TEORA CELULAR

La clula es la unidad de vida ms pequea. Es la unidad anatmica y fisiolgica de todos los

seres vivos. Dos cientficos alemanes el botnico Mattias Schleiden (1804-1881) y el
zologo Theodor Schwann (1810-1882) fueron los primeros en sealar que " Los cuerpos de
las plantas y de los animales estn compuestos por clulas y por productos celulares "
enunciando el postulado inicial de la Teora Celular

Posteriormente, Rudolph Virchow (1821-1902) amplio la Teora Celular y afirm: " Todas las
clulas proceden de otra preexistente" . Por lo tanto, las clulas no surgen por generacin
espontnea a partir de materia inanimada.

Otra importante conclusin de la Teora Celular afirma que todas las clulas actuales,
tienen un origen comn. La evidencia ms importante, sobre el origen comn de todas las
formas celulares, radica en las similitudes bsicas de sus estructuras y principalmente de
su composicin molecular.

Tabla 1.2 Postulados de la Teora Celular

1- Todos los seres vivos estn formados por clulas y productos
celulares (unidad anatmica)
2- Las funciones de un ser vivo son el resultado de la interaccin de
las clulas que lo componen (unidad fisiolgica)
3- Toda clula slo puede tener origen en una clula progenitora.
4- Toda clula tiene la informacin hereditaria del organismo del
cual forma parte, y esta informacin pasa de una clula progenitora
a una clula hija.

PROCARIOTAS (sin ncleo verdadero) y EUCARIOTAS (con ncleo).

Tabla 1.3- Principales caractersticas comunes entre clulas

eucariotas y procariotas
1- En ambos tipos celulares el ADN es el material gentico.
2- Ambos tipos celulares poseen membranas plasmticas como lmite
celular.
3- Poseen ribosomas para la sntesis proteica.
4- Poseen un metabolismo bsico similar
5- Ambos tipos celulares son muy diversos en formas y estructuras.

Las clulas procariontes poseen una caracterstica nica, una pared de peptidoglicanos, un
gran polmero de glcidos y aminocidos.

Tabla 1.4- Caractersticas Diferenciales entre el Modelo Celular

Procaritico y Eucaritico
Caracterstica Clula Procaritica Clula Eucaritica
Ncleo No posee membrana Posee membrana
nuclear nuclear
Cromosomas Un nico cromosoma Posee uno o ms
circular y desnudo cromosomas lineales
unidos a protenas
(cromatina)
ADN Puede estar presente Presente en orgnulos
extracromosmico como plsmidos
Orgnulos No posee Mitocondrias y
citoplasmticas cloroplastos, (los
cloroplastos presentes
slo en clulas
vegetales)
Membrana plasmtica Contiene las enzimas Semipermeable, sin las
de la cadena funciones de la
respiratoria, tambin membrana procaritica
puede poseer los
pigmentos
fotosintticos
Sistema de No posee Presenta REG, REL,
endomembranas Golgi, lisosomas,
vacuolas y vesculas.
Pared celular Capa rgida de No poseen pared de
peptidoglucano peptidoglucano. Pueden
(excepto micoplasmas) poseer una pared de
celulosa o quitina

Citoesqueleto Ausente Presente. Formado por

filamentos proteicos.
Exocitosis y Ausente Presente
Endocitosis
Ribosomas 70 S en el citoplasma 80 S en el retculo
endoplsmico y en el
citosol
Divisin Fisin Binaria Mitosis - Meiosis
(amitosis)
Tamao 0,2 a 10 mm Siempre superior a
6 mm

ESTRUCTURA DE LAS CLULAS PROCARITICAS

ESTRUCTURA DE LAS CLULAS EUCARITICAS

Cuadro 1.2- Estructura de una Clula eucariota

abla 1.5- Caractersticas del Ncleo Celular y sus Componentes
Estructura : NcleoDescripcin Funcin
Celular
Ncleo Estructura rodeada Regular la funcin
por una doble celular. Control del
membrana con poros. metabolismo,
Contiene reproduccin (ciclo
cromatina/cromosomas celular) y
y nucleolo. diferenciacin
celular.
Envoltura Nuclear Estructura formada Continuacin del
por dos unidades de REG. Posee poros que
membrana unidas a regulan el pasaje
nivel de los poros entre ncleo y
nucleares. citoplasma
Nuclolo Cuerpo granular en el Sitio de sntesis del
ncleo, que consiste en RNA ribosmico y de
ARN y protenas. ensamble de los
ribosomas.
Cromatina ADN asociado a Empaquetamiento
protenas, tanto (plegamiento) de
estructurales ADN. El ADN
(histonas) como a compone los genes.
protenas regulatorias. Funciones
La cromatina es visible regulatorias de la
durante la interfase transcripcin
celular gentica.
Cromosomas ADN asociado a Contienen los genes
protenas, en estado que son las unidades
superenrrollado. de informacin, que
Visible en forma de rigen las funciones y
estructuras cilndricas estructura celular.
cuando la clula se
divide, ya sea en
mitosis o meiosis.

