Volumen 76, nm.
7, pps 3330-3337, julio de 1979
Biologa celular
Endocytosis mediado en el receptor: Perspicacias de la lipoprotena
receptor system*
(lysosomes/coated hoyos y vesculas/colesterol/familiar hypercholesterolemia/hormone
accin)
MICHAEL S. BROWN Y JOSEPH L. GOLDSTEIN
Departamentos de Gentica Molecular y Medicina Interna, universidad de Centro de la
Ciencia de la Salud de Texas en Dallas, 5323 Harry Hines Boulevard,
Dallas, Texas 75235
Comunicado por Harry Eagle, el 30 de abril de 1979
ABSTRAIGA El receptor de la lipoprotena de
densidad baja (LDL)
el sistema coordina el metabolismo del colesterol,
una necesidad
componente de la membrana plasma de todas las
clulas mamferas.
Studcy de este sistema ha llevado a un
entendimiento realzado de
la base celular del colesterol homeostasis.
Tambin ha trado
en foco un mecanismo importante de
regulationthe metablico
proceso de endocytosis mediado en el receptor.
En este artculo, nosotros
primero describa endocytosis mediado en el
receptor de LDL, una secuencia
de acontecimientos en cual encuadernacin del
receptor e internalization
se conectan en regiones especializadas de la
membrana plasma
hoyos cubiertos llamados. En segundo lugar,
remontamos las funciones celulares del
el colesterol se deriv de LDL interiorizado. En
tercer lugar, pruebas genticas
se presenta para indicar que tanto la
encuadernacin como internalization
de LDL son mediados por una molcula del
receptor sola
esto contiene dos sitios activos, una
encuadernacin mediana y el
otro internalization. Finalmente, las
caractersticas del LDL
el sistema del receptor es usado para sugerir
modelos para sistemas del receptor
en general.
Uno de los problemas centrales en la biologa
moderna es el entendimiento
del mecanismo por cual macromolculas
extracelulares
relacinese con receptores superficiales para
regular intracelular
acontecimientos metablicos. Avances recientes
en el campo de biologa celular
han hecho posible estudiar acontecimientos
mediados en el receptor directamente
en clulas mamferas vivas. Nos hemos dado
cuenta ahora esto
los receptores de la superficie de la clula
funcionan a travs de una red de subcelular
organelles. Los receptores en la membrana
plasma se comunican
con protenas en el ncleo, endoplasmic retculo,
lysosomes,
mitochondria y otras estructuras. Cmo es esto
por toda la clula
la comunicacin articul? Cmo hace una clula
regulan un metablico
el camino cuyos componentes activos residen en
el diferente
compartimentos subcelulares?
Las respuestas a algunas de estas preguntas
fundamentales tienen recientemente
hgase disponible a travs de estudios del
receptor de la lipoprotena
sistema (1, 2). Este sistema regulador por toda la
clula coordenadas
el metabolismo del colesterol, un componente
esencial de
la membrana plasma de todas las clulas
mamferas. Pero encima y
ms all de su importancia en el colesterol
homeostasis, la lipoprotena
el sistema del receptor se ha hecho reconocido
como un prototipo para
un mecanismo de regulacin metablica - el
proceso de receptor -
endocytosis mediado.
Antes de que el sistema del receptor de la
lipoprotena se describa en el
nivel celular, unos comentarios preliminares sobre
el colesterol
el metabolismo parece apropiado. Todas las
clulas de animal requieren el colesterol
para su plasma mrmnbranes, an el cuerpo no
puede tolerar
el colesterol excesivo en la sangre porque sterol
insoluble deposita
en paredes de la arteria, produciendo
atherosclerosis. As, animales
han desarrollado un mecanismo para transportar
el colesterol a travs de
la sangre y entrega de ello a clulas, mientras al
mismo tiempo
la evitacin de su acumulacin excesiva. Para
este fin, colesterol
es envasado en partculas de la lipoprotena en el
hgado e intestino,
y las lipoprotenas solubles se secretan en el
plasma
y llevado a tejidos objetivo. En hombre, el ms
abundante de stos
las partculas son la lipoprotena de densidad baja
(LDL).
Las dos terceras partes del colesterol en el
plasma humano se contienen
dentro de LDL. El bulto del colesterol reside en un
apolar
el corazn en el cual cada molcula sterol es
esterified con una cadena larga
cido graso. Este corazn de cholesteryl esters es
rodeado por a
el abrigo polar que contiene phospholipid, las
pequeas cantidades del unesterified
el colesterol y una protena llamaron apoprotein B
(3). En
sintetizando sus membranas, las clulas
requieren el colesterol unesterified.
