Informe de Bioprocesos Cla II Unidad

CULTIVO LOTE ALIMENTADO AIREADO 2011
CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO AIREADO
RESUMEN
LABORATORIO DE BIOPROCESOS GRUPO B-4 Pgina 1

INTRODUCCION
En la actualidad muchos de los alimentos son obtenidos gracias al manejo y
conocimiento del crecimiento de microorganismos. Resulta entonces importante el
conocimiento de las condiciones en que estos microorganismos puedan optimizar sus
productos. Para ello la preparacin de medios de cultivo para estos microorganismos es
un buen punto de partida para conocer sobre su comportamiento as como tambin el
seguimiento de la cintica nos proporciona datos mucho ms prcticos y exactos sobre la
velocidad y caractersticas del crecimiento del microorganismo tratado.
La preparacin de medios para el desarrollo de procesos de fermentacin es una

etapa fundamental para asegurar la productividad de los mismos. Los componentes de
los medios constituyen los efectores externos de naturaleza qumica que desempean un
rol esencial en los procesos ya que deben cumplir con los requerimientos del crecimiento
y de formacin de productos y adems suministrar energa para la sntesis de metabolitos
y para el mantenimiento celular. No obstante que los microorganismos varan
considerablemente respecto de los nutrientes que pueden necesitar.
Es as que para esta prctica hemos centrado nuestra atencin en el tratamiento de

un microorganismo (Saccharomyces cerevisiae ATCC-4126), iniciando desde su siembra
partiendo desde su estado en cepa congelada , para luego sembrarlo en medio rico,
empleando la glucosa como fuente de carbono, procurando su rpida activacin, para que
luego de un determinado tiempo podamos sembrar la bacteria pero en un medio mnimo;
es decir con los mnimos requerimientos; en el cual es ms factible determinar la
cintica de crecimiento.
Dentro de su importancia en la agroindustria la Saccharomyces cerevisiae ATCC-4126

es muy valiosa para la conversin de fructosa en etanol que puede mejorar la economa
de una planta transformadora de azucares naturales de frutas a etanol. Con la conversin
de la fructosa, la potencial reduccin del precio est en funcin de tres parmetros de
fermentacin: el rendimiento, la tolerancia de etanol y la productividad. Asumiendo altos
valores para estos parmetros, la reduccin mxima puede volverse de 40%. Hoy en da
es conocido que un nmero de levaduras fermenta sacarosa en etanol, siendo
Saccharomyces cerevisiae ATCC-4126 una de las ms eficientes, especialmente en relacin

con el rendimiento y la proporcin volumtrica. Empleando esta levadura para la

fermentacin de la D-xilosa, la reduccin en el precio del etanol alcanza el 70% del
mximo asequible.
I. OBJETIVOS:
1.1.Objetivos generales:
Disear y realizar una experiencia de cultivo celular por lote alimentado (CLA)
con alimentacin constante utilizando una cepa de Saccharomyces cerevisiae
ATCC-4126.
1.2. Objetivos Especficos:

Disear el medio de cultivo.
Realizar la activacin y desarrollo del inoculo.
Identificar y describir las partes, a accesorios y geometras, conocimiento de la
operacin del fermentador, esterilizacin, carga y descarga y toma de muestra.
Identificar en el fermentador los instrumentos de medicin y control automtico,
as como la calibracin de los sensores
Puesta en marcha del cultivo por lote alimentado y determinar max y Y x/s.
Obtener los perfiles de masa celular, fuente de carbono y oxgeno disuelto a travs
del tiempo de operacin.
Observar las zonas de crecimiento exponencial y limitada.
Determinar el Y x/s y Qx del CLA.

II. METODOLOGA EXPERIMENTAL :
A la hora de disear un medio de cultivo no slo hay que tener en cuenta los nutrientes
sino tambin las condiciones fsicas que permitan el crecimiento de los
microorganismos, asimismo nos interesa cuanto de biomasa se desea producir.Tambin
es importante conocer las caractersticas de los microorganismos con el que se va a
trabajar.
Microorganismo.
La levadura usada es SaccharomycesCerevisiae ATCC 4126, siendo el sustrato
sacarosa
Condiciones del medio:

Sustrato limitante: SACAROSA( C12H22O11)
Duracin: 6 horas de la etapa de CLA
Usar el fermentador automticoBiotron Modelo Liflus G X de 2 litros
Control de pH medianteelectrodo
Medicin de oxigeno disuelto mediante electrodo : 1,0 vim ; 200 rpm
La existencia de las zonas de crecimiento exponencial y limitado.
Utiliza macro nutrientes como: C.N.Mg,K,P
Utiliza micro nutrientes como: Ca,Na,Fe,Cu,Mn,Mo,Co,Zn
2.1. DISEO DEL MEDIO DE CULTIVO
Para disear el medio de cultivo se realizara de acuerdo a los alcances que nos
proporciona la gua de prctica, en el cual podemos conocer los requerimientos del
microorganismo, para su mantencin, activacin y para la fermentacin del cultivo
por lote alimentado.
Otro modo de operar un biorreactor es empleando la tcnica de batch alimentado
(BA) o fedbatch. Esta tcnica se define como un cultivo en batch donde se alimenta
continuamente medio nutritivo fresco o alguno de sus componentes. Si el nutriente

que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la

velocidad de crecimiento () del microorganismo.
El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular

y/o la formacin de producto son sensibles a la concentracin del sustrato limitante,
es decir cuando el rendimiento celular o la poductividad de la biomasa o del
metabolito buscado se ven afectados. As, este mtodo se emplea cuando se quieren
evitar fenmenos de inhibicin por sustrato y se requiere alcanzar una alta
concentracin de biomasa.
ESQUEMA
F(t)
SR(t)
Vf, Xf
VR = Vf - V0
V0, X0, S0
RESERVORIO BOMBA
BIORREACTOR
Donde F(t): caudal de alimentacin
Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin
Vf: volumen final de trabajo
Vo: volumen al inicio de la alimentacin
Xo: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin
So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin

El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las

condiciones finales de dicho batch.
Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo

de caudales variables (F = F(t)), o bien mediante la variacin de la concentracin de
sustrato limitante (Sr=Sr(t)). En el caso del Trabajo Prctico se utilizar el sistema ms
simple, es decir F=cte y Sr=cte.
Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones halladas.
S0'
X.V = X0.V0 + F.SR.YX/S.t
X0.V0 < max
X.V
= max
X0'.V0' S0 = 0
BATCH t = t0 BATCH ALIMENTADO t
Al obtener valores de Sr y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en

batch alimentado. El caso descrito hasta aqu tiene en cuenta que tanto F como Sr
sean constantes. Es claro que en caso de ser F = F(t) y/o Sr = Sr(t), dicha
funcionalidad habr de ser tenida en cuenta para resolver las ecuaciones planteadas
2.2. PREPARACION DEL MEDIO:

