Manual de Tecnicas de Laboratorio para Aguas

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
ANALITICOS PARA AGUAS Y EFLUENTES

CONTENIDO
SECCION I
PROPIEDADES FISICAS
Cod.
02041 Conductividad. Mtodo conductimtrico.
10603 Dureza Total. Mtodo titulomtrico con EDTA.
10602 Dureza Total. Mtodo por clculo.
10301 pH. Mtodo electromtrico.
10430 Slidos Sedimentables. Mtodo gravimtrico.
10406 Slidos Suspendidos, Voltiles y Fijos. Mtodo gravimtrico.
10471 Slidos Totales, Voltiles y Fijos. Mtodo gravimtrico.
02074 Turbidez. Mtodo Nefelomtrico.
SECCION II
II A) DETERMINACION DE METALES
Cod.
33011 Arsnico. Mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica por
genera-cin de hidruros.(HGAAS).
48001 Cadmio. Mtodo FLAAS*.
20003 Calcio. Mtodo FLAAS.
20109 Calcio. Mtodo titulomtrico con EDTA.
30004 Cinc. Mtodo FLAAS.
29006 Cobre. Mtodo FLAAS.
24002 Cromo total. Mtodo FLAAS.
12002 Magnesio. Mtodo FLAAS.
12101 Magnesio. Mtodo por clculo.
80013 Mercurio. Mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica por
vapor fro. CVAAS.
28001 Niquel. Mtodo FLAAS.
82001 Plomo. Mtodo FLAAS.
19001 Potasio. Mtodo FLAAS.
11003 Sodio. Mtodo FLAAS.
* FLAAS: Espectrofotometra de absorcin atmica por llama
II B) CONTROL DE CALIDAD
Cod.
IIB01 Determinacin del Lmite de Deteccin y Cuantificacin en Espectrofotometra de
Absorcin Atmica.
CONTENIDO
SECCION III
DETERMINACION DE CONSTITUYENTES INORGANICOS NO-METALICOS

Cod.
10112 Alcalinidad. Mtodo titulomtrico.
07506 Amonio. Mtodo electromtrico.
06602 Cianuro. Mtodo titulomtrico.
06606 Cianuro libre. Mtodo Colorimtrico.
06600 Cianuro total. Mtodo Colorimtrico.
17204 Cloruro. Mtodo argentomtrico.
07308 Nitrato. Mtodo de espectrofotometra ultravioleta.
14103 Silicato. Mtodo colorimtrico del molibdosilicato.
16302 Sulfato. Mtodo turbidimtrico.
16102 Sulfuro. Mtodo electromtrico.
16103 Sulfuro. Mtodo potenciomtrico.
SECCION IV
DETERMINACION DE CONSTITUYENTES ORGANICOS

Cod.
06521 Aceites y grasas. Mtodo de Extraccin Soxhlet.
08202 Demanda Bioqumica de Oxgeno. Tcnica de dilucin.
08303 Demanda Qumica de Oxgeno. Mtodo colorimtrico, reflujo cerrado.
SECCION V
V A) ANALISIS MICROBIOLOGICOS EN AGUA

Cod.
36013 Coliformes fecales. Tcnica de filtracin por membrana.
36002 Coliformes totales. Tcnica de filtracin por membrana.
36103 Estreptococos fecales. Tcnica de filtracin por membrana.
36403 Vibrio clera. Tcnica de aislamiento e identificacin.
V B) CONTROL DE CALIDAD
Cod.
VB002 Verificacin de Coliformes totales.
VB003 Verificacin de Coliformes fecales.
VB004 Verificacin de Estreptococos fecales.
Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

Direccin Nacional de Medio Ambiente
SECCION I
PROPIEDADES FISICAS
SECCION I
PROPIEDADES FISICAS
Cod.
02041 Conductividad. Mtodo conductimtrico.
10603 Dureza Total. Mtodo titulomtrico con EDTA.
10602 Dureza Total. Mtodo por clculo.
10301 pH. Mtodo electromtrico.
10430 Slidos Sedimentables. Mtodo gravimtrico.
10406 Slidos Suspendidos, Voltiles y Fijos. Mtodo gravimtrico.
10471 Slidos Totales, Voltiles y Fijos. Mtodo gravimtrico.
02074 Turbidez. Mtodo Nefelomtrico.

Cdigo 02041 CONDUCTIVIDAD
DETERMINACION DE CONDUCTIVIDAD
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la medida de conductividad en aguas y

efluen-tes industriales.
2. DEFINICIONES
La conductividad es la capacidad que posee una solucin acuosa de conducir la

corriente elctrica, a 25C.
3. PRINCIPIO
El mtodo consiste en la medida directa de la conductividad utilizando una celda de

conductividad previamente estandarizada con una solucin de KCl.
4. MUESTREO Y PRESERVACION
El anlisis puede ser realizado tanto en campo como en el laboratorio.

Si el anlisis no es realizado durante las 24 horas de recolectada la muestra, sta
debe ser filtrada con un filtro de 0.45micras y preservada a 4C hasta 28 das luego
de su recoleccin. El filtro y el equipo de filtracin deben ser enjuagados con agua
destilada y desionizada, y previo a su uso, enjuagarlos con la muestra a filtrar.
5. EQUIPOS Y MATERIALES
5.1 Medidor de conductividad.

5.2 Celda de conductividad.
5.3 Termmetro con precisin de 0.1C, en el rango de 20-30C, o sensor de tem-
peratura en el equipo.
5.4 Matraz aforado de 1 L.
5.5 Vasos de bohemia.
6. REACTIVOS
6.1 Agua destilada y desionizada.
Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 02041 - 1

CONDUCTIVIDAD
6.2 Solucin estndar de KCl 0.01 M:

disolver 0.7456 g de cloruro de potasio (KCl) secado previamente 2 horas a
105C en agua destilada y diluir a 1 L en matraz aforado a 25C. Esta solucin
estndar de referencia tiene, a 25C, una conductividad de 1412 mhos/cm. P
r e - servar dicha solucin en un frasco de vidrio de borosilicato.
7. PROCEDIMIENTO
Es preferible que la medida sea realizada a 25C, en caso contrario se deben reali-
zar las correcciones necesarias para la temperatura de trabajo y el resultado final
debe ser informado a 25C.
7.1 Seguir las instrucciones del medidor de conductividad utilizado.
7.2 Determinacin de la constante de la celda:

Enjuagar la celda de conductividad con al menos tres porciones de la solucin
de KCl 0.01 M. Ajustar la temperatura de la cuarta porcin a 25.0 0.1C o
realizar las correcciones necesarias para que el valor quede determinado a
25C y medir.
Si el medidor de conductividad lee resistencia (R) en ohms, medir la resistencia de
esta cuarta porcin y la temperatura. Calcular la constante de la celda, C, como:
C, cm-1 = 0.001412 RKCl[1 + 0.019(T-25)]
donde:
R KCl = resistencia medida en ohms.
T = temperatura en C.
7.3 Medida de la conductividad:

Enjuagar la celda de conductividad con una o ms porciones de la muestra a
medir.
Ubicar la celda en la muestra de tal manera que no queden retenidas burbujas
de aire.
Ajustar la temperatura de la muestra a 25.0 0.1C o realizar las correciones
necesarias para que el valor quede determinado a 25C.
Medir la resistencia o la conductividad de la muestra.
0 CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS
5888Cuando se mide resistencia de la muestra, la conductividad a 25C es:
1.000.000 C
k, mhos/cm = Rm [1 + 0.019(T-25)]
02041 - 2 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

CONDUCTIVIDAD
donde:
0 = conductividad
0 = constante de la celda en cm-1
Rm = resistencia medida de la muestra en ohms.
0 = temperatura de medida en C.
8.2 Cuando se mide conductividad de la muestra sin compensacin de

tem-peratura, la conductividad a 25C se calcula como:
k, mho/cm = (km)/[1+0.0191(T-25)]
donde:
km = condutividad medida en mho/cm a T C
= temperatura de medida en C.
8.3 Ciertos instrumentos poseen compensacin de temperatura y leen la conductivi-

dad en unidades de mho/cm, en dicho caso la lectura es corregida automti-
camente a 25C, y se reporta directamente el valor medido.
Tabla de equivalencias:
S/m = (ohms-m)-1
mho/cm = (ohms-cm)-1
S/cm = mho/cm
S - siemens
9. BIBLIOGRAFIA
1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examina-

tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 2-43.
2- ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Methods for Chemical Analysis of

Water and Wastes. 2th Edition. Cincinnati, EPA, 1983. pp 120.1.

Cdigo 10603 DUREZA TOTAL
DETERMINACION DE DUREZA TOTAL
Mtodo titulomtrico con EDTA
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de dureza total en aguas

superficiales, subterrneas y efluentes domsticos e industriales.
2. DEFINICION
La dureza total se define como la suma de concentracin de iones calcio y magne-

sio, expresados como carbonato de calcio, en mg/L.
3. PRINCIPIO DEL METODO
Los iones calcio y magnesio forman complejos estables con etilendiaminotetra-ace-

tato disdico. El punto final de la titulacin es detectado por el indicador Negro de
Eriocromo-T, el cual posee rosado en la presencia de calcio y magnesio y un color
azul cuando los cationes estn formando complejo con EDTA.
Recolectar la muestra en envases de plstico o vidrio. Acidificar con HNO 3 hasta pH

23 2. La muestra puede ser almacenada hasta 6 meses.
0 MATERIALES
5.1 Matraz erlenmeyer de 250 mL

5.2 Buretas de 25 mL
5.3 Pipetas aforadas de 10 mL
5.4 Pipetas graduadas de 1 mL
5.5 Matraz aforado de 1000 mL
6. REACTIVOS
6.1 Solucin Buffer:

disolver 1.179 g de etilendiaminotetra-acetato disdico dihidratado y 780 mg
de MgSO4.7H2O o 644 mg de MgCl2.6H2O en 50 mL de agua destilada. Agre-
DUREZA TOTAL
gar a esta solucin16.9 g de cloruro de amonio (NH 4Cl) y 143 mL de hidrxido

de amonio (NH4OH) concentrado. Mezclar y diluir a 250 mL con agua destila-
da. Almacenar en botella de plstico.
6.2 Indicador Negro de Eriocromo-T (NET):

mezclar 0.5 g de NET con 100 g de NaCl. Pulverizar en mortero.
6.3 Solucin titulante de EDTA 0.01M:

disolver 3.723 g de etilendiaminotetra-acetato disdico dihidratado en agua
des-tilada y diluir a 1000 mL. Guardar en botella de plstico. Titular contra solu-
cin patrn de calcio.
6.4 Solucin estndar de calcio, 1 g CaCO 3/L:

pesar 1.000 g de CaCO3 anhidro seco en un matraz erlenmeyer de 500 mL.
Agregar lentamente solucin de HCl 6 N hasta que todo el carbonato de calcio
se halla disuelto. Agregar 200 mL de agua destilada y hervir 5 minutos para
eliminar completamente el CO2. Enfriar, agregar unas gotas de rojo de metilo y
ajustar al color intermedio naranja agregando solucin 3N de NH 4OH o so-
lucin 6 N de HCl. Transferir cuantitativamente y enrasar a 1000 mL en matraz
aforado con agua destilada.
7. PROCEDIMIENTO
7.1 Titulacin de la solucin de EDTA:
a)Tomar 10.0 mL de solucin estndar de calcio y diluir a 50 mL en un matraz

erlenmeyer.
Agregar 1.0 mL de solucin buffer. El pH deber estar entre 10.0 y 10.1, en
caso contrario descartar la solucin buffer.
b)Agregar una punta de esptula de reactivo indicador.

Titular con solucin de EDTA lentamente y agitando continuamente hasta
viraje del color de la solucin de rosado a azul. Completar la titulacin dentro
de los cinco minutos siguientes al agregado de la solucin buffer.
7.2 Titulacin de la muestra:
a)Seleccionar un volumen de muestra que requiera un gasto de EDTA menor

a 15 mL. Diluir la muestra a 50 mL con agua destilada.
Agregar 1 o 2 mL de solucin buffer. El pH deber ser 10.0 0.1, en caso
contrario descartar la solucin buffer.
b)Agregar una punta de esptula de reactivo indicador.

Titular con solucin de EDTA lentamente y agitando continuamente hasta viraje

DUREZA TOTAL
de color de la solucin de rosado a azul. Completar la titulacin dentro de los

cinco minutos siguiente al agregado de la solucin buffer.
8. CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS
T P x V1
G1
donde:
T : mg de CaCO3 equivalentes a 1000 mL de EDTA
P : mg CaCO3 /L de la solucin estndar de calcio
V1: volumen de solucin estndar de calcio tomados en la titulacin de la so-
lucin de EDTA, (10.0 mL)
G 1 : gasto de la solucin de EDTA consumidos en su titulacin
T x G2
Dureza total, mg CaCO3/L V
2
donde:
V2: volumen de muestra tomados para la determinacin, mL
G2: volumen de solucin de EDTA consumidos en la titulacin de la muestra, mL
9. BIBLIOGRAFIA
1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the

Examina-tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp
2-36 - 2-38.

Cdigo 10602 DUREZA
DETERMINACION DE DUREZA
Mtodo por clculo
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de dureza total en aguas su-
perficiales, subterrneas y efluentes domsticos e industriales.
2. DEFINICION
La dureza total se define como la suma de concentracin de iones calcio y magne-

sio, expresados como carbonato de calcio, en mg/L.
3. REFERENCIAS
3.1 Determinacin de calcio. Mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica

(Cod. 20003).
3.2 Determinacin de magnesio. Mtodo de espectrofotometra de absorcin at-

mica (Cod. 12002).
4. PRINCIPIO
Se calcula la dureza como la suma de las concentraciones de los iones calcio y

mag-nesio, los que se determinan segn las referencias 3.1 y 3.2 respectivamente.
5. CALCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS
Dureza total, mg CaCO3/L = 2.497[Ca] + 4.118[Mg]
donde:
[Ca] : concentracin de calcio expresada en mg/L [Mg] :
concentracin de magnesio expresada en mg/L
6. BIBLIOGRAFIA

tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp 2-36.

Cdigo 10301 DETERMINACION DE pH
DETERMINACION DE pH
Mtodo electromtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de pH en aguas y efluentes

industriales.
2. DEFINICIONES
El pH o la actividad del in hidrgeno indican a una temperatura dada, la intensi-dad

de las caractersticas cidas o bsicas del agua.
El pH se define como el logaritmo de la inversa de la actividad de los iones hidrgeno,
pH = - log [H+]
[H+] = actividad de los iones hidrgeno en mol/L.
3. PRINCIPIO
El mtodo consiste en la determinacin de la actividad de los iones hidrgeno por

medidas potenciomtricas usando un electrodo combinado o un electrodo estndar
de hidrgeno de vidrio con un electrodo de referencia.
4. INTERFERENCIAS
4.1 El electrodo de vidrio generalmente no est sujeto a interferencias como color,

turbidez, materia coloidal, oxidantes, reductores o alta salinidad, excepto para
un error de sodio, que se da a pH mayores de 10. Este error se puede redu-
cir usando un electrodo especial de bajo error de sodio.
4.2 Recubrimientos de material graso o partculas pueden dificultar la respuesta del

electrodo. Estos recubrimientos pueden ser removidos con una frotacin muy
suave o utilizando detergentes, seguido de un enjuague con agua destilada.
Un tratamiento adicional es utilizar cido clorhidrico (1+9) para remover cual-
quier pelcula restante.
4.3 Las medidas de pH son afectadas por la temperatura en dos formas: por efec-
tos mecnicos causados por cambios en las propiedades de los electrodos y
por efectos qumicos causados por cambio de equilibrios. En el primer caso las

DETERMINACION DE pH
interferencias pueden ser controladas utilizando instrumentos que posean

com-pensacin de temperatura o calibrando el sistema electrodo-instrumento
a la temperatura de las muestras. La segunda fuente de error depende de las
muestras y no puede sercontrolada, por lo cual se debe reportar la
temperatura con cada medida de pH realizada.
El anlisis puede ser realizado tanto en campo como en el laboratorio.

En caso de que el anlisis se realice en el laboratorio, llenar el recipiente de mues-
treo completamente sin cmara de aire. Realizar la medida antes de 2 horas de
recolectada la muestra.
6.1 Medidor de pH.

6.2 Electrodo de referencia de potencial constante y electrodo de vidrio. O se puede
utilizar un electrodo combinado el cual posee ambos electrodos, de medida y
de referencia, en un mismo cuerpo.
6.3 Termmetro o sensor de temperatura para compensacin automtica en el ins-
trumento.
6.4 Agitador magntico y barras agitadoras.
6.5 Vasos de Bohemia.
7. REACTIVOS
7.1 Agua destilada y desionizada.

7.2 Agua destilada y desaireada con conductividad menor a 2 umhos/cm. Para des-
airear calentar a ebullicin durante 15 minutos y enfriar.
7.3 Soluciones buffer estndar de pH conocido, necesarias para calibrar el
instrumento: a)Solucin buffer de pH = 4,004 a 25C.
Pesar 10,12 g de KHC 8H4O4 y diluirlo a 1 L en matraz aforado con agua desti-
lada.
b)Solucin buffer de pH = 6,863 a 25C.
Pesar 3,387 g de KH 2PO4 secado previamente a 110-130C durante 2 horas y
3,533 g de Na2HPO4. Disolver y llevar a 1 L en matraz aforado con agua desti-
lada.

DETERMINACION DE pH
c)Solucin buffer de pH = 10,014 a 25C.

Pesar 2,092 g NaHCO3 y 2,640 g de Na2CO3, disolver y llevar a 1 L en matraz
aforado con agua destilada.
NOTA: Reemplazar las soluciones buffer cada cuatro semanas.
0 PROCEDIMIENTO
0 Calibracin del instumento:
a)Para ello se debe seguir las instrucciones del medidor de pH. En la calibra-
cin se usan como mnimo dos de las soluciones buffer, cuyos valores de pH
deben cubrir el rango de pH esperado por la muestra a medir.
b)LLevar los buffers y la muestra a la misma temperatura. (Si el equipo lo per-

mite utilizar compensacin de temperatura). El valor correspondiente de pH de
los buffers debe ser corregido a la temperatura de los mismos.
8.2 Medida:
a)Medir el pH de la muestra indicando la temperatura de la misma.

Realizar la medida con una agitacin moderada para minimizar la entrada de
dixido de carbono y suficiente como para homogeneizar la muestra.
b)Una vez finalizada la medida enjuagar y secar suavemente los electrodos y

proceder a ubicarlos en la solucin de preserva de los mismos.
9. EXPRESION DE RESULTADOS
Los resultados se deben reportar en unidades de pH con una precisin de 0.1 y la

temperaura con una precisin de 1 C.
10.BIBLIOGRAFIA

tion of Water Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 4-65 - 4-69.
2- ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Methods for Chemical Analysis of

Water and Wastes. 2th Edition. Cincinnati, EPA, 1983. pp 150.1-1 - 150.1-3.

Cdigo 10430 SOLIDOS SEDIMENTALES
DETERMINACION DE SOLIDOS SEDIMENTABLES
Mtodo Volumtrico
1. OBJETIVO
Esta norma tcnica se utiliza para la determinacin de slidos sedimentables en

efluen-tes industriales y domsticos.
2. DEFINICION
Los slidos sedimentables son los materiales que sedimentan de una suspensin en
un perodo de tiempo definido en un cono Imhoff.
3. MUESTREO Y PRESERVACION DE LA MUESTRA
Recolectar la muestra en envases de vidrio o de plstico de 1L de capacidad.

Refrige-rar a 4C. Analizar lo antes posible.
4. MATERIALES
4.1 Cono Imhoff graduado de 1000 mL de capacidad.
5. PROCEDIMIENTO
a)Verter en el cono Imhoff 1000 mL de muestra perfectamente mezclada. Dejar

sedimentar y leer el volumen del sedimento a los 10 minutos en la escala.
b)A los 45 minutos, raspar las paredes del cono con varilla de vidrio para des-
prender las partculas adheridas. Dejar sedimentar 15 minutos ms y leer el
volumen del sedimento en la escala a los 60 minutos de iniciado el ensayo.
6. EXPRESION DE LOS RESULTADOS
Los resultados se expresan en mL de slidos sedimentables/L de muestra a los 10

minutos y a los 60 minutos.
El lmite inferior prcticamente medible est generalmente en el rango de 0.1 a 1

mL/L, dependiendo del cono Imhoff utilizado.

SOLIDOS SEDIMENTALES
7. BIBLIOGRAFIA

Examina-tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, AWWA,
WWCF, 1992. pp 2-57.

Cdigo 10406 SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES
SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES, VOLATILES Y FIJOS
Mtodo Gravimtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de slidos suspendidos tota-

les, voltiles y fijos, en aguas, efluentes industriales y domsticos.
2. DEFINICION
2.1 Los slidos suspendidos totales son los materiales retenidos por un filtro estn-
dar de fibra de vidrio y secado 103-105 C.
2.2 Los slidos suspendidos fijos son los residuos resultantes luego de calcinar a
55050 C la muestra retenida en el filtro.
2.3 Los slidos suspendidos voltiles corresponden a los compuestos perdidos du-
rante la calcinacin a 55050 C de la muestra retenida en el filtro. Se deter-
minan por diferencia de peso entre slidos suspendidos totales y fijos.
La muestra se debe recolectar en botellas de vidrio o plstico de 1 L de capacidad.

Refrigerar la muestras a 4C. Analizar antes de 24 horas de preferencia, como
mximo 7 das de realizado el muestreo.
4.1 Filtros de fibra de vidrio: Whatman 934 AH o Gelman A/E o Milipore AP 40.
Preferentemente de 4,7 cm de dimetro.
4.2 Equipo de filtracin por vaco:
embudo de membrana filtrante, preferentemente de 4,7 cm de dimetro, fras-
co de succin de suficiente capacidad para la muestra, trampa de agua, bom-
ba de vaco.
4.3 Estufa para operar a 103-105C.
4.4 Mufla para operar a 550 50C.
4.5 Desecador conteniendo un desecante con indicador coloreado de humedad.
4.6 Balanza anlitica de precisin 0.1 mg.
4.7 Probetas

SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES
5. PROCEDIMIENTO
5.1 Preparacin del papel de filtro:
Colocar el filtro en el embudo de filtracin. Aplicar vaco y enjuagar con tres

porciones de 20 mL de agua destilada. Continuar la succin hasta eliminar
totalmente el agua. Secar en estufa 103-105C por 1 hora en un soporte de
porcelana o similar. Si se va a determinar voltiles muflar por 15 min.a 550 C,
enfriar en desecador y pesar. Repetir el ciclo de muflado, enfriado y pesado
hasta peso constante.
5.2 Determinacin:
a)Una vez que se obtuvo el peso constante del filtro, pesarlo inmediatamente
antes de usarlo.
b)Colocar el filtro en el embudo de filtracin, mojar el filtro con una pequea

cantidad de agua destilada.
c)Tomar un volmen de muestra homogeneizada que de un residuo seco entre

2.5 y 200 mg. Verter el volumen medido en el embudo de filtracin. Comenzar
la succin. Lavar 3 veces sucesivas con 10 mL de agua destilada cada vez,
permitiendo un completo drenaje en los lavados. Continuar la succin por 3
minutos hasta que la filtracin sea completa.
d)Remover el filtro y colocarlo sobre un soporte de porcelana. Secar por 1 hora

a103-105C en estufa, enfriar en desecador hasta temperatura ambiente y pe-
sar. Repetir el ciclo de secado, enfriado, y pesado hasta peso constante o
hasta que la prdida de peso sea menor que el 4% del peso previo o 0.5 mg.
e)Colocar el filtro anterior en la mufla a 550 50C durante 1 hora. Enfriar en

desecador y pesar. Repetir la secuencia hasta obtener peso constante o has-ta
que la prdida de peso sea menor que el 4% del peso previo o 0.5 mg.
(P2-P1) 1000
SST, mg/L
V
(P3-P1) 1000
SSF, mg/L
V
SSV, mg/L SST - SSF

SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES
donde:
SST = slidos suspendidos totales en mg/L.
SSF = slidos suspendidos fijos en mg/L.
SSV = slidos suspendidos voltiles en mg/L.
P1 = peso del filtro preparado en mg.
P2 = peso del filtro ms el residuo seco a 103-105C en mg. P3
= peso del filtro ms el residuo calcinado a 550 C en mg.
23 = volumen de muestra tomado en mL.
24 BIBLIOGRAFIA

WWCF, 1992. pp 2-56.

Cdigo 10471 SOLIDOS TOTALES
SOLIDOS TOTALES, VOLATILES Y FIJOS
Mtodo Gravimtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de slidos totales, voltiles y

fijos en aguas, efluentes industriales y domsticos. El anlisis de slidos voltiles
puede ser empleado en el control de las plantas de tratamientos de efluentes
porque ofrecen una estimacin de la cantidad de materia orgnica presente.
2. DEFINICION
2.1 Los slidos totales son los residuos resultantes luego de la evaporacin y
secado de la muestra en una estufa a 103-105C. Los slidos totales incluyen
voltiles y fijos.
2.2 Los slidos fijos son los residuos resultantes luego de calcinar la muestra a
55050 C.
2.3 Los slidos voltiles corresponden a los compuestos perdidos durante la

calcina-cin a 55050 C. Se determinan por diferencia de peso entre slidos
totales y fijos.
Recolectar la muestra en envases de vidrio o plstico de 1 L de capacidad.

Refrigerar a 4C. Analizar antes de los 7 das.
4.1 Cpsulas de porcelana de 90 mm de dimetro.

