CARA PENGAMBILAN DAN PENGIRIMAN SPESIMEN

MIKROBIOLOGI

Fase Pemeriksaan Mikrobiologi

1. Pre-Analitik
a. Pengambilan Spesimen
Spesimen harus berasal dari daerah infeksi yang benar dan
menghindari adanya kontaminasi dari daerah sekitarnya.
Waktu pengumpulan spesimen harus tepat
Jumlah yang diambil harus memadai agar dapat diperoleh
pertumbuhan m.o yang maksimal
Menggunakan alat pengambilan sampel, kontainer, media
kultur/transpor yang sesuai
Sebaiknya melakukan kultur sebelum pemberian antibiotika
Pengambilan sampel untuk smear juga diikutsertakan
Dilabel dengan benar
b. Transportasi Spesimen
Kondisi sampel dipertahankan seperti awal
Wadah kontainer yang akan dikirim harus sesuai (tidak terlalu besar)
Apabila spesimen labil terhadap panas maka menggunakan dry ice atau
ice pack.
Menggunakan media transpor tidak perlu memakai dry ice.
Menggunakan wadah selain dari gelas (kaca)

c. Penerimaan Spesimen dan Observasi Awal

Observasi awal sebaiknya di dalam biosafety cabinet (BSC) untuk
melihat adanya kontaminasi bahan lain.
Petugas harus menggunakan alat pelindung diri seperti sarung tangan,
masker, jas laboratorium
Meneliti adanya
o Data pasien
 o Spesimen dalam keadaan yang sesuai (memenuhi kriteria
penerimaan sampel atau rejeksi sampel)
d. Rejeksi Spesimen
Spesimen dengan formalin
Spesimen yang melebihi batas waktu yang dapat ditoleransi untuk
dilakukan kultur (sputum dan urine > 2 jam di suhu ruang)
Hanya satu swab untuk bermacam-macam pemeriksaan mikrobiologi
(aerob, anaerob, jamur , TB)
Wadah penampung spesimen tidak sesuai : tidak steril, terkontaminasi,
bocor , menggunakan penampung yang salah
Spesimen terkontaminasi bahan lain seperti barium, zat pewarna,
chemical oil
Penolakan untuk kultur anaerob : gastric washing, urine, sekret prostat,
feses, swab ileostomi atau kolostomi , swab tenggorok, swab hidung,
orofaring, swab kulit superfisial.
Data Pasien tidak lengkap, spesimen tidak dilabel, dan tidak
menyertakan formulir pemeriksaan.
Jumlah minimal spesimen yang dibutuhkan tidak terpenuhi
2. Analitik
3. Post- Analitik

Kultur Aerob/Anaerob

Teknik pengumpulan sampel sangat penting

Inokulasikan pada media transpor anaerob
Paparan udara harus dihindari
Transportasi segera

Diagnosis penyakit pada pasien, kususnya pada penderita infeksi membutuhkan beberapa
acuan. Salah satunya yaitu spesimen/sampel dari penderita yang terinfeksi. Dalam
pengambian speimen atau sampel ini harus dilakukan sesuai prosedur yang sesuai standard
agar tidak terjadi hasil yang tidak representative yang nantinya akan membingungkan petugas
medis dalam mendiagnosis pasien tersebut. Berikut adalah cara pengambilan sampel dari
pasien :

1. Cara Pemberian Label

a. Nama
b. Umur
c. Jenis Kelamin
d. Jenis permintaan pemeriksaan/biakan apa
e. Jam dan Tanggal pengambilan spesimen
 f. Diagnosis
g. Antibiotika yang sudah diberikan
2. Cara Pengambilan Darah Sampel
a. Sebaiknya sebelum pemberian antibiotika
b. Waktu pengambilan terbaik adalah saat penderita menggigil atau panas badan
meningkat
c. Dilakukan lebih dari satu kali, 3 kali lebih baik dengan pengambilan terpisah dengan
interval satu jam.
d. Volume darah yang diambil : Dewasa : 5-20 ml per venepuncture, Anak : 25 ml,
Bayi dan neonatus 12 ml
e. Menggunakan dua tabung : Aerob dan anaerob
f. Tidak diperkenankan mengambil dari kateter intravena (infus set)
g. disinfectant:
i. 2% tincture of iodine,
ii. 10% polyvidone iodine,
iii. 70% alcohol,
iv. 0.5% chlorhexidine in 70% alcohol.
v. Jika menggunakan iodine harus diusap menggunakan 70% alcohol untuk
menghindari iritasi kulit
vi. Disinfektan dibiarkan mengering sebelum darah diambil