2.2.1. PREPARACIN DEL MEDIO DE MANTENCIN
La preparacin de este medio se realizara de acuerdo a los componentes que
se encuentran en la tabla N 01
Nutriente So (g/l) So (g/50ml)

Extracto de Levadura 3 0.15

Extracto de malta 3 0.15
Peptona 5 0.25
Agar 20 1
Glucosa 10 0.5
Tabla N1: Composicin de medio slido de mantencin (para 50 ml de

solucin)
Procedimiento
La preparacin del medio de mantencin se inicia de acuerdo a las
concentraciones de la tabla N 01.
Los nutrientes se pesan en cantidades requeridas para 50ml. De la tabla
N 01,por lo que el medio de mantencin se necesita en cantidades
menores a 50 ml.
Medir en una probeta graduada 50 ml de agua destilada.
Mezclar todos los compuestos en un matraz Erlenmeyer adicionando el
agua destilada.
Calentar con el mechero Bunsen la mezcla disuelta en el matraz;
agitando constantemente con la ayuda de una varilla de vidrio, hasta la
aparicin de la primera burbuja, a partir de lo cual se controla de 1 a 2
minutos.
Preparar 8 tubos de ensayo con tapa, y en caliente adicionar 6ml de la
mezcla a cada tubo, e inmediatamente taparlos.
Colocar los tubos en un vaso de precipitado, y llevarlos a la olla a
presin, previamente aflojar las tapas, para permitir el intercambio de
gases.
Calentar hasta que la temperatura alcance los 121C y a partir de ello
controlar de 15 a 20 minutos, finalizando la esterilizacin.
Ajustar las tapas de los tubos estando estos aun dentro de la olla, luego
colocarlos en posicin inclinada y dejarlos a temperatura ambiente.

Luego preparamos nuestra rea de trabajo, desinfectando con alcohol.

para tener una rea estril prendemos el mechero cinco minutos antes de
realizar la resiembra con el Saccharomycescerevisiae ATCC 4126.
Abrimos los tubos de ensayo cerca al mechero bunsen, flameando para
evitar la contaminacin, teniendo la aza bacteriolgica calentada al rojo
vivo esperamos un momento que se enfre.
Sacamos 2 a 3 azadas y colocamos en el tubo con agar, flameamos y
cerramos el tubo y as en los 8 tubos con agar.
2.2.2. PREPARACIN DEL MEDIO DE ACTIVACIN
NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L) PESAR (G)
Sacarosa 15 0.225
Extracto de 3 0.045
Levadura
Extracto de Malta 5 0.075
Solucin de Sales 5 ml/L 0.075ml
Tabla N 2: Composicin de medio de Activacin (para 15 ml de solucin)
Procedimiento
Pesar los componentes descritos en la tabla N 2.

En un matraz Erlemenyer se coloc la cantidad pesada de sacarosa ms
8 ml de agua destilada.
El extracto de levadura se coloc en tubo de ensayo y se agreg 10 ml
de agua destilada
En cuanto a la solucin de sales tambin se coloc en tubo se ensay y
se agreg 7 ml de agua.

Se esterilizan: la mezcla de extracto de levadura y sales en un tubo de

ensayo cada uno, la sacarosa en un matraz de 125 ml todo esto en un
vaso precipitado colocado dentro de una olla a presin.
Despus de haber esterilizado se dej enfriar para luego mezclar y
realizar la activacin con el microorganismo.
Al mezclar estos componentes (las sales y la levadura con la sacarosa)
se procedi a activar el microorganismo bajo mechero para evitar la
contaminacin.
Sacamos dos azadas y colocamos en el medio de activacin, luego
tapamos con el tapn previamente elaborado.
Colocar en el shaker por un tiempo de 12h.
2.2.3. PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN

Tabla N 3: Composicin Del Medio De Fermentacin I
Composicin del Medio de Cultivo deSaccharomycescerevisiae- ATCC
4126 para un crecimiento en biomasa de 1.8 g/l. para un volumen de
100ml. El diseo del medio se realiz en un matraz Erlenmeyer de 500ml.
Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l) pesar

Celula nutriente (gr)
C Sacarosa 45 42,105 0,4678 3,8478 3,8478 0.3847
(C12H22O11)
N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457 0.1146

Amonio
(NH4)2SO4
K Fosfato Potasico 0,5 28,676 57,352 0,0314 0,0471 0.0047
(KH2PO4)
Mg Sulfato de 0,4 9,86 24,65 0,0730 0,1095 0.0195
Magnesio
Heptahidratado
(MgSO4.7H2O)
P Fosfato Potasico 2 22,79 11,395 0,1580 0,2369 0.02369
(KH2PO4)
- Extracto de - - - - 1,8 0.18
Levadura

- Solucion de sales - - - - 10 ml/L 1
Condiciones de Cultivo :
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
Velocidad de agitacin : 200 rpm
La fermentacin se realizara en un matraz de 500 ml.

800ml
Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l)

Celula nutriente
C Sacarosa 45 42,105 0,4678 3,8478 3,8478
(C12H22O11)
N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457

Amonio
(NH4)2SO4
K Fosfato Potasico 0,5 28,676 57,352 0,0314 0,0471
(KH2PO4)
Mg Sulfato de 0,4 9,86 24,65 0,0730 0,1095
Magnesio
Heptahidratado
(MgSO4.7H2O)
P Fosfato Potasico 2 22,79 11,395 0,1580 0,2369
(KH2PO4)
- Extracto de - - - - 1,8
Levadura
- Solucion de sales - - - - 10 ml/L

pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
La fermentacin se realizara en el fermentador de 2000 ml.
FERMENTACIN DEL CULTIVO
Inocular el caldo (medio rico + biomasa) a un matraz conteniendo medio de

fermentacin, para el la adaptacin del crecimiento
Durante el desarrollo del cultivo, para las evaluar el crecimiento de biomasa,
tomar una muestra inicial, al que se le mide la absorbancia y se centrfuga,
guardando el sobredanante en viales y la masa sedimentada en capachos que
sern expuestos a la estufa.
Una vez iniciado el crecimiento de biomasa se manipula el flujo de
alimentacin de tal manera que en tiempos determinados, se provoque en el
comportamiento del crecimiento.
Luego se llevara a cabo la alimentacin, se llevara a cabo una segunda
fermentacin para un volumen final del medio a 1600 ml de solucin
Tabla N 5: Composicin Del Medio De Fermentacin II

1600ml. Entonces se tendr: X=3.425gr/l
So So
Elemento Nutriente YX/S Pesos (g)
(gr/l) (gr/l)
Extracto de
1.800
levadura 2.880
N (NH4)2SO4 2.36 1.454 2.181 3.489

P KH2PO4 11.38 0.301 0.451 0.722

K KH2PO4 57.47 0.060 0.089 0.143
Mg MgSO47H2O 24.66 0.139 0.208 0.333
Extracto de sales 10.000 16.000
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
2.3. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN CELULAR POR D.O.