4.2 Bao de agua, con soporte para las cpsulas
4.3 Estufa para operar a 103-105C.
4.4 Mufla para operar a 550 50C.
4.5 Desecador conteniendo un desecante con indicador coloreado de humedad.
4.6 Balanza anlitica de precisin 0.1 mg.
4.7 Probetas

SOLIDOS TOTALES
5. PROCEDIMIENTO
5.1 Preparacin de cpsulas:
Colocar las cpsulas en mufla a 550 50C durante 1 hora. Dejar enfriar en
desecador y pesar antes de su uso.
5.2 Determinacin:
a)Tomar un volumen de muestra homogeneizada que de un residuo seco entre

2.5 y 200 mg. Verter el volumen medido en la cpsula preparada y evaporar en
el bao de agua a sequedad. Evitar prdidas de la muestra por ebullicin.
b)Secar la muestra en estufa a 103-105C durante 1 hora. Enfriar en

desecador y pesar. Repetir el ciclo de secado, enfriado en desecador y pesado
hasta que se obtenga peso constante o que la prdida de peso sea menor al 4
% que el peso previo o menos de 0.5 mg (el que sea menor).
c)Calcinar la muestra en mufla a 550 50C durante 1 hora. Enfriar en dese-

cador y pesar. Repetir el ciclo de secado, enfriado en desecador y pesado
hasta que se obtenga peso constante o que la prdida de peso sea menor al 4
% que el peso previo o menos de 0.5 mg (el que sea menor).
(P2-P1) 1000
ST, mg/L V
(P3-P1) 1000
STF, mg/L V
STV, mg/L = ST - STF
donde:
S T = slidos totales en mg/L
S T F = slidos totales fijos en mg/L
S T V = slidos totales voltiles en mg/L
P1 = peso de la cpsula preparada en mg.
P2 = peso de la cpsula ms el residuo seco a 103-105C en mg.
P3 = peso de la cpsula ms el residuo calcinado a 550 C en mg.
0 = volumen de muestra tomado en mL.

SOLIDOS TOTALES
7. BIBLIOGRAFIA

WWCF, 1992. pp 2-54.

Cdigo 02074 TURBIDEZ
DETERMINACION DE TURBIDEZ
Mtodo Nefelomtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de la turbidez en aguas natu-

rales y tratadas.
2. DEFINICION
La turbidez es una medida de la propiedad ptica que causa dispersin y absorcin

de la luz con disminucin de la transmisin en lnea recta. Se miden en unidades de
turbidez nefelomtrica, (NTU).
Este mtodo est basado en la comparacin de la intensidad de la luz dispersada

por la muestra en condiciones definidas con la luz dispersada por una suspensin
estndar de referencia bajo las mismas condiciones. Cuanto mayor sea la intensi-
dad de la luz dispersada, mayor ser la turbidez.
Se debe realizar la determinacin en el da en que se realiza el muestreo. De lo

contrario, almacenar la muestra hasta 24hs en la oscuridad.
5.1 Turbidmetro: es un nefelmetro con una fuente de luz para iluminar la mues-tra
y uno o ms detectores fotoelctricos con mecanismo de lectura para indi-car
la intensidad de la luz dispersada a 90 del camino de luz incidente.
5.2 Tubos para la muestra: de vidrio transparente y limpios.
5.3 Matraces aforados de 100 mL
5.4 Pipetas aforadas de 5 y 10 mL
5.5 Balanza analtica de 1 mg de precisin.

TURBIDEZ
6. REACTIVOS
6.1 Agua libre de turbidez: se obtiene pasando agua destilada a travs de un filtro
de membrana de dimetro de poro de 0.2 um. Para todas las soluciones utili-
zar agua libre de turbidez.
6.2 Solucin I:
disolver 1.00 g de sulfato de hidrazina en agua destilada y diluir a 100 mL en
matraz aforado. Preparar mensualmente.
6.3 Solucin II:

disolver 10.00 g de hexametilen- tetraamina en agua destilada y diluir a 100
mL en matraz aforado. Preparar mensualmente.
6.4 Suspensin stock de turbidez, 400 NTU:

en un matraz aforado de 100 mL mezclar 5.0 mL de solucin I con 5.0 mL de
solucin II. Dejar reposar 24 hs a 25 3C, luego enrasar y mezclar. Preparar
mensualmente.
6.5 Suspensin estndar de turbidez, 40 NTU:

diluir 10.0 mL de suspensin stock de turbidez en 100 mL con agua libre de
turbidez en matraz aforado. Preparar semanalmente.
7. PROCEDIMIENTO
a)Realizar la calibracin del equipo de acuerdo al manual de instrucciones.

Una vez calibrado con la solucin de 40 NTU, proceder a las lecturas de turbi-
dez de las diferentes muestras.
b)Si la turbidez de la muestra es mayor de 40 NTU diluir la muestra con agua

libre de turbidez hasta que la turbidez caiga entre 30 - 40 NTU.
Nota: al llenar los tubos con muestra y estndares dejar reposar suficiente tiempo para que escapen
las burbujas
La turbidez se informa en NTU (Unidades Nefelomtricas de Turbidez)

AV
Turbidez, NTU
T
TURBIDEZ
donde:
A : NTU de la muestra diluda
V : volumen del matraz de dilucin, mL
T : volumen de muestra tomado para diluir, mL
9. BIBLIOGRAFIA
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of

Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp 2-9 - 2-11.

SECCION II
METALES
SECCION II
II A) DETERMINACION DE METALES
Cod.
33011 Arsnico. Mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica por genera-
cin de hidruros.(HGAAS).
48001 Cadmio. Mtodo FLAAS*.
20003 Calcio. Mtodo FLAAS.
20109 Calcio. Mtodo titulomtrico con EDTA.
30004 Cinc. Mtodo FLAAS.
29006 Cobre. Mtodo FLAAS.
24002 Cromo total. Mtodo FLAAS.
12002 Magnesio. Mtodo FLAAS.
12101 Magnesio. Mtodo por clculo.
80013 Mercurio. Mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica por vapor
fro. CVAAS.
28001 Niquel. Mtodo FLAAS.
82001 Plomo. Mtodo FLAAS.
19001 Potasio. Mtodo FLAAS.
11003 Sodio. Mtodo FLAAS.
* FLAAS: Espectrofotometra de absorcin atmica por llama
II B) CONTROL DE CALIDAD
Cod.
IIB01 Determinacin del Lmite de Deteccin y Cuantificacin en Espectrofotometra de
Absorcin Atmica.

Cdigo 33011 ARSENICO
DETERMINACION DE ARSENICO TOTAL
Mtodo de Espectrofotometra de Absorcin Atmica por Generacin Contnua

de Hidruros
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar arsnico en aguas y efluentes indus-
triales en el rango de 0,001 a 0,050 mg/L *, es posible determinar mayores o meno-
res concentraciones por dilucin o concentracin de la muestra respectivamente.
*NOTA: Los extremos del rango de concentraciones pueden variar segn el equipo utilizado.
2. REFERENCIAS
2.1 Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin

en Espectrofotometra de Absorcin Atmica.
3. PRINCIPIO
La muestra es digerida para reducir la interferencia por materia orgnica y convertir

todo el metal a una forma libre determinable por Espectrofotometra de Absorcin
Atmica ( EAA ) a 193,7 nm.
El arsnico es medido previa conversin del mismo al hidruro voltil ( AsH 3 ) por
reduccin con borohidruro de sodio en solucin cida. Este hidruro es transportado
hacia una celda de cuarzo caliente donde es atomizado.
Si existe arsnico en estado de oxidacin V para generar el hidruro este debe prime-
ro reducirse al estado de oxidacin III, esto hace que la sensibilidad decrezca leve-
mente. Por esto previamente debe convertirse todo el arsnico presente al estado
de oxidacin III con ioduro de sodio o potasio.
El contenido de arsnico se determina mediante una curva de calibracin.
Para muestras de aguas con bajo contenido de slidos en suspensin con una turbi-
dez menor a 1 NTU no es necesario realizar la digestin (punto 7.1).
Recolectar en frasco de polietileno de alta densidad de 1L de capacidad de cierre

hermtico. Ajustar a pH<2 con cido ntrico (6.1). Analizar antes de 6 meses.

ARSENICO
0 EQUIPOS Y MATERIALES
0 Espectrofotmetro de absorcin atmica con generador contnuo de hidruros.

1 Plancha calefactora.
2 Balanza analtica de precisin 10 mg.
3 Balanza analtica de precisin 0,1 mg.
4 Pipetas aforadas de 5 - 100 mL.
5 Erlenmeyers de 100 - 125 mL.
6 Papel de filtro libre de ceniza.
7 Matraces aforados de 25 - 1000 mL.
NOTA: Todo el material de vidrio utilizado deber lavarse con detergente y agua y enjuagarse por
inmer-sin en una solucin de HNO 3 al 5% v/v durante toda la noche, o un enjuague nico con una
solucin de HNO3 al 20% v/v. Luego se enjuagan tres veces con agua destilada.
REACTIVOS
0 Acido ntrico ( HNO3) 65 %, d= 1,40 g/mL, ppa.

1 Acido clorhdrico (HCl) 37 %, ppa.
2 Acido sulfrico (H2SO4) 95-98 % w/V, ppa.
3 Solucin estndar de arsnico de 1000 mg/L:
Disolver 1,3200 g de xido de arsnico III (As 2O3) (ppa, para Absorcin Atmi-
ca) en 25 mL de solucin de hidrxido de potasio (KOH, ppa) 20% w/v. Neutra-
lizar con H2SO4 20% v/v. Diluir a 1L en matraz aforado, con H 2SO4 1%. Alma-
cenar en frasco de plstico. Es estable por 1 ao.
Pueden usarse soluciones estndar para Absorcin Atmica comerciales.
4 Solucin de borohidruro de sodio (NaBH 4) 0,4% * :

Disolver 2,5 g de hidrxido de sodio (NaOH ppa) y 2,0 g de NaBH 4 (ppa para-
Absorcin Atmica) en 500 mL de agua destilada. El reactivo pierde sensibili-
dad con el tiempo, prepararlo diariamente.
* NOTA: Preparar este reactivo a la concentracin indicada por el manual del generador de hidruros utilizado.
6.6 Solucin de cido clorhdrico (HCl) 5 M * :

Diluir 210 mL de HCl conc. (5.2.2) a 500 mL con agua destilada.
* NOTA: Preparar este reactivo a la concentracin indicada por el manual del generador de hidruros utilizado.
0 Solucin de ioduro de potasio

(KI) al 20%:
Disolver 20 g de KI (ppa) en 100 mL de agua destilada.
1 Agua destilada.

ARSENICO
23 PROCEDIMIENTO
0 Digestin de la muestra
0 Homogeneizar la muestra. Si se dispone de una estimacin del contenido

total de arsnico en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la
solucin final est en el rango de medida. La toma mnima a realizar ser de
5,00 mL, en el caso de muestras muy concentradas diluirlas luego de la diges-
tin. En el caso de estimar un contenido de arsnico menor a 0,001 mg/L, y de
ser necesario, concentrar la muestra durante la digestin.
Transferir la toma a un Erlenmeyer de 100 - 125 mL.
Paralelamente se realiza un blanco de digestin sustituyendo la muestra por
agua destilada.
NOTA: Si las caractersticas fsicas de la muestra son tales que no se puede realizar una toma
representa-tiva de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso.
0.0 Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se

obtenga una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra
precipitacin. Si es necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta ob-
tener una solucin clara. No permitir que la solucin se seque durante el ca-
lentamiento.
Puede quedar un pequeo precipitado no soluble en agua que es luego filtrado.
En caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla de
cidos (sulfrico y/o clorhdrico). En este caso la medida se realizar por
adiciones estndar.
0.1 Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro
lavan-do abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz
aforado.
Dejar enfriar a temperatura ambiente y llevar a volumen con agua destilada,
homogeneizar.
0.2 Agregar KI 20% (6.7) (antes de llevar a volumen en 7.1.c o a una

alcuota de la solucin obtenida en ese punto), tal que su concentracin final
sea del 1%, esperar 15 minutos antes de medir.
0 Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,001 y 0,050 mg/L de arsnico a partir de

la solucin 6.4, con el agregado de HNO 3 tal que su concentracin final sea
el1%. Agregar tambin KI 20% (6.7) tal que su concentracin final sea del 1%,
esperar 15 minutos antes de medir.

ARSENICO
7.3 Determinacin directa
a) Parmetros instrumentales:
Lmpara de ctodo hueco o de descarga sin electrodo de
arsnico Longitud de onda: 193,7 nm
Magnitud medida: concentracin, altura de pico o rea de pico (depende del
equipo usado)
23 Realizar la curva de calibracin con los estndares de 0,001 a 0,050 mg/L.
24Medir las muestras y blancos.
5888 Determinacin por adiciones estndar
5888 Parmetros instrumentales:

arsnico Longitud de onda: 193,7 nm
equipo usado)
5888 Realizar una medida aproximada del contenido de arsnico en la muestra

(x).
5889 Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en

matraces aforados.En el matraz A aforar con agua destilada. Realizar en los 3
matraces-restantes adiciones de solucin estndar de arsnico tal que la
concentracin en el matraz B sea el doble que la concentracin en A; en el
matraz C el triple y en el D cuatro veces la concentracin de A. Tener en cuenta
que la suma del contenido de arsnico de la muestra ms la adicin no supere
los 0,050 mg/L.
CALCULOS Y EXPRESION DE LOS RESULTADOS
Se determina los lmites de cuantificacin (LC) y deteccin (LDM). Ver Norma

tcnica BII01.
Se determina la concentracin de arsnico en la digestin de la muestra y

blan-co (CM y CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de
calibra-cin obtenida en 7.1, o a partir de la curva de adicin obtenida en 7.2.
Si CM es menor a LDM informar:

No detectable, Lmite de deteccin = LDM * FC, expresado en mg/L.
Donde FC es el factor de concentracin de la muestra, obtenido segn:
FC = V / T
ARSENICO
Donde:
V = volumen del matraz aforado usado para recoger el filtrado de digestin en
mL.
T = toma de la muestra en mL.
Si CM es mayor a LDM pero menor a LC informar:

Se detecta, As (mg/L) < LC * FC.
Donde FC es el factor de concentracin de la muestra, obtenido como en 8.3.
Si CM es mayor a LC informar el valor obtenido segn:
As (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de As en la digestin de la muestra en mg/L
FDM = factor de dilucin de la muestra
C B = concentracin de As en la digestin del blanco en mg/L
FDB = factor de dilucin del blanco.
FC = factor de concentracin de la muestra, obtenido como en 8.3
9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1 -AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examina-

tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp 3.9. 3.12

Cdigo 48001 CADMIO
DETERMINACION DE CADMIO TOTAL
Mtodo de Espectrofotometra de Absorcin Atmica por Llama
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar cadmio en aguas y efluentes indus-
triales en el rango de 0,025 a 3 mg/L *, es posible determinar mayores o menores
concentraciones por dilucin o concentracin de la muestra respectivamente.
REFERENCIAS
Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de

cuantificacin en Espectrofotometra de Absorcin Atmica.
PRINCIPIO

Atmica ( EAA ) con llama a 228,8 nm. El contenido de cadmio se determina me-
diante una curva de calibracin.
Para muestras de agua con bajo contenido de slido en suspensin con una
turbidez menor a 1 NTU no es necesario realizar la digestin (punto 7.1).

EQUIPOS Y MATERIALES
Espectrofotmetro de absorcin atmica con llama.

Plancha calefactora.
Balanza analtica de precisin 10 mg.
Balanza analtica de precisin 0,1 mg.
Pipetas aforadas de 5 - 100 mL.
Erlenmeyers de 100 - 125 mL.

CADMIO
Papel de filtro libre de ceniza.

Matraces aforados de 25 - 1000 mL.
REACTIVOS
Acido ntrico ( HNO3) 65 %, d= 1,40 g/mL, ppa.

Acido clorhdrico (HCl) 37 %, ppa.
HCl (1+1): Diluir HCl (6.2) con igual cantidad de agua destilada.
Acido sulfrico (H2SO4) 95-98 % w/V, ppa.
Solucin estndar de cadmio de 1000 mg/L:
Disolver 1,0000 g de cadmio metlico (ppa) en el mnimo volumen de HCl
(1+1) (6.3). Diluir a 1 L en matraz aforado, con HCl 1% v/v. Almacenar en
frasco de plstico. Es estable por 1 ao.
Agua destilada.
PROCEDIMIENTO
Digestin de la muestra
Homogeneizar la muestra. Si se dispone de una estimacin del contenido

total de cadmio en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la
tin. En el caso de estimar un contenido de cadmio menor a 0,025 mg/L, y de
agua destilada.
b) Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se

tener una solucin clara. No permitir que la solucin se seque durante el ca-
lentamiento.

CADMIO

adiciones estndar.
Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro lavan-do
abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz aforado.
homogeneizar.
Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,025 y 3,0 mg/L de cadmio a partir de la

solucin 6.5, con el agregado de HNO3 tal que su concentracin final sea del 1%.
Determinacin directa
Parmetros instrumentales:
cadmio Longitud de onda: 228,8 nm
Correccin de fondo: lmpara de deuterio
Combustible: acetileno
Oxidante: aire
Tipo de llama: oxidante
Realizar la curva de calibracin con los estndares de 0,025 a 3 mg/L.
Medir las muestras y blancos.
Determinacin por adiciones estndar
cadmio Longitud de onda: 228,8 nm
Oxidante: aire
Realizar una medida aproximada del contenido de cadmio en la muestra (x).
Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces

aforados:A, B, C y D. En el matraz A aforar con agua destilada. Realizar en los 3
matraces restantes adiciones de solucin estndar de cadmio tal que la con-
centracin en el matraz B sea el doble que la concentracin en A; en el matraz C
el triple y en el D cuatro veces la concentracin de A.. Tener en cuenta que la

CADMIO
suma del contenido de cadmio de la muestra ms la adicin no supere los 3

mg/L.
Se determina los lmites de cuantificacin (LC) y deteccin (LDM). Ver

Norma tcnica BII01.
Se determina la concentracin de cadmio en la digestin de la muestra y blan-

co (CM y CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibra-
cin obtenida en 7.1, o a partir de la curva de adicin obtenida en 7.2.

FC = V / T
Donde:
V = volumen del matraz aforado usado para recoger el filtrado de digestin
en mL.

Se detecta, Cd (mg/L) < LC * FC.
Cd (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de Cd en la digestin de la muestra en mg/L
C B = concentracin de Cd en la digestin del blanco en mg/L
1 - AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examina-


Cdigo 20003 CALCIO
DETERMINACION DE CALCIO TOTAL
1.OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar calcio en aguas y efluentes industria-
les en el rango de 0,1 a 20,0 mg/L *, es posible determinar mayores o menores con-
centraciones por dilucin o concentracin de la muestra respectivamente.
REFERENCIAS
Determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin en

Espectrofotometra de Absorcin Atmica. Cdigo IIB01.
PRINCIPIO

El contenido de calcio se determina mediante una curva de calibracin.
Para muestras de agua con bajo contenido de slidos en suspensin con una turbi-
4. INTERFERENCIAS
La sensibilidad del calcio se ve disminuda por la presencia de elementos que pue-

dan formar oxisales estables como fsforo, aluminio. Para disminuir este efecto se
agrega solucin de lantano al 0,5%.


CALCIO

REACTIVOS
Solucin estndar de calcio de 1000 mg/L:

agregar a 2,4980g de carbonato de calcio (CaCO 3, ppa para Absorcin Atmi-
ca, secado a 180_C durante 1 hora) 100 mL de agua destilada, agregar gota a
gota el mnimo volumen de HCl (aprox. 20 mL) hasta completa disolucin del
carbonato. Diluir a 1L en matraz aforado, con agua destilada. Almacenar en
Solucin de xido de lantano 50000 mg/L (La 2O3, ppa):

Disolver 58,65 g de La2O3 en 250 mL de HCl. Agregar el cido lentamente
hasta que el material es disuelto y diluir a 1L con agua destilada.
Agua destilada.
PROCEDIMIENTO

total de calcio en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la

CALCIO

tin. En el caso de estimar un contenido de calcio menor a 0,1 mg/L, y de ser
necesario, concentrar la muestra durante la digestin.
agua destilada.
NOTA : Si las caractersticas fsicas de la muestra son tales que no se puede realizar una toma
represen-tativa de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso.
Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-

tenga una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra pre-
cipitacin. Si es necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta
obtener una solucin clara. No permitir que la solucin se seque durante el
calenta-miento.
Puede quedar un pequeo precipitado no soluble en agua que es luego
filtrado. En caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla
de cidos (clorhdrico, NO sulfrico). En este caso la medida se realizar por
adiciones estndar.
Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro

lavando abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz
aforado. Dejar enfriar a temperatura ambiente y llevar a volumen con agua
destilada, homogeneizar.
Agregar solucin de xido de lantano (7.4) (antes de llevar a volumen en

8.1.c o a una alcuota de la solucin obtenida en ese punto), tal que su con-
centracin final sea del 0,5%.
Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,1 y 20,0 mg/L de calcio a partir de la so-
lucin 7.3, con el agregado de HNO3 tal que su concentracin final sea
del1%.Agregar tambin solucin de xido de lantano 5% (7.4) tal que su con-
centracin final sea del 0,5%.
Lmpara de ctodo hueco de calcio
Longitud de onda: 422,8 nm
Oxidante: aire

CALCIO
Realizar la curva de calibracin con los estndares de 0,1 a 20,0 mg/L.
Lmpara de ctodo hueco de calcio
Oxidante: aire
Realizar una medida aproximada del contenido de calcio en la muestra (x).

aforados: A, B, C y D. Agregar a cada una solucin de xido de lantano (7.5)
tal que su concentracin final sea del 0,5%. En el matraz A aforar con agua
destilada. Realizar en los 3 matraces restantes adiciones de solucin estndar-
de calcio tal que la concentracin en el matraz B sea el doble que la
concentra-cin en A; en el matraz C el triple y en el D cuatro veces la
concentracin de A. Tener en cuenta que la suma del contenido de calcio de la
muestra ms la adicin no supere los 20,0 mg/L.

Norma tcnica BII01.
Se determina la concentracin de calcio en la digestin de la muestra y blanco

(CM y CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibracin
obtenida en 8.1, o a partir de la curva de adicin obtenida en 8.2.
Donde FC es el factor de concentracin de la muestra, obtenido

segn: FC = V / T
Donde:
mL. T = toma de la muestra en mL.

CALCIO
9.4 Si CM es mayor a LDM pero menor a LC informar:
Se detecta, Ca (mg/L) < LC * FC.
9.5 Si CM es mayor a LC informar el valor obtenido segn:
Ca (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de Ca en la digestin de la muestra en mg/L
C B = concentracin de Ca en la digestin del blanco en mg/L
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS


Cdigo 20109 CALCIO
DETERMINACION DE CALCIO
Mtodo titulomtrico con EDTA
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de in calcio en aguas natu-

rales y tratadas. Tambin se emplea para determinar la dureza del agua correspon-
diente a los iones calcio.
Los iones calcio y magnesio forman complejos estables con etilendiaminotetra-

aceta-to disdico. Si el pH es suficientemente alto (12 13) como para que el
magnesio precipite como hidrxido, el calcio puede ser determinado directamente.
El punto final de la titulacin es detectado por el indicador Murexida, el que vira de
rosado a prpura en el punto final.
INTERFERENCIAS
En muestras que contienen fsforo en concentraciones mayores a 50 mg/L,

no se puede usar este mtodo para la determinacin de calcio.
MUESTREO Y PRESERVACION DE LA MUESTRA
Recolectar la muestra en recipiente de plstico o vidrio. Acidificar con HNO 3 hasta

pH < 2. La muestra puede ser almacenada hasta 6 meses.
MATERIALES
Matraz erlenmeyer de 250 mL
Buretas de 25 mL
Pipetas aforadas de 10 mL
Pipetas graduadas de 1 mL
Matraz aforado de 1000 mL

CALCIO
REACTIVOS
Hidrxido de sodio 10 N.
Reactivo indicador Negro de Eriocromo-T (NET):

mezclar 0.5 g de NET con 100 g de NaCl. Pulverizar en mortero.
Reactivo indicador Murexida:

mezclar 200 mg de murexida con 100 g de NaCl y pulverizar la mezcla en
mortero.
Solucin titulante de EDTA 0.01M:

disolver 3.723 g de etilendiaminotetra-acetato disdico dihidratado en agua
des-tilada y diluir a 1000 mL. Guardar en botella de plstico. Titular contra
solucin patrn de calcio.
Solucin Buffer:
disolver 1.179 g de etilendiaminotetra-acetato disdico dihidratado y 780 mg
de MgSO4.7H2O o 644 mg de MgCl2.6H2O en 50 mL de agua destilada. Agre-
gar a esta solucin 16.9 g de cloruro de amonio (NH 4Cl) y 143 mL de hidrxi-do
de amonio NH4OH concentrado. Mezclar y diluir a 250 mL con agua desti-lada.
Guardar en botella de plstico.
Solucin estndar de calcio:

pesar 1.000 g de CaCO3 anhidro seco (estndar primario) en un matraz erlen-
meyer de 500 mL. Colocar un embudo en el matraz y agregar lentamente solu-
cin de HCl 6N hasta que todo el carbonato de calcio se halla disuelto. Agre-
gar 200 mL de agua destilada y hervir 5 minutos para eliminar completamente
el CO2. Enfriar, agregar unas gotas de rojo de metilo y ajustar al color interme-
dio naranja agregando solucin 3N de NH4OH o HCl 6N. Transferir cuantitati-
vamente y enrasar a 1000 mL con agua destilada.
PROCEDIMIENTO
Titulacin de la solucin de EDTA
a)Tomar 10.0 mL de solucin estndar de calcio y diluir a 50 mL en un matraz

erlenmeyer.
Agregar 1.0 mL de solucin buffer. El pH deber estar entre 10.0 0.1, en
caso contrario descartar la solucin buffer.
Agregar una punta de esptula del reactivo indicador negro de eriocromo-

T. Titular con solucin de EDTA lentamente y agitando continuamente hasta
viraje del color de la solucin de rosado a azul. Completar la titulacin dentro
de los cinco minutos siguientes al agregado de la solucin buffer.
CALCIO
Titulacin de la muestra:
Tomar en un erlenmeyer de 250 mL un volumen de muestra que requiera un

gasto de EDTA menor a 15 mL. Diluir la muestra a 50 mL con agua destilada.
Agregar 1 o 2 mL de solucin NaOH 10 N. El pH deber estar entre 12 y 13.
Agregar una punta de esptula de reactivo indicador de murexida.

