Abstracto

La transferencia de masa gas-lquido en matraces de agitacin de 250 ml ha sido previamente

modelada con xito basndose en la teora de penetracin de Higbie.
La presente contribucin presenta avances en la comprensin y modelizacin de la
transferencia de masa gas-lquido en matraces de agitacin en un lquido similar al agua
Viscosidad en matraces entre 50 y 1000 ml. Una investigacin experimental de la mxima
de gas-lquido de transferencia de masa OTR capacidad max
Utilizando el sistema de sulfito de sodio se extendi a volmenes de relleno relativos de 4-
16%, agitando los dimetros de 1,25, 2,5, 5, 7, 10 cm y agitando
Frecuencias de 50-500 rpm para los tamaos de matraz anteriores. Simultneamente, se
ampli el modelo anterior de transferencia de masa gas-lquido
A un "modelo de dos sub reactores" para tener en cuenta diferentes mecanismos de
transferencia de masa en la pelcula lquida sobre la pared del matraz y la mayor parte de
Girando el lquido dentro del matraz. El matraz de agitacin se considera por primera vez un
sistema de dos reactores que consiste en un tanque agitado
Reactor (lquido a granel) y un reactor de pelcula (pelcula sobre pared de frasco y base). La
transferencia de masa en la pelcula sobre la pared del matraz y la base en "fase"
Las condiciones de operacin se describen por la teora de penetracin de Higbie. Se
aplicaron dos diferentes teoras de transferencia de masa para describir con xito La
transferencia de masa en el lquido a granel: un modelo de Kawase y Moo-Young y un
modelo de Gnielinski. El acuerdo entre los nuevos Modelado, que no requiere absolutamente
ningn parmetro de ajuste y el experimental est dentro de 30%. La aplicabilidad de los
modelos a un sistema biolgico se demostr usando un cultivo de Pichia pastoris. Esto es
particularmente notable ya que el lquido geomtricamente no similar se cubren las
distribuciones en tamaos muy diferentes de frascos de agitacin. Una descripcin
comparable de la transferencia de masa gas-lquido en burbuja
Los reactores aireados como los tanques agitados estn absolutamente fuera del alcance. Una
consideracin espacial y resuelta en el tiempo de la transferencia de masa en el lquido una
pelcula en la pared del frasco y la base ha demostrado que la validez de la teora de Higbie
depende sensitivamente del espesor de la pelcula y el tiempo de contacto.

1.- Introduccin
Proporcionar suficiente oxgeno a los cultivos biolgicos es vital para el desarrollo eficiente
de bioprocesos. De acuerdo con Hilton procesos de fermentacin altamente variables
pueden construidos
Ser visto como el resultado de una falta de conciencia de algunos Parmetro crtico para ese
proceso en particular. A menudo en pequeas lquidos, ese parmetro crtico es el gas ex-
Cambio o equilibrio entre la tasa de respiracin (demanda de oxgeno del cultivo,
NUESTRO) y transferencia de oxgeno (al cultivo, OTR)". La demanda de oxgeno de la
cultura OUR puede ser limitada si excede la capacidad mxima de transferencia de oxgeno
Max OTR a travs del cierre matraz de agitacin y el gas-lquido interfaz. Si el metabolismo
del organismo bajo investigacin.
La limitacin de oxgeno, la tasa de crecimiento observada es una funcin de la tasa de
transferencia de masa. Y no da informacin sobre la verdadera tasa de crecimiento de los
microorganismos como lo demuestran van Suijdam et al. Sin embargo, pueden producirse
cambios en el metabolismo. Buchs ha identificado diferentes grados de gravedad del
metabolismo

Problemas resultantes de una limitacin de oxgeno.

En resumen se puede decir que el verdadero efecto de las variables durante el estudio en la
fase de seleccin del desarrollo de bioprocesos puede ser difcil de evaluar bajo limitacin
de oxgeno.
Slo cuando se cambien las condiciones de funcionamiento en una manera de aumentar
OTR mximo hace el verdadero e ilimitado Tasa de absorcin de oxgeno NUESTRO, lo que
significa la respiracin ilimitada de los microorganismos se hacen visibles. La deteccin bajo
una limitacin de oxgeno desconocida puede causar una Presin de seleccin y conducir as
a un alto grado de variabilidad en una etapa temprana y decisiva del desarrollo de
bioprocesos.
.
Para armonizar los experimentos de cribado, deben determinarse condiciones de
funcionamiento adecuadas (tamao del frasco, frecuencia de agitacin, volumen de llenado
y dimetro de agitacin) asegurando un suministro suficiente de oxgeno a los cultivos. Para
ello es vital obtener una comprensin mecanicista de la transferencia de masa gas-lquido, lo
que significa la capacidad mxima de transferencia de oxgeno OTRmax del matraz agitador
en dependencia de los factores de influencia.

La transferencia de oxgeno en frascos de agitacin ha sido previamente discutida en la

literatura [2, 8 - 12]. Con frecuencia se ha empleado un sistema de modelo qumico, tal como
el sistema de sulfito de sodio, para simular un consumidor de oxgeno biolgico en
investigaciones experimentales. Sin embargo, los resultados de las investigaciones realizadas
son difciles de transferir a los laboratorios de cada da en un sistema biolgico, ya que slo
una gama limitada de condiciones de operacin (tamao del frasco, volumen de llenado,
dimetro de agitacin, agitacin frecuencia) ha sido investigado [7]. En algunas
investigaciones las sondas de oxgeno sumergidas en el lquido han influido en la
hidrodinmica y, por lo tanto, en las caractersticas de transferencia de masa gas-lquido del
sistema [5,8], lo que dificulta la interpretacin de los resultados.