El mtodo se basa en el aumento de la turbidez del medio, al incrementarse la
concentracin de microorganismos a medida que avanza el tiempo, esto puede
ser detectado fcilmente por espectrofotometra a 640nm. Para sta
determinacin es necesario que previamente se elabore una curva de calibrado,
para lo cual las concentraciones de microorganismos en el medio son
determinadas por peso seco de acuerdo al siguiente procedimiento:
Se toma una muestra de volumen conocido, y se centrifuga a 1200rpm.

Durante 20 minutos.
Se elimina el sobrenadante y se resuspende el centrifugado con agua
destilada.
Se vuelve a centrifugar en las mismas condiciones a fin de eliminar restos de
sustrato que pudiera alterar la determinacin.
Se elimina el sobrenadante, se redisueIve el precipitado y se seca en la estufa
a 80C hasta peso constante.

PREPARACION DE SALES
CaCl2 .2H2O: 1.12 g/L
ZnSO4.7H2O: 0.11 g/L
FeSO4.7H2O: 0.06 g/L
CuSO4.5H2O: 0.05 g/L
CoCL2.6H2O: 0.01 g/L
MoO3 : 0.0005 g/L
MnCl2.6H2O: 0.027 g/L

Se peso todas las sales NaCl : 0.28 g/L
en la balanza analtica.
Cada sal me mezclo con agua y

se le echo a la fiola de un litro.

Luego de haber pesado todas las sales y de

haberlo echado a la fiola; a esta fiola se le
enrazo con agua.
Se mezcl todas las sales y luego Al pomo de vidrio se le llevo a

se vaci a un pomo de vidrio. la refrigeradora.
2.4. AEREACION
Algunas consideraciones que se debe tomar son:
Proporcionar a los microorganismos el oxgeno necesario para llevar a cabo

su proceso respiratorio.
La solubilidad del O2 es baja < 10mg/l se necesita alimentar en forma

continua este nutriente, dado que su demanda es aproximadamente de 1g/l.
Se pueden tener sistemas donde los microorganismos crecen con mltiples sustratos,
pero en el caso que todos son limitantes. Ej, C, N, O2 , luego la cantidad de cada uno
de ellos afecta la cintica de crecimiento.

G N O
max
K G G K N N K o O
Transferencia de Oxgeno
El comportamiento de las fermentaciones est fuertemente influenciado por una serie de
operaciones de transferencia.
Es posible que una determinada fermentacin, en especial las aerbicas, est limitada en
sus posibilidades de mejorar su rendimiento y productividad, no por razones propias de las
caractersticas de las clulas sino que por problemas en el diseo que permita satisfacer la
alta demanda de transferencia de masa, y en especial de oxgeno.
Necesidades de Diseo
Se diseo de un sistema de aireacin-agitacin debera satisfacer que:
DEMANDA DE OXIGENO = OFERTA DE OXIGENO
Por otra parte, el crecimiento microbiano se puede representar por:
1CaHbOC + m NH3 + n O2 q CdHeOfNg + r CO2 + t H2O + u ChHiOjNk
CdHeOfNg: Biomasa
ChHiOjNk: Metabolito extracelular
De acuerdo con la ecuacin anterior, el rendimiento de oxgeno en clulas se puede

calcular por medio de la relacin entre n y q
Si no se producen Metabolito extracelular, u igual a cero
32a 8b 16c
YO 2 0.01 f 0.03d 0.02 g 0.08e
x Yx mws
s
mws: Peso molecular de la fuente de carbono y energa
Proceso de transferencia de oxgeno (OFERTA)
Etapas
(i)Del seno de la burbuja a una capa interna de gas

(ii) Difusin en la capa interna de gas.
(iii) Difusin a travs de una capa externa de lquido que rodea a la burbuja
Etapa limitante!
(iv) Transferencia al seno del lquido
(v) Difusin a travs de la capa de lquido que rodea a los microorganismos

Etapa limitante!
(vi) Difusin en el interior de los microorganismos
Velocidad de Transferencia de Oxgeno por rea interfacial
La velocidad de transferencia por unidad de rea interfacial, W, est dada por:
W = kl (Ci C)
Como en la interfase se supone que hay

equilibrio entre el oxgeno en el gas y el
disuelto.
W = kl (Ci C)= kG (P Pi)
Las cantidades Pi y Ci resultan difciles de determinar en la prctica, se prefiere

hacer uso de las relaciones de equilibrio, trabajando con las concentraciones y
presiones de equilibrio C* y P*. Con ello se trabaja con la Velocidad de
transferencia de oxgeno volumtrica, NA

Velocidad de Transferencia de oxgeno volumtrica
Cuando el control de la transferencia de O2 se encuentra en el film lquido que rodea

a la burbuja o a los microorganismos, la velocidad de transferencia de oxgeno, NA
se puede expresar como:
NA = kLa (C* - C) = H kLa (P P*)
Se supone que hay equilibrio entre el oxgeno del gas y el disuelto en el lquido.
kL: Coef volumtrico de transferencia de O2 a la fase lquida (cm/hr)
a : Area interfacial especfica (cm2/m3) Resulta difcil de medir (kLa)
C*: Conc. de O2 en el equilibrio (mM/L) (Hipottico)
C : Conc. de O2 disueltro en el seno de la fase lquida (Este valor no puede ser inferior
Ccrtico 1mg/l)
P* : Presin de O2 en el equilibrio
P : Presin de O2 en el seno de la fase gas.
H : cte. de Henry..
Balance de Oxgeno
Se puede plantear una ecuacin de balance de oxgeno en el fermentador:
FO2
O2 que entra O2 que sale O2consumido por unidad de volumen = Acumulacin.
O2 que entra O2 que sale = O2 que se transfiere = NA
x dC
k L a (C * C )
Yo 2 dt
x

Para que el cultivo pueda crecer sin limitacin de Oxgeno, el suministro debe ser
igual a la demanda.
x
k L a (C * C )
Yo 2
x
Mtodos de determinacin kL a
Para la adecuada operacin de un fermentador se hace necesario conocer el valor del

coeficiente volumtrico de transferencia de O2
kL = f (Sc, Sn, GR)
kL a a = f (D32, H)
Medicin de los flujo de Oxgeno
o Titulacin
o Oxidacin de sulfito de sodio
o Eliminacin del O2
o Mtodo Dinmico.
o Balances de masa
o Medicin Directa con analizador de O2

Estimado mediante Correlaciones
o Mtodo del sulfito de sodio
Se basa en la rpida reaccin qumica de oxidacin del sulfito a sulfato

mediante O2.
Se reemplaza el medio por solucin de sulfito de sodio (sulfato cprico

como catalizador) y se burbujea aire por un cierto tiempo.
Sulfito + O2 Sulfato
Sulfitoinicial Sulfito final

kLa C*
t
kLa C* : Representa la mxima velocidad volumtrica de

transferencia de O2 en un sistema dado (fermentador).
o Mtodo dinmico
En este caso la medicin se realiza en el fermentador durante el

crecimiento de un cultivo activo, registrndose el oxgeno disuelto. El
proceso tiene 2 etapas.
Etapa 1: Durante la fermentacin se corta el suministro de aire (T1)

y se registra la disminucin de O2 disuelto. En este caso el suministro
es nulo.
x dC