Titular con solucin de EDTA inmediatamente despus de agregar el reactivo
indicador. Agregar el EDTA lentamente y agitando continuamente hasta viraje
de color de la solucin de rosado a prpura. Luego del punto final agregar 1 o
2 gotas ms de la solucin de EDTA para verificar que el color no cambia.
P x V1
G1
donde:
T : mg de CaCO3 equivalentes a 1000 mL de EDTA
P : mg CaCO3 /L de la solucin estndar de calcio
V1: volumen de solucin estndar de calcio tomados en la titulacin de la
solucin de EDTA, (10.0 mL)
G1: gasto de la solucin de EDTA consumidos en su titulacin
Dureza de calcio, mg CaCO3/L T x G2

V
2
Calcio, mg/L TxG
V2 x 2.5
donde:
V2: volumen de muestra tomados para la determinacin, mL
G2: gasto de solucin de EDTA consumidos en la titulacin de la muestra, mL
9. BIBLIOGRAFIA

3-57 - 3-58.

Cdigo 30004 CINC
DETERMINACION DE CINC TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar cinc en aguas y efluentes industriales
en el rango de 0,01 a 1,5 mg/L *, es posible determinar mayores o menores concen-
traciones por dilucin o concentracin de la muestra respectivamente.
REFERENCIAS
Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de

cuantificacin en Espectrofotometra de Absorcin Atmica.
PRINCIPIO

Atmica ( EAA ) con llama a 213,9 nm. El contenido de cinc se determina mediante
una curva de calibracin.



CINC

inmer-sin en una solucin de HNO3 al 5% v/v durante toda la noche, o un enjuague nico con una
REACTIVOS

HCl (1+1) Diluir HCl (6.2) con igual cantidad de agua destilada.
Solucin estndar de cinc de 1000 mg/L:
Disolver 1,0000 g de cinc metlico (ppa) en el mnimo volumen de HCl (1+1)
(6.3). Diluir a 1 L en matraz aforado, con HCl 1% v/v. Almacenar en frasco de
plstico. Es estable por 1 ao.
Agua destilada.
PROCEDIMIENTO
a) Homogeneizar la muestra. Si se dispone de una estimacin del contenido

total de cinc en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la
5,00 mL, en el caso de muestras muy concentradas diluirlas luego de la
digestin. En el caso de estimar un contenido de cinc menor a 0,01 mg/L, y de
agua destilada.
repre-sentativa de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso.
b) Agregar 5 mL de HNO 3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-tenga

una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra preci-pitacin. Si
es necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta obtener una solucin
clara. No permitir que la solucin se seque durante el calentamiento. Puede quedar
un pequeo precipitado no soluble en agua que es luego filtrado.

CINC
En caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla de cidos
(sulfrico y/o clorhdrico). En este caso la medida se realizar por adiciones es-
tndar.
c) Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro lavan-
do abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz aforado.
homogeneizar.
7.2 Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,01 y 1,5 mg/L de cinc a partir de la solu-
cin 6.5, con el agregado de HNO3 tal que su concentracin final sea del 1%.
Lmpara de ctodo hueco de
cinc Longitud de onda: 213,9 nm
Oxidante: aire
Lmpara de ctodo hueco de cinc
Oxidante: aire
Realizar una medida aproximada del contenido de cinc en la muestra (x).
Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces afo-

rados: A, B, C y D. En el matraz A aforar con agua destilada. Realizar en los 3
matraces restantes adiciones de solucin estndar de cinc tal que la concentra-
cin en el matraz B sea el doble que la concentracin en A; en el matraz C el tri-
ple y en el D cuatro veces la concentracin de A.
Tener en cuenta que la suma del contenido de cinc de la muestra ms la adicin

CINC
no supere los 1,5 mg/L.

Norma tcnica BII01.
Se determina la concentracin de cinc en la digestin de la muestra y blanco


FC = V / T
Donde:
mL.

Se detecta, Zn (mg/L) < LC * FC.
Zn (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C
M concentracin de Zn en la digestin de la muestra en mg/L
FDM factor de dilucin de la muestra
CB concentracin de Zn en la digestin del blanco en mg/L
FD
FCB factor de dilucin del blanco.
factor de concentracin de la muestra, obtenido como en 8.3


Cdigo 29006 COBRE
DETERMINACION DE COBRE TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar cobre en aguas y efluentes industria-
les en el rango de 0,05 a 15 mg/L *, es posible determinar mayores o menores con-
*NOTA: Los extremos del rango de concentraciones pueden variar segn el equipo utilizado .
REFERENCIAS
Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin

en Espectroscopa de Absorcin Atmica.
PRINCIPIO

Atmica ( EAA ) con llama a 324,8 nm. El contenido de cobre se determina mediante
una curva de calibracin.



COBRE

REACTIVOS
HNO3 (1+1) Diluir HNO3 con igual volumen de agua destilada.
Solucin estndar de cobre de 1000 mg/L:

Disolver 1,0000 g de cobre metlico (ppa) en el mnimo volumen de HNO 3
(1+1) (6.2). Diluir a 1 L en matraz aforado con HNO 3 1% v/v. Almacenar en
Agua destilada.
PROCEDIMIENTO

total de cobre en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la
tin. En el caso de estimar un contenido de cobre menor a 0,05 mg/L, y de ser
aguadestilada.
representati-va de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso.

COBRE
Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se obtenga

una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra precipitacin. Si es
necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta obtener una solucin clara.
No permitir que la solucin se seque durante el calentamiento.
Puede quedar un pequeo precipitado no soluble en agua que es luego
filtrado. En caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla
de cidos (sulfrico y/o clorhdrico). En este caso la medida se realizar por
adiciones estndar.
Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro la-
vando abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz
Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar de 0,05 y 15,0 mg/L de cobre a partir de la solu-

Lmpara de ctodo hueco de cobre
Oxidante: aire
1 Realizar la curva de calibracin con los estndares de 0,05 a 15 mg/L.
2 Medir las muestras y blancos.
Lmpara de ctodo hueco de cobre
Oxidante: aire
Realizar una medida aproximada del contenido de cobre en la muestra (x).
Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces aforados:

A, B, C y D. En el matraz A aforar con agua destilada. Realizar en los 3 matraces
restantes adiciones de solucin estndar de cobre tal que la con-

COBRE
centracin en el matraz B sea el doble que la concentracin en A; en el matraz

C el triple y en el D cuatro veces la concentracin de A.
Tener en cuenta que la suma del contenido de cobre de la mues tra ms la adi-
cin no supere los 15 mg/L.
0 CALCULOS Y EXPRESION DE LOS RESULTADOS

tcnica BII01.
Se determina la concentracin de cobre en la digestin de la muestra y blanco (C M y

CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibracin obtenida
en 7.1, o a partir de la curva de adicin obtenida en 7.2.

FC = V / T
Donde:
en mL.
Si CM es mayor a LDM pero menor a LC informar: Se

detecta, Cu (mg/L) < LC * FC.
Cu (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
CM = concentracin de Cu en la digestin de la muestra en mg/L
CB = concentracin de Cu en la digestin del blanco en mg/L

Cdigo 24002 CROMO
DETERMINACION DE CROMO TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar cromo total en aguas y efluentes in-
dustriales en el rango de 0,25 a 10 mg/L *, es posible determinar mayores o menores
2. DEFINICIONES
Cromo total: es el contenido total de cromo en sus estados de oxidacin III y VI.
0 REFERENCIAS
Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin en

Espectrofotometra de Absorcin Atmica.
0 PRINCIPIO

Atmica ( EAA ) con llama a 357,9 nm. El contenido de cromo se determina median-
te una curva de calibracin.



CROMO

0 REACTIVOS
Solucin estndar de Cromo de 1000 mg/L:

Disolver 1,9230 g de xido de cromo VI (CrO 3, ppa para Absorcin Atmica) en
agua destilada y diluir a 1 L en matraz aforado, con HNO 3 1% v/v. Almace-nar
en frasco de plstico. Es estable por 1 ao.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO

total de cromo en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que
lasolucin final est en el rango de medida. La toma mnima a realizar ser de
tin. En el caso de estimar un contenido de cromo menor a 0,25 mg/L, y de ser
agua destilada.

CROMO
1 Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se

tener una solucin clara. No permitir que la solucin se seque durante el calen-
tamiento.
adiciones estndar.
2 Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro la-
Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar de 0,25 y 20,0 mg/L de cromo a partir de la so -

lucin 7.4, con el agregado de HNO3 tal que su concentracin final sea del 1%.
Lmpara de ctodo hueco de cromo
Oxidante: aire
Tipo de llama: reductora
Lmpara de ctodo hueco de cromo
Oxidante: aire
Tipo de llama: reductora
Realizar una medida aproximada del contenido de cromo en la muestra (x).

aforados:A, B, C y D. En el matraz A aforar con agua destilada. Realizar en los

CROMO
3 matraces restantes adiciones de solucin estndar de cromo tal que la con-

centracin en el matraz B sea el doble que la concentracin en A; en el matraz
C el triple y en el D cuatro veces la concentracin de A.
Tener en cuenta que la suma del contenido de cromo de lamuestra ms la adi-

tcnica BII01.
Se determina la concentracin de cromo en la digestin de la muestra y blanco (C M y

CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibracin obtenida
en 8.1, o a partir de la curva de adicin obtenida en 8.2.

FC = V / T
Donde:
en mL.

detecta, Cr total (mg/L) < LC * FC.
Cr total (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de Cr en la digestin de la muestra en mg/L
C B = concentracin de Cr en la digestin del blanco en mg/L
10.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Cdigo 12002 MAGNESIO
DETERMINACION DE MAGNESIO TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar magnesio en aguas y efluentes indus-
triales en el rango de 0,02 a 1,0 mg/L *, es posible determinar mayores o menores
0 REFERENCIAS
Norma tcnica N IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de cuantifica-cin

en Espectrofotometra de Absorcin Atmica.
0 PRINCIPIO

El contenido de magnesio se determina mediante una curva de calibracin.
4. INTERFERENCIAS
La sensibilidad del magnesio se ve disminuda por la presencia de elementos que

puedan formar oxisales estables como fsforo, aluminio. Para disminuir este efecto
se agrega solucin de lantano al 0,5%.


MAGNESIO

0 REACTIVOS
Acido ntrico ( HNO3) 65 %, d= 1,40 g/mL reactivo A.C.S.
Acido clorhdrico (HCl) 37 %, reactivo A.C.S.
0 Solucin estndar de magnesio de 1000 mg/L:

Agregar a 1,6580 g de xido de magnesio (MgO estndar primario, reactivo
A.C.S.) agua destilada para humedecer, agregar la mnima mnima cantidad de
HNO3 para disolver el xido. Diluir, en matraz aforado, a 1L con agua des-
tilada. Almacenar en frasco de plstico. Es estable por 1 ao.
Solucin de xido de lantano 50000 mg/L (La 2O3):

Disolver 58,65 g de La2O3 en 250 mL de HCl. Agregar el cido lentamente
hasta disolucin del material y diluir a 1000 mL con agua.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO

total de magnesio en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la
5,00 mL, en el caso de muestras muy concentradas diluirlas luego de la

MAGNESIO
digestin. En el caso de estimar un contenido de magnesio menor a 0,02 mg/L,

y de ser necesario, concentrar la muestra durante la digestin.
agua destilada.
NOTA: Si las caractersticas fsicas de la muestra son tales que no se puede realizar una
toma re presentativa de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso.
1 Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-

calenta-miento.
En caso de que la digestin con HNO3 no sea suficiente, usar mezcla de cidos
(clorhdrico, NO sulfrico). En este caso la medida se realizar por adiciones
estndar.
2 Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro

Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar de 0,02, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 y 1,0 mg/L de mag-
nesio a partir de la solucin 7.3, con el agregado de HNO 3 tal que su concen -
tracin final sea del 1%. Agregar tambin solucin de xido de lantano 5% (7.4)
tal que su concentracin final sea del 0,5%.
Lmpara de ctodo hueco de magnesio
Oxidante: aire

MAGNESIO
magnesio Longitud de onda: 285,2 nm
Oxidante: aire
1 Realizar una medida aproximada del contenido de magnesio en la muestra (x).
2 Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces

aforados: A, B, C y D. Agregar a cada una solucin de xido de lantano (7.4) tal
que su concentracin final sea del 0,5%. En el matraz A aforar con agua
destilada. Realizar en los 3 matraces restantes adiciones de solucin estndar
de magnesio tal que la concentracin en el matraz B sea el doble que la con-
centracin en A; en el matraz C el triple y en el D cuatro veces la concentracin
de A. Tener en cuenta que la suma del contenido de magnesio de la muestra
ms la adicin no supere los 1,0 mg/L.
Se determina los lmites de cuantificacin (LC) y deteccin (LDM) con estndares de

0,005 y 0,01 mg/L. Ver Norma tcnica BII01.
Se determina la concentracin de magnesio en la digestin de la muestra y blanco


FC = V / T
Donde:
V = volumen del matraz aforado usado para recoger el filtrado de digestin en mL.

Se detecta, Mg (mg/L) < LC * FC.

MAGNESIO
Mg (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de Mg en la digestin de la muestra en mg/L
C B = concentracin de Mg en la digestin del blanco en mg/L
10.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS


Cdigo 12101 MAGNESIO
DETERMINACION DE MAGNESIO
Mtodo por clculo
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de magnesio en aguas natu-

rales.
0 REFERENCIAS
Determinacin de dureza. Mtodo titulomtrico con EDTA. (Cod. 10603).
Determinacin de calcio. Mtodo titulomtrico con EDTA. (Cod. 20109).
0 PRINCIPIO
Se estima la concentracin de magnesio como la diferencia entre la dureza total y la

dureza de calcio, los que se determinan segn las referencias 2.1 y 2.2 respectiva-
mente.
Mg, mg/L = ( D - Ca ) 0.243

Dureza de Mg, mg CaCO3/L = (D - Ca)
donde:
D : dureza total expresada en mg CaCO3/L
Ca : concentracin de calcio expresada en mg CaCO 3/L
5. BIBLIOGRAFIA
1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination

of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp 3-74.

Cdigo 80013 MERCURIO
DETERMINACION DE MERCURIO TOTAL
Mtodo de Espectrofotometra de Absorcin Atmica por Vapor Fro
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar mercurio en aguas y efluentes indus-
triales en el rango de 0,0002 a 0,0050 mg/L *, es posible determinar mayores o me-
nores concentraciones realizando una toma mayor o menor de la muestra.
2. REFERENCIAS
2.1Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin en

Espectroscopa de Absorcin Atmica.
3. PRINCIPIO

El mercurio es medido previa conversin del mismo a su forma de metal libre (Hg 0)
por reduccin con cloruro estannoso en solucin cida. Este vapor (vapor fro) es
transportado hacia una celda de cuarzo donde es medido.
El contenido de mercurio se determina mediante una curva de calibracin.

hermtico. Ajustar a pH<2 con cido ntrico (6.1). Analizar antes de 28 das.
Espectrofotmetro de absorcin atmica con generador de vapor fro.

Bao de agua.

MERCURIO

solucin de HNO3 al 20% v/v. Luego se enjuagan tres veces con agua destilada. En lo posible usar
material exclusivo para la determinacin de mercurio.
0 REACTIVOS
Solucin de persulfato de potasio (K2S2O8) 5% w/v: Disolver 50

g de K2S2O8 (ppa) en 1 L de agua destilada.
Solucin de permanganato de potasio (KMnO 4) 5% w/v:

Disolver 50 g de KMnO4 (ppa) en 1 L de agua destilada.
Solucin estndar de mercurio de 1000 mg/L:

Disolver 1,3540 g de HgCl 2 (ppa para Absorcin Atmica) en agua. Diluir a 1L
en matrtaz aforado, con HNO3 1% v/v. Almacenar en frasco de plstico. Es
estable por 1 ao.
Solucin de cloruro de hidroxilamina (NH 2OH.HCl) 10% w/v:

Disolver 100 g de NH2OH.HCl (ppa) en 1 L de agua destilada.
Solucin de cloruro estannoso (SnCl2.2 H2O) 10 % * :

Disolver 20 g de SnCl2.2 H2O (ppa para determinacin de mercurio) en 40 mL
de HCl. Diluir, en erlenmeyer a 200 mL con agua destilada. El reactivo pierde
sensibilidad con el tiempo, prepararlo diariamente.
* NOTA: Preparar este reactivo a la concentracin indicada por el manual del generador de vapor fro usado.
6.9 Agua destilada.

MERCURIO
0 PROCEDIMIENTO
0 Homogeneizar la muestra. La toma a realizar depende del contenido estima-

do de mercurio, de la capacidad mxima del accesorio generador de vapor fro,
de la especificacin a cumplir por la muestra, y especialmente de la sensibilidad
del equipo.
Si se dispone de una estimacin del contenido total de mercurio en la muestra
realizar una toma con pipeta aforada tal que la solucin final est en el rango de
medida. Suponiendo que el volumen mximo que acepte el generador de vapor
fro sea de 300 mL, detecte 50 ng de Hg 0, y la especificacin sea de 0,0002
mg/L, tomar 250,0 mL de muestra. La toma mnima a realizar ser de 5,00 mL,
en el caso de muestras muy concentradas diluirlas luego de la digestin.
Transferir la toma a un Erlenmeyer de 500 mL.
Paralelamente se realiza un blanco de digestin sustituyendo la muestra
por agua destilada.
representati-va de la misma con material aforado, se realiza una toma en peso.
b) Por cada 100 mL de muestra agregar 1,5 mL de HNO 3, 1,5 mL de H2SO4, 5

mL de solucin de KMnO4 (6.5) o ms hasta que permanezca el color prpura
(no permitir que se decolore). Agregar 8 mL de solucin de persulfato de pota-
sio (6.4). Calentar en bao de agua a 95C durante 1 hora. Si es necesario
agregar ms solucin de KMnO4 (6.5).
Lavar el Erlenmeyer con agua, recoger el digerido en un vaso del generador

de vapor fro.
Agregar solucin de hidroxilamina al 10% (6.7) tal que desaparezca el color

prpura (agregar primero al blanco, luego agregar la misma cantidad a las
muestras).
Preparar soluciones estndar en los vasos del generador conteniendo 25, 50,
100 y 250 ng de mercurio agregar 250 mL de agua, 1,5 mL de HNO 3, 1,5 mL de
H2SO4, la necesaria de solucin de KMnO 4 (6.5) hasta permanencia de colo-
racin prpura durante 30 minutos y la misma cantidad de solucin de hidroxi-
lamina (6.7) que a las muestras.

MERCURIO
7.3 Determinacin directa
a) Parmetros instrumentales:
mercurio Longitud de onda: 253,7 nm
equipo usado)
0 Realizar la curva de calibracin con los estndares de 25 a 250 ng de mer-

curio. Agregar solucin de cloruro estannoso 10% (6.8), segn indique el ma-
nual del generador de vapor fro usado, y realizar la medida.
Se determina los lmites de cuantificacin (LC) y deteccin (LDM) (ambos en ng)

. Ver Norma tcnica BII01.
Se determina el contenido en ng de mercurio en la digestin de la muestra y blanco

(QM y QB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibracin
obtenida en 7.2.
Si QM es menor a LDM informar:

No detectable, Lmite de deteccin = LDM / TM, expresado en ng/mL.
Donde:
TM = Toma de muestra en mL
Si QM es mayor a LDM pero menor a LC informar: Se

detecta, Hg (ng/mL) < LC / TM.
Donde:
TM = Toma de muestra en mL
Si QM es mayor a LC informar el valor obtenido segn:
Hg (ng/mL) = ( QM / TM - QB / TB )
Donde:
QM = Contenido de Hg en la muestra digerida en ng
QB = Contenido de Hg en el blanco digerido en ng
T
M = Toma de muestra en mL
TB = Toma del blanco en mL

MERCURIO


Cdigo 28001 NIQUEL
DETERMINACION DE NIQUEL TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar nquel en aguas y efluentes industria-
les en el rango de 0,2 a 20 mg/L *, es posible determinar mayores o menores con-
2. REFERENCIAS
2.1Norma tcnica IIB01: Determinacin del lmite de deteccin y de cuantificacin en

3. PRINCIPIO

Atmica ( EAA ) con llama a 232,0 nm. El contenido de nquel se determina median-


Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 28001- 1

NIQUEL

0 REACTIVOS

HNO3 (1+1) Diluir HNO3 con igual volumen de agua destilada.
Solucin estndar de nquel de 1000 mg/L:
Disolver 1,0000 g de nquel metlico (ppa) en el mnimo volumen de HNO 3 (1+1)
(6.2). Diluir a 1 L en matraz aforado, con HNO 3 1% v/v. Almacenar en frasco de
plstico. Es estable por 1 ao.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO
0 Homogeneizar la muestra. Si se dispone de una estimacin del contenido to-

tal de nquel en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la solu-
cin final est en el rango de medida. La toma mnima a realizar ser de 5,00
mL, en el caso de muestras muy concentradas diluirlas luego de la digestin. En
el caso de estimar un contenido de nquel menor a 0,2 mg/L, y de ser necesario,
concentrar la muestra durante la digestin.
agua destilada.
repre-sentativa de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso.

NIQUEL
1 Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-tenga

una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra preci-pitacin. Si
es necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta obtener una solucin
clara. No permitir que la solucin se seque durante el calentamiento.
Puede quedar un pequeo precipitado no soluble en agua que es luego filtrado. En
caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla de cidos (sulfrico
y/o clorhdrico). En este caso la medida se realizar por adiciones estndar.
2 Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro lavan-
do abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz aforado.
homogeneizar.
Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,2 y 20,0 mg/L de nquel a partir de la solu-
Lmpara de ctodo hueco de nquel
Oxidante: aire
Lmpara de ctodo hueco de nquel
Oxidante: aire
Realizar una medida aproximada del contenido de nquel en la muestra (x).

aforados:A, B, C y D. En el matraz A aforar con agua destilada. Realizar en los

NIQUEL
3 matraces restantes adiciones de solucin estndar de niquel tal que la concen-

tracin en el matraz B sea el doble que la concentracin en A; en el matraz C el
triple y en el D cuatro veces la concentracin de A. Tener en cuenta que la suma del
contenido de nquel de la muestra ms la adicin no supere los 20 mg/L.

tcnica BII01.
Se determina la concentracin de nquel en la digestin de la muestra y blanco
FC = V / T
Donde:
mL. T = toma de la muestra en mL.
detecta, Ni (mg/L) < LC * FC.
Ni (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
CM concentracin de Ni en la digestin de la muestra en mg/L

CB concentracin de Ni en la digestin del blanco en mg/L
FD


Cdigo 82001 PLOMO
DETERMINACION DE PLOMO TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar plomo en aguas y efluentes industria-
0 REFERENCIAS

0 PRINCIPIO

Atmica ( EAA ) con llama a 217,0 nm. El contenido de plomo se determina median-



PLOMO

0 REACTIVOS

Solucin estndar de plomo de 1000 mg/L:
Disolver 1,5980 g de nitrato de plomo (ppa para Absorcin Atmica) en HNO 3
1% v/v y diluir a 1 L en matra aforado, con HNO 3 1% v/v. Almacenar en frasco
de plstico. Es estable por 1 ao.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO

total de plomo en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la
tin. En el caso de estimar un contenido de plomo menor a 0,3 mg/L, y de ser
agua destilada.
repre-sentativa de la misma con pipeta aforada, se realiza una toma en peso .
b) Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-

tenga una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra preci-
pitacin. Si es necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta obtener

PLOMO
una solucin clara. No permitir que la solucin se seque durante el

calentamiento. Puede quedar un pequeo precipitado no soluble en agua que
es luego filtrado. En caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar
mezcla de cidos (clorhdrico, NO sulfrico). En este caso la medida se realizar
por adiciones estndar.
1 Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro

Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,3 y 25,0 mg/L de plomo a partir de la solucin
6.3, con el agregado de HNO3 tal que su concentracin final sea del 1%.
plomo Longitud de onda: 217,0 nm
Oxidante: aire
plomo Longitud de onda: 217,0 nm
Oxidante: aire
Tener en cuenta que la suma del contenido de plomo de la muestra ms la adi

PLOMO
8. CALCULOS Y EXPRESION DE LOS RESULTADOS
8.1 Se determina los lmites de cuantificacin (LC) y deteccin (LDM). Ver

Norma tcnica BII01.
8.2 Se determina la concentracin de plomo en la digestin de la muestra y blanco

8.3 Si CM es menor a LDM informar:

FC = V / T
Donde:
mL.
1 = toma de la muestra en mL.

detecta, Pb (mg/L) < LC * FC.
Pb (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C
M concentracin de Pb en la digestin de la muestra en mg/L
CB concentracin de Pb en la digestin del blanco en mg/L
FD

Cdigo 19001 POT ASIO
DETERMINACION DE POTASIO TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar potasio en aguas y efluentes indus-
triales en el rango de 0,05 a 4,0 mg/L *, es posible determinar mayores o menores
0 REFERENCIAS

0 PRINCIPIO

El contenido de potasio se determina mediante una curva de calibracin.
4. INTERFERENCIAS
Para evitar la ionizacin se agrega como buffer de ionizacin, solucin de cloruro de

cesio al 1%.


