AUTOR
LUZ STELLA MEJIA RANGEL
ii
VALIDACIN DE LA TCNICA PARA LA CUANTIFICACIN DE
AUTOR
LUZ STELLA MEJIA RANGEL
APROBADO
________________________ ________________________
Viviana Pea Pez Janeth Arias
Microbiloga Industrial Bacteriloga MSc
Director Codirector
________________________ ________________________
Cindy Fernandez Jazmn Castellanos
Microbiloga Industrial Qumica
Jurado Jurado
iii
VALIDACIN DE LA TCNICA PARA LA CUANTIFICACIN DE
AUTOR
LUZ STELLA MEJIA RANGEL
APROBADO
________________________ ________________________
Ingrid Schuler Ph.D Janeth Arias MSc
Decana Acadmica Director de Carrera de
Microbiologa
iv
A mis padres por su ayuda, confianza y apoyo incondicional y a Dios
por acompaarme en cada uno de mis pasos
v
AGRADECIMIENTOS
Viviana Pea por su amistad y colaboracin para realizar con xito este
trabajo de grado.
vi
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCION ......................................................................................... 0
MARCO TEORICO ...................................................................................... 2
2.1 ANTIBITICOS .............................................................................. 2
2.1.1 MODO Y MECANISMO DE ACCIN DE LOS ANTIBIOTICOS 2
2.1.2 MACROLIDOS ............................................................................ 3
2.1.2.1 ORIGEN Y COMPOSICIN QUMICA .................................... 3
2.1.2.2 FORMULACIONES DEL FARMACO ....................................... 4
2.1.2.3 MECANISMO DE ACCIN ...................................................... 4
2.2 TILOSINA ....................................................................................... 5
2.2.1.1 ESTRUCTURA MOLECULAR DE LA TILOSINA .................... 5
2.2.1.2 DESCUBRIMIENTO ................................................................. 6
2.2.1.3 FORMULA EMPIRICA ............................................................. 6
2.2.1.4 CARACTERISTICAS FISICO QUIMICAS ............................ 6
2.2.2 USOS DE LA TILOSINA ............................................................. 7
2.2.3.1 MECANISMO DE ACCIN ...................................................... 8
2.2.3.2 ABSORCIN, METABOLISMO Y EXCRECIN ..................... 8
2.2.3.3 CONTRAINDICACIONES DE LA TILOSINA ........................... 9
2.2.4 POTENCIA ................................................................................ 10
2.2.4.1 METODOS DE EVALUACIN DE POTENCIA
MICROBIOLOGICA ............................................................................ 10
2.2.4.2 DIFUSIN EN PLACA ........................................................... 10
2.5. MICROORGANISMO .................................................................. 11
2.5.1 Micrococcus luteus .................................................................... 11
2.6 VALIDACIN ................................................................................ 14
2.6.1 PARAMETROS DE CALIFICACION Y VALIDACION .............. 15
2.6.1.1 CALIFICACIN DE INSTALACIN (IQ) ................................ 15
2.6.1.2 CALIFICACIN OPERACIONAL (OQ) .................................. 15
2.6.1.3 CALIFICACIN DE DESEMPEO (PQ) .............................. 15
2.6.2 PARMETROS DE VALIDACIN DE UN MTODO ............... 15
2.6.2.1 ESPECIFICIDAD .................................................................... 15
2.6.2.2 SELECTIVIDAD ..................................................................... 16
2.6.2.3 LINEALIDAD Y ALCANCE ..................................................... 16
2.6.2.4 PRECISIN ............................................................................ 17
2.6.2.4.1 REPETIBILIDAD ................................................................. 17
2.6.2.4.2 REPRODUCIBILIDAD ......................................................... 17
2.6.2.5 EXACTITUD ........................................................................... 18
2.6.2.6 LMITE DE DETECCIN........................................................ 18
2.6.2.7 LMITE DE CUANTIFICACIN .............................................. 18
2.6.2.8 ROBUSTEZ ............................................................................ 19
2.6.2.9 SENSIBILIDAD ....................................................................... 19
2.6.3 TIPOS DE VALIDACION DEL PROCESO ............................... 19
2.6.3.1 VALIDACIN PROSPECTIVA ............................................... 19
2.6.3.2 VALIDACIN CONCURRENTE ............................................ 20
vii
2.6.3.3 VALIDACIN RETROSPECTIVA .......................................... 20
2.6.3.4 REVALIDACIN ..................................................................... 20
3. FORMULACIN DEL PROBLEMA Y JUSTIFICACIN ....................... 21
4. OBJETIVOS ........................................................................................... 22
4.1 OBJETIVO GENERAL ................................................................. 22
4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS ....................................................... 23
5. MATERIALES Y METODOS ................................................................ 23
5.1 MATERIALES ............................................................................... 23
5.2 REACTIVOS ................................................................................. 24
5.3 MEDIO DE CULTIVO ................................................................... 24
5.5 MICROORGANISMO ................................................................... 24
6. METODOLOGA .................................................................................... 25
6.1 PROCEDIMIENTO DE LA VALIDACION..................................... 27
6.1.1 PREPARACIN DEL MICROORGANISMO ............................ 27
6.1.2 PREPARACIN DEL BUFFER ................................................. 27
6.1.3 PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO ............................ 27
6.1.4 INOCULO .................................................................................. 28
6.1.5 PERFORACIN Y LECTURA ................................................... 28
6.1.6 CONTROLES ............................................................................ 28
6.2 MUESTRA DE TRABAJO Y ESTANDAR .................................... 29
6.3 VALIDACIN ................................................................................ 29
7. PARMETROS ...................................................................................... 30