Rodeando al ncleo encontramos el CITOPLASMA, coloide donde predominan como

constituyentes agua, iones, enzimas y donde se encuentran incluidos los orgnulos celulares.
El citoplasma se encuentra separado del ambiente exterior por la membrana plasmtica.

MEMBRANA PLASMTICA

Estructuralmente esta compuesta por una bicapa fosfolipdica. El colesterol est

presente en las clulas animales, pero est ausente, en general, en plantas, hongos y
procariontes (salvo micoplasmas). La membrana plasmtica tambin contiene mltiples
protenas con diversas funciones. Podemos dividirlas en dos grandes grupos: a) protenas
integrales de membrana y b) protenas perifricas de membrana. Las primeras atraviesan la
membrana de lado a lado, mientras que las segundas estn en contacto con la membrana,
pero no la atraviesan. Algunas son enzimas reguladoras, otras receptores hormonales.
Existen tambin protenas transportadoras y canales reguladoras del movimiento de iones y
molculas a travs de la membrana plasmtica, de all su enorme especificidad. Otra
funcin importante de la membrana es la comunicacin intercelular y el reconocimiento de
diversos tipos de molcula (hormonas, virus, anticuerpos, toxinas, etc.) que interactan con
ella. En general esta funcin es llevada a cabo por glucoprotenas y glucolpidos, que se
encuentran solo en el lado externo de la membrana plasmtica. Se cree que los glcidos
juegan un importante papel en la adhesin entre clulas. A esta capa, de glucolpidos y
glucoprotenas se la denomina glucoclix.

SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

Este sistema se compone de sistemas membranosos interconectados entre s, como el

retculo endoplasmtico liso o agranular (REL), el retculo endoplasmtico rugoso o granular
(REG) y el aparato de Golgi. Estas estructuras permiten la circulacin de sustancias
siempre dentro de formaciones limitadas por membrana interactuando por medio de
vesculas.

Tabla 1.6 - Organizacin del Sistema de endomembranas

Estructura Descripcin Funcin
Retculo Membranas internas Sntesis de Protenas
endoplasmtico rugoso en forma de sacos destinadas a secrecin
(REG) aplanados y tbulos. (exportacin) o a la
Con ribosomas incorporacin de
adheridos a su membranas.
 superficie externa. La
envoltura nuclear es
parte del REG.
Retculo Membranas internas Sitio de biosntesis de
endoplasmtico liso donde predominan los lpidos y detoxificacin
(REL) tbulos. Sin ribosomas de medicamentos.
adheridos.
Aparato de Golgi Pilas de sacos Modificacin de
membranosos protenas
aplanados (glicosilacin).
(dictiosomas). Empaquetamiento de
Funcional y protenas secretadas.
estructuralmente Clasificacin de las
polarizado. protenas que se
distribuyen a
membrana plasmtica,
secrecin o lisosomas.
Lisosomas Vesculas (sacos) Contienen enzimas
membranosas hidrolticas, que
desdoblan materiales
ingeridos, secreciones
y deshechos celulares.
Vacuolas Sacos membranosos Transporte de
principalmente, en materiales, deshechos
plantas, hongos y algas. y agua.

