24

BIOLOGIA DO VRUS
DO PAPILOMA

CHARLES JULIAN LINDSEY

RITA DE CASSIA STOCCO DOS SANTOS
936 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS

 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 937

Captulo 24

BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA:

SUA IMPORTNCIA EM PROCESSOS ONCOGNICOS E SUA
RELAO COM CO-FATORES AMBIENTAIS

CHARLES JULIAN LINDSEY

RITA DE CASSIA STOCCO DOS SANTOS

INTRODUO

Os estudos da carcinognese e dos mecanismos de oncognese

adquirem importncia crescente pelo impacto cada vez maior que as doenas
resultantes provocam na sade das populaes humanas. Dentre os fatores
etiolgicos envolvidos, os vrus tm sido evidenciados como de grande
importncia, atuando principalmente nos grandes aglomerados populacionais
. Os vrus da papilomatose humana (HPV, vrus do papiloma humano) tm
sido relatados como precursores biolgicos de tumores humanos ou
envolvidos com o processo da transio da clula displsica para neoplsica.
Os vrus do papiloma compem um pequeno grupo de vrus de DNA,
caracterizado por induzirem a formao de verrugas, ou papilomas, numa
grande variedade de organismos, incluindo o homem, sendo amplamente
distribudo entre os mamferos(bovinos, ovinos, caprinos. equinos, murinos,
sunos, entre outros). Estas leses so em geral benignas, podendo porm
se desenvolver e se transformar em tumores malignos. Por outro lado, alguns
papilomas podem regredir naturalmente.
Em humanos, o vrus do papiloma (HPV) capaz de provocar infeco
clnica e subclnica de maneira especfica em mulheres e homens por
transmisso sexual. Cerca de 80 tipos diferentes de HPV j foram isolados
de leses benignas e malignas, classificados em alto, mdio e baixo risco
em dependncia de sua associao mais direta ou no com o processo
neoplsico.
Nos ltimos anos, muitos progressos foram feitos quanto ao
conhecimento da organizao fsica do genoma destes vrus, graas
disponibilidade das enzimas de restrio, tcnicas de clonagem, a Reao
em Cadeia pela Ao da Polimerase e procedimentos de sequenciamento
de cidos nucleicos. Estudos que permitiram uma maior compreenso da
funo e das caractersticas genticas destes vrus foram possveis somente
aps sua clonagem em plasmdeos ou bacterifagos. O desenvolvimento de
novas tcnicas de biologia molecular possibilitou a deteco de diferentes
vrus do papiloma por diferentes laboratrios. Tais estudos levaram
verificao de que ,por exemplo, cerca de 15% das mulheres assintomticas,
sexualmente ativas, so descritas como possveis portadoras de HPV. Destas
mulheres, aquelas com infeces persistentes apresentam risco elevado de
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
938 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

cncer cervical uterino, patologia de importncia devido a se constiturem

uma das causas mais relevantes de morte entre o sexo feminino.
O presente captulo busca discutir e salientar alguns aspectos
referentes s interaes entre o vrus do papiloma (principalmente HPV) e
a clula hospedeira no desenvolvimento dos processos neoplsicos, com
nfase nas interaes entre genomas virais e hospedeiros.

ASPECTOS CLNICOS

Todos os HPV induzem proliferao epitelial, resultando em leses

benignas, que podem evoluir para leses pr-neoplsicas e posteriormente
sofrer transformaes que conduzem a neoplasias. Considerados como
especficos aos tecidos epiteliais, a literatura tem recentemente acumulado
crescentes evidncias de que o vrus possa se instalar em estado de latncia
em clulas mononucleares do sangue.
Dentre as leses benignas e pr-neoplsicas, caracterizam-se as
chamadas verrugas e os papilomas com caractersticas clnicas especficas:
- Verruga comum: distribuda pelas palmas das mos e punhos,
apresentando hiperqueratose a acantose;
- Verruga plantar: distribudas pelas plantas dos ps, apresentando
hiperqueratose e acantose;
- Verruga plana: distribuda pela face e mos, apresentando hiperqueratose
e acantose;
- Epidermodisplasia verrucosa generalizada: com distribuio mais ampla,
apresentando hiperqueratose, hipergranulose, acantose moderada e com
clulas hiperplsicas;
- Condiloma acuminatum: afetando a mucosa genital e anal e com
acentuada acantose;
- Verruga plana cervical: afetando a regio cervical e apresentando
acantose e coilocitose;
- Condiloma plano- afetando a regio genital e com incidncia mais
elevada de malignizao;
- Papiloma de laringe juvenil e adulto- afetando laringe e traquia e
apresentando acantose e coilocitose;
- Hiperplasia epitelial focal afetando a mucosa oral e apresentando
acantose.

