UNIVERSIDAD AUTNOMA DE

CHIHUAHUA.
FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS.

Estudio de residuos de plaguicidas en frutas y hortalizas en

reas especficas de Colombia.

Tcnicas de separacin.
Beatriz Adriana Rocha Gutierrez.

6 C
291764 De la Rosa Bejarano Ivette Banely.
291879 Cardenas Martinez Karen Alicia.
291884 Carreon Romero Gabriela Atenea.
291921 Carrillo Quezada Luis Andres.
 Estudio de residuos de plaguicidas en frutas y
hortalizas en reas especficas de Colombia.
Los plaguicidas son productos qumicos que se utilizan en la
agricultura para proteger los cultivos contra insectos, hongos, malezas y
otras plagas. Adems de usarse en la agricultura, se emplean para
controlar vectores de enfermedades tropicales, como los mosquitos, y
as proteger la salud pblica. (OMS, 2016)
Aunque las ventajas del uso de plaguicidas son vastos, son
potencialmente txicos, puesto que pueden provocar efectos negativos
en la salud como el cncer o acarrear consecuencias para los sistemas
reproductivo, inmunitario o nervioso si es utilizado de forma
irresponsable. No solo daa la salud humana sino tambin son
altamente contaminantes para el medio ambiente.
Antes de que se autorice su uso, los plaguicidas deben estudiarse
a fin de determinar todos sus posibles efectos para la salud, y los
resultados deben ser analizados por expertos que evalen cualquier
riesgo que los productos puedan entraar para los seres vivos. Hay
plaguicidas extremadamente txicos, como los organofosforados (OP)
(CESA, 2012).
Para la proteccin de la salud, se debe asegurar que se aplique a
los alimentos solamente la cantidad mnima de plaguicida que
realmente es necesaria para combatir una plaga. La cantidad mxima
permitida de residuos de un plaguicida est medida por los Lmites
Mximos de Residuos (LMR), los cuales indican los lmites mximos
permisibles en un determinado producto, basndose en estudios de la
ingesta del alimento y en la toxicidad del plaguicida utilizado (CODEX
Alimentarius, 2017).
Para la determinacin de residuos de plaguicidas en productos de
cosecha, es necesario montar y estandarizar tcnicas analticas,
adecuadas, sensibles, reproducibles, confiables y debidamente
validadas, que permitan su determinacin y cuantificacin; de esta
forma es posible evaluar la calidad y el grado de inocuidad de los
productos que ingiere el consumidor.
Esta investigacin tuvo como objetivo principal el determinar
residuos de plaguicidas organoclorados, organofosforados y piretroides
en cosechas de alto riesgo como lo son la fresa, repollo, uchuva y el
tomate en los departamentos de Cundinamarca y Huila. Demostrando de
manera tangible la presencia de residuos de los plaguicidas ya
mencionados, con la finalidad buscar estrategias para que el agricultor
sea consciente del riesgo que esto conlleva para la salud humana, as
como tambin como el uso adecuado de estos productos.
Materiales y mtodos.
Toma de muestra.
 Se bas en un muestreo aleatorio, se llev acabo el anlisis de 20
muestras de fresas tomadas de municipios diferentes Facatativa (una
finca), Sibat (13 fincas) y Guasca (6 fincas), departamento de
Cundinamarca, los mayores productores de este fruto en Colombia. Se
realiz el mismo procedimiento para las muestras de repollo en el
municipio de Madrid (5 fincas), departamento de Cundinamarca.
Para el muestreo de uchuva se utiliz un mtodo estratificado
desproporcionado, con ocho extractos de seis fincas cada una, se tom
una muestra por cada extracto.
Las muestras de tomate se recolectaron en el municipio de
Gigante, departamento de Huila, mediante un muestreo simple aleatorio
sin reemplazo, tomando un total de 10 muestras correspondiente a 10
fincas del municipio.
En todos los casos, la muestra de laboratorio fue de 1 Kg
proveniente por cuarteo de una muestra de campo de entre 6 y 8 Kg. Al
llegar la muestra al laboratorio, se procedi a su preparacin retirando