ORGANELAS

Tabla 1.7 - Principales orgnulos membranosos de la clula

eucarionte
Estructura Descripcin Funcin
Mitocondria Orgnulos Metabolismo
semiautnomas. Poseen aerbico. Sitio de
ADN y ribosomas tipo muchas de las
procarionte. Una doble reacciones de la
membrana les sirve de respiracin celular.
envoltura. La All se realizan el
membrana interna ciclo de Krebs, la
forma las crestas cadena respiratoria
mitocondriales. y la fosforilacin
oxidativa. Es decir
la transformacin
de la energa de
lpidos o glucosa
(molculas
combustibles) en
ATP (moneda
energtica).
Cloroplasto Orgnulo La clorofila capta la
energa luminosa
semiautnoma. Posee para formar ATP y
ADN y ribosomas tipo otros compuestos
procarionte. Una doble con gran cantidad
membrana envuelve a de energa. Estos
los tilacoides. La compuestos
clorofila, se encuentra altamente
en las membranas energticos sirven
tilacoidales. para sintetizar,
glucosa a partir de
CO2.
Microcuerpos Vesculas membranosasSitio de muchas
(Peroxisomas) que contienen diversas reacciones
enzimas relacionadas metablicas.
con el metabolismo del Enzimas que
oxgeno y el perxido protegen de la
de hidrogeno. No toxicidad del
poseen ADN ni oxgeno, por
ribosomas ejemplo la catalasa.

Tabla 1.8 - Organizacin General del Citoesqueleto

Estructura Descripcin Funcin
Sostn estructural,
participan en el
Tubos huecos movimiento de
compuestos por la organelas y la
Microtbulos forma monomrica de divisin celular
la protena tubulina. (aparato mittico),
(monmero globular) componentes de
cilios, flagelos y
centrolos.
Sostn estructural,
Estructura slida en
participan en el
forma de huso
Filamentos de actina movimiento de la
consistente en la
(microfilamentos) clula y sus
protena actina.
organelos y en la
(monmero globular)
divisin celular.
Sostn estructural.
Protenas
Forman redes que
filamentosas, en forma
Filamentos conectan la
de tubos. Compuestas
intermedios membrana
por monmeros
plasmtica con la
fibrosos.
envoltura nuclear.
Centriolos Pares de cilindros El huso mittico se
huecos, localizados forma entre los
cerca del centro de la centrolos durante
 la divisin de clulas
animales, fija y
clula, formados por organiza los
microtbulos. microtbulos. Estn
ausentes en las
plantas superiores.
Movimiento de
Proyecciones
algunos organismos
relativamente cortas
unicelulares. Se
que se extienden
Cilios utiliza para mover
desde la superficie
materiales en la
celular. Compuestas
superficie de
por microtbulos.
algunos tejidos.
Proyecciones largas Locomocin celular
compuestas por de espermatozoides
Flagelos microtbulos. y algunos
Cubiertos por organismos
membrana plasmtica unicelulares.

CLULA EUCARITICA ANIMAL Y VEGETAL

Fig. 1.7- Esquemas de una clula vegetal (izquierda) y tridimencional de un cloroplasto con
sus componentes (derecha)

Tabla 1.9 - Principales diferencias entre clulas animales y clulas

vegetales
Estructura Clula animal Clula vegetal
Pared celular
Pared celular Ausente constituida por
celulosa.
Aparato mittico
Astral
(Huso acromtico )
Centrolos Presente Ausente
Vacuolas grandes,
Vacuolas Vacuolas pequeas puede ser una grande
central
Metabolismo Hetertrofo Auttrofo
Mitocondrias Presentes Presentes
Cloroplastos
Ausentes Presentes
Fig. 1.8- Esquema de la ultraestructura de una clula animal idealizada
Fig. 1.9- Esquema de la ultraestructura de una clula vegetal idealizada
VIRUS

- Las infecciones crnicas, donde de una persona enferma siempre es posible obtener virus
infeccioso, aun por periodos muy prolongados de tiempo. Por ejemplo, virus de la hepatitis
B, Epstein-Barr, virus de la rubola.

Tabla 1.11-Medidas utilizadas en microscopia

Unidad Smbolo Equivalencia enUtilizacin principal en
metro (m) citologa
Centmetro cm 0,01 metro Objetos macroscpicos a
simple vista. Huevos grandes.
Milmetro mm 0,001m Objetos macroscpicos a
simple vista. Clulas muy
grandes.
Micrmetro mm 10-6 m Microscopia de luz (ptica)

Casi todas las clulas y

organelos grandes.
Nanmetro nm 10-9 m Microscopia electrnica.

Organelas pequeas,
macromolculas grandes.
Angstrom 10-10 m Microscopia electrnica.
Mtodos de difraccin de
rayos X. Molculas y tomos.
 Las tcnicas aislamiento y separacin especfica de clulas, organelas y
macromolculas y el preparado de cultivos celulares para el estudio detallado son
herramientas invalorables para el avance de la biologa celular y molecular.

