TSI

(Triple Sugar Iron Agar)

EQUIPO 2B:
KARLA MARIANA SNCHEZ
LUZ MARA RAMIREZ VILLAGMEZ
ISAAC ORTEGA GONZLEZ
 Definicin

Medio universalmente empleado para la

diferenciacin de enterobacterias, en base
a la fermentacin de glucosa, lactosa,
sacarosa y a la produccin de gas y cido
sulfhdrico.
 Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Extracto de carne 3.0

Pluripeptona 20.0 Suspender 62,5 g del polvo
Cloruro de sodio 5.0 por litro de agua destilada.
Lactosa 10.0 Mezclar bien y calentar con
Sacarosa 10.0 agitacin frecuente, hervir 1
Glucosa 1.0 o 2 minutos hasta disolucin
total. Llenar hasta la tercera
Sulfato de hierro y amonio 0.2
parte de los tubos de ensayo.
Tiosulfato de sodio 0.2 Esterilizar a 121C por 15
Rojo de fenol 0.025 minutos. Enfriar en pico de
flauta profundo.

Agar 13.0

pH final: 7.3 0.2

Fundamento
El extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano.

La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono

fermentables.

El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la

produccin de cido sulfhdrico

El sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los

cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen
sulfuro de hierro, de color negro.
 El rojo de fenol es el indicador de pH

El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se

detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al
color amarillo en medio cido.

El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que

reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el
tpico sulfuro de hierro de color negro.
 Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI,
picando el fondo y extendiendo sobre la
superficie del medio.

Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
RESULTADOS
1-Pico alcalino/fondo cido (pico
rojo/fondo amarillo): el microorganismo
solamente fermenta la glucosa.

2-La presencia de burbujas, o ruptura

del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.

3-Pico cido/fondo cido (pico

amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa,
lactosa y/o sacarosa.

4-El ennegrecimiento del medio indica

que el microorganismo produce cido
sulfhdrico.

5-Pico alcalino/fondo alcalino (pico

rojo/fondo rojo): el microorganismo es
no fermentador de azcares.
Microorganismo Pico/Fondo Produccin Produccin de
de gas cido sulfhdrico

E. coli ATCC A/A + -

25922
K. pneumoniae A/A + -
ATCC 700603

P. mirabilis ATCC K/A + +

43071
S. typhimurium K/A - +
ATCC 14028

S. enteritidis K/A + +
ATCC 13076
S. flexneri ATCC K/A - -
12022
P. aeruginosa K/K - -
ATCC 27853
A: cido
K: alcalino
bibliografa

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tsiagar.htm
http://slideplayer.com/slide/6822687/
PRUEBA DE LA CATALASA

EQUIPO 2B:
LUZ MARA RAMIREZ VILLAGMEZ
KARLA MARIANA SNCHEZ
ISAAC ORTEGA GONZLEZ
 Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que
se encuentra el la mayora de las bacterias aerobias y anaerobias
facultativas que contienen citocromo. La principal excepcin es
Streptococcus.

Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente

puede hacerse siguiendo dos tcnicas.
 Mtodo del portaobjetos

Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de

18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
Agregar con gotero o pipeta pasteur una gota de H2O2 al 30%
sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo).
Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
Si se invierte el orden del mtodo (extender la colonia sobre el
agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos
 Mtodo del tubo de ensayo
Agregar 1ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo puro de
agar en slant densamente inoculado.

Observar la formacin inmediata de burbujas (resultado positivo)

En la imagen se puede observar la liberacin

de oxgeno como consecuencia de la
actuacin del enzima catalasa, a partir de
un tubo con agua oxigenada que ha sido
inoculado con
H. pylori
bibliografa

http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnol
ogia/2008/MicroBiol/Pruebas%20Bioquimicas.pdf
https://es.scribd.com/doc/8705261/Prueba-de-La-Catalasa