restos de tejidos tales como spalos, las hojas en mal estado y lavado
con agua de grifo. Las muestras se almacenaron a -20C en bolsas de
polietileno.
Procedimiento de extraccin y limpieza.
Teniendo en cuenta las caractersticas de la matriz y de los
analitos a determinar, se aplic una misma metodologa de extraccin
para compuestos tales como organoclorados, organofosforados y
piretroides, de manera que pudieran determinarse por cromatografa de
gases. La metodologa aplicada se obtuvo como resultado de una
evaluacin y adaptacin de las tcnicas usadas en diferentes
laboratorios de control a nivel internacional.
Una vez que la muestra fue homogenizada se realiz una
extraccin con acetato de etilo, debido a su baja miscibilidad con el agua
y por lo tanto no son necesarias particiones adicionales. Sin mencionar
el bajo porcentaje de toxicidad en combinacin con su baja solubilidad
con el agua permite una buena penetracin en clulas vegetales.
La limpieza para este tipo de compuestos, organoclorados,
organofosforados y piretroides, se realiz mediante GPC (cromatografa
de permeacin en gel) para eliminar interferentes de alto peso
molecular que contienen las matrices en estudio. La limpieza emplea
una fase mvil compuesta por acetato de etilo y ciclohexano, solventes
de baja toxicidad. Para el caso de repollo se llev a cabo una limpieza
adicional mediante una minicolumna empacada con silicagel y de la cual
se eluyeron los plaguicidas con acetato de etilo. El procedimiento se
muestra en la Figura 1.
Proceso de separacin, identificacin y cuantificacin.
Una vez realizada la extraccin y limpieza de cada una de las
matrices, se procedi a la separacin e identificacin de cada uno de los
plaguicidas mediante cromatografa de gases con detector de
microcaptura electrnica (-ECD) y detector de nitrgeno-fsforo (NPD)
para los plaguicidas organoclorados, organofosforados y piretroides.
Instrumentacin y condiciones cromatografas.
Se utiliz un cromatgrafo de gases Hewlett-Packard 6890 Plus
(Palo Alto, CA, USA) con control electrnico de presin, equipado con un
detector de microcaptura electrnica -ECD y un detector de nitrgeno-
fsforo NPD, acoplados en paralelo mediante un divisor de flujo (Y) de
borosilicato al final de la columna capilar HP-5 (30 m x 0,35 mm d.i., df
0,25 m).
Las condiciones cromatogrficas comunes utilizadas en el anlisis
de los plaguicidas en las diferentes matrices fueron las siguientes:
Volumen de inyeccin 2 L (modo splitless) pulsado con un pulso
de presin.
Nitrgeno como gas de transporte en modo de presin constante.
El programa de temperatura utilizado para cada matriz fue
diferente puesto que los plaguicidas evaluados eran diferentes.
Todas las muestras se inyectaron en acetato de etilo. En el proceso
de extraccin y limpieza se utilizaron:
Homogenizador Stephan Blender 2010.
Homogenizador de alta velocidad Ultraturrax T25 (IKA).
Equipo de GPC KL-SX-3 de Redemend Bt, empacado con un
polmero de estireno-divinilbenceno con 3% de entrecruzamiento.
Las condiciones de este equipo fueron: solvente de elucin acetato
de etilo-ciclohexano (1:1); flujo de elucin 1 ml/min.
Materiales de referencia, reactivos y soluciones.
 Muestras de referencia de plaguicidas con porcentajes de pureza entre
97-100% se obtuvieron del Dr. Ehrensthorfer (Augsburg, Alemania).
El acetato de etilo y el ciclohexano con grado residuos de plaguicidas;
bicarbonato de sodio y silica gel (60-200 mesh) con grado analtico, y
sulfato de sodio anhidro con grado residuos, se obtuvieron de J.T. Beaker
y Mallinckrodt.
Soluciones estandar de los materiales de referencia en concentracin
cercana a 1.000 g/ml en acetato de etilo, las cuales se almacenaron a
20o C.
Muestras blanco.
Para la obtencin de las matrices blanco, exentas de plaguicidas, se
obtuvieron de fincas donde se cultivan productos orgnicos. Estas matrices se
analizaron cromatograficamente para verificar su utilizacin como blancos.
Resultados y discusiones.