LOS MICROSCOPIOS PROVEEN VENTANAS PARA EL MUNDO DE LA CLULA

Fig. 1.17- Esquema de un Microscopio ptico

El descubrimiento y estudio temprano progres con la invencin y mejora de los

microscopios en el siglo XVII. Los microscopios de varios tipos son an herramientas
indispensables para el estudio de las clulas.
Los microscopios primeramente usados en el Renacimiento tanto como los que son utilizados
en los laboratorios hoy, son microscopios pticos. La luz visible pasa a travs de la muestra
y de las lentes de vidrio por donde la luz es refractada (doblada) de tal manera, que la
imagen del espcimen es amplificada cuando se proyecta en el ojo.

Dos valores importantes en microscopia son el aumento y el poder de resolucin .

Entendemos por aumento a las dimensiones aparentes de los objetos comparados con su
tamao real. El poder de resolucin es la medida de la nitidez de la imagen; es la capacidad
del instrumento para brindar imgenes distintas de dos puntos cercanos.

El microscopio ptico nunca puede resolver detalles menores a 0,2mm, la medida de una
pequea bacteria. Esta resolucin es limitada por la longitud de onda de la luz visible usada
para iluminar la muestra. Los microscopios pticos o de luz pueden aumentar efectivamente
alrededor de 1000 a 1500 veces el tamao de la muestra real; si se incrementase el
aumento la imagen proyectada sera borrosa. La mayora de las mejoras en microscopia de
luz del comienzo de este siglo ha involucrado nuevos mtodos para aumentar el contraste.
Sin estas tcnicas sera imposible para el ojo humano el conocimiento del mundo celular.

La mayora de las organelas son demasiado pequeas para ser visualizadas por la
microscopia de luz. La Biologa Celular avanz rpidamente hace un poco ms de cincuenta
aos con la introduccin del microscopio electrnico. En lugar de luz visible, el microscopio
electrnico utiliz un haz de electrones [2] a travs de la muestra. El poder de resolucin
est inversamente relacionado con la longitud de onda (l) de la radiacin que un microscopio
usa y un haz de electrones tiene longitudes de onda mucho ms cortas que la luz visible.
Para mayores precisiones al respecto, consulte el cuadro 1.4

Cuadro 1.4- Poder de resolucin del Microscopio

En cualquier tipo de microscopio, el poder de resolucin depende de la
longitud de onda (l) y de la apertura numrica (AN) del objetivo (la
capacidad de colectar la luz). As, el lmite de resolucin, que es la
distancia mnima que debe existir entre dos puntos para que puedan
ser discriminados como tales, y responde a la siguiente ecuacin:

Lmite de resolucin=0,61 l /AN

A su vez,

AN = n . seno a

donde, n es el ndice de refraccin del medio que atraviesa el haz y a

es el ngulo de apertura

Ntese que el lmite de resolucin es inversamente proporcional al

poder resolutivo del instrumento, de modo tal que cuanto mayor sea
ste, menor ser el lmite de resolucin conseguido.
Fig. 1.18- Comparacin entre un Microscopio ptico y Electrnico

La mayora de los microscopios electrnicos modernos pueden lograr una resolucin de 0,2
nm, unas 1000 veces mejor que la obtenida con el microscopio ptico.

Los bilogos usan el trmino ultraestructura celular para referirse a la anatoma celular
cuando se resuelve por un microscopio electrnico.

Hay dos tipos de microscopio electrnico: el microscopio electrnico de transmisin (MET)

y el microscopio electrnico de barrido (MEB):

El MET permite develar la ultraestructura de las clulas y de la matriz extracelular. El

haz de electrones es desviado por un campo electromagntico (que actuara como lente). En
este tipo de microscopia se requiere que las muestras tengan un grosor de 100 nm.

El MEB es especialmente til para estudios de superficie del espcimen. El haz de

electrones explora la superficie de la muestra la que usualmente se recubre con una
pelcula de oro. El haz excita a los electrones sobre la superficie de la misma muestra y
estos electrones secundarios se recolectan y enfocan sobre una pantalla. Esto forma una
imagen de la topografa del espcimen. Un importante atributo del MEB es su gran
profundidad de campo, la cual resulta en una imagen tridimensional.

El ME revela muchas organelas que son imposibles de resolver con MO. Pero el MO ofrece
muchas ventajas especialmente para el estudio de la clula viva. Una desventaja de ME es
que los mtodos qumicos y fsicos usados para preparar la muestra, no slo matan a las
clulas sino que puedan introducir artefactos, estructuras peculiares vistas en micrografas
que no existe en una clula viva.

La preparacin de la muestra para el MO y el ME resulta similar si se trabaja con las

clulas muertas.

