MANUAL DE LABORATORIO

ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD
BACTERICIDA

COLOIDE DE PLATA
ESTABILIZADO
3.2.

1
 Este Coloide se absorbe fuertemente a cualquier superficie libre
de gases y aceites y siempre y cuando no sea metlica. Este factor es
de considerable importancia para evaluar la eficacia de su accin
microbicida en pruebas de laboratorio.

Una vez que el Coloide ha sido absorbido en paredes o

superficies se vuelven auto-esterilizantes y por consecuencia
inadecuadas para el cultivo de microorganismos posteriores a menos
que dichas superficies sean DESACTIVADAS dejndolas por toda una
noche sumergidas en una solucin de Potasio Thiosulfato.

El Coloide fue desarrollado para activar en medio contaminando

con los microorganismos de la prueba.

Cuando se desea diluir las soluciones del Coloide, sugerimos el

siguiente esquema para minimizar la prdida de la actividad por
absorcin en las paredes del recipiente. Como se puede ver slo se
requieren tres frascos de dilucin para diluir el Coloide en 100
millones de partes de agua.

ESQUEMA

10 ml. 5 ml. 1 ml.

1 ml. 999 ml. 900 ml. 990 ml. 995 ml. 999 ml.
COLOIDE 100
H2 O H2 O H2 O H2 O H2 O
3.2 %
1/1000 1/10.000 1/100.000 1/200.000 1/1.000.000

1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml.

99 ml. 99 ml. 99 ml. 99 ml.
Suspensin Suspensin Suspensin Suspensin
Bacteriana Bacteriana Bacteriana Bacteriana
1/ 1/ 1/ 1/
1.000.000 10.000.000 20.000.000 100.000.000

2
 SUGERENCIAS ACERCA DE LAS PRUEBAS CON EL
COLOIDE

GENERALIDADES

1 El Coloide es un estabilizado complejo sistema coloidal y debe

esperarse un comportamiento tpico coloidal.

2 El Coloide se adhiere fuertemente a cualquier superficie, (excepto

metlica sin recubrimiento), con la cual entra en contacto. Esta
superficie as cubierta con una o varias capas, es entonces
esterilizante y esta actividad persiste por algn tiempo.

APLICACIONES BIOLGICAS

3 De acuerdo con el prrafo (2), los cristales que entran en contacto

con el Coloide, quedan imposibilitados para posteriores cultivos de
microorganismos, algas, levaduras, mohos y hongos, a menos que se
quieran matar estos organismos.

4 Cuando se deseen tcnicas de electro galvanizacin, no se debe

poner el COLOIDE directamente al agar nutriente y entonces se
aumentan organismos para probar los efectos de eliminacin de
estos. No hay que olvidar que el COLOIDE fue hecho para operar en
medio lquido y tales tcnicas arrojaran datos completamente
errneos: Debe permitirse que la bacteria que se trata de probar, entre
en contacto con el COLOIDE en medio lquido, (agua, etc...), por un
tiempo o periodo de contacto apropiado, (1 hora o ms), luego pasa
una alcuota a un plato de Petri estril y agrguese agar nutriente.

ACTIVACION DE RECIPIENTES EN LABORATORIOS CON ESTE COLOIDE

1 Se denomina ACTIVACION al efecto residual que adquieren las

superficies de materiales no metlicos al entrar en contacto con
ciertos coloides de plata, como ocurre con este COLOIDE.

3
2 Una superficie activada con este COLOIDE tiene la propiedad de
ejercer una accin bactericida sobre los lquidos contaminados que
entran en contacto con esas superficies. Este efecto perdura por largo
tiempo; un ao como mnimo.

3 Los recipientes de laboratorio se activan al entrar en contacto con

este COLOIDE, por lo tanto cualquier artefacto de vidrio queda
activado al humedecerse con el COLOIDE.

4 Si se vierte algn lquido contaminado en un recipiente activado se

observar la paulatina eliminacin de las bacterias y grmenes
patgenos contenidos en el lquido. El tiempo de contacto es
proporcional a la eliminacin de las bacterias y grmenes patgenos.

5 El laboratorista deber determinar la reduccin o eliminacin de

las bacterias y grmenes patgenos, efectuando anlisis sucesivos del
lquido contenido en el recipiente activado y comparndolo con el
Testigo analizado antes del tratamiento.