Para usar el colesterol de LDL, las clulas deben
ser capaces de tomar
aparte la lipoprotena y hydrolyze el cholesteryl
esters. Esto
es donde la necesidad de organelles subcelular
mltiple entra.
La llave al proceso es un receptor de la superficie
de la clula que liga LDL
y facilita su entrada en clulas. La secuencia de
reacciones por
qu clulas usan el receptor para obtener el
colesterol se llama el
Camino del receptor de LDL.
Endocytosis mediado en el receptor de LDL:
Encuadernacin
conectado a internalization va hoyos cubiertos
Los pasos bioqumicos en el camino del receptor
LDL se inician
por la encuadernacin de LDL a un receptor
especfico en la clula
superficie. El receptor LDL se descubri en 1973
a travs de
estudios de piel humana fibroblasts en cultura del
tejido (4-6). El
el fondo para estos estudios est en las
observaciones de Bailey
(7) y Rothblat (8), quien en los aos 1960 mostr
que cultivado
las clulas de animal no sintetizaron su propio
colesterol, pero mejor dicho
lo tom de lipoprotenas que estuvieron presentes
en el suero de
el medio de la cultura.
En 1973 nuestro laboratorio observ esto aunque
humano
el suero contiene una mezcla de lipoprotenas que
llevan el colesterol,
el fibroblasts podra sacar el colesterol slo de
LDL (4, 9).
Esto era la primera pista que las clulas podran
tener un mecanismo especfico
para relacionarse con una lipoprotena especfica.
Entonces encontramos
que la precisin del efecto LDL fuera debido a la
existencia
de una clula revisten el receptor para LDL (6,
10).
Para estudiar el receptor, pusimos etiqueta a LDL
por 125I de modo que el
el yodo slo se at al componente de la protena.
Cuando
las monocapas de fibroblasts intacto se incuban
en 4VC
con 125I-LDL, la encuadernacin ocurre pero
internalization se previene
(6, 10, 11). El 1251-LDL liga a una poblacin sola
de superficie
sitios del receptor. En 370C la encuadernacin
medio mxima se consigue - en un
Concentracin de LDL de aproximadamente 1 nM
(6, 12). Fibroblasts humano
produzca un mximo de 20.000-50.000
receptores por clula.
La encuadernacin requiere un divalent cation,
calcio o manganeso
(13). El receptor es exquisitamente sensible a
proembroma tal como
Pronase, trypsin, y chymotrypsin, pero son
resistentes a glycosidases
y otras enzimas hydrolytic (10, 13). El receptor
tambin es inactivated por reacciones de
modificacin de la protena, tal
como acetylation y tratamiento glutaraldehyde.
Por lo tanto creemos
que el receptor sea una protena. El receptor liberacin de heparin. El resto de las clulas se
reconoce el calent entonces a 370C.
apoprotein B componente de LDL; no reconoce Despus de varios tiempos, los platos
apoproteins A-I y A-II, las protenas encontradas individuales de clulas se enfriaron a
en la densidad alta 40C para parar el internalization y luego se
Abreviaturas: FH, hypercholesterolemia familiar; expusieron a
LDL, lipoprotena de densidad baja (HDL), la otra heparin. Durante el perodo del calentamiento, la
lipoprotena principal que lleva el colesterol cantidad de LDL esto
en plasma humano (6, 14, 15). En ciertos estaba en la superficie y posteriormente
animales que son releasable por heparin
las cantidades grandes alimentadas del rehusado rpidamente, y esto fue equilibrado por
colesterol, otra lipoprotena, llamaron un aumento del
HDLC, se acumula en el plasma (16). Aunque LDL que haba entrado en la clula y ya no era
HDLC no haga releasable por
contenga apoprotein B, contiene apoprotein heparin. Esto interioriz 125I-LDL no permaneci
llamado de una protena en la clula
E que comparte varias propiedades fsicas y
qumicas con durante un perodo largo. Despus de
apoprotein B. El receptor LDL de fibroblasts
reconoce
apoprotein E y por lo tanto liga HDLC as como
LDL (16,
17).
Una propiedad importante del receptor LDL
consiste en que LDL puede
sea disociado de ello por la exposicin a heparin
y otro sulfated
glycosaminoglycans (11). La capacidad de soltar
LDL del
el receptor con heparin ha provedo un
instrumento potente de cual
disecar el camino del receptor. Habiendo ligado
LDL en la clula
la superficie, cmo hace la clula extrae el
cholesteryl esters del
corazn de la lipoprotena? La respuesta vino
cuando las clulas eran
calentado a 370C y la partcula LDL entera se
encontr ser
interiorizado y degrad (10).
