Universidad de Costa Rica

Facultad de Ciencias Agroalimentarias

Escuela de Agronoma
Microbiologa de suelos AF5412
Trabajo Final
Integrantes:
Whitney Sols Navarro
Edgar Vindas Quesada
Roberto Aguirre Elizondo

Uso de rizobacterias promotoras de crecimiento (RPC) en el control de

Pyricularia grisea (Cooke Sacc.) en el cultivo del arroz (Oryza sativa L.)

Introduccin
El arroz es uno de los cultivos ms importantes a nivel mundial, ocupando el
segundo lugar despus del trigo en el planeta debido a su extensin de la superficie
y por la cantidad de personas que dependen de ella para su alimentacin diaria
(FAO, 2004, Seck et al, 2012; Khush, 2003; Yanni & Dazzo 2010), ya que al igual
que en muchos pases de Latinoamrica, el arroz es parte importante de la dieta
alimenticia en Costa Rica (Villegas et al, 2008), debido a su valor nutricional, ya que
contiene cantidades apreciables de fsforo, hierro, sodio, vitamina B1 (tiamina),
vitamina B2 (riboflavina) y niacina (cido nicotnico) (FAO, 2007).
La piriculariosis o aublo del arroz, causado por Pyricularia grisea (Cooke Sacc.), es
una de las enfermedades ms importantes en este cultivo por su distribucin a nivel
mundial, capacidad infectiva y alta patogenicidad (Rodrguez et al, 2007 &
Almaguer-Chvez et al, 2011). La enfermedad se presenta generalmente a partir de
los 35 das de la siembra, incidiendo durante la fase fenolgica de macollamiento
activo, disminuyendo en la fase de cambio de primordio e incide nuevamente en la
formacin de la pancula (Pinciroli et al, 2006). Los sntomas provocados por este
patgeno, pueden aparecer en toda la planta a diferentes etapas de su desarrollo
(Acebo-Guerrero et al, 2011). Por ejemplo, en parte area la enfermedad se
manifiesta como manchas elpticas a romboides, con un tamao y color que varan
de acuerdo con las condiciones ambientales y con la susceptibilidad de las
variedades (Crdenas et al, 2005), mientras que al infectar la raz provocan
sntomas similares a los inducidos por otras enfermedades fngicas (Sesma et al,
2004)
El control biolgico de patgenos mediante el uso de microorganismos antagonistas
ofrece una alternativa atractiva frente al empleo de compuestos qumicos por el
rechazo que estos ltimos han provocado en la sociedad (Barea et al., 2005). En
este sentido, las rizobacterias sobresalen como una solucin a los problemas
ambientales causados por la agricultura intensiva tradicional, y varios autores han
informado la eficacia de productos elaborados con rizobacterias en el control de
enfermedades que afectan a cultivos anuales y perennes (Hernndez-Rodrguez et
al., 2008 Barriuso et al., 2008 Hassan et al., 2010 Koranteng y Awuah, 2011).

Rizobacterias promotoras del crecimiento (RPC)