La informacin vital tal como el coeficiente de difusin DO2 y la solubilidad en oxgeno

LO2 del sistema de modelo qumico investigado a menudo carece, de modo que no se pueden
emplear datos para identificar condiciones operativas adecuadas para un sistema biolgico
especfico.
En un enfoque anterior [7] se desarroll una comprensin completamente mecanicista de la
transferencia de masa gas-lquido en matraces de 250 ml que no requieren absolutamente
ningn parmetro de ajuste. El objetivo de esta investigacin actual es ampliar la
comprensin anterior de la transferencia de masa gas-lquido a una gama ms amplia de
condiciones de funcionamiento a una viscosidad lquida similar a la del agua. Para ello, el
OTRmax se investig experimentalmente utilizando un sistema qumico completamente
definido (sulfito de sodio acuoso) que simula un consumidor biolgico de oxgeno.
2. Teora
2.1. Transferencia de masa gas-lquido en frascos de agitacin
La transferencia de masa al matraz de agitacin se describe mediante dos resistencias: la del
cierre y la de la interfase gas-lquido. La influencia del cierre estril sobre la presin parcial
de oxgeno en el matraz ha sido estudiada en detalle por Mrotzek et al.
Los resultados que se presentan a continuacin se ocuparn nicamente de las propiedades
mximas de transferencia a travs de la interfase gas-lquido. Se ha presentado previamente
una visin general sobre la literatura y los primeros resultados relativos a la transferencia de
masa gas-lquido. Las correlaciones bsicas de transferencia de masa se presentarn
brevemente en los siguientes.
La velocidad de transferencia de oxgeno OTR es proporcional al coeficiente de transferencia
de masa kL, el rea de transferencia especfica a, la solubilidad de oxgeno LO2 y la
diferencia de presin de accionamiento pO2, G - pO2, L o la diferencia de concentracin de
accionamiento c * O2, L - cO2, L a travs de La interfaz gas-lquido
OTR = kLa LO2(pO2, G pO2, L) = kLa(cO 2, L cO2, L) (1)
El OTR definido por la Ec. (1) est en su mximo, cuando la presin parcial de accionamiento
o la diferencia de concentracin es mayor. Este es el caso cuando la resistencia de cierre
puede ser despreciada y la presin parcial de oxgeno pO2, L o la concentracin de oxgeno
disuelto cO2, L en la Ec. (1) es igual a 0. La tasa de transferencia de oxgeno OTR en este
punto se denomina como capacidad mxima de transferencia de oxgeno OTRmax
OTRmax = kLa LO2pO2, G = kLa cO 2, L (2)
Los factores que influyen en kL, LO2 y a se han discutido anteriormente.
2.2. Modelo mecnico anterior de la transferencia de masa gas-lquido
La anterior comprensin mecnica de la transferencia de masa gas-lquido en frascos de
agitacin se basa en un modelo de la distribucin de lquidos [7, 17]. En este modelo, el
movimiento de la mesa agitadora se divide en dos movimientos parciales como se muestra
en la Fig. 1a, el movimiento del matraz alrededor del eje del excentro 1, y el movimiento
opuesto a la misma velocidad angular alrededor del eje del frasco 2. La alineacin del
matraz permanece sin cambios en la direccin Norte-Sur
La distribucin del lquido tiene como resultado la interseccin entre el paraboloide
rotacional basado en un fluido sin friccin y la pared del matraz. Este modelo describe la
distribucin de lquido y el rea de transferencia de masa gas-lquido resultante a en el matraz
de agitacin
Para lquidos de baja viscosidad lquida [7]. En nuestra investigacin previa se demostr que
la transferencia de masa relevante a en el matraz de agitacin comprende el rea de
transferencia de masa del lquido a granel aB y la pelcula lquida AF distribuida en la pared
del matraz y la base por la masa giratoria [7]. Utilizando el modelo anterior de distribucin
de lquido para calcular el rea de transferencia de masa a, la capacidad mxima de
transferencia de oxgeno OTRmax puede ser
Calculado usando la ecuacin (1) si se conoce el coeficiente de transferencia de masa kL. La
teora de penetracin de Higbie [18] se ha aplicado previamente [7] para calcular el
coeficiente de transferencia de masa kL. En el matraz de agitacin el tiempo de contacto tc,
i entre el gas
Y la fase lquida depende de la altura considerada, lo que significa que es necesario calcular
el coeficiente de transferencia de masa en los cortes diferenciales kL, i, como se muestra en
la Fig. 1b. Segn Higbie, el coeficiente de transferencia de masa es inversamente
proporcional a la raz cuadrada del tiempo de contacto tc, i entre el gas y la fase lquida

(3)
Higbie es vlido para el espacio semi- infinito, lo que significa que la transferencia de masa
tiene lugar slo cerca de la superficie gas-lquido. El coeficiente de difusin DO2 para
soluciones electrolticas puede calcularse de acuerdo con Akita et al. [19] (vase la Tabla 1
para ms detalles). En el modelo de transferencia de masa [7] se diferenci adems entre
Higbie es vlido para el espacio semi- infinito, lo que significa que la transferencia de masa
tiene lugar slo cerca de la superficie gas-lquido. El coeficiente de difusin DO2 para
soluciones electrolticas puede calcularse de acuerdo con Akita et al. [19] (vase la Tabla 1
para ms detalles). En el modelo de transferencia de masa [7] se diferenci adems entre el
coeficiente de transferencia de masa kF L, i de la pelcula lquida, que se describe por el
tiempo de contacto entre la pelcula lquida en la pared / base del matraz y la fase gaseosa
tcF, i Vase la figura 1b) y el coeficiente de transferencia de masa kB L, i del lquido a granel,
que se describe por el tiempo de contacto entre la superficie a granel y la fase gaseosa tcB, i
(vase la figura 1b)
Higo. 1. Modelo de distribucin de lquido y transferencia de masa en el matraz de agitacin: (a)
divisin del movimiento de agitacin en dos movimientos parciales -1: rotacin de la mesa de
sacudidas y 2: orientacin del balancn; La combinacin de ambos movimientos da como resultado
una orientacin no cambiada del matraz agitador con respecto al suelo; (B) aplicacin de la teora de
penetracin de Higbie a la porcin diferencial en el matraz agitado, d0: dimetro de agitacin, tcF, i:
tiempo de contacto de la pelcula, tB c, i: tiempo de contacto a granel.