7.2 ESPECIFICIDAD .......................................................................... 30
7.3 SELECTIVIDAD ....................................................................... 31
7.4 LINEALIDAD DEL SISTEMA........................................................ 32
7.5 LINEALIDAD DEL METODO........................................................ 34
7.6 PRECISION DEL MTODO ......................................................... 36
7.7 PRECISIN DEL SISTEMA ......................................................... 36
7.8 EXACTITUD ................................................................................. 37
7.9 LMITE DE DETECCIN .............................................................. 38
7.10LIMITE DE CUANTIFICACIN ................................................... 38
8. RESULTADOS Y DISCUSION .............................................................. 40
8.1 ESPECIFICIDAD ......................................................................... 40
8.2 SELECTIVIDAD............................................................................ 40
8.2.1 SELECTIVIDAD CONDICIN CIDA....................................... 40
8.2.2 SELECTIVIDAD CONDICIN BSICA .................................... 41
8.2.3 SELECTIVIDAD CONDICIN ULTRAVIOLETA ...................... 41
8.2.4 SELECTIVIDAD CONDICIN TRMICA ................................. 41
8.3 LINEALIDAD................................................................................. 42
8.3.1 LINEALIDAD DEL SISTEMA..................................................... 42
8.3.2 LINEALIDAD DEL MTODO..................................................... 43
8.4 PRECISIN .................................................................................. 44
8.4.1 PRECISIN DEL MTODO ...................................................... 44
8.4.1.1 PRECISIN DA 1 ANALISTA 1 ........................................... 44
8.4.1.2 PRECISIN DIA 1 ANALISTA 2 ............................................ 44
8.4.2.1 PRECISIN DIA 2 ANALISTA 1 ............................................ 45
8.4.2.2 PRECISIN DIA 2 ANALISTA 2 ............................................ 45
8.5 EXACTITUD ................................................................................. 46
viii
8.5.1 EXACTITUD CONCENTRACION 80% .................................... 46
8.5.2 EXACTITUD CONCENTRACION AL 100% ............................ 47
8.5.3 EXACTITUD CONCENTRACION AL 120% ............................ 47
8.6 LIMITES ........................................................................................ 48
8.6.1 LIMITE DE DETECCIN........................................................... 48
8.6.2 LIMITE DE CUANTIFICACIN ................................................. 49
CONCLUSIONES ...................................................................................... 50
BIBLIOFRAFIA .......................................................................................... 51
ANEXOS .................................................................................................... 55
1. RESULTADOS EN EXCEL ............................................................ 55
2 RESULTADOS CON EL PROGRAMA DE VALIDACIN .............. 74
ix
INDICE DE TABLAS
x
Tabla 19: Resultados del parmetro Exactitud al 100% 47
Tabla 20: Resultados del parmetro Exactitud al 120% 47
Tabla 21: Resultados del parmetro Limite de Deteccin 48
Tabla 22: Resultados del parmetro Limite de cuantificacin 49
xi
TABLAS DE ANEXOS
1.1 ESPECIFICIDAD 55
1.2SELECTIVIDAD 56
1.2.1 SELECTIVIDAD CONDICIN CIDA 56
1.2.2 SELECTIVIDAD CONDICIN BSICA 57
1.2.3 SELECTIVIDAD CONDICION ULTRAVIOLETA 58
1.2.4 SELECTIVIDAD CONDICIN TRMICA 59
1.3 LINEALIDAD DEL SISTEMA 60
1.4 LINEALIDAD DEL MTODO 62
1.5 PRECISION DEL METODO 64
1.5.1 PRECISION DIA 1 ANALISTA 1 64
1.5.2 PRECISION DIA 1 ANALISTA 2 65
1.5.3 PRECISION DIA 2 ANALISTA 1 66
1.5.4 PRECISION DIA 2 ANALISTA 2 67
1.6 EXACTITUD 68
1.6.1 EXACTITUD AL 80% 68
1.6.2 EXACTITUD AL 100% 69
1.6.3 EXACTITUD AL 120% 70
1.7 LIMITE DE DETECCIN 71
1.8 LIMITE DE CUANTIFICACION 72
2.1 LINEALIDAD SISTEMA 74
2.2LINEALIDAD DEL MTODO 79
2. 3 PRECISIN DEL MTODO 83
2.4 PRECISIN DEL SISTEMA 89
2.5 EXACTITUD 92
2.6 LIMITE DE CUANTIFICACIN 95
xii
RESUMEN
xiii
ABSTRACT
xiv
INTRODUCCION
1
MARCO TEORICO
2.1 ANTIBITICOS
2
correspondientes, la droga se fija en la pared celular y cuando se
produce la divisin celular de la bacteria, aparecen defectos en dicha
pared, el microorganismo se hace osmticamente sensible, penetra
lquido en su interior, estalla y se lisa, as actan las penicilinas,
cefalosporinas, bacitracinas, cicloserinas y vancomicina (Groupe,1990)
2.1.2 MACROLIDOS
3
Qumicamente todos los antibiticos de este grupo estn clasificados
como lactonas macrocclicas, con miembros que contienen entre 12 y 20
tomos de carbono en el anillo lactona. A este anillo se le une varias
combinaciones de desoxiazcar mediante enlaces glucosdicos.
Desde el descubrimiento de la eritromicina a partir de un microorganismo
del suelo, Streptomyces erythreus, se han aislado o sintetizado a partir de
la molcula base eritromicina numerosos macrlidos, incluyendo la
tilosina, la roxitromicina, eritromicilina, la tilmicosina, la diritromicina, la
azitromicina, la claritromicina, la espiramicina, la fluritromicina. (Adams,
2003)
Todos los macrlidos son bases dbiles, con valores de pKa que oscilan
entre 6 y 9, el pKa de la tilosina es 7,1 y la eritromicina tiene un pKa de
8,7-8,8. (Adams, 2003)
4
2.2 TILOSINA
5
2.2.1.2 DESCUBRIMIENTO
6
2.2.2 USOS DE LA TILOSINA
7
La tilosina es activa contra microorganismos Gram positivos, con especial
accin sobre Mycoplasma gallisepticum S6. Tambin acta sobre algunos
Gram negativos. Por lo general, los microorganismos resistentes a tilosina
tambin lo son a la eritromicina.
8
Es posible mezclar la sal fosfato con el alimento del cerdo, aunque su
absorcin es ms limitada. Cuando se administra por va parenteral, se
recomienda la va intramuscular, disolvindola en propilenglicol y agua,
adicionando alcohol benclico al 4% como bactericida. (Sumano,1997)
9
2.2.4 POTENCIA
10
un microorganismo adecuado. Las placas se incuban para permitir el
desarrollo del microorganismo. La zona obtenida es una zona clara (halo)
de inhibicin del crecimiento en torno a los reservorios. La base
cuantitativa del ensayo es la relacin entre el dimetro de las zonas de
inhibicin y la concentracin de antibitico.
