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04-
16
ALUMNAS:
Bustinza Damiano, Roco
Gonzales Rosales, Brisayda
Huiza Acosta, Karen Briguit
Lzaro Mendoza, Carmen Janeth
Rocha Yupanqui, Ruth
DOCENTE:
Alexandra Muoz
MATERIA:
Microbiologa Ambiental
CICLO:
IV
LIMA, 2016
1
I. OBJETIVOS
II. MATERIALES
2
III. METODOLOGIA
PREPARACIN DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY
Primero el grupo design tareas a cada integrante para la recoleccin de materiales que se iba a necesitar
para la elaboracin de la columna de Winogradsky. La compaera Karen recolect muestra de sedimento
o suelo cerca al mar por villa 6 de la universidad Cientfica del Sur. Tambin la compaera Ruth recolect
muestras de lodo en la laguna 1 de villa 1 en la universidad Cientfica del Sur.
Despus Brisayda recolect suelo del jardn de villa 1 cerca de la laguna 2 en la universidad Cientfica del
Sur. Posteriormente en una botella de agua cielo de 625ml, Carmen recolect agua de la laguna 2 de villa
1 en la universidad Cientfica del Sur. Y nuestra compaera Roco recolect rastrojos y restos de hoja
debajo de los rboles del jardn de villa 1 en la universidad Cientfica del Sur.
Luego nos dirigimos al laboratorio para realizar la columna de Winogradsky, donde se nos brind 1g de
sulfato de calcio y 1g de azufre.
Despus entre todos los miembros del grupo recortamos trozos pequeos de papel de aluminio, papel
de cuaderno, papel para secar y los restos de hojas.
A continuacin pasamos a mezclar la muestra de suelo, restos de hojas, trozos de papel de aluminio,
papel de cuaderno, papel para secar con 1 g de sulfato de calcio, y 1 g de azufre.
Despus cortamos el pico de una botella de plstico de 2 litros y medio donde se pas a colocar como
primera capa lodo, segundo la mezcla y tercero una capa de arena donde iba encima un porta objeto. Se
repiti 3 veces las 2 ltimas capas y los portaobjetos, para luego adicionar agua de la laguna hasta casi al
borde de la botella. Cada vez que bamos colocando los portaobjetos marcbamos con plumn indeleble
por afuera de la botella los puntos donde se hallaban estos.
Por ltimo
ltimo cubrimos
cubrimoscon
conpapel
papelparafilm
parafilmlalaparte
partesuperior
superiordedelalabotella
botellae incubamos enen
e incubamos presencia de de
presencia la luz
la luz
en el invernadero
invernadero de
devilla
villa33en
enlalauniversidad
universidadCientfica
Cientficadel
delSur
Sur(18/04/2016).
(12/04/2016).
3
Con una jeringa adsorbimos muestras de suelo en cada
SIEMBRA POR ESTRAS parte (aerobia, mesofilico, anaerobia) de la columna,
para luego poder sembrar en los agares.
Esterilizamos
IV. el asa metlica con el mechero bunsen, luego acercamos la placa Petri con el agar respectivo
especfico para cada bacteria, y sembramos en forma de estras por los costados de esta.
Se sembr en una placa con AA muestra de Se sembr en una placa con AN muestra de
VI. de la parte aerobia. En otra
la columna la columna de la parte aerobia. En otra
placa seVII.
sembr muestra de la parte placa se sembr muestra de la parte
VIII.
mesofilico de la columna. Y por ltimo se mesofilico de la columna. Y por ltimo se
IX.
sembr muestra de la parte anaerobia. sembr muestra de la parte anaerobia.
4
OBSERVACIN EN EL MICROSCOPIO
Coloracin Gram
Primero colocamos
Primero una asada
colocamos una de la muestra
asada de suelo (aerobia,
de la muestra
mesofilico, anaerobia) sobre el portaobjeto y fijamos al fuego.
sobre el portaobjeto y fijamos al fuego.
