PRCTICA N 8

FISIOLOGA INMUNOLGICA

EXPERIMENTO N 1: TIPIFICACIN SANGUNEA

1. PROCEDIMIENTO:
1.- Se limpia el dedo con alcohol y algodn.
2.- Se pica el dedo con la lanceta.
3.- Sobre un portaobjetos limpio, previamente marcado, colocar separadamente
tres gotas de sangre (gotas de aproximadamente 0.5 cm. de dimetro).
4.- Sobre una gota de sangre poner suero tipificador anti-A, en otra gota poner
suero tipificador anti-B y sobre la tercera gota poner suero tipificador anti Rh
(D).
5.- Mezclar lentamente con un aplicador de madera, haciendo crculos y
observar la existencia o no de aglutinacin (el tiempo de observacin es de
aproximadamente 1 minuto).
6.- Determinar la aglutinacin e interpretar el resultado. Puede visualizarse en
un microscopio en caso de que la reaccin sea muy dbil.
7.- Determinar la frecuencia de cada grupo sanguneo en la clase y
compararlas con las frecuencias establecidas.
2. RESULTADOS

N ESTUDIANTE SISTEMA ABO SISTEMA

Rh
A B AB O Rh+ Rh-
1 Brayan X X
2 Jennifer X X
3 Bertha X X
4 Juanjos X X
5 Renzo X X
6 Marco X X
7 Arroyo X X
8 Bartolini X X
9 Chilon X X
10 Chumioque X X
11 Delgado X X
12 Cueva X X
13 Muro X X
14 Reque X X
15 Jery X X
16 Vidarte X X
17 Naomi X X
18 Diego X X
19 Dionella X X
20 Lizeth X X
21 Ana X X
22 Sergio X X
23 Katherin X X
TOTAL 2 1 0 20 23 0
FRECUENCIA 8.7% 4.35% 86.95% 100%

3. DISCUSIN:
En los resultados que obtuvimos notamos que todos los estudiantes poseemos
un grupo Rh+ ya que presentaron aglutinacin para el Antgeno D y referente a
la frecuencia de los diferentes grupos del sistema ABO: el 86.95% son O+, un
8.7% son A, un 4.35% son B, y la frecuencia de alumnos con grupo sanguneo
AB fue de 0%.
Guyton menciona que a nivel mundial la frecuencia relativa de los diferentes
tipos sanguneos: en el grupo O es de 47%, en el grupo A de 41%, el grupo B
es de 9% y el grupo AB de 3%. Lo que concuerda con lo que obtuvimos ya que
el grupo O es el mas frecuente a nivel mundial, seguido del A+, y el AB es el
mas raro y menos frecuente. Ademas el Rh+ es mucho ms frecuente que el
negativo y eso tambin lo corroboramos con todos los alumnos ya que todos
eran Rh+.

4. CONCLUSIN:

La determinacin del grupo sanguneo, determinacin del grupo sanguneo

ABO o determinacin del Rh es un mtodo para decirle cul es el tipo
especfico de sangre. El tipo de sangre que se tiene depender de si hay o no
ciertas protenas, llamadas antgenos, en sus glbulos rojos.
El sistema del tipo sanguneo Rh tambin es importante cuando se hace una
transfusin de sangre. La principal diferencia entre el sistema O-A-B y el
sistema Rh es la siguiente: en el sistema O-A-B, las aglutininas responsables
de producir las reacciones transfusionales aparecen de manera espontnea,
mientras que en el sistema Rh, las aglutininas casi nunca aparecen de forma
espontnea.