POTASIO

0 REACTIVOS
Acido ntrico (HNO3) 65 %, d= 1,40 g/mL, ppa.
Solucin estndar de potasio de 1000 mg/L:

Disolver 1,9070 g de cloruro de potasio (KCl, ppa para Absorcin Atmica,
secdado a 110_C) en agua. Diluir a 1L en matraz aforado, con HNO 3 1% v/v.
Almacenar en frasco de plstico. Es estable por 1 ao.
Solucin de cloruro de cesio 10 % (CsCl):

Disolver 12,67 g de CsCl ( ppa para Absorcin Atmica) en 1L de agua.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO

total de potasio en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la

POTASIO

tin. En el caso de estimar un contenido de potasio menor a 0,05 mg/L, y de
agua destilada.
b) Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-

tenga una ebullicin leve, concentrar al menor volumen tal que no ocurra preci-
pitacin. Si es necesario agregar ms cido y seguir calentando hasta obtener
una solucin clara. No permitir que la solucin se seque durante el calenta-
miento.
En caso de que la digestin con HNO 3 no sea suficiente, usar mezcla de cidos
(clorhdrico y/o sulfrico). En este caso la medida se realizar por adiciones
estndar.
Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro lavan-do
abundantemente el precipitado, y recoger el filtrado en un matraz aforado.
homogeneizar.
Agregar solucin de cloruro de cesio (6.5) (antes de llevar a volumen en 7.1.c o

a una alcuota de la solucin obtenida en ese punto), tal que su concen-tracin
final sea del 1%.
Preparar soluciones estndar entre 0,05 y 4,0 mg/L de potasio a partir de la

solucin 7.4, con el agregado de HNO 3 tal que su concentracin final sea del
1%. Agregar tambin solucin de cloruro de cesio 10% (7.5) tal que su concen-
tracin final sea del 1%.
potasio Longitud de onda: 769,9 nm
Oxidante: aire

POTASIO
Lmpara de ctodo hueco de potasio
Oxidante: aire
0 Realizar una medida aproximada del contenido de potasio en la muestra (x).
1 Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces afo-

rados.: A, B, C y D. Agregar a cada una solucin de cloruro de cesio (6.5) tal
que su concentracin final sea del 1%. En el matraz A aforar con agua destila-
da. Realizar en los 3 matraces restantes adiciones de solucin estndar de po-
tasio tal que la concentracin en el matraz B sea el doble que la concentracin
en A; en el matraz C el triple y en el D cuatro veces la concentracin de A.Tener
en cuenta que la suma del contenido de potasio de la muestra ms laadicin
no supere los 4,0 mg/L.

tcnica BII01.
Se determina la concentracin de potasio en la digestin de la muestra y blan-co

(CM y CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibra-cin

FC = V / T
Donde:
en mL.

detecta, K (mg/L) < LC * FC.

POTASIO
K (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de K en la digestin de la muestra en mg/L
C B = concentracin de K en la digestin del blanco en mg/L


Cdigo 11003 SODIO
DETERMINACION DE SODIO TOTAL
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar sodio en aguas y efluentes industria-
0 REFERENCIAS

0 PRINCIPIO

El contenido de sodio se determina mediante una curva de calibracin.
4. INTERFERENCIAS
Para evitar la ionizacin se agrega como buffer de ionizacin, solucin de cloruro de

cesio al 1%.


SODIO

0 REACTIVOS
Solucin estndar de sodio de 1000 mg/L:

Disolver 2,5420 g de cloruro de sodio (NaCl, ppa para Absorcin Atmica, se-
cado a 140_C durante 1 hora) en agua. Diluir a 1L en matraz aforado, con
HNO3 1% v/v. Almacenar en frasco de plstico. Es estable por 1 ao.
Solucin de cloruro de cesio 10% (CsCl):

Disolver 12,67 g de CsCl (ppa para Absorcin Atmica) en 1L de agua.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO

total de sodio en la muestra realizar una toma con pipeta aforada tal que la

SODIO

tin. En el caso de estimar un contenido de sodio menor a 0,02 mg/L, y de ser
agua destilada.
1 Agregar 5 mL de HNO3. Calentar en una plancha calefactora tal que se ob-

calenta-miento.
cidos (clorhdrico y/o sulfrico). En este caso la medida se realizar por
adiciones estndar.
2 Lavar el Erlenmeyer con agua, si es necesario filtrar con papel de filtro la-
3 Agregar solucin de cloruro de cesio (7.5) (antes de llevar a volumen en

8.1.c o a una alcuota de la solucin obtenida en ese punto), tal que su
concen-tracin final sea del 1%.
Curva de calibracin
Preparar soluciones estndar entre 0,02 y 1,0 mg/L de sodio a partir de la

solucin 7.4, con el agregado de HNO3 tal que su concentracin final sea del
1%. Agregar tambin solucin de cloruro de cesio 10% (7.5) tal que su
concentracin final sea del 1%.
Lmpara de ctodo hueco de sodio
Oxidante: aire
b) Realizar la curva de calibracin con los estndares de 0,02 a 1,0 mg/L.

SODIO
sodio Longitud de onda: 589,0 nm
Oxidante: aire
1 Realizar una medida aproximada del contenido de sodio en la muestra (x).
2 Tomar 4 alcuotas iguales de la muestra con pipeta aforada en matraces

aforados: A, B, C y D. Agregar a cada una solucin de cloruro de cesio (7.5) tal
que su concentracin final sea del 1%.En el matraz A aforar con agua desti-
lada. Realizar en los 3 matraces restantes adiciones de solucin estndar de
sodio tal que la concentracin en el matraz B sea el doble que la concentracin
en A; en el matraz C el triple y en el D cuatro veces la concentracin de A.
Tener en cuenta que la suma del contenido de sodio de la muestra ms la adi-
cin no supere los 1,0 mg/L.

tcnica BIIO1.
Se determina la concentracin de sodio en la digestin de la muestra y blanco (C M

y CB) o en una dilucin de los mismos a partir de la curva de calibracin

No detectable, Lmite de deteccin = LDM * FC.
FC = V / T
Donde:
V = volumen del matraz aforado usado para recoger el filtrado de digestin en mL.

detecta, Na (mg/L) < LC * FC.

SODIO
Na (mg/L) = ( CM * FDM - CB * FDB ) * FC
Donde :
C M = concentracin de Na en la digestin de la muestra en mg/L
C B = concentracin de Na en la digestin del blanco en mg/L


Cdigo IIBO1 LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION
DETERMINACION DEL LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION

EN ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se usa para determinar los lmites de deteccin y cuantifica-
cin en Espectrofotometra de Absorcin Atmica por llama, vapor fro y generador
de hidruros.
2. DEFINICIONES
Lmite de deteccin del mtodo (LDM): Es la menor concentracin del elemento en

la muestra sometida al mtodo total, que es posible diferenciar de un blanco de
mtodo. Blanco de mtodo: Es un blanco del procedimiento total, includo los pasos
de digestin. Lmite de deteccin instrumental (LDI): Es la menor concentracin del
elemento que es posible diferenciar del ruido del instrumento, sirve de gua para
determinar el LDM, como regla general, el LDM es 4 veces superior al LDI.
Lmite de cuantificacin (LC): Es la menor concentracin del elemento que es
posible cuantificar. Se asume como 5 veces el LDM.
0 PROCEDIMIENTO
Determinacin del Lmite de deteccin instrumental (LDI)
0 Se preparan 2 soluciones estndar de 2 concentraciones diferentes del ele-

mento de inters. El estndar de menor concentracin se prepara aproximada-
mente a una concentracin 5X del lmite de deteccin esperado (este depende de
las caractersticas del equipo figurando frecuentemente en el manual del uso del
mismo) y el segundo estndar se prepara al doble de concentracin (10X).
1 Se realizan 20 o ms lecturas de cada estndar leyendo un blanco (o sol-

vente) entre cada lectura de los estndares. La secuencia de lectura es blanco,
estndar de menor concentracin, blanco, estndar de mayor concentracin.
Repetir 20 veces la secuencia.
2 Promediar las 2 lecturas lecturas del blanco tomadas inmediatamente antes

y despus de cada estndar y restrselo a cada lectura del estndar.
3 Calcular la media y la desviacin estndar para el conjunto de lecturas co-

rregidas del estndar mayor. Hacer lo mismo para el conjunto de lecturas co-
rregidas del estndar menor.
4 Si la relacin entre las medias no corresponde a la relacin de concentracio-

Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 IIB01 - 1
LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION
nes, dentro del error estadstico, descartar los datos.
f) Si los datos pasan el test de la relacin de las medias, calcular el lmite de

deteccin instrumental segn:
LDI = ( LD1 + LD2 ) / 2
Donde:
LD1 = (C1 2 1) / M1
LD2 = (C2 2 2) / M2
C1 : Concentracin del estndar 1

C2 : Concentracin del estndar 2
1 : Desviacin estndar de las lecturas del estndar 1
2 : Desviacin estndar de las lecturas del estndar 2
M1 : Media obtenida del estndar 1
M2 : Media obtenida del estndar 2
Determinacin del lmite de deteccin del mtodo (LDM)
0 Determinar la influencia de la matriz en la determinacin del analito. Para

esto medir la concentracin del analito en 2 diluciones diferentes de la muestra
(x y 10x). En el caso que la concentracin de analito sea muy pequea adicio-
narle, a una porcin de la muestra una cantidad de analito equivalente a por lo
menos 20-100 veces el LDI y diluirla 10 veces. Si la relacin de
concentraciones obtenidas es igual a la relacin de las diluciones (10), implica
que la matriz no afecta la medida y se puede usar el LDI calculado en 3.1
como una buena aproximacin al LDM.
1 Si la relacin de concentraciones obtenida en 3.2a no se corresponde a la

relacin de diluciones (10), proceder como en 3.1 realizando adiciones a la
muestra en vez de preparar estndares acuosos. Realizar los clculos de la
misma forma a la realizada en 3.1.
Determinacin del Lmite de Cuantificacin (LC)
Calcular el LC segn:
LC = 5 * LDM

IIBO1 - 2 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

SECCION III
CONSTITUYENTES INORGANICOS
NO-METALICOS
SECCION III
DETERMINACION DE CONSTITUYENTES INORGANICOS NO-METALICOS

Cod.
10112 Alcalinidad. Mtodo titulomtrico.
07506 Amonio. Mtodo electromtrico.
06602 Cianuro. Mtodo titulomtrico.
06606 Cianuro libre. Mtodo Colorimtrico.
06600 Cianuro total. Mtodo Colorimtrico.
17204 Cloruro. Mtodo argentomtrico.
07308 Nitrato. Mtodo de espectrofotometra ultravioleta.
14103 Silicato. Mtodo colorimtrico del molibdosilicato.
16302 Sulfato. Mtodo turbidimtrico.
16102 Sulfuro. Mtodo electromtrico.
16103 Sulfuro. Mtodo potenciomtrico.

Cdigo 10112 ALCALINIDAD
DETERMINACION DE ALCALINIDAD
Mtodo titulomtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de alcalinidad en aguas

natu-rales y tratadas.
2. DEFINICIONES
La alcalinidad de un agua es su capacidad para neutralizar un cido. La alcalinidad

de un agua natural o tratada se debe principalmente a los aniones bicarbonatos,
carbonatos e hidrxidos.
Alcalinidad a la fenolftalena es la correspondiente a los iones hidrxidos ms la

mitad de la concentracin de los iones carbonatos.
Alcalinidad total es la atribuible a los iones hidrxidos, carbonatos y bicarbonatos.
La alcalinidad se determina por titulacin con una solucin estndar de un cido

mineral fuerte a los puntos sucesivos de equivalencia del bicarbonato y el cido car-
bnico.
El indicador de fenolftalena permite cuantificar la Alcalinidad a la fenolftalena. Para

determinar la Alcalinidad total se emplea el indicador anaranjado de metilo.
Recolectar la muestra en recipientes de plstico de buen cierre. Mantener la

muestra refrigerada a 4C. Realizar la determinacin dentro de las 24 horas de
realizado el muestreo.
0 MATERIALES
Buretas 10 y 25 mL
Agitador magntico
Pipetas aforadas de 10, 20, 50 y 100 mL

ALCALINIDAD
5.4 Matraz erlenmeyer
0 REACTIVOS
Agua destilada libre de dixido de carbono:

debe usarse para la preparacin de todas las soluciones estndar y stock. Si
el agua destilada tiene un pH menor a 6.0, debe ser hervida por 15 minutos,
enfriada a temperatura ambiente y usada inmediatamente.
Solucin de carbonato de sodio 0.05 N:

secar 3 a 5 g de estndar primario Na 2CO3 a 250C durante 4 horas y enfriar
en desecador. Pesar 2.5 0.2 g con una presicin de 1 mg, transferir a ma-
traz aforado de 1 L y enrasar. No almacenar ms de una semana.
Solucin estndar de cido sulfrico 0.1N:

disolver 2.8 mL de cido sulfrico concentrado en 1 L de agua destilada.
Estan-darizar con 20.00 mL de carbonato de sodio 0.05 N con
aproximadamente 60 mL de agua.
Solucin estndar de cido sulfrico 0.02 N:

diluir 200 mL de cido sulfrico 0.1 N a 1 L. Estandarizar con 10.00 mL de
carbonato de sodio 0.05 N.
Indicador acuoso anaranjado de metilo 0.5 g/L.
Indicador de fenolftalena 5 g/L:

disolver 0.5 g de fenolftalena en 50 mL de etanol al 95% y aadir 50 mL de
agua.
0 PROCEDIMIENTO
Se recomienda que se usen volmenes de muestra que necesiten menos de 50 mL

de la solucin tituladora, pues se obtiene un punto final ms preciso. Para muestras
de alcalinidad menor a 20 mg/L titular con el cido sulfrico estndar de 0.02 N.
Alcalinidad total:
Se agrega 0.1 mL de indicador anaranjado de metilo a una muestra adecuada
(50, 100 mL) contenida en un matraz erlenmeyer de 250 mL. Titular con solu-
cin de cido sulfrico valorado 0.1 N hasta el viraje a color naranja salmn.
Alcalinidad a la fenolftalena:
Se agrega dos gotas del indicador de fenolftalena a una muestra de volumen
adecuado (50, 100 mL) contenida en un matraz erlenmeyer de 250 mL. Titular

ALCALINIDAD
con solucin de cido sulfrico valorado 0.1 N hasta viraje de color.
La normalidad del cido sulfrico estndar es:
AxB
N 53 x C
donde:
N = normalidad del cido sulfrico en eq/L.
A = g Na2CO3/L de la solucin de carbonato de sodio 0.05 N.
B = mL de solucin de carbonato de sodio tomados para la valoracin del
cido. C = mL de cido utilizados en su valoracin.
Alcalinidad, mg CaCO3 /L G x N x 50000

T
donde:
G = mL de cido sulfrico utilizados en la titulacin.
N = normalidad del cido sulfrico utilizado para la determinacin. T
= mL de muestra.
9. BIBLIOGRAFIA
1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standardd Methods for the

2-26 - 2-27.

Cdigo 07506 AMONIO
DETERMINACION DE AMONIO
Mtodo electromtrico
1. OJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para determinacin de amonio en agua potable,

aguas superficales, efluentes industriales y domsticos. Se pude determinar amonio
en concentraciones entre 0.06 a 1400 mg NH 3-N/L.
2. DEFINICION
Se considera amonio disuelto a la suma del amonaco disuelto ( NH 3(aq)) ms los

iones amonio (NH4+).
3. PRINCIPIO
El electrodo in selectivo de amonio esta constitudo por una membrana hidrofbica

permeable a los gases que separa la solucin problema de la solucin interna de
cloruro de amonio.
Los equilibrios conformados por amonio disuelto, amonaco disuelto y amonaco gas
se desplazan hacia la formacin de este ltimo con el aumento del pH a 11 con una
base fuerte. El amonaco acuoso difunde a travs de la membrana y cambia el pH
de la solucin interna. Este cambio se mide con un electrodo de pH.
4. INTERFERENCIAS
4.1 Altas concentraciones de iones disueltos, mercurio y plata afectan la medida, no

as el color ni la turbidez.
Recolectar en envases de vidrio o plstico de un litro de capacidad. Ajustar a pH < 2

con cido sulfrico o clorhdrico concentrado. Refrigerar a 4C. Analizar antes de la
24 hs de recolectada la muestra.

AMONIO
pH-metro con escala expandida en milivolts con una resolucin de 0,1 mV o un

analizador de in especfico.
Electrodo selectivo de amonio.
Agitador magntico trmicamente aislado.
Barras magnticas recubiertas de tefln.
0 REACTIVOS
Agua libre de amonaco ( destilada y desionizada ).
Hidrxido de sodio 10 M:
disolver 40 g de hidrxido de sodio (NaOH) en 100 mL de agua destilada.
Acido sulfrico o cido clorhdrico concentrado.
Solucin stock de amonio, 1.0 g N/L:

disolver 3.819 g de cloruro de amonio (NH 4Cl) anhidro, secado a 100C, en
agua, y diluir a 1000 mL en matraz aforado.
Solucin estndar de amonio, 10 mg N/L:

diluir 10.0 mL de la solucin stock de amonio a 1000 mL con agua.
NOTA: Todos los reactivos deben ser calidad puro para anlisis (ppa).
0 PROCEDIMIENTO
Curva de calibracin:
a)Preparar soluciones estndares de las siguientes concentraciones: 1000,

100, 10,1 y 0,1 mg N/L por dilucin de la solucin stock de amonio (7.4) y de la
solu-cin estndar de amonio (7.5), cuando corresponda.
b)Colocar 100 mL de cada solucin estndar en vasos de Bohemia de 150 mL.

Sumergir el electrodo en la solucin estndar de menor concentracin y mez-
clar mediante agitacin magntica. Controlar la velocidad de agitacin tal que
no se produzcan burbujas de aire que obstruyan la membrana del electrodo.
Trabajar con la misma velocidad de agitacin y a la misma temperatura duran-
te la calibracin y la medida de las muestras problema.

AMONIO
c)Agregar solucin de hidrxido de sodio 10 M para alcanzar un pH igual a 11,

generalmente un mL es suficiente.
Mantener el electrodo en solucin hasta obtener una lectura estable.
d)Graficar el logaritmo decimal de la concentracin de amonaco expresada

como nitrgeno (NH3-N) versus potencial registrado en mV. Si el electrodo
funciona bien la pendiente de la recta ser aproximadamente 59.
Precausiones:
Chequear el electrodo de acuerdo a las instrucciones del fabricante para asegurar un
buen funcionamiento del mismo.
No agregar hidrxido de sodio antes de sumergir el electrodo porque el amonaco se
puede perder al alcalinizar la solucin.
8.2 Medida:
Diluir la muestra, en caso de ser necesario, para tener una concentracin

de NH3 dentro del rango de la curva de calibracin.
Colocar 100 mL de muestra en un vaso de Bohemia y seguir los pasos descrip-
tos en el numeral 8.1 b) y c). Agregar 1 ml de hidrxido de sodio 10 M y anotar
el exceso necesario para obtener un pH de 11.
9. CALCULOS Y EXPRESION DE LOS RESULTADOS
Amonio , mg NH3-N/L = A x B x ( 101 + C) / 101
donde:
A = factor de dilucin de la muestra
B = concentracin de NH3-N leda de la curva de calibracin.
C = volmen en exceso de NaOH 10 M agregado, en mL.
10. BIBLIOGRAFIA
1- AMERICAN PUPLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the

Examina-tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 4-
81 - 4-82.
2- ORION RESEARCH INCORPORATED. Manual instructivo del electrodo selectivo

de amonio marca Orion modelo 95-12.

Cdigo 06602 CIANURO
DETERMINACION DE CIANURO
Mtodo Titulomtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica es aplicable para la determinacin de cianuro libre en aguas

y efluentes industriales para concentraciones mayores a 1 mg/L.
Se puede aplicar tanto para la determinacin de cianuro libre como total, para cia-
nuro total se debe realizar destilacin de la muestra previo a la determinacin segn
referencia 2.1. Si durante la destilacin la muestra se concentra hasta 10 veces, se
pueden determinar concentraciones desde 0.1 mg/L
2. REFERENCIAS
2.1 Normativa tcnica para la determinacin de Cianuro total (Cdigo 06600).
Recolectar la muestra en envase de vidrio, polietileno o polipropileno de 1L. Ajustar

a pH>12 inmediatamente luego de extrada la muestra. Refrigerar a 4C, mantener
en la oscuridad. Analizar lo antes posible.
4. PRINCIPIO
El in cianuro es titulado con una solucin estndar de nitrato de plata para formar
el complejo soluble Ag(CN)2-. Luego que todo el in cianuro ha sido complejeado, el
exceso de in plata es detectado por un indicador sensible a la plata, p-dimetilami-
no- benzalrhodanina.
5. MATERIALES
5.1 Bureta de 10 mL de capacidad.
5.2 Balanza analtica con una presicin de 0.1 mg.
5.3 Matraz erlenmeyer de 250 mL.

CIANURO
6. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser calidad puro para anlisis (ppa).
Solucin indicadora:
disolver 20 mg de p-dimetilaminobenzalrhodanina en 100 mL de acetona.
Solucin estndar de nitrato de plata, 0.0192 M:

secar 5 g de nitrato de plata a 150 C hasta peso constante 2. Pesar 3.2647 g
de nitrato de plata (AgNO3) y diluir en matraz aforado a 1L con agua destilada.
Almacenar en envase de vidrio color ambar. Esta solucin equivale a aproxi-
madamente 1000 mg/L de cianuro.
Hidrxido de sodio 0.04 M:

disolver 1.6 g de NaOH en 1L de agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO
0 Pipetear en un erlenmeyer de 250 mL un volumen de muestra tal que se

requieran entre 1 y 10 mL de la solucin estndar de nitrato plata (6.2). Diluir a
100 mL usando solucin de hidrxido de sodio 0.04 M. Agregar 0.5 mL de
solucin indicadora.
1 Titular con el estndar de nitrato de plata hasta que el color cambia de

amarillo a salmn. Titular un blanco conteniendo la misma cantidad de
hidrxido de sodio que la muestra.
1 CALCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS
(A - B) N 52036
mg CN-/L V
donde:
A = mL de estndar de nitrato de plata gastados en la titulacin de la muestra
B = mL de estndar de nitrato de plata gastados en la titulacin del blanco
N = normalidad de la solucin estndar de nitrato de plata
V = mL de muestra utilizados para la determinacin

CIANURO
9. BIBLIOGRAFIA

Examina-tion de Water and Wastewater. 18th edition. Washington. APHA, AWWA,
WPCF, 1992. pp 4-24.
2- Kolthoff,M ; Sandell,E ; Meehan,E. Anlisis Qumico Cuantitativo. Ed. Nigar. 6 ta

edicin, 1979. pp 823.

Cdigo 06600 CIANURO TOTAL
DETERMINACION DE CIANURO TOTAL
Destilacin y Mtodo Colorimtrico
1. OBJETIVO
Esta norma tcnica se utiliza para la determinacin de cianuro total en aguas y

efluen-tes industriales, en concentraciones mayores de 1 g/L.
2 REFERENCIAS
Normativa tcnica para determinacin de cianuro por titulometra con nitrato de

plata.(Cdigo 06602).
0 PRINCIPIO
El in cianuro (CN-) puede encontrarse en aguas como in libre o formando comple-

jos tanto orgnicos como inorgnicos de variada estabilidad. La determinacin de
cianuro total implica la destilacin previa de la muestra en medio cido para diso-
ciar estos complejos y eliminar posibles interferencias.
El cido cianhdrico, liberado de la muestra acidificada por destilacin a vaco, es

recogido en una solucin de hidrxido de sodio. El ion cianuro en el destilado alcali-
no, es convertido a cloruro de ciangeno y este compuesto en presencia de reactivo
c. barbitrico-pyridina desarrolla un color rosado que se determina colorimtrica-
mente.
4. INTERFERENCIAS
Las interferencias posibles son eliminadas o reducidas al mnimo con la destilacin.

a pH > 12 inmediatamente luego de extrada la muestra. Refrigerar a 4C, mante-
ner en la oscuridad. Analizar lo antes posible.

CIANURO TOTAL
Equipo de destilacin (Figura 1):

matraz de destilacin, refrigerante, tubo receptor de vapores cidos, trampa
de agua y trompa de vaco.
Manta elctrica.
Espectrofotmetro a la longitud de onda de 580 nm, con celdas de 1 cm de paso

ptico o filtrofotmetro provisto de un filtro rojo con el mximo de trans-
mitancia entre 570-580 nm y paso de luz de 1 cm
Pipetas graduadas de 5 mL.
Micropipetas de 10 a 100 L y de 100 a 1000 L.
Matraces aforados con tapn de 50 y 100 mL.
Probetas de 100-500 mL.
Refrigerante
Frasco de Tubo de
fondo redondo dispersin Vaco
1000 mL de gas
Frasco de
Manta de
38 mm x 200 mm succin
Tubo recolector
Calentamiento
Figura 1
CIANURO TOTAL
7. REACTIVOS
Todos los reactivos deben de ser calidad puro para anlisis (ppa).
Agua destilada libre de cianuro.
disolver 40 g de hidrxido de sodio en 1 L de agua.

diluir 20 mL de la solucin de hidrxido de sodio 1 M en 500 mL de agua.
Solucin de cloruro de magnesio:

disolver 510 g de cloruro de magnesio hexahidratado (MgCl 2.6H2O) en un
litro de agua.
Acido sulfrico (1+1):

diluir al medio cido sulfrico conc. ( 95-97% y d = 1.84 g/mL).
Carbonato de plomo (PbCO3) grado reactivo en polvo.
Acido sulfmico (NH2SO3H) grado reactivo en polvo.
Cloramina-T:
disolver 1,0 g de cloramina-T en 100 mL de agua.
Prepararla semanalmente y almacenar en el refrrigerador.
Solucin stock de cianuro 1000 mg/L:

disolver 1,6 g de NaOH y 1,88 g de NaCN en 1L de agua. Esta solucin se
valora semanalmente con nitrato de plata (ref. 2.1).
Solucin estndar de cianuro 10 mg/L:

diluir 100 veces la solucin stock con hidrxido de sodio 0.04 M.
Reactivo pyridna-cido barbitrico:

pesar 15 g de cido barbitrico en un erlenmeyer de 250 mL y agregar
suficien-te agua como para mojar el cido. Agregar 75 mL de pyridina y
mezclar. Agregar 15 mL de cido clorhdrico conc., mezclar y enfriar a
temperatura am-biente. Diluir con agua a 250 mL. Este reactivo es estable por
un mes, descar-tarlo si aparece precipitado.
Buffer de fosfato 1 M:
disolver 138 g de NaH2PO4.H2O en 1 L de agua. Refrigerar.