Pengambilan Sampel Darah Secara Umum

Cara Aseptik
Desinfeksi pada kulittempat ambil darah (vena)
Jumlah Pasien harus sesuai

Bahan yang dibutuhkan

Sarung tangan steril

Alkohol 70% dan Yodium tingtur ( povidon iodine 10% )
Semprit sekali pakai
Botol Media ( aerobik, jika perlu anaerobik )
Torniquet

Praktek Pengambilan Sampel untuk Kultur

Cuci Tangan sebelum melakukan pengambilan darah dan setelah itu memakai
sarung tangan.
Persiapkan peralatan di dekat penderita dan pakai sarung tangan
Pasang torniket dengan dikendurkan
Usapkan desinfektan povidon iodine di daerah pungsi vena dengan arah
melingkar dari tengah ke pinggir
Biarkan mengering dan kontak dengan kulit selama 60 detik
 Bersihkan povidone iodine dengan alkohol 70 %
Sebelum melakukan pungsi siapkan tabung kultur darah dengan memberi
tanda sampai mana darah akan ditambahkan
Buka penutup tabung kulltur dan usap dengan alkohol 70 %
Kencangkan torniket
Lakukan pungsi vena
Masukkan darah kedalam tabung kultur
Label tabung sesuai aturan yang berlaku

Pengiriman

Jangan disimpan di almari es

biarkan suhu kamar atau 35 C
Segera kirim ke laboratorium
Mikrobiologi

3. Cara Pengambilan Cairan Serebrospinal

a. Menggunakan teknik aseptik dan dilakukan oleh petugas yang kompeten
b. Tempat ambil:
i. antara tulang L 3-4 (L3-4) (dewasa);
ii. dan L4-5 (Anak)
c. Tempat Penampungan (5-10 ml CSF dibagi ke tabung)
i. 3 tabung ( Tabung I : hitung sel, Tabung II : Pemeriksaan biokimia, Tabung III :
Kultur)
ii. 2 Tabung (Tabung I hitung sel dan biokimia tabung II : Kultur)
d. Bisa dimasukkan langsung ke media aerob dan anaerob seperti media untuk biakan
darah.
e. Jika tidak pemeriksaan tidak dilakukan segera maka inkubasi sampel 37 C. untuk
virus taruh di 4 C
f. Jumlah sampel minimal 1 ml untuk bakteria dan virus, 2 ml untuk jamur dan BTA.

