UNIVERSIDAD CATOLICA SANTA MARIA

PROGRAMA DE INGENIERIA BIOTECNOLOGICA

CURSO: BIOTECNOLOGIA ANIMAL

PRACTICA N 9

DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES POR ANALISIS INMUNOLOGICOS

PRUEBA DE ANILLO EN LECHE (MRT) PARA BRUCELLOSIS BOVINA
PRUEBA DE SEROAGLUTINACION EN PLACA: PRUEBA DE ROSA DE BENGALA
PRUEBA PARA BRUCELLOSIS BOVINA

INTRODUCCION.-

Una prueba inmunolgica es una prueba que permite identificar si determinado organismo presenta
en s un proceso infeccioso o no.
Sirve para identificacin el agente infeccioso (bacteria, hongo, parsito), para un posterior
tratamiento.
Se registr un incremento en la cantidad y tipo de pruebas utilizados con fines diagnsticos, no solo
para la deteccin de anticuerpos, sino tambin para la de los antgenos.

Todas las pruebas se basan en el principio de que solo se forma un complejo antgeno-anticuerpo,
cuando un antgeno se encuentra con un anticuerpo especficamente contra l.
Por lo tanto la pureza de los reactivos utilizados tiene una importancia crucial respecto a la
especificidad y confiabilidad de la Prueba.
Una clasificacion en cuanto a algunas pruebas inmunolgicas utilizadas para diagnstico pueden
dividirse en dos grupos principales:

PRUEBAS VISIBLES A SIMPLE VISTA:

1.- Reaccin antgeno-anticuerpo directa:
1.1. Aglutinacin de suero en tubo
1.2. Aglutinacin microscpica (porta-objetos)
1.3. Difusin en agar gel
1.4. Inmunodifusin microscpica
1.5. Inmunoelectroforesis
1.6. Prueba de Comb., etc.
2. Antigeno unido a una partcula de mayor tamao para permitir la visualizacin del resultado:
2.1. Aglutinacin de latex
2.2. Hemaglutinacin pasiva indirecta
2.3. Inhibicin de la hemaglutinacin
2.4. Antgeno unido a colorante (Rosa de Bengala )

PRUEBAS QUE REQUIEREN UN INDICADOR:

1.- Indicador mediado por el complemento:
1.1. Fijacin de complemento.
1.2. Hemlisis radial simple

2.- Indicador marcado con enzima :

2.1-.ELISA
3,. Indicador marcado con inmunofluorescencia:
3.1 Inmunofluorescencia

MRT PRUEBA DE ANILLO EN LECHE PARA BRUCELLOSIS

OBJETIVO:
La Prueba de anillo en Leche detecta la presencia de anticuerpos en la leche
(Inmunoglobulinas IgA). Estos anticuerpos reaccionan con el antgeno coloreado de
Brucella abortus, formando con el un complejo, que se adhiere a la superficie de los
glbulos de la grasa de la leche y que asciende con ellos para formar una capa de crema
coloreada.

ACTIVIDADES PARA LA TOMA DE MUESTRA

1. En el campo:
Remover bien la leche en el recipiente y tomar unos 50ml., transportndose refrigeradas al
laboratorio para su anlisis respectivo.

2. En las plantas de Acopio:

Se toma la muestra directamente de cada una de las tinas de recepcin de muestra en las
plantas de las fbricas de subproductos de leche, en una cantidad de 50ml.