CIANURO TOTAL
0 PROCEDIMIENTO
Destilacin:
0 Mezclar adecuadamente la muestra. Tomar 500 mL de muestra o una

alcua-to de muestra, tal que el contenido de CN en la solucin final est en el
rango de la curva de calibracin. La toma se coloca en el matraz de destilacin
y se diluye con agua a aproximadamente 500 mL.
1 Agregar 40 mL de NaOH 1M en el tubo de recoleccin de gas. Si se sabe

que se genera cido sulfhdrico desde el matrz de destilacin, agregar 50 mg
de carbonato de plomo en este tubo para precipitar el sulfuro.
2 Armar el equipo de destilacin segn figura 1, conectar el agua para refrige-

rar y la bomba de vaco tal que ingrese 2 burbujas de aire/seg en el matrz del
destilador.
3 Agregar 2g de cido sulfmico en el matraz a travs del tubo de entrada de

aire. Y por medio de este mismo tubo adicionar 50 mL de cido sulfrico (1+1).
Enjuagar el tubo con agua destilada, y permitir la entrada de aire por 3 min.
para mezclar. Adicionar 20 mL del catalizador cloruro de magnesio por el tubo
de entrada de agua, y enjuaguar las paredes del tubo con agua.
4 Calentar hasta ebullicin y reflujar por 1 h. Luego dejar enfriar 15 min.

Mantener siempre el burbujeo inicial de aire.
Diluir el destilado a 50 mL, en matraz aforado. La muestra est lista para deter-
minar el contenido de cianuro total.
0 En matraces aforados de 50 mL pipetear 30, 75, 100, 250 y 500 L de la

solucin estndar de cianuro (7.10), con la micropipeta correspondiente, para
obtener 0.3; 0.75; 1.0; 2.5 y 5.0 g de cianuro en 50 mL. Adicionar 20 mL de
hidrxido de sodio 0.04 M.
1 Pipetear 4 mL del buffer de fosfato y mezclar. Pipetear 2.0 mL de cloramina-

T, mezclar y esperar 1 min. Agregar 5.0 mL del reactivo c. barbitrico-pyridina
(7.11). Aforar con agua. Preparar un blanco de reactivos.
Proseguir con la medida como se indica en el numeral 8.3.c).
NOTA: Preparar la curva de calibracin todos los das porque el reactivo de pyridina-barbitrico se va
oxidando.

CIANURO TOTAL
Determinacin:
0 Pipetear en un matraz aforado de 50 mL una alcuota del destilado tal que la

concentracin final est en el rango de medida (T 2). Si T2 es menor de 20 mL
diluir a aproximadamente 20 mL con hidrxido de sodio 0.04 M.
1 Continuar con el desarrollo de color como en el numeral 8.2.b. Corroborar

que luego del agregado del buffer el pH est entre 5 y 6. En caso que sea
mayor agregar ms buffer o neutralizar la alcuata de la muestra con un cido
inmediatamente antes del agregado del buffer.
2 Medir la absorbancia a 580 nm, de los stndares y de la muestra, contra el

blanco de reactivos, a los 10-12 minutos de agregado el reactivo c.
barbitrico-pyridina.
De la curva de Absorbancia vs g de cianuro, determinar los g de cianuro en la

alcuota ensayada.
CN- (mg/L) A 50
T1 T2
Donde:
A = g de cianuro en la alcuota ensayada determinados de la curva de ab-
sorbancia vs g de cianuro
T1 = volumen de muestra destilada en mL
T2 = alcuota del destilado en que se hace la determinacin en mL
10. BIBLIOGRAFIA

WPCF, 1992. pp 4-24 - 4-26.

Cdigo 06606 CIANURO LIBRE
DETERMINACION DE CIANURO LIBRE
Mtodo Colorimtrico
1. OBJETIVO
Esta norma tcnica se utiliza para la determinacin de cianuro libre en aguas y

efluentes industriales, en concentraciones mayores a 0.01 mg/L.
2. REFERENCIAS
2.1 Normativa tcnica para determinacin de cianuro por titulometra con nitrato
de plata. (Cdigo 06602).
3. PRINCIPIO
El in cianuro libre es convertido a cloruro de ciangeno y este compuesto en pre-

sencia de reactivo c. barbitrico-pyridina desarrolla un color rosado que se
determi-na colorimtricamente.
4. INTERFERENCIAS
4.1 Formaldehdo en concentraciones mayores de 0.5 mg/L.
4.2 Sulfocianuro (SCN-) reacciona con cloramina-T, creando una interferencia posi-
tiva. Para verificar la presencia de sulfocianuro se enmascara al in cianuro
con formaldehdo.
4.3 El in sulfuro afecta negativamente la colorimetra.

6.1 Espectrofotmetro a longitud de onda de 580 nm con celdas de 1 cm de paso

CIANURO LIBRE
ptico o filtrofotmetro provisto de un filtro rojo con el mximo de transmitancia

entre 570-580 nm y paso de luz de 1 cm.
0 REACTIVOS
Hidrxido de sodio 40 g/L :

disolver 20 g de NaOH en 500 mL de agua.

diluir 20 mL de la solucin de hidrxido de sodio 40 g/L en 500 mL de agua.
Cloramina-T:
disolver 1.0 g de cloramina-T en 100 mL de agua. Prepararla semanalmente y
almacenar en el refrigerador.

disolver 1.6 g de NaOH y 1.88 g de cianuro de sodio (NaCN) en 1L de agua.
Esta solucin se valora semanalmente con nitrato de plata (ref. 2.1).

Reactivo pyridina-cido barbitrico:

pesar 15 g de c. barbitrico en un erlenmeyer de 250 mL y agregar suficiente
agua como para mojar el cido. Agregar 75 mL de pyridina y mezclar. Agregar
15 mL de cido clorhdrico conc., mezclar y enfriar a temperatura ambiente.
Diluir con agua a 250 mL. Este reactivo es estable por un mes, descartarlo si
aparece precipitado.
Buffer de fosfato 1M:


CIANURO LIBRE
0 PROCEDIMIENTO
a)En matraces aforados de 50 mL pipetear 30, 75, 100, 250 y 500 L de la

solu-cin estndar de cianuro (7.5), con la micropipeta correspondiente, para
obte-ner 0.3; 0.75; 1.0; 2.5 y 5.0 g de cianuro en 50 mL. Adicionar 20 mL de
b)Pipetear 4 mL del buffer de fosfato y mezclar. Pipetear 2.0 mL de cloramina-

T, mezclar y esperar 1 min. Agregar 5.0 mL del reactivo c. barbitrico-pyridina.
Aforar con agua. Preparar un blanco de reactivos.
oxidando.
8.2 Determinacin:
a)Pipetear en un matraz aforado de 50 mL una alcuota de la muestra tal que

la concentracin est en el rango de medida (T 2). Si T2 es menor a 20 mL,
b)Continuar con el desarrollo de color como en el numeral 8.1.b). Corroborar

mayor agregar ms buffer o neutralizar la alcuota de la muestra con un cido
mineral inmediatamente antes del agregado del buffer.
c)Medir la absorbancia a 580 nm, de los stndares y de la muestra, contra el

blanco de reactivos, a los 10-12 minutos de agregado el reactivo c. barbitri-
co-pyridina.

alcuota ensayada.
A
CN-, (mg/L) = T
donde:
sorbancia vs g de cianuro.
T = volumen de muestra ensayada en mL.

CIANURO LIBRE
10. BIBLIOGRAFIA

WPCF, 1992. pp 4-24 - 4-26.

Cdigo 06600 CIANURO TOTAL
DETERMINACION DE CIANURO TOTAL
Destilacin y Mtodo Colorimtrico
1. OBJETIVO
Esta norma tcnica se utiliza para la determinacin de cianuro total en aguas y

efluen-tes industriales, en concentraciones mayores de 1 g/L.
0 REFERENCIAS
Normativa tcnica para determinacin de cianuro por titulometra con nitrato de

plata.(Cdigo 06602).
0 PRINCIPIO
El in cianuro (CN-) puede encontrarse en aguas como in libre o formando com-

plejos tanto orgnicos como inorgnicos de variada estabilidad. La determinacin
de cianuro total implica la destilacin previa de la muestra en medio cido para
disociar estos complejos y eliminar posibles interferencias.
El cido cianhdrico, liberado de la muestra acidificada por destilacin a vaco, es

recogido en una solucin de hidrxido de sodio. El ion cianuro en el destilado alcali-
no, es convertido a cloruro de ciangeno y este compuesto en presencia de reactivo
c. barbitrico-pyridina desarrolla un color rosado que se determina colorimtrica-
mente.
4. INTERFERENCIAS
Las interferencias posibles son eliminadas o reducidas al mnimo con la destilacin.


CIANURO TOTAL
Equipo de destilacin (Figura 1):

matraz de destilacin, refrigerante, tubo receptor de vapores cidos, trampa
de agua y trompa de vaco.
Manta elctrica.
Espectrofotmetro a la longitud de onda de 580 nm, con celdas de 1 cm de paso

ptico o filtrofotmetro provisto de un filtro rojo con el mximo de trans-
mitancia entre 570-580 nm y paso de luz de 1 cm
Probetas de 100-500 mL.
Refrigerante
Frasco de Tubo de
fondo redondo dispersin Vaco
1000 mL de gas
Frasco de
Manta de
38 mm x 200 mm succin
Tubo recolector
Calentamiento
Figura 1
CIANURO TOTAL
7. REACTIVOS
Todos los reactivos deben de ser calidad puro para anlisis (ppa).
disolver 40 g de hidrxido de sodio en 1 L de agua.

diluir 20 mL de la solucin de hidrxido de sodio 1 M en 500 mL de agua.
Solucin de cloruro de magnesio:

disolver 510 g de cloruro de magnesio hexahidratado (MgCl 2.6H2O) en un litro
de agua.
Acido sulfrico (1+1):

diluir al medio cido sulfrico conc. ( 95-97% y d = 1.84 g/mL).
Carbonato de plomo (PbCO3) grado reactivo en polvo.
Acido sulfmico (NH2SO3H) grado reactivo en polvo.
Cloramina-T:
disolver 1,0 g de cloramina-T en 100 mL de agua.
Prepararla semanalmente y almacenar en el refrrigerador.

disolver 1,6 g de NaOH y 2,51 g de NaCN en 1L de agua. Esta solucin se
valora semanalmente con nitrato de plata (ref. 2.1).

Reactivo pyridna-cido barbitrico:

pesar 15 g de cido barbitrico en un erlenmeyer de 250 mL y agregar sufi-
ciente agua como para mojar el cido. Agregar 75 mL de pyridina y mezclar.
Agregar 15 mL de cido clorhdrico conc., mezclar y enfriar a temperatura am-
biente. Diluir con agua a 250 mL. Este reactivo es estable por un mes, descar-
tarlo si aparece precipitado.
Buffer de fosfato 1 M:

CIANURO TOTAL
0 PROCEDIMIENTO
Destilacin:
0 Mezclar adecuadamente la muestra. Tomar 500 mL de muestra o una al-

cuato de muestra, tal que el contenido de CN en la solucin final est en el
rango de la curva de calibracin. La toma se coloca en el matraz de destilacin
y se diluye con agua a aproximadamente 500 mL.
1 Agregar 40 mL de NaOH 1M en el tubo de recoleccin de gas. Si se sabe

que se genera cido sulfhdrico desde el matrz de destilacin, agregar 50 mg
de carbonato de plomo en este tubo para precipitar el sulfuro.
2 Armar el equipo de destilacin segn figura 1, conectar el agua para refrige-

rar y la bomba de vaco tal que ingrese 2 burbujas de aire/seg en el matrz del
destilador.
3 Agregar 2g de cido sulfmico en el matraz a travs del tubo de entrada de

aire. Y por medio de este mismo tubo adicionar 50 mL de cido sulfrico (1+1).
Enjuagar el tubo con agua destilada, y permitir la entrada de aire por 3 min.
para mezclar. Adicionar 20 mL del catalizador cloruro de magnesio por el tubo
de entrada de agua, y enjuaguar las paredes del tubo con agua.
4 Calentar hasta ebullicin y reflujar por 1 h. Luego dejar enfriar 15 min.

Mantener siempre el burbujeo inicial de aire.
Diluir el destilado a 50 mL, en matraz aforado. La muestra est lista para de-
terminar el contenido de cianuro total.
0 En matraces aforados de 50 mL pipetear 30, 75, 100, 250 y 500 L de la

solucin estndar de cianuro (7.10), con la micropipeta correspondiente, para
obtener 0.3; 0.75; 1.0; 2.5 y 5.0 g de cianuro en 50 mL. Adicionar 20 mL de
1 Pipetear 4 mL del buffer de fosfato y mezclar. Pipetear 2.0 mL de cloramina-

T, mezclar y esperar 1 min. Agregar 5.0 mL del reactivo c. barbitrico-pyridina
(7.11). Aforar con agua. Preparar un blanco de reactivos.
oxidando.

CIANURO TOTAL
Determinacin:
0 Pipetear en un matraz aforado de 50 mL una alcuota del destilado tal que la

concentracin final est en el rango de medida (T 2). Si T2 es menor de 20 mL
1 Continuar con el desarrollo de color como en el numeral 8.2.b. Corroborar

mayor agregar ms buffer o neutralizar la alcuata de la muestra con un cido
inmediatamente antes del agregado del buffer.
2 Medir la absorbancia a 580 nm, de los stndares y de la muestra, contra el

blanco de reactivos, a los 10-12 minutos de agregado el reactivo c.
barbitrico-pyridina.

alcuota ensayada.
CN- (mg/L) A 50
T1 T2
Donde:
sorbancia vs g de cianuro
T1 = volumen de muestra destilada en mL
T2 = alcuota del destilado en que se hace la determinacin en mL
10. BIBLIOGRAFIA

WPCF, 1992. pp 4-24 - 4-26.

Cdigo 17204 CLORURO
DETRMINACION DE CLORUROS
Mtodo argentomtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin del in cloruro en aguas lim-
pias que contengan concentraciones de cloruro entre 1.5 y 100 mg/L. Se podrn
determinar concentraciones mayores por dilucin de muestra.
El cloruro se determina en una solucin neutra o ligeramente alcalina por titulacin

con nitrato de plata estndar, usando cromato de potasio como indicador del punto
final. El cloruro de plata es cuantitativamente precipitado antes de que sea formado
el cromato de plata de color rojo.
3. INTERFERENCIAS
Sustancias en cantidades normalmente encontradas en aguas no interfieren.
3.1 Los iones bromuros, ioduros y cianuros son medidos como equivalentes de la
concentracin de cloruros.
3.2 Los iones sulfuros, tiosulfatos y sulfitos afectan la determinacin pero pueden
ser eliminados por tratamiento con perxido.
3.3 Ortofosfato en concentraciones mayores a 25 mg/L, produce precipitados de

fosfato de plata.
3.4 Hierro en concentraciones mayores a 10 mg/L, enmascara el punto final de la

titulacin.
Recolectar la muestra en frascos de plstico o vidrio. No es necesario el agregado

de preservante.

CLORURO
2 MATERIALES
Buretas de 2, 10 y 25 mL
Erlenmeyer de 250 mL
Pipetas graduadas de 1 y 5 mL
0 REACTIVOS
Solucin estndar de nitrato de plata 0.0141N:

disolver 2.395 g de nitrato de plata (AgNO3) en agua destilada y diluir a 1000
mL. Guardar en frasco color ambar y estandarizar contra la solucin de cloruro
de sodio (6.2).
Solucin estndar de cloruro de sodio 0.0141 N:

secar aproximadamente entre 1 y 2 g de cloruro sodio (NaCl) a 140C. Pesar
exactamente 824.0 mg de NaCl, disolver en agua destilada y diluir en matraz
aforado de 1000 mL.
Reactivo indicador de cromato de potasio:

disolver 50 g de cromato de potasio en agua destilada. Agregar solucin de
nitrato de plata, gota a gota hasta producir un ligero precipitado rojo de cro-
mato de plata. Dejar reposar durante 12 hs, filtrar y diluir a 1000 mL con agua
destilada.
Suspensin de hidrxido de aluminio:

disolver 125 g de sulfato de aluminio y potasio dodecahidratado
(AlK(SO4)2.12H2O) en 1 L de agua destilada. Calentar a 60C y agregar agitan
do 55 mL de hidrxido de amonio concentrado (NH 4OH). Dejar reposar 1 hora,
transferir a un vaso grande, y lavar el precipitado a travs de adiciones sucesi-
vas, mezclando y decantando, hasta que el agua de lavado se encuentre libre
de cloruros. Recin preparada la suspensin ocupa un volumen de aproxima-
damente 1 L.
Reactivo indicador de fenolftalena:

solucin alcohlica al 5%.
Solucin de hidrxido de sodio 1N.
Solucin de cido sulfrico 1N.
Perxido de hidrgeno al 30%.

CLORURO
0 PROCEDIMIENTO
Titulacin de la solucin estndar de nitrato de plata
a)Tomar en un erlenmeyer de 250 mL, 20 mL de la solucin estndar de cloru-

ro de sodio (6.2). Diluir a 100 mL. Agregar 1 mL de solucin indicadora. Valo-
rar la solucin de nitrato de plata hasta un punto final de color amarillo-rosa-
do. Valorar diariamente.
Determinacin
a)Tomar en un erlenmeyer de 250 mL, 100 mL de muestra o una alcuota dilu

da a 100 mL.
Si la muestra es altamente coloreada, agregar 3 mL de suspensin de hidrxi-

do de aluminio, mezclar, sedimentar y filtrar.
Si existe presencia de sulfuro, sulfito o tiosulfato, agregar 1 mL de perxido de
hidrgeno y calentar por un minuto.
Ajustar la muestra a pH entre 7 y 10 con cido sulfrico o hidrxido de sodio.
b)Agregar 1 mL de solucin indicadora. Titular con solucin estndar de nitrato

de plata (6.1), hasta color amarillo-rosado como punto final.
Titular siempre un blanco de agua destilada, en las mismas condiciones.
PxV
0 xG
donde:
N : normalidad del nitrato de plata en eq/L.
P : masa de NaCl pesado para la preparacin de la solucin estndar de
cloruro de sodio, g.
V : volumen de la solucin estndar de NaCl tomado para la valoracin de la
solucin de nitrato de plata, 20 mL.
G : gasto de nitrato de plata en su valoracin, mL.
Cloruro, mg/L (A - B) x N x 35450

V
donde:
A : gasto de titulante en la valoracin de la muestra, mL.
B : gasto de titulante por el blanco, mL.
V: volumen de muestra tomado para el ensayo, mL.

CLORURO
9. BIBLIOGRAFIA

4-49 - 4-50.

Cdigo 07308 NITRATO
DETERMINACION DE NITRATOS
Mtodo de espectrofotometra ultravioleta
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para una estimacin rpida de la concentracin de

nitratos en muestras con bajos contenidos en materia orgnica, como en aguas na-
turales no contaminadas y en agua potable.
2. PRINCIPIO
Los nitratos absorben la radiacin ultavioleta a la longitud de onda de 220 nm. La

materia orgnica tambin absorbe a 220 nm, por consiguiente es necesario realizar
la correccin de la absorbancia midiendo a 275 nm donde los nitratos no absorben.
La concentracin de nitrato se determina mediante una curva de calibracin.
1 INTERFERENCIAS
La materia orgnica disuelta, los surfactantes, nitritos, Cromo (+6) presentan

interferencias al mtodo.
Los aniones clorito y clorato afectan la medida, aunque no es comn que estn
presentes en aguas naturales.
0 MUESTREO Y PRESERVACION
Recolectar la muestra en envases de vidrio de un volumen mnimo de 200 mL, sin

cmara de aire y cerrar hermticamente.
Analizar tan pronto como sea posible.
Si no es posible analizar antes de 24 hs de recolectada la muestra ajustar a pH < 2

con cido clorhdrico o sulfrico y refrigerar a 4C.
NOTA: si la muestra se preserva con cido no se pueden determinar nitratos y nitritos como especies
indi-viduales.
Espectrofotmetro con lmpara UV, a longitud de onda de 220 nm y 275 nm.

NITRATO
Matraz aforado de 100 mL y 1L.
Pipeta aforada de 10 mL.
0 REACTIVOS
Acido clorhdrico 1 M.
Agua destilada.
Solucin stock de nitrato de potasio, 100 mg NO3-N/L: secar el

nitrato de potasio a 105C durante 24 hs. Disolver
0,7218 g en agua destilada. Agregar 2 mL de cloroformo para preservar la
solucin y diluir a 1000 mL en matraz aforado. Esta solucin es estable por
seis meses.
Solucin intermedia de nitrato de potasio, 10 mg NO 3-N/L:

diluir diez veces la solucin stock de nitrato con agua destilada y agregar 2 mL
de cloroformo. Esta solucin es estable por seis meses.
0 PROCEDIMIENTO
0 Preparar soluciones estndares de nitrato en un rango entre 0 y 7 mg N/L

por dilucin de la solucin intermedia de nitrato (6.4).
1 Medir la absorbancia de los estndares a 220 y 275 nm contra un blanco de

agua.
2 Graficar Absorbancia corregida vs concentracin de nitrato.

Verificar la curva peridicamente.
Determinacin:
La muestra debe ser clara, si es necesario filtrarla.

Medir la absorbancia de la muestra a 220 y 275 nm contra un blanco de agua.
La absorbancia corregida se calcula como:
Abs. nitratos = ( Abs220 - Abs275 )

NITRATO
Si el valor corregido es mayor al 10 % de la lectura realizada a 220 nm, este mtodo

no debe ser aplicado.
La concentracin de nitratos se obtiene con la curva de calibracin y el valor de

absorbancia corregido.
Los resultados se expresan como mg/L de nitrato como nitrgeno (mg NO 3-N /L).
9. BIBLIOGRAFIA
1 - AMERICAN PUPLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the

Examina-tion of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 4-
87 - 4-88.

Cdigo 14103 SILICATO
DETERMINACION DE SILICATOS
Mtodo colorimtrico del molibdosilicato
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de slice reactiva en aguas

relativamente puras, para concentraciones entre 1-30 mg SiO 2/L. Es posible
determi-nar niveles de slice mayores por dilucin de la muestra, y niveles menores
usando un paso de luz mayor.
2. DEFINICIONES
Se denomina slice reactiva a la slice que reacciona con molibdato para formar ci-
do molibdosilcico.
El molibdato de amonio a pH 1.2 aproximadamente, reacciona con slice y fosfatos

presentes formando heteropolicidos. El cido oxlico destruye el cido molibdofos-
frico pero no el cido molibdosilcico. La intensidad del color amarillo formado es
proporcional a la concentracin de slice reactiva al molibdato, la cual se mide en un
espectrofotmetro a la longitud de onda de 410 nm. La concentracin se deter-mina
mediante una curva de calibracin.
4. INTERFERENCIAS
4.1 En lo posible evitar el uso de materiales de vidrio para no contaminar con slice.
4.2 Interfieren en la medida grandes cantidades de hierro, color, turbidez, sulfuros.
Recolectar la muestra en recipientes de polietileno o polipropileno. Mantenerla refri-

gerada a 4C como mximo 28 das.
Espectrofotmetro o colormetro, longitud de onda 410 nm.

SILICATO
Pipetas graduadas de 1 mL
Matraz aforado de 100 y de 1000 mL
0 REACTIVOS
Guardar todos los reactivos en frascos de plstico.
Acido clorhdrico: solucin 1+1
Solucin de molibdato de amonio:

disolver 10 g de molibdato de amonio tetrahidratado en agua destilada con
agitacin y suave calentamiento, y diluir a 100 mL en matraz aforado. Filtrar si
es necesario. Ajustar a pH 7- 8 con hidrxido de amonio o con hidrxido de
sodio.
Solucin de cido oxlico:

disolver 7.5g de cido oxlico monohidratado en agua destilada y diluir a 100 mL.
Solucin stock de slice 1 g SiO2 /L:

disolver 4.73 g de metasilicato de sodio nanohidratado (Na 2SiO3.9H2O) en agua
destilada recin hervida y enfriada, y diluir a 1000 mL. Valorar segn el mtodo
gravimtrico 4500-Si C del Standart Methods for Examination of Water and
Was-tewater. Alternativamente se pueden utilizar una solucin standard
comercial de Silicio
Solucin estndar de slice 100 mg SiO 2/L:

diluir 10 mL de solucin stock a 100 mL en matraz aforado, con agua recin
hervida y enfriada.
0 PROCEDIMIENTO
0 Preparar por lo menos 5 estndares con concentraciones entre 0 y 30 mg/L,

por dilucin de la solucin estndar de slice (7.5).
1 Pipetear 25.0 mL de cada solucin estndar.
2 Agregar en rpida sucesin 0.5 mL de cido clorhdrico (1+1) y 1 mL de

molibdato de amonio. Mezclar por inversin por lo menos 6 veces y esperar 5 a
10 minutos. Agregar 1 mL de solucin de cido oxlico y agitar vigorosamente.
Leer la absorbancia a 410 nm, entre los 2 y 15 minutos del agregado del

SILICATO
oxlico.
0 Realizar la curva de absorbancia vs mg SiO2/L.
Determinacin:
0 Si la muestra lo requiere, filtrar para eliminar color o turbidez.
1 Pipetear 25.0 mL de muestra o una alcuota diluda a 25.0 mL.
2 Seguir los pasos descriptos en el numeral 8.1 c).
A x 1000
Slice, mg SiO2/L V
donde: A : mg de slice ledos en la curva

de calibracin.
V : mL de muestra utilizado en la determinacin.
Es conveniente intercalar un patrn con cada serie de muestras para verificar la

vali-dez de la curva de calibracin.
Los resultados se expresan en mg SiO2/L.
Lmite de deteccin del mtodo: 1 mg SiO2/L.
10. BIBLIOGRAFIA
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of

Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp 4-119 - 4-121.

