

RESULTADO FUERA DE TENDENCIA,

CUESTIONABLE O ATPICO (OOT)

Resultado que se encuentra dentro de

las especificaciones pero esta fuera de
la tendencia histrica del producto.
 95

Ejemplo de resultado atpico

Resultado valoracin RESULTADO
Especificacin interna
95.0 % - 105.0 %
100.2 % TPICO
99.4 % TPICO
100.3 % TPICO
98.7 % TPICO
100.7 % TPICO
99.1 % TPICO
96.3 % ATPICO
 96

PREGUNTA

Por qu los resultados fuera de

tendencia deben investigarse si no estn
fuera de especificaciones?
 97

RESULTADO ABERRANTE (OUTLIER)

Resultado extremo el cual es

significativamente diferente de las
dems observaciones del mismo
anlisis o de los resultados histricos
del producto
 98

Ejemplo de resultado aberrante

Resultado valoracin RESULTADO
Especificacin interna
95.0 % - 105.0 %
100.2 % TPICO
99.4 % TPICO
100.3 % TPICO
98.7 % TPICO
100.7 % TPICO
99.1 % TPICO
73.3 % ABERRANTE
 99

OBJETIVO DE LA INVESTIGACIN

Determinar si el resultado fuera de especificaciones

es representativo o no de la poblacin
Determinar la causa del resultado fuera de
especificaciones
 100

UTILIDAD DE LA INVESTIGACIN
ACCIONES A TOMAR

Tomar acciones preventivas para evitar su

recurrencia.

Las autoridades regulatorias quieren encontrar

que se tomaron acciones oportunas para
eliminar la causa raz y que fueron efectivas
 101

POSIBLES RESULTADOS DE LA
INVESTIGACIN

Error del laboratorio

Posibilidades
Error del proceso
 DIAGRAMA DE FLUJO 102
En caso de sospecha de resultado aberrante, Paso 1. DETECCIN
aplicar la prueba de desviacin (Formato A)
estudentizada extrema, para determinar si es
estadsticamente un resultado aberrrante Si
Causa
encontrada

No
Paso 2: INVESTIGACIN NIVEL 1
(Formato B)

No
Causa
Si
encontrada

No
Paso 3: INVESTIGACIN NIVEL 2
(Formato C)
No
En caso de sospecha de resultado aberrante, Causa
Si
aplicar la prueba de desviacin encontrada
estudentizada extrema, para determinar si
es estadsticamente un resultado aberrrante No
Paso 4 PROTOCOLO DE REPITES
(Formato D)
Anlsis estadstico: X +/- 3 DE, para
Determinar si el resultado fuera de Paso 5 CIERRE DE LA INVESTIGACIN
especificaciones
(Formato E)
se confirmar o no

Finaliza la investigacin en el paso No Se requiere plan

5 (Formato E)
de accin?

Si
Paso 6 PLAN DE ACCIN
(Formato A del plan de accin)

Paso 7 ACCIONES REQUERIDAS

(Formato B del plan de accin)

Paso 8 VERIFICACIN DE EJECUCIN Y EFECTIVIDAD DE

LAS ACCIONES REQUERIDAS
(Formato C del plan de accin)

Paso 9 CIERRE
(Formato D del plan de accin)
 103

INVESTIGACIN

En caso de confirmarse el resultado fuera de

especificaciones, se procede a generar una No
conformidad o desviacin
VALIDACIN DE METODOS ANALTICOS
DEFINICIN
PROCESO POR EL CUAL QUEDA
ESTABLECIDO, POR ESTUDIOS DE
LABORATORIO, QUE LA CAPACIDAD DEL
METODO SATISFACE LOS REQUISITOS
PARA LAS APLICACIONES ANALTICAS
DESEADAS.
VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

Una parte integral del desarrollo de un

mtodo analtico es la validacin del
mismo, es decir, el mtodo debe probarse
para determinar su efectividad.
GUIAS NACIONALES

Gua de Validacin de mtodos analticos

emitida por el Colegio Nacional de Qumicos
Farmacuticos Bilogos. (2002)
GUIAS NACIONALES

Gua de validacin de mtodos analticos:

limpieza de equipos, Comisin Interinstitucional
de Buenas Prcticas de fabricacin, Mxico
D.F., 2004
GUIAS INTERNACIONALES