Dentre as leses neoplsicas, encontramos os Carcinomas, sejam

carcinoma in situ ou carcinomas invasivos, salientando a importncia dos
carcinomas cervicais, pela sua morbidade e mortalidade. Dentro dos objetivos
deste captulo, discutiremos alguns aspectos referentes ao cncer do colo
uterino.
O cncer do colo uterino o segundo mais freqente em mulheres,
com maior prevalncia nos pases em desenvolvimento, salientando a
importncia de fatores de risco (como tabagismo) e a deficincia de sistemas
pblicos de sade para preveno. O aumento da incidncia do cncer
cervical tem sido verificado em mulheres jovens, principalmente portadoras
de leses precursoras, embora as leses pr-neoplsicas possam ser
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 939
diagnosticadas por mtodos citolgicos, colposcpicos e histolgicos (Figura
24.1). O papilomavrus humano (HPV) descrito como de importncia
fundamental no desenvolvimento da neoplasia cervical, dependendo do tipo
viral, carga viral, ciclo de vida intracelular e integrao com o genoma da
clula hospedeira. A preveno depende da deteco precoce do vrus e
esta tem sido desenvolvida com mtodos de biologia molecular.

Figura 24.1: Colpofotografia -

Condiloma acuminado - grande di-
reito vulva.

Mtodos de Deteco Viral por Biologia Molecular:

Os principais mtodos para deteco viral, utilizados em sistemas
diagnsticos so:
- Captura hbrida que envolve hibridizao entre genomas virais e sondas
genricas,- Reao em Cadeia pela Ao da Polimerase, que envolve
amplificao de segmentos especficos de DNA;
- Sequenciamento de cidos Nucleicos, que envolve determinao da
sequncia de bases do genoma do agente contaminante ou do hospedeiro;
- Determinao de Padres de Digesto por Enzimas deRestrio que
envolve mtodos de verificao da distribuio de stios de digesto de
restrio (ver captulo 04 - Gentica Molecular).

Co-fatores ambientais possveis de estar atuando em sinergismo com os

vrus do papiloma em processos oncognicos:
A ao viral tem sido discutida em sinergismo com fatores ambientais
como fatores sociodemogrficos, reprodutivos e de comportamento sexual,com
nfase ao tabagismo, considerado o principal fator de risco evitvel para
mortalidade por cncer e uma verdadeira epidemia, principalmente entre
jovens. O tabagismo parece ter um efeito carcinognico direto no colo uterino,
com alteraes demonstradas no DNA das clulas epiteliais cervicais, e
presena de substncias consideradas carcinognicas, como a nicotina e
cotinina, no muco cervical de pacientes fumantes. Tais substncias tm
efeitos mutagnicos relacionados com a induo e progresso da leses
neoplsicas. Entre os co-fatores investigados que poderiam influir no processo

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS

940 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

carcinognico incluem-se: mltiplos parceiros sexuais, incio precoce de

atividade sexual, alta paridade, tabagismo, longo tempo de uso de
contraceptivos, deficincias nutricionais (especificamente cidos flico e
retinico), doenas sexualmente transmissveis, como clamdia ou
tricomonas. Agentes qumicos presentes por exemplo no fumo, podem levar
a mutaes em oncogenes e em genes supressores de tumor em clulas
infectadas por HPV, levando a clula, tornada displsica pela ao viral,
neoplasia.
Apesar da alta incidncia do cncer mamrio em todo o mundo, os
mecanismos etiolgicos ainda no so completamente compreendidos.
Recentemente, genes correlacionados foram descritos explicando a alta
frequncia de recorrncia familiar da patologia. A relao com o HPV
(especificamente de certos tipos virais) tem sido discutida, juntamente com
co-fatores ambientais, como por exemplo tabagismo ou clnicos associados,
como hormnios esterides, descritos como elementos que aumentam a
transcrio de protenas virais.
No aspecto de interaes com fatores ambientais, desde os trabalhos
pioneiros de Olson e cols.(1959, 1965), os vrus da papilomatose bovina (BPV)
tm sido verificados como de importncia como modelo experimental para o
estudo de sinergismo entre co-fatores e o vrus do papiloma. Neoplasias em
sistema vesical urinrio e em trato digestivo superior em bovinos esto
etiologicamente associadas a agentes qumicos oncognicos, resultando em
patologias que causam prejuzo econmico elevado no Brasil e outros pases.
Alguns co-fatores ambientais j foram identificados, como a samambaia,
nativa de pastagens de slos cidos, Pteridium aquilinum, consumida pelos
animais em pocas de seca. Curiosamente, esta mesma espcie faz parte
da dieta de algumas populaes humanas, como prato tpico regional e tem
sido descrita relacionada formao de tumores do trato digestivo nos
consumidores, independentemente de outros co-fatores ambientais .A
relao entre o BPV e a samambaia, enquanto co-fator oncognico tem sido
estudada: o tipo 4 (BPV4) est relacionado carcinognese de trato digestivo
superior, sendo porm detectado apenas em papilomas, mas no nos tumores,
sendo considerado como no necessrio para a progresso tumoral.

