TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRA EN
CIENCIAS EN PRODUCCIN AGRCOLA SUSTENTABLE
PRESENTA:
DIRECTORES
Especialmente quiero agradecer a mis directores de tesis: al Dr. Jos Luis Montaez
Soto y al Dr. Jos Venegas Gonzlez, por su gran apoyo para conmigo y mi trabajo,
por sus consejos y su paciencia para la redaccin de esta tesis; los comentarios y
sugerencias que me dieron en el laboratorio y sobre todo por brindarme su amistad.
A los Doctores; Martha Alicia Velzquez machuca y Luis Fernando Ceja Torres por
ser parte de mi comit tutorial, y al Dr. Nahum castellanos por motivarme desde la
licenciatura a seguir estudiando y tambin por apoyar en la revisin de mi tesis.
A todas las personas que conoc en los laboratorios del CIIDIR y con quienes tuve la
oportunidad de convivir especialmente a los tcnicos de laboratorio: Jazmn, Norma y
Hctor que siempre estuvieron para resolver mis dudas.
A Dios. Por darme la oportunidad de vivir y permitirme llegar hasta aqu y haberme
dado salud para lograr mis objetivos y por poner en mi camino a aquellas personas
que me han enseado tanto y me han acompaado durante este periodo.
A mis padres Yolanda y Rafael. Por darme la vida, por ser el pilar fundamental en
todo lo que soy, por creer en m y apoyarme en todo momento, por sus consejos, por
la motivacin constante que me ha permitido llegar a donde estoy, por su ejemplo de
vida y los valores inculcados que me han motivado a ser una persona de bien, pero
ms que nada, por su amor.
A mi novio Francisco. Quien me apoyo y alent para continuar, cuando pareca que
me iba a rendir.
CONTENIDO Pgina
RESUMEN 1
ABSTRACT 3
CAPITULO I. INTRODUCCIN 5
CAPITULO V. CONCLUSIONES 81
La cabeza o pia del agave tequilero (Agave tequilana Wever azul) constituye la
materia prima en el proceso de elaboracin de tequila. Su demanda actual oscila
alrededor de un milln doscientas mil toneladas anuales y en su procesamiento, se
genera un promedio de 200,000 toneladas anuales de bagazo, el cual no es
aprovechado actualmente y se est convirtiendo en un problema tanto para el medio
ambiente, como para los productores tequileros que an no han encontrado una
alternativa econmicamente viable para el aprovechamiento de este residuo
agroindustrial.
Este trabajo trata sobre la obtencin de compuestos fenlicos tales como el cido
ferlico, cafeico, p-cumrico, y p-carboxifenol, mediante la hidrlisis alcalina de la
lignina extrada a partir del bagazo de agave tequilero; compuestos que, dadas sus
propiedades funcionales, son ampliamente demandados por la industrias alimentaria,
farmacutica y de cosmticos.
1
Se aplic un diseo factorial completo 33 con tres repeticiones, para investigar
simultneamente los efectos de las variables: concentracin de NaOH (1,0, 2 y 3 N),
temperatura (80, 100 y 120 C), y tiempo de reaccin (30, 60 y 90 min), en la
hidrlisis alcalina de la lignina extrada a partir del bagazo de agave tequilero, a fin de
determinar las condiciones ptimas para la liberacin de compuestos fenlicos. Los
ensayos se realizaron utilizando una relacin slidos/ solucin alcalina de 1/20 (w /
w).
2
como el saborizante de mayor importancia a nivel mundial, por lo que es
ampliamente utilizado en diversas y variadas industrias
ABSTRACT
The vanilla flavoring is considered the most important in the world, because it is
widely used in various industries ranging from food, to the liquor, soft drink,
pharmaceutical, cosmetics and tobacco. Natural vanilla extract contains a lot of
compounds that give it its characteristic aroma and flavor. The major component and
primarily responsible for the properties of the vanilla is "vanillin (4-hydroxy-3-
methoxybenzaldehyde).
The high price of natural vanilla extract prohibits their use in the manufacture of a
variety of products; that is why, given the huge market potential, scarcity of the
natural vanilla extract, its high cost and chemical simplicity of its main active
ingredient, there is growing interest in the synthetic preparation of this compound.
One such alternative is the industrial preparation of vanillin from ferulic acid, chemical
compound that is associated to lignin, a natural constituent of wood and many agro
industrial waste, including bagasse agave plant.
The agave head (Agave tequilana Wever blue) is the raw material in the process of
making tequila. Your current demand hovers around one million two hundred
thousand tons and in its processing, an average of 200,000 tons of bagasse are
generated annually, which is not currently exploited and is becoming a problem for
the environment and for the tequila producers, who have not yet found an
economically viable alternative to the use of this agro industrial residue.
This paper deals with the production of phenolic compounds such as ferulic acid,
caffeic, p-coumaric and p-carboxifenol, by alkaline hydrolysis of lignin extracted from
agave tequila bagasse; compounds that given their functional properties, are widely
demanded by the food, pharmaceutical and cosmetics industries.
A full factorial design 33 with three replicates was used to simultaneously investigate
the effects of the variables: NaOH concentration (1.0, 2 and 3 N), temperature (80,
3
100 and 120 C) and reaction time (30, 60 and 90 min), in the alkaline hydrolysis of
the lignin extracted from agave bagasse, with the object to determine the optimal
conditions for the release of phenolic. Assays were performed using a solids - alkaline
solution ratio of 1/20 (w / w).
The best conditions for the alkaline hydrolysis of the agave's lignin were when the
hydrolysis is carried out with 1N NaOH, at a temperature of 120 C and for a time of
30 minutes. The content of phenolic compounds in the liquor obtained under these
conditions hydrolysis was 4448 55 mg / 100 g of lignin, which correspond to 1527,
918, 1226 and 778 mg of ferulic acid, caffeic acid, p-coumaric acid and p -
carboxifenol acid, respectively. The process yields, expressed as grams of compound
per 100 grams of agave plant bagasse were: 0.0034, 0.0020, 0.0027 and 0.0017% on
a dry basis for each of the phenolic aforementioned, respectively. In this hydrolysate it
was registered the higher antioxidant activity (84.09 2.5%) too. A high correlation
(R2 = 0.93) between phenolic content and antioxidant activity percent was observed
too.
In the Lignin samples treated under more drastic hydrolysis conditions, that is, those
samples hydrolyzed at NaOH concentrations greater or equal than 2N, the phenolic
content decreased and disappeared from the sample 2-120-30 hereinafter; that is,
when the lignin hydrolysis was carried out with NaOH 2N and at temperature of
120C and for a reaction time of 30 minutes.