ICH
EURACHEM
FDA
FDA (CDER)
CDER Bioanalticos
Otros pases
CONFERENCIA INTERNACIONAL DE
ARMONIZACIN
 Gua ICH
CONFERENCIA INTERNACIONAL DE ARMONIZACIN

Validation of Analytical procedures:

Text and Methodology Q2 (R1)

GUAS INTERNACIONALES
 DECISIONES IMPORTANTES BASADAS EN
RESULTADOS ANALTICOS

oLiberacin de lotes.
oRechazo de lotes.
oReproceso de lotes.
oEstablecimiento de fechas de caducidad
basadas en estudios de estabilidad.
oDeterminacin de trazas para liberacin de
equipos para fabricacin.
oLa necesidad de realizar estudios
toxicolgicos adicionales, si aparecen nuevas
impurezas o si las impurezas conocidas
rebasan los lmites.
OBJETIVO

El objetivo de un mtodo debe ser claramente

entendido para determinar las caractersticas que
deben ser evaluadas.

La validacin debe proveer la seguridad de que el

mtodo ser Libre de problemas durante su uso.
CONDICIONES PARA VALIDAR

Los instrumentos deben de estar calificados/

validados, antes de empezar con las actividades
de validacin.
Contar con sustancias de referencia
adecuadamente caracterizadas.
El personal debe estar adecuadamente
capacitado.
Contar con procedimientos para la validacin y
reporte de mtodos analticos.
CONDICIONES PARA VALIDAR

CONTAR CON UN MTODO ANALTICO CON

UN BUEN DESEMPEO, QUE INDIQUE QUE
HAY POSIBILIDADES DE SER VALIDADO
CON XITO.
 PARMETROS DE DESEMPEO
PRUEBA DE
IMPUREZAS

PARMETRO DE Contenido/ Contenido/ IDENTIFICACIN

Potencia/ Valoracin Limite
DESEMPEO
Valoracin

Precisin/Adecuabilidad del Sistema SI SI SI *

Linealidad del sistema. SI SI NO NO
Especificidad SI SI SI SI
Exactitud y repetibilidad SI SI NO NO
Linealidad del mtodo SI SI NO NO
Precisin intermedia SI SI NO NO
Estabilidad de la muestra y referencia SI * NO NO
Limite de deteccin NO NO SI NO
Limite de cuantificacin NO SI NO NO
Robustez * * * NO
Tolerancia * * * NO

* Puede ser requerido segn la naturaleza del mtodo

 ETAPAS DE LA VALIDACIN DE MTODOS
ANALTICOS

1. SISTEMA: SE TRABAJA CON SUSTANCIAS DE

REFERENCIA

2. MTODO (PLACEBO): SE TRABAJA CON LOS

EXCIPIENTES (PLACEBOS) Y SUSTANCIAS DE
REFERENCIA.

3. MTODO (PRODUCTO TERMINADO) :

PROBAMOS EL METODO CON PRODUCTO
TERMINADO
RELACION ENTRE EXACTITUD Y PRECISIN

Exacto y preciso
RELACIN CONCENTRACIN DE ANALITO, % RSD (CV)
REFERENCIA (% RSD)
CRITERIOS DE ACEPTACIN (% RECOBRO)
CRITERIOS DE ACEPTACIN (% RECOBRO)
VALIDACIN INADECUADA = PROCEDIMIENTOS INADECUADOS

DECISIONES
EQUIVOCAS

RESULTADOS VALIDACION
REPETICIONES
OOS INADECUADA

RETRASOS

OOS= Resultado fuera de especificaciones.

PREGUNTA
Mencione 3 razones por las cuales los
procedimientos analticos deben estar
validados.
 REVALIDACIN
Se requiere cuando hay:

Cambios en el proceso de sntesis de la

sustancia activa.
Cambios en la composicin del producto
terminado
Cambios en el mtodo analtico.
Cuando le mtodo es transferido de un
laboratorio a otro laboratorio (WHO)
 126

Buenas prcticas de cromatografa

Los sistemas de cromatografa de lquidos se
consideran como un conjunto de partes o
mdulos.