ASPECTOS CITOGENTICOS RELACIONADOS COM O VRUS DO

PAPILOMA

Alteraes citogenticas em clulas neoplsicas so extensamente

descritas, mas so as alteraes primrias aquelas de maior relevncia,
uma vez que com a progresso do tumor, surge uma instabilidade
cromossmica generalizada. A alterao primria est relacionada ao
processo de malignizao, havendo inmeros relatos como por exemplo as
translocaes entre o cromossomo 8 e o 14 no linfoma de Burkit, entre o
cromossomo 9 e 22 nas leucemias mielides,ou rearranjos do cromossomo
1 em tumores de mama. Em alguns casos, a alterao citogentica pode
ser diretamente correlacionada com a patognese tumoral, como nas
leucemias e no linfoma de Burkit, onde a localizao citogentica de
oncogenes, alterada pelo rearranjo cromossmico leva a sua ativao. Em

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS

 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 941
outros casos, por outro lado, no se tem ainda certeza de qual seria o
mecanismo inicial, como nos relatos sobre papilomas cutneos, em que
poucas alteraes so verificadas e de maneira poli-clonal, como alteraes
do cromossomo 7. Delees, duplicaes ou translocaes podem levar
alterao da regulao gnica, inibindo ou ativando genes relacionados
com a malignidade, ou seja os oncogenes e os genes supressores de tumor
.Estudos experimentais em que queratincitos cervicais so infectados por
HPV mostraram alteraes citogenticas em vrios pares cromossmicos,
com descries mais particulares envolvendo o par 10. Por outro lado, quando
o cromossomo 10 normal transferido para clulas de linhagens
imortalizadas por HPV (16 ou 18) verifica-se uma diminuio da expresso
do gene codificante da oncoprotena viral E7. Oncoprotenas de HPV tm
sido correlacionadas com clastogenicidade, especificamente aquelas do HPV
16, em diferentes nveis: atravs do aumento da ploidizao ou da frequncia
de aberraes cromossmicas em linfcitos cultivados provenientes de
pacientes com leses uterinas. Nos relatos referentes imortalizao de
queratincitos por HPV 18, alterao preferencial do cromossomo 3 descrita,
envolvido com rearranjos com outros pares, sendo os rearranjos envolvendo
os cromossomos 1 e 3 os mais comuns em leses cervicais. A origem das
alteraes cromossmicas referentes ao das oncoprotenas de HPV pode
estar relacionada ativao de telomerases celulares quando da integrao
do genma viral ao genma da clula hospedeira, alto nvel de associaes
telomricas descritas em linhagens estabelecidas de epitlio ovariano,
transformadas por oncoprotenas E6 e E7. O aumento das associaes
telomricas verificadas em sangue perifrico de pacientes afetadas por
tumores de mama e de tero associado com aumento de instabilidade
cromossmica j descrito em linfcitos perifricos de pacientes afetadas
pelos dois tipos de cncer. A fragilidade cromossmica tambm tem sido
discutida em linfcitos de pacientes com cncer cervical, conjuntamente
com alteraes de ciclo celular.
A etiologia das aberraes cromossmicas relacionadas ao vrus do
papiloma humano (HPV) pode estar relacionada a sua integrao ao genma
hospedeiro e tem sido discutida e investigada: o genma do HPV 16 descrito
como integrado a ponto especfico do cromossomo 13, no locus do gene
supressor de tumor do retinoblastoma, e esta situao comparada a
outras em que o genma do mesmo vrus pode ser identificado em forma
epissomal. Os genomas do HPV16 e do HPV18 j foram relatados como
integrados prximos a stios frgeis. Em nossa pesquisa utilizamos como
material biolgico os linfcitos de sangue perifrico e como tcnica de
abordagem a verificao do nvel de aberraes cromossmicas estruturais.
Nossos dados mostraram:

1) Nveis significativamente elevados de aberraes cromossmicas

estruturais nos linfcitos cultivados de sangue perifrico de animais
afetados por hematria enzotica, expostos samambaia das pastagens
que poderiam indicar efeitos clastognicos dos princpios ativos da
samambaia, como j descrito in vitro e in vivo;

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS

942 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

2) Aumento significativo dos nveis de aberraes cromossmicas em

linfcitos de sangue perifrico de animais que foram inoculados com
sangue de animais afetados pela hematria enzotica, mantidos em
dieta sem samambaia e tambm em seus descendentes, mostrando
portanto, clastogenicidade na ausncia do co-fator samambaia;
3) Aumento do nvel de associaes telomricas em linfcitos perifricos
de pacientes afetadas por tumores mamrios HPV positivos (Figura 24.2).