El tiempo de contacto entre la superficie a granel y la fase de gas tBc, i se define por la
velocidad de la superficie del lquido que se considera que se mueve con la velocidad de la
pared del matraz v

La capacidad mxima de transferencia de oxgeno OTRmax se puede calcular ahora

insertando la ecuacin (3) en la ecuacin (1) con las respectivas reas de transferencia de
masa del lquido a granel aiB y la pelcula aFi resultante de la distribucin de lquido
El coeficiente de transferencia de masa resultante kLa en la Ec. (5) se puede interpretar como
un coeficiente de transferencia de masa integral que comprende la contribucin de volumen
y pelcula a la transferencia de masa. La concentracin de oxgeno disuelto en la interfase
gas-lquido c * O2, L puede calcularse de acuerdo con Schumpe et al. [20]. Este modelo
mecanicista de la transferencia de masa se ha verificado con algunos datos experimentales
de rango limitado en el frasco de 250 ml de agitacin [7].
2.3. Mtodo de modelado extendido
2.3.1. Modelo para el coeficiente de transferencia de masa kL segn Kawase y Moo-
Young
El modelo descrito por Kawase y Moo-Young [26] se basa en la teora de la subcapa peridica
por Pinczewski y Sideman [27]. En este modelo, el coeficiente de transferencia de masa en
biorreactores de tanque agitado aireado en condiciones de turbulencia isotrpica se describe
por la siguiente correlacin:

Con el nmero de Schmidt Sc, la viscosidad cinemtica de la fase lquida , la velocidad de

disipacin de energa ~ y la entrada de potencia especfica P / VL.
2.3.2. Modelo de transferencia de masa segn Gnielinski
Se propone un segundo modelo para calcular el coeficiente de transferencia de masa del
lquido a granel kLB. Se basa en la teora de la capa lmite de Gnielinski [29] en forma del
nmero Sherwood Sh = f (Re, Sc) vlido para la transferencia de masa lquido-slido en una
superficie plana

Con el nmero de Sherwood mnimo Shmin = 8 / para un disco en condiciones de difusin

[29] y el trmino laminar Shlam
Con la longitud de desbordamiento caracterstica L, el nmero mnimo de Sherwood Shmin
y el nmero de Schmidt Sc. El nmero Reynolds de rebosamiento ReL se define por

El modelo anterior se puede transferir a cualquier geometra definiendo una longitud de

desbordamiento caracterstica L y velocidad v [29]. En la literatura algunos investigadores
han llevado las teoras de la interfaz fija sobre a las superficies libres [30], como por ejemplo
Kawase y Moo Young [26]. La teora de la "subcapa de transicin peridica" [27]
desarrollada para la transferencia de masa lquido-slido se transfiere directamente a la
transferencia de masa gas-lquido en la superficie libre de un biorreactor aireado sin el uso
de parmetros de ajuste. Se supone que la interfaz gas-lquido se comporta como un lmite
rgido [26]. Kudrjawizki y Bauer [31], quienes investigaron la transferencia de masa gas-
lquido a travs de un reactor de tanque agitado aireado superficial tambin asumen que la
superficie libre se comporta como un lmite rgido. Sobre la base de esta literatura, el modelo
de Gnielinski, desarrollado para la transferencia de masa slido-lquido, se transfiere a la
interfaz gas-lquido del lquido a granel asumiendo que la interfaz gas-lquido se comporta
como un lmite rgido.
2.4. Transferencia de masa gas-lquido en pelcula lquida
Sobre la base de una reaccin de primer orden, el balance de masa de oxgeno alrededor de
un elemento en una pelcula lquida se describe por

Con las condiciones de contorno (vase la figura 2)

Fig. 2. Dissolved oxygen concentration profile in liquid filmcO 2, L: oxygen concetration at gas
liquid interface; cO 2, L: dissolved oxygen concentration at tc = 0; : film thickness; x: length scale
perpendicular to wall.

La ecuacin diferencial no homognea Eq. (11) se puede resolver utilizando una herramienta
de simulacin, tal como "gPROMS" (Process Systems Enterprise Ltd., Londres, Reino
Unido). Los perfiles de concentracin cO2, L (x, tc) que dependen del tiempo de contacto tc
y del resultado de profundidad de penetracin. El flujo de oxgeno a travs de la interfaz gas-
lquido n O2 puede calcularse mediante

Con el rea de intercambio a y el coeficiente de difusin del oxgeno DO2. El flujo medio de
oxgeno a travs de la interfase gas-lquido n O2 dentro del tiempo de contacto tc viene
entonces dado por

Segn Higbie, el flujo medio de oxgeno a travs de la interfase lquido de gas n O2, Higbie
es igual a

2.5. El sistema de sulfito de sodio

El sulfito de sodio reacciona con el oxgeno que pasa al lquido de acuerdo con la siguiente
reaccin:
Para determinar el coeficiente de transferencia de masa kLa a partir de las mediciones de las
mediciones de la velocidad de absorcin se deben llevar a cabo en el denominado rgimen
de reaccin "no acelerado" descrito en detalle por Linek y Vacek [16].

3. Materiales y mtodos
3.1. El sistema del modelo qumico
El sistema qumico utilizado para simular un consumidor de oxgeno es un sistema de sulfito
sdico 1 M (98%, Roth, Karlsruhe, Alemania) en agua desionizada catalizada por 1 x 10 -
7 M de sulfato de cobalto (97,5%, Fluka Chemie AG, Buchs , Suiza). La concentracin de
catalizador de 1 10 -7 M requerido para trabajar en el rgimen de reaccin "no acelerado"
[16] se verific en experimentos preliminares. El sistema se tampon usando un tampn de
fosfato 0,1 M (fosfato de sodio disdico 99%, monohidrato de dihidrogenofosfato sdico
98%: Roth, Karlsruhe, Alemania) para asegurar un pH constante [13]. El sistema se ajusta
a pH = 8 utilizando cido sulfrico ( 30%, Applichem, Darmstadt, Alemania) y tiene una
viscosidad resultante de = 1,78 mPa sy una densidad de = 1105,9 kg / m3.