2.5. MICROORGANISMO
11
causar infecciones como endocarditis o bacteriemia en huspedes
susceptibles.
(http://db.doyma.es/cgi- bin/wdbcgi.exe/doyma/mrevista.pdf?pident=13042871)
12
Mtodo Reaccin Micrococcus
Lisostafina Resistente
Produccin de cido a partir de la glucosa en Negativo
anaerobiosis y en presencia de 0.4 g/ml de
eritromicina
Furazolidona Resistente
Prueba de Oxidasa modificada Positivo
13
Figura 5. Micrococcus luteus Tomada :
http://www.puc.cl/sw_educ/biologia/bio100/html/portadaMIval11.2.1.1.
1.html
2.6 VALIDACIN
14
2.6.1 PARAMETROS DE CALIFICACION Y VALIDACION
Establecer por evidencia objetiva que todos los aspectos claves del
equipo de proceso y la instalacin de sistemas auxiliares cumplen con las
especificaciones aprobadas del fabricante y las recomendaciones del
abastecedor del equipo son consideradas de manera apropiada (FDA,
2004)
2.6.2.1 ESPECIFICIDAD
15
puede compensarse usando otros procedimientos analticos
complementarios (USP 30)
2.6.2.2 SELECTIVIDAD
16
concentraciones de analito que cubren el alcance atribuido al
procedimiento. Cuando la relacin entre la respuesta y la concentracin
no es lineal, se puede lograr la normalizacin por medio de una curva de
calibracin. (OMS, 1996)
2.6.2.4 PRECISIN
2.6.2.4.1 REPETIBILIDAD
2.6.2.4.2 REPRODUCIBILIDAD
17
2.6.2.5 EXACTITUD
18
cuantificacin es aproximadamente el doble que el de deteccin. (OMS,
1996)
2.6.2.8 ROBUSTEZ
2.6.2.9 SENSIBILIDAD
La sensibilidad es la capacidad del procedimiento de prueba de registrar
pequeas variaciones de la concentracin. Es la inclinacin de la curva de
calibracin. Se debe evitar usar el trmino en forma ms general, es decir,
abarcando lmite de deteccin y/o lmite de cuantificacin. (OMS,1996)
19
hace una valoracin general; si los resultados son aceptables al final, el
proceso es satisfactorio. Los procesos no satisfactorios se tienen que
modificar y mejorar hasta que una nueva validacin demuestre su carcter
satisfactorio. Este tipo de validacin es importante para limitar el riesgo de
errores que se producen a escala de produccin, por ejemplo, en la
preparacin de productos inyectables. (Comisin Europea, 2001)
2.6.3.4 REVALIDACIN
20
cuando se presenta cambio de uno de los componentes crticos de la
formulacin, cambio o reemplazo de una pieza crtica en un sistema o
equipo, cambio en instalaciones, cambio en tamao del lote de fabricacin
y por unidades producidas fuera de especificaciones en lotes
consecutivos.
La revalidacin peridica se presenta cuando los procesos experimentan
cambios graduales, incluso si operarios experimentados trabajan
correctamente aplicando los mtodos establecidos. De manera anloga,
el desgaste del equipo puede tambin causar cambios graduales. Por
consiguiente, es aconsejable realizar revalidacin a intervalos
programados, incluso sin introducir cambios deliberados.
La decisin de implantar la revalidacin peridica debe basarse
esencialmente en un examen de datos histricos, es decir, datos
producidos durante las pruebas del proceso de fabricacin y del producto
terminado efectuadas despus de la validacin ms reciente, con el
objetivo de verificar si el proceso est bien controlado. Al examinar esos
datos histricos se debe evaluar cualquier tendencia observada en los
datos compilados. (Comisin Europea, 2001)
21
Al examinar los datos de validacin de los mtodos, se espera que los
datos para las pruebas repetitivas sean coherentes y que las diversas
concentraciones de las soluciones de prueba provean resultados lineales.
4. OBJETIVOS
22
4.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
5. MATERIALES Y METODOS
5.1 MATERIALES
Cajas de Petri estriles desechables
Balones aforados
Pipetas graduadas y aforadas
Frascos Schott volumen 500 ml
Puntas estriles
Micropipeta 10-100 l
Asa redonda
23
Tubo taparosca 16*100 mm
Beaker 100 mL
5.2 REACTIVOS
Metanol grado reactivo
Fosfato dibsico de potasio
Fosfato monobsico de potasio
Cloruro de sodio NaCl 0.9%
Acido fosforico 18 N
Hidroxido de potasio 10 N
5.5 MICROORGANISMO
Micrococcus luteus ATCC 9341
5.6 EQUIPOS
Incubadora 35C +/- 3
Bao termostatado
Cabina Seguridad Biolgica Clase II
Autoclave
Ultrasonido
Calibrador
24
6. METODOLOGA
25
Metodologa
Inoculo 3 ml * 100ml
Patrn Mac farland 25%
transmitancia
Siembra
Lectura de halos
26
6.1 PROCEDIMIENTO DE LA VALIDACION
27
6.1.4 INOCULO
6.1.6 CONTROLES
28
6.2 MUESTRA DE TRABAJO Y ESTANDAR
6.3 VALIDACIN
29
7. PARMETROS
7.1 GENERALIDADES
7.2 ESPECIFICIDAD
30
Tabla 1: Diluciones de las concentraciones que se trabajaron en la
Especificidad
ESTANDAR 25 50 MeOH 1.6 UI/mL
2 50 BPH8:MEOH
4 50
7.3 SELECTIVIDAD
31
El estndar, la muestra y el placebo fueron sometidos en la ltima dilucin
a cada una de las condiciones anteriormente mencionadas menos a
condicin ultravioleta que fue la exposicin antes de hacer las diluciones.
32
Con la inicial dilucin del estndar se toma una alcuota de 1ml en un
baln de 50ml, de esta dilucin se toma alcuotas de 5 y 7ml en balones
de 50ml.