Os dados de literatura discutem que em leses benignas ou pr-

neoplsicas o vrus se encontra em estado epissomal, enquanto em leses
malignas, o genma se encontraria integrado. A associao de tcnicas de
citogentica molecular a tcnicas de anlise de aberraes cromossmicas
vir a esclarecer este aspecto ainda obscuro do ciclo viral (Figura 24.3).

Figura 24.2: A seta indica

rearranjo por associao e
recombinao da regio
telomrica em placa metafsica de
linfcito, obtida atravs de cultu-
ra temporria de amostra de san-
gue perifrico de paciente afetada
por tumor mamrio.

BPV COMO MODELO EXPERIMENTAL PARA ESTUDOS DE

TRANSMISSO

O estudo da ao sinrgica entre o BPV (papiloma vrus bovino) e a

samambaia em bovinos constitui um excelente modelo experimental para
pesquisa em mecanismos de oncognese, uma vez que uma das maiores
dificuldades nesta rea reside na obteno de sistemas isolados onde os
fatores etiolgicos podem ser bem caracterizados e avaliados. De fato,
verificamos em bovinos, que apresentam tumores de bexiga (hematria
enzotica) ou tumores do aparelho digestivo (caraguat): uma interao
do vrus do papiloma bovino (BPV2 e BPV4) com agentes carcinognicos e
imunosupressores encontrados na samambaia, Pteridium aquilinum,
presena do vrus BPV2 nas amostras de sangue de animais infectados
experimentalmente analisadas , detectada por PCR e com sequenciamento
especfico, mostrando transmisso horizontal; presena de BPV2 e BPV4
em amostras de leite, colostro e fludos corporais de animais afetados pela
doena, e em animais inoculados com sangue de animais doentes e seus
descendentes, evidenciando a transmisso viral vertical, sendo estes os
primeiros estudos a demonstrar a transmisso horizontal e vertical desses
vrus em mamferos (Figura 24.3).
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 943

Figura 24.3: Placa metafsica de linfcito de san-

gue perifrico de bovino afetado por hematria
enzotica onde as setas indicam aberraes
cromossmicas estruturais tipo quebras.

ESTRUTURA MOLECULAR DOS VRUS DO PAPILOMA

O genoma de diversos vrus do papiloma so descritos como uma

molcula de DNA circular de fita dupla, com cerca de 55nm de dimetro,
complexada com histonas e estruturada em nucleossomos, encontrando-se
encapsulada em uma estrutura composta por 72 subunidades organizadas
em estruturais icosadricas com peso molecular mdio de 5,0 x 103 KD,
correspondendo a aproximadamente 8.000pb, podendo se apresentar com
ambas cadeias de DNA ligadas covalentemente, em forma altamente
espiralizada (supercoiled), ou com uma interrupo em uma das cadeias,
em configurao mais relaxada em crculo aberto (open circle). Ao longo do
genoma desta classe viral esto distribudas cerca de dez regies
codificadoras denominadas ORFs (open reding frames) que so
classificadas como Early (E, transcrio precoce) e Late (L, transcrio
tardia) e regies no codificadoras, onde se incluem as longas regies de
controle (LCR). Nas LCR est localizada a regio de origem de replicao
do DNA viral e a regio regulatria (URR) (Figura 24.4). Apesar destas regies
serem bastante homogneas em seus tamanhos, em sua localizao
genmica e em suas funes, as seqncias nucleotdicas so extremamente
particulares para cada tipo viral e apresentam uma caracterstica que
comum a todos os vrus do papiloma: apresentar os genes em uma s fita do
DNA viral. As regies codificadoras so transcritas primeiramente, logo aps
a infeco celular pelo vrus, que tem localizao preferencial no ncleo da
clula hospedeira, podendo seu genma estar integrado ao genma hospedeiro
ou em forma livre ou epissomal. Seus transcritos esto envolvidos na
replicao, regulao de transcrio e transformao celular .As regies
codificadoras L (Late) que expressam mais tardiamente protenas
constituintes do capsdeo viral esto relacionadas com o processo de infeco
celular. A classificao dos tipos virais feita atravs da comparao das
seqncias especficas de nucleotdeos do genoma viral e, segundo os
critrios do Comit de Nomenclatura do Vrus do papiloma (PNC), esta
classificao deve ser realizada por comparao das seqncias das regies
codificadoras E6, E7 ou L1, sendo que os novos tipos virais somente so
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
944 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

reconhecidos quando a comparao das sequncias destas regies

apresentam homologia menor que 90%.