3.2. Investigacin del sistema de modelos qumicos

Se llev a cabo una investigacin para determinar la cintica de reaccin del sistema de
sulfito sdico en un reactor de tanque agitado de 1,5 l (VSF Fermentor, Bioengineering,
Wald, Suiza) equipado con un analizador polarogrfico de gas (Modelo 26082, Orbisphere
Laboratorien, Genf, Suiza). La concentracin de oxgeno disuelto cO2, L se midi con un
sensor de oxgeno (Comp. Nr. 341003050, Mettler Toledo, Steinbach, Alemania). El reactor
fue aireado a 1,15 vvm y operado a una temperatura de T = 22,5 C. La velocidad de agitacin
se increment en pasos de 400 a 800, 1200, 1500 y 2000 rpm manteniendo constante cada
velocidad de agitacin hasta que la velocidad de transferencia de oxgeno OTR y la
concentracin de oxgeno disuelto cO2, L estuvieran en estado estacionario. Para cada
velocidad de agitacin, se obtuvieron valores correspondientes de OTR y cO2, L. El
experimento se llev a cabo a una concentracin de catalizador de cobalto ccat igual a 0, 1
10-7, 1 10-6 y 1 10-5 M

3.3. Experimentos biolgicos

Se cultiv Pichia pastoris en medio complejo (YPG: 10 g / l de glicerina, Applichem,
Darmstadt, Alemania, 10 g / l de extracto de levadura seleccionado, Chemie AG, Buchs,
Suiza y 20 g / l de peptona seleccionada, Gibco BRL, Invitrogen Life Technologies ,
Karlsruhe, Alemania y 20 g / l de peptona, Invitrogen Life Technologies, Karlsruhe,
Alemania, 10 g / l de extracto de levadura seleccionado, Gibco BRL, Invitrogen Life
Technologies, Karlsruhe, Alemania y 31,64 g / l de metanol, Aldrich, Steinheim, Alemania).
El cultivo se ejecut en una limitacin de oxgeno verificado mediante la realizacin del
experimento utilizando el mtodo de medicin en lnea descrito por Anderlei y compaeros
de trabajo [3, 21, 22]. El experimento se llev a cabo en un matraz de agitacin de 250 ml
con un dimetro de agitacin de 5 cm, volumen de llenado de 10, 15, 25 y 40 ml y frecuencia
de agitacin de 50-500 rpm (en pasos de 50C) a una temperatura de T = 30C.

3.4. Experimentos de frascos de agitacin

El OTR se midi mediante un mtodo de medicin en lnea desarrollado por Anderlei y
compaeros de trabajo [3, 21, 22, 32]. Erlenmeyer de 50, 100, 250, 500 y 1000 ml de volumen
nominal, volmenes relativos de relleno de 4-16%, dimetros de agitacin de 1,25, 2,5, 5, 7,
10 cm (Lab Shaker modificado, Khner AG, Birsfelden, Suiza ) Y se estudiaron frecuencias
de agitacin de 50-500 rpm (en pasos de 50 rpm) a viscosidad lquida similar a agua. Las
investigaciones se llevaron a cabo a una temperatura de T = 22,5 C. Para el clculo de kLa
se utiliz la solubilidad en oxgeno y el coeficiente de difusin dados en la Tabla 1.

4. Resultados y discusin
4.1. Investigacin del sistema de modelos qumicos
Se llev a cabo una investigacin en un reactor de tanque agitado para determinar la cintica
de reaccin del sistema de sulfito de sodio de acuerdo con la Ec. (Diecisis). Los puntos de
medicin del OTR de la Fig. 3 se ajustaron a la siguiente ecuacin en un sentido de mnimos
cuadrados:

La velocidad de transferencia de oxgeno medida OTR describe el equilibrio de oxgeno

alrededor del lquido, kn en la Ec. (16) puede considerarse como la constante de velocidad
de reaccin y n como el orden de reaccin de la reaccin de sulfito
De la fig. 3 se puede ver que el orden de reaccin de la reaccin de sulfito aumenta de 1
(cuando no hay catalizador presente) en la direccin de 2 con el aumento de la concentracin
de catalizador. Este efecto tambin se ha informado en la literatura [14 - 16]. Para la
concentracin de catalizador de 10-7 M aplicada en la investigacin sistemtica del matraz
de agitacin en este trabajo, el orden de reaccin es n = 1,1 y la constante de velocidad de
reaccin es kn = 0,7 1 / s (m3 / mol) n-1. Higo. 3 muestra adems que la concentracin de
oxgeno disuelto cO2, L es realmente desigual a 0 para todas las concentraciones de
catalizador investigadas. Esto significa que la OTR medida (Eq. (1)) no se corresponde con
la capacidad mxima de transferencia de oxgeno OTRmax (Ec. (2)), que asume una
concentracin de oxgeno disuelto cO2, L de 0. Esto contrasta bastante con la literatura , Lo
que supone que el sistema de sulfito de sodio reduce la concentracin de oxgeno disuelto a
0 en el denominado rgimen de reaccin "no acelerado" [16], en el que deben realizarse las
investigaciones del coeficiente de transferencia de masa gas-lquido volumtrico kLa. En
consecuencia, la tasa de transferencia de oxgeno medida OTR en esta investigacin se basa
en una diferencia de concentracin de conduccin significativamente menor que si se
alcanzara la diferencia de concentracin de conduccin completa (en cO2, L = 0). Sin
embargo, la velocidad de transferencia de oxgeno medida OTR en el matraz de agitacin
puede ser corregida a la capacidad mxima de transferencia de oxgeno OTRmax resolviendo
la Ec. (1) al coeficiente de transferencia de masa volumtrica kLa como sigue:

E insertando esta expresin en la ecuacin (2)

Higo. 3. Cintica de reaccin del sistema de sulfito sdico 1 M: velocidad de transferencia de oxgeno,
OTR frente a la concentracin de oxgeno disuelto cO2, L bajo variacin de la velocidad del agitador
y la concentracin del catalizador de sulfato de cobalto, 1,4 l reactor de tanque agitado, T = 22,5 C,
catalizador Concentracin: (\ alpha) _ {c} = 10 ^ {- 5} M; (\ Alpha) _ {c} = 10 - 6 M; (\ Alpha) _ {c}
= 10 - 7 M; (\ Alpha) sin catalizador.