Estndar 25mg 50
2 50
50 50 50 50 50
1,2 1,6 2,0 2,4 2,8
C E F G H
Estndar
25mg 50 25 50
3 50 1,0 50
50 50 50
0,6 1,0 1,4
A B D
33
7.5 LINEALIDAD DEL METODO
34
Tabla 4: Diluciones de las concentraciones que se trabajaron en la
Linealidad del mtodo
Estndar 25 50
2 50
3,0 +1ml 4,0 +1ml 5,0 +1ml 6,0 +1ml 7,0 +1ml
placebo placebo placebo placebo placebo
50 50 50 50 50
1,2 1,6 2,0 2,4 2,8
C E F G H
Estndar 50
25 25 50
3 50 1,0 50
50 50 50
0,6 1,0 1,4
A B D
35
PLACEBO 940 mg 50
2 100
ESTANDAR 25 50 MeOH
2 50 BPH8:MEOH
4 50 BPH8:MEOH
1.6 UI / mL
36
7.8 EXACTITUD
37
7.9 LMITE DE DETECCIN
7.10LIMITE DE CUANTIFICACIN
38
Tabla 8: Diluciones de las concentraciones que se trabajaron en el
Limite de cuantificacin
25 50
ESTANDAR MeOH 1.6 UI / mL
2 50 BPH8:MEOH
4 50 BPH8:MEOH
39
8. RESULTADOS Y DISCUSION
8.1 ESPECIFICIDAD
Tabla 9: Resultado del parmetro de especificidad
RESULTADO
M1 MUESTRA 10.6 g / 100g
M2 PLACEBO NO PRODUCE HALO
M3 DILUENTE NO PRODUCE HALO
8.2 SELECTIVIDAD
40
8.2.2 SELECTIVIDAD CONDICIN BSICA
Tabla 11: Resultado del porcentaje de degradacin en el
parmetro Selectividad en condicin bsica
MUESTRA DEGRADACION
M1 ESTNDAR 96,1
M2 MUESTRA 95,9
M3 PLACEBO ----
MUESTRA DEGRADACION
M1 ESTNDAR 7,0
M2 MUESTRA 14,5
M3 PLACEBO ----
MUESTRA DEGRADACION
M1 ESTNDAR 38,9
M2 MUESTRA 52,0
M3 PLACEBO ----
41
En condicin cida el porcentaje de degradacin del estndar fue del
32.4% y la muestra de 44.2% donde se observa que este que el principio
activo frente a condicin cida se ve afectada.
En condicin bsica el porcentaje de degradacin del estndar fue del
96.1% y de la muestra del 95.9%, se observa que la molcula del principio
activo fue seriamente afectada.
En condicin de calor el estndar tiene un porcentaje de degradacin del
38.9 y la muestra de 52%; en condicin de ultravioleta el estndar tiene
un porcentaje de degradacin del 7% y la muestra del 14.5%.
El placebo frente a las diferentes condiciones no se vio afectado, como
era de esperarse no hubo halo de inhibicin.
Estos resultados indican que el producto debe estar bien almacenado, no
debe estar bajo el sol y que la condicin bsica se va afectado en mayor
porcentaje que en los otro parmetros evaluados.
Tilosina es sensible a condiciones extremas de evaluacin ya que a si sea
en muestra se encuentra una disminucin del activo.
Las soluciones son estables durante 30 das a temperatura ambiente y a
un pH de 4 a 9. Por hidrlisis cida (pH inferior 4) se descompone en dos
fracciones: el azcar y la desmicosina, un producto microbiologicamente
activo que posee propiedades fsico-qumicas similares. Si prosigue el
desdoblamiento, se liberan los sacridos neutros micarosa y micaminosa.
La tilosina conserva su estabilidad durante dos aos en las condiciones
habituales de condicionamiento. (H. Trolldenier, 1980)
8.3 LINEALIDAD
42
Se encuentra en proporcionalidad entre la concentracin de trabajo y el
dimetro del halo, es decir es directamente proporcional la concentracin
al halo.
La linealidad del sistema es la curva patrn para la evaluacin de los
parmetros de validacin.
43
8.4 PRECISIN
44
8.4.2.1 PRECISIN DIA 2 ANALISTA 1
Tabla 16: Resultados del parmetro precisin da 2, analista 1
MUESTRAS
M1 M2 M3
Dimetro 14,58 14,50 14,66
Concentracin (UI/ml) 1,4537 1,4280 1,4780
Log (Concentracin) 0,162 0,155 0,170
Cantidad Muestra (mg) 940,3 940,5 940,0
g tilosina /100 g 9,7 9,5 9,8
Potencia Promedio 9,66
% 96,6
45
Coeficiente de variacin de la precisin intermedia 4.81
Especificacin mx.: 5.00
8.5 EXACTITUD
46
8.5.2 EXACTITUD CONCENTRACION AL 100%
Tabla 19: Resultados del parmetro Exactitud al 100%
MUESTRAS
M1 M2 M3
Dimetro 14,62 14,52 14,56
Concentracin (UI/ml)
recuperada 1,4674 1,4356 1,4463
Log (Concentracin) 0,167 0,157 0,160
Cantidad Muestra mg 25,1 25,7 25,6
UI reales / mg 1,4 1,5 1,5
Porcentaje Recuperado % 101 97 98
Porcentaje % 98,7
MUESTRAS
M1 M2 M3
Dimetro 15,28 15,96 15,28
Concentracin (UI/ml)
recuperada 1,6918 1,9594 1,6909
Log (Concentracin) 0,228 0,292 0,228
Cantidad Muestra mg 30,0 30,7 30,3
UI reales / mg 1,7 1,8 1,7
Porcentaje Recuperado % 98 103 97
Porcentaje % 99,2
47
La exactitud del procedimiento empleado consiste en la proximidad de los
resultados obtenidos al valor real (OMS,1996)
La especificacin para la exactitud, el porcentaje de recuperacin debe
estar entre los limites 97%-103%
El porcentaje de recuperacin al 80, 100 y 120% fue cercano al 100%,
esta dentro del rango permitido, esto indica que la tcnica es exacta
dando valores reales al momento de trabajar.