4. Cara Pengambilan Sampel Urine

a. Jenis Spesimen Urine
i. Urin kateter
ii. Urin porsi tengah ( (Clean Catch Urine)
iii. Urin Aspirasi Suprapubik
iv. Sistoskopi
Urine harus di kultur dalam 2 jam, jika lebih 2 jam harus dimasukkan lemari es
dan tidak boleh lebih dari 18 jam. Spesimen sebaiknya urine pagi hari
b. Prosedur Pengambilan Urine Porsi Tengah untuk Wanita
i. Cuci tangan dengan sabun dan air kemudian keringkan dengan handuk
bersih/tisu.
ii. Duduk di toilet,
iii. Buka kaki/lutut ke samping selebar mungkin.
 iv. Pisahkan labia dan bersihkan vulva dan labia menggunakan air sabun dan
kasa/spon/kapas steril daria arah depan ke belakang. Tidak diperkenankan
menggunakan didesinfektan.
v. Bilas vulva dan labia menggunakan air hangat dan keringkan dengan
kasa/spon steril
vi. Selama proses tersebut penderita tetap mempertahankan labia terpisah dan
tidak menyentuh daerah yang sudah dibersihkan dengan jari
vii. Buang sedikit pancaran urine pertama.
viii. Penderita menampung urin pancaran tengah ke dalam wadah steril
ix. Tutup wadah penampung urine
x. Serahkan ke petugas laboratorium
c. Prosedur Pengambilan Urine Porsi Tengah untuk Pria
i. Cuci tangan dengan sabun dan air kemudian keringkan dengan handuk
bersih/tisu.
ii. Tarik kulit depan penis (jika belum disirkumsisi) dan bersihkan glans penis
secara menyeluruh menggunakan cotton gauze pads dengan air sabun. Tidak
boleh menggunakan disinfektan.
iii. Bilas dengan air hangat dan keringkan dengan sterile gauze pads. Selama
proses ini tidak diperkenankan menyentuh dengan tangan
iv. Kembalikan posisi kulit depan penis pada posisi semula
v. Buang aliran kencing pertama dan tampung aliran kencing selanjutnya ke
dalam wadah steril
vi. Tutup Wadah penampung
vii. Berikan pada petugas laboratorium
Untuk anak tersedia urine collector yang ditempelkanpada daerah urogenital,
dengan sebelumnya daerah urogenital dibersihkan terlebih dahulu.
d. Cara Pengambilan dari Urine Kateter
i. Petugas mencuci tangan kemudian memakai sarung tangan steril
ii. Jepit Kateter dengan klem selama < 30 menit
iii. Disinfeksi area soft rubber connector (antara kateter dan selang penampung).
iv. Tusukkan jarum, ambil urin, tampung, tutup rapat.
e. Cara Pengambilan Urine Aspirasi Suprapubik
i. Petugas mencuci tangan kemudian memakai sarung tangan steril
ii. Disinfeksi area kulit diatas kandung kemih dan dipakaikan duk steril
iii. Injeksi lidocain 1 % subkutan didaerah yang akan ditusuk jarum (2 cm diatas
simpisis).
iv. Buat insisi kecil dengan pisau bedah sampai dermis
v. Tusukkan jarum spinal 18 G sampai perlahan sampai mengenai kandung
kemih
vi. aspirasi urine, tampung, pindahkan ke wadah steril dan tutup rapat.
Cara ini menghindari dari pencemar uretra dan perineum. Diutamakan untuk
anak atau pemeriksaan anaerobik dan kandung kemih harus dalam keadaan
penuh
5. Cara Pengambilan Sample Tinja
a. Spesimen Tinja sebaiknya diperoleh pade fase awal diare/sakit
b. Sebelum penggunaan antibiotika
c. Lebih baik di dapatkan tinja pada pagi hari.
d. Feses yang digunakan harus fresh stool
e. Jika kesulitan mendapatkan tinja maka bisadilakukan swab rektum (anak-anak)
f. Deteksi pengidap (Carrier) dilakukan tiap hari, 3 hari

Pegambilan Sampel
Berikan pada penderita wadah steril untuk tinja (wadah dengan collector yang
menempel di tutup wadah)
Instruksikan penderita untuk mengeluarkan tinja dan ditampung pada tisu toilet,
koran, atau pot bersih dan tidak tercemar air.
Ambil tinja dengan menggunakan collector ke wadah steril sebanyak kira-kira 5
gram
Dipilih bagian tinja yang mengandung darah, lendir atau pus.
Tinja tidak boleh tercemar urine atau air.
Tutup rapat wadah dan serahkan kepada petugas
Segera mungkin dilakukan pemeriksaan, juka lebih dari 1-2 jam pergunakan
media transpor .

Cara Pengambilan Swab Rektum

Basahi swab kapas dengan air steril
Masukkan swab melalui sphincter ani kurang lebih 2 cm
Biarkan selama 30 detik agar bahan tinja terserap pada swab
Putar swab dan keluarkan.
Membutuhkan beberapa swab untuk pemeriksaan yang berbeda.
Masukkan swab ke dalam transpor medium .
Jika segera diperiksa dalam 1-2 jam maka dapat tidak perlu menggunakan media
transpor , hanya dimasukkan ke dalam tabung steril bertutup kapas atau tutup
Media Transpor : Carry- Blair Media, Stuart, Amies
6. Cara Pengambilan Swab Tenggorok
a. Penderita duduk menghadap lampu
b. Penderita membuka mulut lebar-lebar
c. Lidah tetap dibawah dan ditekan dengan spatula lidah
d. Swab kapas steril diusapkan pada setiap tonsil, dinding belakang faring, dan daerah
inflamasi lain yang nampak.
e. Diusahakan swab tidak menyentuh lidah dan permukaan buccal.
f. Lebih baik dilakukan dua kali swab, swab pertama dipakai untuk pemeriksaan
mikroskopis langsung dan swab kedua untuk kultur
g. Jika swab tenggorok tidak segera diperiksa maka digunakan media transpor Amies
atau stuart
7. Cara Pengambilan Swab Nasofaring
a. Petugas memakai masker, sarung tangan, jas lab.
b. Perkirakan panjang swab yang akan dimasukkan dengan mengukur jarak antara
telinga dan hidung
c. Masukkan swab ke dalam lubang hidung perlahan menyusuri dasar hidung sampai
menyentuh dinding belakang nasofaring
d. Putar swab perlahan dan biarkan selama 5-10 detik detik agar terjadi penyerapan
e. Masukkan swab ke dalam transpor medium