Cdigo 16302 SULFATO
DETERMINACION DE SULFATOS
Mtodo turbidimtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de sulfato en aguas en

efluentes industriales y domsticos para concentraciones entre 1 y 40 mg/L.
El in sulfato es precipitado en medio actico con cloruro de bario para formar cris-
tales de sulfato de bario de tamao uniforme.
La absorcin de luz producida par la suspensin del sulfato de bario se mide con un
fotmetro y la concentracin de sulfato es determinada por comparacin con la lec-
tura realizada en una curva estndar.
3. INTERFERENCIAS
3.1 Material suspendido o color en grandes cantidades. Remover por filtracin. Si

las cantidades son bajas se puede corregir corriendo blancos en los cuales
no es agregado el cloruro de bario.
3.2 Slice en concentraciones mayores a 500 mg/L.
Recolectar la muestra en botellas de plstico o vidrio y mantenerla refrigerada a 4C

como mximo durante 28 das.
Fotmetro:
0 Turbidmetro.
1 Espectrofotmetro a longitud de onda de 420 nm con camino ptico 2.5 a
10 cm con la celda correspondiente.
2 Filtrofotmetro equipado con un filtro violeta con el mximo de transmitancia
cercano a los 420 mm. y paso de luz de 2.5 a 10 cm.
Agitador magntico: usar velocidad de agitacin constante.

SULFATO
Timer
Esptula
Matraz erlenmeyer de 500 mL
Pipetas aforadas de 20 y 100 mL
0 REACTIVOS
Solucin buffer A:
disolver 30 g de cloruro de magnesio (MgCl 2.6H2O), 5 g de acetato de sodio
(CH3COONa.3H2O), 1.0 g de nitrato de potasio (KNO 3) y 20 mL de cido ac-
tico (CH3COOH) (99%), en 500 mL de agua destilada. Llevar a 1000 mL.
6.2 Solucin buffer B (necesario cuando la concentracin de sulfato de la m u e s t

r a es menor a 10 mg/L):
disolver 30 g de cloruro de magnesio (MgCl 2.6H2O), 5 g de acetato de sodio
trihidratado (CH3COONa.3H2O), 1.0 g de nitrato de potasio (KNO3), 0.111 g de
sulfato de sodio (Na2SO4) y 20 mL de cido actico (CH 3COOH) (99%), en 500
mL de agua destilada. Llevar a 1000 mL.
Cristales de cloruro de bario (BaCl2), 20 a 30 mesh.
Solucin estndar de sulfato 100 mg/L:

disolver 0.1479 g sulfato de sodio anhidro (Na 2SO4), en agua destilada y llevar
a 1000 mL en matrz aforado.
0 PROCEDIMIENTO
0 Realizar una curva de calibracin con concentraciones que contengan entre

1 y 10 mg/L o entre 10 y 40 mg/L de sulfato a partir de la solucin estndar de
sulfato, para que la curva contenga la concentracin de la muestra.
1 Pipetear 100.0 mL de una solucin estndar en un matraz erlenmeyer de

250 mL. Agregar 20.0 mL de solucin buffer A para soluciones de concentra-
ciones mayores a 10 mg/L, o 20.0 mL de buffer B para concentraciones meno-
res a 10 mg/L.
2 Agregar una punta de esptula de cristales de BaCl 2 y agitar a velocidad

constante durante 60 2 seg.

SULFATO
Despus de finalizada la agitacin, colocar la solucin en la celda y medir la

absorbancia a los 5 0.5 min, a 420 nm.
3 Repetir los pasos descriptos en los numerales 7.1 b) y c) para los dems
estndares. Realizar un blanco de agua destilada y reactivos.
4 Graficar absorbancia vs mg SO4=/L.
Determinacin:
0 Tomar 100.0 mL de la muestra o una alcuota diluda a 100.0 mL en un

matraz erlenmeyer de 250 mL. Agregar 20.0 mL de solucin buffer A cuando se
estime que la concentracin de sulfato es mayor a 10 mg/L, o 20.0 mL de
solucin buffer B si se estima que la concentracin de sulfato es menor a 10
mg/L.
1 Seguir los pasos descriptos en el numeral 7.1 c).
2 Si la muestra posee color y/o turbidez medir la absorbancia de la muestra

(blanco de muestra).
Medida con buffer A
Sulfato, mg SO=/L = C x 1000

4 V
donde:
C : mg/L de la muestra, determinado con la curva de calibracin, usando
como dato de absorbancia: (Abs.muestra - Abs. blanco de muestra)
V : mL de muestra tomados para la determinacin
8.2 Medida con buffer B
Sulfato, mg SO =/L = (M - B) x 1000

4 V
donde:
M : mg/L aparente de la muestra leda de la curva de calibracin B
: mg/L del blanco ledo de la curva de calibracin
V : mL de muestra tomados para la determinacin

SULFATO
9. BIBLIOGRAFIA
1-AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination

of Water and Wastewater. 18th Edition. Washington , APHA, 1992. pp 4-134.

Cdigo 16103 SULFURO
DETERMINACION DE SULFURO
Mtodo Potenciomtrico
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para determinacin de sulfuro en efluentes indus-

triales, en concentraciones superiores a 10 mg/L.
2. PRINCIPIO
La determinacin incluye todo el sulfuro presente como cido sulfhdrico, sulfuro ci-
do y los sulfuros metlicos solubles. Los HS - y H2S son convertidos a S -2 con un
buffer antioxidante. El in sulfuro se determina por titulacin potenciomtrica con
una solu-cin estndar de perclorato de plomo, usando el electrodo de in selectivo
de plata/ sulfuro como indicador del punto final de la valoracin. La muestra no debe
conte-ner mercurio, por que el sulfuro de mercurio es muy insoluble.
Recolectar la muestra en recipientes de plstico e inmediatamente diluirla al medio

con buffer SAOB II. Evitar que quede cmara de aire en el recipiente. Proteger de la
luz. Analizar antes de 7 das.
Electrodo indicador de plata/sulfuro.
Electrodo de referencia plata/cloruro de plata.
Medidor de voltaje en mV.
Agitador magntico.
Vaso de bohemia de 150 mL.
Bureta de 10 mL.
Matraz aforado de 100-1000 mL.
Pipetas aforadas de 50 mL.

SULFURO
0 REACTIVOS
Agua destilada y desaireada:

el agua debe ser destilada y desaireada para evitar posibles oxidaciones del
in sulfuro. Para desairear calentar a ebullicin durante 15 minutos y luego
mantenerla en un recipiente tapado.
disolver 40 g de NaOH en 100 mL de agua destilada.
Buffer antioxidante de sulfuro (SAOB II):

a 600 mL de agua destilada y desaireada agregar 200 mL de NaOH 10 M, 35 g
de cido ascrbico (ppa) y 67 g de EDTA disdica (ppa), agitar para disolver y
llevar a 1L con agua destilada. Esta solucin ser incolora o poseer un leve
color amarillo plido-pardo, descartar cuando se torna marrn oscuro. Guar-
dar en frasco hermtico para evitar oxidaciones.
Solucin estndar I de perclorato de plomo Pb(ClO 4)2 0,100 M:

disolver 40,610 g de perclorato de plomo (ppa) en agua y llevar a 1000 mL en
matraz aforado.
Se puede comprar la solucin estandarizada.
Solucin estndar II de perclorato de plomo 0.010 M:

diluir 10 veces la solucin estndar I de perclorato de plomo.
0 PROCEDIMIENTO
0 Tomar con pipeta aforada 50 mL de muestra a titular en un vaso de bohe-

mia de 150 mL. Colocar el electrodo indicador y el de referencia en el vaso.
Agitar durante la valoracin.
1 Agregar el titulante (*) en incrementos de 0.5-1.0 mL. Medir el voltaje.

Cuando el cambio en el potencial por incremento comienza a aumentar pasar
a agre-gar el perclorato de plomo en incrementos de 0.1-0.2 mL y continuar
hasta 1.0 mL despus del punto final.
(*): Si la concentracin de sulfuro est entre 10 y 100 mg/L valorar con lasolucin
estndar II de perclorato de plomo (5.5). Si la concentracin de sulfuro es mayor de
100 mg/L valorar con la solucin estndar I de perclorato de plomo (5.4).
c) El punto final de la valoracin es cuando se observa un salto de potencial

entre 40 - 100 mV. Anotar el gasto en mL, de perclorato de plomo correspon-
diente a ese punto final, G.

SULFURO
La concentracin de sulfuro en la muestra corresponde a:
M G 32060
S-2, mg/L V
Donde:
M = molaridad de la solucin de perclorato de plomo titulante en mol/L
G = gasto de titulante en mL
V = volumen de muestra tomado para la determinacin en mL
Nota: Cuando la muestra se diluye a la mitad en el muestreo por el agregado del buffer SOABII se
debe multiplicar la concentracin por 2
8. BIBLOGRAFIA
1- ORION RESEARCH INCORPORATED. Instruction Manual sulfide ion electrode,

sil-ver ion electrode. 1980.

SECCION IV
CONSTITUYENTES ORGANICOS
SECCION IV
DETERMINACION DE CONSTITUYENTES ORGANICOS

Cod.
06521 Aceites y grasas. Mtodo de Extraccin Soxhlet.
08202 Demanda Bioqumica de Oxgeno. Tcnica de dilucin.
08303 Demanda Qumica de Oxgeno. Mtodo colorimtrico, reflujo cerrado.

Cdigo 06521 ACEITES Y GRASAS
DETERMINACION DE ACEITES Y GRASAS EN EFLUENTES

INDUSTRIALES
Mtodo de Extraccin Soxhlet
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de aceites y grasas en

efluen-tes industriales y domsticos.
2. DEFINICIONES
Aceites y grasas se considera cualquier material recuperado de la muestra acidifica-da,

como una sustancia soluble en ter de petroleo y no votalizables durante el ensa-yo.
Incluye adems de aceites y grasas, otros materiales extractables por el solvente.
Los aceites y grasas quedan definidos por el mtodo de anlisis utilizado.
3. PRINCIPIO
Los aceites y las grasas viscosas presentes, as como los slidos, son separados
por filtracin de la muestra lquida acidificada, mientras que los jabones metlicos
son hidrolizados por la acidificacin. Una vez separados de la solucin, en el
material retenido en el filtro se realiza una extraccin en un equipo Soxhlet,
utilizando como solvente ter de petrleo. La ganancia de peso en el frasco de
extraccin luego de evaporado el solvente corresponde al contenido de aceites y
grasas presentes en la muestra.
El mtodo es enteramente emprico y resultados duplicados concordantes pueden

ser obtenidos solamente por una estricta adherencia a todos los detalles.
El tiempo y la velocidad de extraccin deben ser respetados con exactitud, as como

el tiempo y la temperatura de secado del material extrado.
1 MUESTREO Y PRESERVACION
Recolectar de 100 a 1000 mL de muestra (segn la cantidad de aceites y grasas que

se estime presente en la muestra) en un frasco de vidrio de boca ancha, con cmara
de aire. El frasco debe ser enjuagado previamente con el solvente.

Cdigo 08202 DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO
DETERMINACION DE LA DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de demanda bioqumica de

oxgeno en efluentes industriales, vertidos domsticos y aguas contaminadas.
2. DEFINICION
La demanda bioqumica de oxgeno (DBO) corresponde a la cantidad de oxgeno

consumido para la degradacin bioqumica de la materia orgnica contenida en la
muestra, durante un intervalo de tiempo especfico y a una temperatura determinada.
3. PRINCIPIO
La muestra o una dilucin adecuada de la misma, es incubada por 5 das a 20C en

la oscuridad. Se mide la concentracin de oxgeno disuelto antes y despus de la
incubacin, y el consumo de oxgeno correponde a la demanda bioqumica de ox-
geno.
Recolectar la muestra en envases de plstico o vidrio. Tomar la muestra y llenar el

frasco evitando airear. Llenar el recipiente hasta el borde superior sin cmara de
aire.
Realizar el anlisis inmediatamente, si no es posible refrigerar la muestra a 4C y

comenzar el anlisis antes de 24 horas de la recoleccin.
0 INTERFERENCIAS
Muestras conteniendo cloro residual, metales o compuestos orgnicos txicos no

permiten el desarrollo de las bacterias que degradan la materia orgnica. Tales
muestras requieren un estudio y tratamiento especial.
El consumo de oxgeno por parte de los compuestos inorgnicos, en las condi-

ciones del anlisis, queda includo en la medida de DBO.

Cdigo 08303 DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO
DETERMINACION DE LA DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO
Mtodo espectrofotomtrico, reflujo cerrado
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de demanda qumica de ox-

geno en efluentes domsticos e industriales y aguas contaminadas.
2. DEFINICION
La demanda qumica de oxgeno (DQO) es la medida de oxgeno equivalente a la

materia orgnica que es susceptible a ser oxidada por un oxidante qumico fuerte,
en condiciones especficas de temperatura y tiempo.
3. PRINCIPIO
La muestra se oxida con una cantidad conocida de dicromato de potasio en exceso,

en medio cido y con catalizadores. El dicromato de potasio remanente es determi-
nado espectrofotomtricamnete a 600 nm.
0 INTERFERENCIAS
Los iones inorgnicos reducidos tales como: hierro ferroso, sulfuro, magnesio,
manganeso, etc, son oxidados cuantitativamente bajo las condiciones de anli-
sis. Para muestras conteniendo niveles significativos de estos iones,
suponiendo que se oxidan estequiomtricamente, y conociendo su
concentracin inicial se obtiene el valor de la DQO por medio de correcciones.
Los compuestos alifticos voltiles de cadena larga no son oxidados, porque al

volatilizarse no toman contacto con la solucin oxidante.
0 MUESTREO Y PRESERVACION DE LA MUESTRA
Recolectar la muestra en envases de vidrio o plstico, sin cmara de aire. Refrigerar

a 4C, mantener en la oscuridad. Si no se analiza inmediatamenete luego de extra-
da la muestra, acidificar con cido sulfrico a pH < 2 y refrigerar. Analizar antes de 7
das.
Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 08303- 1

DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO
Espectrofotmetro o colormetro, longitud de onda 600 nm. Con adaptador de celda

(tubos de digestin) de 25 mm de dimetro.
Digestor: block de aluminio con huecos para alojar tubos de 25 mm de dime-tro y
que opere a 150 2C.
Tubos de digestin: tubos de borosilicato con tapa de rosca resistente al calor y
contratapa de tefln, de 50 mL de capacidad y 25 mm de dimetro.
Matraces aforados de 1000 mL.
Pipetas aforadas de 1, 2, 3, 4, 5, 10 mL.
0 REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser calidad pura para anlisis (ppa).
Solucin de digestin:
Agregar a 500 mL de agua destilada 10.216 g de dicromato de potasio
(K2Cr2O7) previamente secado a 103C por 2 horas, 167 mL de H 2SO4 conc. y
33.3 g de sulfato mercrico (HgSO 4). Disolver, enfriar a temperatura ambiente
y enrasar a 1000 mL.
Solucin de cido sulfrico:

Agregar sulfato de plata (Ag 2SO4) a cido sulfrico conc. en una relacin de
5.5 g/kg de H2SO4. Esperar 1 o 2 das antes de usar esta solucin para permi-
tir la disolucin completa del Ag2SO4.
Solucin estndar de ftalato cido de potasio (KHP), 500 mg O 2/L:

Secar ftalato cido de potasio (KHP) hasta peso constante a 120C. Disolver
425 mg en agua destilada y diluir a 1000 mL en matraz aforado. Conservar la
solucin refrigerada a 4C.
Agua destilada, libre de materia orgnica.
0 PROCEDIMIENTO
0 Pipetear en 7 tubos de digestin: 1, 2, 3, 4, 5, 8 y 10 mL de la solucin

estndar de KHP y completar un volmen final de 10 mL con agua destilada.
Estas soluciones corresponden a 50, 100, 150, 200, 250, 400, 500 mg O 2/L
respectivamente.
Hacer un blanco de reactivos, pipeteando 10 mL de agua destilada en un tubo

de digestin.
Agregar a cada tubo de digestin 6 mL de solucin de digestin (7.1) y 14 mL

de solucin de cido sulfrico (7.2).
Tapar bien los tubos de digestin y agitarlos vigorosamente. Colocar los tu-bos
en el digestor a 150C durante 2 horas. Enfriar los tubos a temperatura
ambiente colocndolos en una gradilla. La gradilla debe ser adecuada para no
deteriorar la calidad del vidrio de los tubos, los que se usan como celda en el
espectrofotmetro.
Invertir los tubos varias veces y esperar a que el slido sedimente.
Descartar los tubos de digestin cuya solucin posea color verde. Leer la
absorbancia a 600 nm.
Graficar la absorbancia versus mg O2/L y trazar la mejor recta.
Hacer una curva de calibracin por cada lote de reactivos preparados.
Determinacin:
0 Pipetear 10 mL de muestra o una dilucin adecuada en un tubo de diges-

tin.
1 Seguir los pasos descriptos en los numerales 8.1 c), d) y e).
2 Si la solucin digerida posee color verde repetir los pasos anteriores con
una dilucin mayor de la muestra.
3 Leer la absobancia a 600 nm.
DQO, mg O2/L = C 10
T
donde:
C = mg O2/L de la muestra ledos de la curva de calibracin

T = mL de muestra tomada para el ensayo
Los resultados se expresan en mg de oxgeno consumido/L.

10. BIBLIOGRAFIA

Examina-tion of Water and Wastewater. 18 th Edition. Washington DC, APHA, AWWA,
WWCF, 1992. pp 5-6 - 5-10.
2- HACH Technical center for Applied Analytical Chemistry. Introduction to Chemical

Oxygen Demand. Booklet N 8. Hach Company, U.S.A.

DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO
Botellas de incubacin, de 300 mL de capacidad, preferentemente con sello de

agua. Las botellas deben ser lavadas con detergente, bien enjuagadas y seca-
das antes de su uso.
Incubadora controlada termostticamente a 20 1C. Excluir toda luz para pre-venir

la posibilidad de produccin de oxgeno disuelto por fotosntesis.
Electrodo de membrana selectiva al oxgeno, con compensacin automtica de

temperatura y medidor apropiado.
0 REACTIVOS
Solucin buffer de fosfato:

Disolver 8.5 g de KH2PO4, 21.75 g de K2HPO4, 33.4 g de Na2HPO4.7H2O y 1.7
g de NH4Cl en 500 mL de agua destilada y diluir a 1 L. El pH debe ser 7.2.
Solucin de sulfato de magnesio:

Disolver 22.5 g de sulfato de magnesio (MgSO 4.7H2O) en agua destilada y
diluir a 1L.
Solucin de cloruro de calcio:

Disolver 27.5 g de cloruro de calcio (CaCl2) en agua destilada y diluir a 1 L.
Solucin de cloruro frrico:

Disolver 0.25 g de cloruro frrico (FeCl3).6H2O y diluir a 1 L.
Soluciones cida y alcalina:

Para neutralizacin de muestras casticas o cidas se utilizan soluciones 1N.
0 Solucin cida: agregar 28 mL de H 2SO4 (cc) lentamente y con agitacin a
agua destilada y diluir a 1L.
1 Solucin alcalina: disolver 40 g de NaOH en agua destilada y diluir a 1L.
Agua destilada, preferentemente no usar agua desionizada por la posible con-

taminacin con materia orgnica.
0 PROCEDIMIENTO
8.1 Preparacin del agua de dilucin:
a) Colocar un volmen deseado de agua destilada en un recipiente adecuado y

adicionar 1 mL de las soluciones: de buffer fosfato, sulfato de magnesio, cloru-

ro de calcio, y cloruro frrico por litro de agua. Termostatizar el agua de dilu-
cin previo a su uso a 20C. El contenido de oxgeno debe ser prximo al de
saturacin a 20C.
1 Blanco del agua de dilucin: incubar una botella de DBO llena de agua de
dilucin por 5 das a 20C conjuntamente con el ensayo de la muestra. Medir la
concentracin de oxgeno antes y despus de la incubacin. El consumo de
oxgeno disuelto al cabo de los 5 das no debe ser mayor de 0.2 mg/L y prefe-
riblemente no ms de 0.1 mg/L. Un consumo mayor de 0.2 mg/L indica conta-
minacin del agua con materia orgnica. Rever el suministro de agua.
Pretratamiento de la muestra:
0 El pH del agua de dilucin no debe ser afectado por dilucin de la muestra.

En caso necesario ajustar entre 6.5-7.5 el pH de las muestras con una solucin
de cido sulfrico o hidrxido de sodio de tal fuerza que la cantidad de reactivo
no diluya la muestra en ms del 0.5%.
1 La muestra debe estar a temperatura ambiente (aprox. 20C) antes de reali-

zar las diluciones.
Tcnica de dilucin:
0 Realizar varias diluciones de la muestra para obtener un consumo de oxge-

no de no menos de 2 mg/L y un oxgeno residual no menor a 1 mg/L, despus
de 5 das de incubacin.
Si no se cuenta con un dato estimado de la DBO de la muestra, realizar dilu

ciones en los siguientes rangos:
100 a 1000 veces para efluentes industriales no tratados.
20 a 100 veces para aguas servidas crudas y tratadas.
5 a 20 veces para efluentes tratados biolgicamente.
1 a 5 veces para aguas de ro poludos.
Se realizarn como mnimo cuatro diluciones por muestra que incluyan el valor
de la DBO estimada.
Luego de homogeneizar la muestra preparar las diluciones directamente en las

botellas de DBO, usando pipeta graduada. Para las diluciones mayores que
100 realizar una dilucin primaria intermedia en material volumtrico graduado
an-tes de realizar la dilucin final en la botella.
Llenar las botellas con el agua de dilucin evitando airear y de forma que al

cerrarlas se hayan desplazado todas las burbujas de aire.
Determinacin:
0 Medida de oxgeno disuelto de la muestra (ODm): determinar el oxgeno

disuelto de la muestra con el electrodo de oxgeno segn las instrucciones del
manual, evitando airear la muestra.
1 Incubacin: Incubar las botellas de DBO conteniendo las diluciones de la

muestra y el blanco del agua de dilucin a 20 1C, durante 5 das.
2 Medida de oxgeno disuelto final: Luego de los 5 das de incubacin deter-

minar el oxgeno disuelto en las diluciones de la muestra.
Mtodo grfico:
Graficar la concentracin de oxgeno disuelto final versus volumen de muestra

(mL) tomados para la dilucin. De esta grfica se determina la mejor recta y se
calcula la pendiente (K).
DBO5, mg/L = - K V - Y + ODm
Donde:
K = pendiente de la recta
V = capacidad de la botella de DBO, (300 mL)
Y = intercepcin de la recta con el eje de las y
ODm = concentracin de oxgeno disuelto en la muestra original
Mtodo clsico:
Utilizar este mtodo para muestras de bajo contenido en materia orgnica, cuan
do no es necesario diluir; o cuando de las diluciones realizadas se tiene un
nico resultado que cumple con las condiciones del numeral 8.3a).
DBO5, mg/L = (ODi - ODf) V

T

Donde:
ODi = concentracin de oxgeno disuelto inicial (medido luego de la dilucin)

ODf = concentracin de oxgeno disuelto final
V = capacidad de la botella de DBO, (300 mL)
T = mL de muestra tomados para la dilucin
10. BIBLIOGRAFIA

Examina-tion of Water and Wastewater. 18 th Edition. Washington DC, APHA, AWWA,
WWCF, 1992. pp 5-2 - 5-6.
2- HACH Technical center for Applied Analytical Chemistry. Introduction to Biochemi-

cal Oxygen Demand. Booklet N 7. Hach Company, U.S.A.

ACEITES Y GRASAS
4.2 Acidificar a pH < 2 con HCl (1+1) en el mismo recipiente en el cual fue extra-da
la muestra. Refrigerar a 4C. Analizar antes de los 28 das.
NOTA: Recoger una muestra exclusivamente para la determinacin de aceites y grasas. No realizar
com-posicin de muestras.
Equipo de extraccin Soxhlet: matraz de extraccin, embudo Soxhlet y refrige-rante.

Bomba de vaco.
Manta elctrica de calentamiento.
Estufa a 103C.
Embudo Buchner.
Cono de extraccin.
Papel de filtro de 11 cm de dimetro, Whatman N40 o equivalente.
Piedras de ebullicin.
0 REACTIVOS
Acido clorhdrico (1+1).
Eter de petrleo con punto de ebullicin entre 60C a 70C. El solvente utiliza-do no
debe dejar residuos medibles en su evaporacin, en este caso destilar el
solvente previo a su utilizacin.
Tierra de diatomeas en suspensin 10 g/L en agua destilada.
NOTA: No usar tubos o recipientes de plstico para transferir el solvente entre los distintos recipientes.
0 PROCEDIMIENTO
Marcar el nivel de lquido en el frasco de muestreo para luego determinar el volumen

de muestra tomado. Denominar a dicho volumen en mL como V.
Verificar que el pH de la muestra es menor que 2, en caso contrario acidificar con

HCl (1+1).
Colocar un papel de filtro en el embudo Buchner y humedecerlo con agua des-tilada.

Haciendo vaco pasar 100 mL de la suspensin de tierra diatomeas a travs
del filtro y lavar con 1 L de agua destilada.