Yo 2 dt
x

k L a (C * C ) 0
La pendiente de la curva es la demanda de O2:
x dC

Yo 2 dt
x
El flujo de aire se repone antes que se alcance la concentracin crtica de

oxgeno, Cc (bajo este valor la velocidad de metabolismo se hace
dependiente de la concentracin C, pudindose causar daos irreversibles
en los m.o.).
Cc 0.1*Concentracin de Saturacin
Bajo estas condiciones se cumple:

1 x dC
C C*
k L a Yo 2 dt
x
Desde la cual se despeja el trmino (-1/kLa)
Depende de la velocidad de respuesta de los electrodos

o Mtodo medicin directa
Para aplicar este mtodo se utiliza un electrodo de oxgeno disuelto y

sistemas para determinar oxgeno en la fase gaseosa.
En este mtodo se calcula la demanda de oxgeno midiendo el flujo de

aire y la concentracin de oxgeno en las corrientes gaseosas de entrada y
salida.
Con estos valores y la lectura de oxgeno disuelta, se calcula kLa.
O2 que entra O2 que sale = O2 que se transfiere = kL a (C* - C)
Mtodo de alto costo debido al equipamiento analtico requerido.
2.5. AGITACIN
La agitacin es la operacin que crea o que acelera el contacto entre dos o varias
fases. Una fermentacin microbiana puede ser considerada como un sistema de tres
fases, que implica reacciones lquido-slido, gas-slido y gas-lquido.
La fase lquida contiene sales disueltas, sustratos y metabolitos. Puede existir,

en algunos casos, una segunda fase lquida si existe un sustrato inmiscible en
agua como por ejemplo los alcanos.
La fase slida consiste en clulas individuales, bolitas de micelio, sustratos
insolubles o productos del metabolismo que precipitan.
La fase gaseosa proporciona un reservorio para el suministro de oxgeno,
para la eliminacin del CO2 o para el ajuste del pH con amonio gaseoso.
Una adecuada agitacin de un cultivo microbiano es esencial para la fermentacin ya

que produce los siguientes efectos en las tres fases:
Dispersin del aire en la solucin de nutrientes.

Homogeneizacin, para igualar la temperatura, pH y concentracin de
nutrientes, en el fermentador.
Suspensin de los microorganismos y de los nutrientes slidos.
Dispersin de los lquidos inmiscibles.
Bajo estas premisas se podra concluir que cuanto mayor sea la agitacin, mejor ser
el crecimiento. Sin embargo, la agitacin excesiva puede romper las clulas grandes
e incrementar la temperatura lo que ocasiona un descenso en la viabilidad celular.
Por lo tanto, se debe conseguir un balance entre la necesidad del mezclado y la
necesidad de evitar el dao celular.

La agitacin es una operacin muy importante tanto del punto de vista tcnico como
econmica.
La agitacin es importante para:
un mezclado homogneo
Una buena transferencia de masa y de calor, permite disminuir el espesor de la

pelcula lquida esttica.
Diseo del sistema de agitacin
El sistema de agitacin tiene la funcin de generar la potencia necesaria para

producir una mezcla perfecta para el sistema de cultivo y producir un rgimen de
agitacin adecuado que, maximice la difusin de gases en el lquido y minimice la
produccin de esfuerzos cortantes y la presin hidrodinmica local y global, para
optimizar los fenmenos de transferencia de momentum, calor y masa.
Un sistema de agitacin consta de cuatro partes mecnicas:
Motor Impulsor: suministra la potencia al eje de potencia; debe ser de corriente

alterna (a.c), preferiblemente de induccin y su potencia debe calcularse para
manejar el doble (200%) de la potencia terica requerida para agitar el fluido y
el cultivo a Re3000. Motor de Induccin (A.C): dado que un biorreactor debe
operar de forma continua durante todo el proceso de cultivo; se requiere un
motor capaz de resistir largos periodos de operacin continua y trabajo duro; por
eso, el motor debe ser de induccin de corriente alterna (a.c) y debe ser
acorazado, preferiblemente en acero inoxidable.
Eje trasmisor de la potencia: es una barra cilndrica de acero inoxidable 316L
y por lo general se disea en dimetros estndar: , , etctera para mayor
facilidad de ajuste a los estndares de motores a.c. Su longitud depende de la
profundidad del contenedor (tanque).
Acople del Eje Transmisor: ajusta y fija al motor, el eje transmisor de
potencia. Existen dos tipos de acople:
Acople-adaptador de tipo taladro: el puerto de entrada se acopla al eje del
motor por fijacin directa. El puerto de salida es un dispositivo que se adapta a
varios dimetros de broca y sujeta o abraza firmemente el eje transmisor de
potencia por presin y abrasin; similar al que utilizan los taladros mecnicos.
Acople-ajustador de tipo tornillo-rosca: el puerto de entrada se enrosca o se
fija firmemente al eje del motor. El puerto de salida es un dispositivo que
abraza el eje transmisor de potencia por un mecanismo de tornillo-rosca.

En ambos casos, el dimetro del puerto de entrada del acople que es la unin de ste
con el eje del motor debe ser de dimetro interno igual al dimetro externo del eje
del motor y el dimetro del puerto de salida que es dispositivo sujetador del eje
transmisor de potencia debe ser el mismo que el dimetro externo del respectivo eje.
2.6. ESTERILIZACION
Esterilizacin significa la eliminacin de toda forma de vida de un medio o
material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios fsicos, por ejemplo,
filtracin, o por muerte de los organismos por calor, productos qumicos u otra va.
La razn fundamental para efectuar la esterilizacin en Microbiologa Industrial es
para evitar la competicin por los nutrientes en medios de cultivo y permitir as que
el cultivo de microorganismos especficos que se utilizan en un proceso de
fermentacin de los rendimientos esperados en biomasa y/o metabolitos especficos.
Mtodos de esterilizacin
Los mtodos de esterilizacin pueden ser de 3 tipos:
a) Por destruccin total de microorganismos
Por destruccin total se entiende un proceso muy violento, que casi siempre
implica calentamiento apreciable del material, como ocurre con la aplicacin
de una llama, que es lo que hacemos en el laboratorio cuando flameamos un
ansa de platino olas bocas de tubo de ensayo o erlenmeyers. Otra manera de
destruir contaminantes es con el uso de poderosos agentes oxidantes. Por
supuesto sta metodologa, aunque es efectiva, est muy restringida en su
empleo.
b) Por muerte o inactivacin
La muerte o inactivacin significa la eliminacin de microorganismos sin