8.6 LIMITES
48
8.6.2 LIMITE DE CUANTIFICACIN
Tabla 22: Resultados del parmetro Limite de cuantificacin
MUESTRAS
M1 M2 M3
Dimetro 11,90 12,09 12,08
Concentracin (UI/ml) recup 0,8139 0,8465 0,8457
Log (Concentracin) -0,089 -0,072 -0,073
Cantidad Muestra mg 27,3 27,6 27,1
UI reales / mg 0,8 0,8 0,8
Porcentaje Recuperado% 103 106 108
Porcentaje % 105,9
MUESTRAS
M1 M2 M3
Dimetro 12,03 11,97 11,81
Concentracin (UI/ml) recup 0,8358 0,8248 0,7976
Log (Concentracin) -0,078 -0,084 -0,098
Cantidad Muestra mg 27,6 27,5 27,5
UI reales / mg 0,8 0,8 0,8
Porcentaje Recuperado% 105 104 101
Porcentaje % 103,1
49
El lmite de cuantificacin fue de 0.8 UI/mL Se confirma que la
concentracin es exacta y cuantificable porque arroj resultados
coherentes y confiables.
CONCLUSIONES
50
Se estandariz la tcnica para la cuantificacin del principio activo
tilosina
Se valido la tcnica de cuantificacin de tilosina en un producto en
polvo.
Se evidenci que el principio activo frente a condiciones de calor,
ultravioleta y cidos es susceptible la tilosina y en condicin bsica
supera el 95% de degradacin.
Los parmetros crticos para la validacin microbiolgica de la
tcnica es selectividad y precisin
Se demostr que la tcnica difusin en agar mediante la tcnica de
potencia funciona para la validacin de la tcnica de cuantificacin
de tilosina.
La linealidad por ser parmetro fundamental ya que a partir de este
se calculan los otro parmetro, debe manejarse con valores
aceptables como por ejemplo el r2 superior a 0.95.
Cuando cambie su composicin o fabricacin del Tifomix se
recomienda hacer revalidacin de la tcnica de cuantificacin de
tilosina.
BIBLIOFRAFIA
51
ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD. Buenas prcticas de manufactura
Vigentes. Serie de Informes Tcnicos de la OMS (823). Comit de
Expertos de la OMS en Especificaciones para las Preparaciones
Farmacuticas. Informe 32. Ginebra. 1996..
USP 30. 2007. Pharmacopea. The United States Phamacopeia. The official
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53
Isadore Kanfer , Michael F. Skinner, Roderick B. Walker. Analysis of macrolide
antibiotics. 1998. Rev. Elsevier Journal of chromatographya. Vol. 812.
Pag. 255-286
54
ANEXOS
1. RESULTADOS EN EXCEL
1.1 ESPECIFICIDAD
TIFOMIX
ACTIVO Tilosina Fosfato
Concentracin 10 g / 100g Lote TF0H0072P N Anlisis P012
1.6 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 940mg 50 1.6 UI/mL
2 50 BPH8 2 100
4 50 BPH8 1 25
BPH8
Promedio
Muestras Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio correlacin
S3 16,74 15,53 15,72 15,34 16,11 16,06 15,35 16,02 15,03 15,77
MUESTRA 15,59 16,14 15,61 14,90 16,45 14,95 15,19 16,10 15,59 15,61 15,00
M3 DILUENTE ---
55
1.2SELECTIVIDAD
M3 PLACEBO ----
56
1.2.2 SELECTIVIDAD CONDICIN BSICA
ACTIVO Tilosina Fosfato
Concentracin 10 g / 100g Lote TF0H0072P N Anlisis P012
ESTANDAR 25 50 MeOH 1.6 UI / mL MUESTRA 940mg 50 1.6 UI/mL
2 50 BPH8 2 100
4 50 BPH8 1 25
BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio
S3 18,34 16,18 15,96 16,08 17,26 15,18 16,94 17,97 16,31 16,69
ESTANDAR --- --- --- --- --- --- --- --- ---
M1 ESTNDAR 96,1
M2 MUESTRA 95,9
M3 PLACEBO ----
57
1.2.3 SELECTIVIDAD CONDICION ULTRAVIOLETA
ACTIVO Tilosina Fosfato
Concentracin 10 g / 100g Lote TF0H0072P N Anlisis P012
ESTANDAR 25 50 MeOH 1.6 UI / mL MUESTRA 940mg 50
2 50 BPH8 2 100
4 50 BPH8 1
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio
S3 16,12 13,91 14,52 13,56 15,65 14,42 14,59 15,96 14,38 14,78
ESTANDAR 14,57 13,70 15,33 13,83 14,93 13,38 14,25 14,66 14,07 14,30
MUESTRA DEGRADACION
M1 ESTNDAR 7,0
M2 MUESTRA 14,5
M3 PLACEBO ----
58
1.2.4 SELECTIVIDAD CONDICIN TRMICA
ACTIVO Tilosina Fosfato
Concentracin 10 g / 100g Lote TF0H0072P N Anlisis P012
1.6 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 940mg 50 1.6 UI/mL
2 50 BPH8 2 100
4 50 BPH8 1 25
BPH8
Muestras
Promedio
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio correlacin
S3 16,85 16,60 16,93 15,85 17,12 16,65 17,53 16,83 17,53 16,69
ESTANDAR 14,44 12,66 14,99 14,12 13,85 14,31 13,95 14,17 14,40 14,28 12,75
MUESTRA DEGRADACION
M1 ESTNDAR 38,9
M2 MUESTRA 52,0
M3 PLACEBO ----
59
1.3 LINEALIDAD DEL SISTEMA
TIFOMIX
LINEALIDAD SISTEMA TILOSINA
ACTIVO Tilosina Fosfato
10 g /
Concentracin 100g Lote TF0H0072P N Anlisis P012 Fecha 07 11 07
Curva Estndar
Promedio
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Total Promedio corr.