Los tiempos recomendados para anlisis debern ser cada media

hora, para trazar la curva de eliminacin progresiva hasta la total
eliminacin de las bacterias y grmenes patgenos.

NOTA: Cuando se trate de una prueba de agua contaminada, deber

previamente filtrarse dicha muestra, simplemente utilizando papel
filtro.

Esta precaucin es necesaria para evitar la absorcin de la Plata por la

materia orgnica que pudiera encontrarse en suspensin en la
muestra de agua sujeta a prueba.

ANLISIS BACTERIOLGICO CUANTITATIVO DEL AGUA

ANLISIS PRELIMINAR

La muestra del agua que se ha de analizar se recoge en un frasco de

100 ml., limpio y esterilizado con tapn de vidrio o cpsula de rosca.
El cuello y la embocadura del frasco se cubren con papel pergamino y
ste se ata con un trozo de bramante. Luego se esteriliza el frasco en
una estufa de aire caliente a 170 C., durante una hora, por lo menos.

4
La cubierta de papel pergamino sirve para proteger el contenido del
frasco contra cualquier contaminacin.

Al tomar una muestra de una fuente o un grifo, debe dejarse correr el

agua durante cinco minutos por lo menos, para que arrastre cualquier
germen presente alrededor de la salida, adems en tuberas pequeas
pueden producirse cambios en el nmero de bacterias; pues unas
tienden a morir y otras a multiplicarse. Se coge la botella con la mano
derecha y con la izquierda se quita el tapn, sujetndolo con el papel,
cuidando de evitar cualquier contaminacin y se ata el papel con
bramante. Los dedos no han de tomar la embocadura ni el tapn,
pues as podra infectarse el contenido y el examen dara un resultado
errneo.

Cuando se toma una muestra tranquila, se quita primero el tapn con

la mano izquierda, se sumerge la botella boca abajo unos 30 cm., se
invierte y una vez llena, se saca del agua y se tapa. Si hay alguna
corriente, la boca de la botella debe dirigirse hacia ella, para evitar que
se produzcan bacterias precedentes de los dedos.

Recogida y conservada la muestra se produce un cambio rpido en su

contenido bacteriano. Generalmente, el nmero de microorganismos
muestra un notable aumento gradual unas veces y apresurado otras;
esto obedece a la multiplicacin de los bacilos tpicamente acuticos;
pues los patgenos y otros grmenes que suelen albergarse en el
intestino del hombre y de los animales, tienden a morir muy pronto.

INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA

Una subida de temperatura acelera mucho el aumento del nmero de

bacterias como el agua embotellada, aunque se guarda a
temperaturas no mayores de 10 C., pueden producirse rpidos
cambios bacterianos, deben examinarse todas las muestras lo antes
posible.

ANLISIS CUANTITATIVO

El mtodo de recuento macroscpico bacteriano, consiste en poner

una cantidad medida de la muestra de agua en un platillo de Petri y
mezclarla con Agar fundido esterilizado. Cuando se ha solicitado el
agua, la placa se incuba a 37 C., durante 24 horas, se cuentan las

5
colonias y se anota el nmero de las desarrolladas por milmetro de
agua.

El nmero de bacterias contenido en una muestra no debe exceder de

300 por milmetro. Si hay ms deben prepararse diluciones.

FACTORES QUE INFLUYEN EN EL ANLISIS

1 Composicin y reaccin del medio.

2 Temperatura.
3 Periodo de Incubacin.
4 Presencia de abundante oxgeno y humedad.

Para identificar el E-Coli se aplica el mtodo universal de precipitar la

lactosa en medio del agua, aunque otras bacterias tambin los
precipitan (Aerbacter y Aergenes), pero estos ltimos son de poca o
nula importancia sanitaria.

Se diferencia el E-Coli y estos dos ltimos en la forma y coloracin de

precipitarse la lactosa.

El E-Coli precipita el caldo lactoso en medio de Agar como un anillo de

coloracin rojo intenso con vis-metlico y el Aerbacter o Aergenes
solamente forman un anillo verde sin vis-metlico.

