1.

Introduccin
High Performance Liquid Chromatography o Cromatografa Lquida de Alta Presin
Es una forma de cromatografa de reparto lquido que se utiliza para compuestos que son separadas
Disuelto en una solucin (CHP, 2000). En un artculo publicado por Lister (2012), algunos
Ventajas y desventajas asociadas con el proceso de HPLC se puso de relieve. Afirm que HPLC es un
proceso automatizado de alta eficiencia que produce resultados dentro de unos minutos y, que HPLC tambin
produce resultados de alta resolucin que son fciles de interpretar. Sin embargo, a menudo es muy difcil
determinar si dos compuestos se escapan de la tubera a la vez. Como consecuencia, esto puede resultar en
una categorizacin compuesto inexacta. Otras desventajas asociadas con el proceso de HPLC pueden
atribuirse al coste de los equipos, su funcionamiento y su eficiencia. En primer lugar, el equipo necesario para
llevar a cabo la HPLC es relativamente caro. En segundo lugar, se requiere un tcnico entrenado para utilizar
el equipo debido a su complejidad y, por ltimo, debido a la velocidad del proceso, el equipo tiene baja
sensibilidad a algunos compuestos.
Un instrumento tpico de HPLC se compone de un depsito de fase mvil, una bomba, un inyector, una
columna de separacin, y un detector. Consulte el siguiente diagrama esquemtico.

Segn Backes (2006) HPLC es un procedimiento que consiste en pasar un soluto muestra en un disolvente de
presin alta, conocida como la fase mvil. A continuacin, el soluto pasa a travs de un tubo o columna de
relleno con solventes, conocido como la fase estacionaria de acero. A medida que pasan los solutos a travs
de la columna que interactan entre las dos fases, el mvil y el estacionario fases a ritmos diferentes. Esta
diferencia en las tasas se atribuye a las diferentes polaridades o el coeficiente de reparto de los solutos. Los
solutos que, o bien tienen la menor cantidad de interaccin con la fase estacionaria, o la mayor cantidad de
interaccin con el mvil fase tienden a salir de la columna ms rpido (Backes, 2006). Estas interacciones
repetidas de los solutos a lo largo de la longitud de la columna de resultado en la separacin de los solutos. En
la columna de la HPLC en fase estacionaria es ms apretados que en otros tipos de cromatografa lquida. A
los efectos de esta prctica de laboratorio, la columna se llena de
Partculas C18. La presencia de solutos medida que salen de la columna se puede detectar a travs
, ndice de refraccin o cambios electroqumica ultravioleta en la fase mvil. La HPLC instrumentacin
utilizada en la realizacin de este experimento fue un detector de UV. La intensidad de la seal producida en
el detector de UV es una determinacin de la cantidad de partida soluto la columna (Backes, 2006). Como
cada soluto sale de la columna, mide el detector de UV un pico de la seal. El tiempo necesario para que el
pico para mostrar que se conoce como el tiempo de retencin. Por lo tanto, compuestos desconocidos en una
mezcla de muestra pueden identificarse mediante la comparacin de su retencin veces con los tiempos de
retencin de los compuestos conocidos. Tambin, la cantidad de soluto en particular en una mezcla se puede
identificar mediante la medicin de la intensidad de la seal o la respuesta, y comparndola con la respuesta
de una cantidad conocida de soluto que en particular. Por lo tanto este experimento busca determinar la
cantidad de cafena presente en una marca de la energa bebida.
El mtodo consiste Cuando el volumen de la muestra es conocido con frecuencia se utiliza la Calibracin con
estndares o patrones. Tiene la ventaja de que slo se necesita, medir las reas de los picos de inters. Es un
requisito que cada vez se inyecte la misma cantidad de muestra. Los estndares necesarios deben analizarse
bajo las mismas condiciones de Operacin que la muestra En la prctica, se preparan las soluciones estndar
de(los) componentes de inters y se inyectan en el cromatgrafo. Para cada componente se obtiene la grfica:
rea del pico en funcin de cantidad de componente. Despus, para el clculo de una concentracin
desconocida, se obtiene el cromatograma de la muestra problema y el rea de cada pico se utiliza con la
grfica anterior para obtener la cantidad.
2. Objetivos

2.- Determinar la cantidad de cafena presente en marca popular de la energa

Bebidas: Red Bull , usando HPLC.

3.- Obtener conocimiento prctico en el uso de equipo bsico de HPLC.

4. Anlisis HPLC
Rectificar si la cantidad de Cafena estipulada en la formulacin de una bebida energtica, corresponde
efectivamente a la descrita

4.1. Datos de muestra y anlisis de HPLC

Muestra: Red bull sugar free
Contenido: Agua carbonada, Taurina (0,4%), glucuronolactona (0,24%), Cafena (0,03%), Inositol,
vitaminas (Niacina, cido Pantoteico, B6, B2, B12), Regulador de Acidez Citratos de Sodio, Edulcorantez
(ASPARTAME, ASELFURAME K), Aromatizantes naturales y artificiales, Estabilizante Goma Xantana,
Colorante Caramelo. FENICETONURICOS: CONTIENE FENILALANINA.

6. Resultados y Discusin

Datos:

-Contenido de cafena en Redbull: 0,3 mg/mL

-Contenido de cafena obtenido en el anlisis: 0,346 mg/mL
% rendimiento: 115,3 %
-rea bajo la curva de la Cafena: 8798515
-Platos tericos: 9.499,30

TablaN1: Concentracin de cafena y su rea bajo la curva del espectro.

[promedio
[concetracion] auc]
0,001 655522
0,1 6072787
0,2 11239424
0,4 22455062,33

Grafico N1: Curva de calibracin de Redbull

 25000000
curva de calibrado
y = 5E+07x + 546464
20000000 R = 0.9998

15000000
[promedio auc]
Linear ([promedio auc])
10000000
Linear ([promedio auc])

5000000

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5

El valor de R2 se aproxim a uno, lo que refleja que en este caso, existi linealidad.
El porcentaje de rendimiento obtenido fue bastante alto, lo que se atribuye principalmente a un error al
momento de aforar o sonificar la muestra.
7. Conclusin

La cantidad de cafena obtenida del anlisis fue cercana al valor indicado en la muestra, por esta razn el
mtodo utilizado fue el adecuado ya que se pudo medir la cantidad de cafena de un compuesto.

Referencias
-Cromatografa: Principios generales (s.f). Recuperado el 14 de Junio de 2014, de
http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8246/7/T2cromagraf.pdf

Hernandez, H. L., & Gonzalez, P. C. (2002). Introduccion al ana lisis instrumental. Barcelona: Ariel.