EQUIPOS Y MATERIALES:

Incubadora a 37C
Frascos de 50 ml. para la recoleccin de la muestra.
Tubos de ensayo de vidrio de 1ml.
Gradilla pequea para sujetar los tubos de ensayo
Pipetas : Para la toma de muestra de 1ml. de 1000 ul.
Para el reactivo de 30ul.
Tips para las pipetas.
Reactivo el antgeno

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA
Las muestras de leche deben de mantenerse en refrigeracin a temperatura de 4 a 6C.
Una hora antes de la prueba, se lleva a temperatura ambiente, tanto las muestras de leche
como el antgeno.
Mezclar cada muestra invirtiendo varias veces el frasco.
Colocar 1 ml. de muestra en un tubo de 12 x 75 mm.
Agregar una gota (0.03ml). de antgeno a cada tubo, mezclando bien invirtiendo el tubo
varias veces.
Incubar a 37C durante una hora

RESULTADOS:

Negativo : Anillo de crema blanco, Columna de leche azul

Positivo : Anillo de crema azul, columna de leche blanco.
ASPECTOS QUE HACEN VARIAN EL RESULTADO:

El exceso escases de crema dificulta la lectura de la prueba

La muestra de leche no debe de ser pasteurizada ni hervida.
La leche de calostro puede dar falso positivo.
La leche de vacas con mastitis tambin puede dar lugar a lecturas falso positivas por el
decoloramiento del antgeno.
Hay vacas infectadas por Brucella que no eliminan anticuerpos por la leche.

PRUEBA DE SEROAGLUTINACION EN PLACA : PRUEBA DE ROSA DE BENGALA

PARA BRUCELLOSIS BOVINA

INTRODUCCION
La prueba de Rosa de Bengala pertenece al grupo de pruebas serolgicas de aglutinacin y
es utilizada para la deteccin de anticuerpos contra Brucella abortus, presentes en el suero
sanguneo. Algunas ventajas son su alta sensibilidad, su bajo costo y facilidad para
realizarla inclusive en el campo.

FUNDAMENTO:
El antgeno de Rosa de Bengala detecta el anticuerpo que se encuentra en el suero de la vaca
formando un complejo que se dar a conocer a travs de la aglutinacin.

OBJETIVO GENERAL.-
Comprender los fundamentos bsicos de la prueba de aglutinacin como prueba inmunolgica.
Para el diagnstico e investigacin de agentes de importancia patgena.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
- Adquirir destrezas en la ejecucin de la metodologa de la prueba de aglutinacin
- Aplicar los fundamentos de la prueba en la interpretacin de los resultados de diagnstico e
investigacin de microorganismos.

MATERIALES:
- Muestras de suero sanguneo
- Reactivo de Rosa de Bengala
- Placa de vidrio rayada en cuadrculas
- Pipetas automticas graduables a 30 ul.
- Tips de 100 ul .
- Lmpara de luz indirecta
- Centrfuga

METODO:
1.- Dispensar una gota (30ul) de la muestra de suero en cada uno de los espacios cuadriculados de
la placa de vidrio.
2.- Adicionar una gota (30ul) de antgeno de Rosa de Bengala junto a cada gota de la muestra de
suero.
3.- Mezclar la muestra de suero y reactivo usando los tips u otros dispositivos.
4.- Agitar rotando la placa de vidrio por espacio de 4 minutos.
RESULTADOS:
Negativo : La mezcla de suero y antgeno permanece de un color rosado homogneo.

Positivo: Presencia de partculas muy finas de color rosado en el fondo de la mezcla formada por
el fenmeno de aglutinacin.

CUESTIONARIO:

1. Indique a que se llama Especificidad y Sensibilidad de una prueba.

2. Explique a que se llama Prueba de Oro (Goldstandar).
3. Explique sobre los tipos de Inmunoglobulinas que se detecta con las pruebas
realizadas en la prctica.
4. Explique en que consiste la Prueba de Fijacin de Complemento
5. Explique en que consiste la Prueba de COMB para Brucelosis.
6. Explique sobre la Brucelosis en cabras y perros.
7. Indique la diferencia entre la Prueba de Precipitacin y la Prueba de
Aglutinacin.
8. Defina a que se refiere la Prueba de Hemoaglutinacin y la Prueba de I nhibicin de
la hemaglutinacin.
9. Cul es la sensibilidad y especificidad de a Prueba de Seroaglutinacin en
Placa.