que exista necesariamente desintegracin de las clulas. Se puede efectuar
por calentamiento, seco o hmedo, por radiaciones o por agentes qumicos.
El calor hmedo, generalmente en forma de vapor bajo presin, es muy til y
de gran valor en la esterilizacin en el laboratorio, que se efecta en
autoclave, o en la industria cuando se esterilizan los medios de cultivo y los
equipos de fermentacin. En el caso de los autoclaves, se pueden alcanzar
presiones de 1 a 3 atmsferas. En escala grande el equipo de produccin es
esterilizado con vapor saturado bajo presin, y la presin requerida debe ser
alcanzada en todas las partes del equipo y el aire debe ser purgado
totalmente del sistema (como ocurre tambin en el caso de los autoclaves)

porque la transferencia de calor disminuye mucho en ese caso. Despus de la

esterilizacin se mantienen las condiciones aspticas, haciendo pasar vapor
por las vlvulas y sellos.
c) Por eliminacin con medio fsicos.
La eliminacin fsica est restringida a la esterilizacin de gases lquidos, y

es fundamentalmente llevada a cabo por filtracin mediante filtros absolutos
o filtros fibrosos.
Los filtros absolutos son de materiales cermicos, de vidrio o de metal

sinterizado con poros tan pequeos que la penetracin de los
microorganismos no es posible.
Los filtros fibrosos no son absolutos y el material filtrante puede ser lana de
vidrio, amianto y esteres de celulosa, siendo las fibras de un dimetro
variable de 0.5 a 15 micrones.
Cintica de la esterilizacin por calor
La cintica de la esterilizacin por calor hmedo, que es la nica que

consideraremos en sta monografa por su aplicacin a la esterilizacin de medios
de fermentacin, est caracterizada bastante aproximadamente por una reaccin
cintica de primer orden.
Si No es el nmero de organismos viables presentes inicialmente y N es nmero

viable al final tendremos que la ecuacin de velocidad de muerte ser:
(1)e integrando entre los lmites
No a tiempo = 0 y N al tiempo t = t, se obtiene
N/No es la fraccin de organismos viables que sobreviven despus del tratamiento

por calor durante el tiempo t y K = constante de velocidad de destruccin, que
depende de la temperatura segn la clsica ecuacin de Arrhenius:

Donde: A = constante
E = energa de activacin
R = Constante general de los gases
T = Temperatura en grados Kelvin
Si se grfica el In k en funcin de 1/T se obtendr una lnea recta, siendo la

inclinacin igual a -E/R y la interseccin de la recta con la ordenada, el valor
de la constante de Arrtherius.
En la prctica de la esterilizacin es necesario tener presente que la calidad

nutriente del medio debe ser preservada todo lo posible, razn por la cual, es
imprescindible disear un ciclo de esterilizacin lo ms efectivo posible pero
al mismo tiempo lo ms corto posible. Podremos definir un trmino nabla
(V) que representa la magnitud de la disminucin del nmero de organismos
viables de manera que:
Y por tanto
Sin embargo, como ya dijimos, parte de la destruccin ocurre en la etapa de

calentamiento y otra parte en la de enfriamiento, de manera tal que:
Las partes de calentamiento y enfriamiento son obtenidas a temperatura

variable de manera tal que es necesario integrar la ecuacin:
para el perodo de calentamiento y de enfriamiento con el fin de calcular la

cantidad de esporos que se eliminan durante ambos perodos. Conociendo el
valor inicial de esporos presentes en el volumen de medio considerado es

posible calcular el tiempo de mantenimiento a 120 C para la esterilizacin

completa del mismo.
2.7. MONTAJE DE EQUIPO
El biorreactor antes de ser puesto en marcha se llenara con alcohol de 96 para

ser esterilizado.
El biorreactor ser puesto en marcha con un volumen inicial igual a 0.75Lt para
llegar a un volumen final de 1.65Lt y utilizando la siguiente formula:
V=V0+Ft
Se determin q el tiempo de fermentacin ser de 6 h para un flujo constante de

alimentacin de (3/20)Lt/h.
Se trabajara con 1,5 vvm y 150 rpm como ser un cultivo por lote alimentado
aireado no habr flujo de salida.
F(t)
SR(t)
Vf, Xf
VR = Vf - V0
V0, X0, S0
RESERVORIO BOMBA
BIORREACTOR
Para esta experiencia se utilizara un El sistema Liflus GX fermentacin es un

fermentador a escala de laboratorio, que est diseado para la fermentacin de
usos mltiples. Varios esquemas de fermentacin, tales como fedbatch e incluso
el cultivo de clulas animales pueden ser pertalined con la serie BioGM. El
monoltico monitor LCD se instala en el cuerpo de la torre controlador de

tamao medio y se puede visualizar todos los valores medidos y los parmetros
de control.
El biorreactor del laboratorio es un biorreactor marca boitron- liflus GX.

El biorreactor del laboratorio de la universidad nacional del santa posee las
siguientes partes:
Determinacin de PH (4.2)
Sensor de PH
Sensor de T
Sensor Oxgeno Disuelto.
Antiespumante
Condensador
Motor de rotor
Posee cuatro bombas peristaticos: acido- base- alimentacin-
espumante
2 Sensores de aire (1%)
Un vaso con capacidad de 6lt

1. Sensor de
espuma
2. Condensador
3. Motor
4. Sensor de O.D
5. Sensor de PH
6. Sensor de T
2.8. PREPARACION DE SOLUCIONES DE SALES CONCENTRADAS (1L)
Pesar las correspondientes sales que conforman nuestra solucin de sales

concentradas para sepa de SaccharomycesCerevisiae ATCC 4126 lo cual se
muestra en la gua de Prctica de Bioprocesos:
Fuente de Ca : 2,9 g CaCl2. 2H2O
Fuente de Fe : 0.6009 g FeSO4.7H2O
Fuente de Cu : 0,25 g CuSO4.5H2O
Fuente de Co : 0,24 g CoCl2.6H2O
Fuente de Zn : 0,4015 g ZnSO4.7H 2O
Fuente de Mg : 2,20 g MgSO4.7H2O
Fuente de B : 0.06 g H3BO3
Fuente de Cl : HClconc.

Cada compuesto se pesara con cuidado.