Fig. 1 muestra un experimento bioqumico
diseado para seguir
el internalization de 125I-LDL ligado al receptor.
Antes de tiempo
cero, los fibroblasts se incubaron con 125I-LDL en
4VC tan aproximadamente 30 minutos el LDL dentro de la
esa encuadernacin ocurri. Las clulas se clula
lavaron entonces para quitar rehusado. At the same time, trichloroacetic acid-
LDL desatado. Un juego de clulas se expuso soluble 125Ilabeled
entonces a heparin en material appeared in the culture medium. These
tiempo cero. Como estas clulas no se haban acid-soluble products consisted almost entirely of
calentado, casi todos mono[125I]-
de 125I-LDL atado se solt del receptor por iodotyrosine, indicating that the protein
heparin. Slo una pequea cantidad de 125I-LDL component of the internalized
era resistente a
LDL had been digested completely to amino to bind LDL-ferritin at 4VC and are then warmed
acids to 370C,
(10). This hydrolysis has been shown to occur within 1 min the LDL-ferritin can be seen in
within lysosomes coated pits that
(18, 19). At the same time that the protein of LDL have invaginated into the cell and have begun to
is hydrolyzed, form coated
the cholesteryl esters are also hydrolyzed (19). endocytic vesicles (Fig. 2). Within 3 min after
The warming, these
cholesterol released within the lysosome enters coated vesicles detach from the membrane and
the cytoplasmic can be seen
compartment, where it becomes the central carrying the LDL-ferritin into the cell. Within 6-8
regulator of cholesterol min after
metabolism (discussed below). warming, the LDL-ferritin is observed within
One aspect of the warm-up experiment in Fig. 1 lysosomes where
was striking. the LDL is being degraded (24). The time course
That was the remarkable efficiency of the of LDL-ferritin
internalization. uptake in the electron microscope is identical to
Nearly all of the receptor-bound 125I-LDL was the rapid
internalized uptake of 125I-LDL observed in the biochemical
within 15 min (20). Fibroblasts must have an studies. The
efficient mechanism for coupling the binding and clustering of LDL receptors in coated pits
internalization events. The explains the extraordinary
key to this coupling turned out to be an intriguing efficiency of the LDL internalization process. The
structure properties of coated pits are listed in Table 1.
called the coated pit. Coated pits on the surface At the same time that we, together with Richard
of mosquito Anderson,
oocytes were described in 1964 by Roth and were carrying out functional studies of coated
Porter (21), and pits, Barbara
subsequently these structures have been Pearse was isolating coated vesicles from pig
observed in virtually brain. Pearse
all animal cells (22). They represent specialized
regions of the
cell surface where the plasma membrane is
indented and coated
on its cytoplasmic surface by a fuzzy material.
The role of the
coated pit in receptor-mediated endocytosis was
recognized in
studies of LDL uptake that were carried out in
collaboration
with Richard Anderson (23, 24).
The visualization of LDL receptors was made
possible
through the use of LDL that had been covalently
coupled to the
iron-containing protein ferritin so that the
lipoprotein could
be seen in the electron microscope (23). Coated
pits cover only
2% of the cell surface of fibroblasts, yet they
contain 50-80%
of the LDL receptors (23, 25). When fibroblasts
are first allowed
showed that the fuzzy coat is composed
predominantly of a protein of 180,000 molecular
weight that she named clathrin
(22, 26, 27). It seemed likely that the same protein
was present
in the coated pits of human fibroblasts. Therefore,
we isolated
clathrin from bovine brain coated vesicles, prepared
an antibody
to it, and used this antibody to stain coated pits and
vesicles
in human fibroblasts (28). By indirect
immunoperoxidase
electron microscopy, the anti-clathrin antibody was
observed
to bind specifically to coated pits on the surface of
human fibroblasts
and to coated vesicles within the cell (28). In more
recent electron microscopic studies (29), Anderson
has demonstrated
that LDL-ferritin and clathrin are both localized to
the same coated pits and vesicles. These findings
raise a crucial
question: How do the LDL receptors find their way
to coated
pits? The answer has been suggested by genetic
studies that are
discussed later in the article.
Fig. 3 shows a schematic representation of the
sequential
steps in the LDL receptor pathway as they emerged
from the
biochemical and ultrastructural studies. The LDL
receptors are
located in coated pits. Binding of LDL is followed by
internalization
within coated vesicles, which rapidly fuse with
lysosomes.
The protein of LDL is hydrolyzed to amino acids,
and
the cholesteryl esters are hydrolyzed by a lysosomal
acid lipase.
The resulting unesterified cholesterol crosses the
lysosomal
membrane and enters the cytoplasmic
compartment, where
it fulfills its cellular functions.