8. Cara Pengambilan Sampel Sputum

a. Penampung Sputum : Botol/penampung steril bertutup ulir dan bermulut lebar
b. Cara pengambilan sampel
 i. Penderita kumur dengan air dan melepas gigi palsu
ii. Sputum dikeluarkan dengan batuk yang dalam dan bukan saliva
iii. Tampung spesimen langsung ke botol
iv. Segera tutup botol; dan segera kirim ke laboratorium dan diperiksa segera, jika
tidak letakkan di refrigerator
9. Cara Pengambilan Swab Luka
a. Petugas memcuci tangan
b. Memakai sarung tangan
c. Luka dibersihkan dulu menggunakan kasa steril dan saline steril untuk
menghilangkan debris dan pus
d. Siapkan swab dengan membasahinya dengan saline steril
e. Swab semua permukaan luka dan biarkan beberapa detik diatas luka agar eksudat
terserap diswab
f. Masukkan ke dalam media transpor
10. Cara Pengambilan Sekret Vagina
a. Posisikan penderita tidur terlentang dengan lutut ditekuk kaki mendekati bokong
(litotomi)
b. Usapkan Kapas dengan savlon di area vulva
c. Masukkan spekulum cocor bebek
d. Masukkan swab ke dalam vagina menuju vagina posterior dan usap sekret. Dibuat
dua kali swab untuk pemeriksaan mikroskopis dan kultur.
e. Masukkan ke dalam media transpor
f. Kirim segera ke laboratorium
11. Cara Pengambilan Sekret Uretra
a. Daerah ddi sekitar lubang uretra luar harus dibersihkan dengan kapas dan akuades
b. Spesimen yan dapat diambil yaitu nanah yang keluar dari uretra atau swab sekret
uretra masuk 3-4 cm ke dalam uretra.
c. Jangan memakai swab kapas lebih baik memakai swab dari dacron atau jika
memakai kapas harus ditambahkan charcoal atau calsium alginate.
d. Segera masukkan ke media transpor dan N. gonorrhea dapat bertahan sampai 24
jam.
12. Pengecatan Gram
a. Bahan
i. Primary Stain: Crystal Violet
ii. Mordant: Iodine
iii. Decolorizing Agent : Ethanol, 95% (vol/vol), acetone dan ethanol (1:1)
iv. Counterstain: Safranin
b. Prosedur
i. Disiapkan sediaan hapusan spesimen pada gelas obyek yang difiksasi diatas api.
ii. Hapusan digenangi dengan reagen crystal violet selama 2 menit
iii. Pencucian dilakukan menggunakan air keran mengalir
iv. Mordant kemudian diberikan selama 2 menit
v. Pencucian dilakukan kembali menggunakan air keran mengalir
vi. Sediaan digenangi decolorizing agent selama 15 detik atau tetes demi tetes
sampai warna ungu hilang
 vii. Sediaan digenangi dengan counterstain safranin. Dan ditunggu antara 30 detik
sampai 1 menit
viii. Pencucian akhir dilakukan sampai tidak tampak warna pada air pencuci.
ix. Sediaan dikeringkan.
x. Observasi sediaan pada mikroskop
c. Faktor yang mempengaruhi Pengecatan Gram
i. Hapusan terlalu tebal sehingga fase pelunturan kurang maksimal
ii. Pemanasan hapusan saat fiksasi terlalu lama akan menyebabkan dinding sel
iii. Konsentrasi dan kebaruan dari reagen
iv. Fase pelunturan terlalu lama
v. Tahap pencucian dan pengeringan harus konsisten karena adanya sisa air yang
berlebihan akan mengencerkan reagen berikutnya terutama iodine.
vi. Hasil biakan yang sudah lama (>24 jam) dapat menyebabkan hasil negatif palsu
karena banyak sel yang mati dan dinding sel rusak.
vii. Penggunaan Antibiotika
d. Pemantapan Kualitas
i. Periksa adanya presipitasi atau pengendapan pada reagen setiap hari.
ii. Siapkan pengecatan gram dengan Escherichia coli (ATCC 25922) dan
Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228) atau Staphylococcus aureus (ATCC
25923).
- Escherichia coli: merah muda, batang gram negatif
- Staphylococcus epidermidis or aureus: biru keunguan, cocci gram positif