En el matraz de agitacin, la concentracin de oxgeno disuelto cO2, L en las ecuaciones (17)

y (18) (dependiendo de si kLa o OTRmax se considera) puede calcularse a partir del balance
de masa de oxgeno en la Ec. (Diecisis)
La concentracin de oxgeno en la fase de interfase gas-lquido c * O2, L en las ecuaciones
(17) y (18) puede calcularse de acuerdo con Schumpe et al. [20] (vase la Tabla 1 para ms
detalles)

4,2. Transferencia de datos del sistema de modelos qumicos al sistema

biolgico
La aplicabilidad de los resultados medidos del sistema de modelo qumico a un sistema
biolgico se verific usando una cultura de P. pastoris. La comparacin entre la velocidad de
transferencia de oxgeno medida OTRB del cultivo de P. pastoris y la capacidad mxima de
transferencia de oxgeno OTRmax del sistema de sulfito de sodio se muestra en la Fig. 4.
OTRB es de hecho ms alto que OTRmax del sistema del sulfito de sodio debido a la fuerza
inica ms baja del sistema biolgico. Existe una relacin lineal entre OTRB de la cultura de
P. pastoris y OTRmax del sistema de sulfito sdico. Un factor de correlacin de OTRB /
OTRmax = 2.8 resultados sobre el rango de condiciones de funcionamiento investigadas.
Esto demuestra que el sistema de sulfito de sodio 1 M es adecuado para modelar P. pastoris
como consumidor de oxgeno aplicando un factor de correlacin para todas las condiciones
de funcionamiento. La aplicabilidad a otros sistemas biolgicos requiere diferentes factores
de correlacin que deben determinarse individualmente para cada sistema.

fig. 4. Tasa de transferencia de oxgeno medida OTR de P. pastoris vs. capacidad mxima de
transferencia de oxgeno OTRmax del sistema de sulfito de sodio calculado a partir de la Ec. (18):
matraz de agitacin de 250 ml, 5 cm de dimetro de agitacin, VL = 10, 15, 25 y 40 ml, n = 50-500
rpm (en pasos de 50), factor de correlacin resultante OTRB / OTRmax = 2,8, R2 = 0,97

4.3. Descripcin sistemtica de la masa gas-lquido

Transferencia en matraces de agitacin La investigacin experimental de OTRmax en el
matraz de agitacin usando el sistema de sulfito de sodio descrito anteriormente se extiende
mucho ms all de las condiciones de funcionamiento comnmente aplicadas. Se encontr
que el coeficiente de transferencia de masa volumtrico mximo de la investigacin
experimental era kLa, Exp = 0,157 l / s en el matraz de 50 ml a un volumen de relleno relativo
de 4%, una frecuencia de agitacin de 450 rpm y un dimetro de agitacin de 7 cm.
La validez del modelo mecnico anterior de la transferencia de masa gas-lquido descrita
anteriormente y denominada "modelo anterior" se investigar ahora usando el coeficiente de
transferencia de masa kLa (modelo: Eq. (5) resuelto a kLa; (17)). La comparacin entre el
coeficiente de transferencia de masa volumtrica de los clculos modelo kLaModel y las
mediciones kLaExp para las condiciones de funcionamiento investigadas muestra que
aunque existe una tendencia lineal general los puntos de datos se dispersan claramente (datos
no mostrados). La desviacin media de los valores del modelo a partir de los valores de
medicin viene dada por el ajuste linealmente asumido kLaModel = 1,62kLaExp que
significa 62% de desviacin. Esto significa que el modelo de Higbie se aplic para la
transferencia masiva de masa de lquido y pelcula como en la Ec. (3) sobreestima los datos
experimentales.

4.4. Mtodo de modelado extendido

Cuando se aplica la teora de Higbie para modelar el coeficiente de transferencia de masa del
lquido a granel kLB, i ("modelo anterior"), se considera que la superficie del lquido a granel
se mueve con la velocidad de la pared del matraz, despreciando todos los efectos de friccin
dentro del lquido. Debido a esto, es probable que la transferencia de masa sea sobrestimada.
De acuerdo con las investigaciones de entrada de potencia por Bchs y Zoels [25], la masa
se puede considerar como bien mezclado. Esta mezcla en el lquido no se explica por el
modelo de Higbie. Por lo tanto, es necesario ampliar el enfoque de modelado para tener en
cuenta los diferentes mecanismos de transferencia de masa en la pelcula lquida y el lquido
a granel. Para ello, el matraz de agitacin se divide en dos reactores hipotticos: un reactor
de pelcula descendente y un reactor de tanque agitado como se muestra en la Fig. 5. En este
punto se puede suponer que la teora de penetracin de Higbie, que ha sido especficamente
desarrollada para la cada de pelculas, describe satisfactoriamente el coeficiente de
transferencia de masa de pelcula kFL en la Ec. (5). Un modelo adecuado para describir el
coeficiente de transferencia de masa del lquido a granel kLB en la Ec. (5). Varios modelos
de transferencia de masa incluyendo modelos basados en la "teora de la capa lmite", como
los de King [30], Lamont y Scott [32], Theofanous et al. [33], Prasher [34] y Zhang y Thomas
[35], por lo tanto, se comprob su idoneidad para describir la transferencia de masa en el
frasco de agitacin. Estos modelos demostraron sobreestimar significativamente el
coeficiente de transferencia de masa de la masa lquida. Slo los modelos de Kawase y Moo-
Young [26] y Gnielinski [29] conducen a coeficientes de transferencia de masa razonable
como se presentar a continuacin.
Fig. 5. Hidrodinmica en el lquido lquido y "modelo de dos sub reactores" resultante del matraz de
agitacin: divisin hipottica del matraz agitador en una pelcula que cae y un reactor de tanque
agitado.

