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UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE MORELOS

Proyecto en Ciencias Bioqumicas


HSV como vector en desarrollo de vacunas y terapia gnica.

PRESENTA:

Mara Fernanda Francia Contreras

TUTOR PRINCIPAL: Sonia Dvila


INSTITUTO DE INVESTIGACION EN CIENCIAS BASICAS Y APLICADAS

Pregunta a responder
Para que fueron construidos los vectores que se derivan de HSV-1?

CUERNAVACA, MORELOS. JUNIO, 2017


RESUMEN

Los vectores basados en el virus Herpes simple tipo 1 (HSV-1) se presentan


Como un sistema de gran potencial tanto en terapia gnica, como en vacunas de ltima
Generacin. Recientemente, se han desarrollado diferentes sistemas de vectores virales
basados en HSV-1, los que se han utilizado en ensayos clnicos para el tratamiento de
tumores en humanos, y como vacunas contra diferentes patgenos.

Con el presente proyecto se pretende comprender cuales son las limitaciones potenciales
y actuales de las tres clases diferentes de vectores basados en HSV.

INTRODUCCION

Uno de los principales objetivos de la vectorologa viral, desde mediados de los


80', ha sido el desarrollo de vectores recombinantes para la presentacin de transgenes a
clulas de mamferos, con una mnima toxicidad asociada.
Entre los sistemas existentes podemos mencionar los derivados de virus adeno-asociados
(Grieger y Samulski, 2005), adenovirus (Chen y col., 2010), retrovirus (Barraza y Poeschla,
2008), poxvirus (Walsh y Dolin, 2011), herpes simplex virus tipo 1 (Marconi y col., 2009),
entre otros.
Los virus integran los genes virales dentro del material gentico de la clula infectada y as
utilizar la maquinaria celular para reproducir las partculas virales. El avance en el
conocimiento de la biologa de los virus ha permitido el uso de esta propiedad para
desarrollar virus que puedan transportar genes de inters teraputico o vectores virales
para la terapia gnica.
El rea de vacunas ha tomado parte de estos desarrollos para aplicaciones especficas, y se
han utilizado como vectores de inmungenos, codificantes de protenas heterlogas,
tratando de reemplazar patgenos vivos atenuados que pueden presentar riesgos, o
dificultades tales como imposibilidad de su cultivo in vitro.
Antecedentes

El virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1), pertenece a la familia Herpesviridae, subfamilia


Alphaherpesvirinae, y est presente entre el 65% al 90% de la poblacin humana
(Chayavichitsilp y col., 2009).
La partcula de HSV-1 posee un genoma de 152 kpb de ADN doble cadena, protegido por
una cpside icosadrica, que se encuentra rodeada de una capa que incluye protenas
virales, denominada tegumento, el cual est limitado por una envoltura externa de
caractersticas lipoproteicas (Knipe y col., 2007).

Figura 1. Esquematizacin de la estructura vrica de herpes simplex tipo 1.

El genoma del virus herpes simplex tipo 1 codifica para aproximadamente 80 genes, y
estructuralmente puede dividirse en un segmento largo (UL) y un segmento corto (US),
conectados por regiones repetitivas internas (IRL e IRS) y terminales (TRL y TRS) (Bataille y
Epstein, 1995). Posee tres orgenes de replicacin oriL, oriS (Bataille y Epstein, 1995; Stow,
1982). Las seales de clivado/empaquetamiento (pac) estn presentes en ambos
extremos del genoma, como tambin en la unin de los segmentos genmicos.

Figura 2. Esquema del genoma de HSV-1. El genoma de HSV-1 es ADN doble cadena
lineal de aproximadamente 152 kpb, compuesto de dos segmentos nicos, UL y US,
los cuales son flanqueados por regiones repetidas, TRL/IRL y TRs/IRS
respectivamente. Los elementos requeridos en cis para la replicacin del ADN y el
empaquetamiento son, la seal ori y las seales de empaquetamiento pac,
respectivamente.
Ciclo replicativo del virus herpes simplex tipo 1

Los HSV, al igual que la mayora de los virus animales de DNA, se reproducen en el ncleo
celular. Durante el ciclo infectivo de HSV-1, la expresin de los ms de 80 genes se
produce con una temporalidad regulada en forma secuencial, en tres etapas principales.
La expresin gnica, controlada principalmente a nivel transcripcional, comienza con la
expresin de genes inmediato-tempranos, tempranos y tardos. Cuatro de los cinco genes
inmediato-tempranos (ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 e ICP47) son responsables de controlar la
expresin gnica de las fases temprana y tarda, y tambin generar silenciamiento y
regulacin transcripcional en la clula infectada.
Los genes inmediatos-tempranos, ICP4 e ICP27, son esenciales para la replicacin viral
(McMahan y Schaffer, 1990). En la siguiente etapa de expresin gnica, los productos de
los genes tempranos, aportan actividades enzimticas, que aumentan los
desoxinucleotidos disponibles en la clula infectada y dirigen la sntesis de novo del
genoma viral. Las ltimas funciones son las de los denominados genes tardos, los cuales
codifican para protenas involucradas en el empaquetamiento del DNA genmico as como
protenas estructurales que participan en el ensamblado del virin, incluyendo la cpside
que se ensambla en el ncleo, las protenas que se adquieren en el citoplasma celular, que
son transportadas en el tegumento, y las glicoprotenas que forman parte de la membrana
lipdica o envoltura.

Figura 3. Esquema simplificado de la cascada de expresin gnica de HSV.