Se seleccionaron los plaguicidas de alto riesgo como analitos en la muestra a
evaluar, se determin simultneamente por cromatografa de gases con
detector ECD y NPD plaguicidas de tipo organoclorados, organofosforados y
piertroides. Se aplicaron varios parametros para validar la metodologa
empleada, como lo fueron la especificidad y selectividad con extractos blancos
exentos de plaguicidas inyectados en las matrices, la repetitividad y precisin
se evalu con diferentes rplicas de la misma metodologa de CG, expresando
los resultados como coeficientes de varianza para saber si exista dispersin en
los datos. Se detect una mayor dispersin en los compuestos detectados por
NPD por la inestabilidad en el detector y asimetra de los picos que
presentaban una alta polaridad, todas las muestras mostraron coeficientes de
varianza menores a 21% con algunas excepciones como en el tomate con un
CV de 21% y el repollo con un CV mayor a 21% que se debe a su matriz difcil.
Mientras tanto la repetibibilidad oscilaba entre 30-33%.
Efecto matriz.
El efecto matriz consiste en que los componentes de la matriz como las ceras o
pigmentos no son separados de los analitos en el proceso de limpieza y tienen
la capacidad deproteger a los plaguicidas de la adsorcin/descomposicin
cataltica en el inyector, permitiendo que una mayor cantidad de muestra se
transfiera a la columna. Se realizaron pruebas estadsticas que demostraron
que la mayora de los compuestos en las matrices presentaban el efecto
matriz, por lo tanto se decidi realizar curvas de calibracin con extractos de
matriz fortificado con cada una de las mezclas de plaguicidas.
Las curvas fueron hechas de tal forma que el LMR estuviera en los rangos de
concentracin detectables y fueron moldeadas segn el mtodo de mnimos
cuadrados simple. Aplicando T-Studen en la pendiente y regresin grafica con
desvi de la linealidad mediante el anlisis ANOVA, se concluy que la curva de
calibracin era lineal en las diferentes matrices y poda ser empleada para
obtener resultados de concentracin proporcionales.
Limites crticos.
Se utilizaron las curvas de calibracin en extracto de matriz, las metodologas
fueron lo suficientemente sensibles para determinar concentraciones de g/kg
para la mayora
de los plaguicidas de inters. En repollo se encontr que no es posible
cuantificar monocrotofos a concentraciones cercanas a 0,2 mg/kg, se opt por
tener una CMD de 0.61 mg/kg.
Anlisis de las muestras.
En las fresas del municipio de Facatativa se encontraron residuos de malation a
nivel de trazas que no superan el LMR, en Sibate se encontraron clorpirifos,
dimetoato y profenofos a niveles cuantificables pero de trazas y por ltimo en
Guasca se encontraron concentraciones cuantificables de captan pero tambin
por debajo del LMR .
En repollo, no se encontr ningn residuo de plaguicida en el municipio de
Madrid.
En uchuva no se encontr tampoco ningn residuo de los 13 plaguicidas
evaluados en las muestras analizadas.
Por ultimo en el tomate se encontr clorpirifos en el 50% de las muestras
donde dos muestras presentaban concentraciones que sobrepasaban el LMR,
propagite fue el segundo plaguicida ms frecuente pero estaba debajo del LMR
estando presente en dos muestras, Triflumuro presento residuos en una sola
muestra a concentraciones por debajo del LMR y por ultimo -ciflutrina y
metamidofos se encontraron a nivel de trazas en algunas fincas y en otras no
fueron detectables.
Las muestras positivas se analizaron por cromatografa de gases acoplada a
espectrometra de masas verificando por medio del espectro de masas del
clorpirifos la confirmacin de las dos muestras positivas en tomate.
Conclusin.
No se encontr la presencia de residuos de plaguicidas que sobrepasan los
limites mximos de residuos en el 95.4% de las muestras. En dos muestras
(4.7%) de tomate, fue positiva la presencia de plaguicidas de clorpirifos que
sobrepasan los lmites mximos de residuos.