Luego de pesar, cada compuesto lo diluiremos con agua destilada en un vaso de
precipitado adicionndole 100 ml de agua destilada con la ayuda de un agitador
de vidrio, la solucin se colocara en una fiola de 1 litro y se enrazara con agua
destilada hasta completar 1litro.
Una vez realizado el preparado se llevara a refrigeracin para su posterior
utilizacin.
2.9. SOLUCIN BUFFER O TAMPN
Una solucin buffer o tampn o amortiguadora es una mezcla de un cido dbil y

una base dbil, la cual se puede obtener mezclando un cido dbil con una de sus
sales correspondientes, tampn cido, puesto que el anion del cido es una base
dbil. Tambin se puede preparar la solucin amortiguadora mezclando una base
dbil con una de sus sales correspondientes tampn bsico. El cido dbil
reacciona con cual quien cantidad de OH- agregado, mientras que el papel de la
base dbil es consumir el H+ que pueda haberse introducido. Esto impide que se
perturbe en mayor grado el equilibrio:
H2O H+ + OH- y del cual dependa el PH mayor de la solucin.
El efecto amortiguador de estas soluciones se presenta cuando se les agrega

pequeas cantidades de cidos fuertes o bases fuertes. El responsable de este efecto
es una o ms reacciones que ocurren dentro del sistema y en las cuales se consume
casi totalmente el cido o base agregados. Esta reaccin puede determinarse
fcilmente sobre la base del equilibrio que predomina en el sistema aplicando el
teorema de Chatelier y teniendo en cuenta que siempre que un cido esta en
presencia de dos bases reacciona con aquella que produzca la sustancia ms estable
o que posee la menor constante de disociacin y lo mismo puede decirse si se trata
de una base en presencia de dos cidos.

III. MATERIALES INTRUMENTOS Y REACTIVOS

3.1. Medio de mantencin y resiembra del microorganismo.
Materiales y equipos
Balanza analtica
Olla a presin
Mechero Bunsen
Pipetas de 10 ml.
Aza bacteriolgica
Tubos de ensayo con tapas (8 tubos)
Varilla de vidrio
Matraz Erlenmeyer (250ml)
Guantes.
Esptula
Probeta graduada
Capachos de papelmetalico
Reactivos
Muestra: Saccharomycescerevisiae ATCC 4126
Sustrato: sacarosa
Agua destilada.
Extracto de levadura.
Peptona.
Agar.
3.2. Medio de activacin

Matraz de 250ml.
Matraz de 125 ml
Tubos de ensayo con tapa
Algodn
Gasa

Varilla de vidrio
Balanza analtica
Esptula
Agua destilada
Pinzas
Guantes
Shaker
Mechero Bunsen, trpode y rejilla.
Olla a presin
Pipetas
Capachos de papel metlico.
Reactivos
Componentes segn Tabla N 2
Alcohol
HClcc.
3.3.Medio de fermentacin y proliferacin
Matraz de 1 L
Matraces de 125 ml
Varilla de vidrio
Capachos de papel metlico.
Balanza analtica
Reactivos
Segn la tabla N 3 y 5 de anexos
Agua destilada
Alcohol
IV. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES:

Tabla N: Programacin y actividades a realizar
ACTIVIDADES FECHA
Recepcin de gua de practicas 02/11/10
Explicacin del procedimiento de 02/11/10
prctica.
Presentacin del preinforme de 07/11/10
practicas
Esterilizacin de materiales preparacin 09/11/10
de medios e inoculo para la curva de
calibrado
Toma de muestras para determinacin 16/11/10
de la curva de calibrado rpido
Preparacin de instrumentos y 22/11/10
esterilizacin de los mismos
Preparacin del medio de activacin
Inoculacin al medio de activacin 22/11/10
Preparacin del medio de fermentacin
Inicio de la cintica y toma de muestras 23/11/10

Discusin y conclusin de la experiencia 23 24/11/10
Imprevistos de la experiencia 25/11/10
Presentacin del informe final 30/11/10

V. BIBLIOGRAFIA
Jay, J. 1994. Microbiologa Moderna de los Alimentos. Zaragoza, Espaa: Acribia.
Doran M, P. Principios de Ingeniera de los Bioprocesos. Zaragoza, Espaa:
Instituto Politcnico Nacional. 2007. Laboratorio de Biorreactores: Manual de
Prcticas. Mxico. p. 48
http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/fisiologia.php?Mostrar=quimic
os
http://www.laboratoriosmicrokit.com/docs/..%5Cmanual%5CKits-C.pdf.
http://www.monografias.com/trabajos15/lactobacilos/lactobacilos.shtml
QUINTEROS RAMIREZ Rodolfo, Ingeniera Bioqumica
www.sciencedirect.com
MEDIOS DE FERMENTACION.PDF
Microbiologa General Tema 2.- Cultivo de microorganismos.PDF
Diseo de fermentadores o bioreactores.PDF
http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema12MI.html
http://www.monografias.com/trabajos63/fermentadores-cultivo
sumergido/fermentadores-cultivo-sumergido2.shtml
http://es.wikipedia.org/wiki/Biorreactor#Dise.C3.B1o_de_un_Biorreactor_de_Tanque
_Agitado


En la Gua de prcticas de curso Laboratorio de Bioprocesos se parte de las

siguientes condiciones:
Referencias de composicin de medios de mantencin, activacin y cultivo para

SaccharomycesCerevisiae ATCC 4126
MEDIO NUTRIENTE CONCENTRACIN (GR/L)

Solido de mantencin Extracto de levadura 3
(YM solido) Peptona 5
Extracto de malta 3
Agar 20
Glucosa 10
Activacin Sacarosa 15
Extracto de levadura 3
Extracto de malta 5
Solucin de sales 5 ml/L
Fermentacin Sacarosa
Extracto de levadura 1.8
(NH4)2SO4
KH2PO4
MgSO4.7H2O
Solucin de sales 10 ml/L
pH 4,2
Condiciones de cultivo: temperatura 35C y velocidad de agitacin 200 rpm en el

agitador orbital (shaker)
COMPOSICIN DEL M.O:
COMPONENTES % DE COMPOSICION
C 45 %
N 9%
Mg 0.4 %
K 0.5 %
P 2.0 %
max = 0.37 h-1 en glucosa a 35 C ( Lane, M. y Morrissey, J. 2010

COMPOSICION DE NUTRIENTE (g) PARA UN MEDIO DE

MANTENCION PARA 50ml
Nutriente So (g/l) So (g/50ml)
Extracto de Levadura 3 0.15

Extracto de malta 3 0.15
Peptona 5 0.25
Agar 20 1
Glucosa 10 0.5
PREPARACIN DEL MEDIO DE ACTIVACIN
NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L) PESAR (G)
Sacarosa 15 0.225
Extracto de 3 0.045
Levadura
Extracto de Malta 5 0.075
Solucin de Sales 5 ml/L 0.075ml
Tabla N 2: Composicin de medio de Activacin (para 15 ml de solucin)
2.9.1. PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN

100ml. El diseo del medio se realiz en un matraz Erlenmeyer de 500ml.

Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l) pesar

Clula Nutriente (gr)
C Sacarosa 45 42,105 0,4678 3,8478 3,8478 0.3847
(C12H22O11)
N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457 0.1146

Amonio
(NH4)2SO4
K Fosfato Potasico 0,5 28,676 57,352 0,0314 0,0471 0.0047
(KH2PO4)
Mg Sulfato de 0,4 9,86 24,65 0,0730 0,1095 0.0195
Magnesio
Heptahidratado
(MgSO4.7H2O)
P Fosfato Potasico 2 22,79 11,395 0,1580 0,2369 0.02369
(KH2PO4)
- Extracto de - - - - 1,8 0.18
Levadura
- Solucion de sales - - - - 10 ml/L 1
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
La fermentacin se realizara en un matraz de 500 ml.