ENFERMEDADES PRODUCIDAS POR EL AGUA

1 LA DISENTERIA LA QUE PREDOMINA.

2 EL COLERA.
3 LA FIEBRE TIFOIDEIA.

Las tres enfermedades son afecciones intestinales, por lo tanto, sus

agentes causales se encuentran en el contenido intestinal.

Loe grmenes que producen estas enfermedades mueren a los pocos

das (una o dos semanas), y si el agua esta FRIA, o contiene
ABUNDANTE MATERIA ORGANICA, mueren a los pocos das.

ENSAYO PRELIMINAR

La primera fase de los anlisis de agua, es la prueba preliminar o de

tanteo, que consiste en poner cantidades medidas de agua en una

6
serie de tubos de fermentacin de lactosa, con dos veces ms medio
nutritivo que agua por lo menos.

Generalmente se emplean cinco tubos de fermentacin cada uno con

10 mililitros de agua, otro con 1 mililitro y otro con 0.1 mililitro de
agua; los tubos se incuban 48 horas a 37 C.

La formacin de gases en la ampolleta invertida dentro del tubo de

fermentacin al cabo de 24 horas a 37 C., constituye una prueba
preliminar positiva, pues seala como posible, la presencia de
grmenes coliformes.

Si no se desprenden gases en 24 horas, los tubos se incuban durante

46 horas. Si hubo gases es una prueba Positiva Dudosa, entonces
deben determinarse si hay grupo Coliformes. Cuando no se forman
entonces la prueba es negativa (No hay necesidad de determinar
grupo coliformes).

PREPARACIN DEL MEDIO

MEDIO DE AGAR CON EOSINA Y AZUL DE METILILENO. Este medio de

prepara aadiendo cantidades dadas de los dos colorantes el Agar
Lactosado Fundido y vertiendo unos 15 mililitros en cada platillo
Petri. Cuando se trazan estras tpicas de E-Coli sobre la superficie de
este medio y se incuban las placas a 37 C., durante 24 horas, las
colonias presentan Obscura la zona central de un Viso o Brillo
Metlico Verdoso, caractersticos. En cambio las colonias tpicas de
Aerobacter Aergenes muestran Pardo el centro y rara vez brillo
metlico.

TCNICA EMPLEADA PARA DETERMINAR EL PODER BACTERICIDA DE

LOS COLOIDES DE PLATA, UTILIZANDO AGUA DE ALBAIL DILUIDA
1:1,000.

PREPARACIN DE LA MUESTRA

Tomar 100 ml., de agua de albaal recientemente obtenida y filtrarla

por gasa.

1. Tmese 2 ml., del filtrado y agrguese a 2,000 ml., de agua

destilada que se ha ajustado previamente el pH a 7.2 con agua
reguladora de fosfatos. Agtese.

7
2. Tomar 1 ml., de Coloide de Plata y agregarlo a un tubo con 9
ml., de agua destilada, agtese obteniendo as una dilucin de
1:10.

3. De la dilucin (2), tomar 1 ml., y agregar 9 ml., de agua

destilada. Agitar. Se obtiene una dilucin 1:1000.

4. De la dilucin (3), tomar 1 ml., ms 9 ml., de agua destilada.

Agitar. Se obtiene una dilucin 1:1,000.

TCNICA

5. A un litro de la dilucin del agua de albaal (1), agregar 1ml., de

la dilucin (4), 1:1,000 del Coloide de Plata. Agitar y tomar el
tiempo. Se obtiene una parte por milln del Coloide.

6. Preprese por cada muestra, una serie de 3 tubos de 18 x 175

mm., conteniendo 20 ml., de medio concentrado (1.5 veces su
frmula), de caldo lactosado verde brillante bilis (Difco), con
tubo de Kahn invertido en el interior del primero, utilizado como
campana para ver produccin de gas.

7. 2 series de tubos 16 x 150 mm., contenido 10 ml., de caldo

lactosado verde brillante bilis (Difco), a la concentracin normal
(1.0 vez su frmula), con su respectiva campana.

8. 6 cajas de Petri estriles.

9. 6 tubos con 9 ml., de agua reguladora de fosfatos de pH 7.2

(estril), cada uno.

10. 1 pipeta de 10 ml., estril.

11. 6 pipetas de 1 ml., estriles.