Due to its constant and abundant availability, its high lignin content and its relatively
low price, the agave tequilero bagasse can be used in the production of various
phenolic compounds such as ferulic acid, whose chemical and functional properties
make it in a precursor for the bio-production of vanillin, one of the flavors and aromas
most liked today, and considered the most important flavoring worldwide, so it is
widely used in many and varied industries
4
I
INTRODUCCIN
5
Los agaves son plantas suculentas que pertenecen a la familia Agavaceae. La
palabra agave proviene de un vocablo griego que significa noble, ilustre,
admirable. Se tiene la certeza de que el origen del agave es Mxico debido a que es
aqu donde se encuentra la mayor diversidad de agavceas; pues de las 273
especies que se distribuyen en el continente americano, 205 se encuentran
representadas en nuestro pas. Los agaves guardan una relacin milenaria con la
historia de Mxico, su domesticacin se llev a cabo hace 3,500 aos
aproximadamente, y su cultivo contribuy al desarrollo de la agricultura de los
amerindios.
Antes de que el maz se convirtiera en un cultivo bsico, los agaves fueron las
principales fuentes de carbohidratos para las poblaciones indgenas de lo que hoy es
el oeste de Mxico y el sureste de los Estados Unidos de Amrica (Zizumbo 2008).
Las plantas completas de agave eran empleadas para delimitar terrenos, como
barreras de proteccin y para evitar la erosin del suelo. Las espinas se usaban
como agujas, puntas de flechas, punzones y clavos. La cabeza o pia se utilizaba
como alimento y para la elaboracin de bebidas. El aguamiel era utilizado como
endulzante en la preparacin de alimentos y en la elaboracin de pulque. El quiote se
utilizaba como viga en la construccin de viviendas, las cuales cubran con pencas
verdes a manera de tejas. Las pencas se utilizaban para la obtencin de fibras con
las cuales elaboraban diversos artculos como hilos, cuerdas, morrales, hamacas,
redes para pescar, prendas de vestir y trampas para cazar. Las pencas asadas se
aplicaban en la piel para curar heridas y lavar mordeduras de vboras, puestas en el
vientre servan para purificar los riones y la vejiga; adems, las pencas secas se
usaban como combustible y sus cenizas como jabn o detergente.
Las bebidas que se extraen del agave desde la poca del pueblo mexica hasta hoy
en da son el aguamiel, el pulque, mezcales y tequila, este ltimo se obtiene del
Agave tequilana Weber, variedad azul, originario del estado de Jalisco. En Mxico, la
produccin de tequila ha aumentado y con ello la problemtica de los residuos que
se generan en el proceso de elaboracin de esta bebida (Ramrez et al, 2012). Se
6
estima que la industria tequilera genera 0.8 kg de bagazo de agave tequilero por
cada litro de tequila elaborado, por lo que en la ltima dcada, la generacin de estos
residuos slidos arroja cifras superiores a las 200,000 toneladas al ao (CRT, 2013).
7
II
ANTECEDENTES
8
II. ANTECEDENTES
De la gran variedad de plantas de Mxico que benefician al ser humano, el agave o
maguey ha sido una de las ms aprovechadas, tanto en la antigua Mesoamrica
como en la actualidad. La palabra agave proviene de un vocablo griego que
significa noble, ilustre, admirable. Los agaves guardan una relacin milenaria con la
historia de Mxico, su domesticacin se llev a cabo hace 3,500 aos, y su cultivo
contribuy al desarrollo de la agricultura de los amerindios. Antes de que el maz se
convirtiera en un cultivo bsico, los agaves fueron las principales fuentes de
carbohidratos para las poblaciones indgenas de lo que hoy es el oeste de Mxico y
el sureste de los Estados Unidos de Amrica (Zizumbo 2008), debido a que esta
planta le proporciona al hombre casa, vestido, sustento y salud, (Tablas 1 y 2) por
esto el maguey ha sido calificado como excepcional (Oliver 1955).
9
Tabla 2. Usos del agave, productos y parte de la planta empleada.
La palabra maguey tiene origen tano en nhuatl es metl, nombre vinculado con la
voz mayauetl o mayahuel, divinidad femenina asociada con la planta y con la
embriaguez (Montemayor; 2005), pertenece a la familia de las agavceas, que se
agrupan en el orden Asparagales. El gnero Agave lo constituyen 197 taxas: 136
especies, 26 subespecies, 29 variedades y 7 formas (Rulfo 2007), es una planta de
gran importancia desde el punto de vista agroecolgico y socio ecolgico, por los
tantos usos que tiene dependiendo de la regin donde se ubique, que van desde su
empleo como lea hasta ornamental (Garca-Herrera et al; 2010). Su origen se
10
remonta a la poca prehispnica, cuando los pueblos indgenas del centro y norte del
pas encontraron en esta planta una fuente de materia prima para elaborar una gran
cantidad de productos (Garca-Herrera et al; 2010), considerando a Mxico como
centro de origen y de diversidad de los agaves (Figuras 1-2).
11
como agua, y es fresco y dulce; este mismo, cocido, se hace como vino, y dejndolo
acedar se vuelve vinagre; y apurndolo ms al fuego es como miel; y a medio cocer,
sirve de arrope, y es de buen sabor y sano; y a mi parecer es mejor que arrope de
uvas. As van cociendo estas otras diferencias de aquel jugo o licor, el cual se da en
mucha cuantidad, porque por algn tiempo cada da sacan algunas azumbres de
ello (Montemayor 2005).
Las bebidas que se extraen del agave desde la poca del pueblo mexica hasta hoy
en da son el aguamiel y el pulque elaborado a partir de la fermentacin de este. El
pulque es una bebida alcohlica de importancia prehispnica que era utilizada como
bebida ritual y alimenticia, el consumo de ella estaba restringido para mujeres
embarazadas, ancianos y condenados a muerte, siendo que su consumo no estaba
permitido ni siquiera para el gobernante o los nobles que lo rodeaban (Saldvar-E. y
Vargas-Rodrguez; 2007). Con la conquista y la colonizacin europea los derivados
del maguey tuvieron un incremento (Olvera-Vega; 1995), el pulque dej de ser una
bebida ritual recibiendo un impulso para venderlo. Los europeos a su vez iniciaron la
destilacin de otros agaves con los que elaboraron aguardientes denominados
12
mezcales o tequilas, siendo estos los principales productos derivados de esta planta
que se producen en la actualidad (Figura 3).
13
azul; de aqu que su nombre botnico sea Agave tequilana Weber azul (Nobel,
(1988). La planta del Agave tequilana Weber azul se extiende radialmente de 1.5 a
2.0 metros de altura, y de 1.7 a 2.5 m de dimetro. La parte area de la planta est
integrada por dos fracciones: hojas y tallo (Figura 4).