Las bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPB) representan una gran
variedad de microorganismos endfitos y rizosfricos; dentro de este grupo se
encuentran las rizobacterias promotoras del crecimiento de plantas (RPC), que
estimulan el crecimiento vegetal en asociacin con una planta husped (Vessey,
2003; Hayat et al, 2010). Estas bacterias estn asociadas con la rizsfera, que es
la zona del suelo que est bajo la influencia del sistema radical, la rizsfera
proporciona un ambiente ecolgico importante, al permitir interacciones planta-
microorganismo (Hayat et al, 2010). Este conjunto de bacterias deben poseer las
siguientes caractersticas intrnsecas: (i) competentes para colonizar la superficie
de la raz, (ii) deben sobrevivir, multiplicarse y competir con otra microbiota, durante
el tiempo necesario para expresar sus actividades de proteccin/crecimiento de las
plantas, y (iii) se debe promover un crecimiento y desarrollo de las plantas
(Kloepper, 1994).
Segn Glick (2012), las RPC pueden influir en el crecimiento tanto directa como
indirectamente. De forma directa influyen a travs de los siguientes mecanismos: (i)
fijacin de nitrgeno atmosfrico (realizada por organismos diazotrficos), (ii)
solubilizacin de minerales, formas inorgnicas de fsforo son solubilizadas por
microorganismos heterotrficos, los cuales disuelven minerales ricos en fsforo o
quelan cationes unidos al fsforo liberndolo a la solucin del suelo (He et al, 2002),
(iii) produccin de siderforos (quelantes de hierro), (iv) produccin de reguladores
de crecimiento (hormonas) (Selosse et al, 2004; Vega, 2007) y (v) produccin de 1-
aminociclopropano-1-carboxilato (ACC) desaminasa, para disminuir la cantidad de
etileno presente en las races de las plantas en desarrollo (Forchetti et al, 2007);
mientras que de forma indirecta, su accin se da mediante la prevencin de efectos
nocivos de microorganismos fitopatgenos a travs de la produccin de siderforos
(Glick, 1995; Glick & Pasternak 2003) o mediante la induccin de resistencia
sistmica (Kloepper, 1994).
Antecedentes
Diversos gneros bacterianos se han aislado de las plantas y el suelo
rizosfrico de arroz (Mano, 2008; Sun et al, 2008; Hardoim et al, 2011; Chaudhary
et al, 2012), dentro de los principales gneros que se han visto asociados a la
rizsfera del arroz se encuentran Azospirillum (Thakuria et al, 2004), Herbaspirillum
(Elbeltagy et al, 2001; Radwan et al, 2004), Pseudomonas, Burkholderia,
Azotobacter y Bacillus (Hernndez et al, 2004) y la manera en que estos gneros
influyen en el crecimiento de plantas, difiere entre cepas (Glick et al, 1999).
 Fundamento del control biolgico
Este proceso puede ocurrir por diferentes mecanismos de accin, como la
competencia por nutrientes, minerales y espacio; sntesis de metabolitos
secundarios y la induccin de resistencia sistmica en la planta (Hfte & Altier,
2010). Entre estos metabolitos se destacan los siderforos, que hacen al hierro
inaccesible para los patgenos; los antibiticos, tales como 2,4-diacetilfloroglucinol
(DAPG), pioluteorina, pirrolnitrina y derivados de fenazina (Faraldo-Gmez, 2007),
y lipopeptidos cclicos (Raaijmakers et al, 2010). En el caso de la detoxificacin de
factores de virulencia de los patgenos, este constituye otro mecanismo de control
biolgico que puede incluir la produccin de una protena que se une,
reversiblemente, a la toxina, la detoxificacin irreversible mediada por una esterasa
y la hidrlisis (Acebo-Guerrero et al; 2011, Hfte & Altier, 2010).
La antibiosis es definida como la inhibicin o destruccin de un
microorganismo por los productos metablicos de otros, que incluyen la accin de
antibiticos, enzimas lticas, as como, compuestos voltiles y difusibles. Dentro de
las enzimas lticas se estudiaron las quitinasas, las lipasas y las celulasas
(Raaijmakers et al, 2010). Las -glucanasas y las proteasas, constituyen otro grupo
de enzimas lticas relacionadas con el control biolgico de fitopatgenos (Selin et
al, 2010). Sin embargo, el crecimiento de estos antagonistas sobre el patgeno en
cultivo dual, no es garanta de alta capacidad biorreguladora del patgeno, ya que
en la prctica se deben tener en cuenta otros aspectos que se relacionan con la
interaccin planta-microorganismos-medio ambiente.
Literatura sobre estudios
En estudios previos de diversos autores, se reporta la actividad en el control
de hongos patgenos en bacterias de los gneros Bacillus, Pseudomonas,