S3- C 15,37 16,55 14,59 14,99 14,14 14,30 15,75 16,30 14,44 136,43 15,16
S1 - A 10,39 11,51 10,97 10,19 10,60 10,44 10,05 10,16 10,00 94,31 10,48 10,48
S3- C 14,20 16,10 14,44 14,53 14,42 15,21 15,73 15,32 14,43 134,38 14,93
S2 - B 12,55 12,50 11,61 12,28 12,09 12,98 13,66 12,77 13,40 113,84 12,65 12,88
S3- C 15,09 15,57 14,65 15,32 13,84 15,88 13,99 15,86 14,45 134,65 14,96
S4 - D 14,99 13,88 13,10 13,07 12,27 14,78 13,67 14,54 12,09 122,39 13,60 13,80
S3- C 13,71 13,88 15,29 14,48 13,92 15,31 16,42 15,02 16,42 134,45 14,94
S4 - E 12,67 14,50 13,92 13,15 13,49 13,69 14,64 14,92 15,66 126,64 14,07 14,29
S3- C 15,30 15,40 15,66 16,47 17,66 15,11 14,58 15,99 16,20 142,37 15,82
S5- F 16,73 16,84 15,86 17,85 16,15 14,82 16,68 16,77 15,96 147,66 16,41 15,75
S3- C 14,21 16,25 16,11 17,49 15,11 15,73 14,90 15,63 14.97 140,40 15,60
S6 - G 19,69 19,18 16,57 17,11 16,46 18,00 16,06 16,97 17,03 157,07 17,45 17,01
S3- C 16,39 16,41 13,99 14,11 14,77 14,55 14,36 14,51 13,16 132,25 14,69
S7 - H 18,02 18,50 16,51 17,36 16,66 17,62 16,60 17,61 15,36 154,24 17,14 17,60
XS 15,16
60
CURVA CALIBRACION TILOSINA
LINEALIDAD SISTEMA
0,5000
0,2000
0,1000
0,0000
8,00 9,00 10,00 11,00 12,00 13,00 14,00 15,00 16,00 17,00 18,00 19,00
-0,1000
-0,2000
-0,3000
Halo (m m )
61
1.4 LINEALIDAD DEL MTODO
TIFOMIX
LINEALIDAD METODO TILOSINA
ACTIVO Tilosina Fosfato
10 g / N
Concentracin 100g Lote TF0H0072P Anlisis P012 Fecha 07 09 11
Curva Estndar
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Total Promedio Promedio corr.
S3- C 14,59 14,23 13,93 14,03 13,03 14,31 13,27 13,75 14,09 125,23 13,91
S1 - A 12,91 12,85 12,68 11,25 12,29 13,04 12,25 12,91 11,94 112,12 12,46 12,77
S3- C 12,29 14,14 15,91 13,21 14,03 15,34 15,91 13,89 13,75 128,47 14,27
S2 - B 12,80 14,91 14,63 12,82 14,69 14,65 14,91 13,61 14,53 127,55 14,17 14,12
S3- C 14,43 12,89 14,40 15,08 13,60 15,05 15,45 14,18 16,14 131,22 14,58
S4 - D 13,11 13,18 14,35 14,40 13,42 15,12 14,28 13,92 15,00 126,78 14,09 13,73
S3- C 14,17 14,03 15,61 12,49 14,72 14,70 14,78 15,35 15,26 131,11 14,57
S4 - E 15,31 15,70 16,10 14,70 16,20 14,94 14,23 15,05 16,01 138,24 15,36 15,01
S3- C 13,40 13,88 14,56 13,11 13,91 14,55 15,18 13,52 13,31 125,42 13,94
S5- F 14,82 16,82 15,59 15,00 16,40 14,92 16,11 14,06 16,70 140,42 15,60 15,89
S3- C 14,66 13,12 14,68 15,07 13,00 15,35 13,70 13,26 13,72 126,56 14,06
S6 - G 15,44 16,34 16,98 16,90 15,49 17,01 17,38 16,92 16,74 149,20 16,58 16,74
XS 14,22
CURVA ESTANDAR DATOS ESTANDAR
Puntos Dimetro Concentracin Log (Conc.) Peso (mg) 27,7
(mg/ml) Potencia (P) UI/mg 901,8
S1 12,77 1,0 -0,0004 Fecha de vencimiento Jun-08
S2 14,12 1,2 0,0788 Lote E0607067
S3 13,73 1,4
S4 15,01 1,6 0,2038
S5 14,22 2,0
S6 15,89 2,4 0,3799
S7 16,74 2,8 0,4468
62
CURVA CALIBRACION TILOSINA
LINEALIDAD DEL METODO
0,5
0,4
Log. Concentracin
0,3
0
11 12 13 14 15 16 17 18
-0,1
Halo (m m )
63
1.5 PRECISION DEL METODO
1.6 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 940mg 50 1.6 UI/mL
2 50 BPH8 2 100
4 50 BPH8 1 25
BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 16,74 15,53 15,72 15,34 16,11 16,06 15,35 16,02 15,03 15,77
M1 15,59 16,14 15,61 14,90 16,45 14,95 15,19 16,10 15,59 15,61 15,00
64
1.5.2 PRECISION DIA 1 ANALISTA 2
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 16,04 16,40 15,23 15,44 16,11 15,98 16,32 15,88 15,23 15,85
M1 16,38 15,41 15,21 15,33 15,48 15,17 15,89 14,59 15,83 15,48 14,79
65
1.5.3 PRECISION DIA 2 ANALISTA 1
Muestras
Promedio
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio corr
S3 13,94 14,84 16,42 14,16 15,29 15,42 14,61 16,74 15,12 15,17
M1 13,46 15,57 14,15 13,85 16,57 13,51 14,94 15,44 13,86 14,59 14,58
66
1.5.4 PRECISION DIA 2 ANALISTA 2
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 14,36 14,73 15,24 15,86 14,36 15,58 14,17 15,16 14,46 14,88
M1 13,94 14,26 14,79 14,53 15,27 15,36 15,62 14,99 14,45 14,80 15,08
67
1.6 EXACTITUD
1.6 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 20 50 MeOH 1.3 UI / mL
2 50 BPH8 2 50 BPH8
4 50 BPH8 4 50 BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 12,18 12,49 10,70 11,52 11,74 9,98 12,66 11,83 12,05 11,68
M1 11,39 11,11 9,96 10,96 10,32 10,77 11,90 10,21 10,81 10,83 14,30
68
1.6.2 EXACTITUD AL 100%
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 12,01 12,00 11,55 11,03 13,38 12,28 11,15 11,65 10,38 11,71
M1 11,04 11,58 12,60 10,89 12,45 10,03 10,38 11,09 10,57 11,18 14,62
69
1.6.3 EXACTITUD AL 120%
1.6 UI / 1.9 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 30 50 MeOH mL
2 50 BPH8 2 50 BPH8
4 50 BPH8 4 50 BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 12,17 11,71 11,38 10,00 12,43 12,25 12,43 11,20 11,22 11,64
M1 12,35 11,22 11,47 10,66 13,13 10,86 12,60 11,37 12,24 11,77 15,28