A B
Figura 4. Planta completa de Agave tequilana Weber azul (A), cabeza o pia (B)
El tallo y las bases de las hojas que lo conforman, constituyen la seccin conocida
con el nombre de cabeza o pia; es grueso, corto, alcanza de 50 a 80 cm de altura al
madurar, presenta un alto contenido de fructanos y constituye la materia prima para
la produccin de tequila. El tamao de sus hojas oscila entre los 90 y 120
centmetros, son de fibras firmes, casi siempre rgidamente estiradas, cncavas de
ascendentes a horizontales (Valenzuela, 1997; Iiguez, 2001).
14
sitios sin cambios bruscos de temperatura, con una temperatura media de 20C. Las
lluvias deben ser de aproximadamente un metro anual, con nublados de 65 a 100
das por ao. La falta de agua provoca que la planta tarde ms tiempo en madurar y,
por el contrario, el exceso de lluvia reduce el contenido de azcares. La altitud media
es cercana a los 1500 msnm; con variaciones que van de los 700 hasta los 2900
msnm. Los mejores suelos son los arcillosos, permeables, abundantes en elementos
derivados del basalto, ricos en fierro (Valenzuela, 1997).
Dependiendo de las condiciones del terreno, el cultivo del agave se establece con
densidades de poblacin que van de las 3000 a las 4000 plantas por hectrea, lo
cual repercute en el desarrollo de la planta individual y en el rendimiento agrcola del
cultivo. El agave llega a su madurez en el mejor de los casos a los 7 aos despus
de su plantacin, aunque puede tardar hasta 10 aos. Durante la maduracin se
concentran en la cabeza de la planta reservas de humedad y azcares que estn
destinadas a la floracin. A la cosecha del agave se le conoce como jima, y consiste
en cortar la planta desde su base y eliminar sus hojas para dar forma a un cuerpo
ovoide conocido como cabeza o pia. El peso promedio de las cabezas del agave
oscila entre los 30 y los 70 kg., aunque se han obtenido cultivos de agave cuyas
cabezas han llegado a pesar entre los 80 y 120 kg., y dentro de estos, cabezas de
hasta 150 kg. Durante la dcada pasada, el rendimiento agrcola del cultivo del
agave oscil entre 103 y 153 ton/ha, con un rendimiento medio de 124 ton/ha
(Valenzuela, 1997).
15
Zona comprendida dentro de la Denominacin de Origen del Tequila (Gerritsen et al;
2011). Dicha Zona est integrada por 181 municipios que comprenden
aproximadamente el 6% del territorio nacional, y que se encuentran distribuidos de la
siguiente forma: 124 municipios del Estado de Jalisco, 30 municipios del Estado de
Michoacn, 8 municipios del Estado de Nayarit, 7 municipios del Estado de
Guanajuato y 11 municipios del Estado de Tamaulipas (Figura 5).
16
970,000 toneladas anuales, con un mximo de 1,120,000 toneladas de pias de
agave que se consumieron en el ao 2008 (Figura 6).
El bagazo de agave tequilero (Figura 7), constituye el residuo fibroso que queda
despus de que las cabezas de agave han sido cocidas, destrozadas, enjuagadas y
exprimidas para extraerle los azucares fermentables para la produccin del tequila.
En peso hmedo el bagazo representa cerca del 40% del peso total de la cabeza de
agave procesada (Cedeo, 1995). El bagazo est compuesto principalmente de
fibras heterogneas de 10 a 12 cm de largo y material orgnico no fibroso en forma
de partculas finas (mdulas) que corresponden a la corteza y envoltura fibrovascular
dispersa en el interior de la cabeza de la planta de agave (Iiguez et al, 2007). Se
estima que la industria tequilera genera 0.8 kg de bagazo de agave tequilero por
cada litro de tequila elaborado, por lo que en la ltima dcada, se ha generado un
17
promedio de 200,000 toneladas anuales de este residuo agroindustrial. Entre las
caractersticas qumicas ms sobresalientes del bagazo del agave tequilero se
encuentra su alto contenido de material celulsico y hemicelulsico, cuyo promedio
es del 45.6%, as como su alto contenido de lignina, cuyo contenido promedio es de
18.1%, aproximadamente (Tabla 3) (Flores, 2009; Ramrez, 2012).
18
II.3.1 Usos del bagazo del agave tequilero
19
enlaces fibrilares de la pulpa del bagazo, con los de la pulpa del papel bond reciclado
y obteniendo as un papel de buena textura y apariencia.
En la implementacin del bagazo composteado como sustrato agrcola (Figura 8), se
demostr que este tiene un gran potencial para ser utilizado como sustrato
alternativo (Rodrguez, et. al; 2010), as como tambin su uso en mezclas bioslidos-
bagazo de agave durante el compostaje se obtuvo un producto con caractersticas
similares a una composta de follaje de pinos y encinos (iguez et. al; 2006).
20
animales rumiantes, lo cual nos indica que este residuo agroindustrial tratado con
hidrxido de calcio pude ser utilizado en la fabricacin de raciones alimenticias para
los animales rumiantes.
21
II.3.2 La lignina
La lignina es un polmero presente en las paredes celulares de organismos del reino
Plantae y tambin en las Dinophytas del reino Chromalveolata. La palabra lignina
proviene del trmino latino lignum, que significa madera. La lignina est formada por
la extraccin irreversible del agua de los azcares, creando compuestos aromticos.
Los polmeros de lignina son estructuras transconectadas con un peso molecular de
10,000 uma. Se caracteriza por ser un complejo aromtico (no carbohidrato) del que
existen muchos polmeros estructurales (ligninas) (Figura 10).
22
Despus de los polisacridos, la lignina es el polmero orgnico ms abundante en el
mundo vegetal. Es importante destacar que la lignina es la nica fibra no polisacrido
que se conoce. Este componente de la madera realiza mltiples funciones que son
esenciales para la vida de las plantas. Por ejemplo, proporciona rigidez y da
resistencia a la pared celular contra el ataque de microorganismos, impidiendo la
penetracin de las enzimas destructivas en la pared celular, la molcula de lignina
presenta un elevado peso molecular, que resulta de la unin de varios cidos y
alcoholes fenilproplicos (cumarlico, coniferlico y sinaplico) (Tainz et al., 2006). El
acoplamiento aleatorio de estos radicales da origen a una estructura tridimensional,
polmero amorfo, caracterstico de la lignina. La lignina es el polmero natural ms
complejo en relacin a su estructura y heterogeneidad. Por esta razn no es posible
describir una estructura definida de la lignina; sin embargo, se han propuesto
numerosos modelos que representan su estructura (Tainz et al., 2006).