La protena de tegumento viral VP16 activa los promotores de los genes inmediato-tempranos
(IE del ingls Immediate-Early, en verde), permitiendo la expresin de los mismos (en recuadros
azules), los que a su vez activan los promotores de los genes tempranos (E: del ingls Early, en
amarillo). Los productos de los genes tempranos replican el ADN viral, llevando a la expresin de
los productos tardos (L: del ingls Late, en rojo), que conducen al empaquetamiento de los
genomas virales sintetizados de novo y conforman la estructura de la partcula viral.
Los vectores basados en el virus herpes simplex (HSV), se han desarrollado principalmente
para la administracin de genes neuronales, aprovechando el neurotropismo natural del
virus.
Estn disponibles dos tipos de vectores: virus recombinantes defectivos en su replicacin, cuya
toxicidad ha sido suprimida por delecin de productos gnico virales, y vectores de amplicn, que
son plsmidos envasados en partculas de HSV con la ayuda de un virus auxiliar. [1]

Los principales obstculos para el desarrollo de HSV como vector han sido la produccin de
backbones vectoriales seguros y la superacin de la estrecha represin transcripcional del genoma
viral latente.

Metodologa

En el artculo vectores basados en virus en herpes simplex nos mencionan los actuales vectores
basados en HSV de tipo 1, los cuales son:

Vectores de virus recombinantes defectivos en su replicacin: estos virus poseen


delecciones en uno o ms genes esenciales, esta delecin suprime su toxicidad. Su
genoma viral defectivo va a requerir lneas celulares para la produccin del genoma viral
delecionado.
Vectores de amplicn: son plsmidos envasados en partculas de HSV con la ayuda de un
virus auxiliar. [1]

Mientras que en el artculo construccin y caracterizacin de un virus del herpes simplex tipo ,
mutante incapaz de trans-inducir expresin gnica inmediata-temprana

En este artculo lo que hicieron fue crear vectores recombinantes basados en mutacion en el trans-
activador del virion VP16, impidiendo tomar un complejo protena-DNA lo cual inhibe la expresin
del gen IE. Con esto determinaron que es a virulento cuando se inyecta en ratones, sin embargo
todava es capaz de ser toxico, a estos vectores les adicionaron mutantes adicionales sin embargo
el virus sigui presentando toxicidad.

Los virus recombinantes atenuados son principalmente utilizados como oncolitico, sus
modificaciones genticas restringen su aplicacin y capacidad cataltica a clulas tumorales. Se han
empleado en terapia gnica suicida para la destruccin restringida de clulas malignas. [2]

En el artculo un enfoque nuevo para el virus del herpes simple tipo 1 de produccin de
vectores de amplicn, utilizando el sistema de recombinacin de Cre-loP para eliminar el virus
auxiliar
Este articulo menciona la forma en la que crearon los vectores amplicn mediante la tcnica
recombinacio Cre-loP permite la deteccin eficiente de la seal de envasado de un virus auxiliar
recombinante HSV-1 (HSV-1-LAL) en las clulas que expresan Cre (TE-CRE30). [5]

Lo ms reciente sobre la investigacin de vectores derivados del virus herpes simplex-1 (HSV-1)
fue realizado por el doctor Carlos Adolfo Palacion con el ttulo de amplicones y paticulas
replicantes defectivas derivadas del virus Herpes simplex tipo 1 como vectores transgnicos de
protenas de patgenos de humanos y animales.

En este trabajo se postula que el uso de vectores derivados del virus herpes simplex-1 (HSV-1)
podra representar una herramienta de utilidad para la transferencia de genes a clulas de
mamferos, para la expresin in situ de antgenos heterologos que eventualmente puedan
estimular el sistema inmunolgico del husped.

En esta investigacin el objetivo general es la construccin de vectores derivados de herpes virus


(virus defectivos y amplicones) aptos para la expresin in situ en clulas de mamferos, de
protenas de patgenos que afectan a humanos y animales, con el fin de que constituyan un
aporte al desarrollo de nuevas vacunas.

En esta investigacin se generaron varios tipos de vectores defectivos y amplicones de HSV-1 los
cuales fueron:

Virus defectivos y amplicones derivados de HSV-1, aptos para expresar distintas protenas
patgenas que afectan a humanos y animales, en particular rotavirus de tipo A y C, y de
rickettsia anaplasma.
Vector viral herptico defectivo capaz de exponer en la membrana un epitope
inmunolgicamente relevante perteneciente al virus de la fiebre Aftosa, fusionado a la
glicoprotena C de HSV-1.

CONCLUSIONES

Los distintos tipos de vectores que se derivan de HSV-1 fueron construidos para aprovechar las
propiedades biolgicas de este virus, aunque estos genes fueron principalmente desarrollados
para la entrega de genes a neuronas, poseen un gran potencial como vacunas vectoriales.

Este virus ayuda a combatir enfermedades geneticamente neurodegenerativas.


REFERENCIAS

[1] Robin H Lachmann. (2004). Herpes simplex virus-based vectors. 2004, de NCBI Sitio web:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2517519/#b62

[2] C I Ace,T A McKee, J M Ryan, J M Cameron, and C M Preston. (1989). Construction and
characterization of a herpes simplex virus type 1 mutant unable to transinduce immediate-early
gene expression.. 1989, de journal of virology Sitio web:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC250644

[3] Logvinoff C1, Epstein AL.. (2001). A novel approach for herpes simplex virus type 1 amplicon
vector production, using the Cre-loxP recombination system to remove helper virus.. 2001, de
NCBI Sitio web: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11177553