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TEMA 14.

- ORGANOCLORADOS Y RECEPTORES DE HIDROCARBUROS


AROMTICOS

Las policlorodibenzo-p-dioxinas (PCDDs) son una familia de 75 compuestos aromticos


clorados similares conocidos como contaminantes ambientales por el elevado poder txico
de algunos de sus miembros, la amplia variedad de sus respuestas txicas y la ubicua
presencia en el ambiente.

Todos ellos parecen tener un mecanismo de accin comn. El ms txico es el 2,3,7,8-


TCDD. La eliminacin de algunos de los sustituyentes o el cambio de un lugar a otro (1,4,6
o 9) disminuye la toxicidad. Compuestos relacionados son los PCDFs y PCBs.

2,3,7,8-Tetraclorodibenzo-p-dioxina 2,3,7,8-Tetraclorodibenzofurano 3,3',4,4',5,5'-Hexaclorobifenilo

EFECTOS TOXICOS Y BIOLOGICOS


La toxicidad del 2,3,7,8-TCDD est asociada al propio compuesto ms que a sus
metabolitos, ya que prcticamente no sufre bioactivacin. El metabolismo y excrecin de
los PCDDs representan la detoxificacin, y la velocidad de estos procesos es importante en
la determinacin de su poder txico. As, la toxicidad de un congenere de dioxina depende
al menos de tres factores: su propio potencial, su velocidad de eliminacin y la presencia y
cantidad de otros agonistas o antagonistas.

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Los PCDDs y compuestos relacionados presentan un amplio espectro de toxicidad y
respuestas bioqumicas. El efecto ms comnmente observado en humanos es el cloracn,
aunque se han asociado niveles en suero de 2,3,7,8-TCDD y/o PCBs con:

TOXICIDAD ESPECFICA DE TEJIDO Y EFECTOS BIOLGICOS


PRODUCIDOS POR TCDD
Inmunotoxicidad Induccin de la expresin de genes:
Toxicidad dermal Cytocromo P450 (1A1/2; 1B1)
Promotor de tumores Glutation S-transferasa Ya
Hepatotoxicidad Quinona reductasa
Teratogenicidad UDP glucuronil transferasa
Anomalas reproductivas y del desarrollo Aldehido deshidrogenasa 3
Alteracin de rutas metablicas (diabetes) Disrupcin endocrina

Los cambios inmunolgicos por accin de los PCBs se deben a la liberacin de


calcio intracelular, activacin de tirosina quinasas y liberacin de cido araquidnico de la
membrana, tres rutas importantes en la activacin de neutrfilos.
La toxicidad heptica del TCDD est marcadamente potenciada por la presencia de
hierro, probablemente por un mecanismo oxidativo. Este aumento de la toxicidad de TCDD
por hierro muestra diferencias entre especies de ratones, que son probablemente de origen
polignico.
Los PCBs presentan una afinidad por los receptores estrognicos entre 100 y 10000
veces inferior a los estrgenos naturales (17-estradiol, estrona y estriol), siendo su
concentracin en sangre similar (0,03-0,5 ng/mL). Sin embargo, el menor porcentaje de
unin a protenas (mayor concentracin en la forma activa), y la mayor permeabilidad a
travs de las membranas de stos contaminantes dara origen a la consiguiente accin
farmacolgica y sus efectos sobre la salud humana. La ausencia de parte de estos efectos y
la elevada dispersidad en los datos con dioxinas y PCBs se explica por las limitaciones en
los estudios (basados en hallazgos epidemiolgicos) y la presencia simultnea de otros
contaminantes (plaguicidas, por ej.) mezcla de congneres, ya que el trmino sustancias
semejantes a dioxinas incluyen tambin los PCDFs, PCBs coplanares y sus anlogos
bromados. Entre ratones la variacin se debe a diferencias en la afinidad de sus protenas
receptoras de Ah para PCDDs y en las ratas a diferencias en el metabolismo. El 2,3,7,8-

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PCDD es un potente inductor y modulador enzimtico, induciendo la citocromo P-450
(1A1 y 1A2).
El mecanismo de accin de los PCDDs actualmente reconocido se muestra a
continuacin.

EL RECEPTOR Ah
Experimentos realizados con TCDD demostraron que la exposicin al mismo
produca una potencia txica inusual, sugiriendo la posible existencia de un receptor para
dioxina. Esta protena (el receptor) se encontr en la fraccin soluble del citosol de clulas
de hgado de ratn y tena las caractersticas propias de un receptor: unin a dioxinas
saturable (aprox. 105 sitios de unin por clula), reversible y de alta afinidad (en el
rango nanomolar). El ligando de mayor afinidad era planar y contena tomos de cloro en al
menos 3 de las 4 posiciones; de esta forma la unin al ligando exhiba
estereoespecificidad. A esta protena se la llam receptor de hidrocarburos aromticos
(AhR) porque tambin une y media los efectos txicos de otros hidrocarburos aromticos
(PCBs e hidrocarburos aromticos policclicos). La unin de estos compuestos al AhR
activa una serie de genes, incluyendo los del Cyt P450 CYP1A1, CYP1A2 y CYP1B1.
Hasta el momento, no se ha encontrado ningn ligando endgeno para este receptor aunque
hay evidencias de que existen.