23
carboxilo o fenlicos, respectivamente. El primero se asocia principalmente con
lignina y el segundo se esterifica con la hemicelulosa principalmente. La unin entre
el cido ferlico y la lignina an no es bien entendida, depende en gran medida de la
materia prima y los resultados se ven influenciados por los mtodos de
fraccionamiento empleados (Jefries, 1994).
II.4 La vainilla
24
Figura 11. Planta de vainilla (Vanilla planifolia).
25
El extracto natural de vainilla contiene una gran cantidad de compuestos que le
confieren su aroma y sabor caractersticos. En 1858, se aisl por primera vez el
componente mayoritario (>98%) y principal responsable de sus propiedades, el cual
fue denominado como vainillina (4-hidrxi-3-metoxibenzaldehdo) (Figura 12) (Asaff,
2012). La vainillina (4-hidroxi-3-metoxibenzaldehdo) es el componente principal de la
vainilla natural, es uno de los aromatizantes ms ampliamente utilizados en todo el
mundo. Al igual que muchos otros compuestos fenlicos de bajo peso molecular, la
vainillina muestra propiedades antioxidantes (Salazar, et.al., 2008).
26
Figura 13. Vainas de vainilla beneficiada
27
Figura 14.- Produccin nacional de vainilla beneficiada de 1992 al 2011
28
Figura 15. Principales pases productores de vainilla de 1992 al 2011.
A pesar de que la vainilla es un producto que tiene una gran importancia dentro de
algunas industrias, an no tiene el peso especfico para que pueda existir un
seguimiento de las cotizaciones de esta especie en los mercados en el mbito
mundial. As, dado que Estados Unidos es el principal importador mundial de
vainillina, con el fin de observar cul ha sido el comportamiento de los precios de la
vainilla en el mercado estadounidense, se analiza el precio que este pas ha pagado
por la compra del producto en el pas productor. Este precio refleja el costo del
producto puesto en la frontera del pas exportador. No incluye los costos de traslado
al pas comprador, ni los costos de internacin a la zona de consumo. As, en el caso
de la vainilla procedente de Madagascar, el precio promedio pagado fue de 37.28
dlares por kilogramo. Es importante sealar que se trata de vainilla en bruto, sin
ningn tipo de industrializacin posterior. En el caso de Indonesia el precio pagado
fue 26.47 dlares por kilogramo, la vainilla de Comoras fue pagada a razn de 51.5
29
dlares por kilogramo, y la vainilla mexicana fue pagada a razn de 56.73 dlares por
kilogramo.
El comercio de la vainilla se compone de una serie de precios que representa a los
diversos agentes que participan en ella y as como los mrgenes de ganancia que se
pueden obtener durante todo el proceso de produccin y transformacin de la
vainilla. La vainilla mexicana durante el periodo de 1993-2000, registr en trminos
nominales una tendencia al crecimiento; ya que pas de una cotizacin de
$24,844/ton a $56,734/ton, esto significa que un lapso de 7 aos el precio se duplic.
Se observ a la vez una tasa de crecimiento del orden de 10.87%.
El ao que mostr una cada en el precio fue 1996, donde el precio alcanz un total
de $ 18,438/ton, lo que represent una disminucin de 17% con respecto al precio
del ao anterior (SAGARPA.2007). Este alto precio se debe a que el cultivo de
vainilla, es un cultivo muy delicado que requiere condiciones climticas especiales
para su desarrollo, tambin cuando ocurre la floracin, la polinizacin debe ser hecha
a mano ya que no hay suficientes insectos polinizadores; adems, las vainas
recolectadas de la vainilla se someten a un largo proceso de tratamiento con agua
caliente, fermentacin, secado y maduracin. Finalmente se extrae la vainillina
(principal sustancia responsable del aroma), que se encuentra en una proporcin de
12% del peso de las vainas. El resultado final es un producto que puede variar en
calidad y caractersticas aromticas, segn la variedad de planta utilizada y segn las
condiciones del proceso de extraccin (Duran, 2002).
30
De acuerdo a la Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-182-SCFI-2010, estos son
algunos de los parmetros de calidad que debe cumplir la vainilla mexicana (Tablas
4-6).
31
Tabla 6.- Especificaciones microbiolgicas para la vainilla de Papantla beneficiada
32
a partir de la lignina, un constituyente natural de la madera, la cual es un subproducto
de la industria del papel (Prez, 2009).
A B
Figura 17. Caa de azcar (A) y plantas de guadua (B)
33
Desde la dcada de los noventa, se han venido estudiando alternativas menos
riesgosas y econmicamente competitivas para la produccin de vainillina. A partir
del ao 2000, la empresa Rhodia inici la venta de vainillina producida por la accin
de microorganismos capaces de transformar el cido ferlico extrado (Figura 18) de
la cascarilla de arroz en vainillina (Prez, 2009).
Los compuestos fenlicos son sustancias que poseen un anillo aromtico unido a
uno o ms grupos hidroxilo, incluyendo derivados funcionales (steres, glucsidos.).
Los fenoles son metabolitos secundarios de las plantas que les confieren cualidades
deseables como indeseables, tienen un papel importante en el color, en las
cualidades sensoriales y nutricias as como en las propiedades antioxidantes de los
alimentos, y no estn presentes en alimentos provenientes de animales (Escobar,
2012). Los cidos hidroxicinmicos son componentes importantes de paredes
celulares de las plantas en determinados alimentos vegetales cuyos principales
representantes son el cido ferlico, p-cumrico, cafico y sinpico, (Ferguson, et.al.,
2005) (Figura 19).
34
enzimticamente para luego recuperar y purificar el cido ferlico liberado (Mussatto,
et al.; 2007). Algunos de estos desechos agroindustriales de los que se ha realizado
la liberacin de cido ferlico son: el bagazo cervecero, desechos de la industria
vincola y mazorcas de maz, los cuales fueron tratados mediante hidrlisis acida
seguida de una hidrlisis alcalina con el fin de que la extraccin de cido ferlico
fuera optima, y otra ventaja del uso de estos desechos es que son relativamente
baratos (Mussatto, et al.; 2007, Torre, et. al; 2008 y Max, et. al; 2009).
35
Debido al bajo coste y gran disponibilidad, algunos materiales lignocelulsicos tales
como madera de eucalipto, salvado de cebada, olotes, hojas de maz y fibra de
avena han sido evaluadas como fuentes alternativas para la obtencin de cidos
fenlicos (Mussatto; et.al., 2006)
36
II.6 JUSTIFICACIN
II.8 HIPTESIS
37
II.9 OBJETIVOS
Obtener cido ferlico por va qumica, a partir de la lignina presente en el bagazo del
Agave tequilana Weber azul, que genera la industria tequilera nacional durante el
proceso de elaboracin de tequila.