5
IV. RESULTADOS
COLUMNA DE WINOGRADSKY
18/04
20/04
6
25/04
05/05
07/05
10/05
7
La sexta revisin se realiz el 10 de mayo,
pudimos observar en el agua de la parte
superior que tomaba un color verde muy
oscura, con presencia de pulgas de agua, y por
la parte inferior se extenda an ms la
coloracin verde.
18/05
23/05
24/05
8
La novena revisin se realiz el 24 de mayo,
pudimos observar que la columna, que no
hubo cambio con respecto al anterior porque lo
realizamos dos das seguidos.
27/05
03/06
9
06/06
Revisin nmero 12 se
realiz, esto fue en el
laboratorio, pudimos observar
que en la parte aerbica
haba crecido algas y
encontrado algunos
animlculos de agua.
DIVERSIDAD Y MORFOLOGIA DE
MEDIO MEDIO DE CULTIVO
COLONIAS
10
AN
11
AN
Diversidad: se visualiza cuatro tipos de
colonias.
Morfologa: la primera colonia
presentaba una morfologa puntiforme,
convexa, mixoide con superficie lisa y
con pigmentacin anaranjada; la
segunda colonia presentaba una
morfologa circular, plana, seca con
superficie rugosa y con pigmentacin
blanca; la tercera colonia era rizoide,
elevada, seca con superficie rugosa y
con pigmentacin blanca; la cuarta
colonia era puntiforme, convexa, mixoide
con superficie lisa y con pigmentacin
beige.
AA
12
era irregular rizoide, elevada, seca y
densa con respecto al primer tipo de
colonia con superficie rugosa y con
pigmentacin blanca; la quinta colonia era
puntiforme, convexa, mucode con
superficie lisa y con pigmentacin beige; la
sexta colonia era irregular esparcida,
plana, seca con superficie rugosa y con
pigmentacin blanca; la sptima colonia
era circular, plana concntrica, mucode
(menos denso que los dems) con
superficie lisa y con pigmentacin marrn;
la octava colonia era irregular, elevada,
seca con superficie rugosa y con
pigmentacin blanca; la novena colonia
era irregular, mucode con superficie lisa y
con pigmentacin blanco lechoso; la
dcima colonia era rizoide, elevada, seca
(menos densa que el cuarto tipo de
colonia) con superficie rugosa y con
pigmentacin beige y la colonia decima
primera presentaba una morfologa
irregular, plana, mucode con superficie
lisa y con pigmentacin blanca.
13
W3
W2
W1
SIMBOLOGIA SIGNIFICADO
W1 Zona anaerbica
W2 Zona facultativa
W3 Zona aerbica
DESCRIPCION W1, W2 Y W3
W1
En esta capa hubo cambio de color de negro a plomo con pequeas puntos de color
verde claro.
Mide 1.5 cm
Mide 0.5 cm
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CAPA 3: presenta color verde oscuro con presencia de porciones o puntos de color rojizo
oscuro y presencia de burbuja
Mide 2 cm
W2
Mide 2 cm
Mide 4.5 cm
W3
Mide 9.5 cm
Mide 1 cm
CAPA 8: se caracteriza por ser agua verdosa con presencia de organismos o animlculos.
Mide 3 cm
En la imagen podemos ver una posible Observamos una posible pulga de agua
pulga de agua rodeada de cianobacterias. rodeada de cianobacterias.
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Fig.6 Posible Diatomea sp. Fig.7 Bacillus sp. Gram (-)
esporulados.
Fig.8 Probables Bacilos sp. Gram (+) Fig.9 Probable Diatomea sp.
17
Fig.10 Probable Diatomea sp.
18
Fig.13 Posibles bacterias Gram-
positiva Bacillus brevis . Fig.14 Posibles bacterias Bacilos
Gram positivos.