4.4.1. Modelo de transferencia de masa segn Kawase y Moo-Young

El primer modelo propuesto para describir la transferencia de masa en el lquido a granel es
un modelo de Kawase y Moo-Young [26] de acuerdo con la Ec. (6). Esta correlacin se
transfiere al matraz de agitacin usando la correlacin de entrada de potencia volumtrica
descrita por Bchs et al. [23].

Con la frecuencia de agitacin n, el dimetro mximo del matraz d y el nmero de Reynolds

Re. Las condiciones de la turbulencia isotrpica se aseguraron mediante el criterio de Liepe
[28], que ha sido transferido al matraz de agitacin por Bchs y Zoels [25].
Eq. (6) se aplica ahora para calcular el coeficiente de transferencia de masa del lquido a
granel kLB. La mayor contribucin a la transferencia de masa total en la Ec. (5) se calcula
utilizando el rea de intercambio especfico del aB en masa. La contribucin de la pelcula
en la Ec. (5) se calcula con la teora de penetracin de Higbie. Este enfoque se denominar
"modelo de dos sub reactores Kawase y Moo-Young". Higo. La figura 6 muestra los valores
experimentales frente a los modelados del coeficiente de transferencia de masa volumtrica.
Si se consideran todos los puntos de medicin, la dispersin sigue siendo significativa. Para
dilucidar este comportamiento se considera la hidrodinmica de los puntos de medicin. En
matraces de agitacin, el grueso del lquido gira generalmente con la direccin de la
aceleracin centrfuga. Sin embargo, una condicin de funcionamiento hidrodinmico
desfavorable, la condicin llamada "fuera de fase" [23] puede ocurrir hacia pequeos
dimetros de agitacin, bajos volmenes de llenado y altas viscosidades de lquido. En esta
condicin de funcionamiento, el lquido a granel ya no gira con la direccin de la aceleracin
centrfuga [23, 24], sino que se derrumba en la base del matraz. Por consiguiente, la entrada
de potencia especfica P / VL y el rea de transferencia de masa a se reducen
significativamente. El modelo de la distribucin de lquidos explicado anteriormente no
puede describir el rea de transferencia de masa en condiciones de funcionamiento "fuera de
fase", puesto que asume un volumen simtrico de lquido que gira dentro del matraz. Las
condiciones operativas "fuera de fase" en nuestra investigacin pueden ser identificadas y
eliminadas usando los criterios "en fase" por Bchs et al. [23]. Con esto los puntos de datos
dispersos se reducen claramente como Fig. 6 muestra. Se puede concluir que la dispersin es
obviamente causada por las condiciones de funcionamiento "fuera de fase". La desviacin
media del modelo de los valores medidos se reduce del 60% en el "modelo anterior" al 16%,
lo que significa un factor de correlacin de 1,16.

Fig. 6. Coeficiente de transferencia de masa volumtrica del modelo kLaModel (transferencia de masa
de pelcula: Higbie, transferencia de masa a granel: Kawase y Moo-Young) frente a valores de
medicin kLaExp: matraz de agitacin de 50-1000 ml, dimetro de agitacin de 1,25-10 cm, Volumen
de relleno relativo, frecuencia de sacudida de 50-500 rpm, sistema de sulfito de sodio 1 M, T = 22,5
C, (?) Todos los valores de medicin; (\ Alpha) slo valores de medicin "en fase" que se calcularon
de acuerdo con Bchs et al. [23] con el nmero de fase, Ph> 1.26 y el nmero de Froude axial, Fra>
0.4, kLaModel = 1.16kLaExp; R2 = 0,88.