38
III
MATERIALES
Y
MTODOS
39
III.1 Estrategia experimental
En el desarrollo del presente trabajo de investigacin se aplic la siguiente estrategia
experimental (Figura 20).
40
III.2 Recoleccin y acondicionamiento de la materia prima
41
III.3 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave
III.4 Determinacin de pH
42
filtrada a travs de manta de algodn, y el pH del extracto fue determinado con un
potencimetro HANNA modelo HI-2211.
La relacin C:N fue calculada en base al carbono orgnico total, y el anlisis del
contenido de nitrgeno total determinado por el mtodo de Kjeldahl (AOAC, 1997).
43
III.7 Determinacin de lignina
44
Figura 22. Diagrama de flujo del proceso de hidrlisis cida del bagazo de agave
La pre- hidrlisis de las muestras se llev a cabo mediante el empleo de una solucin
de H2SO4 al 73%, a una relacin de 5 mL de sta solucin por gramo de muestra
seca. La hidrlisis de las muestras se llev a cabo a una temperatura de 120C
durante 17 min. Al trmino de la reaccin, el lquido sobrenadante fue decantado y
los residuos slidos fueron separados por filtracin al vaco. La pasta obtenida fue
posteriormente lavada con agua destilada hasta obtener un pH neutro. Las pastas
obtenidas de color caf obscuro fueron colocadas en un horno y secadas a 50 1C,
hasta llegar a un contenido mximo de humedad del 50%.
45
en investigacin, la industria, el control de calidad, el medio ambiente, el rea de
alimentos, el rea de materiales y en anlisis forenses (Olsen, 1990).
46
diferentes condiciones de hidrlisis de las muestras (Tabla 7). La relacin utilizada
de hidrxido de sodio-lignina de agave fue de 1:20 (p/p). Para el calentamiento de las
muestras a 80 y 100C se utiliz una plancha de calentamiento y agitacin LabTech
modelo 1003 (Proveedor de laboratorio S.A. de C.V., Mxico), y para alcanzar
temperaturas de 120 C se utiliz una autoclave convencional de laboratorio marca
All American, modelo 1925-X de 25 L de capacidad (Proveedor de laboratorio S.A. de
C.V., Mxico). Transcurrido el tiempo de hidrlisis, los diferentes tratamientos fueron
enfriados inmediatamente en un bao de hielo y la mezcla fue filtrada mediante el
uso de una bomba de vaco y papel filtro Whatman N41. Los licores resultantes
fueron colocados en frascos de vidrio mbar (Figura 23) y analizados por HPLC para
determinar las concentraciones de compuestos fenlicos presentes en cada muestra.
47
Tabla 7. Condiciones de hidrlisis de la lignina obtenida del bagazo de agave
48
III.11 Cuantificacin de compuestos fenlicos
49
procedimiento que a los extractos. Los resultados obtenidos se reportaron como
gramos de cido glico equivalentes (GAE) por 100 g de materia seca.
= ( ) 100 (4)
Ao
ln( )
At
= (5)
t
50
Un tercer mtodo de expresin de la actividad antioxidante basado en la velocidad de
oxidacin (ORR), se calculara mediante la siguiente ecuacin (Ec. 6).
51
de blanqueo de -caroteno se calcul mediante el ajuste de regresin lineal a los
datos con el tiempo. Todas las muestras se ensayaron por triplicado. Se utiliz Butil
Hidrxi Tolueno (BHT) como estndar y etanol al 80% como control. Se realiz un
anlisis de correlacin para determinar si hay relacin entre la actividad antioxidante
y la cuantificacin de compuestos fenlicos.
52
3. Separacin y el anlisis de los iones moleculares y de los fragmentos cargados
producidos segn su relacin m/z.
4. Finalmente, se obtiene el espectro de masas, en el que se presenta la abundancia
relativa de los iones y fragmentos separados respecto a la relacin masa/carga.
53
ionizacin, y analizadores de masas (Plasencia, 2003). El espectro resultante es un
grfico que representa la abundancia relativa de los iones producidos (% de
abundancia relativa de los iones producidos) respecto de su relacin masa/carga
(m/z). La seal correspondiente a un in aparece en forma de varios picos que
corresponden a la distribucin estadstica de los distintos istopos del in. La
informacin obtenida por espectrometra de masas es esencialmente cualitativa,
como es la determinacin de masa molecular o la informacin sobre la estructura a
partir de los fragmentos obtenidos, pero tambin se pueden realizar anlisis
cuantitativos utilizando patrones internos o externos con lmites de deteccin desde
picomoles a femtomoles (Plasencia, 2003) .
54
Figura 25. Esquema de un sistema de ionizacin por electrospray (ESI)
El anlisis por ESI, se puede hacer provocando una ionizacin positiva o negativa.
Se selecciona la polaridad de los iones que se desea analizar mediante el voltaje del
capilar. Permite la obtencin del in molecular, y si se desea obtener una
fragmentacin, se puede inducir aumentando el voltaje en la punta del cono del
capilar. Este proceso produce un ion con carga positiva y un electrn suelto. La
molcula ionizada puede tener energa excesiva que puede ser disipada a travs de
la fragmentacin de ciertos enlaces qumicos. El rompimiento de varios enlaces
qumicos permite la produccin de fragmentos de ion cuya masa es igual a la suma
de las masas atmicas de un grupo de tomos que retienen la carga positiva durante
el proceso de fragmentacin (Martn y Ballesteros, 2010).
55
movimiento de las partculas cargadas permite distinguir unas de otras en funcin de
la energa cintica de cada in, de la velocidad o del momento de fuerzas. Los
distintos analizadores aprovechan alguna o varias de estas propiedades para separar
los iones de distintas masas (Martn y Ballesteros, 2010).
56
de acuerdo a su velocidad (por lo tanto m/z) como van recorriendo la regin libre de
campo entre la fuente de ionizacin y el detector. Los iones chocan secuencialmente
en el detector en forma de un incremento de m/z. Los iones de baja m/z llegan al
detector antes que aquellos con m/z alta debido a que entre ms m/z tengan los
iones tendrn una velocidad menor (Plasencia, 2003).