Figura 24.4: Representao de um genoma genrico do vrus do papiloma. A linha contnua representa
o DNA viral. A numerao interna se refere ao nmero das bases. As linhas externas se referem s
regies codificadoras Early (E) e Late (L).
Regio Early(E)
E7,E6,E5 - Transformao
E1 - Replicao Epissomal
E2,E4- TransAtivadora/Trans-Repressora
Regio Late(L)
L1 - Capsdeo maior
L2 - Capsdeo menor
LCR- Regio no codificadora
Os produtos de PCR so obtidos a partir das regies L1 e E6 atravs dos seguintes primers:
MY09/MY11-Regio L1, nucleotdeo 6580-7050(vermelho)
PR1A/PR1B-RegioE6, nucleotdeo 421-541(amarelo)

LOCALIZAO DO VRUS DO PAPILOMA

O epitlio pode no ser o nico stio de localizao dos vrus do

papiloma, tendo sido encontrado o DNA do vrus do papiloma em linfcitos
de bovinos com ou sem leses de papilomatose, sugerindo que os linfcitos
poderiam ser stio de latncia do vrus do papiloma. O DNA do vrus do
papiloma humano tambm j foi detectado em clulas sanguneas de
mulheres portadoras de infeco urogenital e cncer cervical por HPV, assim
como pacientes afetadas por tumores mamrios e portadoras de leses pr-
neoplsicas HPV positivas. Recentes investigaes referentes aos
mecanismos de transmisso vertical e horizontal do vrus do papiloma em
bovinos, revelaram a presena do BPV-2 em linfcitos de sangue perifrico
desses animais ao mesmo tempo que, exames citogenticos detectaram
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 945
aumento do nmero de aberraes cromossmicas nestas mesmas amostras
(Figura 24.3). Estes dados reforam a hiptese de que os linfcitos atuam
realmente como stio de latncia viral, alm de sustentarem que o sangue
pode se tratar de um importante veculo da transmisso horizontal e vertical
do vrus do papiloma bovino (BPV) e talvez humano. Pode-se considerar que
outros lquidos corpreos ricos em linfcitos possam atuar como importantes
veculos da transmisso do vrus do papiloma bovino. Outro fator importante
que quando este vrus infecta uma clula, ele permanece na forma
epissomal, podendo se integrar ao DNA desta clula e iniciar seu ciclo de
reproduo o que culminaria no aparecimento de leses do tecido no qual
esta clula se encontra, caso contrrio este vrus permanece latente e, se
tal fato ocorrer em um tecido que est circulando no organismo hospedeiro
esse vrus, mesmo na forma latente poderia ser encontrado em diferentes
pontos desse organismo e no especificamente em determinados tecidos
lesados. Em estudos por hibridizao em dot blot de 16 amostras controles
e 17 amostras de smen de parceiros regulares de mulheres
comprovadamente infectadas com papilomavrus humano (HPV), objetivando
verificar a transmisso do HPV via smen, pode-se verificar que todas as
mulheres foram HPV DNA positivas, as amostras de smen de seus parceiros,
da mesma forma que as amostras controles, foram negativas sugerindo que
o HPV no transmitido via smen. Em estudos em amostras de material
uretral, urina e smen de setenta homens, parceiros regulares de mulheres
HPV DNA positivas, tanto o PCR quanto o dot blot de 100% das amostras de
smen foram eficientes para a deteco do material gentico do HPV, o que
no foi observado com relao aos swabs e amostras de urina, sugerindo
ser o smen o melhor material para anlise.
A presena de seqncias de DNA e RNA do vrus do papiloma humano
tipos 16 e 18 foi estudada em 24 amostras de plasma seminal e
espermatozides tendo sido encontradas seqncias E6 e E7 do DNA do
gene e produtos de transcrio do vrus do papiloma tipo 16 em 2 e 0 amostras
de plasma seminal, respectivamente e em 6 e 2 amostras de
espermatozides, respectivamente. Para o HPV tipo 18, foram encontradas
as seqncias de DNA do gene e produtos de transcrio, respectivamente,
em 8 e 2 amostras de lquido seminal e em 11 e 5 amostras de
espermatozides, respectivamente. Os resultados sugerem que, alm de
infectar clulas espermticas humanas, certos genes do HPV so expressos
ativamente em clulas espermticas infectadas, levando-as a se comportarem
como vetores ou transportadores para a transmisso do HPV entre parceiros
durante o contato sexual e para os fetos atravs da fecundao dos vulos,
ou ambos. Apesar da alta incidncia de infeco uro-genital, no tem sido
demonstrada a presena de vrus em clulas germinativas e, embora o
vrus tenha sido encontrado no smen, usualmente eles so encontrados
no lquido seminal e no em associao com os espermatozides, ficando a
contaminao intra-tero em dependncia da possibilidade do vrus penetrar
ou no no ovcito antes ou no momento da fecundao ou, se o embrio
jovem possa ser invadido pelo vrus no ambiente uterino. Estudos
experimentais em bovinos vieram a demonstrar a transmisso vertical do
vrus do papiloma, bovino (especificamente BPV2) atravs da deteco do
vrus em bezerro nascido de fmea infectada (Figura 24.5). As tcnicas
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
946 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

