FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS HUMANAS

MICROBIOLOGA
LABORATORIO N 3.1
PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y TCNICAS DE SIEMBRA

Es el microscopio, el evento que desencadena el desarrollo de la microbiologa

como una ciencia, permitiendo la observacin de los primeros microorganismos,
que hasta antes de tal hecho, solo existan en la imaginacin de los hombres que
se interesaban por su estudio. Sin embargo, el desarrollo de los medios de cultivo,
el empleo del agar, fueron elementos que jalonaron el vertiginoso desarrollo de la
microbiologa.
Con la realizacin de la presente prctica de laboratorio, se persigue como
objetivos principales, la adquisicin de destreza en la preparacin de medios de
cultivo utilizados en microbiologa, la aplicacin de diferentes tcnicas de siembra
y aislamiento de cultivos de bacterias y levaduras en medios slidos y la
comprobacin de la utilidad que tienen los medios de cultivo de uso general
diferenciales y selectivos.
Es de anotar, que por circunstancias ajenas a la voluntad del docente y de los
estudiantes, esta prctica no pudo ser desarrollada en su totalidad; el docente
socializ las caractersticas de los medios de cultivo de inters para la prctica, tal
como se relata a continuacin:
Se inici con la descripcin de lo que es un medio de cultivo, el cual en esencia
es, una mezcla de diversos nutrientes que en concentraciones adecuadas permite
el crecimiento de microorganismos, bajo determinadas condiciones fsico-
qumicas. La composicin qumica de los medios de cultivo es variada pero, de
manera general, todos ellos contienen una fuente de energa (compuesto orgnico
o inorgnico), una fuente carbonada (algunas veces un mismo compuesto puede
servir de fuente de energa y fuente carbonada), sales minerales, vitaminas y
agua.
Los medios de cultivo, son uno de los sistemas ms importantes para la
identificacin de microorganismos, permitiendo observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Se han preparado ms de
10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
En el caso particular de la presente prctica, se hizo referencia a los medios
selectivos y diferencial. Para el caso del primero, el docente expres que es un
medio en el que solo se permite el crecimiento de un grupo especfico de
microorganismos y se inhibe el crecimiento de otros, siendo un ejemplo de ello, el
Agar Eosina Azul de Metileno. Para el medio diferencial, se expres que es un
medio que permite revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos, por
ejemplo, el Agar Mac Conkey.
Cabe resaltar, que en su gran mayora, las bacterias logran desarrollarse en un
medio de cultivo bsico que contiene agua, carne y peptona, denominado medio
nutritivo, pudiendo ser lquido, llamndose caldo nutritivo, o slido, siendo agar
nutritivo. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales
de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.
Los hidratos de Carbono se agregan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin
de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa
se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes; tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para
detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de
unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo
en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como
inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-
positivas).
Luego de socializar lo anterior, el docente se refiri a las condiciones generales
que deben cumplirse, para que pueda darse el cultivo de microorganismos. Entre
otros aspectos, hizo referencia a:
Disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para
la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que
tengan lugar.
Presencia o ausencia de oxgeno y otros gases: Los gases principales que
afectan al desarrollo microbiano son el oxgeno y el dixido de carbono. Las
bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxgeno libre
clasificndose en cuatro grupos:
o Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxgeno libre.
o Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxgeno
libre.
 o Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en
presencia como en ausencia de oxgeno libre.
o Microaerfilas: bacterias que crecen en presencia de pequeas
cantidades de oxgeno libre.
Condiciones adecuadas de humedad: Un nivel mnimo de humedad, tanto
en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen
desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos.
Luz ambiental: La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en
la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes
como sera el caso de los microorganismos fotosintticos.
Temperatura: Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a
temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los
termfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En
lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura
mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los saprofitos tienen rangos ms
amplios.
Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que
puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano
normal del o de los especmenes inoculados en dichos medios. El sistema
clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presin como agente esterilizante)
Luego de realizada la prctica, el grupo de trabajo pudo llegar a las siguientes
conclusiones:
La adecuada composicin de los medios de cultivo, afecta directamente el
xito del experimento en la manipulacin de microrganismos
Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio
de microbiologa, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las
enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas
bacterias.
Un mtodo fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un
medio lquido o en la superficie de un medio slido de agar.