57
III.14 ANLISIS ESTADSTICO
58
iV
RESULTADOS
y
discusin
59
IV.1 Anlisis qumico porcentual del bagazo de agave
tequilero
La composicin qumica porcentual del bagazo del agave tequilero (Agave tequilana
Weber azul) se muestra en la siguiente tabla (Tabla 8). Se puede observar que existe
cierta heterogeneidad sobre el anlisis qumico porcentual entre los resultados aqu
obtenidos con los reportados por otros investigadores; aun cuando se trata de la
composicin qumica de residuos del mismo agave tequilero (Agave tequilana Weber
azul). La diferente edad de las plantas de agave al momento de la cosecha, as como
a las diferentes condiciones agronmicas de los cultivos se pueden mencionar como
las posibles causas de estas discrepancias.
60
Los resultados obtenidos son muy similares a los reportados por Iiquez (2005), las
ligeras discrepancias entre estos puede deberse a muchas causas tales como la
edad de la planta, las condiciones agronmicas de los cultivos, la manera en la que
se proces la planta para la elaboracin del tequila, tal como lo menciona Flores
(2009) , donde explica que en las empresas de mayor tecnificacin recurren al
desmenuzado de las pias cocidas para extraer mayor cantidad de material, mientras
que en otras empresas slo someten a una trituracin las pias de agave ya cocidas,
usando para ello molinos de piedra, por lo que los residuos de agave de las
diferentes empresas son bastante diferentes.
61
sido propuestos para la produccin de precursores de la vainillina como lo son el
cido ferlico, el cido cafico, y el cido p-cumrico.
Dado que la gran mayora de las reacciones qumicas y enzimticas que se llevan a
cabo durante los procesos de biodegradacin de los residuos agroindustriales se ven
afectadas por el pH de dichos residuos, el conocimiento de este parmetro
fisicoqumico resulta fundamental, para tomar las medidas correctivas pertinentes si
queremos evitar o acelerar la velocidad de dichas reacciones o bien, si queremos
utilizar dichos residuos como sustrato para el crecimiento de otras plantas. Se ha
encontrado que valores de pH cidos favorecen las reacciones de hidrlisis y que el
pH ptimo para un sustrato orgnico va de 5.2 a 6.3, ya que este intervalo de pH
tambin favorece la actividad de microorganismos benficos para las plantas como
son las bacterias nitrificantes y los hongos micorrizicos (Zrate 2006).
En esta parte del proyecto se realizaron varios ensayos con el fin de determinar un
ptimo uso del agua y del tiempo del lavado, con lo que se lleg a la colusin de que
los mejores resultados se obtuvieron al lavar la muestra cada 90 minutos dejndola
60 minutos en agitacin mecnica constante y 30 minutos de reposo entre cada
lavado. De este pretratamiento cido se obtuvo un polvo negro con un rendimiento
promedio del 72.8 % en peso.
62
3412 cm-1, la cual tiene una alta intensidad y se le atribuye a los grupos OH de la
lignina. A un nmero de onda de 2929 cm-1 aparece la banda de C-H, la cual en su
mayora pertenecen a los grupos metoxilos del anillo base de las ligninas. Por otro
lado, la banda caracterstica de los grupos carbonilos, la cual normalmente aparece
entre un nmero de onda de 1738-1709 cm-1, no se observa en el espectro, debido
muy probablemente a que el tamao de la molcula permite que haya interacciones
entre otros tomos los cuales tiene una mayor relevancia en el espectro haciendo
que este no se vea tan definidamente y solo se note como un hombro a un nmero
de onda de 1720 cm-1. Por su parte, la banda que aparece a un nmero de onda de
1638 cm-1, se debe a vibraciones del esqueleto aromtico C=C y a dems
interacciones HC =CH. Finalmente las bandas ubicadas en la regin entre los
1000 y 1200 cm-1 corresponden a enlaces CO de metoxilos y de COH.
63
IV.4 Hidrlisis alcalina de la lignina
64
etanlicos de las 27 muestras de lignina hidrolizadas (Tabla 9). Se puede observar
que al inicio de la hidrlisis, la concentracin de compuestos fenlicos totales se
incrementa tanto al aumentar la concentracin de NaOH, como al aumentar la
temperatura y el tiempo de reaccin. Este incremento ocurre hasta llegar a un valor
mximo de 4575 mg de compuestos fenlicos totales por 100 g de lignina, el cual se
obtuvo a una concentracin 2N de NaOH, a una temperatura de 80C y un tiempo de
reaccin de 30 minutos. Tambin se puede observar que no existe una diferencia
estadstica significativa (p<0.05) en la cantidad de compuestos fenlicos encontrados
en la muestra de lignina hidrolizada a una concentracin de NaOH 2N, una
temperatura de 80C y tiempo de reaccin de 30 minutos, con respecto a la muestra
de lignina hidrolizada a una concentracin de NaOH 1N, una temperatura de 120C y
durante 90 minutos de tiempo de reaccin.
2.5
y = 0.025x - 0.1357
R = 0.9938
2
Absorbancia a 760 nm
1.5
0.5
0
0 20 40 60 80 100
Concentracin de cido Glico (g/mL)
Figura 27.- Curva tipo de cido glico
65
una solucin de NaOH 2N y temperatura de 120C, al igual que cuando se utiliz una
solucin de NaOH 3N, lo cual se debe posiblemente a que una vez que los
compuestos fenlicos son liberados de la lignina, sufren una degradacin debido a
las drsticas condiciones en que se lleva a cabo el proceso de hidrlisis.
66
IV.6 Evaluacin de la actividad antioxidante
Figura 28. Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las muestras de lignina
hidrolizadas con NaOH 1N.
67
Figura 29. Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las muestras de lignina
hidrolizadas con NaOH 2N.
Figura 30. Disminucin de la absorbancia del -caroteno con las muestras de lignina
hidrolizadas con NaOH 3N.
68
Esto se debe a que a medida que se incrementa la temperatura y tiempo de
hidrlisis, se va liberando una mayor cantidad de compuestos fenlicos con actividad
antioxidante. Las muestras cuya cintica de decoloracin del -caroteno fue muy
similar a la que presenta el -tocoferol fueron aquellas que se obtuvieron en
condiciones de hidrlisis de 1-120-90 y 2-80-30; es decir, aquellas cuya hidrlisis se
llev a cabo empleando NaOH 1N, temperatura de 120C y 90 minutos de tiempo de
reaccin, o bien, aquella obtenida con NaOH 2N, temperatura de 80C y un tiempo
de reaccin de 30 minutos, respectivamente, pues no existe una diferencia
estadstica significativa (p<0.05) entre la cintica de decoloracin del -caroteno de
ambas muestras. Cuando la hidrlisis se lleva a cabo con NaOH 2N, a medida que
se incrementa la temperatura (T>80C) y el tiempo de reaccin (t >30 min), la
cintica de decoloracin del -caroteno va tendiendo a parecerse ms a la que
presenta la muestra control; es decir, la pendiente de la recta va disminuyendo hasta
que, a partir del hidrolizado 2-100-60, las cinticas de decoloracin del -caroteno
son similares a las del control, lo cual se debe a que bajo estas condiciones de
hidrlisis, se presenta una posible degradacin de los compuestos fenlicos que han
sido liberados de la lignina, por lo que las muestras pierden su capacidad
antioxidante sobre el -caroteno. Por otro lado, ninguno de los hidrolizados obtenidos
con NaOH 3N presentaron actividad antioxidante, lo cual se debe a las drsticas
condiciones aplicadas en la hidrlisis de la lignina del agave tequilero.