bacteriolgicas e virolgicas so difceis de serem trabalhadas para se

determinar, com segurana, se o embrio est contaminado ou no. Tm
sido usadas algumas tcnicas especficas como ultramicroscopia,
imunocitoqumica e autoradiografia, que podem ajudar a mostrar tanto o
agente patognico como o antgeno produzido pelo vrus. Mtodos clssicos
em bacteriologia e virologia como culturas de embries ou de homogeneizados,
por exemplo, no so suficientemente sensveis para identificar, com
segurana, viroses intra ou extracelulares (Figura 24.6). O aprimoramento
de novas tcnicas de amplificao, sequenciamento e hibridizao in situ
tem favorecido a identificao segura de material gentico do vrus, como
no caso da deteco em modelo bovino citado.

Figura 24.5: Identificao do BPV2 em linfcitos perifricos de bovinos inoculados por sangue
de animais afetados por hematria enzotica, atravs de anlise por PCR: as colunas 1 e 8 so
ocupadas por marcadores de Peso Molecular; a coluna 5 controle negativo e a coluna 7
controle positivo ( DNA do vrus); colunas 2,3,4 e 6 amostras dos animais inoculados.

Figura 24.6: Amplificao

por PCR de DNA de HPV
extrado de linfcitos perif-
ricos de paciente afetada por
condiloma acuminado com
primers de consensus
MY09-My11. 1-Frao de
linfcitos; 2-Frao de
hemceas; 3- Frao de
hemceas; 4-Controle nega-
tivo; 5-Controle positivo; 6-
Marcador de peso molecular
(100pb)
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 947
CONSIDERAES FINAIS

As descobertas sobre a estrutura , ciclo de vida e interaes com a

clula hospedeira descritas para os vrus da papilomatose, HPV ou BPV,
vm demonstrar que sua relao com os processos oncognicos muito
mais complexa do que supunha. Os conceitos sobre a ao oncogncia viral
discutiam a integrao do genma viral no genma hospedeiro tendo como
consequncias a ativao de oncogenes celulares e a transformao maligna.
As evidncias referentes ao do HPV (ou outros vrus do grupo) tm
trazido a viso de que a ao viral muito mais ampla. Esta ao se inicia
no processo infeccioso, onde protenas celulares, como a integrina, vm a
atuar como receptores virais, agindo diretamente na entrada do vrus na
clula. Posteriormente, as oncoprotenas virais transcritas, segundo sua
sequncia programada, E ou L, tm capacidade de interferir com protenas
envolvidas no controle do ciclo celular, como ciclinas, p53 e RB (protenas
codificadas por genes supressores de tumor), ou p21. Estas interaes vo
resultar em alteraes no controle do ciclo celular, levando a clula a alterar
seu destino e muitas vezes transformao e imortalizao. O papel dos
fatores ambientais nestes processos torna-se de difcil entendimento devido
possibilidade de mltiplas aes, como por exemplo na diminuio da
capacidade imunolgica ou gerando mutaes em sequncias especficas
do genma envolvidas com os sistemas de reparo. Outro aspecto ainda no
totalmente esclarecido a relao entre o estado do vrus no ncleo
hospedeiro e a induo de malignizao. A relao das oncoprotenas virais
com o sistema de regulao da enzima telomerase, alterando a manuteno
das regies telomricas ,leva a importantes questionamentos sobre os
fenmenos de fragilidade cromossmica verificados em clulas infectadas e
a relao entre a progresso das leses cromossmicas e o processo de
transformao celular. Sem dvida, a sua associao com patologias de to
grande relevncia em sade pblica e suas caractersticas de interao
com o genma hospedeiro tornam o vrus do papiloma de interesse cada vez
mais intenso.
A presente discusso traz elementos novos que iro moldar o futuro
do nosso conhecimento sobre a biologia dos vrus do papiloma e os mecanismos
correlacionados em oncognese. A deteco do vrus em pacientes com
neoplasias e principalmente nas portadoras de leses pr-neoplsicas trar
reflexos a curto prazo para o diagnstico da infeco viral e na preveno e
aconselhamento em cncer.