Serratia y Erwinia, as como de Streptomyces contra P. grisea (Rojas et al 2008
Zarandi et al; 2009). Se inform que 16% de los aislamientos de rizobacterias
asociadas a semillas de arroz inhibieron al patgeno P. grisea (Cottyn et al.,
2009). Los estudios mencionados son una evidencia precisa del potencial
antagnico de las rizobacterias contra este hongo. Por otra parte, se demostr la
induccin de resistencia sistmica en plantas de arroz contra el patgeno
mediante la utilizacin de Pseudomonas aeruginosa 7NSK2, adems de
observarse la disminucin de la aparicin de sntomas de la enfermedad (De
Vleesschauwer et al., 2006).
Las bacterias de los gneros Pseudomonas y Burkholderia, son de los
grupos ms estudiados porque tienen la capacidad de producir reguladores del
crecimiento vegetal y otros metabolitos con efecto antagnico y represivo del
crecimiento de patgenos en la rizosfera (Baset-Mia et al, 2010). En un estudio se
demostr que las bacterias del gnero Bacillus pueden ejercer un efecto
antagnico sobre los hongos fitopatgenos (tanto P. grisea as como otros hongos
que afectan el cultivo del arroz), debido a su alta velocidad de crecimiento, lo que
permite que estas lleguen a una etapa estacionaria, donde se da la produccin de
metabolitos secundarios con actividad antifngica y finalmente esto les permita
colonizar el medio (Tejera et al, 2012).
Tambin se ha evidenciado la actividad antagnica de cepas de
Pseudomonas fluorescens y Burkholderia cepacia ante los patgenos Fusarium y
Curvularia (Trujillo et al; 2007). En otros estudios se inform que bacterias
antagonistas de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Serratia y Erwinia, aisladas
de la rizosfera del arroz, han mostrado su efectividad en el control de los
fitopatgenos Rhizoctonia solani, Sclerotium oryzae, P. grisea, Sarocladium
oryzae y Fusarium fujijkuroi en laboratorio, macetas y campo (Joshi et al; 2006,
Velusamy et al; 2006). Chaiharn et al (2009) informaron que un aislado productor
de siderforos de la especie Bacillus firmus inhibi el crecimiento de P. oryzae.
Hernndez-Rodrguez et al (2010) demostraron que Pseudomonas spp.
Cepas AI05 y AJ13 tienen efecto antagnico ante Curvularia pallescens Boedijn
AAD 430 y Curvularia trifoli (Kauffman) Boedijn AAD 533, lo que sugieren que
estas bacterias producen metabolitos que inhiben el crecimiento micelial de
patgenos fngicos. Mientrs que investigaciones demostraron una proteccin de
hasta 80 das posteriores a la aplicacin por aspersin foliar de una formulacin en
talco a base de Serratia marcescens contra P. grisea (Jaiganesh et al; 2007).
 Literatura Citada
Acebo-Guerrero, Y; Hernndez-Rodrguez, A; Rives-Rodrguez, N; Velzquez del Valle,
M; Hernndez-Lauzardo, A. 2011. Perspectivas del uso de bacterias rizosfricas en
el control de Pyricularia grisea (Cooke Sacc.) en el cultivo del arroz (Oryza
sativa L.). Revista Colombiana de. Biotecnologa, 8 (1):16-22.
Almaguer-Chvez, M; Rojas, T; Dobal, V; Batista A; Rives, N & Aira, M. 2012.
Aerobiological dynamics of potentially pathogenic fungi in a rice agroecosystem in
La Habana. Aerobiologa, 28:177-183.
lvarez, A; Zamora, Z & Jimnez, E. 2001. Comportamiento de variedades de arroz frente
a Pyricularia grisea (Cooke Sacc.) en la provincia Granma. Revista Proteccin
Vegetal, 16(1):40-43.
Bais, H; Weir, T; Perry, L; Gilroy, S & Vivanco, J. 2006. The Role of Root Exudates in
Rhizosphere Interactions with Plants and Other Organisms. Annual Review of Plant
Biology, 57:233-266.
Barriuso, J; Ramos-Solano, B; Gutirrez, F. 2008. Protection against pathogen and salt
stress by four-plant growth promoting rhizobacteria isolated from Pinus sp. on
Arabidopsis thaliana. Phytopathology, 98 (6): 666-672.
Baset-Mia, M; Shamsuddin, Z; Wahab, Z & Marziah, M. 2010. Effect of plant growth
promoting rhizobacterial (PGPR) inoculation on growth Ans nitrogen incorporation
of tissue cultured Musa plantlets under nitrogen free hydroponics conditions.
Australian Journal of Crop Science, 4 (2): 85-90
Crdenas, R; Prez, N; Cristo, E; Gonzlez, M & Fabre, L. 2005. Estudio sobre el
comportamiento de lneas y variedades de arroz (Oryza sativa Lin.) ante la infeccin
por el hongo Pyricularia grisea Sacc. Cultivos Tropicales, 26(4):83-87.
Chaiharn, M; Chunhaleuchanon, S & Lumyong, S. 2009. Screening siderophore-producing
bacteria as potential biological control agent for fungal rice pathogens in Thailand.
World Journal of Microbiology and Biotechnology, 25 (11): 1919-1928.