19
Fig.17 Posibles bacterias Bacillus Fig.18 Posibles bacterias coccos
Gram negativas. gram positivas
20
Fig.21 Posible Streptococcus Fig.22 Posibles bacilos y las
pneumoniae bacterias Clostridium,
21
V. DISCUSIONES
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EVALUACION DE LOS MICROOGANISMOS ENCONTRADOS EN LA COLUMNA DE
WINOGRADSKY EN LAS TRES ZONAS AEROBIA, MACROEROFILIA Y ANAEROBIA.
a nivel de colonias
En la zona aerobia a nivel de colonias, solo se visualiz un rango de tres a cuatro tipos de
colonias en los medios de agar almidn y agar nutritivo. En ambos medios se present
una morfologa muy similar, ya que solo se evaluaba las colonias que crecieron en zona
aerobia.
En la zona facultativa se ve una diferencia de los microorganismos que ms se
desarrollaron en el medio de cultivo de agar almidn, ya que se visualizaron seis tipos de
colonias, mientras que en el agar nutritivo solo se visualizaron tres tipos de colonias. En
cuanto a su morfologa se observ ms las colonias de tipo puntiforme.
En la zona anaerobia, se hall una gran diversidad de colonias en el agar nutritivo, ya que
se pudo visualizar 11 tipos de colonias con distintas morfologas, a diferencia del medio
de cultivo agar almidn solo se visualiz cuatro tipos de colonias.
En sntesis de la evaluacin de las colonias se puede afirmar que la columna de
winograsky fue favorable para los microorganismos anaerobios, ya que segn los
resultados obtenidos se pudieron visualizar la mayor cantidad de colonias en esa zona, lo
que significa que hubo presencia muy significativa de bacterias reductoras de azufre.
a nivel celular
En la zona aerobia, se pudo apreciar la presencia de algunas algas y bacterias
fotosintticas, as como tambin la presencia de muchos bacilos con pocas esporas a
diferencia de que en la zona facultativa hubo predominancia de esporas, esto fue un
indicador de que bacilos u otros microorganismos, se encontraban sometidos a un tipo de
estrs; sin embargo tambin se encontraron actinomicetos. En la zona anaerobia, la cual
fue la ms representativa se observ la presencia de muchos bacilos.
VI. RECOMENDACIONES
1. Para elaborar una adecuada columna de winogradsky, se debe utilizar una mayor
cantidad de nutrientes tales como sulfato, calcita y fosfato.
2. Se recomienda compactar la mezcla de suelo y lodo para evitar la formacin de
burbujas de aire que eviten el crecimiento de las bacterias anaerobias.
3. La columna debe tener una mayor exposicin al sol, ya que en el invernadero no
lleg la luz suficiente y pudo ser una de las causas principales de que no se pudo
observar los colores deseados en la columna.
4. Otra opcin de iluminacin puede ser una lmpara incandescente.
5. La columna debe estar cubierta casi al tope de agua de donde se sac el lodo y
tierra, si es que se evapora debe aadirse agua destilada.
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6. Es recomendable que el volumen de agua en la columna sea de un tercio del total
aproximadamente.
7. Es necesario que la columna tenga materia orgnica suficiente para que sea de
alimento para los microorganismos hetertrofos.
8. La materia orgnica que se introduce en la columna debe ser lo ms particulada
posible para as facilitar la descomposicin a las bacterias.
9. Debe aadirse lodo en la parte inferior de la base, donde se desarrollaran los
microorganismos anaerobios y facultativos.
10. La columna debe ser cubierta con parafilm y ligas alrededor para as evitar el
ingreso de oxigeno que podra alterar la funcionalidad de los microorganismos.
11. Es necesario hacer anotaciones en un cuaderno de apuntes sobre los cambios
macroscpicos que se puedan observar peridicamente, acompaado de fotos.
12. Se recomienda aadir restos de petrleo o crudo en la parte inferior junto con el
lodo para la obtencin de cultivos de bacterias degradadoras petrleo.
13. Se recomienda aadir restos de bolsas biodegradables con pan en pedazos
pequeos para realizar estudios posteriores de bacterias degradativas de bolsas.
VII. BIBLIOGRAFIA
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