4.4.2. Modelo de transferencia de masa segn Gnielinski

Para aplicar este modelo el lquido a granel se divide en rodajas diferenciales. La longitud
caracterstica del desbordamiento de cada rebanada diferencial Li se define por la longitud
de la interfaz gas-lquido y la velocidad caracterstica en la interfaz gas-lquido vi es
aproximada por la velocidad de la pared del frasco vi = 2ndi / 2. Las ecuaciones (7) - (10)
para calcular el coeficiente de transferencia de masa del lquido a granel kLB, i. La
contribucin mayoritaria en la Ec. (5) resulta considerando el rea especfica de transferencia
de masa aBi. La contribucin de la pelcula en la Ec. (5) se calcula usando la teora de
penetracin de Higbie. Este enfoque se denominar como el "modelo de dos sub reactores de
Gnielinski" en lo que sigue. La aplicacin de la teora de la capa lmite de Gnielinski para
modelar la transferencia de masa en el lquido a granel resulta en una desviacin promedio
del modelo de los valores medidos del 14%, lo que significa un factor de correlacin de 1,14
para el amplio rango de condiciones de operacin investigadas. El acuerdo entre el modelo y
los valores medidos al aplicar el "modelo de dos sub reactores Gnielinski" para el lquido a
granel es ligeramente superior al "modelo de dos sub reactores Kawase y Moo-Young" para
el lquido a granel. Los coeficientes de transferencia de masa volumtrica kLaModel del
modelo "Kawase y Moo-Young dos sub reactores" corresponden bien con los del "modelo
de dos sub reactores de Gnielinski" (datos no mostrados). Esto es silencioso notable teniendo
en cuenta que el enfoque de modelado es absolutamente diferente y ambos enfoques no
requieren absolutamente ningn ajuste parmetros. Slo a bajos valores de kLa el "Kawase
y Moo-Young dos sub-reactor modelo" muestran valores ligeramente ms altos que el
"Gnielinski dos sub-reactor modelo". El "modelo de dos sub reactores de Gnielinski" explica
la transferencia de masa en condiciones de flujo laminar, que el "modelo de dos sub reactores
Kawase y Moo-Young" no tiene en cuenta. A pesar de que la condicin de la turbulencia
isotrpica para el "Kawase y Moo-Young dos sub-reactor modelo" se han asegurado [25, 28],
puede cuestionarse, si esta transicin es realmente bien definido dentro del frasco de
agitacin. Teniendo en cuenta el hecho de que ambos modelos no requieren parmetros de
ajuste para el gran nmero de condiciones de operacin investigadas, el acuerdo con valores
de medicin puede considerarse como bueno. En los siguientes resultados de la "Gnielinski
dos sub-reactor modelo" slo se discutir ms.
Hasta ahora se han considerado los puntos de datos independientemente del tamao del
matraz, del dimetro de agitacin o del volumen del matraz. En el siguiente se discutir la
validez del "modelo de dos sub reactores de Gnielinski" en funcin del dimetro mximo del
matraz, el dimetro de sacudida y el volumen de llenado para determinar en qu condiciones
el nuevo enfoque de modelado todava no describe correctamente los mecanismos
verdaderos.
4.4.3. Influencia del volumen del matraz
Cuando se considera el grfico de paridad diferenciado por el tamao del matraz, mostrado
en la Fig. 7, se hace visible una clara tendencia: cuanto menor es el volumen del matraz,
mayor es la sobreestimacin de los valores del modelo en comparacin con los valores de
medicin. Higo. La figura 8a muestra una comparacin representativa entre el modelo y los
valores de kLa de medicin en dependencia de la frecuencia de agitacin y del volumen del
matraz. Se puede ver claramente que el acuerdo entre el modelo y los valores de medicin
mejora con el aumento del volumen del matraz. En el matraz de 250 ml el acuerdo es muy
bueno, mientras que en el matraz de 50 ml el acuerdo aumenta con la frecuencia de agitacin.
Influencia del dimetro de agitacin. No se encontr una tendencia general en dependencia
del dimetro de agitacin entre el modelo y los valores de medicin (datos no mostrados). El
acuerdo entre el modelo y los valores de medicin puede ser considerado como bueno para
un dimetro de sacudida de 5, 7 y 10 cm. No se encontr la razn de pequeas desviaciones
entre los valores del modelo y de la medicin con un dimetro de sacudimiento de 2,5 cm
(no mostrado), que disminuye con la frecuencia de sacudida creciente
Fig. 7. Coeficiente de transferencia de masa volumtrica del modelo kLaModel (transferencia de masa
de pelcula: Higbie, transferencia de masa de masa: Gnielinski) frente a valores de medicin kLaExp
para diferentes tamaos de matraz: matraz de agitacin de 50-1000 ml, dimetro de agitacin de 1,25-
10 cm, 4-20% Volumen de relleno relativo, frecuencia de agitacin de 50-500 rpm, sistema de sulfito
de sodio 1 M, T = 22,5 C; Tamao de matraz: (\ bullet) Frasco de 50 ml; (\ Bullet) Frasco de 100 ml;
(+) Frasco de 250 ml; (\ Bullet) Frasco de 500 ml; (\ Bullet) Frasco de 1000 ml.

4.4.4. Influencia del volumen de llenado

Fig. 8b muestra una comparacin representativa entre los valores de kLa del modelo y de
medicin en dependencia de la frecuencia de agitacin y del volumen relativo de llenado. Se
puede ver que el acuerdo entre el modelo y los valores de medicin aumenta hacia volmenes
de relleno relativos ms pequeos y frecuencias de agitacin crecientes. Hay una tendencia
en la desviacin entre el "modelo de dos sub reactores de Gnielinski" y los valores de
medicin en dependencia del dimetro mximo del matraz, del volumen de llenado y de la
frecuencia de agitacin. Sin embargo, el acuerdo entre el "modelo de dos sub reactores de
Gnielinski" y los valores de medicin pueden considerarse buenos, ya que no se aplican
parmetros de ajuste alguno.

4.5. Transferencia de masa gas-lquido en pelcula lquida

El lquido a granel giratorio distribuye una pelcula lquida de un cierto espesor en la pared
del frasco y en la base. La concentracin de oxgeno disuelto de la pelcula en el momento
de la aplicacin (tc = 0) es igual a la concentracin de oxgeno disuelto del volumen lquido
de cO2, b. La transferencia y reaccin de masa gas-lquido tiene entonces lugar a lo largo de
la pelcula para el tiempo de contacto tc, despus de lo cual la pelcula lquida se mezcla bajo
el volumen de lquido giratorio. Este proceso se repite continuamente. Como se ha descrito
anteriormente, la teora de penetracin de Higbie es vlida slo para el espacio semi- infinito,
lo que significa que describe la transferencia de masa siempre y cuando sta tenga lugar cerca
de la interfaz gas-lquido. En lo que sigue, el proceso de difusin de oxgeno en la pelcula
lquida se considerar resuelto en el tiempo y en el espacio para validar la aplicacin de la
teora de penetracin de Higbie en el "modelo de dos sub reactores de Gnielinski", as como
investigar la influencia de la reaccin.
Para una primera estimacin se considera la transferencia de masa para diferentes tiempos de
contacto tc igual al recproco de la frecuencia de agitacin 1 / n. Por ejemplo, tc (100 rpm) =
1/100 x 60 = 0,6 s. Se consideraron tiempos de contacto correspondientes a las frecuencias
de agitacin n = 100, 200, 300 y 400 rpm. La reaccin del sistema de sulfito de sodio se
considera como una reaccin de orden 1.1. En primeras investigaciones del espesor de
pelcula realizado usando un mtodo de medicin fluorescente, se encontr un espesor de
pelcula en el orden de = 5 x 10-5 m en un matraz de 250 ml. En esta medicin preliminar
no se investig el espesor de la pelcula en dependencia de las condiciones de
funcionamiento. El balance de masa de oxgeno en la Ec. (11) fue resuelto usando el
programa "gPROMS" aplicando los valores listados en la Tabla 1. Los perfiles resultantes de
la concentracin de oxgeno disuelto cO2, L (x, t) se muestran en la Fig. 9a. Se puede
observar que cuanto menor es la frecuencia de agitacin, es decir, cuanto ms alto es el
tiempo de contacto tc, mayor es la concentracin de oxgeno disuelto en la pared del matraz.
A altas frecuencias de agitacin (n> 400 rpm), la pelcula lquida puede considerarse como
un espacio semi- infinito, lo que significa que la teora de penetracin de Higbie todava
puede aplicarse. A bajas frecuencias de agitacin la concentracin de oxgeno disuelto en la
pared del matraz se levanta, lo que significa que la teora de penetracin de Higbie ya no es
plenamente vlida.
La desviacin relativa rel entre el flujo de oxgeno calculado usando la teora de penetracin
de Higbie (Eq. (14)) y la de la solucin exacta de la Ec. (12) se puede calcular de acuerdo
con:

Para el tiempo de contacto ms largo considerado tc = 0,15 s (correspondiente a n = 400 rpm)

se produce una desviacin relativa de rel = 2,6%. Para el tiempo de contacto ms corto
considerado tc = 0,15 s (correspondiente a n = 100 rpm) se produce una desviacin relativa
de rel = 8,8%. Esto significa que cuanto ms alto es el tiempo de contacto, ms el flujo real
de oxgeno (Eq. (12)) es realmente subestimado por la teora de Higbie (Eq. (14)). Esto es al
principio bastante sorprendente, ya que con base en los resultados presentados en la Fig. Se
esperara que 9a Higbie sobreestimara el flujo real de oxgeno. Esto indica que hay un
segundo factor que influye, que compensa el efecto esperado. Este efecto es que la teora de
penetracin de Higibe descuida la transferencia de masa debido a la reaccin en la pelcula
lquida.
Para investigar la influencia del espesor de la pelcula sobre la validez de la teora de
penetracin de Higbie, el espesor de la pelcula aument y disminuy en un 50%
(significando = 7,5 10^-5 y 2,5 10^-5 m) y el perfil de oxgeno disuelto resultante Y
flujo de oxgeno calculado para un tiempo de contacto de 0,6 s. De la fig. 9b se puede ver
que cuanto ms delgada sea la pelcula, ms se eleva el perfil de concentracin de oxgeno
disuelto en la pared del matraz y la condicin de espacio semi- infinito ya no se da en = 2,5
10^-5 m. Para = 2,5 10 -5 m se produce una desviacin relativa de rel = -9,6%, lo que
significa que la teora de penetracin de Higbie realmente sobreestima el flujo de oxgeno en
pelculas delgadas.
Las consideraciones anteriores han demostrado que la validez de la teora de penetracin de
Higbie depende sensiblemente del tiempo de contacto y del grosor de la pelcula. Se han
encontrado dos tendencias generales
(Tc> 0,2 s) y el espesor de la pelcula ( = 5 10 -5 m), la reaccin dentro de la pelcula
domina y hace que la teora de penetracin de Higbie subestime el flujo real de oxgeno a
travs de la interfaz gas-lquido,
(Ii) en las pelculas lquidas finas ( = 2.5 10 -5 m), el oxgeno se difunde directamente
hasta la pared del matraz y ya no se da la condicin de espacio semi- infinito; En este caso la
teora de penetracin de Higbie sobreestima el flujo real de oxgeno a travs de la interfaz
gas-lquido.
Para dilucidar la influencia exacta de las tendencias anteriores sobre las desviaciones en el
"modelo de dos reactores de Gnielinksi" mostrado anteriormente, son necesarias medidas
detalladas del espesor de la pelcula, ya que el espesor de la pelcula puede ser una funcin
de las condiciones operativas tales como la frecuencia de agitacin y Dimetro mximo del
matraz.

5. Conclusin
Se ha desarrollado un "modelo de dos sub reactores" totalmente mecnico de la transferencia
de masa gas-lquido en matraces de agitacin a una viscosidad lquida similar a la del agua.
Este modelo considera el matraz agitador como un sistema de "dos sub-reactor" que lo divide
en un reactor de pelcula hipottico y un reactor de tanque agitado. La transferencia de masa
en la pelcula lquida (reactor de pelcula) en la pared del matraz se describe usando la teora
de penetracin de Higbie. La transferencia de masa al lquido a granel (reactor de tanque
agitado) se describe igualmente bien mediante dos teoras de transferencia de masa
diferentes: la de Kawase y Moo-Young [26] y la de Gnielinski, que se basa en la teora de la
capa lmite [29] para Un lmite rgido. El modelo de Gnielinski puede considerarse que
describe la transferencia de masa en condiciones de flujo laminar mejor que el modelo de
Kawase y Moo-Young. Los modelos no requieren ningn parmetro de ajuste alguno y
describen satisfactoriamente los valores de medicin del coeficiente de transferencia de masa
volumtrica kLa y la capacidad mxima de transferencia de oxgeno OTRmax en un sistema
modelo de sulfito sdico acuoso 1M con una desviacin media del 14%. El OTRmax del
sistema de sulfito de sodio ha mostrado un factor de correlacin constante de 2,8 con un
cultivo de P. pastoris limitado en oxgeno bajo variacin de las condiciones operativas. Otros
sistemas biolgicos todava tienen que ser investigados.
Por lo tanto, el modelo desarrollado puede ser aplicado para elegir las condiciones de
funcionamiento adecuadas para los experimentos de exploracin biolgica a viscosidades
similares al agua antes de la deteccin que asegura suficiente suministro de oxgeno.
Podra demostrarse que la validez de la teora de penetracin de Higbie para describir la
transferencia de masa en la pelcula lquida depende sensitivamente del espesor de la pelcula
y del tiempo de contacto
Entre el gas y la fase lquida. Se debe realizar una investigacin ms detallada de la influencia
de los parmetros operativos en la pelcula.
La aplicabilidad del modelo a viscosidades lquidas ms altas tiene que ser investigada
todava. La distribucin de lquido en el matraz se vuelve cada vez ms asimtrica hacia
viscosidades ms altas [23] y finalmente puede llegar a un estado "fuera de fase". Este efecto
no se explica por el modelo presentado de la distribucin de lquidos que es tambin la base
para calcular el rea de transferencia de masa. Adems, se puede suponer que el espesor de
la pelcula lquida sobre la pared del matraz aumenta con la viscosidad, dando como resultado
una mayor fraccin del lquido que participa en la transferencia de masa de la pelcula. En
nuestro modelo actual el volumen de la pelcula es descuidado