12. 1 caja con medio de Agar Eosina Azul de Metileno (Difco), por
cada tubo que fermente.

13. 6 tubos con 20 ml., de medio Agar Triptona glucosado, que

fundido se coloca en un bao mara a 45 C.

14. Transcurridas 3 horas despus de la preparacin de la dilucin

(5), inoclese simultneamente se sta y de la dilucin (1) en la

8
 serie de tubos indicada en (6), 10 ml., de cada dilucin por tubo,
1 ml., de cada dilucin por tubo en una de las series indicada en
(7), y 0.1 de ml., cada dilucin por tubo en la otra serie indicada
en (7). Incubar a 35 C + 0.5 C., por 48 horas.

15. Hacer diluciones de cada muestra (1) y (5) 1:100, 1:1,000,

1:10,000, 1:1,000,000 con los tubos indicados en (9), utilizando
1 pipeta estril para cada dilucin y agitando perfectamente.

16. De cada dilucin obtenida (15), tomar 1 ml., y colocarlo en

cada una de las cajas de Petri indicada en (8). Agregar
inmediatamente el medio de Agar Triptona contenido en los
tubos que se indican en (13), mezclar por rotacin y dejar
solidificar. Incubar a 35 C. + 0.5 C., por 48 horas.

17. Transcurridas 48 horas observar:

a) Todos los tubos que han fermentado, se resiembran, para

aislar colonias, en cada caja de Agar Eosina Azul de
Metileno.
b) Contar el nmero de colonias en las cajas inoculadas con
las diluciones de las muestras. Solo tomar en cuenta
aquellas que contienen entre 30 y 300.

18. 24 horas despus de inoculadas las cajas de Eosina Azul de

Metileno, observar si hay colonias aisladas tpicas de
Escherichia-Coli.

19.Informar el nmero de colonias en Agar Triptona glucosado a

37 C., por ml., informar el nmero ms probable de
Organismos Coliformes por 100 ml. La muestra (1) corresponde
al testigo.

20.La tcnica bacteriolgica utilizada en este proceso se basa en la

determinacin del nmero de bacterias y organismos coliformes
para aguas potables y aguas negras que utiliza la Secretara de
Salubridad y Asistencia.

9
 ESQUEMA
DE DILUCIN PARA
LA PRUEBA DEL:

COLOIDE DE PLATA
ESTABILIZADO 3.2.

TABLAS N. 1 y 2

Pgs. (siguientes)

10
 N. 1 PLATA COLOIDAL ESTABILIZADA

1 ml
0.1 ml

AGUA DE
DILUCIN: -A - -B - -C - -D -
ml 10 ml ml ml 10 ml ml
BUFFERED. H2O H2O H2 O H2O
Dest. Dest. Dest. Dest.

1 ml

1 ml

0.1 ml
10 ml

0.1 ml
1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml
10 ml
CT-S IS II S III S IV S VS VI S
-2 -4 -6 -8 - 10 - 11
CONTROL 10 10 10 10 10 10

CT-S MIS MIIS MIIIS MIVS MVS MVIS

-2 -4 -6 -8 -10 -11
CONTROL 10 10 10 10 10 10

99.9 ml

99.9 ml
100 ml

100 ml

99 ml

99 ml

90 ml

90 ml

99 ml

99 ml

99 ml

99 ml

99 ml

99 ml
11
 N. 2 PLATA COLOIDAL ESTABILIZADA

1 ml
0.1 ml

AGUA
NATURAL DE -A - -B - -C - -D -
MANANTIAL ml 10 ml ml ml 10 ml ml
H2O H2O H2 O H2O
Dest. Dest. Dest. Dest.

1 ml

1 ml

0.1 ml
10 ml

0.1 ml
1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml
10 ml
CT-Z IZ II Z III Z IV Z VZ VI Z
-2 -4 -6 -8 - 10 - 11
CONTROL 10 10 10 10 10 10

CT-Z MIZ MIIZ MIIIZ MIVZ MVZ MVIZ

-2 -4 -6 -8 -10 -11
CONTROL 10 10 10 10 10 10

99.9 ml

99.9 ml
100 ml

100 ml

99 ml

99 ml

90 ml

90 ml

99 ml

99 ml

99 ml

99 ml

99 ml

99 ml
12