En la tabla 1.9 se comparan los pasos a seguir en ambos tipos de microscopia para la
preparacin de la muestra:
Tabla 1.12 -Tcnicas para Preparar una Muestra en Microscopia ptica y
Electrnica
Paso Microscopia ptica Microscopia Electrnica
OBTENCIN: Se hace
cuidadosamente con
instrumental adecuado.
FIJACIN: se destina a Pueden usarse Se realiza con
impedir la autodegradacin fijadores qumicos paraformaldehido, con
enzimtica (autlisis)de las (formol, etanol, tetrxido de osmio o,
clulas tratando de evitar, metanol o mezclas ltimamente, con
en lo posible, la alteracin fijadoras). Tambin glutaraldehido, en
de las estructuras se utilizan mtodos soluciones acuosas de pH
originales y su fsicos como la neutro y concentracin
autodigestin. desecacin, el calor salina semejante al
seco, el fro o la medio. Luego se lava la
congelacin. pieza y se post-fija con
tetrxido de osmio
durante una hora; el
osmio se une a
estructuras
lipoproteicas
(membranas celulares)
ofreciendo mayor
contraste en la imagen.
Esto se conoce
como coloracin o
contrastado.
DESHIDRATACIN: retira Pasajes sucesivos por Baos con alcohol o
el agua de las piezasalcoholes de acetona.
fijadas, para que luegoconcentracin
puedan ser incluidas en uncreciente.
elemento que es insolubles
en solventes acuosos.
ACLARACIN Se realiza para No requiere
eliminar de la muestra
restos de alcohol y
toda sustancia
hidrosoluble. Se
impregna la muestra
con un solvente no
acuoso, orgnico y
soluble en parafina,
como xileno, tolueno o
benceno.
INCLUSIN Se incluye el material Se utilizan resinas
en parafina o celoidina sintticas tipo epoxi que
previamente luego de secarse se
calentada, la que al transforman en un
 solidificarse sirve de material muy duro, apto
sostn de la muestra para que se le efecten
y posibilita su corte. cortes extremadamente
Se forma eltaco. delgados.
CORTE Es lo suficientemente Debe obtenerse un corte
delgado como para ser de la muestra tal que el
atravesado por la luz. haz de electrones logre
Esto se logra atravesarla.
utilizando Elultramicrtomo realiza
elmicrtomo con el cortes de 20 a 100 nm
que se realiza cortes de espesor con cuchillas
uniformes del tejido a de vidrio o diamante.
un dado espesor.
REHIDRATACIN Se retira la parafina
con xilol y se lava con
alcoholes de
concentracin
creciente. Al ser los
colorantes solubles en
agua resulta
indispensable
rehidratar
COLORACIN Las clulas y los
tejidos son coloreados
para lograr mayores
contrastes facilitando
la observacin. La
coloracin de
hematoxilina-eosina
es una de las ms
comnmente
utilizadas. Tie el
ncleo de azul y el
citoplasma de rosa.
MONTAJE El corte se monta Estas muestras se
sobre un montan en pequeas
El corte se coloca sobreportaobjetos. El grillas de cobre
ciertas clases decubreobjetos puede
estructuras. colocarse por encima
para proteger el
preparado. Este puede
conservarse durante
dcadas si el
cubreobjetos se sella.
CONTRASTADO La pieza se impregna en
acetato de uranilo,
citrato de plomo u otras
sustancias.
 Las diferencias ms notables de los principales componentes del MO y del ME y sus
caractersticas singulares se especifican en la siguiente tabla.

Tabla 1.13 - Diferencias entre el MO y ME

MICROSCOPIO CARACTERSTICA MICROSCOPIO
PTICO ELECTRNICO
De interferencia de 1) IMAGEN DADA POR De dispersin de
rayos luminosos MECANISMO: electrones
Simple con aire 2) TUBO Al vaco con gran
diferencia de potencial
Luz (fotones) 3) FUENTE Filamento de tungsteno
(electrones)
Lentes: Ocular, 4) ELEMENTOS Bobinas
objetivo y electromagnticas
condensador
Clulas vivas o 5) ESTUDIAN Clulas muertas
muertas
Coloreadas o no 6) OBSERVACIN DE Distintas tonalidades
LA IMAGEN de gris. En la
actualidad se ven
imgenes "sombreadas"
electrnicamente.
0,25m 7) LIMITE DE 3 a 5 (terico)
RESOLUCIN
10 (en la prctica)
5.500 (trmino 8) LONGITUD DE 0,056
medio) ONDA
500 X a 1500 X 9) AUMENTO (el signo 30.000 X a 1.000.000
X significa aumento) X
Carnoy u otros 10) FIJACIN Bicromato de potasio,
fijadores tetrxido de osmio,
formaldehdo.
Parafina o coloidina 11) INCLUSIN Acrlicos o resinas de
epoxi.
Con el micrtomo. 12) CORTES Con ultramicrtomo.
(cuchilla de acero). (cuchilla de diamante o
Cortes de 10m vidrio) Cortes de 100 a
500 .
De vidrio 13) PORTAOBJETO Placas de Colodion,
aluminio o berilio.
Nivel microscpico: 14) NIVEL DE Nivel submicroscpico:
OBSERVACIN
ESTRUCTURA ULTRAESTRUCTURA