800ml

Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l)

Clula Nutriente
C Sacarosa 45 42,105 0,4678 3,8478 3,8478
(C12H22O11)
N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457

Amonio
(NH4)2SO4
K Fosfato Potasico 0,5 28,676 57,352 0,0314 0,0471
(KH2PO4)
Mg Sulfato de 0,4 9,86 24,65 0,0730 0,1095
Magnesio
Heptahidratado
(MgSO4.7H2O)
P Fosfato Potasico 2 22,79 11,395 0,1580 0,2369
(KH2PO4)
- Extracto de - - - - 1,8
Levadura
- Solucion de sales - - - - 10 ml/L
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
Tabla N 5: Composicin Del Medio De Fermentacin II

1600ml. Entonces se tendr: X=3.425gr/l

So So
Elemento Nutriente YX/S Pesos (g)
(gr/l) (gr/l)
Extracto de
1.800
levadura 2.880
N (NH4)2SO4 2.36 1.454 2.181 3.489
P KH2PO4 11.38 0.301 0.451 0.722
K KH2PO4 57.47 0.060 0.089 0.143
Mg MgSO47H2O 24.66 0.139 0.208 0.333
Extracto de sales 10.000 16.000
pH inicial : 4,2
SHAKER
Temperatura: 35C
Fuente de carbono y energa: Sacarosa (C12 H22 O11), M =342 g
YX/S= % de C en el nutriente / % de C en la clula.
% de C en el nutriente = 12(12) x 100 / 342 = 42.105 %
% de C en la clula = 45 %
YX/S=(42.105/45) x0.6 (este factor por ser aireado)
YX/S = 0.936x 0.5 = 0.468g/g
1. CALCULO DE % NUTRIENTE:
Sacarosa: C12 H22 O11 PM = 342

342 100% 39.1 x
12x12 x x = 28.73
(NH4)2SO4:
PM = 132
x = 42.105
132 100%
KH2PO4
P: 28 x
PM = 136.1 x = 21.21
136.1 100%
31 x MgSO47H2O
PM = 246.3
x = 22.777
246.3 100%
KH2PO4
K: 24.3 x
PM = 136.1 x = 9.866
136.1 100%
2. CALCULO DE YX/S: Yx/s=(42.105/45)x0.5
Yx/s= 0.468g/g
%nutriente
Yx / s 0.6
%celula
KH2PO4:
P:
Sacarosa: Yx/s=(22.777/2)

Yx/s= 11.3885 g/g (NH4)2SO4:

Yx/s=(21.21/9)
KH2PO4:
K:
Yx/s=(28.73/0.5) Yx/s= 2.3567 g/g
MgSO47H2O
Yx/s=(9.866/0.4)
Yx/s= 57.46 g/g
Yx/s= 24.665 g/g
3. CALCULO DE S0
x x0
Yx / s
s0 s
Sacarosa: K:
S0= (1.8/57.46)x1.5
0.468= 1.8/S0
S0 = 0.046989 g/l
S0= 1.8/0.468
S0 = 3.8462g/l
(NH4)2SO4:
S0= (1.8/2.3567)x1.5
KH2PO4 S0 = 1.14567 g/l

P:
MgSO47H2O
S0= (1.8/11.3885)x1.5
S0 = 0.2371 g/l S0= (1.8/24.665)x1.5
K2HPO4 S0 = 0.10946 g/l

S0= 10ml/L
Extracto de levadura :
S0= 1.8
Solucin de sales
COMPOSICION DE SOLUCIONES DE SALES:
COMPONENTES CONCENTRACION
(gr/L)
CaCL2,2H2O 1.12
ZnSO4.7H2O 0.11
FeSO4.7H2O 0.06
CuSO4.5H2O 0.05
CoCL2,6H2O 0.01
MoO3 0.0005
MnCL2,6H2O 0.027
NaCl 0.28
DESARROLLO DE LA FERMENTACION (CAPACIDAD 2L)
MEDIO DE ALIMENTACIN: (para 1000ml de solucin)
Dato del biorreactor: F = 2.67ml/ min = (0.16)L/ h
X0 = 1.8 gr/L
S0 = 0
Sf = 3.77 gr/L
CONDICIONES INICIALES DADAS:
COMPOSICION ELEMENTAL DEL MICROORGANISMO
C 45% N 9% Mg 0.4% K 0.5% P 2.0%

Calculemos el Yx/s, teniendo a la fuente de Carborno (Sacarosa) como factor limitante, asi
tenemos:
%nutriente
Yx / s 0.6
%celula
Yx/s=(42.105/45)x0.5
Yx/s= 0.468 g/g
As mismo, de acuerdo con las condiciones de cultivo:
umax=0.37h-1
T=35C
Volumen Total del fermentador= 2L
Tiempo total del CLA= 6h
Como sabemos, el CLA con aireacin necesita antes el microorganismo tener un

CULTIVO POR LOTE, en el cual haya comenzado su crecimiento exponencial, hasta
obtener hemos credo conveniente una concentracin de clulas de 2g/L.
Condiciones para el CULTIVO POR LOTE
Vo=800ml So=?
Xo=0.2g/L
Xf=2g/L
X=1.8 g/l
Supongamos que tras el inicio de la fermentacin, tenemos que encontrar el tiempo ptimo
donde se inicia la fase de crecimiento exponencial, para ello hemos querido conveniente
fijar una X=1.8g/L, suponiendo que se ha consumido todo el sustrato, entonces tendremos
que:
Sf=0 (inicio del CLA)

0
/ =
0

Entonces, So=?
1.8
=
0.468
= 3.8462/
Calculando el tiempo aproximado de fermentacin del Cultivo por Lote:
1
= ln( )

1 2
= ln( )
(0.37) 0.2
= 6.22
Condiciones para el CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO
En la zona de crecimiento exponencial de masa celular
So=0 gr/L umax=0.37h-1
Xo=1.8gr/L Yx/s= 0.47 g/g
Vo=800ml
BIOMASA INICIAL(XoVo)= (1.8g/l)(0.8L)=1.44gr
De acuerdo a la bibliografa revisada, hemos credo conveniente trabajar con un

volumen final de 1.60L (80% del volumen total), entonces se tendr:
Como el tiempo total del CLA = 6horas

0 1.6 0.8
= : = = = 0.16/ = 2.67/
5
Condiciones de transicin
Como se tiene dos zonas de crecimiento, por teora sabemos que se debe cumplir:
Biomasa producida en la zona de crecimiento exponencial
= Biomasa producida en la zona de crecimiento limitado