70
1.7 LIMITE DE DETECCIN
ACTIVO Tilosina Fosfato
1.6 UI / 0.6 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 25 50 MeOH mL
2 50 BPH8 3 50 BPH8
4 50 BPH8 1 50 BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 13,35 13,99 13,65 16,02 15,86 14,34 14,37 13,96 14,68 14,28
0,2 UI / mL --- --- --- --- --- --- --- --- ---
71
1.8 LIMITE DE CUANTIFICACION
1.6 UI / 0,8 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH mL MUESTRA 25 50 MeOH mL
2 50 BPH8 4 50 BPH8
4 50 BPH8 1 50 BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 15,50 15,23 16,08 16,24 14,84 15,60 16,13 15,53 15,90 15,67
M1 11,89 12,47 12,58 13,08 11,30 13,15 12,60 12,71 11,99 12,42 11,90
72
LIMITE DE CUANTIFICACION
0,8 UI /
ESTANDAR 25 50 MeOH 1.6 UI / mL MUESTRA 25 50 MeOH mL
2 50 BPH8 4 50 BPH8
4 50 BPH8 1 50 BPH8
Muestras
Caja 1 Caja 2 Caja 3 Promedio Promedio corr
S3 15,02 15,26 12,77 15,08 15,33 16,87 15,68 14,77 16,30 15,23
M1 12,63 12,16 12,19 11,33 12,80 12,31 10,52 11,98 12,98 12,10 12,03
73
2 RESULTADOS CON EL PROGRAMA DE VALIDACIN
Variables transformation
Number of repetitions 3
Unit
Linearity
# HALO CONCEN
1 10.96 0.60
2 10.41 0.60
3 10.07 0.60
4 12.22 1.00
5 12.45 1.00
6 13.28 1.00
7 13.99 1.20
8 13.37 1.20
9 13.43 1.20
10 15.50 1.60
11 14.48 1.60
12 15.50 1.60
13 16.48 2.00
14 16.27 2.00
15 16.47 2.00
16 17.19 2.40
17 16.69 2.40
18 17.21 2.80
19 17.68 2.80
74
Results
Variables transformation
Number of values 19
Number of repetitions 1
Unit
Linearity
# HALO Log CONCEN Residuals
1 10.96 -0.22 -0.06
2 10.41 -0.22 -0.01
3 10.07 -0.22 0.02
4 12.22 0.00 0.05
5 12.45 0.00 0.03
6 13.28 0.00 -0.04
7 13.99 0.08 -0.03
8 13.37 0.08 0.03
9 13.43 0.08 0.02
10 15.50 0.20 -0.04
11 14.48 0.20 0.05
12 15.50 0.20 -0.04
13 16.48 0.30 -0.03
14 16.27 0.30 -0.01
15 16.47 0.30 -0.03
16 17.19 0.38 -0.01
17 16.69 0.38 0.03
18 17.21 0.45 0.05
19 17.68 0.45 0.01
75
Calibration curve
76
Confidence level for the residuals : 95.00
Confidence level 95
Student t 1.74
Y intercept -1.14094e+000
- Variance 2.72761e-003
- Confidence interval 9.08742e-002
Slope 8.92383e-002
- Variance 1.28089e-005
- Confidence interval 6.22738e-003
Correlation coefficient r 0.986602
Determination coefficient r 0.973384
Variance due to the regression SI 8.33768e-001
Residual variance SR 1.34108e-003
Residual sum of squares 2.27984e-002
77
Test for the existence of a significant slope (F1)
Conclusion
Conclusions
Linearity
SUMMARY
78
2.2LINEALIDAD DEL MTODO
Data.
The model used is : Log(Y ) = a + bX
The linearity of the method is tested with the following data :
Variables transformation
Number of repetitions 3
Unit
Linearity
# HALO CONCEN
1 12.81 1.00
2 12.19 1.00
3 12.37 1.00
4 13.55 1.40
5 14.31 1.40
6 14.40 1.40
7 15.70 2.00
8 15.28 2.00
9 15.10 2.00
10 15.74 2.40
11 15.44 2.40
12 15.62 2.40
13 16.25 2.80
14 16.47 2.80
15 17.01 2.80
Results
Variables transformation
Number of values 15
Number of repetitions 1
Unit
Linearity
79
# HALO Log CONCEN Residuals
1 12.81 0.00 -0.04
2 12.19 0.00 0.03
3 12.37 0.00 0.01
4 13.55 0.15 0.03
5 14.31 0.15 -0.05
6 14.40 0.15 -0.06
7 15.70 0.30 -0.05
8 15.28 0.30 -0.00
9 15.10 0.30 0.02
10 15.74 0.38 0.02
11 15.44 0.38 0.06
12 15.62 0.38 0.04
13 16.25 0.45 0.04
14 16.47 0.45 0.01
15 17.01 0.45 -0.05
Calibration curve
80
Plot of the residuals
Confidence level 95
Student t 1.771
Y intercept -1.35693e+000
- Variance 1.18478e-002
- Confidence interval 1.92769e-001
Slope 1.08790e-001
81
- Variance 5.34612e-005
- Confidence interval 1.29490e-002
Correlation coefficient r 0.971872
Determination coefficient r 0.944535
Variance due to the regression SI 3.72901e-001
Residual variance SR 1.68442e-003
Residual sum of squares 2.18975e-002
Conclusion
Linearity
SUMMARY
82
Not Validated Validated
Data
Author : VM administrator
Variables transformation
Unit
Intermediate precision
# Concentration Area
1 10.0 10.6
2 10.0 10.9
3 10.0 10.1
Variables transformation
Unit
Intermediate precision
# Concentration Area
1 10.0 9.7
2 10.0 9.5
3 10.0 9.8
83
Data from group: Group 2
Variables transformation
Unit
Intermediate precision
# Concentration Area
1 10.0 10.1
2 10.0 9.9
3 10.0 10.0
Variables transformation
Unit
Intermediate precision
# Concentration Area
1 10.0 10.8
2 10.0 9.6
3 10.0 9.7
Results
The study of the characteristic " Intermediate Precision" gives the following
results:
Results for the group: Group 1
84
Intermediate precision
# Area STAT Test # Q calc. Q (99%) Q (95%)
Concentratio
n
1 10.0 10.6
2 10.0 10.9
3 10.0 10.1 1 0.625 0.988 0.941
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Number of values 3
Number of values used for calculation 3 Variance test
Confidence level 95.00 Test #
Mean of values 10.5 C calc.