LAS CLULAS VIVAS PUEDEN SER OBSERVADAS A TRAVS DEL MICROSCOPIO

Se pueden utilizar ingeniosamente las propiedades ondulatorias de la luz aumentando el
contraste de las estructuras transparentes. As surgieron varias clases de microscopios
pticos convirtindose en herramientas destacadas en el estudio de la clula. Ms an, si se
considera la posibilidad de que algunos componentes de la clula puedan perderse o
distorsionarse durante la preparacin de la muestra. En consecuencia, el examen de la
clula viva (sin fijacin ni congelacin) resulta til.

Los microscopio de contraste de fase y de interferencia son sistemas pticos especiales

que logran intensificar la escasa interferencia [3] y proporcionan mayor contraste que el
obtenido con un MO comn.

En el microscopio de campo oscuro, el haz luminoso se proyecta oblicuamente y los sistemas

de lentes detectan la luz reflejada por la muestra que se ve como un objeto brillante
contra un fondo oscuro, logrndose un gran relieve de rasgos de la clula que son invisibles
en el MO.

El microscopio de luz polarizada puede proveer datos sobre la estructura a nivel molecular
de las clulas y los tejidos no slo en las clulas vivas sino en preparados post-mortem.
Ciertos componentes celulares y tisulares se comportan peculiarmente cuando la luz
polarizada (luz que gira nicamente en un plano) los atraviesa.

LAS ORGANELAS PUEDEN AISLARSE PARA ESTUDIARLAS MS PROFUNDAMENTE

La descripcin de las diversas organelas dentro de la clula revela poco acerca de su

funcin. La Biologa Celular actual desarrolla la integracin de la Citologa con la Bioqumica,
es decir el estudio de la estructura celular junto con el anlisis de los procesos qumicos de
la vida (metabolismo). El fraccionamiento celular ha sido particularmente importante en
esta ciencia.

El objetivo del fraccionamiento celular es disgregar las clulas separando las organelas
principales de modo que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas. El instrumento
usado para fraccionar las clulas es la centrfuga capaz de girar a diversas velocidades. La
ms poderosa, llamada ultracentrfuga puede dar vueltas tan rpidamente como 80000
revoluciones por minuto (RPM) y aplicar fuerzas sobre las partculas de 500000 veces
mayores que la fuerza de la gravedad (500000g).
Fig. 1.19- Esquema del Proceso de Fraccionamiento Celular

El fraccionamiento celular comienza con la homogeneizacin, o sea la ruptura de la clula. El

objetivo es romper las clulas sin daar severamente sus organelas. El homogenato se
centrifuga logrndose la separacin de las partes de la clula en dos fracciones:
el pellet que consiste en las estructuras ms grandes depositadas en el fondo del tubo y
el sobrenadante constituido de partes ms pequeas suspendidas en el lquido por encima
del pellet. El sobrenadante es transvasado a otro tubo y centrifugado otra vez. El proceso
es repetido incrementando la velocidad en cada paso. De esta manera se consigue
recolectar componentes ms pequeos de los sucesivos pellets.

Los detalles de esta marcha se aprecian en la Fig.1.19.

El fraccionamiento celular permite preparar los componentes especficos de la clula

tanto cualitativa como cuantitativamente.

LAS POBLACIONES CELULARES PUEDEN SER SEPARADAS POR EL CITMETRO DE

FLUJO

Este instrumento posee un tubo muy delgado por donde se hacen pasar a las clulas una
tras otra. Un determinado tipo celular emitir fluorescencia, previo tratamiento
con fluorocromo (pigmento fluorescente). Esto permite la discriminacin y, por lo tanto, la
separacin de las clulas as tratadas de acuerdo a la fluorescencia que emitan.
LAS CLULAS VIVAS PUEDEN SER ESTUDIADAS MEDIANTE EL CULTIVO CELULAR

Con el objetivo de preservar toda la informacin que sea posible sobre todos los tipos
celulares, se han desarrollado tcnicas de disociacin de las clulas.