Chaudhary, H; Peng, G; Hu, M; He, Y; Yang, L; Luo, Y & Tan, Z. 2012. Genetic diversity of
endophytic diazotrophs of the wild rice, Oryza alta and identification of the new
diazotroph, Acinetobacter oryzae sp. nov. Microbiology Ecology, 63:813821.

Cottyn, B; Debode, J; Regalado, E; Mew, T & Swings, J. 2009. Phenotypic and genetic
diversity of rice seed-associated bacteria and their role in pathogenicity and
biological control. Journal of Applied Microbiology, 107 (3): 885-897.

De Vleesschauwer, D; Cornelis, P & Hfte, M. 2006. Redoxactive pyocyanin secreted by

Pseudomonas aeruginosa 7NSK2 triggers systemic resistance to Magnaporthe
 grisea but enhances Rhizoctonia solani susceptibility in rice. Molecular Plant
Microbe Interactions, 19 (12): 1406-1419.

FAO (Food and Agriculture Organization). 2004. FAO production yearbook. Roma, Italia.
FAO (Food and Agriculture Organization). 2007.Rice Market Monitor.
Faraldo-Gmez, J. 2007. Protein-mediated Siderophore Uptake in Gram-negative Bacteria:
A Structural Perspective. Springer-Verlag. Berlin Heidelberg, Berlin.
Forchetti, G; Masciarelli, O; Alemano, S; Alvarez, D & Abdala G. 2007. Endophytic bacteria
in sunflower (Helianthus annuus L.): isolation, characterization, and production of
jasmonates and abscisic acid in culture medium. Applied Microbiology and
Biotechnology, 76:11451152.

Hardoim, P; Andreote, F; Reinhold-Hurek, B; Sessitsch, A; Van Overbeek, L & Van Elsas,

J. 2011. Rice root-associated bacteria: insights into community structures across 10
cultivars. Microbiology Ecology, 77:154164.

Hassan, M; Afgani, S & Hafeez, F. 2010. Suppresion of red rot caused by Colletotrichum
falcatum on sugarcane plant using plant growth-promoting rhizobacteria. Biocontrol,
55 (4): 531-542.

Hayat, R; Ali, S; Amara, U; Khalid, R & Ahmed, I. 2010. Soil beneficial bacteria and their
role in plant growth promotion: a review. Annals Microbiology, 60:579598.
He, Z; Bian, W & Zhu, J. 2002. Screening and identification of microorganisms capable of
utilizing phosphate adsorbed by goethite. Communications in Soil Science and Plant
Analysis, 33:647-663.
Hernndez, A; Rives, N; Caballero, A; Hernndez, A & Heydrich, M. 2004. Caracterizacin
de rizobacterias asociados al cultivo del maz en la produccin de metabolitos del
tipo AIA, sideroforos y cido saliclico. Revista Colombiana de. Biotecnologa, 6(1):
6-13.
Hernndez-Rodrguez, A; Heydrich-Prez, M; Acebo-Guerrero,Y; Velzquez, M&
Hernndez-Lauzardo, A. 2008. Antagonistic activity of Cuban native rhizobacteria
against Fusarium verticillioides (Sacc.) Nirenb. in maize (Zea mays L.). Applied Soil
Ecology, 39 (2): 180186.
Hernndez, A; Rives, N. y Heydrich, M. Caracterizacin de la comunidad microbiana y
endfita asociada al cultivo del arroz variedad J-104. En: Congreso Cientfico del
INCA (14:2004, nov 9-12, La Habana). Memorias [CD-ROM]. Instituto Nacional de
Ciencias Agrcolas.
Hernndez-Rodrguez, A, Len-Plasencia, D; Rives, N; Daz, A; Almaguer-Chvez, M &
Acebo-Guerrero, Y. 2010. Identificacin de aislamientos autctonos de
pseudomonas fluorescentes con actividad antagnica ante Curvularia spp.
Proteccin Vegetal, 26(2):21-29.
Hfte, M & Altier, N. 2010. Fluorescent pseudomonads as biocontrol agents for sustainable
agricultural systems. Research in Microbiology, 161:464- 471.
Glick, B.1995. The enhancement of plant growth by freeliving bacteria. Canadian Journal
of Microbiology 41:109117.

Glick, B; Patten, C; Holguin, G & Penrose, D. 1999. Biochemical and genetics mechanisms
used by plant growth promoting bacteria. Imperial College Press, London.

Glick, B.2012. Plant Growth-Promoting Bacteria: Mechanisms and Applications. Hindawi

Publishing Corporation, Scientifica.

Jaiganesh, V; Eswaran, A; Balabaskar, P & Kannan, C. 2007. Antagonistic activity of

Serratia marcescens against Pyricularia oryzae. Notulae Botanicae Horti
Agrobotanici Cluj-Napoca, 35 (2): 48-54.

Joshi, R; McSpadden-Gardener, B. 2006. Identification and characterization of novel

genetic markers associated with biological control activities in Bacillus subtilis.
Phytopatholology, 96 (2): 145-154.

