Prctica N7

Ttulo: Test Coombs Directo-Prueba en tubo

Objetivo de aprendizaje: Al terminar la prctica el estudiante ser capaz de:

Demostrar la presencia de anticuerpos absorbidos a las clulas rojas en vivo

(prueba directa), mediante la tcnica en tubo.
Realizar la prueba de coombs directo siguiendo los protocolos adecuados.
Identificar la presencia de aglutinacin.

1. Introduccin

El objetivo de la prueba directa de coombs es determinar la unin antgeno-anticuerpo

producida in vivo, y la presencia de IgG y/o complemento (C3b/C3d) sobre la superficie de
los hemates in vivo (Buelvas Corts,Armado; Muiz-Daz,Eduardo; Len de
Gonzlez,Gabriela, 2014). Se emplea en el diagnstico de la anemia hemoltica
autoinmune, eritroblastosis fetal y reacciones transfusionales por incompatibilidad
eritrocitaria.

Grfico N1: Prueba de Coombs Directa

(Buelvas Corts,Armado; Muiz-Daz,Eduardo; Len de Gonzlez,Gabriela, 2014)

2. Prctica

2.1 Reactivos

El suero anti-humano, llamado suero de Coombs se prepara por medio de inyecciones

repetidas a los animales con sueros humanos mezclados del grupo 0, despus de
eliminar hemolisinas y aglutinas no especficas se agrega al suero cido de sodio al 0.1%
como conservador. El suero deber mantenerse entre 2 y 8C mientras no est en uso,
para evitar su desnaturalizacin y contaminacin (DIAMED, 2010).
La prueba de Coombs en definitiva se usa para demostrar la presencia de los anticuerpos
que se han fijado en las clulas del paciente in vivo.

2.2 Materiales:

Tubos de vidrio
Centrifuga serolgica
Pipetas pasteur
Solucin Salina al 0,9%
Reactivo de Coombs

3. Procedimiento:

1) Agregue dos gotas de las clulas a probar

2) Lavar con solucin salina al 0,85% a 3000 rpm durante 1 minuto. Efecte este
lavado tres veces.
3) Despus del ltimo lavado, decante toda la solucin salina.
4) Agregue dos gotas de suero anti-humano (Coombs)
5) Mezcle bien y centrifugue a 3000 rpm por 15 segundos.
6) Resuspenda los eritrocitos de los tubos y lea el resultado.

3.1 Interpretacin

La aglutinacin de los eritrocitos del paciente, por el anti-humano IgG(Coombs), indica

que estos se encontraban sensibilizados por anticuerpos.

Definicin de la potencia de la reaccin

Cuando se leen los resultados es necesario que diferencie la potencia de las reacciones;
en general se utilizan por puntajes:

Aglutinacin completa de todas las clulas

4+
Aglutinacin de la mayora de clulas

3+
Aglutinacin a simple vista

2+
 Positividad dbil

1+

No se observa aglutinacin

Negativo
Lisis de glbulos rojos (hemolisis)

Informe de Laboratorio: Siga el formato de Informe de Laboratorio (Anexo 3):

1) Realice un reporte y analice los resultados obtenidos.

Cuestionario:

2) Que diferencia existe entre la prueba Du y Coombs directo?

3) En qu casos utilizamos la prueba Du y en qu casos el test de Coombs Directo?
4) Que fundamento tiene la prueba de Coombs directo en tubo?
5) Cul es el fundamento de la prueba de Coombs en gel?
6) Cul es la diferencia de reactivo de Coombs poliespecfico y especfico?

Respuestas deben sustentarse en artculos cientficos.

Bibliografa
Utilizar el formato APA: Usar el siguiente link.
http://tutorialsibusach.pbworks.com/w/page/22541880/Estilo%20APA