En los primeros tiempos, la tcnica consista en colocar un explante de un pequeo trozo de

tejido en un medio compuesto por suero sanguneo, extracto de embriones y solucin salina.
Hoy se conocen los requerimientos nutricios de las clulas eucariontes. Se las mantienen y
hacen crecer en un medio sinttico enriquecido de suero. Se distinguen tres tipos de
cultivos:

Cultivos Primarios se obtienen de los animales o vegetales. El tejido se separa en

condiciones aspticas y se corta en pequeos trozos y se los trata con tripsina (enzima
proteoltica) que disocia los agregados celulares y genera una suspensin de clulas libres
que se cultivan en un medio apropiado.

Cultivos Secundarios se obtienen mediante el tratamiento con tripsina de un cultivo

primario, seguido de un nuevo cultivo en una caja de Petri.

Cultivos de lneas establecidas cuyo crecimiento se prolonga debido a las condiciones

cancerosas de las clulas. Entre las ms usadas se encuentran las clulas HeLa. A pesar de
tales anomalas son muy tiles para el estudio del cncer.

LAS MOLCULAS ORGNICAS SON ESTUDIADAS DENTRO Y FUERA DE LA

CLULA

A nivel molecular, los organismos estn formados por relativamente pocos tipos de
compuestos. El agua constituye alrededor del 70% de la mayora de los seres vivos. De los
dems compuestos, los principales son los glcidos, los lpidos, las protenas y
los nucletidos, muchos de ellos combinados para formar los cidos nucleicos, cido
ribonucleicos (ARN) y cido desoxirribonucleico(ADN). Aunque hay muchos otros
compuestos presentes, estas cuatro categoras constituyen la mayora de las molculas
orgnicas de los seres vivos y son los actores de los procesos metablicos. Por lo tanto, su
localizacin y funcin dentro de la clula como un estudio ms detallado fuera de ella se
hace necesario.

Algunos ejemplos de tcnicas para el estudio, la ubicacin y la cuantificacin de molculas

orgnicas se mencionan a continuacin:

RECONSTRUCCIN DE IMGENES A PARTIR DE ELECTROMICROGRAFAS

Las microfotografas electrnicas poco claras de cristales de molculas o estructuras

supramoleculares se colocan en la trayectoria de un haz de rayos lser para obtener un
diagrama de difraccin ptica. Este diagrama es procesado por un programa de
computacin consiguiendo la reconstruccin de las molculas individuales en las fases y
amplitudes correspondientes a un rea de la microfotografa.

DIFRACCIN DE RAYOS X
 Este mtodo consiste en el bombardeo de la molcula por un delgado haz de rayos X y
provoca la dispersin (difraccin) de la radiacin a travs de los electrones de los tomos
de la muestra. Este haz disperso debe alcanzar una placa fotogrfica. La estructura
molecular tridimensional se deduce de las posiciones y las intensidades de las manchas
registradas en la placa fotogrfica.

LOS MTODOS CITOQUMICOS

Los compuestos qumicos se identifican "in situ" por medio de mtodos citoqumicos.

Este objetivo es cualitativo y cuantitativo y muchas veces persigue el estudio de los

cambios dinmicos producidos en el contenido qumico celular en las distintas etapas del
metabolismo.

Para ello, el compuesto qumico debe ser:

a) inmovilizado en posicin original e,

b) identificado por un procedimiento especfico para el compuesto o para un grupo qumico

caracterstico que posea.

Los mtodos fsicos y reacciones qumicas similares a las implementadas en Qumica

Analtica pero adaptadas a tejidos se usan para llevar a cabo este tipo de identificacin.

LAS DIVERSAS MOLCULAS DE LA CLULA PUEDEN LOCALIZARSE POR LAS

TCNICAS INMUNOHISTOQUMICAS

Cuando los vertebrados superiores, los animales e incluso el hombre, son expuestos a la
actividad de los microorganismos o a molculas ajenas a sus ultraestructuras, ya sea
naturalmente o por inyeccin, aquellos sintetizan anticuerpos. Estos son protenas que
pueden fijarse selectivamente a los materiales extraos que desencadenaron su sntesis.
Por lo tanto, el organismo produce tantos anticuerpos como partculas extraas (antgenos)
son reconocidas. As, se puede obtener una gran variedad de anticuerpos.