69
este valor disminuye a medida que se incrementa la actividad antioxidante del
compuesto. En valor antioxidante fue mnimo (0.042 y 0.038) en las muestras 1-120-
90 y 2-80-30, respectivamente, y no hubo una diferencia estadstica significativa
(p<0.05) en el valor antioxidante entre ambas muestras. Cuando la hidrlisis se llev
a cabo con NaOH 2N, a medida que se incrementa la temperatura (T>80C) y el
tiempo de reaccin (t >30 min), el valor antioxidante de los va tendiendo a parecerse
ms al valor antioxidante que presenta la muestra control; es decir, AOX tiende 0
0.264, que, a partir del hidrolizado 2-100-60, el valor de AOX de los hidrolizados es
igual a AOX del control. Esto se debe a que bajo estas condiciones de hidrlisis, se
presenta una posible degradacin de los compuestos fenlicos que han sido
liberados de la lignina, por lo que las muestras pierden su capacidad antioxidante
sobre el -caroteno. Por otro lado, el valor antioxidante de todas las muestras que
fueron hidrolizadas con NaOH 3N, fue igual al valor antioxidante que presenta la
muestra control; es decir, AOX = 0.264.
70
Tabla 10. Actividad antioxidante de los hidrolizados de lignina
71
dichas muestras. Nuevamente observamos que la actividad antioxidante fue nula
(AA=0%), en aquellas muestras hidrolizadas con NaOH 2N, temperaturas T=120 C,
as como en todas las muestras hidrolizadas con NaOH 3N.
72
Deseano et al., (1990) encontraron que las mejores condiciones para obtener
vainillina a partir de la lignina extrada del bagazo de caa de azcar, son aquellas en
las que la hidrlisis alcalina de la lignina se lleva a cabo con una solucin de
hidrxido de calcio al 20% en peso y a una temperatura de 170C; condiciones que
resultan muy diferentes a las utilizadas en este estudio, probablemente debido a que
el Ca(OH)2 es mucho menos agresivo que el NaOH que nosotros empleamos para
llevar a cabo la hidrlisis alcalina de la lignina. Otros autores han utilizado tambin
las mismas condiciones anteriores para llevar a cabo la hidrlisis alcalina de la
lignina extrada de la guadua, para la obtencin de vainillina (Martnez et al., 2011)
Varios investigadores han observado que los rendimientos de extraccin y la
actividad antioxidante de los extractos dependen del tipo de disolvente utilizado,
como consecuencia del diferente potencial antioxidante de compuestos con distinta
polaridad (Conde, 2009). Los disolventes apolares son los ms utilizados para la
extraccin de compuestos fenlicos en medios acuosos. Se han empleado acetato
de etilo y dietil-ter para la extraccin de compuestos fenlicos de bajo peso
molecular de madera de roble observndose que los compuestos polifenlicos
extrados con acetato de etilo a partir de diferentes sustratos naturales presentan una
elevada capacidad antioxidante. Sin embargo, el etanol y el agua son los disolventes
ms frecuentemente utilizados por razones de ausencia de toxicidad, costo y
abundancia, respectivamente.
73
de los compuestos fenlicos, mientras que en procesos de hidrlisis de duracin
entre 1-8 h, no observaron degradacin de estos compuestos.
Al comparar los resultados de las tablas 10 y 11, podemos ver que la mxima
actividad antioxidante, calculada por cualquiera de los cuatro diferentes mtodos
utilizados en este estudio, coincide con el mximo contenido de compuestos
fenlicos en las muestras hidrolizadas. Si hacemos la representacin grfica del
contenido de compuestos fenlicos totales con respecto a la actividad antioxidante
de las muestras (Figura 31), se puede apreciar que existe una correlacin altamente
significativa entre ambos factores, ya que al aumentar el contenido de compuestos
fenlicos totales, tambin aumenta la el % de actividad antioxidante de la muestra,
obtenindose un coeficiente de correlacin R2=0.93 entre dichas variables.
74
Se han obtenido resultados contradictorios sobre la relacin que guarda el contenido
de compuestos fenlicos totales con la actividad antioxidante de la muestra (Conde,
2009); mientras algunos autores mencionan haber encontrado una correlacin entre
el contenido en compuestos fenlicos y la actividad antioxidante (Tsaliki et al., 1999),
otros autores no encontraron tal correlacin (Kahkonen et al., 1999; Escobar, 2012).
Por ejemplo, Velioglu et al., (1998) obtuvieron un coeficiente de correlacin de
R2=0.9632 entre el contenido de compuestos fenlicos totales y la actividad
antioxidante de 8 muestras de fibras de cereales, y un coeficiente de correlacin de
R2=0.9051 entre el contenido de compuestos fenlicos totales y el % de AA, al
analizar 4 diferentes productos de cereales, sin embargo, al analizar cinco diferentes
materiales ricos en antocianinas, la relacin entre el contenido de compuestos
fenlicos totales y el % de actividad antioxidante no fue significativo, arrojando un
coeficiente de correlacin entre ambos de R2=0.4623. Estos autores tambin
mencionan que la actividad antioxidante no slo depende del contenido de
compuestos fenlicos, sino tambin del tipo de compuestos fenlicos presentes, ya
que las muestras ricas en antocianinas les dieron mayor actividad antioxidante.
Los espectros de elusin de las muestras de lignina tratadas bajo las diferentes
condiciones de hidrlisis se muestran en las figuras 32-48, las cuales se ubican en la
seccin de ANEXOS. Debido a que todos los espectros de elusin obtenidos, desde
la muestra 2-120-30 en adelante fueron idnticos, slo se incluye el espectro de la
muestra 2-120-30 (Figura 47), mientras que en la figura 48 se representa el espectro
de elusin de los estndares utilizados e inyectados a una concentracin de 1
mg/mL. Los estndares utilizados fueron: cido p-carboxibenzico, cido p-cumrico,
cido cafeico y cido ferlico. Por otro lado, con las reas de cada una de las
seales obtenidas, y con los volmenes y diluciones utilizadas para la inyeccin de
las muestras, se obtuvieron las concentraciones de cada uno de los compuestos
75
fenlicos encontrados en las muestras de lignina tratadas bajo las diferentes
condiciones de hidrlisis (Tabla 11).
