RFLD (RESTRICTION FRAGMENT LENGHT POLYMORPHISMS)

Apa itu tes DNA? Mengapa tes ini begitu canggih, hingga dapat menentukan jatidiri
korban ledakan bom yang sudah hancur ? Sejak awal abad ke-20 para ahli forensik atau pihak
kepolisian menggunakan berbagai ciri khas pada manusia, yang disebut biometri sebagai
sarana untuk identifikasi jatidiri.
Selain metode identifikasi sidik jari juga dikembangkan metode identifikasi ciri biometri
lainnya, misalnya dengan sidik retina mata, catatan susunan gigi, bentuk tengkorak kepala
atau yang lainnya. Namun dalam kondisi tertentu metode identifikasi ciri biometri sulit
diterapkan. Misalnya, untuk kasus korban ledakan bom atau jatuhnya pesawat terbang yang
mengakibatkan tubuh korban hancur terpotong-potong. Atau juga dalam kasus kejahatan,
misalnya pembunuhan yang tidak meninggalkan jejak atau tanda apa pun.

Sampel analisa sidik jari DNA dapat berupa:

darah
kulit
rambut
sperma

RFLP adalah sebuah metode yang digunakan oleh ahli biologi molekuler untuk
mengikuti urutan tertentu DNA seperti yang disampaikan kepada sel-sel lain Sebuah RFLP
adalah urutan DNA yang memiliki pembatasan situs pada setiap ujungnya dengan "target"
urutan di antara keduanya. Sebuah sekuens target adalah setiap segmen DNA yang mengikat
untuk suatu penyelidikan dengan membentuk pasangan basa komplementer. Sebuah probe
urutan DNA beruntai tunggal yang telah ditandai dengan radioaktivitas atau enzim sehingga
probe dapat dideteksi. Ketika pasangan basa probe ke target, penyelidik dapat mendeteksi
mengikat ini dan tahu di mana urutan target adalah karena probe terdeteksi.
Sebagai contoh, mari kita ikuti RFLP tertentu yang ditetapkan oleh enzim restriksi EcoR I
dan urutan target sebesar 20 basis GCATGCATGCATGCATGCAT. EcoR aku mengikat
kepada pengakuan seuqence GAATTC dan memotong DNA beruntai ganda.
Probe DNA di gunakan dalam analisis polimorfisme pembatasan panjang fragmen
(RFLP- Restriction Fragment Length Polymorphisms),yang menjadi semakin berharga dalam
prosedur medis,mengandalkan pada pendeteksian berbagai ukuran fragmen (Polymorphisms)
yang di hasilkan ketika potongan DNA genomik yang mengandung suatu gen tertentu dan
daerah analog yang mengandung alel mutan nya di belah oleh suatu enzim pembatas.
Elektroforesis gel,autoradiografi, dan probe DNA berlabelradio digunakan untuk mendeteksi
dua fragmen berbeda. Protokol diagnostik ini sekarang di gunakan dengan berhasil untuk
diagnosis prenatal dari anemia sel sabit,Fibrosis kistik, Korea Huntington, Distrofi Muskular
Duchenne, dan penyakit ginjal polikistik dewasa. Karena tidak ada dua genom manusia yang
memiliki rangkaian basa yang identik. Maka RFLP dewasa ini di gunakan oleh pengetahuan
kedokteran kehakiman untuk mendapatkan sidik jari DNA manusia,di mana tidak ada dua
sidik jari yang sama.Dengan demikian,karena setiap sidik jari DNA manusia adalah
unik,maka RFLP terbukti merupakan alat penyelidikan yang kuat untuk membantu petugas
hukum dalam menyelesaikan masalah kejahatan.
Untuk menghitung jarak genetik antara untuk lokus, Anda harus mampu mengamati
rekombinasi. . Secara tradisional, ini dilakukan dengan mengamati fenotipe, tetapi dengan
analisis RFLP, adalah mungkin untuk mengukur jarak genetis antara dua lokus RFLP apakah
mereka merupakan bagian dari gen atau tidak.
Deteksi RFLP dilakukan berdasarkan pada adanya kemungkinan untuk membandingkan
profil pita-pita yang di hasilkan setelah di lakukan pemotongan dengan enzim restriksi
terhadap DNA target atau dari individu yang berbeda. Berbagai mutasi yang terjadi pada
suatu organisme mempengaruhi molekul DNA dengan berbagai cara,menghasilkan fragmen-
fragmen dengan panjang yang berbeda. Aplikasi tekhnik RFLP biasa di gunakan untuk
mendeteksi diversitas genetic,hubungan kekerabatan,sejarah domestikasi,asal dan evolusi
suatu spesies,genetic drift dan seleksi,pemetaan keseluruhan genom,tagging gen,mengisolasi
gen-gen yang berguna dari spesies liar,mengkonstruksi perpustakaan DNA.