Los anticuerpos son herramientas experimentales muy verstiles para reconocer y

manipular clulas y molculas. Si un animal de una especie determinada es inyectado con un
componente celular o molecular de otra especie, el primero logra fabricar anticuerpos
capaces de reconocer y fijar fuertemente aquel componente (el del segundo animal). A
estos anticuerpos se acoplan colorantes fluorescentes que son visibles al MO. De modo
similar, con el M.E. se pueden detectar molculas trazadoras acopladas en anticuerpos. De
esta manera, los componentes celulares y moleculares quedan teidos en forma
diferencial por los anticuerpos que se fijan a ellos.

Como todava no se han presentado los aspectos fundamentales de las molculas

orgnicas, otros mtodos fisicoqumicos de ms fina determinacin, purificacin y
cuantificacin de las biomolculas se mencionarn en las prximas unidades. Como se ver,
dichas tcnicas son de uso corriente en el diagnstico mdico rutinario.

CUESTIONARIO DE AUTOEVALUCIN
1. Cul de los siguientes organoides no forman parte del Sistema de Endomembranas?:

a. envoltura nuclear

b. cloroplasto

c. aparato de Golgi

d. retculo endoplasmtico

2. Un determinado veneno destruye el citoesqueleto. Cul de las siguientes funciones

sera afectada directamente?:

a. la divisin celular

b. la respiracin celular

c. la fotosntesis

d. la sntesis de protenas

3. Cul de las siguientes orgnulos est presente en la clula animal y vegetal?:

a. cloroplasto

b. pared celular

c. mitocondria

d. centrolos.

4. Qu orgnulo est presente en una clula procarionte?:

a. mitocondria

b. ribosoma

c. cloroplasto

d. retculo endoplasmtico

5. En qu parte de la mitocondria aparecen las crestas?

6. Qu orgnulo carece de membrana?

7. En qu parte de la bacteria se realiza la respiracin?

8. Si Ud. tuviera que argumentar acerca de que los virus son organismos vivos, qu
caractersticas estructurales y funcionales del virus podra utilizar para apoyar su
argumentacin?
9. Qu tipo de clulas pensara Ud. que alcanzaran el mayor tamao: una clula muy
aplanada o una esfrica? Por qu?

10. Por qu casi todas las clulas casi siempre son microscpicas?

11. Cules son las propiedades fundamentales que comparten todas las clulas? Describa
la importancia de cada una de ellas.

12. Compare en un cuadro las diferencias estructurales, funcionales y metablicas entre

las clulas procariontes y eucariontes.

13. Qu propiedades distinguen a un virus de una bacteria?

14. Enumere los pasos de la infeccin viral, y describa brevemente cada paso.

15. Utilizando el Sistema Mtrico Decimal resuelva las equivalencias en metros de: a) 1 nm;
b) 1 mm.

19. Qu compuesto se usa como fijador en microscopia electrnica? Y en microscopia

ptica?

20. Explique qu tcnicas utilizara para crear suficiente contraste cuando se usa el M.O. y
el M.E.

21. Qu tipo de microscopios se usan para la observacin de la clulas vivas?

22. Cules son las ventajas de estudiar las clulas con el M.E.T. y el M.E.B.?

23. Cundo utilizara la microscopia de contraste de fase? Por qu?

24. Para qu se utiliza la tcnica de fraccionamiento celular? Qu se obtiene en cada

paso?

25. Qu es un anticuerpo? Por qu es una herramienta til en la investigacin biolgica?

26. Para qu se utiliza la difraccin de rayos X?

27. Cuando una clula de forma esfrica crece, los mm2 de superficie de la membrana
plasmtica por mm3 del volumen celular:

a. decrece

b. aumenta

c. se mantiene constante

d. se vuelve ms delgada

28. El microscopio de interferencia es:

a. una variante del M.O.

b. una variante del M.E.

c. til cuando se colorea la muestra

d. utilizado para visualizar tomos

29. La ultracentrfuga se emplea en:

a. citometra de flujo

b. b) microscopia electrnica

c. fraccionamiento celular

d. difraccin de rayos

30. Las muestras de clulas vivas o preparados fijados se pueden estudiar indistintamente
con:

a. microscopia electrnica

b. microscopia de interferencia

c. microscopia de luz polarizada

d. difraccin de rayos X.