ACEITES Y GRASAS
Filtrar la totalidad de la muestra recogida y acidificada. Usando pinzas transfe-rir el

filtro a un vidrio reloj.
Pasar un papel de filtro humedecido en solvente por el embudo Buchner y por
el frasco de muestreo, asegurndose de remover las pelculas de grasas y ma-
terial slido presente. Juntar ambos filtros, envolverlos y colocarlos en el cono
de extraccin.
Secar el cono de extraccin en una estufa de aire caliente a 103C por 30 mi-nutos. Los
compuestos volatilizables a 103C se perdern durante este proceso.
Pesar el matraz de extraccin conteniendo perlas de ebullicin. Denominar a dicho

peso como p1.
Colocar el cono en el embudo Soxhlet. Agregar aproximadamente 200 mL de ter

de petrleo al frasco de extraccin. Extraer aceites y grasas a una veloci-dad
de 20 ciclos por hora durante 4 horas, tiempo tomado a partir del primer ciclo.
Destilar el solvente del frasco de extraccin en un bao de agua a 70C. Cuan-do se

observa que la condensacin del solvente finaliza, sacar el frasco de ex-
traccin del bao de agua, cubrir el bao con un soporte adecuado y secar el
frasco sobre el soporte durante 15 minutos, en el ltimo minuto, pasar aire a
traves del residuo usando un vaco apropiado.
Enfriar el frasco de extraccin en un desecador por 30 minutos y pesar. Deno-minar

a dicho peso como p2.
aceites y grasas, mg/L = (p2-p1) V 1000
donde:
p1 = peso del matraz con las perlas de ebullicin previo a la extraccin en mg.
p2 = peso del matraz con las perlas de ebullicin luego de la extraccin en mg.
V = volumen de muestra filtrado en mL.

ACEITES Y GRASAS

Examina-tion of Water Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 5-28.

SECCION V
MICROBIOLOGIA
SECCION V
V A) ANALISIS MICROBIOLOGICOS EN AGUA

Cod.
36013 Coliformes fecales. Tcnica de filtracin por membrana.
36002 Coliformes totales. Tcnica de filtracin por membrana.
36103 Estreptococos fecales. Tcnica de filtracin por membrana.
36403 Vibrio clera. Tcnica de aislamiento e identificacin.
V B) CONTROL DE CALIDAD
Cod.
VB002 Verificacin de Coliformes totales.
VB003 Verificacin de Coliformes fecales.
VB004 Verificacin de Estreptococos fecales.

Cdigo 36013 COLIFORMES FECALES
DETERMINACION DE COLIFORMES FECALES
Tcnica de Filtracin por Membrana
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de coliformes fecales en

aguas naturales superficiales o subterrneas, aguas recreacionales y aguas
residuales, fil-trando un volumen medido de la muestra, o la dilucin adecuada de la
misma y obteniendo resultados en 24 horas.
1 REFERENCIA
Norma tcnica cdigo VB003 para la verificacin de Coliformes Fecales.
0 DEFINICION
El grupo de bacterias coliformes fecales para la tcnica de filtracin por membrana

se define como todos los bacilos gram negativos, aerbicos y algunos anaerbicos
facultativos, no formadores de endosporas, que cuando se incuban en medio M-FC
con lactosa por 24 hs a 44.5 0.2 C desarrollan colonias color azul.
4. PRINCIPIO
El principio de esta tcnica consiste en la filtracin de un volumen medido de mues-

tra a travs de una membrana de nitrato de celulosa y su incubacin en un medio de
cultivo selectivos a 44.5 C. Este medio selectivo y la temperatura de incubacin
disminuyen el desarrollo de bacterias no coliformes que afectaran negativamente el
crecimiento de los coliformes fecales.
5. INTERFERENCIAS
Aguas con gran turbidez y baja densidad de coliformes totales; con txicos orgnicos
comolos fenoles; o cuando existe una carga bacteriana de no coliformes muy grande.
La muestra debe ser colectada en frascos de vidrio o de polipropileno autoclavable,

de boca ancha estriles. No debe llenarse el frasco por completo, debe quedar una

COLIFORMES FECALES
cmara de aire para poder homogeneizar la muestra antes de procesarla.

La misma debe conservarse a 4C hasta ser analizada. El perodo mximo de con-
servacin de la muestra en fro es de 6 - 8 horas.
Cuando se trata de muestras de agua que fueron cloradas, el frasco debe contener
Na2S203 en una concentracin de 100 mg/L de muestra para neutralizar el cloro resi-
dual, sin producir efectos importantes sobre los coliformes de la muestra. En un
frasco de muestreo de 120 mL, 0.1 mL de solucin de Na 2S203 al 10%, es suficiente
para neutralizar 15 mg/L de cloro residual.
Cuando la muestra posee una alta cantidad de metales pesados, el frasco de mues-
treo debe contener EDTA a pH 6.5 como agente quelante en una concentracin de
372 mg/L, para disminuir la toxidad de los mismos.
Si la muestra es de agua de ros, arroyos, lagos o reservorio, recolectar la muestra

por lo menos 15 cm por debajo de la superficie y si es posible en contra corriente.
Equipo de filtracin: embudo y platina porosa que se puedan trabar entre s y sean
autoclavables; bomba de vaco; kitasato de 1 litro; trampa de agua entre el
kitasato y la bomba de vaco.
Balanza con una sensibilidad de por lo menos 10 mg.
Incubadora de 44.5 0.2 C.
Equipo de recuento: microscopio binocular con un aumento de 10 a 15X. (De
preferencia).
Autoclave
Mecheros
Placas de Petri estriles de plstico descartables ( o de vidrio) de 50 mm de di-
metro aproximadamente u otro tamao adecuado.
Filtros de nitrocelulosa cuadriculados estriles de 0.45 0.02m de dimetro de
poro. Libre de glicerina y sin reas hidrofbicas.
Pinzas para filtros de acero inoxidable sin extremidades rugosas.
Tubos de ensayo de vidrio estriles para diluciones con tapa de algodn o de rosca.
Pipetas de vidrio graduadas estriles.

Materiales de vidrio para preparacin de los medios de cultivo.
Termmetros calibrados para controlar las incubadoras de coliformes.

COLIFORMES FECALES
0 REACTIVOS
Agua peptonada estril al 1% y pH neutro.

Etanol al 95%
Medio de cultivo lquido M-FC
Agar
Agua destilada
0 PROCEDIMIENTO
9.1 Preparacin de las placas de Petri
Si las placas son de plstico pueden ser reutilizadas despus de lavadas, si se

tratan con hipoclorito y posteriormente con etanol 70% durante 30 minutos y luego
se comprueba su esterilidad.
9.2 Preparacin de los medios de cultivo
El medio de cultivo debe ser preparado como lo indica el envase, sin necesidad de
ser autoclavado, agregndole agar al 1.5% y fundir. Una vez fundido y termostatiza-
do a 45C se reparte en las placas de Petri en una atmsfera asptica, colocando
aproximadamente 3 mL de medio por placa de 50 mm de dimetro.
9.3 Preparacin de la muestra
El volumen de muestra a ser filtrado se determina de acuerdo a la densidad bacte-

riana esperada y el origen de la muestra. En caso de ser necesario se preparan las
diluciones en agua peptonada estril. Se recomienda filtrar 3 volmenes diferentes
de muestra en mltiplos de 10 o las diluciones realizadas, como se indica en la si-
guiente tabla.
Volumenes de muestra o de diluciones sugeridas para diferentes tipos de aguas
Dilucin no no no no 10 100 1000 10000

Toma 100 50 10 1 1 1 1 1
Subterrneas X X X
Agua de Aljibe X X X
Lagos, reservorios X X X
Recreacionales X X X
Ros X X X X
Desechos colorados X X X
Desechos crudos X X X X

COLIFORMES FECALES
9.4 Filtracin e incubacin de la muestra
Descontaminar los embudos de filtracin al inicio del procesamiento de cada mues-

tra, humedeciendo el embudo con alcohol y luego flambearlo, una vez que el alco-
hol se consume hacer pasar suficiente agua estril para lavar el sistema y enfriarlo
ms rpidamente.
Colocar un filtro de nitrocelulosa estril con la superficie cuadriculada hacia arriba
sobre el portafiltros poroso del embudo, utilizando pinzas humedecidas con alcohol,
flambeadas y a temperatura ambiente. Posicionar el embudo sobre ste y trabar el
sistema. Verter el volumen a filtrar y filtrar. Luego de filtrada destrabar el sistema,
retirar el filtro con pinzas estriles y colocarlo sobre la placa con medio de cultivo M-
FC, evitando la formacin de burbujas de aire.
Si el volumen a filtrar es pequeo ( 1 mL), colocar en el embudo aproximadamente

10 mL de agua peptonada estril y luego la muestra, para lograr una mejor distribu-
cin de la misma sobre la membrana al ser filtrada.
Se recomienda procesar por duplicado cada volumen a filtrar.
La placa de Petri con el filtro se coloca en la estufa de incubacin a 44.5 0.2C en

posicin invertida durante 24 hs.
9.5 Recuento
Las colonias tpicas de coliformes fecales desarrolladas en el medio selectivo indica-

do son de distintas tonalidades de azul.
Las colonias grises, o crema son consideradas no coliformes, aunque existen colo-
nias de E. coli atpicas que se presentan de color crema por lo que se recomienda
realizar la verificacin.
Para el recuento utilizar preferentemente un microscopio binocular con un aumento

de 10 o 15X y una fuente de luz fluorescente posicionada formando un ngulo de
60-80 con respecto al filtro.
El recuento de colonias se realiza en filtros que contengan entre 20 y 60 colonias de

coliformes fecales tpicas.
La ecuacin que se emplea es la siguiente:
Total colonias coliformes fecales = colonias de coliformes contadas x 100

mL de muestra filtrados

COLIFORMES FECALES
Los resultados deben expresarse por Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ 100 mL.
Realizar la verificacin de los coliformes fecales segn la normativa tcnica que se

menciona en la referencia 2.1.
11. BIBLIOGRAFIA
1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard methods for the examina-

tion of water and. 18 ed. Washington D.C., APHA, AWWA, WPCF,1992. pp 9-54, 9-
58.
2- FORMULARIO PARA A AVALIAAO DE LABORATORIOS BACTERIOLOGICOS DE

ANALISES DE AGUAS. CETESB, SAO PAULO.
3- PUBLICACION DEL CURSO DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL, Diretoria de

Treinamiento e Transferencia de Tecnologia y Diretoria de Tecnologia e Qualidade
Ambiental, CETESB, Sao Paulo, 1988.

Cdigo 36002 COLIFORMES TOT ALES
DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES
Tecnica de Filtracin por Membrana
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de Coliformes Totales en

aguas naturales superficiales o subterrneas, aguas recreacionales y aguas
residuales fil-trando un volumen medido de la muestra, o la dilucin adecuada de la
misma y obteniendo resultados en 24 horas.
1 REFERENCIA
Norma tcnica Cdigo VB002 para la verificacin de Coliformes Totales.
0 DEFINICION
El grupo de bacterias coliformes para la tcnica de filtracin por membrana se defi-

ne como todos los bacilos gram negativos, aerbicos y algunos anaerbicos faculta-
tivos, no formadores de endosporas, que cuando se incuban en medio Endo con
lactosa por 24 hs. a 35C 0.5C, desarrollan colonias color rojo con brillo verde
metlico.
4. PRINCIPIO
El principio de esta tcnica consiste en la filtracin de un volumen medido de la

muestra a travs de una membrana de nitrato de celulosa y su incubacin en medio
de cultivo selectivo a 35C.
La incorporacin en los medios de cultivo de determinados colorantes, permiten que
la produccin de cido y aldehdo debida a la fermentacin de la lactosa sea visuali-
zada por la formacin de colonias rojas con brillo verde metlico, tpicas de colifor-
mes totales.
5. INTERFERENCIAS
Aguas con gran turbidez y baja densidad de coliformes totales; con txicos orgni-
cos como los fenoles; o cuando existe una carga bacteriana de no coliformes muy
grande.

COLIFORMES TOTALES
La muestra debe ser colectada en frascos de vidrio, o de polipropileno autoclavable,

de boca ancha, estriles. No debe llenarse el frasco por completo, dejando una c-
mara de aire para poder homogeneizar la muestra antes de procesarla.
La muestra debe conservarse a 4C hasta ser analizada. El perodo mximo de con-

Para aguas que fueron cloradas el frasco debe contener Na 2S203 en una concentra-
cin de 100 mg/L de muestra para neutralizar el cloro residual, sin producir efectos
importantes sobre los coliformes de la muestra. En un frasco de muestreo de 120
mL, 0.1 mL de solucin de Na 2S203 al 10%, es suficiente para neutralizar 15 mg/L de
cloro residual.
Cuando la muestra posee una alta cantidad de metales pesados, el frasco de mues-
372 mg/L, para disminiur la toxicidad de los mismos.
Cuando la muestra es de agua de ros, arroyos, lagos o reservorio, recolectar la

muestra por lo menos 15 cm debajo de la superficie y si es posible, contra corriente.
1 EQUIPOS y MATERIALES
Balanzas con una sensibilidad de por lo menos 10 mg.
Incubadoras de 35 0.5C.
Equipo de recuento: microscopio binocular con un aumento de 10 a 15X
y una fuente de luz fluorescente posicionada formando un ngulo de 60-80
con la placa. (De preferencia).
Autoclave
Mecheros
Placas de Petri estriles, de plstico descartables o de vidrio de 50 mm de di-
metro aproximadamente u otro tamao adecuado.
Filtros de nitrocelulosa cuadriculados estriles de 0.45 m 0.02 m de dime tro
de poro. Libre de glicerina y sin reas hidrofbicas.
Pinzas de acero inoxidable para filtros, sin extremidades rugosas.

COLIFORMES TOTALES
Tubos de ensayo de vidrio estriles para diluciones con tapa de algodn o de

rosca.
Materiales de vidrio para preparacin del medio de cultivo.
Termmetros calibrados para controlar la incubadora de coliformes.
0 REACTIVOS

Etanol al 95%
Medio de cultivo lquido M-Endo
Agar
Agua destilada
0 PROCEDIMIENTO
Si las placas son de plstico pueden ser reutilizadas despues de lavadas, si se tra-
tan con hipoclorito y posteriormente con etanol 70% durante 30 minutos y luego se
comprueba su esterilidad.
ser autoclavado, agregndole agar al 1.5% y fundir.
Una vez fundido y termostatizado a 45C se reparte en las placas de Petri en una
atmsfera estril colocando aproximadamente 3 mL de medio por placa de 50 mm
de dimetro.

de muestra en mltiplo de 10 o las diluciones realizadas, como se indica en la si-
guiente tabla:

COLIFORMES TOTALES

Toma 100 50 10 1 1 1 1 1
Subterrneas X X X
Ros X X X X

tra humedeciendo el embudo con alcohol y luego flambearlo, una vez que el alcohol
se consume hacer pasar suficiente agua estril para lavar el sistema y enfriarlo ms
rpidamente.
sobre el portafiltros poroso del embudo utilizando pinzas humedecidas en alcohol,
sistema. Verter el volumen a filtrar y filtrar. Luego de filtrada destrabar el sistema,
retirar el filtro con pinzas estriles y colocarlo sobre la placa con medio de cultivo M-
Endo, evitando la formacin de burbujas de aire.
Si el volumen a filtrar es poco (1 mL) colocar en el embudo aproximadamente 10 mL

de agua peptonada estril y luego la muestra, para lograr una mejor distribucin de
la misma sobre la membrana al ser filtrada.
La placa de Petri con el filtro se coloca en la estufa de incubacin a 35 0.5C en

posicin invertida durante el tiempo adecuado segn el origen de la muestra.
Las muestras que consisten en aguas tratadas pueden incluir microorganismos es-
tresados que presentan un crecimiento ms lento y demoran entre 22 - 24 hs en
manifestar el brillo verde metlico. Por el contrario, si el origen de la muestra son
aguas naturales las colonias tpicas de coliformes pueden observarse entre las 16 a
18 hs de incubacin pudindose perder el brillo verde metlico a las 24 horas de
incubadas.
9.5 Recuento
Las colonias tpicas de coliformes totales son aquellas rojas o rosado oscuro que
presentan brillo verde metlico en la superficie ya sea como un pequeo punto o en
toda la superficie de la colonia.

COLIFORMES TOTALES
Colonias que no presentan brillo, pudiendo ser rosadas, rojas, blancas o sin color
son consideradas como no coliformes.
Para el recuento utilizar preferentemente un microscopio binocular con un aumento

de 10 o 15X y una fuente de luz fluorescente posicionada formando un ngulo de
60-80 con respecto al filtro.

coliformes tpicas y no ms de 200 colonias de cualquier tipo.
Total de colonias de coliformes = colonias de coliformes contadas x 100

mL de muestra filtrados
Los resultados deben expresarse por Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ 100 mL.
Si las colonias crecen unindose sobre la membrana se informa como crecimiento

confluente con o sin presencia de coliformes y se sugiere la realizacin de otro
mues-treo del mismo punto.
Si el nmero de colonias tpicas de coliformes fuera entre 20 y 80 pero la placa

posee ms de 200 colonias de cualquier tipo, se informa como mayor al recuento
realizado y se aconseja la realizacin de otro muestreo en ese punto.
Realizar la verificacin de los coliformes totales segn la normativa tcnica que se

menciona en la referencia 2.1.
11. BIBLIOGRAFIA
1 - AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard methods for the examina-

tion of water and wastewater. 18 ed. APHA, AWWA, WPCF,1992. pp 9-54, 9-58.
2 - FORMULARIO PARA A AVALIAAO DE LABORATORIOS BACTERIOLOGICOS DE

3 - GUIA PARA LA CALIDAD DEL AGUA POTABLE, Organizacin Panamericana

de la Salud, Vol. 3, Publicacin cientfica N 508, 1988.
4 - PUBLICACION DEL CURSO DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL, Diretoria de

Trei-namiento e Transferencia de Tecnologia y Diretoria de Tecnologia e Qualidade
Am-biental, CETESB, Sao Paulo, 1988.

Cdigo 36103 ESTREPTOCOCOS FECALES
DETERMINACION DE ESTREPTOCOCOS FECALES
Tecnica de Filtracin por Membrana
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de estreptococos fecales en

aguas naturales superficiales o subterrneas, aguas recreacionales y aguas residua-
les filtrando un volumen medido de la muestra o la dilucin adecuada de la misma y
obtenindose resultados en 24 horas.
1 REFERENCIAS
Norma tcnica Cdigo VB004 para la verificacin de estreptococos fecales.
0 DEFINICION
El grupo de estreptococos fecales para la tcnica de filtracin por membrana se

define como todos los cocos gram positivos quedesarrollan colonias de color rojo
cla-ro y rojo oscuro cuando se incuban en medio Agar m-Enterococcus para
estreptoco-cos fecales.
4. PRINCIPIO
El principio de esta tcnica consiste en el filtrado de un volumen medido de muestra

a travs de una membrana de nitrato de celulosa y su incubacin en un medio se-
lectivo a 35C.
La fermentacin de carbohidratos presentes en el medio, con la azida de sdio
como agente selectivo inhibiendo las bacterias gram negativas, y el cloruro trifenil
tetrazo-lio hace que las colonias positivas presenten un color rojo oscuro como
resultado de la reduccin tetrazlica a un azocolorante cido.
5.INTERFERENCIAS
Aguas con gran turbidez y baja densidad de estreptococos fecales; con txicos
org-nicos como los fenoles; o cuando existe una carga de bacterias no
pertenecientes al grupo de estreptococos grande.
Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 3610 3 - 1

ESTREPTOCOCOS FECALES
La muestra debe ser colectada en frascos de vidrio o de polipropileno autoclavable,

de boca ancha estriles. No debe llenarse el frasco por completo, debe quedar una
cmara de aire para poder homogeneizar la muestra antes de procesarla.
La misma debe conservarse a 4C hasta ser analizada. El perodo mximo de con-
Cuando se trata de muestras de agua que fueron cloradas, el frasco debe contener
Na2S203 en una concentracin de 100 mg/L de muestra para neutralizar el cloro resi-
dual, sin producir efectos importantes sobre los estreptococos de la muestra.En un
frasco de muestreo de 120 mL, 0.1 mL de solucin de Na 2S203 al 10%, es suficiente
para neutralizar 15 mg/L de cloro residual.
Cuando la muestra posee un alto contenido de metales pesados, el frasco de mues-

372 mg/L, para disminuir la toxicidad de los mismos.
Si la muestra es de agua de ros, arroyos, lagos o reservorio, recolectar la muestra

por lo menos 15 cm por debajo de la superficie y si es posible, contra corriente.
Incubadora de 35 0.5C.
Equipo de recuento: microscopio binocular con un aumento de 10 a 15X, y una
fuente de luz fluorescente posicionada formando un ngulo de 60-80 con la
placa. (De preferencia).
Autoclave.
Mecheros.
Placas de Petri estriles de plstico descartables o de vidrio de 50 mm de dime-tro
aproximadamente u otro tamao adecuado.
Filtros de nitrocelulosa cuadriculados estriles de 0.45m 0.02m de dime-tro de
poro. Libre de glicerina y sin reas hidrofbicas.
Pinzas para filtros, de acero inoxidable sin extremidades rugosas.
3610 3 - 2 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

Tubos de ensayo de vidrio estriles para diluciones con tapa de algodn o de rosca.
Termmetros calibrados para controlar las incubadoras.
0 REACTIVOS

Etanol al 95%.
Medio de cultivo Agar m - Enterococcus para estreptococos fecales.
Agua destilada.
0 PROCEDIMIENTO
Si las placas son de plstico pueden ser reutilizadas despus de lavadas, si se

tratan con hipoclorito y posteriormente con etanol 70% durante 30 minutos y luego
se com-prueba su esterilidad.
ser autoclavado y posteriormente fundido.
Una vez fundido y termostatizado a 45C, se reparte en las placas de Petri en una
atmsfera estril colocando aproximadamente 3 mL de medio por placa de 50 mm
de dimetro.

de muestra en mltiplo de 10 o las diluciones realizadas, como se indica en la si-
guiente grfica:


Toma 100 50 10 1 1 1 1 1
Subterrneas X X X
Ros X X X X

tra, humedeciendo el embudo con alcohol y luego flambendolo, una vez que el
alcohol se consume, hacer pasar suficiente agua estril para lavar el sistema y en-
friarlo ms rpidamente.
sobre el portafiltros poroso del embudo, utilizando pinzas humedecidas en alcohol,
sistema. Verter el volumen a filtrar y filtrar. Luego de filtrada, destrabar el sistema ,
retirar el filtro con pinzas estriles y colocarlo sobre la placa con medio de cultivo
Agar m - Enterococcus para estreptococos fecales, evitando la formacin de burbu-
jas de aire.
Si el volumen a filtrar es pequeo (1 mL), colocar en el embudo aproximadamente

10 mL de agua peptonada estril y luego la muestra, para lograr una mejor distri-
bucin de la misma sobre la membrana al ser filtrada.
La placa de Petri con el filtro se dejan reposar por 30 minutos y luego se colocan en
la estufa de incubacin a 35 0.5C en posicin invertida durante 48 horas.
9.5 Recuento
Las colonias tpicas son aquellas que desarrollan un color rojo claro u oscuro sobre
el medio de cultivo m- Enterococcus para estreptococos fecales.
Para el recuento utilizar preferentemente un microscopio binocular con un aumento-
de 10 o 15X, en caso de ser necesario.
3610 3 - 4 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996


estreptococos.
Total colonias estreptococos = colonias de estreptococos contadas x

100 mL de muestra filtrados
Los resultados deben expresarse por Unidades Formadoras de

Colonias (UFC)/ 100 mL.
Realizar la verificacin de estreptococos fecales segn la normativa tcnica que se

menciona en la referencia 2.1
11. BIBLIOGRAFIA
1 - AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard methods for the

examina-tion of water and wastewater. 18 ed. Washington D.C., APHA, AWWA,
WPCF,5.92. pp 9-69, 9-73.

3 - BERGEYS MANUAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY, 5.84, Vol.2, Section

12, pp 1043 - 1071.

Cdigo 36403 VIBRIO CHOLERAE
DETERMINACION DE Vibrio cholerae EN AGUAS

Vibrio cholerae. Aislamiento e identificacin.
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica es aplicable para un constante control sistemtico de Vibrio

cholerae tanto a nivel de aguas naturales (agua de uso domiciliario), superficiales o
subterrneas, aguas recreacionales y aguas residuales.
1 REFERENCIAS
Norma tcnica cdigo 36002 para la determinacin de Coliformes Totales por la

Tcnica de Filtracin por Membrana.
Norma tcnica Cdigo VB002 para la verificacin de Coliformes Totales deter-

minados por la Tcnica de Filtracin por Membrana.
0 DEFINICION
El gnero Vibrio se encuentra dentro de la familia Vibrionaceae junto con tres gne-
ros ms: Aeromonas, Photobacterium y Plesiomonas.
El mismo esta constituido por bacilos, Gram negativos de 0.5 a 0.8 m de dimetro
y 1.4 a 2.6 m de largo, anaerobios facultativos, mviles y no forman endosporas.
Las cepas de Vibrio cholerae que reaccionan con el antisuero somtico 01 se deno-
minan V. cholerae 01, las restantes serovariedades se denominan V.cholerae no 01,
siendo las primeras las causantes de la enfermedad del clera.
Dentro de V.cholerae 01 hay dos clases de biotipos: el clsico y El Tor que se

encuen-tran separados en dos serotipos: Ogawa e Inaba y a veces un tercer
serotipo: Hikoji-ma.
Existe actualmente un serogrupo dentro de los V. cholerae no 01, el 0 139 que tam-
bin es causante de la enfermedad del clera.
4. PRINCIPIO
Esta normativa se basa en la aplicacin de diferentes tcnicas de muestreo para la

obtencin de colonias aisladas de posible V. cholerae, y su posterior identificacin
por pruebas bioqumicas y serolgicas.