Entonces debemos calcular el tiempo de transicin, a partir de:
(XV) crecimiento exponencial= (XV) crecimiento limitado
Asimismo se debe cumplir, para un buen desarrollo del microorganismo, teniendo un

tiempo de transicin =2.5horas
Entonces, sabemos que:
BIOMASA ZONA CRECIMIENTO EXPONENCIAL= BIOMASAZONA CRECIMIENTO LIMITADO
u t
XoVo e max. = FSfYX/S t + SoVo + XoVo
Despejando Sf, obtenemos que:
(XoVo . SoVo XoVo)

=
F/
Reemplazando:
(1.8 0.80.372.5 0 0.8 1.8 0.8)
=
0.16 0.47 2.5
= 11.66/
En la zona de crecimiento limitado de masa celular
Tendremos que:
XV= FSfYX/S t + SoVo + XoVo. ()
Como segn la bibliografa revisada, se tiene que Xf=
Entonces en Vf= 1.60L, se tendr:
Asimismo, Sf=? y So=0gr/l
De la ecuacin (), reemplazamos los datos obtenidos:
XV= (0.16)*(11.66)*(0.468)*(5) + 1.8*0.8
XV=5.8055gr de biomasa

Como: Vf=1.6L
Xf= (5.8055/1.6)=3.62844 gr/L
ASIMISMO:
Sf=?
A partir de:
Sabiendo que: ks=0.01
umax=0.37h-1
Yx/s= 0.47 g/g
Reemplazando:
(0.16 11.66 0.467 0.01)

=
0.16 11.66 0.467(0.37 5 1) + (0 + 1.8 0.8) 0.37
= 0.01368/
CALCULO DEL VALOR DEL NA:

.
=
2
Donde:
NA: Velocidad de Consumo de Oxigeno
x: Biomasa
Yo2: Rendimiento de O2
El valor de terico para la Saccharomyces cerevisiae es 0,4 h -1 y el

rendimiento de O2 es de 1,25 mg de O2 / L.h.
1 5.
(0,4 ) ( )

= 2

(1,25 ) = 1,6
. 2
Calculo del valor del KLA:


=
( )
Donde:
CL*: Concentracin Crtica de Oxigeno disuelto
CL: Concentracin de Oxigeno disuelto
El valor de CL* terico para la Saccharomyces cerevisiae es 0,6 mg O2/L y

el CL es de 20 % del valor de CL*, entonces es 0,12 mg O2/L.

(1,6 2)
= (0,60,12)2
= 3333,3/

PREPARACION DE SOLUCION TAMPON
A= 57.5 g cido ctrico/250 ml P.M=192.13gr/mol
Entonces: [A]= (57.5/192.13*250)=1.19M
B= 29.41 g citrato/100 ml P.M=170.14 gr/mol
[B]= (29.41/170.14*100)=1.73M
Luego, se tomo:
157.5 ml A + 92.5 ml B ajuste pH HCl y KOH
250 ml Agua Destilada
Entonces tendremos que:
[A]= (1.19*157.5/500)=0.375M
[B]= (1.73*92.5/500)=0.32M
pka=3.13

pH =pka + log([sal]/[acido])
pH = 3.13 + log(0.32/0.375)
pHinicial = 3.726, se utiliz KOH para ajustar el pH a 4.2
Solucin Tampn: 500 ml
pH citrato= 4.2
CLCULO DE LA VELOCIDAD DE AIREACIN ESPECFICA: VVM

= 2,035 104

Donde:
NA: Velocidad de Consumo de Oxigeno
T: Temperatura en K
: Eficiencia de Absorcin
Los valores tpicos de vvm:
Laboratorio: 0,5 2.0 vvm

.
El valor terico del vvm es 0,5 a nivel de laboratorio.
.
CLCULO DEL CAUDAL DE AIRE: Q
=
Donde:
vvm: Velocidad de Aireacin Especfica
VL: Volumen del Lquido del Fermentador

Reemplazando: VL= 1,8 L vvm= 0,5 g.K / l.h
.
= 0,5 1,8
.

= 0,9



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CULTIVO LOTE ALIMENTADO AIREADO 2011

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con el rendimiento y la proporcin volumtrica. Empleando esta levadura para la

1.2. Objetivos Especficos:

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II. METODOLOGA EXPERIMENTAL :

Condiciones del medio:

2.1. DISEO DEL MEDIO DE CULTIVO

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que se alimenta es el limitante del crecimiento, esta tcnica permite controlar la

El BA es particularmente til en procesos en los que el crecimiento celular

Donde F(t): caudal de alimentacin

Sr(t):concentracin de sustrato de la alimentacin

Vf: volumen final de trabajo

Vo: volumen al inicio de la alimentacin

Xo: concentracin de biomasa al inicio de la alimentacin

So: concentracin de sustrato limitante al inicio de la alimentacin

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El cultivo BA se inicia a partir de un cultivo en batch, por lo que V o, Xo y So son las

Es posible elegir distintas condiciones de alimentacin, ya sea mediante el empleo

Puede representarse un cultivo en batch alimentado operando en las condiciones halladas.

BATCH t = t0 BATCH ALIMENTADO t

Al obtener valores de Sr y F, se ha DISEADO una alimentacin para el cultivo en

2.2. PREPARACION DEL MEDIO:

Nutriente So (g/l) So (g/50ml)

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Extracto de Levadura 3 0.15

Tabla N1: Composicin de medio slido de mantencin (para 50 ml de

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Luego preparamos nuestra rea de trabajo, desinfectando con alcohol.

2.2.2. PREPARACIN DEL MEDIO DE ACTIVACIN

NUTRIENTE CONCENTRACIN (G/L) PESAR (G)

Solucin de Sales 5 ml/L 0.075ml

Tabla N 2: Composicin de medio de Activacin (para 15 ml de solucin)

Pesar los componentes descritos en la tabla N 2.

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Se esterilizan: la mezcla de extracto de levadura y sales en un tubo de

2.2.3. PREPARACIN DEL MEDIO DE FERMENTACIN

Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l) pesar

N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457 0.1146

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- Solucion de sales - - - - 10 ml/L 1

La fermentacin se realizara en un matraz de 500 ml.

Tabla N 4: Composicin Del Medio De Fermentacin I

Elemento Nutriente % en % en Y x/s (g/g) S`0 (g/l) S0 (g/l)

N Sulfato de 9 21,21 2,3567 0,7638 1,1457

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La fermentacin se realizara en el fermentador de 2000 ml.

FERMENTACIN DEL CULTIVO

Inocular el caldo (medio rico + biomasa) a un matraz conteniendo medio de

Tabla N 5: Composicin Del Medio De Fermentacin II

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P KH2PO4 11.38 0.301 0.451 0.722

La fermentacin se realizara en el fermentador de 2000 ml.

2.3. DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN CELULAR POR D.O.

Se toma una muestra de volumen conocido, y se centrifuga a 1200rpm.

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CaCl2 .2H2O: 1.12 g/L