76
Tabla 11. Compuestos fenlicos encontrados en los hidrolizados de lignina
77
Adems de los compuestos mencionados en la tabla 15, tambin se identificaron
trazas de cido sirngico, y cido vainillinico en los hidrolizados de la lignina pero, al
igual que los compuestos mencionados en dicha tabla, slo aparecieron hasta la
muestra 2-100-90; es decir, la muestra hidrolizada con NaOH 2N, a una temperatura
de 100C y durante 90 minutos de tiempo de reaccin. Estos compuestos tambin se
destruyeron a condiciones de hidrlisis ms drsticas.
Al analizar los resultados de las tablas 8, 9 y 10, podemos ver que tanto la
concentracin de compuestos fenlicos totales (tabla 8), as como el porciento de
actividad antioxidante (tabla 9) y la concentracin de cada uno de los compuestos
fenlicos encontrados, todo ello se present bajo las mismas condiciones de
hidrlisis de las muestras de lignina, lo cual era de esperarse, puesto que todos estos
parmetros estn correlacionados; es decir, a mayor concentracin de compuestos
fenlicos se tendr mayor actividad antioxidante y por lo tanto, ser tambin mayor la
concentracin de cada uno de los compuestos fenlicos encontrados, aunque esto
ltimo no necesariamente, pues cada uno de los compuestos fenlicos presenta
diferente actividad antioxidante, tal como lo manifiesta Gutirrez et al., (2008).
78
uno de los compuestos fenlicos identificados y cuantificados, las cuales fueron:
15.27, 9.18, 12.26, y 7.78 mg/g de lignina de los cidos ferlico, cido cafeico, cido
p-cumrico y cido p-carboxifenol, respectivamente. Si consideramos que el
contenido de lignina en el bagazo de agave fue del 30.37% en base seca, y que el
porcentaje de recuperacin de la lignina despus de la digestin con cido sulfrico
del bagazo de agave fue del 72.8%, los rendimientos obtenidos de cada uno de los
compuestos fenlicos, expresados como gramos del compuesto por cada 100
gramos de bagazo de agave tequilero fueron: 0.0034, 0.0020, 0.0027 y 0.0017 % en
base seca, para los cidos ferlico, cido cafeico, cido p-cumrico y cido p-
carboxifenol, respectivamente.
Realmente resulta muy difcil comparar los resultados aqu obtenidos con los que
aparecen reportados en la literatura; en primer lugar porque se parte de diferente
materia prima y en segundo lugar porque las condiciones de hidrlisis son muy
diferentes, adems de la forma en que se reportan los resultados obtenidos. Al
trabajar en la obtencin de cido ferlico y cido cumrico por hidrlisis alcalina del
bagazo de la industria cervecera, Mussatto et al (2007) encontraron que las mejores
condiciones de hidrlisis fueron cuando la hidrlisis se lleva a cabo utilizando una
relacin slidos lquido de 1:20 p/p, con una solucin alcalina de NaOH 2%, a una
temperatura de 120C y durante 90 min de tiempo de reaccin. Bajo estas
condiciones, los compuestos fenlicos encontrados fueron: 145.3 mg/L de cido
ferlico y 138.8 mg/L de cido p-cumrico, lo cual corresponde a 9.65 mg de cido
ferlico y 9.22 mg de cido p-cumrico por gramo de lignina solubilizada.
Por otra parte, al trabajar en la solubilizacin de cido ferlico y cido p-cumrico por
hidrlisis alcalina aplicada despus de una pre-hidrlisis cida de los residuos slidos
obtenidos de las podas de la vid, Max et al., (2009) encontraron que las mejores
condiciones resultaron cuando utilizaron una relacin slidos-lquido de 1/10 p/p, y la
hidrlisis alcalina la llevaron a cabo con KOH 3N, a una temperatura de 35C. Bajo
estas condiciones los investigadores antes sealados obtuvieron una concentracin
de cido ferlico de 228.6mg/L, lo cual equivale a 0.41mg de cido ferlico/g de
79
residuos y, 102.6mg de cido p-cumrico/L, lo que equivale a 0.147mg de cido p-
cumrico/g de residuos de la vid.
Cuando Torre et al., (2008) trabajaron sobre la obtencin de cido ferlico y cido p-
cumrico a partir de olotes, ellos encontraron que los mejores resultados los
obtuvieron cuando la hidrlisis de la lignina de olote la llevaban a cabo a temperatura
ambiente, empleando una relacin slidos lquido de 0.84 g/g, una solucin alcalina
de NaOH 0.5 y un tiempo de reaccin de 6 horas. Bajo estas condiciones, las
cantidades de cidos fenlicos encontrados fueron de 1171 mg/L de cido ferlico y
de 2156 mg/L de cido p-cumrico.
80
V
CONCLUSIONES
81
Debido a su constante y abundante disponibilidad, su relativo bajo precio y su alto
contenido de lignina, el bagazo de agave tequilero puede ser utilizado a travs de un
mtodo amigable con el medio ambiente, para reducir las grandes cantidades que de
stos residuos slidos genera anualmente la industria tequilera, para la produccin
de diversos compuestos fenlicos entre los que destaca el cido ferlico, compuesto
orgnico que, dadas sus importantes propiedades qumicas y funcionales, encuentra
una gran variedad de aplicaciones, siendo una de sus principales su utilizacin como
material de arranque en la bio-produccin de vainillina, uno de los sabores y aromas
ms gustados y hoy en da, considerado como el saborizante de mayor importancia a
nivel mundial, por lo que es ampliamente utilizado en diversas y variadas industrias,
que van desde la alimentaria, farmacutica, pasando por la licorera, refresquera,
cosmtica y tabacalera.
82
VI
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92
VII
ANEXOS
93
Fifura 32. Perfil de elusin de la muestra 1-80-30
94
Figura 34. Perfil de elusin de la muestra 1-80-90
95
Figura 36. Perfil de elusin de la muestra 1-100-60
96
Figura 38. Perfil de elusin de la muestra 1-120-30
97
Figura 40.Perfil de elusin de la muestra 1-120-90
98
Figura 42. Perfil de elusin de la muestra 2-80-60
99
Figura 44. Perfil de elusion de la muestra 2-100-30
100
Figura 46. Perfil de elusin de la muestra 2-100-90
101
Figura 48. Perfil de elucin de los estndares: p-carboxifenol (m/z=137), cido p-
cumrico (m/z=163), cido cafeico (m/z=179) y cido ferlico (m/z=193).
102