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS

948 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1) ALMEIDA.M.E. Deteco e Sequenciamento dos Vrus do Papiloma Bovino

Tipos 2 e 4 (BPV2 E BPV4) em lquidos corpreos de Bovinos. Dissertao
de Mestrado- UNIFESP 1998;
2) BRISSON, J.; Morin, C.; Fortier, M.; Roy, M;. Bouchard,C.; Leclerc, J.;
Christen, A. Cuimont, C.; Penault, F.; Meisels, A . Risk factor for cervical
intraepithelial neoplasia: difference between low and high-grade lesions.
Am J Epidemiol, v.140, p.700-10, 1994;
3) BURGER, M.P.M; Hollena, H; Peters, W.J;. Schrder, F.P.; Quint, W.G.
4) Epidemiological evidence of cervical intra-epithelial neoplasia without
the presence of human Papillomavirus. B J Cancerv.v. 73, p. 831-6,
1986;
5) BURGER, M.P.M.; Hollena, H; Gouw, A.S.H.; Pieters, W.J.L.M.; Quint,
W.G.V. Cigarette smoking and human Papillomavirus in patients with
reported cervical cytological Ano????????????;
6) CAMPO, M.S.; Jarret, W.F.H.; O Neil, B.W.; Smith, K.T. Association of
Bovine papillomavirus type 2 and braken fern with bladder cancer in
cattle. Cancer Res, v. 52, p. 6898 - 6904, 1992;
7) CAPALASH, N.; Sobti, R.C. Spontaneous genomic fragility and cell cycle
progression in lymphocytes of patients with cervical carcinoma. Cancer
Genetics & Cytogenetics, v. 88, p. 30-34, 1996;
8) CARVALHO,C. Avaliao da possvel presena do vrus do papiloma bovino
(BPV) em gametas de bovinos. Monografia- Especialista - Biologia
Molecular - UNITAU, 45p.-1999;
9) ELUF-NETO, J.; Booth, M.; Muoz, N.; Bosch, F.X.; Meijer, C.J.L.M.;
Walboomers, J.M.M. Human Papillomavirus and invasive cervical cancer.
Br J Cancer, v.69, p. 114, 1994;
10) ERKIZAN, V.; Atabey, N.; Yorukoglu, K.; Sakizli,M.; Kirkali, Z.. Human
papillomavirus prevalence in bladder cancer. 16th International
Papillomavirus Conference: 489, 1997;
11) FRANCO,E.L. Epidemiology of HPV infection and cervical neoplasia : an
update. 16th International Papillomavirus Conference: 49, 1997;
12) HASHIDA ,T. & Yamamoto, S. Induction of chromosome abnormalities
in mouse epidermal keratinocytes by human papillomavirus type 16 E7
oncogene. Journal of General Virology, v.72, p.1569-1577, 1991;
13) HEIM, S. & Mitelman, F. Cancer cytogenetics Chromosomal and
molecular genetic aberrations of tumor cells.2nd edition. John Wiley &
Sons, Inc., 1995, 536p;
14) KRISTIANSEN, E.; Jenkins, A.; Holm, R. 1994. Coexistence of episomal
and integrated HPV16 DNA in squamous cell carcinoma of the cervix. J.
Clin Pathol, v.47, p. 253-256, 1994;
15) LAI,Y.M.; Yang, F.P.; Pao, C.C. Human papilomavirus deoxyribonucleic
acid and ribonucleic acid in seminal plasma and sperm cells. Fert.
Steril., v.65, p.1026-1030, 1996;
16) MARK, H.F.; Santoro, K.; Campbell, W.; Hann, E.; Lathrop, J. Integration
of human papillomavirus sequences in cervical tumor cell lines. Ann.
Clin. Lab., v. 26, p. 147-153, 1996;

