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EXTRACCIN DEL ADN A PARTIR DE LA CEBOLLA CABEZONA

RESULTADOS
Al agregar la solucin buffer en el extracto de cebolla este torna a color
amarillo se mezcl suavemente, se filtr, centrifugo y se adiciono
isopropanol frio observando en la parte superior del tubo de ensayo unas
fibras blancas alargadas.

Al retirar la fibra de ADN, se coloc en un porta objeto y se le adicion azul


de metileno luego se coloc el cubre objetos para proceder a observar en el
microscopio se utiliz todos los objetivos de aumento 4x, 10x, 40x, 100x.

Hebra de ADN
Bloques de
construccin del ADN
Doble cadena de ADN Doble helice del ADN

Bases
nitrogenadas

Esqueleto
5
5 Azcar y grupo
fosfato

3
no se si estas partes
estn bien lo hice de acuerdo a las imgenes anteriores con la doble
cadena de adn
ANALISIS

Para extraccin del ADN se utiliz una licuadora, la cual rompi las clulas
de la cebolla para acceder al ADN, la solucin Buffer (sal, bicarbonato de
sodio, shampoo, agua)fue de gran importancia; pues la sal (NaCl) hizo que
los iones salinos fueran atrados hacia la carga negativa del ADN y poder
rodear esta molcula, impidiendo que se mezclaran con otros restos o
componentes celulares; el bicarbonato de sodio (NaHCO 3) neutraliz la
acidez de la disolucin consiguiendo un pH neutro, el shampoo al ser un
desengrasante y la membrana celular al estar compuesta mayormente de
lpidos, as como la membrana nuclear provoc una lisis en ambas
membranas liberando el ADN. Despus de esta liberacin se hizo una
centrifugacin, la cual se gir una solucin de ADN y luego lo precipit; por
ltimo se agreg isopropanol que produjo que el ADN se desenrollara y
precipitara en la interfase esto ocurri porque el ADN, a diferencia de otros
componentes de la clula, no es soluble en alcohol, lo cual nos permiti
visualizar las cadenas de esta molcula como unas fibras blancas y poder
extraerlo con facilidad.

La fibra de ADN se puso en un porta objetos y se le agreg azul de metileno


(cloruro de metiltionina), este colorante se utiliz pues con frecuencia son
molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad
con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como el
ADN; por ello la fibra tomo una tonalidad azul oscuro. Despus se coloc un
cubre objetos y se llev al microscopio observando una especie de cierre
de cremallera, la forma viene dada por los puentes de hidrogeno que unen
ambas mitades, y por los grupos azucar-fosfatados que enlazan la
secuencia de nucleotidos.

CUESTIONARIO

Qumicamente que permite la separacin del ADN

Lo que permite la separacin del ADN de las protenas y lpidos


son mediante solventes orgnicos y ciclos de centrifugacin
(Figura 2.1A). Se utiliza la fuerte tendencia hidroflica de los
grupos fosfato para separarlos en medios acuosos, mientras que
las protenas y los lpidos se separan en solventes orgnicos
(Sambrook et al. 1989). La fase acuosa y la orgnica se separan
por centrifugacin lo que permite aislar al ADN. Los solventes que
se usan frecuentemente son el fenol, el cloroformo y el alcohol
isoamlico (Stulnig y Amberger 1994). Estos reactivos contaminan
fcilmente el ADN, por lo que se debe evitar acarrearlos en el
proceso de purificacin.
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/extracc
ion.pdf

Por qu no se utiliz flores de Jardn?


No se utiliz flores de jardn ya que las plantas tienen tres diferentes
ADN:
* la clula tiene su propio genoma en su ncleo,
* las mitocondrias tienen su propio genoma,
* los cloroplastos tienen su propio genoma.
Tanto las mitocondrias como los cloroplastos se reproducen dentro
de la clula y ah es cuando se dividen haciendo que una clula
siempre tenga mitocondrias y cloroplastos. El ADN est ordenado en
cromosomas y cada cromosoma es una sola molcula de ADN lineal,
empaquetada. En cambio, las mitocondrias y los cloroplastos tienen
genoma de tipo bacteriano: poseen una molcula de ADN circular
por plstido, al igual que sus ancestros que eran bacterias, por ello
su proceso de extraccin tarda mucho.
http://www.plantasyjardines.es/el-adn-de-las-plantas/

Qu papel juega el shampoo y el alcohol en la extraccin del ADN?

El shampoo permite la emulsin de los lpidos presentes en las


membranas celulares y seguidamente provoca su ruptura. De esta
manera el shampoo rompe la membrana celular y la membrana
nuclear, al igual que todas las membranas de los organelos, como
las que rodean a las mitocondrias y cloroplastos. Cabe sealar, que
el shampoo pasa con facilidad por la pared celular, debido a que sta
no se le otorga la funcin de permitir el pase o no de sustancial al
medio celular. Adems ste permite que las protenas asociadas al
ADN, de gran longitud se fraccionen en cadenas ms pequeas y se
puedan separar.
http://es.calameo.com/read/001644667dee77767eeb7

El alcohol al ser menos denso que el agua se sita en la capa


superior. Precipitando en la interface entre el alcohol y el agua el
ADN, y ste al encontrarse con el alcohol se desenrolla, ya que el
ADN no es soluble en este lquido. Por otro lado, la parte acuosa,
que se ubica en la capa inferior, contiene protenas, lpidos, y otros
componentes de la clula. De esta manera, el alcohol asla al ADN.
Hacer un cuadro comparativo entre el mtodo de extraccin utilizado
en laboratorio y los utilizados en biologa molculas computacional
profesional.