EXPERIMENTO N2: SEROLOGA PARA Ags VHB

1. PROCEDIMIENTO:
1. Retire el kit de su envoltura y colquelo en la superficie plana y limpia,
etiquetar para cada alumno.
2. Realice una puncin con la lanceta en la yema de dedo limpio y obtener
una gota de sangre que ser dispensada en el pocillo de muestra.
3. Adiciones una gota de diluyente de muestra inmediatamente.
4. Realice la lectura a los 15 minutos.
2. RESULTADOS:
ALUMNO VACUNA VHB RESULTADO
Juan Jos 2015 NEGATIVO
Bertha 2015 INVALIDA
Jennifer 2015 INVALIDA
Brayan 2015 NEGATIVO

3.DISCUSIN:
En este experimento quisimos detectar la presencia del Ags VHB en sangre de
donantes.
La reaccin ser positiva cuando en el kit se coloree en las bandas C y T , ser
negativo cuando solo coloree en la banda C(control) y ser invalido cuando
solo haya coloracin en la banda T o no sale nada debido a que el kit vino
fallado.
De acuerdo a esto se obtuvo dos resultados negativos porque solo sali
coloreada la banda en el control y tuvimos dos invalidos debido a que los kits
vienen fallidos.
Por teora se sabe que la deteccin de HBs Ag en sangre indica la presencia de
una infeccin activa. Se secretar durante la replicacin vrica. El HBs Ag se
presentar continuo osea + en una infeccin tanto aguda como crnica y en
portador inactivo.

4.CONCLUSIN:
El VHB es el principal representante de los hepadnavirus, infecta el hgado y en
menor medida, los riones y el pncreas del ser humano.
El VHB puede provocar una enfermedad aguda o crnica, sintomtica o
asintomtica. Y tienen un periodo medio de incubacin de aprox. 3 meses tras
el cual aparecen sntomas de ictericia progresiva.
Ya que hubo una inmunizacin por parte de los alumnos previamente es que no
hubieron resultados positivos para esta prueba.
EXPERIMENTO 3: (PhysioEx) ENSAYO INDIRECTO DE
INMUNOABSORCIN LIGADO A ENZIMAS (ELISA)

1.RESULTADOS:

TABLA RESULTADOS DE ELISA INDIRECTA

DENSIDAD OPTICA RESULTADO DEL TEST
MUESTRA VIH
Paciente A 0.054 Negativo
Paciente B 0.432 Indeterminado
Paciente C 1.99 Positivo
Control Positivo 1.624 Positivo
Control Negativo 0.154 Negativo

2.DISCUSIN:
La densidad ptica tambin conocida como absorbancia se define como la
relacin logartmica entre la intensidad de la luz que incide sobre una muestra y
la intensidad de esa misma luz que es transmitida a travs de esa muestra. Y
es la que nos dar los valores y nos permitir determinar los resultados finales
del test de ELISA.
El resultado del test VIH depender de los siguientes valores: al ser < 0,300
ser negativo para VIH-1, al estar entre 0,300 y 0,499 ser indeterminado y un
resultado > 0,500 ser positivo para VIH-1.
En el siguiente experimento se obtuvo 2 resultados negativos ,2 positivos y uno
indeterminado, lo que indica que solo el paciente C y el control positivo tendrn
resultados positivos para VHI-1.
En la del paciente B que sali indeterminado se deber repetir la prueba.
Una de las grandes ventajas de la tcnica ELISA es la posible automatizacin
de la lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha automatizacin se puede
conseguir con un simple colormetro. Los resultados finales de la lectura
colorimtrica se reflejan mediante valores de absorbancia o densidad ptica
que se obtendrn a la longitud de onda ms adecuada para la coloracin final
alcanzada.
3.CONCLUSIN:
El ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzimas es utilizado para detectar la
presencia de un antgeno o un anticuerpo. Algunos ejemplos incluyen:
diagnstico de infeccin por VIH, test de embarazo, y medicin de citocinas o
receptores solubles en sobrenadantes celulares o suero.
Si la prueba est diseada para detectar un antgeno o antgenos es un ELISA
directo, porque est buscando directamente la sustancia extraa. Un ELISA
indirecto se disea para detectar los anticuerpos que el paciente ha creado
contra el antgeno.
El Elisa indirecto es un mtodo ampliamente utilizado para la determinacin de
Anticuerpos, ya que se necesitan slo unos pocos conjugados para analizar Ac
de una gran variedad de enfermedades.

CUESTIONARIO 1

1. Describe como puedes afirmar que es un Elisa indirecto en lugar

de un Elisa directo?
Es un Elisa indirecto ya que se quizo detectar la
presencia de anticuerpos creados contra el
virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). En
comparacin del Elisa directo que su uso
comn es en la prueba de embarazo, que
detecta gonadotropina corinica humana
(hCG), una hormona presente en la orina de
mujeres embarazadas.