El clonaje y secuenciacin del gen del AhR ha demostrado que es un miembro de la


superfamilia de factores de transcripcin con secuencias bsicas hlice-bucle-hlice
(bHLH), que se activan por la unin a ligandos y tienen gran variedad de funciones en
procesos de crecimiento y diferenciacin de tejidos. Esta familia alberga tambin los
reguladores de la transcripcin Per (Period, protena del ritmo circadiano de Drosophila),
ARNT (translocador nuclear del receptor Ah) y Sim (Single minded, protena reguladora
que participa en el desarrollo del SNC de Drosophila). Esta superfamilia de factores de
transcripcin se llama normalmente bHLH/PAS (Per, Arnt, Sim). Otro miembro de la
superfamilia de factores de transcripcin es la protena que media la activacin de genes
por anoxia, llamado Hif1. Tanto el AhR como Hif1 y Sim requieren la dimerizacin con
ARNT para la activacin de genes

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El dominio bHLH est situado hacia el extremo N-terminal del gen del AhR. La
regin bsica es necesaria para la unin a secuencias especficas del DNA llamadas
elementos de respuesta a dioxinas (DREs) que facilitan el acceso al promotor y aumentan
la velocidad de transcripcin de mRNA para CYP1A1 y otras protenas. El dominio HLH
es necesario para la dimerizacin con otras protenas.
En ausencia del ligando, el receptor Ah se encuentra en el citosol como un complejo
oligomrico, unido a dos molculas de hsp90 (protena de choque trmico) y posiblemente
a otras protenas como AIP, c-Src (60 kD), adems de contener la subunidad de unin al
ligando (ALBS). La asociacin con hsp90 se piensa que es necesaria para mantener el
plegamiento adecuado del AhR para su unin al ligando y tambin se cree que limita el
paso del AhR al ncleo por bloqueo de una secuencia de localizacin nuclear en el extremo
N-terminal.
El AhR se expresa en la mayora de los rganos y clulas del organismo. Aunque los
datos existentes sugieren que los tejidos humanos son menos sensibles a los efectos txicos
del TCDD que los de rata o ratn, parece ser que el AhR en humanos puede existir en ms
de una forma, lo que apoyara las diferencias encontradas.

MECANISMO DE ACCIN A TRAVES DEL RECEPTOR Ah


El ligando (por ejemplo el TCDD), debido a su estructura lipoflica, entra en la
clula por difusin pasiva a travs de la membrana celular, y se une en el citosol al
receptor Ah. La afinidad en la unin depende de las caractersticas del receptor, del

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huesped y de las propiedades del ligando. En ratones, por ejemplo, se puede saber si una
especie es resistente o sensible al TCDD mediante las diferencias en la afinidad del receptor
Ah por el TCDD.
La unin del ligando implica la disociacin del oligmero, desplazndose las
molculas de hsp90, tras lo cual se pueden seguir dos rutas txicas:
1.- Aumento rpido de la actividad tirosinquinasa. Esta actividad est mediada por
el receptor Ah y no se debe a la accin directa de las TCDD sobre las proteinquinasas.
2.- Translocacin del complejo ligando-receptor al ncleo donde forma un
heterodmero con ARNT. Esta dimerizacin es necesaria para su unin, corriente arriba, a
elementos del DNA de genes diana (DRE). Este complejo L-AhR-ARNT se une entonces a
DREs (regiones de DNA con una secuencia especfica de reconocimiento GCCTG-3 en la
regin lateral 5 de genes de respuesta) y media el aumento en la velocidad de transcripcin
de genes especficos. La activacin de la transcripcin por este complejo est mediada por
co-activadores (CBP/p300, media la unin entre el complejo AhR-ARNT y factores
asociados a la caja TATA), que atraen a la RNA polimerasa II. Para la asociacin del
complejo con DREs, parece ser que se requiere la fosforilacin, ya que in vitro, la
desfosforilacin de extractos nucleares de clulas tratadas con TCDD elimina dicha
capacidad de asociacin.

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Las diferentes respuestas de especies y tejidos se cree que se deben a la diferente
activacin de la expresin de genes, lo que lleva a la transcripcin de diferentes mRNAs y
subsiguiente sntesis de protenas. Sin embargo el nico camino realmente establecido es la
caracterstica induccin de las isoenzimas del citocromo P-450 CYP 1A1 y 1A2.
Descubrimientos de 1996 indican que las dioxinas afectan tambin a la expresin
del virus de la inmunodeficiencia humano (HIV-1), con activacin de un factor de
transcripcin celular, NF-kappa B.
Varios compuestos relacionados con las dioxinas han mostrado ser aditivos,
sinrgicos o antagnicos con respuestas txicas y bioqumicas. El sinergismo o
antagonismo de mezclas de congneres de desigual potencia, podra depender del grado de
ocupacin del receptor Ah.

OTROS LIGANDOS DEL RECEPTOR Ah: Toxinas naturales


Las toxinas naturales pueden tener los mismos mecanismos de toxicidad que las
sintticas como las dioxinas. As, sustancias como los PAH (hidrocarburos aromticos
policclicos) (por ejemplo de un filete cocinado), tienen una elevada afinidad por el receptor
Ah pero son incapaces de producir el espectro de efectos txicos observados tras la
exposicin a PCDDs debido a que son metabolizados ms rpidamente. Los productos de la
oxidacin del triptofano, tambin se unen al receptor Ah y han demostrado tener
propiedades similares a TCDD. Una variedad de flavonas y de otras sustancias de las
plantas en la dieta contienen una sustancia qumica, la glucobrassicina (un glucosinolato),
cuyos productos de ruptura (mayoritariamente carbinol indol) se unen al receptor Ah
aunque no est claro su efecto. Pueden inducir las enzimas de defensa bajo control del
receptor, causando posiblemente mutagnesis de la misma forma que la TCDD, o pueden
tener un efecto protector regulando el metabolismo de estrgenos, o con actividad
anticancergena o antioxidante. La glucobrasicina est presente en grandes cantidades en
vegetales del gnero brassica, incluyendo la col y el brcoli (cerca de 25 mg por cada 100g)
o las coles de Bruselas (125 mg por 100g).

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