VIBRIO CHOLERAE
El perfil bioqumico que correspone al V. cholerae sera el siguiente:
TN
OXIDASA TSI STRING ADH LDC ODC 1 0 T1N1 SACAROSA LACTOSA VP 0129 0129
10g 150g
6
+ A/A + - + + + + + - v + +
Todas las muestras, independientemente de su origen, deben ser recolectadas en

frascos o bidones estriles y deben ser transportadas refrigeradas a 4C hasta el
momento de su anlisis.
En caso de que se utilize el Hisopo de Moore, debe ser colocado en bolsas

plsticas estriles o en frascos de boca ancha, con agua peptonada alcalina simple
concen-tracin y enviarse refrigerado al laboratorio, no superando las 8 horas de
efectuado el muestreo en ningn caso.
La metodologa de muestreo a utilizar, as como la tcnica de aislamiento a emplear,

dependen del tipo de agua a muestrear, siendo la salinidad de la misma un factor
determinante para la eleccin de esta ltima.
Las tres alternativas de muestreo son las siguientes
A. Enriquecimiento directo
Consiste en la toma de un volumen adecuado de agua utilizando un recipiente lim-

pio y estril. Deben emplearse guantes descartables que sern desechados entre
toma y toma.
Es aplicable a aguas de uso domiciliario, aguas de mar, estuarios, ros, lagos, aguas
residuales,etc., teniendo en consideracin para cada caso el volumen de muestra a
procesar.
En aguas domiciliarias, el volumen a recolectar es 1L de muestra como volumen

ptimo.
Para ros, lagos, aguas residuales, etc. muestrear 500 mL.
B. Filtracin por membrana
Si la muestra proviene de aguas marinas utilizar un filtro de nitrocelulosa estril de

0.22 m de dimetro de poro, si es de otro origen emplear el filtro de 0.45 m de
dimetro de poro. En ambos casos usar un prefiltro estril en aquellas muestras

VIBRIO CHOLERAE
cuya turbidez dificulte el filtrado.
Para aguas domiciliarias, filtrar un volumen de 1 litro; para aguas naturales filtrar
entre 4 y 5 litros de muestra.
C. Hisopo de Moore
Es una tcnica recomendada principalmente para aguas residuales.
Los hisopos se preparan enrrollando una tira a lo largo de gasa de 90 a 120 cm de

largo por 15 cm de ancho, atando firmemente el centro con un hilo que resista la
esterilizacin por autoclave 15 minutos.
Para el estudio de aguas residuales, los hisopos deben colocarse principalmente en

la entrada de las plantas de tratamiento, arriba de la corriente en cualquier sitio del
vertedero, dejandose all por 24 - 72 horas.
El hisopo se recoge con guantes descartables y se coloca en bolsas plsticas o reci-

piente de boca ancha.
Incubadora de 37C - 35 0.5C.
Autoclave.
Equipo para medir pH con sensibilidad de 0.1 unidades de pH.
Mecheros.
Placas de Petri estriles, de plstico descartables o de vidrio.
Filtros de nitrocelulosa cuadriculados estriles de 0.22m o 0.45m 0.02 m
de dimetro de poro. Libre de glicerina y sin reas hidrofbicas.
Pinzas para filtros, de acero inoxidable sin extremidades rugosas, humedecida en
alcohol y flambeadas antes de su uso.
Tubos de ensayo de vidrio, estriles con tapa.
Frascos de muestreo estriles.
Bidones estriles de 5 litros para muestreo.
Termmetros calibrados para controlar la incubadora.
Prefiltro estril.

VIBRIO CHOLERAE
0 REACTIVOS
MEDIOS DE CULTIVO
Mac Conkey agar: para visualizar el metabolismo con respecto a la lactosa.

TCBS: medio selectivo y diferencial para el crecimiento de Vibrio sp. Se reali-za 24
hs antes de su uso.
TSA: se lee resistencia a O 129 y Polimixina B.
TSI: para metabolismo de los azcares y produccin de H2S.
LIA: decarboxilacin de la lisina y produccin de H 2S.
HIA: para crecimiento de cepa para tests serolgicos.
SC: utilizacin de citrato como fuente de carbono.
Agar Fenilalanina: deaminacin de la fenilalanina con produccin c. fenil-pirvico.
MIO: movilidad, decarboxilacin de la ornitina.
SIM: movilidad y produccin de indol a partir del triptofano de las protenas.
Inositol: utilizacin de otros azcares para diferenciar Vibrio sp.de Aeromo-nas sp.
Arabinosa: igual que el inositol.
Base de Moeller + arginina: decarboxilacin de la arginina. (*)
T1N0 al T1N10 : Triptona al 1% y diferentes porcentajes de NaCl hasta llegar a 10%,
para saber si es halfilo el microorganismo o no y diferenciar dentro de la
especie Vibrio sp.
Caldo Nitrato: utilizacin del nitrato como aceptor de electrones con reduc-cin del
NO3 a NO2 o N2.
Voges Proskauer: produccin de acetona de la fermentacin de azcar.(*)
A los medios marcados con (*) hay que adicionarles NaCl hasta una concentracin
final de 1% teniendo en cuenta el NaCl ya presente en el medio de cultivo.
7.2 REACTIVOS
Agua Peptonada Alcalina simple concentracin: Peptona 10 g, cloruro de so-dio 10

g, agua destilada 1000 mL. pH = 8.6 0.2.
Discos para el test de citocromo oxidasa o los reactivos correspondientes
(Referencia 2.2).
Discos de vibriosttico 0129 de concentracin 10 y 150 g.
Discos de polimixina B 50g para ensayo de biotipo.
Antisueros polivalente 01 y 0 139.
Antisueros Ogawa e Inaba.

VIBRIO CHOLERAE
Etanol al 95%.
Agar.
Agua destilada.
0 PROCDIMIENTO
PROCESAMIENTO DE MUESTRA A.
Enriquecimiento directo
Una vez llegada la muestra al laboratorio, se coloca un volumen de muestra (500

mL) en un recipiente conteniendo el mismo volumen de agua peptonada alcalina
(APA) a pH= 8.6 de doble concentracin. Incubar a 37 C durante 6-8 horas.
Alternativamente pueden incubarse 450 mL de muestra en 50 mL de APA 10 veces

concentrada, o relacin 1:4 de muestra y APA de simple concentracin.
B. Filtracin por membrana
La filtracin se realiza como est descripta en la referencia 2.1 pero colocando un

prefiltro estril sobre la membrana para las muestras muy turbias. Una vez filtrado
se colocan todas las membrana y los prefiltros de la muestra en un recipiente con
100 mL de APA simple concentracin. Incubar 6-8 horas a 37C.
C. Hisopo de Moore
Colocar el hisopo en un frasco de boca ancha con APA simple concentracin e incu-
bar a 37C por 6 - 8 horas.
8.2 AISLAMIENTO DE Vibrio cholerae
Independientemente del mtodo de procesamiento empleado, posteriormente a la

incubacin en APA, sembrar una ansada de la pelcula superficial del agua pepto-
nada alcalina en placas de Petri con medio TCBS, e incubar por 24 horas a 37C.
Selccionar colonias sospechosas es decir, colonias amarillas, (porque fermentan la

sacarosa), planas, ligeramente convexas, de 2 mm de dimetro con centro opaco y
borbes translcidos. No todas las colonias amarillas desarrolladas en este medio
son de V. cholerae. Repicar las colonias seleccionadas (aproximadamente un nme-
ro de 8 -10 ) en placas con medio TSA e incubar 24 horas a 37C.
A partir de TSA realizar las pruebas de oxidasa, Tincin de Gram, TSI, decarboxila-
sas (lisina, arginina y ornitina), crecimiento en T 1N0 y T1N1 , que permiten la identifi-
cacin presuntiva.

VIBRIO CHOLERAE
Si las bioqumicas antes mencionadas concuerdan con las de V. cholerae, realizar

las pruebas bioqumicas complementarias con los medios de cultivo y reactivos que
fi-guran en el item 7. Efectuar la prueba serolgica de aglutinacin en placa con los
antisueros polivalentes 01 y O139. Si el resultado es positivo 01, se hace aglutina-
cin con los antisueros Ogawa e Inaba.
El diagnstico serolgico presuntivo se debe realizar a partir de colonias desarrolla-

das en TSA, ya que las colonias crecidas en TCBS son pegajosas y dificultan la
aglu-tinacin.
Finalmente realizar los ensayos de toxicidad o en su defecto enviar la muestra al

organismo que los realice.
9. BIBLIOGRAFIA

examina-tion of water and wastewater. 18 ed. Washington D.C.,APHA, AWWA,
WPCF,1992. pp 9-94, 9-95.

3 - BERGEYS MANUAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY,1984, Vol.1, Section 5

pp 516 - 538.
4 - Elisa L. elliot, Charles A. Kaysner y col. Metodologa de la Administracin de

Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos para la recuperacin, Identifica-
cin y Enumeracin de las Especies Patognicas de Vibrio, incluyendo V. cholerae,
V.parahaemolyticus, V.vulnificus y otras especies.
5 - AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE Vibrio cholerae. Ministerio de Salud y

Accion Social, Secretara de Salud Pblica, Direccin Nacional de Medicina Sanitaria,
Instituto Nacional de MicrobiologaCarlos G. Malbran, Buenos Aires, 1993.
6 - Laboratory Methods for the Diagnosis of Vibrio cholerae.

Centers for Disease Control and Prevention. Pan American Health Organization.
World Health Organization, March 1993.

Cdigo VB002 COLIFORMES TOTALES
TECNICA DE VERIFICACIN DE COLIFORMES TOTALES
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para verificar coliformes totales determinados por la
tcnica de filtracin por membrana y evitar obtener resultados falsos positivos.
2. DEFINICION
Se define como colonia de coliformes totales verificada a travs de tcnicas que evi-
dencian fermentacin de lactosa, aquella que evidencia formacin de gas cuando se
incuba en Caldo Lauril Triptosa y en Caldo Lactosa Bilis Verde Brillante a 35C du-
rante 48 horas.
En el caso de que la verificacin se realice a travs de tcnicas bioqumicas rpidas,

se define como colonia de coliformes totales verificada aquella que presenta el si-
guiente perfil: citocromo-oxidasa negativa y -galactosidasa positivas.
3. PRINCIPIO
Estos procedimientos de verificacin de coliformes totales se basan en la capacidad

de los mismos para fermentar la lactosa, inhibiendo el verde brillante y la bilis el
desarrollo de otras bacterias. Este grupo es deficiente en permeasa pero no en -
galactosidasa la cual produce la ruptura de la lactosa en glucosa y galactosa.

Incubadora de 35 0.5C.
Autoclave.
Equipo para medir pH.
Mecheros.
Placas de Petri estriles de plstico descartables o de vidrio.
Tubos de ensayo de vidrio estriles con tapa de algodn o de rosca, con cam-
pana de Durham.
Termmetros calibrados para controlar la incubadora.
Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 VB002 - 1
COLIFORMES TOTALES
0 REACTIVOS
Medio de cultivo Caldo Lauril Triptosa.

Medio de cultivo Caldo Lactosa Bilis Verde Brillante.
Discos para el test bioqumico de Citocromo oxidasa (CO).
Discos para el test bioqumico de - galactosidasa (ONPG).
Medio de cultivo, no selectivo, TSA o Agar Nutritivo.
Etanol al 95%.
Agua destilada.
Una segunda alternativa para la realizacin de las pruebas de citocromo oxidasa -

galactosidasa es el empleo de los siguientes reactivos y materiales:
Citocromo oxidasa
tetramethyl paraphenylenediamine dihydrochloride 1%

papel de filtro Whatman N 1 o equivalente.
- galactosidasa
solucin de fosfato monosdico 1.0 M a pH 7.0.

solucin de o- nitrofenil -D- galactopiranosida (ONPG).
tolueno.
0 PROCEDIMIENTO
Se aplica tanto a colonias tpicas como a las atpicas. En caso de que las colonias
contadas a partir de una muestra de agua de desecho sean ms de 50, se realiza la
verificacin al 10% de las colonias obtenidas.
El medio de cultivo para coliformes totales, M-Endo, ocasionalmente puede producir

colonias de coliformes totales atpicas de color rojo oscuro sin brillo metlico, por lo
que es importante la verificacin tanto de colonias tpicas como atpicas para lograr
un mejor reconocimiento de las mismas por parte del tcnico analista.
Si los coliformes a verificar provienen de muestras de agua para beber debe verifi-
carse la totalidad de las colonias desarrolladas.
6.1 Alternativa A - Fermentacin de lactosa
Repicar las colonias elegidas al azar para la verificacin a tubos con campana de
Durham y medio de cultivo Caldo Lauril Triptosa. Incubar a 35 0.5C por 48
VB002 - 2 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

COLIFORMES TOTALES
horas. Los tubos positivos, es decir los que evidencian la produccin de gas, son
repicados a tubos con campana de Durham y medio de cultivo Lactosa Bilis Verde
Brillante incubndose 48 horas a 35 0.5C.
Si se detecta produccin de gas en ambos medios dentro de las 48 horas, se

excluye la posibilidad de resultado falso positivo, siendo verificados as los
coliformes tota-les.
Si de alguna colonia repicada solo se detecta produccin de gas en el medio Caldo

Lauril Triptosa, transferir desde el tubo positivo a otro tubo con Lactosa Bilis Verde
Brillante para testarlo nuevamente.
6.2 Alternativa B - Test Bioqumicos Rpidos
Obtener colonias aisladas y puras repicando a un medio nutritivo como por ejem-plo,
Tryptic Soy Agar (TSA).
6.2.1 Test de CO:
a) Si se cuenta con los discos comerciales:
suspender la colonia en un tubo con 0.5 mL de agua destilada estril y luego colocar
el disco. Esperar 30 segundos para leer la reaccin.
Ser un resultado positivo aquella colonia que desarrolle un color rojo intenso sobre
el disco.
b) En caso de que no se cuente con los discos comerciales entonces se realiza esta
prueba de la siguiente manera:
preparar una solucin acuosa fresca al 1% de tetramitil parafenilendiamina dihidro-

cloruro. Impregnar una tirilla de papel de filtro con la misma y colocar una porcin de
la colonia a verificar sobre el papel de filtro utilizando un ansa de platino, vidrio, etc.
para evitar falsos positivos con el xido del metal.
Cuando la colonia desarrolla un color rosado sobre el papel de filtro se lee como
positivo.
6.2.2 Test ONPG:
a) Si se cuenta con los discos de papel comerciales:
colocar 0.5 mL de agua destilada en un tubo de ensayo, esterilizar, suspender una

ansada de cultivo, colocar el disco de ONPG e incubar 30 minutos a 37C.
El resultado puede ser ledo en un perodo mximo de 4 horas, siendo positivas
aquellas colonias que desarrollan color amarillo.

COLIFORMES TOTALES
b) En caso de no poseer los discos comerciales el procedimiento para el desarrollo

de esta prueba es el siguiente:
preparar una solucin de fosfato monosdico 1.0 M disolviendo 6.9 g de

NaH2PO4.H2O en 45 mL de agua, agegar 3 mL de NaOH 30% y ajustar pH a 7.0.
Diluir a 50 mL y guardar refrigerada.
Preparar solucin de ONPG disolviendo 80 mg de o-nitrofenil--D-galactopiranosi-
da (ONPG) en 15 mL de agua a 37C y agreagar 5 mL de NaH 2PO4 1.0 M. Conser-
var refrigerada. Antes de usar calentar a 37C.
Emulsionar una ansada de inculo en un tubo de fermentacin, agregar una gota de
tolueno y agitar. Dejar reposar 5 minutos en Bao de agua a 35C. Agregar 0.25 mL
de solucin de ONPG a cada tubo y reincubar. Leer los tubos a los 30, 60 minu-tos
y 24 horas.
Resultado positivo es aquel tubo en el que se desarrollo color amarillo.
7. RECUENTO
Debe ajustarse el conteo inicial efectuado sobre la membrana filtrante basado en el

porcentaje obtenido a partir de las verificaciones positivas de coliformes totales de
acuerdo al item 6.1 o 6.2.
Los resultados se expresan como Unidades formadoras de colonia (UFC) de colifor-

mes totales verificados en 100 mL de muestra.
9. BIBLIOGRAFIA

examina-tion of water and wastewater. 18 ed.Washington D.C., APHA, AWWA,
WPCF,1992. pp 9-54, 9.58 y 9-11.

3 - BERGEYS MANUAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY, 1984, Vol 1, Section 5.

Cdigo VB003 COLIFORMES FECALES
TECNICA DE VERIFICACION DE COLIFORMES FECALES
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para verificar coliformes fecales determinados por
la tcnica de filtracin por membrana y as evitar obtener resultados falsos positivos.
2. DEFINICION
Se define como colonia verificada de coliformes fecales aquella que evidencia for-
macin de gas cuando se incuban en Caldo Lauril Triptosa y medio EC durante 48
horas a 35C.
3. PRINCIPIO
La verificacin de coliformes fecales se basa en la capacidad de los mismos para

fermentar la lactosa, inhibiendo la sal biliar presente en el medio de cultivo EC, el
desarrollo de bacterias formadoras de endosporas y bacterias gram positivas.
1 EQUIPOS y MATERIALES
Incubadoras para 35 0.5C y para 44.5 0.2C.
Autoclave.
Equipo para medir pH .
Mecheros.
Tubos de ensayo de vidrio estriles con tapa de algodn o de rosca, con cam-
pana de Durham.
Termmetros calibrados para controlar las incubadoras de coliformes.

COLIFORMES FECALES
0 REACTIVOS
Medio de cultivo Caldo Lauril Triptosa

Medio de cultivo EC
Etanol al 95%
Agua destilada
0 PROCEDIMIENTO
A partir de la membrana filtrante incubada en medio para coliformes fecales (M-FC),

se repican por lo menos 10 colonias aisladas tpicas y se transfieren a tubos con
Caldo Lauril Triptosa con campana de Durham. Se incuban dichos tubos a 35C por
24 horas y 48 horas. Se observa produccin de gas.
De los tubos positivos, es decir en aquellos que se observa produccin de gas se

transfiere una ansada a tubos con medio EC y campana de Durham, se incuba
44.5C por 24 horas.
La produccin de gas en este medio verifica la presencia de coliformes fecales.
7. RECUENTO
Debe ajustarse el conteo inicial efectuado sobre la membrana filtrante basado en el

porcentaje obtenido a partir de las verificaciones positivas de coliformes fecales.
Los resultados se expresan como recuento de UFC de coliformes fecales

verificados en 100 mL de muestra.
9. BIBLIOGRAFIA
1 -AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard methods for the

examina-tion of water and wastewater. 18 ed.Washington D.C., APHA, AWWA,
WPCF,1992. pp 9-54, 9.58.

3 -BERGEYS MANUAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY,1984, Vol.1, Section 5.

Cdigo VB004 ESTREPTOCOCOS FECALES
TECNICA DE VERIFICACION DE ESTREPTOCOCOS FECALES
1. OBJETIVO
Esta normativa tcnica se utiliza para verificar estreptococos fecales, determinados

por la tcnica de filtracin por membrana y evitar obtener resultados falsos positivos
al realizar el recuento.
2. DEFINICION
Se define como colonia verificada de pertenecer al grupo de estreptococos fecales

aquella que presenta las siguientes caractersticas: gram positiva, coco de 0.5 a 1.0
m de dimetro, catalasa negativa, creciendo en el medio Bilis Esculina Azida Agar
a 35C y en Brain Heart Infusion Broth a 45C.
3. PRINCIPIO
Las bacterias gram negativas son inhibidas por accin de la azida de sodio, mien-
tras que las bacterias gram positivas diferentes de los estreptococos ven inhibido su
desarrollo por las sales biliares presentes en el medio.
Los estreptococos crecen rpidamente en el medio Bilis Esculina Azida Agar e hidro-
lizan la esculina, provocando la coloracin marrn del medio, lo que consituye una
reaccin positiva, indicando tolerancia a la bilis y capacidad de hidrolizar la esculi-
na.

Incubadoras para 35 0.5C y para 45 0.5C
Autoclave.
Microscopio.
Equipo para medir pH.
Mecheros.
Tubos de ensayo de vidrio, estriles con tapa de algodn o de rosca.
Termmetros calibrados para controlar las incubadoras.
Porta y cubre objetos.

0 REACTIVOS
Medio de cultivo Brain Heart Infusion Agar.

Medio de cultivo Brain Heart Infusion Broth.
Medio de cultivo Bilis Esculina Azida Agar.
Etanol al 95%.
Agua destilada.
Perxido de hidrgeno al 3%.
0 PROCEDIMIENTO
Repicar colonias tpicas crecidas en el filtro de nitrocelulosa a placas de Petri con

Brain Heart Infusion Agar para obtener colonias aisladas, e incubar a 35 0.5C por
24 a 48 horas.
Transferir una ansada de una colonia aislada en Brain Heart Infusion Agar a tubos
con Brain Heart Infusion Broth e incubar a la misma temperatura por24 horas.
De la misma colonia preparar un frotis para coloracin de Gram y en otro porta ob-
jetos esparcir parte de la colonia que se est analizando para realizarle la prueba de
catalasa. Dicha prueba consiste en colocar una dos gotas de perxido de hidrge-
no al 3% sobre el preparado y observar el desarrollo de burbujas debido al despren-
dimiento de oxgeno. Si se observan burbujas se lee como catalasa positivo.
Posteriormente transferir, por un lado, una ansada del tubo con Brain Heart Infusion
Broth a una placa con Bilis Esculina Azida Agar e incubar a 35 0.5C por 48 horas.
Por otro lado, colocar una ansada del mismo tubo en otro tubo con Brain Heart
Infusion Broth e incubar a 45 0.5 durante 48 horas.
7. RECUENTO
Se consideran como colonias verificadas de pertenecer al grupo de estreptococos

fecales aquellas que son cocos Gram positivos, catalasa negativas, creciendo tanto
en Bilis Esculina Azida Agar a 35C como en Brain Heart Infusion Broth a 45C.
Debe ajustarse el conteo preliminar efectuado sobre la membrana filtrantebasado en

el porcentaje obtenido a partir de las verificaciones positivas de estreptococos feca-
les.

Los resultados se expresan como recuento de UFC de estreptococos fecales

verifica-dos en 100 mL de muestra.
9. BIBLIOGRAFIA

examina-tion of water and wastewater.18 ed. Washington D.C., APHA, AWWA,
WPCF,1992. pp 9-69, 9-73.

3 - BERGEYS MANUAL OF SYSTEMATIC BACTERIOLOGY,1984, Vol.2,

Section 12. pp 1043 - 1071.

Manual de Tecnicas de Laboratorio para Aguas

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Manual de Tecnicas de Laboratorio para Aguas

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

ANALITICOS PARA AGUAS Y EFLUENTES

* FLAAS: Espectrofotometra de absorcin atmica por llama

DETERMINACION DE CONSTITUYENTES INORGANICOS NO-METALICOS

DETERMINACION DE CONSTITUYENTES ORGANICOS

V A) ANALISIS MICROBIOLOGICOS EN AGUA

Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

Direccin Nacional de Medio Ambiente

Esta normativa tcnica se utiliza para la medida de conductividad en aguas y

La conductividad es la capacidad que posee una solucin acuosa de conducir la

El mtodo consiste en la medida directa de la conductividad utilizando una celda de

El anlisis puede ser realizado tanto en campo como en el laboratorio.

5.1 Medidor de conductividad.

6.1 Agua destilada y desionizada.

Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 02041 - 1

6.2 Solucin estndar de KCl 0.01 M:

7.1 Seguir las instrucciones del medidor de conductividad utilizado.

7.2 Determinacin de la constante de la celda:

C, cm-1 = 0.001412 RKCl[1 + 0.019(T-25)]

7.3 Medida de la conductividad:

0 CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS

5888Cuando se mide resistencia de la muestra, la conductividad a 25C es:

02041 - 2 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

8.2 Cuando se mide conductividad de la muestra sin compensacin de

8.3 Ciertos instrumentos poseen compensacin de temperatura y leen la conductivi-

1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examina-

2- ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Methods for Chemical Analysis of

Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 02041 - 3

Direccin Nacional de Medio Ambiente

DETERMINACION DE DUREZA TOTAL

Mtodo titulomtrico con EDTA

Esta normativa tcnica se utiliza para la determinacin de dureza total en aguas

La dureza total se define como la suma de concentracin de iones calcio y magne-

3. PRINCIPIO DEL METODO

Los iones calcio y magnesio forman complejos estables con etilendiaminotetra-ace-

Recolectar la muestra en envases de plstico o vidrio. Acidificar con HNO 3 hasta pH

5.1 Matraz erlenmeyer de 250 mL

6.1 Solucin Buffer:

gar a esta solucin16.9 g de cloruro de amonio (NH 4Cl) y 143 mL de hidrxido

6.2 Indicador Negro de Eriocromo-T (NET):

6.3 Solucin titulante de EDTA 0.01M:

6.4 Solucin estndar de calcio, 1 g CaCO 3/L:

7.1 Titulacin de la solucin de EDTA:

a)Tomar 10.0 mL de solucin estndar de calcio y diluir a 50 mL en un matraz

b)Agregar una punta de esptula de reactivo indicador.

7.2 Titulacin de la muestra:

a)Seleccionar un volumen de muestra que requiera un gasto de EDTA menor

b)Agregar una punta de esptula de reactivo indicador.

10603 - 2 Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996

de color de la solucin de rosado a azul. Completar la titulacin dentro de los

8. CALCULOS Y EXPRESION DE RESULTADOS

1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the

Laboratorio de DINAMA - Edicin 1996 10603 - 3

Direccin Nacional de Medio Ambiente

Mtodo por clculo

La dureza total se define como la suma de concentracin de iones calcio y magne-

3.1 Determinacin de calcio. Mtodo de espectrofotometra de absorcin atmica

3.2 Determinacin de magnesio. Mtodo de espectrofotometra de absorcin at-

Se calcula la dureza como la suma de las concentraciones de los iones calcio y

5. CALCULO Y EXPRESION DE RESULTADOS

Dureza total, mg CaCO3/L = 2.497[Ca] + 4.118[Mg]

1- AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examina-