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS

 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA 949
17) MONTGOMERY, K.D.; Tedford, K.L.; McDougall, J.K. Genetic instability
of chromosome 3 in HPV- immortalized and tumorigenic human
keratinocytes. Genes Chromosomes Cancer, v.14, p.97-105, 1995;
18) MOURA, J.W.; Stocco Santos, R.C.; Dagli, M.L.Z.; DAngelino, J.L.; Birgel,
E.H.; Beak, W. Chomossome aberrations in cattle raised on bracken
fern pasture. Experientia, v.44, p.785-788, 1988;
19) ODA, D.; Bigler, L.; Mao, E.J.; Disteche, C.M. 1996. Chromosomal
abnormalities in HPV -16- immortalized oral epithelial cells.
Carcinogenesis, v.17, p. 2203-2008, 1996;
20) OLSON, C.; Pamukcu,A.M.; Brobst, D.F.; Kowalczyk, T.; Satter, E.J.;
Price, J.M.. A urinary bladder tumor induced by a bovine cutaneous
papilloma agent. Cancer Research, v.19, p. 779-782, 1959;
21) OLSON, C.; Pamucku, A.M.; Brobst, D.F. Papilloma-like virus from bovine
urinary bladder tumors. Cancer Research, v. 25, p.840-849, 1965;
22) PARK, T.W.; Fujiwara, H.; Wright, T.C.. Molecular biology of cervical
cancer and its precursors. Cancer, v.76, p. 1902-1903, 1995;
23) PEREIRA, S.R.M.; Lindsey, P.C.; Souza, I.E.; Lopes, F.; Lindsey, C.J.;
Pignatari, A.C. HPV diagnosis by clinical examination, cytology, colposcopy
and histopatology comparewith molecular analysis by PCR and
hybridization assay. 16 th International Papillomavirus Conference, p.
274., 1997;
24) PEREIRA, S.R.M.; Person, O.C.; Buratinni, M.; Cunha, D.C.;
Pignatari,A.C.; Lindsey, P.C. Epidemiological factors and diagnosis of
HPV infection in women submitted to biopsies of the genital tract. 16th
International Papillomavirus Conference, p.442, 1997;
25) PIZA, A.M.; Almeida, M.E.; Lindsey, C.J.; Stocco Santos, R.C.; Beak,
W. Bovine Papillomavirus BPV2 e BPV4 in milk and urine of infected
cows. 16th International Papillomavirus Conference, p.285, 1997;
26) POPESCU, N.C.; DiPaolo, J.A. Preferential sites for viral integration on
mammalian genome. Cancer Genet Cytogenet v.42, p.:157-171, 1989;
27) SANTOS, R.C.; Brasileiro-Filho, G. & Silva, M.E. Tumorigenicity of boiling
water extract of bracken fern (Pteridium aquilinum (L.) Kuhn). Cincia
e Tecnologia de Alimentosv. 12, p. 72-76, 1992;
28) STOCCO DOS SANTOS, R.C.; Ferraz, O.; Castro, N.; Pinto, J.; Santelli,
G.; Beak, W. Chromossome aberrations in cattle inoculated with blood
of hematuric bovines. Seventeenth International Congress of Genetics,
p.213, 1993;
29) STOCCO DOS SANTOS, R.C.; Ferraz, O.P.; Castro, N.H.C.; Vianna, E.K.G.;
Pinto, J.R.; Romano, M.A.; Santelli, G.M.M.; Beak, W. Chromossome
aberrations related to bovine papillomavirus transmission. II Congresso
Latinoamericano y 3 de mutagenesis, carcinogenesis y teratogenesis
ambiental, 1994;
30) STOCCO DOS SANTOS, R.C.; Ferraz, O.P.; Santos, R.C.; Marliere, C.A.;
Galvo M.A.M.; Beak, W. Oncogenesis induced by viral transmission
through inoculated blood: an experimental model. Bras .J. Genetics v.
19, p.: 255, 1996;
31) STOCCO SANTOS, R.C.; Lindsey, C.J.; Ferraz, O.P.; Pinto, J.R.;
Mirandola, R.S.; Benesi, F.J.; Birgel, E.H.; Pereira, C.A.B.; Beak, W.
Bovine Papillomavirus transmition and chromossomal aberrations and
GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS
950 CAPTULO 24 - BIOLOGIA DO VRUS DO PAPILOMA

experimental model. 16th International Papillomavirus Conference, p.

314, 1997;
32) STOCCO DOS SANTOS, R. C.; Lindsey, C.J.; Ferraz, O. P.; Pinto, J.R.;
Mirandola, R.S.M.; Benesi, F.J.; Birgel, E.H.; Pereira, C.A.B.Bovine
papillomavirus transmission and chromossomal aberrations: an
experimental model. J. Genetics Virology v.79, p.2127-2135, 1998;
33) VILLA, L.L.; Rahal., P.; Caballero, O.; Termini, J.; Sobrinho, S.; Ferreira,
M.L.B.; Pinto, L.; Galan, M.; Santos, M.; Leme, M.S.; Franco, E.L.; Rohan,
T.E.; Ferenczy, A. Epidemiology of persistent Human Papillomavirus (HPV)
and risk of Cervical intraepithelial neoplasia. Ludwig Institute for Cancer
Research Scientific Report p.:258-259, 1997;
34) VILLA,L.L. Human papillomaviruses and cervical cancer. Adv. Cancer
Res v. 71,p.: 321-341,1997;
35) WAN, T.S.; Chan, L.C.; Ngan. H.Y.; Tsao, S.W. 1997. High frequency of
telomeric associations in human ovarian surface epithelial cells
transformed by human papilloma viral oncogenes. Cancer Genet
Cytogenet v.95, p. 166-172, 1997.

GENTICA BASEADA EM EVIDNCIAS SNDROMES E HERANAS