2. Indica a que se ha unido el Ac secundario y por qu

Se une a una enzima que se une a la regin constante del anticuerpo
primario, si est presente en la muestra del paciente. Ya que la regin
constante de un anticuerpo tiene la misma secuencia de aminocidos en los
anticuerpos de una misma clase
 CUESTIONARIO 2

1. La ausencia de Ags VB en la sangre de una persona que estuvo

expuesta al virus B es suficiente para descartar la infeccin o
estado de portador?

No es suficiente, ya que este antgeno de superficie aparece al final del

periodo de incubacin. Recin a las 6 semanas despus de la infeccin
viral se detectan HBsAg y marcadores de replicacin viral activa (HBeAg
y HBV DNA) previamente al comienzo de los sntomas clnicos. As que
la lectura puede dar negativo para el antgeno de superficie en este
periodo de incubacin.

2. Cmo estimulan los linfocitos T a los linfocitos B para el cambio

de isotipo y maduracin de afinidad de las inmunoglobulinas?
Cules son las citoquinas que promueven la sntesis de cadenas
pesadas psilon, gamma y alfa?

Los linfocitos B una vez activados se diferencian clulas plasmticas,

que son las verdaderamente productoras de Anticuerpos solubles, y que
se caracterizan porque pueden permanecer aos produciendo
anticuerpos desde los lugares donde normalmente se asientan, que es
la pulpa roja del bazo, ganglios linfticos y la propia mdula sea.
Durante el proceso madurativo de la respuesta inmune B, se produce un
cambio de isotipo de las cadenas pesadas de las Inmunoglobulinas, de
tal forma que los linfocitos que originariamente expresan en su
membrana mIgM o mIgD, pasan a sintetizar IgG, IgA IgE. En este
proceso intervienen citocinas, IL4, IL5 e IFN, producidas por
linfocitos T. Por otra parte tras la activacin de los linfocitos B, tambin
se producen clulas memoria B, que se caracterizan por permanecer
largo tiempo, muchos aos, en el organismo y cuando se activan
producen IgG o IgA o bien IgE que son inmunoglobulinas de la
respuesta inmune secundaria.
Es de destacar que estas Inmunoglobulinas que se producen como
consecuencia de la activacin de las clulas memoria, siguen
expresando el mismo tipo de regiones variables. Esto hace que sigan
reconociendo los mismos antgenos aunque sean de distinto isotipo que
las clulas originarias pero con un aumento muy significativo de la
afinidad de estos anticuerpos con sus antgenos, debido sobre todo, a
las mutaciones espontaneas de los genes que las codifican.
 3. Qu clula de la respuesta inmune adaptativa es responsable de la
destruccin de los hepatocitos infectados por el virus de hepatitis?
Cules son los mecanismos de lisis celular?

La particularidad que tiene el VHB es su escaso efecto citoptico sobre

el hepatocito: el virus no suele destruir a las clulas que afecta, sin
embargo, es la respuesta inmune la que desencadena tras la infeccin y
encargada de la eliminacin del agente patgeno.
Para ambos brazos del sistema inmune adaptativo, anticuerpo y los
linfocitos T.
Mecanismos de lisis celular:
Respuesta de los linfocitos T citotoxicos con restriccin CMH
clase 1 dirigida contra los HBc Ag y HBe Ag sobre hepatocitos
infectados.
Efecto histopatolgico directo de expresin de HBcAg en clulas
infectadas.
Expresin a gran nivel y la secrecin ineficiente de HBsAg.
Coinfeccin con el virus de la Hepatitis D

REFERENCIAS BIBLIGRAFICAS:

Hall, G. y. (2011). Tratado de Fisiologa mdica. Espaa: Barcelona.

P. R. MURRAY. Microbiologa Mdica. 2006. Mosby (Elsevier Science)

http://www.bmglabtech.com/es/tecnologico/modos-de-
deteccion/absorbancia/

http://www.kardiagnostx.com/documentos/Hemato_35.pdf