FENOL- Reaccin en CHELEX SALTING-


CLOROFORM cadena de OUT
O polimerasa pcr
Tecnica Es la Tcnica Tcnica de
organica amplificacin del inorgnica tipo
(solventes) adn in vitro por inorganica
medio de la
polimerizacin
de cadena de
ADN utilizando
un termcicladot
ADN muy a partir de una No se pierde Utiliza
buena calidad muestra pequea ADN reactivos
y cantidad de ADN se puede bajos en
obtener una toxicidad
cantidad
considerable para
el estudio.
Pptidos y se puede Previene la Permite
protenas son amplificar en adn degradacin visualizar la
extraidas en de cualquier del ADN por malla del
la fase organismo vivo o quelacion de adn
organica muerto los iones
(fenol) metlicos
despus se durante la
realiza ebullicin 5%
digestin con
proteinasa K
El cloroformo Aplicaciones en Tiene Requiere
permite que medicina forense,copolimeros una mayor
todo el fenol diagnostico, de estireno cantidad de
pueda ser anlisis dibenzeno- muestra
lavado prenatales iones
iminodiacetat
o
Reactivos La deteccin se Los reactivos Tiene cuatro
altamente realiza mediante no son pasos: lisis
txicos corrido txicos celular,
electrofotomtric extraccin,
o precipitacion
y
resuspensio
n
Perdida La El ADN El
significativas polimerizacin aislado es de precipitado
de ADN y puede tener cadena formado se
mucho ms si errores al sencilla, separa por
esta sintetizar el ADN utilizado en centrifugac
degenerado PCR n y luego se
puede
extraer el
ADN de la
disolucin
acuosa
mediante la
adicin de
alcohol, por
precipitacin
.

http://es.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn
Describa 2 mtodos de extraccin de ADN diferente utilizado en la
prctica y de 3 ejemplos diferentes donde se aplique la extraccin
del ADN.

Mtodo de extraccin de ADN con yoduro de sodio como agente


caotrpico en un nico tubo
La compaa Wako pone a disposicin de los investigadores y
empresas varios kit de ADN que usan yoduro de sodio como agente
caotrpico, que tienen la ventaja de que la extraccin se realiza en
un nico micro tubo de centrifugado. El yoduro de sodio adems de
provocar la lisis celular rompe la capa de hidratacin que rodea el
ADN y logra que las cargas negativas de los grupos fosfatos del ADN
queden ms expuestas. En estos kits despus del tratamiento de la
muestra con yoduro de sodio en el mismo tubo se adicionan
detergentes aninicos como es el caso del N-lauril sarcosinato de
sodio, proteinasa K y/o otros reactivos que permiten separar las
protenas y lpidos contenidos en las muestras biolgicas del ADN.

Lisis por ruptura mecnica y extraccin con disolventes


orgnicos
Si se opta por realizar el lisado de las clulas mediante un proceso
mecnico hay que tener en cuenta la posibilidad de ruptura de las
molculas de ADN que se intentan separar, por lo que este debe
bastar para lograr la lisis de las clulas pero no ser muy agresivo
para proteger el ADN. Este mtodo puede ser usado para extraer
ADN de material crudo, liofilizado o congelado, que puede romperse
con un mortero, por congelacin-descongelacin o usando
ultrasonidos. El lisado de clulas se puede extraer con cloroformo,
alcohol isoamlico o fenol, siendo las protenas y otros componentes
de la clula solubles en el disolvente orgnico, por lo que de esta
forma se logra la separacin de los cidos nucleicos. Este mtodo se
puede usar para molculas de ADN de alto peso molecular,
obteniendo buenos rendimientos de molculas relativamente puras,
siempre teniendo en cuenta que hay que controlar el pH de la fase
acuosa y la concentracin de sales, que son los factores que
aseguran una buena separacin. Las desventajas de este mtodo
son el uso de disolventes orgnicos dainos para la salud humana y
que pueden quedar como trazas en la muestra de ADN y luego
actuar como interferentes en tcnicas como el PCR, que es largo, en
ocasiones puede dar rendimientos poco reproducibles y requiere de
varios trasvases que aumentan la posibilidad de contaminacin de la
muestra. http://www.wakolatinamerica.com/blog-
reactivos/post/10-metodos-de-extraccion-de-adn/

Otros ejemplos donde se aplica la extraccin del ADN es en Cabello


con races, uas, semen, tomate entre otras.

CONCLUSIONES

Los reactivos (detergente, la sal, el alcohol y el agua destilada) juegan un


papel importante pues tienen ciertas funciones en conjunto que hacen
posible la extraccin del ADN
La extraccin de ADN requiere de un proceso secuencial, en el cual se trata
de aislar a esta molcula de los dems componentes de la clula

El ADN es una molcula muy larga y tiene a agruparse, esto permite


extraerla y visualizarla con facilidad.
Utilizando el microscopio y agregndole azul de metileno a la muestra de
ADN se puedo observar las bases nitrogenadas y el esqueleto azcar
grupo fosfatos.