Confidence interval 0.7 C (99%)
Variance for this group 1.63333e-001 C (95%)
Coefficient of variation 3.84 % STAT
Accepted
Intermediate precision
# Area STAT Test # Q calc. Q (99%) Q (95%)
Concentratio
n
1 10.0 9.7
2 10.0 9.5 1 0.667 0.988 0.941
3 10.0 9.8
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Number of values 3
Number of values used for calculation 3 Variance test
Confidence level 95.00 Test #
Mean of values 9.7 C calc.
Confidence interval 0.3 C (99%)
Variance for this group 2.33333e-002 C (95%)
Coefficient of variation 1.58 % STAT
85
For the calculation of the variances, this group will be:
Accepted
Intermediate precision
# Area STAT Test # Q calc. Q (99%) Q (95%)
Concentratio
n
1 10.0 10.1
2 10.0 9.9 1 0.500 0.988 0.941
3 10.0 10.0
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Number of values 3
Number of values used for calculation 3 Variance test
Confidence level 95.00 Test #
Mean of values 10.0 C calc.
Confidence interval 0.2 C (99%)
Variance for this group 1.00000e-002 C (95%)
Coefficient of variation 1.00 % STAT
Accepted
Intermediate precision
# Area STAT Test # Q calc. Q (99%) Q (95%)
Concentratio
n
86
1 10.0 10.8 1 0.917 0.988 0.941
2 10.0 9.6
3 10.0 9.7
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Number of values 3
Number of values used for calculation 3 Variance test
Confidence level 95.00 Test # 1
Mean of values 10.0 C calc. 0.693
Confidence interval 1.1 C (99%) 0.864
Variance for this group 4.43333e-001 C (95%) 0.768
Coefficient of variation 6.64 % STAT
Accepted
87
Conclusion
Conclusions
Intermediate Precision
SUMMARY
Analysis of variance
Variance of repeatability Sr 1.60000e-001
Inter-group variance Sg 7.43519e-002
Variance of intermediate 2.34352e-001
precision SR
88
2.4 PRECISIN DEL SISTEMA
Data
Author : VM administrator
Variables transformation
Unit
Intermediate precision
# Concentration Area
1 1.6 14.20
2 1.6 14.44
3 1.6 14.53
4 1.6 14.42
5 1.6 14.43
6 1.6 14.78
7 1.6 14.54
8 1.6 14.58
9 1.6 14.97
10 1.6 14.21
Results
The study of the characteristic " Intermediate Precision" gives the following
results:
Results for the group: Group 1
89
Intermediate precision
# Area STAT Test # Q calc. Q (99%) Q (95%)
Concentratio
n
1 1.6 14.20
2 1.6 14.44
3 1.6 14.53
4 1.6 14.42
5 1.6 14.43
6 1.6 14.78
7 1.6 14.54
8 1.6 14.58
9 1.6 14.97 1 0.247 0.527 0.412
10 1.6 14.21
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Number of values 10
Number of values used for calculation 10 Variance test
Confidence level 95.00 Test #
Mean of values 14.51 C calc.
Confidence interval 0.14 C (99%)
Variance for this group 5.51333e-002 C (95%)
Coefficient of variation 1.62 % STAT
Accepted
90
Coefficient of variation of repeatability 1.62
Specification max.: 3.00
Conclusion
Conclusions
Intermediate Precision
SUMMARY
Analysis of variance
Variance of repeatability Sr 5.51333e-002
91
2.5 EXACTITUD
Data
Number of values 9
Unit
Results
Number of values 9
Number of values used for calculation 9
Mean of concentrations 100.0
Concentration unit
92
At the target level
# Concentration Area STAT Recovery
1 100.0 104.0 104.00
2 100.0 101.0 101.00
3 100.0 101.0 101.00
4 100.0 101.0 101.00
5 100.0 97.0 97.00
6 100.0 98.0 98.00
7 100.0 98.0 98.00
8 100.0 103.0 103.00
9 100.0 97.0 97.00
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Area
Confidence level (1- /2) 95.00
Variance 6.75000e+000
Mean 100.0
Confidence interval 1.6
Coefficient of variation of repeatability 2.60 %
Recovery
Variance 6.75000e+000
Coefficient of variation of repeatability 2.60
Confidence level (1- /2) 95.00
Degrees of freedom 8
t table 1.860
Mean recovery 100.00
Interval (+-) 1.61
Specification min.: 95.00
Specification max.: 105.00
Conclusion
93
The characteristic "Accuracy - At the target level " of the analytical method is
validated.
Conclusions
Accuracy
At the target level
SUMMARY
Mean recovery
Variance 6.75000e+000
Mean recovery(%) 100.00
Interval (+-) 1.61
Specification min.: 95.00
Specification max.: 105.00
94
2.6 LIMITE DE CUANTIFICACIN
Accuracy
Accuracy - At the target level . Calculations
Data
Number of values 6
Unit
Results
Number of values 6
Number of values used for calculation 6
Mean of concentrations 100.0
Concentration unit
95
(*) suspicious value, (**) aberrant value
Area
Confidence level (1- /2) 95.00
Variance 5.50000e+000
Mean 101.5
Confidence interval 1.9
Coefficient of variation of repeatability 2.31 %
Recovery
Variance 5.50000e+000
Coefficient of variation of repeatability 2.31
Confidence level (1- /2) 95.00
Degrees of freedom 5
t table 2.015
Mean recovery 101.50
Interval (+-) 1.93
Specification min.: 95.00
Specification max.: 105.00
Conclusion
The characteristic "Accuracy - At the target level " of the analytical method is
validated.
96
Conclusions
Accuracy
At the target level
SUMMARY
Mean recovery
Variance 5.50000e+000
Mean recovery(%) 101.50
Interval (+-) 1.93
Specification min.: 95.00
Specification max.: 105.00