Columna

Detector
Inyector
Bomba

Computadora
 127

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Es una parte integral de

varios procedimientos
analticos.

Nos permite confirmar

que el mtodo se esta
desempeando
adecuadamente, es
una herramienta de
diagnstico.
 128

EL CROMATOGRAMA

T0 TIEMPO DE LA FASE MVIL

TR TIEMPO DE RETENCIN
( DETERMINA
LA IDENTIDAD DEL COMPUESTO)
tR B

tR A
W1/2 B

W1/2 A
T0
WA WB
 129

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Parmetros de adecuabilidad del sistema

Repetibilidad de inyeccin de la solucin de

referencia
Resolucin
Coleo
Nmero de platos tericos
Factor de capacidad
Tiempo de retencin
Tiempo de retencin relativo
 130

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

 131

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

La adecuabilidad del sistema es especfica

para cada mtodo

A pesar que la adecuabilidad del sistema puede

realizarse durante el anlisis, generalmente es
realizada Antes de proceder con el anlisis de
las muestras

131
 132

SECUENCIA DE INYECCIN
 133

CRITERIOS DE ACEPTACIN
Manual del CNQFB.
Para cada inyeccin se recomienda reportar:
K> 2
R > 2
T<2
C. V. < 2.0%
Nmero de platos tericos (N)
Retencin relativa (Rr)
 134

Coeficiente de variacin
(CV, RSD, o DER)

Datos de 5 rplicas deben emplearse para

calcular el coeficiente de variacin, si el CV
requerido por el mtodo es < 2.0 %.
Datos de 6 rplicas deben emplearse si el CV
solicitado por el mtodo es mayor a 2.0%.
 135

SIMETRIA DEL PICO (Coleo o Tailing)

Es especialmente importante reportarlo en

pruebas de impurezas, si el coleo es muy alto
podra enmascarar otras impurezas.
Cuando el coleo se incrementa, la integracin
se vuele menos confiable y la precisin puede
verse comprometida.
 136

MTODOS PARA ANALIZAR CANTIDADES

BAJAS DE ANALITOS

Preparar una solucin de sensibilidad: Sirve

para demostrar que se tiene una adecuada
relacin Seal/ruido.

Determinar tambin la reproduciblidad de las

rplicas de inyecciones.

136
 137

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Todos los factores que son crticos para el

mtodo deben ser identificados e incluidos en la
adecuabilidad del sistema.
Si no se cumple la adecuabilidad del sistema los
factores crticos deben ser ajustados.

137
 138

CASOS ESPECIALES
Cuando la especificacin es muy cerrada

Ejemplo: 99.0 % - 101.0 % un CV de 2.0 % no

sera adecuado.

Emplear el criterio recomendado por la

Farmacopea britnica (BP), de 1/6 el rango de la
especificacin en este caso..

Rango: 2 X 1/6 = 0.33 % de CV

 139

Confrontacin de estndares
(Estndar Check)

Cuntos soluciones de referencia deben

prepararse en un anlisis espectrofotomtrico o
cromatogrfico?
 140

Confrontacin de estndares
(Estndar Check)
Si se emplean dos estndares, calcular la
confrontacin de estndares:

Re spuesta St1 Concentracin St2

%= X X100
Conentracin St1 Re spuesta St2

Dependiendo del mtodo el % de confrontacin debe

encontrarse entre: 98.0 102.0 % o 97.0 103.0 %
 141

Certificados de anlisis
1. Nmero de registro de la muestra
2. Fecha de recepcin
3. Nombre y direccin del laboratorio que
analiz la muestra.
4. Nombre y direccin de quin realiz el
anlisis
5. Nombre, descripcin y nmero de lote de la
muestra.
6. Nombre y direccin del fabricante original y si
corresponde, del distribuidor o acondicionador
 142

Certificados de anlisis
7. Referencia a las especificaciones del ensayo
y la muestra.
8. Resultados de las pruebas realizadas
(promedio, desviacin estndar) y sus lmites.
9. Conclusin sobre si la muestra se encuentra
o no dentro de especificaciones.
10. Fecha de caducidad o reanlisis.
11. Fecha del anlisis
12. Firma del director o persona autorizada por
el laboratorio.