Koranteng, S & Awuah, R. 2011. Biological suppression of black pod lesion development
on detached cocoa pods. African Journal of Agricultural Research, 6 (1): 6772.

Krishnamurthy, K & Gnanamanickam, S. 1998. Biological Control of Rice Blast by

Pseudomonas fluorescens Strain Pf 714: Evaluation of a Marker Gene and
Formulations. Biological Control, 13 (3): 158-165

Kloepper, J. 1994. Plant growth-promoting rhizobacteria (other systems). In: Okon, Y. (Ed.),
Azospirillum/Plant Associations. Editorial CRC. Florida, Estados Unidos. 111118 p.

Mano, H & Morisaki, H.2008. Endophytic bacteria in the rice plant. Microbes and
Environments, 23:109117.

Pinciroli, M; Cordo, M; Bezus, R; Vidal, A & Delucis, M. 2006. Development of rice blast
under two nitrogen availability conditions. Summa Phytopathologica, 32(3):280-282.
Raaijmakers, J; Bruijn, I; Nybroe, O & Ongena, M. 2010. Natural functions of lipopeptides
from Bacillus and Pseudomonas: more than surfactants and antibiotics. FEMS
Microbiology Reviews, 34:1037- 1062.
Radwan, T.; Mohamed, Z. K. y Reis, V. 2004. Efeito da inoculacao de Azospirillum e
Herbaspirillum na producao de compostos indolicos em plantulas de milho e arroz.
Pesquisa Agropecuria Brasileira, 39(10): 987-994.
Rodrguez, A; Ramirez, M; Crdenas, R; Hernndez, A; Velazquez, M & Bautista, S. 2007.
Induction of defense response of Oryza sativa L. against Pyricularia grisea (Cooke)
Sacc. by treating seeds with chitosan and hydrolyzed chitosan. Pesticide
Biochemistry and Physiology, 89(3):206-215.
Rojas, M; Tejera, B; Larrea, J & Heydrich, M. 2008. Caracterizacin de cepas del gnero
Bacillus asociadas al cultivo del arroz (Oryza sativa). Revista Cubana del Arroz, 3
(1): 1-6.
Selin, C; Habibian, R; Poritsanos, N; Athukorala, S; Fernando D & De Kievit, T. 2010.
Phenazines are not essential for Pseudomonas chlororaphis PA23 biocontrol of
Sclerotinia sclerotiorum, but do play a role in biofilm formation. FEMS Microbial
Ecology Reviews, 71: 73-83.
Selosse, M; Baudoin, E; Vandenkoornhuyse, P. 2004. Symbiotic microorganisms, a key for
ecological success and protection of plants. C R Biology, 327:639648.

Sesma, A & Osbourn, A. 2004. The rice leaf blast pathogen undergoes developmental
processes typical of root-infecting fungi. Nature Research, 431:582-586.
Sun, L; Qiu, F; Zhang, X; Dai, X; Dong, X & Song, W. 2008. Endophytic bacterial diversity
in rice (Oryza sativa L.) roots estimated by 16S rDNA sequence analysis. FEMS
Microbiology Ecology, 55:415424.

Tejera, B; Heydrich, M & Rojas, M. 2012. Antagonismo de Bacillus spp. frente a hongos
fitopatgenos del cultivo del arroz (Oryza sativa L.). Revista de Proteccin
Vegetal, 27(2), 117-122.
Thakuria, D; Talukdar, N; Goswami1, C; Hazarika, S; Boro, R & Khan, M. 2004.
Characterization and screening of bacteria from rhizosphere of rice grown in acidic
soils of Assam. Current Science, 86(7): 978-985.
Trujillo, I; Daz, A; Hernndez, A & Heydrich, M. 2007. Antagonismo de cepas de
Pseudomonas fluorescens y Burkholderia cepacia contra hongos fitopatgenos del
arroz y el maz. Revista de Proteccin Vegetal, 22 (1): 7-14.
Vega, N. 2007. A review on beneficial effects of rhizosphere bacteria on soil nutrient
availability and plant nutrient uptake. Revista Facultad Nacional Agricultura de
Medelln. 60:36213643.

Velusamy, P; lmmanuel, J; Gnanamanickam, S & Thomashow, L. 2006. Biological control

of rice bacterial blight by plant-associated bacteria producing 2,4-
diacetylphloroglucinol. Canadian Journal of Microbiology, 52 (1): 56-65.
Vessey, J. 2003. Plant growth promoting rhizobacteria as biofertilizers. Plant Soil, 255:571
586.